JPH04338377A - デホスホ酸化ヌクレオチド、並びにその製造、精製及び安定化方法 - Google Patents
デホスホ酸化ヌクレオチド、並びにその製造、精製及び安定化方法Info
- Publication number
- JPH04338377A JPH04338377A JP13841891A JP13841891A JPH04338377A JP H04338377 A JPH04338377 A JP H04338377A JP 13841891 A JP13841891 A JP 13841891A JP 13841891 A JP13841891 A JP 13841891A JP H04338377 A JPH04338377 A JP H04338377A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleotide
- nucleotides
- oxidized
- dephosphooxidized
- formula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Pyridine Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はデホスホ酸化ヌクレオチ
ド、並びにその製造、精製及び安定化方法、特に過ヨウ
素酸ナトリウムを使用してヌクレオチドを酸化し、ヌク
レオチドを水中でインキュベートしてβ脱離によりリン
酸部分（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を除去することからなる
デホスホ酸化ヌクレオチドの製造方法に関する。得られ
たデホスホ酸化ヌクレオチドを高速タンパク質液体クロ
マトグラフィー（ｆａｓｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｑｕ
ｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）で精製し、凍結乾
燥粉末として貯蔵したものは、抗がん剤として使用され
得る。
ド、並びにその製造、精製及び安定化方法、特に過ヨウ
素酸ナトリウムを使用してヌクレオチドを酸化し、ヌク
レオチドを水中でインキュベートしてβ脱離によりリン
酸部分（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を除去することからなる
デホスホ酸化ヌクレオチドの製造方法に関する。得られ
たデホスホ酸化ヌクレオチドを高速タンパク質液体クロ
マトグラフィー（ｆａｓｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｑｕ
ｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）で精製し、凍結乾
燥粉末として貯蔵したものは、抗がん剤として使用され
得る。
【０００２】
【従来の技術】酵素阻害物質の設計及び合成の原理に基
づく最初の治癒薬は、ＢａｋｅｒによりＢａｋｅｒ，Ｂ
． Ｒ． Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｓｉｔ
ｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｅ
ｎｚｙｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ（１９６７）に例示されている。Ｂａｋｅ
ｒの主要概念は、特異性及び親和性の高い酵素基質の構
造に似た化合物の構造を使用することである。即ち、代
謝を妨げて、細胞増殖を阻害する目的は、特定酵素の阻
害作用に適うように単一組合わせ特性（ｕｎｉｔｙ ｃ
ｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｙ）により達成
される。Ｂｒｏｏｍ Ａ． Ｄ．，Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃ
ｈｅｍ． ３２， ２−７（１９８９）では、酵素の特
異性に基づく設計概念は特異性の異なるアイソザイムに
適用されている。このようにして、正常な細胞に影響を
与えずにがん細胞の増殖を阻害する特別な酵素活性を有
する１種の薬剤が開発された。
づく最初の治癒薬は、ＢａｋｅｒによりＢａｋｅｒ，Ｂ
． Ｒ． Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａｃｔｉｖｅ ｓｉｔ
ｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｅ
ｎｚｙｍｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ（１９６７）に例示されている。Ｂａｋｅ
ｒの主要概念は、特異性及び親和性の高い酵素基質の構
造に似た化合物の構造を使用することである。即ち、代
謝を妨げて、細胞増殖を阻害する目的は、特定酵素の阻
害作用に適うように単一組合わせ特性（ｕｎｉｔｙ ｃ
ｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｙ）により達成
される。Ｂｒｏｏｍ Ａ． Ｄ．，Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃ
ｈｅｍ． ３２， ２−７（１９８９）では、酵素の特
異性に基づく設計概念は特異性の異なるアイソザイムに
適用されている。このようにして、正常な細胞に影響を
与えずにがん細胞の増殖を阻害する特別な酵素活性を有
する１種の薬剤が開発された。
【０００３】現在抗がん剤に関する研究開発は、合成核
酸の主要酵素活性をどのように阻害するかを力説してい
る。酸化ヌクレオシドは広範に議論されている中の１種
である。このことは、Ｇｒａｎｔ， Ａ． Ｊ．， ａ
ｎｄ Ｌｅｒｎｅｒ， Ｌ． Ｍ．， Ｊ． Ｍｅｄ．
Ｃｈｅｍ． ２３， ３９−４２（１９８０）；Ｇｒ
ａｎｔ， Ａ． Ｊ．， ａｎｄ Ｌｅｒｎｅｒ， Ｌ
． Ｍ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２３， ７
９５−７９８（１９８０）；Ｓａｔｏ， Ａ．， ａｎ
ｄ Ｃｏｒｙ， Ｊ． Ｓ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
． ４１， １６３７−１６４１（１９８１）；Ｏｈｍ
ｓｔｅｄｅ， Ｃ． Ａ．， ａｎｄ Ｃｏｒｙ， Ｊ
． Ｇ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．
３４， １７１７−１７２４（１９８５）； Ｋｉｎ
ａｈａｎ， Ｊ． Ｊ．， Ｐａｖｅｌｉｃ， Ｚ．
Ｐ．， Ｌｅｏｎａｒｄ， Ｒ． Ｊ．， Ｂｌｏｃｈ
， Ａ．， ａｎｄ Ｇｒｉｎｄｅｙ， Ｇ． Ｂ．，
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４０， ５９８−６０３（
１９８０）； Ｍｉｒｋｉｎ， Ｂ． Ｌ．， Ｏ’Ｄ
ｅａ， Ｒ． Ｆ．，ａｎｄ Ｈｏｇｅｎｋａｍｐ，
Ｈ． Ｐ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４７， ３６
５０−３６５５（１９８７）； Ｏ’Ｄｅａ， Ｒ．
Ｆ．，Ｍｉｒｋｉｎ， Ｂ． Ｌ．， Ｈｏｇｅｎｋａ
ｍｐ， Ｈ． Ｐ．， ａｎｄ Ｂａｒｔｅｎ， Ｄ．
Ｍ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４７， ３６５６
−３６６１（１９８７）；並びにＢｏｓｔｒｏｍ， Ｂ
．， Ｈｏｇｅｎｋａｍｐ， Ｈ． Ｐ． Ｃ．， ａ
ｎｄ Ｍｉｒｋｉｎ， Ｂ． Ｌ．， Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ． ４８， ５９３３−５９３６（１９８８）の
参考文献で開示されている。Ｈｉｇｇｉｎｓ等はかなり
効果のある抗がん剤としてイノシンジアルデヒドを使用
した。現在イノシンジアルデヒドは、Ｈｉｇｇｉｎｓ，
Ｇ． Ｒ．， Ｆｉｎｋｌｅｓｔｅｉｎ， Ｊ．，
Ｋｉｒｖｉｔ， Ｗ．， ａｎｄ Ｈａｍｍｏｎｄ，
Ｄ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ． Ｒｅｐ． ６４
， ６２５（１９８０）及びＶｏｓｉｋａ， Ｇ． Ｊ
．， Ｂｒｉｓｃｏｅ， Ｋ．， Ｃａｒｅｙ， Ｒ．
Ｗ．， Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ， Ｊ． Ｆ．， Ｐｅ
ｒｒｙ， Ｍ． Ｃ．， Ｂｉｄｍａｎ，Ｄ．， Ｒｉ
ｃｈａｒｄｓ， Ｆ．， ＩＩＩ， ａｎｄ Ｃｏｌｅ
ｍａｎ， Ｍ． Ｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．
Ｒｅｐ． ６５， ８２３（１９８１）に説明されて
いるようにフェーズＩ及びフェーズＩＩの臨床試験にあ
る。しかしながら、この薬剤は、Ｃｈｕｉｔｅｎ， Ｄ
． Ｆ．， Ｖｏｓｉｋａ， Ｇ． Ｊ．， Ｓｈａｗ
， Ｍ． Ｔ．， Ｂｏｉｒｏｎ， Ｍ．，Ｇｉｓｓｅ
ｌｂｒｅｃｈｔ， Ｃ．， Ｍａｒｔｙ， Ｍ．， Ｈ
ｉｇｇｉｎｓ， Ｇ．， ａｎｄ Ｍｕｇｇｉａ， Ｆ
． Ｍ．， Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １，
１２１−１２４（１９８１）に記載されているように消
化管及び腎臓に副作用を呈するので、すぐに臨床試験か
ら除外された。次に、Ｃｏｒｙ等はＣｏｒｙ， Ｊ．
Ｇ．， ａｎｄ Ｐａｒｋｅｒ， Ｓ． Ｈ．， Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ２８， ８６７
−８７１（１９７９）に開示されているように、がん細
胞に対して相対的阻害作用を有するものとして酸化５’
−デオキシイノシンを発見した。
酸の主要酵素活性をどのように阻害するかを力説してい
る。酸化ヌクレオシドは広範に議論されている中の１種
である。このことは、Ｇｒａｎｔ， Ａ． Ｊ．， ａ
ｎｄ Ｌｅｒｎｅｒ， Ｌ． Ｍ．， Ｊ． Ｍｅｄ．
Ｃｈｅｍ． ２３， ３９−４２（１９８０）；Ｇｒ
ａｎｔ， Ａ． Ｊ．， ａｎｄ Ｌｅｒｎｅｒ， Ｌ
． Ｍ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２３， ７
９５−７９８（１９８０）；Ｓａｔｏ， Ａ．， ａｎ
ｄ Ｃｏｒｙ， Ｊ． Ｓ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
． ４１， １６３７−１６４１（１９８１）；Ｏｈｍ
ｓｔｅｄｅ， Ｃ． Ａ．， ａｎｄ Ｃｏｒｙ， Ｊ
． Ｇ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．
３４， １７１７−１７２４（１９８５）； Ｋｉｎ
ａｈａｎ， Ｊ． Ｊ．， Ｐａｖｅｌｉｃ， Ｚ．
Ｐ．， Ｌｅｏｎａｒｄ， Ｒ． Ｊ．， Ｂｌｏｃｈ
， Ａ．， ａｎｄ Ｇｒｉｎｄｅｙ， Ｇ． Ｂ．，
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４０， ５９８−６０３（
１９８０）； Ｍｉｒｋｉｎ， Ｂ． Ｌ．， Ｏ’Ｄ
ｅａ， Ｒ． Ｆ．，ａｎｄ Ｈｏｇｅｎｋａｍｐ，
Ｈ． Ｐ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４７， ３６
５０−３６５５（１９８７）； Ｏ’Ｄｅａ， Ｒ．
Ｆ．，Ｍｉｒｋｉｎ， Ｂ． Ｌ．， Ｈｏｇｅｎｋａ
ｍｐ， Ｈ． Ｐ．， ａｎｄ Ｂａｒｔｅｎ， Ｄ．
Ｍ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ４７， ３６５６
−３６６１（１９８７）；並びにＢｏｓｔｒｏｍ， Ｂ
．， Ｈｏｇｅｎｋａｍｐ， Ｈ． Ｐ． Ｃ．， ａ
ｎｄ Ｍｉｒｋｉｎ， Ｂ． Ｌ．， Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ． ４８， ５９３３−５９３６（１９８８）の
参考文献で開示されている。Ｈｉｇｇｉｎｓ等はかなり
効果のある抗がん剤としてイノシンジアルデヒドを使用
した。現在イノシンジアルデヒドは、Ｈｉｇｇｉｎｓ，
Ｇ． Ｒ．， Ｆｉｎｋｌｅｓｔｅｉｎ， Ｊ．，
Ｋｉｒｖｉｔ， Ｗ．， ａｎｄ Ｈａｍｍｏｎｄ，
Ｄ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ． Ｒｅｐ． ６４
， ６２５（１９８０）及びＶｏｓｉｋａ， Ｇ． Ｊ
．， Ｂｒｉｓｃｏｅ， Ｋ．， Ｃａｒｅｙ， Ｒ．
Ｗ．， Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ， Ｊ． Ｆ．， Ｐｅ
ｒｒｙ， Ｍ． Ｃ．， Ｂｉｄｍａｎ，Ｄ．， Ｒｉ
ｃｈａｒｄｓ， Ｆ．， ＩＩＩ， ａｎｄ Ｃｏｌｅ
ｍａｎ， Ｍ． Ｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．
Ｒｅｐ． ６５， ８２３（１９８１）に説明されて
いるようにフェーズＩ及びフェーズＩＩの臨床試験にあ
る。しかしながら、この薬剤は、Ｃｈｕｉｔｅｎ， Ｄ
． Ｆ．， Ｖｏｓｉｋａ， Ｇ． Ｊ．， Ｓｈａｗ
， Ｍ． Ｔ．， Ｂｏｉｒｏｎ， Ｍ．，Ｇｉｓｓｅ
ｌｂｒｅｃｈｔ， Ｃ．， Ｍａｒｔｙ， Ｍ．， Ｈ
ｉｇｇｉｎｓ， Ｇ．， ａｎｄ Ｍｕｇｇｉａ， Ｆ
． Ｍ．， Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １，
１２１−１２４（１９８１）に記載されているように消
化管及び腎臓に副作用を呈するので、すぐに臨床試験か
ら除外された。次に、Ｃｏｒｙ等はＣｏｒｙ， Ｊ．
Ｇ．， ａｎｄ Ｐａｒｋｅｒ， Ｓ． Ｈ．， Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ２８， ８６７
−８７１（１９７９）に開示されているように、がん細
胞に対して相対的阻害作用を有するものとして酸化５’
−デオキシイノシンを発見した。
【０００４】イノシンジアルデヒドは細胞に入ると、す
ぐにリンと化合して、イノシン酸ジアルデヒドの特性を
示す。しかし、５’デオキシイノシンジアルデヒドはリ
ンとは化合し得ず、デオキシピリミジンヌクレオシドの
代謝を妨げ得る。Ｍｉｒｋｉｎ等は、一連の酸化ヌクレ
オシドの中で比較的特殊な抗がん作用を有する酸化アデ
ノシンを発見し、体内の酸化アデノシン濃度が１．５ｘ
１０−６でがん細胞の増殖を５０％妨げ得ることを発見
した。３つの結論が導かれる。（１）アルデヒド基は活
性にとって重要であり、還元後に細胞毒性を１８００分
の１にする。（２）窒素塩基の構造は活性に大きく影響
を与える。（３）ヌクレオシドのリン酸化反応は細胞毒
性にとって重要ではない。
ぐにリンと化合して、イノシン酸ジアルデヒドの特性を
示す。しかし、５’デオキシイノシンジアルデヒドはリ
ンとは化合し得ず、デオキシピリミジンヌクレオシドの
代謝を妨げ得る。Ｍｉｒｋｉｎ等は、一連の酸化ヌクレ
オシドの中で比較的特殊な抗がん作用を有する酸化アデ
ノシンを発見し、体内の酸化アデノシン濃度が１．５ｘ
１０−６でがん細胞の増殖を５０％妨げ得ることを発見
した。３つの結論が導かれる。（１）アルデヒド基は活
性にとって重要であり、還元後に細胞毒性を１８００分
の１にする。（２）窒素塩基の構造は活性に大きく影響
を与える。（３）ヌクレオシドのリン酸化反応は細胞毒
性にとって重要ではない。
【０００５】上記説明に基づき、酸化ヌクレオシドが酸
化ヌクレオチドより効果的であるという結論が得られ得
る。酸化ヌクレオシドが簡単に細胞内に入ることを除け
ば、この酸化ヌクレオシドが細胞内に入ると代謝速度が
増して、抗がん効果が低減する。しかし、５’−デオキ
シヌクレオシドはリン酸化反応を妨げて、酸化ヌクレオ
シドの効果を大幅に改善し得る。酸化ヌクレオシドには
尚欠点が１つある。即ちアルデヒド基は水和して、環状
又は非環状水和物を水溶液中に生じることである。この
水和物の構造ＩＩ及びＩＩＩを以下に示す。
化ヌクレオチドより効果的であるという結論が得られ得
る。酸化ヌクレオシドが簡単に細胞内に入ることを除け
ば、この酸化ヌクレオシドが細胞内に入ると代謝速度が
増して、抗がん効果が低減する。しかし、５’−デオキ
シヌクレオシドはリン酸化反応を妨げて、酸化ヌクレオ
シドの効果を大幅に改善し得る。酸化ヌクレオシドには
尚欠点が１つある。即ちアルデヒド基は水和して、環状
又は非環状水和物を水溶液中に生じることである。この
水和物の構造ＩＩ及びＩＩＩを以下に示す。
【０００６】
【化３】
遊離アルデヒド基をＮＭＲスペクトル又はＩＲにより検
出することはできない。換言すれば、水溶液中の酸化ヌ
クレオシドの化学的構造は大半が、炭水化物化合物の構
造に類似した環状半アセタールである。しかしながら、
遊離アルデヒド基を含んでいる直鎖構造Ｉの量は少ない
。従って、遊離アルデヒド基の濃度が低いため、抗がん
作用に影響を及ぼす。
出することはできない。換言すれば、水溶液中の酸化ヌ
クレオシドの化学的構造は大半が、炭水化物化合物の構
造に類似した環状半アセタールである。しかしながら、
遊離アルデヒド基を含んでいる直鎖構造Ｉの量は少ない
。従って、遊離アルデヒド基の濃度が低いため、抗がん
作用に影響を及ぼす。
【０００７】
【化４】
酸化ヌクレオシドの構造を変化させれば、水溶液中の遊
離アルデヒド基の濃度及び抗がん作用は増すだろう。不
飽和２重結合に隣接するアルデヒド基は水溶液に水和し
ないので、本発明のデホスホ酸化ヌクレオチドを使用す
ると、抗がん作用が改善される。ヌクレオチドを酸化し
て、酸化ヌクレオチドを生成し、次いでβ脱離によりリ
ン酸部分を除去すると同時にα，β−不飽和アルデヒド
を生成する。この時点でアルデヒド基はこれ以上水和せ
ず、遊離アルデヒド基の濃度は増す。最終的に、得られ
たデホスホ酸化ヌクレオチドは好ましい抗がん剤として
使用することができる。
離アルデヒド基の濃度及び抗がん作用は増すだろう。不
飽和２重結合に隣接するアルデヒド基は水溶液に水和し
ないので、本発明のデホスホ酸化ヌクレオチドを使用す
ると、抗がん作用が改善される。ヌクレオチドを酸化し
て、酸化ヌクレオチドを生成し、次いでβ脱離によりリ
ン酸部分を除去すると同時にα，β−不飽和アルデヒド
を生成する。この時点でアルデヒド基はこれ以上水和せ
ず、遊離アルデヒド基の濃度は増す。最終的に、得られ
たデホスホ酸化ヌクレオチドは好ましい抗がん剤として
使用することができる。
【０００８】
【発明の要旨】本発明の目的は、デホスホ酸化ヌクレオ
チド、及び過ヨウ素酸ナトリウムを使用してヌクレオチ
ドを酸化し、ヌクレオチドを水中でインキュベートして
、β脱離によりリン酸部分を除去することからなるデホ
スホ酸化ヌクレオチドの製造方法を提供することである
。
チド、及び過ヨウ素酸ナトリウムを使用してヌクレオチ
ドを酸化し、ヌクレオチドを水中でインキュベートして
、β脱離によりリン酸部分を除去することからなるデホ
スホ酸化ヌクレオチドの製造方法を提供することである
。
【０００９】本発明の他の目的は、高速タンパク質液体
クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）を使用するデホスホ酸
化ヌクレオチドの精製方法を提供することである。
クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）を使用するデホスホ酸
化ヌクレオチドの精製方法を提供することである。
【００１０】本発明の他の目的は、凍結乾燥技術により
生成物を凍結乾燥粉末として貯蔵することからなるデホ
スホ酸化ヌクレオチドの安定化方法を提供することであ
る。
生成物を凍結乾燥粉末として貯蔵することからなるデホ
スホ酸化ヌクレオチドの安定化方法を提供することであ
る。
【００１１】本発明の他の目的は、抗がん剤として使用
するデホスホ酸化ヌクレオチドを提供することである。
するデホスホ酸化ヌクレオチドを提供することである。
【００１２】本発明のこれらの目的、他の目的、利点及
び特徴は、以下の添付図面を参照した記載内容により更
に十分理解されよう。
び特徴は、以下の添付図面を参照した記載内容により更
に十分理解されよう。
【００１３】本発明はデホスホ酸化ヌクレオチド並びに
その製造、精製及び安定化方法、特に過ヨウ素酸ナトリ
ウムを使用してヌクレオチドを酸化し、ヌクレオチドを
水中でインキュベートして、β脱離によりリン酸部分を
除去することからなるデホスホ酸化ヌクレオチドの製造
方法に関する。この方法は、（ａ）ヌクレオチドを蒸留
水に溶解し、（ｂ）ヌクレオチドを過ヨウ素酸ナトリウ
ムにより酸化し、次いでエチレングリコールを加えて過
剰ＩＯ４を破壊し、（ｃ）３７℃の温度の水中でインキ
ュベートして、β脱離によりリン酸部分を除去し、（ｄ
）段階（ｃ）の酸化ヌクレオチドを高速タンパク質液体
クロマトグラフィーのモノＱカラムにより精製して、Ｕ
Ｖ２５４ｎｍ吸収ピークで流出液を収集し、（ｅ）得ら
れたヌクレオチドを凍結乾燥技術により安定化して、凍
結乾燥粉末の形態で貯蔵する段階からなる。
その製造、精製及び安定化方法、特に過ヨウ素酸ナトリ
ウムを使用してヌクレオチドを酸化し、ヌクレオチドを
水中でインキュベートして、β脱離によりリン酸部分を
除去することからなるデホスホ酸化ヌクレオチドの製造
方法に関する。この方法は、（ａ）ヌクレオチドを蒸留
水に溶解し、（ｂ）ヌクレオチドを過ヨウ素酸ナトリウ
ムにより酸化し、次いでエチレングリコールを加えて過
剰ＩＯ４を破壊し、（ｃ）３７℃の温度の水中でインキ
ュベートして、β脱離によりリン酸部分を除去し、（ｄ
）段階（ｃ）の酸化ヌクレオチドを高速タンパク質液体
クロマトグラフィーのモノＱカラムにより精製して、Ｕ
Ｖ２５４ｎｍ吸収ピークで流出液を収集し、（ｅ）得ら
れたヌクレオチドを凍結乾燥技術により安定化して、凍
結乾燥粉末の形態で貯蔵する段階からなる。
【００１４】酸化ヌクレオチドは、ヌクレオチドを酸化
し、次いでβ脱離によりリン酸エステルを除去すること
により得られる。酸化ヌクレオチドの構造は以下の式：
し、次いでβ脱離によりリン酸エステルを除去すること
により得られる。酸化ヌクレオチドの構造は以下の式：
【００１５】
【化５】
（式中、Ｒは窒素塩基を示す）で表される。
【００１６】前記化合物のアルデヒド基はこれ以上水和
され得ない。遊離アルデヒド基の濃度は大幅に増し、こ
のようにしてこれらの化合物は有効な抗がん剤になろう
。
され得ない。遊離アルデヒド基の濃度は大幅に増し、こ
のようにしてこれらの化合物は有効な抗がん剤になろう
。
【００１７】以下の式で表される化合物ＸＶＩＩＩ，Ｘ
ＩＸ，ＸＸ及びＸＸＩは抗がん特性を有するとみなされ
、抗がん剤として使用するために開発され得る。これら
の化合物は以下の一般式：
ＩＸ，ＸＸ及びＸＸＩは抗がん特性を有するとみなされ
、抗がん剤として使用するために開発され得る。これら
の化合物は以下の一般式：
【００１８】
【化６】
で表される。
【００１９】本発明の製造方法では、分離作用の小さい
セファデックスＧ−１０を使用せずに、イオン交換ＦＰ
ＬＣモノＱカラムを採用している。この方法により、得
られる生成物の精製効果は顕著に改善される。
セファデックスＧ−１０を使用せずに、イオン交換ＦＰ
ＬＣモノＱカラムを採用している。この方法により、得
られる生成物の精製効果は顕著に改善される。
【００２０】ヌクレオチドは不安定であるが、リン酸部
分の除去後に得られる生成物であるα，β−不飽和アル
デヒドがヌクレオチドより不安定であることが判明した
。ｐＨ値、反応時間及び温度調整のような製造又は貯蔵
条件が不適切ならば、重合反応が生じ、その結果、効率
を損なう褐色の生成物が生じるだろう。一般に塩基性溶
液又は僅かに高い温度が生成物の安定性を低減させる。 更には、安定化のためのより良い方法は、凍結乾燥粉末
であり、また中性緩衝溶液への溶解後にこの粉末を速や
かに使用することである。
分の除去後に得られる生成物であるα，β−不飽和アル
デヒドがヌクレオチドより不安定であることが判明した
。ｐＨ値、反応時間及び温度調整のような製造又は貯蔵
条件が不適切ならば、重合反応が生じ、その結果、効率
を損なう褐色の生成物が生じるだろう。一般に塩基性溶
液又は僅かに高い温度が生成物の安定性を低減させる。 更には、安定化のためのより良い方法は、凍結乾燥粉末
であり、また中性緩衝溶液への溶解後にこの粉末を速や
かに使用することである。
【００２１】以下の実施例は本発明を理解するためのも
のであり、本発明の範囲を制限するものではない。
のであり、本発明の範囲を制限するものではない。
【００２２】
【実施例】実施例１：ジヌクレオチド３−アミノピリジ
ンアデニンジヌクレオチドホスフェート（ＡＡＤＰ＋）
の酸化及び開裂により得られる生成物の分離０．１モル
のＡＡＤＰ＋を蒸留水に溶解し、この溶液を４℃でｐＨ
７．０に調整した。０．１１モルのＮａＩＯ４を加えた
。この溶液を暗闇で４℃で１時間放置した。 ０．０５ｍＭのエチレングリコールを加えて反応を停止
させた。
ンアデニンジヌクレオチドホスフェート（ＡＡＤＰ＋）
の酸化及び開裂により得られる生成物の分離０．１モル
のＡＡＤＰ＋を蒸留水に溶解し、この溶液を４℃でｐＨ
７．０に調整した。０．１１モルのＮａＩＯ４を加えた
。この溶液を暗闇で４℃で１時間放置した。 ０．０５ｍＭのエチレングリコールを加えて反応を停止
させた。
【００２３】混合物を水中、３７℃で２０分間インキュ
ベートした。β脱離によりリン酸部分を除去した。
ベートした。β脱離によりリン酸部分を除去した。
【００２４】開裂、酸化したＡＡＤＰ＋をＰｈａｒｍａ
ｃｉａ製ＦＰＬＣモノＱカラムで分離した。流速は１．
０ｍｌ／分であった。溶離液をＵＶ２５４ｎｍピークで
連続的に監視した。ＵＶ２５４ｎｍピークで収集した溶
液を急速に凍結乾燥し、構造分析のために−５０℃で貯
蔵した。
ｃｉａ製ＦＰＬＣモノＱカラムで分離した。流速は１．
０ｍｌ／分であった。溶離液をＵＶ２５４ｎｍピークで
連続的に監視した。ＵＶ２５４ｎｍピークで収集した溶
液を急速に凍結乾燥し、構造分析のために−５０℃で貯
蔵した。
【００２５】ｐＨ７．４、３０℃でヌクレオチドピロホ
スファターゼでインキュベートした後のＡＡＤＰ＋及び
ｏＡＡＤＰ＋の開裂生成物のＦＰＬＣプロフィールを図
１に示す。
スファターゼでインキュベートした後のＡＡＤＰ＋及び
ｏＡＡＤＰ＋の開裂生成物のＦＰＬＣプロフィールを図
１に示す。
【００２６】ＡＡＤＰ＋を中性ｐＨにおいて過ヨウ素酸
ナトリウムで処理すると、３−アミノピリジンに結合さ
れたリボースが酸化され、ジヌクレオチドはアデノシン
を含む部分と３−アミノピリジンを含む部分とに開裂し
た。これらの部分の分離は、薄層クロマトグラフィー、
高性能液体クロマトグラフィー及び高速タンパク質液体
クロマトグラフィーにより実施される。高速原子衝撃質
量スペクトル及び核磁気共鳴スペクトルから、アデノシ
ンを含む部分を２’−ホスホアデノシン−５’−ホスフ
ェートとして同定したが、アミノピリジン部分は水和し
た３−アミノピリジンモノヌクレオチド／ヌクレオシド
ジアルデヒドの混合物中に存在していた。完全に酸化し
た生成物をＰｈａｒｍａｃｉａ製高速タンパク質液体ク
ロマトグラフィーにより分離すると、酸化３−アミノピ
リジンヌクレオシド（ｏＡＭＳ）、２’−ホスホアデノ
シン−５’−ホスフェート（２’ＰＡｄｏ５’Ｐ）及び
２’−ホスホアデノシン−５’−ジホスフェート（２’
ＰＡｄｏ５’ＤＰ）に相当する３つの主要ピークが得ら
れた。酸化３−アミノピリジンモノヌクレオチド（ｏＡ
ＭＴ）も少量認められた。ＡＡＤＰ＋の過ヨウ素酸ナト
リウムによる酸化反応は、以下の式：
ナトリウムで処理すると、３−アミノピリジンに結合さ
れたリボースが酸化され、ジヌクレオチドはアデノシン
を含む部分と３−アミノピリジンを含む部分とに開裂し
た。これらの部分の分離は、薄層クロマトグラフィー、
高性能液体クロマトグラフィー及び高速タンパク質液体
クロマトグラフィーにより実施される。高速原子衝撃質
量スペクトル及び核磁気共鳴スペクトルから、アデノシ
ンを含む部分を２’−ホスホアデノシン−５’−ホスフ
ェートとして同定したが、アミノピリジン部分は水和し
た３−アミノピリジンモノヌクレオチド／ヌクレオシド
ジアルデヒドの混合物中に存在していた。完全に酸化し
た生成物をＰｈａｒｍａｃｉａ製高速タンパク質液体ク
ロマトグラフィーにより分離すると、酸化３−アミノピ
リジンヌクレオシド（ｏＡＭＳ）、２’−ホスホアデノ
シン−５’−ホスフェート（２’ＰＡｄｏ５’Ｐ）及び
２’−ホスホアデノシン−５’−ジホスフェート（２’
ＰＡｄｏ５’ＤＰ）に相当する３つの主要ピークが得ら
れた。酸化３−アミノピリジンモノヌクレオチド（ｏＡ
ＭＴ）も少量認められた。ＡＡＤＰ＋の過ヨウ素酸ナト
リウムによる酸化反応は、以下の式：
【００２７】
【化７】
で表される。
【００２８】実施例２：エテノ−アデノシンモノホスフ
ェートの酸化 製造方法は実施例１の製造方法と同様であり、反応は以
下の式：
ェートの酸化 製造方法は実施例１の製造方法と同様であり、反応は以
下の式：
【００２９】
【化８】
で表される。
【００３０】実施例３：過ヨウ素酸塩で酸化した３−ア
ミノピリジンアデニンジヌクレオチドホスフェート（ｏ
ＡＡＤＰ＋）への温度及びｐＨ値の作用ｏＡＡＤＰ＋、
酸化アミノピリジン部分を含んでいる水溶液は室温では
不安定であった。この水溶液は数時間の内に分解し始め
、数日でやや褐色を帯びた。長時間放置した後に、この
水溶液は重合して、水不溶性になった。 ＮＭＲスペクトル及び質量スペクトルで分析すると、６
日後にＡＡＤＰ＋ピークが消失し、次いで図２の線ａに
示す如く３つの主要ピークが出現することが判明した。 この３つの主要ピークはそれぞれｏＡＭＳ，２’ＰＡｄ
ｏ５’Ｐ及び２’ＰＡｄｏ５’ＤＰに相当している。温
度を下げると分解速度を下げることができた。図２の線
ｂは、−１８℃で１３日間貯蔵した水性試料の結果を示
している。僅かな分解しか認められなかった。試料を凍
結乾燥粉末として貯蔵すると、ｏＡＡＤＰ＋の分解速度
が更に遅くなった。我々の経験では、凍結乾燥した試料
を−５０℃で少なくとも半年間貯蔵しても、それほど分
解は生じなかった。
ミノピリジンアデニンジヌクレオチドホスフェート（ｏ
ＡＡＤＰ＋）への温度及びｐＨ値の作用ｏＡＡＤＰ＋、
酸化アミノピリジン部分を含んでいる水溶液は室温では
不安定であった。この水溶液は数時間の内に分解し始め
、数日でやや褐色を帯びた。長時間放置した後に、この
水溶液は重合して、水不溶性になった。 ＮＭＲスペクトル及び質量スペクトルで分析すると、６
日後にＡＡＤＰ＋ピークが消失し、次いで図２の線ａに
示す如く３つの主要ピークが出現することが判明した。 この３つの主要ピークはそれぞれｏＡＭＳ，２’ＰＡｄ
ｏ５’Ｐ及び２’ＰＡｄｏ５’ＤＰに相当している。温
度を下げると分解速度を下げることができた。図２の線
ｂは、−１８℃で１３日間貯蔵した水性試料の結果を示
している。僅かな分解しか認められなかった。試料を凍
結乾燥粉末として貯蔵すると、ｏＡＡＤＰ＋の分解速度
が更に遅くなった。我々の経験では、凍結乾燥した試料
を−５０℃で少なくとも半年間貯蔵しても、それほど分
解は生じなかった。
【００３１】ｏＡＡＤＰ＋の安定性へのｐＨ値の作用を
以下の表に示す。
以下の表に示す。
【００３２】
【表１】
上記結果は、ｐＨ値が高ければ高いほど、分子がより多
く開裂することを示している。
く開裂することを示している。
【００３３】実施例４：がん細胞増殖へのデホスホ酸化
ヌクレオチドの阻害作用 ＡＡＤＰ＋から得られた酸化３−アミノピリジンヌクレ
オシドの場合、ｏＡＡＤＰ＋が図３に示す如くヒトの乳
がん細胞及び口腔がん細胞の増殖を極めて強力に阻害す
ることが判明した。０．１ｍＭ及び０．２ｍＭの濃度で
ｏＡＡＤＰ＋は細胞増殖速度を抑制している。０．３ｍ
Ｍの濃度のｏＡＡＤＰ＋では増殖速度はゼロである。即
ち、細胞集団は実質的に増加していない。０．５ｍＭの
濃度のｏＡＡＤＰ＋では、細胞が指数的に死滅している
。正常なヒト細胞への細胞毒性は、図４に示す如く細胞
分化の度合い及び増殖速度に依存している。例えば３−
アミノピリジンヌクレオシドは急速に分裂する胚の腎細
胞の増殖を強力に阻害することができた。０．５ｍＭの
濃度では生細胞は経時的に減少している。しかしながら
、図４Ａに示す阻害レベルでは、正常な細胞への細胞毒
性はがん細胞への細胞毒性より低い。ヒト胚の肺細胞の
薬物耐性は比較的良好で、図４Ｂでは細胞毒性は大きく
ない。更にはヒト歯肉線維芽細胞はまったくｏＡＡＤＰ
＋の影響を受けない。
ヌクレオチドの阻害作用 ＡＡＤＰ＋から得られた酸化３−アミノピリジンヌクレ
オシドの場合、ｏＡＡＤＰ＋が図３に示す如くヒトの乳
がん細胞及び口腔がん細胞の増殖を極めて強力に阻害す
ることが判明した。０．１ｍＭ及び０．２ｍＭの濃度で
ｏＡＡＤＰ＋は細胞増殖速度を抑制している。０．３ｍ
Ｍの濃度のｏＡＡＤＰ＋では増殖速度はゼロである。即
ち、細胞集団は実質的に増加していない。０．５ｍＭの
濃度のｏＡＡＤＰ＋では、細胞が指数的に死滅している
。正常なヒト細胞への細胞毒性は、図４に示す如く細胞
分化の度合い及び増殖速度に依存している。例えば３−
アミノピリジンヌクレオシドは急速に分裂する胚の腎細
胞の増殖を強力に阻害することができた。０．５ｍＭの
濃度では生細胞は経時的に減少している。しかしながら
、図４Ａに示す阻害レベルでは、正常な細胞への細胞毒
性はがん細胞への細胞毒性より低い。ヒト胚の肺細胞の
薬物耐性は比較的良好で、図４Ｂでは細胞毒性は大きく
ない。更にはヒト歯肉線維芽細胞はまったくｏＡＡＤＰ
＋の影響を受けない。
【００３４】上記実験データは、本発明の酸化ヌクレオ
チドががん細胞増殖を阻害するために優れた特性を有し
、また細胞毒性が低いことを証明し得る。
チドががん細胞増殖を阻害するために優れた特性を有し
、また細胞毒性が低いことを証明し得る。
【００３５】本発明を好ましい実施例に関連して説明し
、また実験結果により実証したが、当業者が前述した特
許請求の範囲に規定された如き本発明の範囲を逸脱する
ことなく、本発明の好ましい実施例に原理及び変更を適
用し得ると考えられることにも留意すべきである。
、また実験結果により実証したが、当業者が前述した特
許請求の範囲に規定された如き本発明の範囲を逸脱する
ことなく、本発明の好ましい実施例に原理及び変更を適
用し得ると考えられることにも留意すべきである。
【図１】ｐＨ７．４、３０℃でヌクレオチドピロホスフ
ァターゼでインキュベートした後のＡＡＤＰ＋及びｏＡ
ＡＤＰ＋の開裂生成物のＦＰＬＣプロフィールを示す図
である。反応混合物をモノＱカラムにかけ、１ｍｌ／分
の流速で溶離した。線ａは４５分間加水分解後のＡＡＤ
Ｐ＋、線ｂは２時間加水分解後のｏＡＡＤＰ＋を示す。
ァターゼでインキュベートした後のＡＡＤＰ＋及びｏＡ
ＡＤＰ＋の開裂生成物のＦＰＬＣプロフィールを示す図
である。反応混合物をモノＱカラムにかけ、１ｍｌ／分
の流速で溶離した。線ａは４５分間加水分解後のＡＡＤ
Ｐ＋、線ｂは２時間加水分解後のｏＡＡＤＰ＋を示す。
【図２】種々の条件下で貯蔵した水溶液中のｏＡＡＤＰ
＋のＦＰＬＣプロフィールである。線ａは室温で６日間
貯蔵した場合を示し、線ｂは−１８℃で１３日間貯蔵し
た場合を示している。
＋のＦＰＬＣプロフィールである。線ａは室温で６日間
貯蔵した場合を示し、線ｂは−１８℃で１３日間貯蔵し
た場合を示している。
【図３Ａ】ヒト口腔がん細胞増殖のｏＡＡＤＰ＋による
阻害を示している。
阻害を示している。
【図３Ｂ】ヒト乳がん細胞増殖のｏＡＡＤＰ＋による阻
害を示している。
害を示している。
【図４Ａ】ヒト胚腎細胞増殖へのｏＡＡＤＰ＋の作用を
示している。
示している。
【図４Ｂ】ヒト胚肺細胞増殖へのｏＡＡＤＰ＋の作用を
示している。
示している。
【図４Ｃ】ヒト歯肉線維芽細胞増殖へのｏＡＡＤＰ＋の
作用を示している。
作用を示している。
Claims (4)
- 【請求項１】 以下の式： 【化１】 （式中、Ｒは窒素塩基を示す）で表されるデホスホ酸化
ヌクレオチド。 - 【請求項２】 化合物ＸＶＩＩＩ，ＸＩＸ，ＸＸ又は
ＸＸＩの構造が、以下の式： 【化２】 で表されることを特徴とする請求項１に記載のデホスホ
酸化ヌクレオチド。 - 【請求項３】 （ａ）ヌクレオチドを蒸留水に溶解し
、（ｂ）ヌクレオチドを過ヨウ素酸ナトリウムにより酸
化し、次いでエチレングリコールを加えて過剰ＩＯ４を
破壊し、（ｃ）ヌクレオチドを３７℃の温度の水中でイ
ンキュベートして、β脱離によりリン酸部分を除去し、
（ｄ）段階（ｃ）の酸化ヌクレオチドを高速タンパク質
液体クロマトグラフィーを使用して精製し、（ｅ）得ら
れた酸化ヌクレオチドを凍結乾燥により安定化して、凍
結乾燥粉末として貯蔵する段階からなることを特徴とす
るデホスホ酸化ヌクレオチドの製造方法。 - 【請求項４】 抗がん剤として使用され、正常なヒト
細胞への細胞毒性が低いことを特徴とする請求項１又は
２に記載のデホスホ酸化ヌクレオチド。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13841891A JPH04338377A (ja) | 1991-05-14 | 1991-05-14 | デホスホ酸化ヌクレオチド、並びにその製造、精製及び安定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13841891A JPH04338377A (ja) | 1991-05-14 | 1991-05-14 | デホスホ酸化ヌクレオチド、並びにその製造、精製及び安定化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04338377A true JPH04338377A (ja) | 1992-11-25 |
Family
ID=15221505
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13841891A Pending JPH04338377A (ja) | 1991-05-14 | 1991-05-14 | デホスホ酸化ヌクレオチド、並びにその製造、精製及び安定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04338377A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITTO20110652A1 (it) * | 2011-07-20 | 2013-01-21 | Medestea Res & Production S P A | Composto derivato dall'adenina avente azione immuno-modulante, antinfiammatoria e antidolorifica |
-
1991
- 1991-05-14 JP JP13841891A patent/JPH04338377A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITTO20110652A1 (it) * | 2011-07-20 | 2013-01-21 | Medestea Res & Production S P A | Composto derivato dall'adenina avente azione immuno-modulante, antinfiammatoria e antidolorifica |
| WO2013011489A1 (en) * | 2011-07-20 | 2013-01-24 | Medestea Research & Production S.P.A. | Adenine derivatives having immunomodulating anti-inflammatory and analgesic activity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Basu et al. | Mutagenic and genotoxic effects of three vinyl chloride-induced DNA lesions: 1, N6-ethenoadenine, 3, N4-ethenocytosine, and 4-amino-5-(imidazol-2-yl) imidazole | |
| Furman et al. | The anti-hepatitis B virus activities, cytotoxicities, and anabolic profiles of the (-) and (+) enantiomers of cis-5-fluoro-1-[2-(hydroxymethyl)-1, 3-oxathiolan-5-yl] cytosine | |
| Hess et al. | Cytochemical localization of pyridine nucleotide-linked dehydrogenases | |
| Kawanishi et al. | Mechanism of guanine-specific DNA damage by oxidative stress and its role in carcinogenesis and aging | |
| Zhao et al. | Mutation versus repair: NEIL1 removal of hydantoin lesions in single-stranded, bulge, bubble, and duplex DNA contexts | |
| Yoshimura et al. | A novel synthesis of 2 ‘-modified 2 ‘-deoxy-4 ‘-thiocytidines from d-Glucose1 | |
| Slama et al. | Specific inhibition of poly (ADP-ribose) glycohydrolase by adenosine diphosphate (hydroxymethyl) pyrrolidinediol | |
| Seela et al. | Palindromic oiigonucleotides containing 7-deaza-2'-deoxyguanosine: solid-phase synthesis of d [(p) GG* AATTCC] octamers and recognition by the endodeoxyribonnclease EcoRI | |
| US4507287A (en) | Preparation and method for the treatment of acne | |
| US5739013A (en) | Enzymatic synthesis of 2',5'-oligoadenylate-2',3'-cyclophosphates and treatment of papillomaviruses | |
| US4210746A (en) | Nucleotide inhibitor of protein synthesis | |
| US4331662A (en) | Methods for the treatment of viral infections | |
| Guan et al. | TET-dioxygenase deficiency in oncogenesis and its targeting for tumor-selective therapeutics | |
| Kleineidam et al. | Efficient cleavage of pre-tRNAs by E. coli RNAse P RNA requires the 2′-hydroxyl of the ribose at the cleavage site | |
| Duffy et al. | Stereoselectivity of interaction of phosphoenolpyruvate analogs with various phosphoenolpyruvate-utilizing enzymes | |
| US5593999A (en) | Non-classical folate analogue inhibitors of glycinamide ribonucleotide formyltransferase (GARFT) | |
| Taktakishvili et al. | Recognition and inhibition of HIV integrase by a novel dinucleotide | |
| Drabikowska et al. | Studies on the mechanism of antiviral action of 1-(. beta.-D-ribofuranosyl)-1, 2, 4-triazole-3-carboxamide (ribavirin) | |
| Kuwahara et al. | Transcription and reverse transcription of artificial nucleic acids involving backbone modification by template-directed DNA polymerase reactions | |
| Liang et al. | α, β-Methylene-2′-deoxynucleoside 5′-triphosphates as noncleavable substrates for DNA polymerases: Isolation, characterization, and stability studies of novel 2′-deoxycyclonucleosides, 3, 5′-cyclo-dG, and 2, 5′-cyclo-dT | |
| US5852001A (en) | Method and compounds for inhibition of ribonucleases | |
| Eaton et al. | Poly (5-chlorocytidylic acid) | |
| Dyrkheeva et al. | Excision of Carbohydrate-Modified dNMP Analogues from DNA 3'end by Human Apurinic/Apyrimidinic Endonuclease 1 (APE1) and Tyrosyl-DNA Phosphodiesterase 1 (TDP1) | |
| JPS6121560B2 (ja) | ||
| Hampton et al. | Inactivation of rabbit, pig, and carp adenylate kinases by N6-o-and p-fluorobenzoyladenosine 5'-triphosphates |