JPH04364200A - 細胞接着性アルブミン - Google Patents
細胞接着性アルブミンInfo
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- JPH04364200A JPH04364200A JP3166347A JP16634791A JPH04364200A JP H04364200 A JPH04364200 A JP H04364200A JP 3166347 A JP3166347 A JP 3166347A JP 16634791 A JP16634791 A JP 16634791A JP H04364200 A JPH04364200 A JP H04364200A
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は天然に存在するアルブミ
ンを化学的に修飾することにより細胞接着性の機能を持
たせることを特徴とするアルブミンに関する。
ンを化学的に修飾することにより細胞接着性の機能を持
たせることを特徴とするアルブミンに関する。
【０００２】
【従来の技術】現在までに，細胞接着性を有する種々の
蛋白質（フィブロネクチン，ビトロネクチン，コラーゲ
ン等）が知られており，このような蛋白質は試薬として
利用されたり，人工臓器材料の表面に吸着または固定化
することにより組織親和性を付与する等重要な役割を果
たしている。
蛋白質（フィブロネクチン，ビトロネクチン，コラーゲ
ン等）が知られており，このような蛋白質は試薬として
利用されたり，人工臓器材料の表面に吸着または固定化
することにより組織親和性を付与する等重要な役割を果
たしている。
【０００３】また，これら細胞接着性蛋白質の活性部位
がアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）か
らなるペプチドであることが同定され，更にチロシン−
イソロイシン−グリシン−セリン−アルギニン（ＹＩＧ
ＳＲ）がラミニンの細胞接着活性部位として同定されて
いる。近年このような合成ペプチドを利用した研究も広
く行われている。
がアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）か
らなるペプチドであることが同定され，更にチロシン−
イソロイシン−グリシン−セリン−アルギニン（ＹＩＧ
ＳＲ）がラミニンの細胞接着活性部位として同定されて
いる。近年このような合成ペプチドを利用した研究も広
く行われている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記の様な細胞接着性
蛋白質は高価であり，保存安定性の点で問題を有してい
た。またＲＧＤのような合成ペプチドで組織親和性を付
与するためには，材料表面に化学的に固定化する必要が
あり，高分子材料表面の制約や導入量の問題を有してい
た。
蛋白質は高価であり，保存安定性の点で問題を有してい
た。またＲＧＤのような合成ペプチドで組織親和性を付
与するためには，材料表面に化学的に固定化する必要が
あり，高分子材料表面の制約や導入量の問題を有してい
た。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは，かかる現
況にかんがみ，天然に存在するアルブミンを細胞接着性
を有するオリゴペプチドで化学修飾した細胞接着性アル
ブミンを鋭意研究した結果本発明に到達したものである
。
況にかんがみ，天然に存在するアルブミンを細胞接着性
を有するオリゴペプチドで化学修飾した細胞接着性アル
ブミンを鋭意研究した結果本発明に到達したものである
。
【０００６】すなわち，本発明は安価で容易に入手でき
るアルブミンと細胞接着活性を有するオリゴペプチドと
結合試薬により化学的に結合し，細胞接着性を有する人
工のアルブミンを供給することにある。
るアルブミンと細胞接着活性を有するオリゴペプチドと
結合試薬により化学的に結合し，細胞接着性を有する人
工のアルブミンを供給することにある。
【０００７】本発明におけるアルブミンとは，たとえば
ウシ血清アルブミン，ヒト血清アルブミン等の動物の細
胞や体液から得られるアルブミンやロイコシン，レグメ
リン等の植物性のアルブミンであってもよい。
ウシ血清アルブミン，ヒト血清アルブミン等の動物の細
胞や体液から得られるアルブミンやロイコシン，レグメ
リン等の植物性のアルブミンであってもよい。
【０００８】細胞接着性を有するオリゴペプチドとして
は，グリシン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
−セリン（ＧＲＧＤＳ）をはじめとしたＲＧＤを含むオ
リゴペプチド，チロシン−イソロイシン−グリシン−セ
リン−アルギニン（ＹＩＧＳＲ）を含むペプチド等があ
る。
は，グリシン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
−セリン（ＧＲＧＤＳ）をはじめとしたＲＧＤを含むオ
リゴペプチド，チロシン−イソロイシン−グリシン−セ
リン−アルギニン（ＹＩＧＳＲ）を含むペプチド等があ
る。
【０００９】オリゴペプチドの長さは任意でよいが１０
残基以下であることが好ましい。
残基以下であることが好ましい。
【００１０】オリゴペプチドとアルブミンとの結合試薬
としては，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミド塩酸塩〔１−ｅｔｈｙｌ−３−（
３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ） ｃａ
ｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ〕
あるいは１−シクロヘキシル−３−（２−モルフォリノ
エチル）カルボジイミドメソ−Ｐ−トルエンスルホン酸
〔１−ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ−３−（２−ｍｏｒｐｈｏ
ｌｉｎｏｅｔｈｌ） ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ ｍｅ
ｔｈｏ−ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅ−ｓｕｌｆｏｎａｔｅ〕等
の水溶性カルボジイミドを用いるのが好ましいが，クロ
ロギ酸エチル，カルボニルジイミダゾールやジメチルア
ジピンイミデート，ジスクシンイミジルスベレート等の
２価性架橋試薬であってもよい。
としては，１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
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ロギ酸エチル，カルボニルジイミダゾールやジメチルア
ジピンイミデート，ジスクシンイミジルスベレート等の
２価性架橋試薬であってもよい。
【００１１】本発明におけるオリゴペプチドとアルブミ
ンとの結合方法は弱酸性から弱アルカリ性の水溶液中で
行うのが好ましいが有機溶媒中であってもよい。反応温
度は任意でよいが，０〜３７℃が好適である。また反応
時間も任意でよいが，１分〜２４時間が好適である。ア
ルブミンとオリゴペプチドの組成比も任意でよいが，ア
ルブミンに対してオリゴペプチド１〜１００当量が好ま
しい。
ンとの結合方法は弱酸性から弱アルカリ性の水溶液中で
行うのが好ましいが有機溶媒中であってもよい。反応温
度は任意でよいが，０〜３７℃が好適である。また反応
時間も任意でよいが，１分〜２４時間が好適である。ア
ルブミンとオリゴペプチドの組成比も任意でよいが，ア
ルブミンに対してオリゴペプチド１〜１００当量が好ま
しい。
【００１２】本発明により合成したアルブミンは，反応
後透析膜を用いて低分子物質を除去するか，カラムを通
して精製するのが好ましく，精製後は水溶液中で凍結保
存するか，凍結乾燥を行って保存するのが好ましい。
後透析膜を用いて低分子物質を除去するか，カラムを通
して精製するのが好ましく，精製後は水溶液中で凍結保
存するか，凍結乾燥を行って保存するのが好ましい。
【００１３】
【実施例】以下，本発明を実施例によってさらに具体的
に説明する。 実施例１ シグマ社製ウシ血清アルブミン５００ｍｇをリン酸バッ
ファ（ｐＨ７．４）３０ｍｌに溶解し，氷冷下で同仁化
学研究所社製１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）カルボジイミド塩酸塩〔１−Ｅｔｈｙｌ−３−
（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）−ｃ
ａｌｂｏｄｉｉｍｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ
〕２２ｍｇを加え攪拌する。３０分後，ペプチド研究所
社製グリシン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
−セリン（ＧＲＧＤＳ）３４ｍｇを加え冷蔵室（４℃）
内で２４時間攪拌した。反応液を透析膜に移し，５日間
透析を行った。透析終了後，透析液を凍結乾燥し４５０
ｍｇのアルブミン─ＧＲＧＤＳ結合体を得た。
に説明する。 実施例１ シグマ社製ウシ血清アルブミン５００ｍｇをリン酸バッ
ファ（ｐＨ７．４）３０ｍｌに溶解し，氷冷下で同仁化
学研究所社製１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプ
ロピル）カルボジイミド塩酸塩〔１−Ｅｔｈｙｌ−３−
（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）−ｃ
ａｌｂｏｄｉｉｍｉｄｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ
〕２２ｍｇを加え攪拌する。３０分後，ペプチド研究所
社製グリシン−アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
−セリン（ＧＲＧＤＳ）３４ｍｇを加え冷蔵室（４℃）
内で２４時間攪拌した。反応液を透析膜に移し，５日間
透析を行った。透析終了後，透析液を凍結乾燥し４５０
ｍｇのアルブミン─ＧＲＧＤＳ結合体を得た。
【００１４】比較例
実施例１のＧＲＧＤＳの代わりに細胞接着活性を持たな
い対照用ペプチドとして岩城硝子社製グリシン−アルギ
ニン−グリシン−グルタミン酸−セリン−プロリン（Ｇ
ＲＧＥＳＰ）４５ｍｇを用いて同条件で合成を行い，ア
ルブミン─ＧＲＧＥＳＰ結合体４７０ｍｇを得た。
い対照用ペプチドとして岩城硝子社製グリシン−アルギ
ニン−グリシン−グルタミン酸−セリン−プロリン（Ｇ
ＲＧＥＳＰ）４５ｍｇを用いて同条件で合成を行い，ア
ルブミン─ＧＲＧＥＳＰ結合体４７０ｍｇを得た。
【００１５】参考例１
実施例１，比較例で得たアルブミン─ＧＲＧＤＳ結合体
，アルブミン─ＧＲＧＥＳＰ結合体及び未処理のアルブ
ミンを５０μｇ／ｍｌの濃度に調製し，２４穴マルチウ
ェルに５００μｌずつ注入し，室温で２時間放置後生理
食塩水にて３回置換して各蛋白質のコーティングを行っ
た。コーティング済のマルチウェルにウシ動脈由来内皮
細胞５×１０４ 個を播種し，３７℃で２時間培養後細
胞の接着状態を観察した。アルブミン−ＧＲＧＤＳ結合
体では内皮細胞が多数接着し紡錘形に伸展したのに対し
，アルブミン−ＧＲＧＥＳＰ結合体及び未処理アルブミ
ンでは内皮細胞は接着しなかった。
，アルブミン─ＧＲＧＥＳＰ結合体及び未処理のアルブ
ミンを５０μｇ／ｍｌの濃度に調製し，２４穴マルチウ
ェルに５００μｌずつ注入し，室温で２時間放置後生理
食塩水にて３回置換して各蛋白質のコーティングを行っ
た。コーティング済のマルチウェルにウシ動脈由来内皮
細胞５×１０４ 個を播種し，３７℃で２時間培養後細
胞の接着状態を観察した。アルブミン−ＧＲＧＤＳ結合
体では内皮細胞が多数接着し紡錘形に伸展したのに対し
，アルブミン−ＧＲＧＥＳＰ結合体及び未処理アルブミ
ンでは内皮細胞は接着しなかった。
【００１６】実施例２
ウシ血清アルブミン５００ｍｇをリン酸バッファ（ｐＨ
７．４）３０ｍｌに溶解し，氷冷下で１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
〔１−Ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉ
ｎｏｐｒｏｐｙｌ）−ｃａｌｂｏｄｉｉｍｉｄｅ ｈｙ
ｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ〕２２ｍｇを加え攪拌する。３
０分後，岩城硝子社製チロシン−イソロイシン−グリシ
ン−セリン−アルギニン（ＹＩＧＳＲ）４７ｍｇを加え
冷蔵室（４℃）内で２４時間攪拌した。反応液を透析膜
に移し，５日間透析を行った。透析終了後，透析液を凍
結乾燥し４５０ｍｇのアルブミン─ＹＩＧＳＲ結合体を
得た。
７．４）３０ｍｌに溶解し，氷冷下で１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
〔１−Ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉ
ｎｏｐｒｏｐｙｌ）−ｃａｌｂｏｄｉｉｍｉｄｅ ｈｙ
ｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ〕２２ｍｇを加え攪拌する。３
０分後，岩城硝子社製チロシン−イソロイシン−グリシ
ン−セリン−アルギニン（ＹＩＧＳＲ）４７ｍｇを加え
冷蔵室（４℃）内で２４時間攪拌した。反応液を透析膜
に移し，５日間透析を行った。透析終了後，透析液を凍
結乾燥し４５０ｍｇのアルブミン─ＹＩＧＳＲ結合体を
得た。
【００１７】参考例２
実施例１で得たアルブミン─ＧＲＧＤＳ結合体を１０ｍ
ｇ／ｍｌの濃度に調製し，ポリウレタン（Ｃａｒｄｉｏ
ｍａｔ ）のスポンジ（５×５×１０ｍｍ，孔径１５０
〜５００μｍ）に含浸させた後，凍結乾燥しアルブミン
─ＧＲＧＤＳ結合体処理スポンジを作製した。同様の手
法によりフィブロネクチン及びアルブミン処理スポンジ
を作製した（但し，フィブロネクチンは１ｍｇ／ｍｌの
溶液を用いた。）。
ｇ／ｍｌの濃度に調製し，ポリウレタン（Ｃａｒｄｉｏ
ｍａｔ ）のスポンジ（５×５×１０ｍｍ，孔径１５０
〜５００μｍ）に含浸させた後，凍結乾燥しアルブミン
─ＧＲＧＤＳ結合体処理スポンジを作製した。同様の手
法によりフィブロネクチン及びアルブミン処理スポンジ
を作製した（但し，フィブロネクチンは１ｍｇ／ｍｌの
溶液を用いた。）。
【００１８】アルブミン─ＧＲＧＤＳ結合体，アルブミ
ン，フィブロネクチン処理スポンジ，及び未処理のスポ
ンジを体重２５０ｇのウィスター（Ｗｉｓｔｅｒ）ラッ
トの皮下に埋植し，４日後に取り出し組織切片を作製し
，ヘマトキシリン・エオジン染色して光学顕微鏡にて観
察した。アルブミン−ＧＲＧＤＳ結合体，フィブロネク
チン処理スポンジでは白血球の浸潤が顕著であり，スポ
ンジ内部までおよんでおり，形態は球形であった。また
外側の細胞組織の入り込みも見られ，スポンジの外側に
は新生血管が多数観察された。
ン，フィブロネクチン処理スポンジ，及び未処理のスポ
ンジを体重２５０ｇのウィスター（Ｗｉｓｔｅｒ）ラッ
トの皮下に埋植し，４日後に取り出し組織切片を作製し
，ヘマトキシリン・エオジン染色して光学顕微鏡にて観
察した。アルブミン−ＧＲＧＤＳ結合体，フィブロネク
チン処理スポンジでは白血球の浸潤が顕著であり，スポ
ンジ内部までおよんでおり，形態は球形であった。また
外側の細胞組織の入り込みも見られ，スポンジの外側に
は新生血管が多数観察された。
【００１９】一方，アルブミン処理スポンジは炎症性細
胞の増加が見られ，未処理スポンジでは細胞成分の浸潤
は見られなかった。また両スポンジともスポンジ周囲の
新生血管の数は前者に比べ少なかった。
胞の増加が見られ，未処理スポンジでは細胞成分の浸潤
は見られなかった。また両スポンジともスポンジ周囲の
新生血管の数は前者に比べ少なかった。
【００２０】
【発明の効果】本発明により，細胞接着性を有する人工
のアルブミンを比較的安価で，かつ簡便に調製すること
ができる。またオリゴペプチドのアミノ酸の配列やオリ
ゴペプチドの導入量を変えることにより細胞接着能の強
弱をつけることも可能である。本発明により合成したア
ルブミンは単体として，もしくは高分子材料表面に固定
化して用いることができ，組織適合性を有する人工材料
となる。このような材料は創傷治癒促進材やハイブリッ
ド型人工血管の基底材として有効である。
のアルブミンを比較的安価で，かつ簡便に調製すること
ができる。またオリゴペプチドのアミノ酸の配列やオリ
ゴペプチドの導入量を変えることにより細胞接着能の強
弱をつけることも可能である。本発明により合成したア
ルブミンは単体として，もしくは高分子材料表面に固定
化して用いることができ，組織適合性を有する人工材料
となる。このような材料は創傷治癒促進材やハイブリッ
ド型人工血管の基底材として有効である。
Claims (1)
- 【請求項１】 アルブミンが細胞接着性を有するオリ
ゴペブチドにより修飾された細胞接着性アルブミン。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3166347A JPH04364200A (ja) | 1991-06-10 | 1991-06-10 | 細胞接着性アルブミン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3166347A JPH04364200A (ja) | 1991-06-10 | 1991-06-10 | 細胞接着性アルブミン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04364200A true JPH04364200A (ja) | 1992-12-16 |
Family
ID=15829695
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3166347A Pending JPH04364200A (ja) | 1991-06-10 | 1991-06-10 | 細胞接着性アルブミン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04364200A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999024462A3 (en) * | 1997-11-07 | 1999-08-26 | Conjuchem Inc | Novel conjugates of rgd-containing peptides and endogenous carriers |
| WO1999048536A3 (en) * | 1998-03-23 | 2001-05-17 | Conjuchem Inc | Delivery of long lasting therapeutic agents by forming covalent attachments in vivo |
| KR20120052454A (ko) * | 2010-11-15 | 2012-05-24 | 삼성전자주식회사 | 퓨즈 어레이를 갖는 반도체 장치 및 그 동작방법 |
| CN107670097A (zh) * | 2017-10-19 | 2018-02-09 | 北京九鼎君健医药科技项城有限公司 | 一种促进糖尿病伤口愈合的低聚肽创面敷料及其制备方法 |
| JP2020007507A (ja) * | 2018-07-12 | 2020-01-16 | 東洋紡株式会社 | シート状接着剤 |
-
1991
- 1991-06-10 JP JP3166347A patent/JPH04364200A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999024462A3 (en) * | 1997-11-07 | 1999-08-26 | Conjuchem Inc | Novel conjugates of rgd-containing peptides and endogenous carriers |
| WO1999048536A3 (en) * | 1998-03-23 | 2001-05-17 | Conjuchem Inc | Delivery of long lasting therapeutic agents by forming covalent attachments in vivo |
| KR20120052454A (ko) * | 2010-11-15 | 2012-05-24 | 삼성전자주식회사 | 퓨즈 어레이를 갖는 반도체 장치 및 그 동작방법 |
| CN107670097A (zh) * | 2017-10-19 | 2018-02-09 | 北京九鼎君健医药科技项城有限公司 | 一种促进糖尿病伤口愈合的低聚肽创面敷料及其制备方法 |
| CN107670097B (zh) * | 2017-10-19 | 2021-02-23 | 北京九鼎君健东肽生物科技项城有限公司 | 一种促进糖尿病伤口愈合的低聚肽创面敷料及其制备方法 |
| JP2020007507A (ja) * | 2018-07-12 | 2020-01-16 | 東洋紡株式会社 | シート状接着剤 |
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