JPH04349895A - Ｄ−エリスロ−ジヒドロキシフェニルセリン誘導体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、Ｄ−エリスロ−３−（
３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体（以下、
Ｄ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体と略す）の製造方法に関
する。Ｄ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体は医薬品として有
用であるＤ−エリスロ−ＤＯＰＳ合成の重要な中間体で
ある。

【０００２】

【従来の技術】従来、Ｄ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体の
合成は以下の方法により行われていた。即ち、カテコ−
ル部分を保護したプロトカテキュアルデヒド誘導体とグ
リシンを強アルカリ下で縮合させ、ラセミ−スレオ／エ
リスロ−ＤＯＰＳ誘導体を得、次にこうして得られた生
成物をスレオ／エリスロ体の相互分離処理を行ない、次
にラセミ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体を光学分割するた
めに、カテコール部分の保護基を除去後、アミノ基部分
に置換基を導入し、キニン、ブルシン等の分割剤を用い
て光学分割を行い、最後にアミノ基部分の置換基を除去
するという方法である（Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，５２，１
７３４（１９１９）；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，６５８
（１９４７）；Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，８７，８９２（１
９５４）；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７６，１３
２２（１９５４）；Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．，
５８，１４７（１９７５）　）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】Ｄ−エリスロ−ＤＯＰ
Ｓ誘導体の合成にあたっては、各種の特定の保護基を導
入したり、除去することが必要であるのに加えて、この
合成において複数の立体異性体が産生され、それら立体
異性体相互の分離が、大きな課題となっている。このよ
うに、その合成工程において２種以上の立体異性体が生
じることから、それら異性体の分離には少なくとも複数
の工程が必須であり、さらに各種保護基の導入除去工程
もそれに伴って必要であることから、工業的製造の上で
大きな問題となっていた。

【０００４】このうち特に、光学分割法は、工程が複雑
で収率が悪いばかりでなく、それに使用する光学分割剤
も高価であり、工業的製造法としては問題があった。さ
らに従来の光学分割法では、ラセミ体分離前に必ず、ス
レオ／エリスロ体間の分離処理も必要としており、さら
にこれらの方法の結果得られる不要の生成物、すなわち
、Ｌ−エリスロ誘導体及びＤ，Ｌ−スレオ誘導体は、再
度それを利用するために別途ラセミ化したり、分解した
りする必要があり、ますます製造設備などが複雑となる
ことになっていた。

【０００５】本発明者らは、Ｄ−エリスロ−ＤＯＰＳ合
成にあたり重要な中間体であるＤ−エリスロＤＯＰＳ誘
導体のみを得ることのできる手法を鋭意検討した結果、
ラセミ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体に、特定の基質特異
性を有する酵素を作用させることにより、特異的にＤ−
エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体のみが得られることを見出し
、本発明を完成したものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】すなわち本発明法は、（
１）一般式

【０００７】

【化２】

【０００８】（式中、Ｒ１　、Ｒ２　は同一又は相異な
り、水素、低級アルキル又はアラルキル基を示すが、Ｒ
１　、Ｒ２　共にアルキレン基で置換されて環を形成し
てもよい）で表わされるラセミ−エリスロ−３−（３，
４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体に、Ｌ−エリ
スロ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘
導体を特異的にグリシンと対応するプロトカテキュアル
デヒド誘導体に分解する能力を有する酵素、同酵素を産
生する微生物菌体あるいは菌体処理物を作用させること
により、Ｌ−エリスロ−３−（３，４−ジヒドロキシフ
ェニル）セリン誘導体を合成原料であるグリシンと対応
するプロトカテキュアルデヒド誘導体に分解することを
特徴とするＤ−エリスロ−３−（３，４−ジヒドロキシ
フェニル）セリン誘導体の製造法及び、

【０００９】（２）Ｌ−エリスロ−３−（３，４−ジヒ
ドロキシフェニル）セリン誘導体を特異的にグリシンと
対応するプロトカテキュアルデヒド誘導体に分解する酵
素が、Ｌ−アロスレオニンアルドラーゼである（１）記
載の方法及び、（３）Ｌ−エリスロ−３−（３，４−ジ
ヒドロキシフェニル）セリン誘導体を特異的にグリシン
と対応するプロトカテキュアルデヒド誘導体に分解する
酵素を産生する微生物が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ａｌｃ
ａｌｉｇｅｎｅｓ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ａｒ
ｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に
属する微生物よりなる群から選ばれた少なくとも１種の
微生物よりなる（１）記載の方法である。

【００１０】以下、さらに本発明について詳しく説明す
る。本発明で用いられる原料ラセミ−エリスロ−ＤＯＰ
Ｓ誘導体としては、上記式（Ｉ）を有する化合物があげ
られるが、それら化合物は、その保護基のＲ１　及びＲ
２　が同一又は相異なるところの化合物の混合物であっ
てもよい。上記式（Ｉ）で示される化合物の代表的なも
のとしては、ラセミ−エリスロ−３−（３，４−メチレ
ンジオキシフェニル）セリン、ラセミ−エリスロ−３−
（３，４−ジベンジルオキシフェニル）セリン、ラセミ
−エリスロ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セ
リン、ラセミ−エリスロ−３−（３，４−ジメトキシフ
ェニル）セリンあるいはそれらの混合物があげられる。

【００１１】本発明においては、Ｄ−エリスロ−ＤＯＰ
Ｓ誘導体以外の異性体、すなわち、Ｌ−エリスロ−ＤＯ
ＰＳ誘導体を特異的に分解するのみでなく、その異性体
をグリシンと対応するプロトカテキュアルデヒド誘導体
とに分解することから、こうして得られたグリシンと対
応するプロトカテキュアルデヒド誘導体はそれを再度合
成に使用できる。

【００１２】本発明には、Ｌ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導
体を特異的にグリシンと対応するプロトカテキュアルデ
ヒド誘導体に分解する能力を有する酵素であればいずれ
も使用可能であり、その酵素と実質的に同一な活性を有
するもの、例えば、それら酵素を産生する微生物そのも
の、あるいは菌体の処理物等も用いることが出来る。さ
らに、本発明者らは、上記の性質を有する酵素としてＬ
−アロスレオニンアルドラーゼを用いれば良好な結果が
得られることを見出した。Ｌ−アロスレオニンアルドラ
ーゼは、Ｌ−アロスレオニンに作用してグリシンとアセ
トアルデヒドに分解する酵素である（特公昭６３−５４
３５９）が、本発明者らはＬ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導
体にも特異的に作用し、グリシンと対応するプロトカテ
キュアルデヒド誘導体に分解することを見出した。

【００１３】Ｌ−アロスレオニンアルドラーゼ産生菌と
しては、例えば、アルカリゲネスフェカリス（Ａｌｃａ
ｌｉｇｅｎｅｓ　　ｆａｅｃａｌｉｓ）（ＩＦＯ　　１
２６６９）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
）ＤＫ−２　（微工研菌寄６２００号）、アスロバクタ
ー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）ＤＫ−１９　（微工研
菌寄６２０１号）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ＤＫ
−３９（微工研菌寄６２０２号）などが知られている（
特公昭６３−５４３５９）が、これらのものに限定され
ることなく使用することもできる。

【００１４】また、Ｌ−アロスレオニンアルドラーゼの
合成に関与する遺伝子を担うＤＮＡを遺伝子組換えなど
の手法を用いて導入して作成された組換え体も、好適に
使用することができる。このような遺伝子を導入して利
用しうる微生物としては、例えばエシェリヒア（Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ）属細菌、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属細菌、キサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
）属細菌、アセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）
属細菌、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属
細菌、グルコノバクター（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ
）属細菌、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ）
属細菌、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）属細菌、ア
ルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属細菌、クレ
ブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属細菌、サルモネラ
（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属細菌、セラチア（Ｓｅｒｒ
ａｔｉａ）属細菌などの原核微生物や酵母などの下等真
核生物などを用いることができる。

【００１５】本発明に用いる微生物は常法に従って培養
することが出来る。培養に用いられる培地は微生物の生
育に必要な炭素源、窒素源、無機物質等を含む通常の培
地である。ここで用いられる炭素源としては、グルコー
ス、リボース、ガラクトース、可溶性デンプンなどがあ
げられ、窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、硝酸アンモニウム、ペプトン、肉エキス、イー
ストエキス、コーンスティプリカー、大豆粉、綿実カス
などがあげられる。また、塩化ナトリウム、カリウム塩
、カルシウム塩、アンモニウム塩、燐酸塩などの他、亜
鉛、マグネシウム、鉄、マンガンなどの無機物も使用で
きる。更に、ビタミン、アミノ酸等の有機微量栄養素を
添加すると望ましい結果が得られる場合が多い。培養は
、好気的条件下でｐＨ４〜１０、温度２０〜６０℃の任
意の範囲に制御して１〜１０日間培養を行えばよい。 組換え体を用いる場合、使用する菌株に応じて、アンピ
シリン、クロラムフェニコール等の抗生物質を培養液に
添加してもよい。

【００１６】酵素反応にあたっては、菌体の培養液、培
養液から分離した菌体、凍結乾燥などによる乾燥菌体、
菌体破砕液、粗酵素抽出液、精製酵素、さらには、上記
の処理物および固定化物、その他何れも使用できる。酵
素反応を実施する方法は、水性媒体中にて基質であるラ
セミ−エリスローＤＯＰＳ誘導体を、上に記した微生物
の培養液、菌体、菌体処理物、酵素、あるいはこれらを
通常の方法で固定化したものと接触させれば良い。かか
る反応時の水性媒体としては、例えば、水、緩衝液、含
水有機溶媒等が使用できる。

【００１７】反応における酵素、微生物菌体あるいは菌
体処理物等の濃度は、Ｌ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体を
完全に分解できるならば特に制限はないが、Ｌ−アロス
レオニンアルドラーゼ活性（１ＵはＬ−アロスレオニン
から１分間に１μｍｏｌｅのグリシンを生成するのに必
要な酵素量を表わす）で、０．０１Ｕ／ｍｌ以上である
ことが好ましい。特に、０．１Ｕ／ｍｌ以上であれば反
応を速やかに終了させることが出来る。

【００１８】基質であるラセミ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘
導体の濃度は、反応を著しく阻害しない程度であれば良
く１ｍｍｏｌｅ／リットル〜１００ｍｍｏｌｅ／リット
ルが好ましく、基質の供給は、一括、連続、分割のいず
れの手段でも実施出来る。

【００１９】反応温度は、１０〜５５℃が良く、２０〜
４０℃がより好適である。反応時のｐＨは５〜１０、好
ましくは６〜８である。Ｌ−アロスレオニンアルドラー
ゼは、ピリドキサール−５′−リン酸を補酵素として要
求するため、反応系に１０ｎｍｏｌｅ／リットル〜１０
ｍｍｏｌｅ／リットル、好ましくは１μｍｏｌｅ／リッ
トル〜１００μｍｏｌｅ／リットルの濃度で添加するこ
とにより反応が促進される。

【００２０】反応形式はバッチ方式、連続方式のいずれ
でも良いが、かくして、反応は０．５〜５０時間程度で
終了する。反応終了後、反応液は遠心分離や限外ろ過等
により除菌・除タンパクし、まず有機溶媒抽出により生
成プロトカテキュアルデヒド誘導体を分離する。抽出に
は、プロトカテキュアルデヒド誘導体の溶解性が高く、
Ｄ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体及びグリシンがほとんど
不溶である溶媒であればいずれも使用することが出来る
が、エーテルを使用すると良好な結果が得られる。

【００２１】溶媒相からは減圧濃縮することによりプロ
トカテキュアルデヒド誘導体を回収する。水相からのＤ
−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体とグリシンの単離回収は、
通常のイオン交換樹脂を用いたクロマト分離によって行
うことが出来る。すなわち、水相を陽イオン交換樹脂を
充填したカラムに通液、水洗後、希アンモニア水等によ
り溶出を行う。

【００２２】純度が低い場合には、さらに晶析・水再結
晶を行うことにより精製度を高めることが出来る。上記
反応生成物の単離精製法は、一つの代表的な方法を例示
したものであり、好ましい方法であるが、本発明におい
てはそれに限定されることなく各種の分離精製法が適用
できる。このような方法の例としては、メタノール、エ
タノール等のアルコール系溶媒、ベンゼン、トルエン等
の芳香族炭化水素系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶
媒、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン溶媒、ジ
メチルスルホキシド等のスルホキシド類溶媒、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド等のアミド溶媒、アセトニトリル
などのニトリル系溶媒、エチルエーテル、ジオキサン、
テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒、メチレンクロ
ライド等のハロゲン化炭化水素溶媒及びそれらの混合溶
媒あるいはそれらの水性溶媒などを用いた溶媒抽出など
の分離法、カラムクロマトグラフィー、逆相クロマトグ
ラフィー、高速液体クロマトグラフィー、再結晶化法な
どの方法をあげることができる。

【００２３】本発明の方法によると、 （１）光学分割のための置換基の導入及び除去が不要で
あり、さらに高価な光学分割剤を用いる必要もなく、収
率も高い。 （２）非常に装置工程を単純化できるので、装置のため
の設備費を大巾に節約することができる。 （３）Ｌ−エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体は共に合成原料で
あるグリシンとプロトカテキュアルデヒド誘導体に分解
されるため、それらは再度反応液から回収してラセミ−
スレオ／エリスロ−ＤＯＰＳ誘導体合成にリサイクル使
用することができ、生産コストを大きく低減させること
ができる。特に、カテコール部分を保護した誘導体を基
質として用いて本発明の処理を行なった場合においても
、本発明の処理は良好に行なうことができ、更に回収さ
れたプロトカテキュアルデヒド誘導体には、保護基がそ
のまま残っているので再度保護基の導入操作を行なうこ
となく、それをそのまま合成原料に用いることができる
。 （４）原料からの目的物の収率を大巾に高めることがで
きると共に、高純度の目的物を簡単に取得できる。

【００２４】

【実施例】次に、実施例により本発明の方法を更に詳し
く説明するが、本発明は実施例により限定されるもので
はない。例中％は重量％を示す。

【００２５】酵素製造例１ ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．５％、塩化ナト
リウム０．５％からなるｐＨ７．５の培地を調製し、５
リットルの培養槽にその３リットルを添加し、１２０℃
で１５分間加熱殺菌した。その培地にＢａｃｉｌｌｕｓ
　　ＤＫ−３９（微工研菌寄６２０２号）を接種し、ｐ
Ｈ７．５に保ちながら３０℃で２０時間通気及び攪拌を
しつつ培養した。培養終了後、培養液から菌体を遠心分
離で集菌、水洗後、０．０１ｍＭピリドキサ−ル−５’
−リン酸を含むｐＨ７．５の５０ｍＭＴｒｉｓ（Ｔｒｉ
ｓｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ　　ａｍｉｎｏｍｅｔｈ
ａｎｅ）緩衝液１００ｍｌに懸濁し、この菌体懸濁液を
２０ＫＨｚ、３分間の超音波破砕処理を４回行い、破砕
液の懸濁物質を遠心分離で除去して粗酵素液を調製した
。次に、この粗酵素液を陰イオン交換樹脂ＤＥＡＥ−Ｃ
ｅｌｌｕｌｏｆｉｎｅＡ−５００（生化学工業（株）製
）を充填したカラム（２．６ｍｍφ×１０ｃｍ）に通液
、上記緩衝液で洗浄後、塩化ナトリウム直線グラジェン
トにより溶出・分画し、Ｌ−アロスレオニンアルドラー
ゼ活性を有する画分（粗精製酵素液）２０ｍｌを得た。 得られた粗精製酵素液のＬ−アロスレオニンアルドラー
ゼ活性（１ＵはＬ−アロスレオニンから１分間に１μｍ
ｏｌｅのグリシンを生成するのに必要な酵素量を表わす
）を測定した。 粗精製酵素液　　：　　１．３　　Ｕ／ｍｌ

【００２６
】酵素製造例２ 酵素製造例１と同様の方法で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
　　ＤＫ−２（微工研菌寄６２００号）、Ａｌｃａｌｉ
ｇｅｎｅｓ　　ｆａｅｃａｌｉｓ（ＩＦＯ１２６６９）
及びＡｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　　ＤＫ−１９（微工研
菌寄６２０１号）の粗精製酵素液を調製した。得られた
粗精製酵素液のＬ−アロスレオニンアルドラーゼ活性を
測定した。結果を表１に示す。

【００２７】

【表１】

【００２８】合成例１ ラセミーエリスロ−３−（３，４−メチレンジオキシフ
ェニル）セリンの合成　　水酸化カリウム４８．８ｇ、
グリシン２６．４ｇをメタノール８４４ｍｌに溶解し、
３０℃以下でピペロナール１１６ｇを加え６５℃で３０
分間撹拌後、減圧濃縮を行った。残渣をメタノール１０
８ｍｌに溶解し、３０℃以下で酢酸６４．８ｇを加え、
４５℃で１時間撹拌した。トルエン１０００ｍｌと水１
０８ｍｌを加え、４５℃で３０分間撹拌、さらに５℃で
２時間撹拌後、析出した結晶を除去した母液を、さらに
室温で２０時間撹拌し、析出した結晶を濾取し、乾燥し
たところ、４．２８ｇの結晶が得られた。この結晶に５
０ｍｌの水を加え、還流下８０℃で撹拌溶解後濾過し、
母液を５℃で２時間撹拌することにより水からの再結晶
を行った。濾取した結晶を乾燥させ、２．９ｇのラセミ
ーエリスロ−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル
）セリンを得た。 ｍｐ：１９０℃（分解） ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）ν（ｃｍ−１）：３４００，３２０
０，１６００，１３００，１２４０，１０２０，９１０
また、ο−フタルアルデヒドとＮ−アセチル−Ｌ−シス
ティンによる誘導体化後、ＯＤＳカラムを用い、ＨＰＬ
Ｃによる異性体分析によって、各異性体の比率を調べた
。 Ｌ−スレオ体：Ｄ−スレオ体：Ｌ−エリスロ体：Ｄ−エ
リスロ体＝０：０：５０：５０

【００２９】合成例２ ラセミーエリスロ−ＤＯＰＳの合成 　　合成例１で得られたラセミ−エリスロ−３−（３，
４−メチレンジオキシフェニル）セリン２ｇとジクロロ
メタン２０ｍｌ、エチルメルカプタン２ｍｌを混合し、
無水臭化アルミニウム１０ｇを氷冷下で撹拌しながら加
え、氷冷下で３時間、さらに室温で１５時間撹拌した。 この反応液に１Ｎ塩酸２００ｍｌを加え混合後分液し、
水層のｐＨを水酸化ナトリウムで約５とし、析出した結
晶を濾取した。この結晶を０．０５％のＬ−アスコルビ
ン酸を含む水４０ｍｌから再結晶を行い、得られた結晶
を乾燥させ、１．３ｇのラセミーエリスロ−ＤＯＰＳを
得た。 ｍｐ：１７１℃（分解） 元素分析：Ｃ９　Ｈ１１Ｏ５　Ｎに対し、計算値：Ｃ５
０．７１，Ｈ５．２０，Ｎ６．５７％実測値：Ｃ５１．
０２，Ｈ５．１７，Ｎ６．３２％ＩＲ（Ｎｕｊｏｌ）ν
（ｃｍ−１）：３６００，３５００，３２００，１６２
０，１６００，１５００，１４００，１３５０，１２８
０，１０４０

【００３０】実施例１ 酵素製造例１で得た粗精製酵素液１００ｍｌに合成例２
で得たＤ，Ｌ−エリスロ−ＤＯＰＳ１００ｍｇを加え、
３０℃で１０時間反応させた。反応終了後、１Ｎ塩酸を
１０ｍｌ加えた後、遠心分離で不溶物を除去した。ＨＰ
ＬＣ（島津アミノ酸分析システム）で残存基質と生成グ
リシンを定量したところ、基質は添加時の４７．２％残
存、グリシンは基質の減少と等しいモル濃度で生成して
いた。また、プロトカテキュアルデヒドは、２，４−ジ
ニトロフェニルヒドラジンと反応させ、ＯＤＳカラムを
用いてＨＰＬＣ分析を行ったところ、基質の減少と等し
いモル濃度で生成していた。上記遠心上清に２００ｍｌ
のエチルエーテルを加え、攪拌・静置し、エーテル相を
分離、減圧乾固を行い、３３ｍｇのプロトカテキュアル
デヒドを得た。水相を、強酸性陽イオン交換樹脂ＤＯＷ
ＥＸ　　５０Ｗ×８を充填したカラム（１０ｍｍφ×１
００ｍｍ）に通液、脱イオン水による十分な洗浄後、０
．５Ｎのアンモニア水で吸着物質を溶出させ、ＤＯＰＳ
画分とグリシン画分に分けて採取した。両画分それぞれ
減圧乾固を行ったところ、それぞれ４６ｍｇ、１８ｍｇ
の結晶を得た。ＤＯＰＳ画分より得られた結晶は、以下
の分析によりＤ−エリスロ−ＤＯＰＳであることが確認
できた。 ｍｐ：１７１℃ 元素分析：Ｃ９　Ｈ１１Ｏ５　Ｎに対し計算値：Ｃ５０
．７１，Ｈ５．２０，Ｎ６．５７％実測値：Ｃ５０．８
０，Ｈ５．１８，Ｎ６．６０％異性体分析（ο−フタル
アルデヒドとＮ−アセチルーＬ−システィンによる誘導
体化後、ＯＤＳカラムでＨＰＬＣ分析）：ピークはＤ−
エリスロ体の位置にのみ見られた。 　　比旋光度：［α］２０Ｄ　＝−５１．６°（Ｃ＝０
．５，０．１Ｎ・ＨＣｌ）

【００３１】実施例２ 酵素製造例２で得た粗精製酵素液を用い、実施例１と同
様に反応を行い、反応液中の残存基質を定量した結果を
表２に示す。

【００３２】

【表２】

【００３３】反応終了後、反応液を実施例１と同様に処
理し、比旋光度を測定したところ、得られたＤＯＰＳは
いずれもＤ−エリスロ体であることが確認された。

【００３４】実施例３ 一般式（Ｉ）におけるＲ１　、Ｒ２　がともにメチル基
・ベンジル基である誘導体及びＲ１　、Ｒ２　がメチレ
ン基で置換されて五員環を形成している誘導体を基質に
用い、酵素製造例１及び２で得た粗精製酵素液を実施例
１と同様の方法で反応させ、反応液中の残存基質を定量
した結果を表３に示す。

【００３５】

【表３】

【００３６】反応終了後、反応液を実施例１と同様に処
理し、比旋光度を測定したところ、得られたＤＯＰＳ誘
導体は、いずれもＤ−エリスロ体であることが確認され
た。

【００３７】

【発明の効果】Ｄ−エリスロ−ＤＯＰＳを得るための従
来の光学分割法は、置換基の導入や除去が必要であるた
め工程が複雑で収率も悪く、分割剤も高価であり、また
残りの光学異性体をラセミ化させる必要がある等、工業
的製造法としては問題があった。本発明によれば、光学
分割のための置換基の導入や除去が不要であり、高価な
光学分割剤を用いる必要もなく、生成するグリシンとプ
ロトカテキュアルデヒド誘導体を原料合成にリサイクル
使用することが可能で、繁雑なラセミ化を行う必要がな
いため、従来の方法に比べて極めて有利な方法である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　一般式 【化１】 （式中、Ｒ１　、Ｒ２　は同一又は相異なり、水素、低
   級アルキル又はアラルキル基を示すが、Ｒ１　、Ｒ２　
   共にアルキレン基で置換されて環を形成してもよい）で
   表わされるラセミ−エリスロ−３−（３，４−ジヒドロ
   キシフェニル）セリン誘導体に、Ｌ−エリスロ−３−（
   ３，４−ジヒドロキシフェニル）セリン誘導体を特異的
   にグリシンと対応するプロトカテキュアルデヒド誘導体
   に分解する能力を有する酵素、同酵素を産生する微生物
   菌体あるいは菌体処理物を作用させることにより、Ｌ−
   エリスロ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セリ
   ン誘導体を合成原料であるグリシンと対応するプロトカ
   テキュアルデヒド誘導体に分解することを特徴とするＤ
   −エリスロ−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）セ
   リン誘導体の製造法。
2. 【請求項２】　　Ｌ−エリスロ−３−（３，４−ジヒド
   ロキシフェニル）セリン誘導体を特異的にグリシンと対
   応するプロトカテキュアルデヒド誘導体に分解する酵素
   が、Ｌ−アロスレオニンアルドラーゼである請求項１記
   載の方法。
3. 【請求項３】　　Ｌ−エリスロ−３−（３，４−ジヒド
   ロキシフェニル）セリン誘導体を特異的にグリシンと対
   応するプロトカテキュアルデヒド誘導体に分解する酵素
   を産生する微生物が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ａｌｃａｌ
   ｉｇｅｎｅｓ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ａｒｔｈ
   ｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属す
   る微生物よりなる群から選ばれた少なくとも１種の微生
   物よりなる請求項１記載の方法。