JPH0445107B2

JPH0445107B2 -

Info

Publication number: JPH0445107B2
Application number: JP798387A
Authority: JP
Inventors: Dankan Kerii Jeemusu; Dominiku Neirinkukusu Rudei; Piitaa Nootonitsuku Deebitsudo
Original assignee: Amersham International PLC
Current assignee: GE Healthcare Ltd
Priority date: 1986-01-16
Filing date: 1987-01-16
Publication date: 1992-07-23
Also published as: EP0229718A2; GB8601003D0; EP0229718B1; JPS62195558A; EP0229718A3; DE3769321D1

Description

【発明の詳細な説明】

欧州特許第123504はテクノチウム−99mとエチ
レンまたはプロピレンのアミンオキシムとの親油
性の巨大環状錯体を記載している。それらの正味
電荷がゼロであるために、これらの錯体は血液−
脳障壁をこえることができ、脳の生体内研究にと
つて興味がもたれる。欧州特許願194843には改善された脳内保持
（brain retention）を示すことが発見された本分
野における一連の化合物が記述されている。この
系統の化合物は、一般構造式１をち各々の星印炭
素原子が１個の水素原子を保持するプロピレンア
ミンオキシムのテクネチウム−99m錯体から成
る。各炭素原子が水素以外の置換基を持つていて
もよいことは当然である。特に、化合物２、すな
わち、４，８−ジアザ−３，６，６，９−テトラ
メチルウンデカン−２，10−ジオンビスオキシ
ム、は興味のある脳内保持性質をもつ。ｄ、ｌ−
体の化合物２は購入者による標識化および脳内血
流を示す脳走査剤としての使用のために、市販さ
れている。 EPA179608にはこの分野の他の類の化合物が
記述されている。これらの化合物は１の一般式で
表わされるが、星印の炭素原子のうち１つだけが
１個の炭素原子を持ち、したがつて５個の炭素原
子について不斉である。本発明は、構造１の化合物および関連化合物の
テクネチウム−99m錯体が血球標識化に価値のあ
る試薬であるという発見の結果である。この発見
は予想外のことであつた。本分野における従来の
文献は一方において脳走査剤と脳血流剤とを、そ
して他方では血球標識化剤とを結びつける理由を
ほとんど与えていない。血球標識化についての慣用的技法は血液試料を
患者から採取し、所望の血球を比較的純粋な形で
とり出し、その血球に体外で標識をつけ、そして
その標識化血球を患者に戻すことを含んでいる。
現在では、好ましい血球標識化剤はインジウム−
111とオキシン（８−ヒドロキシキノリン）との
錯体である。しかしこの錯体はインジウム−111
の他の錯体と共にいくつかの欠点をもつている。
すなわち、 −コストと便利さ。インジウム−111は比較的高
価でありかつ広範囲の応用をもたず；テクネチ
ウム−99mは安価でありかつ多くの他の目的に
有用である。 −患者への照射線量。同日走査用または翌日走査
用として、テクネチウム−99ｍ錯体はより低い
合計照射線量を生ずる。 −リンパ球への細胞間照射線量。インジウム−
111はオージエ電子を発生し、これはリンパ細
胞白血病を開始させる潜在能力に関する関心の
原因となつているものである。我々はインジウム−111を使用する代表的白血
球標識化について、全身、臨界的器官（肝臓と脾
臓）およびリンパ細胞への相対的放射線量を、テ
クネチウム−99mと対比して計算した。計算は標
識化白血球の生体内分布について容認されている
仮定に基づいている。

【表】 Tc−99mは同日イメージングにきわめて好都
合であることは明らかである。しかし、翌日イメ
ージングにも有利である。もし18時間後、すなわ
ち３半減期において走査したい場合には、走査の
時点において適当な活性能を得るには８倍のTc
−99mを使用することが必要である。しかし、
Tc−99mはそれでも実質的により低い照射線量
を与える。テクノチウム−99mをベースとする血球標識化
剤を求める必要性がそこにある。本発明は、血球の懸濁液を一般的構造式１をも
ちその中で星印炭素原子の一つまたは両方がそれ
ぞれ１個の水素原子を担持するプロピレンアミン
オキシムの中性親油性テクネチウム−99m錯体と
一緒にインキユベートすることによつて、血球を
標識化する方法を提供する。プロピレンアミンオキシム構造式１の中の炭素
原子のどれかあるいは全部が水素以外の置換基を
担持してもよい。例えばプロピレンアミンオキシ
ムは構造式３をもつものであつてもよい。ここで
各ＲはＨ、アルキル、アリール、アラルキル、シ
クロアルキル、CF₃、CONX₂または
C₆H₄OCH₃； R¹はＨ、アルキル、アリール、アラルキル、
シクロアルキルまたはCF₃；各R²はアルキル、アリール、アラルキル、シ
クロアルキルまたはCF₃；またはＲとR₂とはいつ
しよになつてシクロアルキル環の一部を作つても
良い、各R³、R⁴およびR⁵はＨ、アルキル、アリール、
アラルキル、シクロアルキルまたはCF₃；およびＸはＨ、CH₃、C₂H₅またはC₆H₅である。同一
の記号で表わされる２個の置換基は同じまたは異
つていても良い。特に好ましいプロピレンアミンオキシムは上記
化合物２である。本発明は結果に基づくものであ
つて、理論に基づくものではないが、我々は現在
では、この化合物のテクネチウム−99m錯体は血
球内のその場で、その溶離を遅らせあるいは阻止
するような様式で分解する傾向があり、そして、
この性質は構造式１のとおりに星印炭素原子へ結
合した水素をもつ他のプロピレンオキシムの錯体
と分け合つてもよいと信じている。構造式１の中
性の親油性テクネチウム−9m錯体は現在は構造
式４をもつと信じられる。血球懸濁液は上記定義のとおりの錯体とさほど
臨界的でぬない条件の下で保温される。インキユ
ベーシヨン温度は０から50℃であり、代表的には
室温または37℃であるが、好都合な条件下では標
識化は10分以内で実質的に完了する。この方法に
よつて標識化することができる血球は赤血球、単
核および多核の両方の白血球、と血小板を含む。
この方法の効率は細胞の性質に依存し、一般的に
は、赤血球に対するよりも白血球についてより良
好であり、血小板についてよりも赤血球について
より良好である。懸濁液中の血球の濃度はできるだけ高いことが
好ましい。白血球に関するかぎり、錯体の実質的
吸収は10⁷血球／mlまたはそれ以上の濃度におい
て観察され、一方、10⁶血球／ml以下濃度におい
ては、不十分な吸収が観察される。類似の効果は
他の種類の血球にもあてはまる。血漿は標識化を阻止する。例えばヒトの白血球
を使用する一つの実験においては、16.9％の血漿
の最終濃度により50％阻止され、34％の血漿によ
り100％阻止される。血球が標識化のために血液
から分離される場合には、血漿は実質的に存在し
ない状態にあるべきである。一方、白血球および
特に血小板は生かしておくためには血漿を要する
であろう。血漿濃度は、標識化の間の血液細胞の
生存性を維持するのに十分高く、しかしながら効
果的な標識化を行うのに十分に低いように選択し
なければならない。実際に、血漿の添加は標識化
反応を停止させる便利な方式である。混合血球が
高濃度で存在する全血標識化の場合についての
み、許容される実質的割合の血漿が存在する。テクネチウム−99m錯体はそれらが吸収された
血球から溶離するが、しかしその速度はテクネチ
ウム−99mの半減期（６時間）と比べてゆつくり
である。その溶離速度は著しく温度依存性であ
り、従つて標識化血球は室温またはそれ以下に使
用前は貯蔵せねばならない。血球の性質もまた、
以下の数字によつて示されるとおりに、重要であ
り、それらの数字は全血中で異なる時間の間貯蔵
された異なる種類の標識化血球に関するものであ
る。

【表】以下の実施例は本発明を例証するものである。実施例１化合物２のテクネチウム−99ｍ錯体の溶液を次
のとおりにつくつた。ガラス瓶は0.5mgの化合物
２、0.0075mgの塩化第一錫・二水塩、および4.5
mgの塩化ナトリウムを含んでおり、凍結乾燥さ
れ、窒素下で密封された。これへ5.0mlのナトリ
ウム・パーテクネテート溶出液（eluate）を135
ｍCiテクネチウム発生器から添加した。混合白血球は酸性クエン酸塩凝固防止血液の34
mlからデキストラン沈降によつて得られた。これ
らを２回洗滌し、2.0mlの燐酸塩緩衝食塩水の中
で再分散させた。この懸濁液を化合物２のテクネ
チウム−99m錯体の溶液の0.2mlと一緒にインキ
ユベートした。インキユベートは室温において行
ない、試料は分析のために間隔を置いて取出し
た。２分後、放射能の60％が血球と合会してお
り；５分後には、83％；10分後には89％であつ
た。実施例２化合物２のテクネチウム−99m錯体の溶液の
0.2mlへ各種濃度の洗滌赤血球の1.0mlを添加し
た。インキユベーシヨンは室温において10分間で
あつた。10⁸個の赤血球数の場合、放射能の30％
が血球中で吸収され、10⁹個の場合はその吸収は
80％であ、10¹⁰個の場合には90％であつた。実施例３実施例２の実験を繰返し、ただし、赤血球の代
りに血小板を使用したが、血球が２×10⁹個／ml
の場合に、放射能の吸収は36％であつた。実施例４ヘパリンを加えた全血（血漿を含む）の試料
1.0mlを化合物２のテクネチウム−99m錯体の溶
液の10〜200マイクロリツトルと一緒にインキユ
ベートした。標識化効果は錯体の量に比例して増
し、10マイクロリツトル添加の場合の35.6％から
200マイクロリツトル添加の場合の68.3％の範囲
にあつた。これらの本質的に赤血球の調製剤からのテクネ
チウムの溶離は、４時間に及ぶ期間にわたつて血
球からの浸出は11％以下であつたことを示した。実施例５実施例１の方法によつてつくつたTc−99m標
識化白血球を排泄物抽出物で以て含浸したスポン
ジの挿入によつて生成された膿瘍をもつねずみの
中へ注射した。膿瘍吸収はIn−111標準化白血球
についての吸収と同等であつた。実施例６ヘキサメチルプロピレンアミンオキシム
（HMPAO）が_99nTcと脂質可溶性の中性錯体を
形成し、これはインビトロで白血球中に迅速に組
入れらる。擬似または既知の炎症性病気をもつ６
人の患者の中で、酸−クエン酸塩−デキストロー
スで以て凝固防止された85mlの血液から単離した
「混合」白血球懸濁液を^99mTc−HMPADによつ
て標識化し、平均効率は47％であつて、そのうち
78％は顆粒状によつて吸収された。放射能は顆粒
球からよりも他の血球型からより迅速にインビト
ロにおいて溶離された。顆粒球はしつかり標識化
されたままであつた。標識の平均の初期生体分布
と30−40分におけぬる血液中の32％の顆粒球回収
は、それらの顆粒径が標識化中において著しくは
活性化されないこと示した。６人の患者全員が炎
症性病気に対して陽性であり、５人の患者は30分
ほどの早さで、そして、６人目の患者は３時間後
においてであり、彼らは全員が20−24時間後にお
いて陽性のままであつた。４人の患者はまた、
¹¹¹In−標識化「純」顆粒球を受けた。詳細には、
_99nTcイメージは¹¹¹Inイメージと同等であるかま
たはすぐれていた。この実験はThe Lancet、1985年10月25日、
946−949頁においてより詳しく記述されている。

Claims

【特許請求の範囲】１血球懸濁液を、一般構造式(1) をもち、その中で星印炭素原子の一つまたは両方
が１個の水素原子を持つているプロピレンアミン
オキシムの中性親油性テクネチウム−99m錯体と
一緒に、インキユベートすることによる、血球の
標識化方法。２血球懸濁液が血漿を実質的に含まない、特許
請求の範囲第１項に記載の方法。３血球が白血球である、特許請求の範囲第１項
または第２項に記載の方法。４白血球懸濁液の血球濃度が少くとも10⁶血
球／mlである、特許請求の範囲第３項に記載の方
法。５血球が赤血球である、特許請求の範囲第１項
または第２項に記載の方法。６前記プロピレンアミンオキシムが式(3) 〔ここで各ＲはＨ、アルキル、アリール、アラル
キル、シクロアルキル、CF₃、CONX₂または
C₆H₄OCH₃； R¹はＨ、アルキル、アリール、アラルキル、
シクロアルキルまたはCF₃；各R²はアルキル、アリール、アラルキル、シ
クロアルキルまたはCF₃；またはＲとR²とはいつ
しよになつてシクロアルキル環の一部を作つても
良い、各R³、R⁴およびR⁵はＨ、アルキル、アリー
ル；アラルキル、シクロアルキルまたはCF₃；お
よびＸはＨ、CH₃、C₂H₅またはC₆H₅である〕、特
許請求の範囲第１項から第５項のいずれかに記載
の方法。７プロピレンアミンオキシムが、４，８−ジア
ザ−３，６，６，９−テトラメチル−ウンデカン
−２，10−ジオンビスオキシムである、特許請求
の範囲第１項から第６項のいずれかに記載の方
法。８プロピレンアミンオキシムのｄ、ｌ体を用い
る特許請求の範囲第７項記載の方法。