JPH04346731A - リンドウの体細胞胚による増殖法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は体細胞胚によるリンドウ
の大量増殖方法に関する。本発明は農業分野等で完成し
た品種を採種するに先だって速やかに大量に栄養繁殖す
る目的に、および優れた個体を栄養繁殖し品種として直
接利用する等の目的のために用いられれる。

【０００２】

【従来の技術】植物分野における体細胞胚の誘導はニン
ジンにおいて発見されて以来多くの植物で研究され植物
体が再生されている。一般に体細胞胚は植物の組織を高
濃度のオーキシンおよび低濃度のサイトカイニンを含む
人工培地で培養し、直接体細胞胚を誘導あるいは体細胞
胚を形成する能力のあるカルスを誘導したのち上記ホル
モンの濃度を低下させた培地に移し培養することによっ
て得られる。（ＨＡＮＤＢＯＯＫ　　ＯＦ　　ＰＬＡＮ
Ｔ　　ＣＥＬＬ　　ＣＵＬＴＵＲＥ，Ｍａｃｍｉｌｌａ
ｎＣａｍｐａｎｙ発刊）この体細胞胚による植物体再生
は従来より行われている茎頂培養もしくは不定芽培養あ
るいは苗条原基培養に比較し格段に増殖効率が高く、ま
た、操作も容易なことから大幅なコスト低減が可能とな
り大量増殖に有望な手段である。

【０００３】しかし、セリ科の植物を除き、多くの場合
、実用的な作物では体細胞胚の誘導は困難である。体細
胞胚による増殖方法をリンドウに適用し成功した例は知
られていない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】リンドウは通常種子繁
殖で増殖されているが、雑種性が強いため種子では花の
色や開花時期などの重要形質が分離し均一な個体が得ら
れない。従って優れた固体を組織培養により大量増殖し
、品種として直接利用することが望まれている。茎頂培
養や苗条原基培養による増殖法では、増殖率が低いこと
、越冬芽が形成されにくいという問題点がある。

【０００５】本発明は上記の欠点を克服し、リンドウを
大量に増殖しうる方法を提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成すべく鋭
意研究した結果、体細胞胚による増殖法を用いることに
より問題を解決しリンドウを大量に増殖できることを見
出し本発明を完成させたのである。

【０００７】本発明は、リンドウの組織片を摘出し、こ
れを植物生長調節ホルモンを含む人工培地で培養し、組
織片から直接体細胞胚を形成させるか、あるいはカルス
形成を経て体細胞胚を形成させ、これらを植物生長調節
ホルモンの濃度を低めたあるいはこれを含まない培地で
培養して生長させ、苗化することを特徴とするリンドウ
の体細胞胚による増殖法である。

【０００８】本発明の方法を実施するに際しては、リン
ドウの組織を摘出し、これを植物生長調節ホルモンを含
ませた人工培地に移植し、１５〜３５℃の温度、暗黒ま
たは照明下で培養することにより植物組織から直接に体
細胞胚を誘導、または植物体より体細胞胚を形成する能
力のあるカルスを経由して体細胞胚を誘導し、これらを
さらに人工培地で生育して苗化する。

【０００９】また本発明は体細胞胚によりリンドウ（エ
ゾリンドウ系、ササリンドウ系、オヤマリンドウ系、ミ
ヤマリンドウ系およびこれらの交配系）の遺伝子型およ
び染色体型を多年にわたって維持し大量に栄養繁殖させ
る方法を提供するものである。本発明にいう体細胞胚と
は植物組織またはカルスから出現する長さ０．５ｍｍ〜
５ｍｍで幼根、子葉など種子にある胚と類似の器官を備
えた構造体をさし根と芽のそれぞれの生長点を有する。

【００１０】本発明の構成を次に詳しく説明する。■培
養に用いるリンドウの組織片、■組織片からのカルス誘
導と増殖、■体細胞胚の誘導、■植物体への再分化、に
わけて説明する。

【００１１】■培養に用いるリンドウの組織片培養に用
いるリンドウの組織、つまり外植体は植物体のいずれの
部分であってもよい。種子を用いる場合には発芽前ある
いは発芽後の子葉、胚軸、根、生長点近傍などが適する
。また受精後の未熟胚なども良い。畑に植えてある株の
場合には茎の生長点近傍、葉、茎、花器などがある。雑
菌の汚染や組織の取出し易さから生長点近傍が最も適す
る。これらの外植片はいずれも次亜塩素酸ナトリウムな
どを用いて表面殺菌する。殺菌に用いる薬剤の種類、濃
度、処理時間などは培養に用いる外植片の状態により選
択する。表面殺菌した組織から培養する部位を無菌的に
取出す。組織片が小さいときは実体顕微鏡下で行うとさ
らに良い。このようにして得られた組織片を次のカルス
の誘導に用いる。

【００１２】■組織片からのカルスの誘導と増殖リンド
ウの組織片を人工培地で培養することによりカルスを誘
導できる。本発明の方法において、人工培地としては、
慣用のものを用いることができ、例えばムラシゲ・スク
ーグ（以下ＭＳと称する）、ガンボーグのＢ５などの成
分をそのまま、またはその成分をかえて用いることがで
きる。これに炭素源としてショ糖、グルコースなどを加
える。植物生長調節ホルモンとしては２，４−ジクロロ
フェノキシ酢酸（以下２，４−Ｄと称する）、ナフタレ
ン酢酸などのオーキシン類、また、カイネチン、ベンジ
ルアミノプリン、ゼアチンなどのサイトカイニン類、そ
のほかジベレリン、アンシミドール、アブサイシン酸な
どを組み合わせて用いることができる。このほかには、
有機物としてイノシトール、ニコチン酸、ピリドキシン
塩酸などのビタミン類やカゼイン加水分解物、麦芽エキ
スなどの天然物などが用いられる。培地のｐＨは５〜６
が良い。固体培地で培養するときは寒天あるいはジェラ
ンガムなどを加える。培養温度は１５〜３５℃が適当で
あり、好ましくは２０℃〜２５℃前後である。光は散光
下または暗黒下でもよい。

【００１３】無菌的に取出したリンドウの組織片を固体
または液体培地に置くと１ケ月程度でカルスが誘導され
る。このときカルスとともに組織片から直接に体細胞胚
が形成され植物体に再生することもある。このカルスを
１週間〜２ケ月で植え継ぐが、培養温度、培地の種類に
もよるが通常は１ケ月程度で新しい培地に植えかえる。

【００１４】誘導されたカルスは、誘導と同じ培地また
は培地の構成をかえて培養増殖することができる。また
、固体培地または液体培地どちらでも培養できる。

【００１５】植え継ぐときに、黄白色で脆く細胞が小さ
く緻密なカルスを選び出してこれを植え継ぐとよい。

【００１６】■体細胞胚の誘導と植物体への再分化上記
のようにして得られたカルスを無機塩濃度を低下させた
培地に植物生長調節ホルモンなどの濃度を下げるか、あ
るいはまったく含まない培地に移すと体細胞胚が誘導さ
れる。とくに２，４−Ｄを含む培地から２，４−Ｄ濃度
を低下させた培地またはまったく含まない培地にカルス
を移すと体細胞胚が効率的に誘導される。体細胞胚は、
球状胚、心臓胚、魚雷胚をへて成熟した体細胞胚を形成
する。体細胞胚をさらに生長させ再分化するためには公
知の方法で行うことができ、体細胞胚を誘導した時の培
地と同じ組成の培地で好結果が得られる。この時は２０
００〜１０，０００ｌｕｘ　程度の明条件下で行う方が
良い。

【００１７】培養器内で再生したリンドウは無菌的な培
土に植えかえ、外界の環境に徐々に馴れさせ順化し、圃
場に植えリンドウの栽培方法に従って栽培することがで
きる。

【００１８】この方法により、カルスを増殖しこれを再
分化させることにより、無限的にリンドウを増殖するこ
とができる。

【００１９】

【実施例】以下実施例により本発明を詳しく説明するが
これに限定されたものではない。

【００２０】（カルスの誘導と増殖）圃場で栽培されて
いるエゾリンドウ（Ｇｅｎｔｉａｎａ　　ｔｒｉｆｌｏ
ｒａＰａｌｌ）の花芽分化前の生長しつつある茎を切り
とり、大きな葉を取り除き茎頂部分約５ｃｍを洗剤で洗
う。 これを界面活性剤を含む次亜塩素酸ナトリウム（有効塩
素０．５％）溶液中に１５分間浸漬し、表面殺菌したあ
と滅菌水で洗浄した。これを実体顕微鏡下で、２〜５対
の幼原基を含む茎頂部（約０．５〜１ｍｍ）を無菌的に
摘出した。

【００２１】カルス誘導培地はＭＳ培地を２倍に希釈し
、ショ糖３％を基本培地とし、植物生長ホルモンとして
２，４−Ｄを１０μＭ加えてｐＨ５．５に調整したジェ
ランガム０．２％固体培地とし、１００ｍｌコニカルフ
ラスコに分注後オートクレーブした。培地組成を表１に
示した。

【００２２】無菌的に取出した茎頂部を上記の培地に置
床した。培養温度は２０〜２５℃、４５００ｌｕｘ　、
１６時間日長で行った。１ケ月ごとに組織片や誘導され
たカルスを新しい培地に移しかえた。培養開始後１年後
に体細胞胚および体細胞胚を形成するカルスが誘導され
、同じ培地でカルスを増殖した。

【００２３】また、増殖したカルスは誘導培地と同じ組
成でジェランガムを含まない液体培地中でさらに増殖し
た。

【００２４】

【表１】

【００２５】（苗化）つぎに、苗化用の培地として前記
培地から２，４−Ｄを除いた液体または固体培地を用い
た。

【００２６】固体培地上で増殖したカルスは、ジェラン
ガム０．２％の苗化用固体培地に移すと２週間後ころよ
り体細胞胚が誘導されはじめリンドウが再生する。カル
スの誘導時に誘導された体細胞胚も同様にして苗化でき
た。再生したリンドウは生育にあわせ、同じ組成の培地
に植えかえ生長を促進させる。

【００２７】また、液体培地中で増殖したカルスは、２
，４−Ｄを含まない苗化用の液体培地で３回洗浄する。 カルスの自然沈降した体積を測定し、１０倍に希釈する
。容器としてプラントボックスを用い、ジェランガム１
％を加えた苗化用固体培地５０ｍｌを入れオートクレー
ブ減菌後、培地上に上記に調整した細胞懸濁液５ｍｌを
散布した。培養は２５℃で明所で行った。

【００２８】培養１ケ月後には体細胞胚が形成され、こ
れをジェランガム濃度を０．２％とした苗化培地に移し
発芽させた結果、リンドウが再生できた。これらの再生
したリンドウは順化し、鉢上げし育てた。鉢上げ４ケ月
後にリンドウの越冬芽を調査したところすべてが越冬芽
を形成していた。

【００２９】

【発明の効果】本発明の方法によれば、花の色や形ある
いは開花時期などの重要な形質が均一なリンドウを大量
に増殖することができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　リンドウの組織片を摘出し、これを植
   物生長調節ホルモンを含む人工培地で培養し、組織片か
   ら直接体細胞胚を形成させるか、あるいはカルス形成を
   経由して体細胞胚を形成させ、これらを植物生長調節ホ
   ルモンの濃度を低めたあるいはこれを含まない培地で培
   養して生長させ、苗化することを特徴とするリンドウの
   体細胞胚による増殖法。