JPH0445516B2 - - Google Patents
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- JPH0445516B2 JPH0445516B2 JP58234037A JP23403783A JPH0445516B2 JP H0445516 B2 JPH0445516 B2 JP H0445516B2 JP 58234037 A JP58234037 A JP 58234037A JP 23403783 A JP23403783 A JP 23403783A JP H0445516 B2 JPH0445516 B2 JP H0445516B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- spirocardin
- culture
- spirocardine
- eluted
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
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- Saccharide Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Epoxy Compounds (AREA)
Description
本発明は新抗生物質スピロカルデイン
（Spirocardin）ＡまたはＢ並びにその製造法に関
するものである。本発明者らは福島県耶麻郡で採
取した土壌から分離したノカルジア属に属する
SANK64282株がグラム陽性、グラム陰性殺菌に
対して有効な新抗生物質がスピロカルデインＡま
たはＢを生産することを見出した。 従つて、スピロカルデインＡまたはＢはこれら
細菌に起因するヒト、動物または植物の疾病の予
防または治療に用いられる。 ここに、スピロカルデインＡまたはＢは下記の
式で表わされる。 但し、式中、スピロカルデインＡはＸが基
（Spirocardin）ＡまたはＢ並びにその製造法に関
するものである。本発明者らは福島県耶麻郡で採
取した土壌から分離したノカルジア属に属する
SANK64282株がグラム陽性、グラム陰性殺菌に
対して有効な新抗生物質がスピロカルデインＡま
たはＢを生産することを見出した。 従つて、スピロカルデインＡまたはＢはこれら
細菌に起因するヒト、動物または植物の疾病の予
防または治療に用いられる。 ここに、スピロカルデインＡまたはＢは下記の
式で表わされる。 但し、式中、スピロカルデインＡはＸが基
【式】を示し、スピロカルデインＢ
はＸが基
【式】を示す。
スピロカルデインＡまたはＢを生産する
SANK64282株の菌学的性状は次の通りである。 (1) 形態学的特徴 ISP〔インターナシヨナル・ストレプトミセ
ス・プロジエクト（International
Streptomyces Project）〕規定の倍地およびワ
ツクスマン（S.A.Waksman）らの勧告〔アク
チノミセイテス（The Actinomycetes）２巻〕
の倍地上で培養する。培養は通常28℃で行う。
SANK64282株の形態学的特徴は、接種培養の
数日後に気菌糸および栄養菌糸に明瞭な分断が
観察されることである。分断菌糸は球状ないし
桿状を示す。その他、特殊器官の形成は観察さ
れない。 (2) 各種培養基上の諸性状 各種培養基上で28℃、14日間培養したときの
性状は第１表に示す通りである。色調の表示は
日本色彩研究所版“標準色票”のカラーチツプ
ナンバーを表わす。
SANK64282株の菌学的性状は次の通りである。 (1) 形態学的特徴 ISP〔インターナシヨナル・ストレプトミセ
ス・プロジエクト（International
Streptomyces Project）〕規定の倍地およびワ
ツクスマン（S.A.Waksman）らの勧告〔アク
チノミセイテス（The Actinomycetes）２巻〕
の倍地上で培養する。培養は通常28℃で行う。
SANK64282株の形態学的特徴は、接種培養の
数日後に気菌糸および栄養菌糸に明瞭な分断が
観察されることである。分断菌糸は球状ないし
桿状を示す。その他、特殊器官の形成は観察さ
れない。 (2) 各種培養基上の諸性状 各種培養基上で28℃、14日間培養したときの
性状は第１表に示す通りである。色調の表示は
日本色彩研究所版“標準色票”のカラーチツプ
ナンバーを表わす。
【表】
【表】
【表】
(3) 生理的性質
SANK 64282株の生理学的性質を第２表に、
炭素源資化性を第３表に示す。
炭素源資化性を第３表に示す。
【表】
【表】
【表】
＋：同化、±：弱く資化、−：同化
せず
(4) 菌体内成分について エム・ピー・レシエバリヤー（M.P.
Lechevalier）らの方法〔エイ・デイーツ（A.
Dietz）ら著、放線菌の分類（Actinomycete
taxonomy）、225頁、1980年〕に従い、菌体の
酸加水分解物のペーパークロマトグラフイーに
よる分析を行つた結果、メソジアミノピメリン
酸およびアラビノース、ガラクトースが認めら
れ、細胞壁型のタイプは型であることが確認
された。また全菌体糖型はＡ型であつた。さら
にエツチ・モルダルスカ（H.Mordarska）ら
の方法〔ジヤーナル・オブ・ジエネラル・マイ
クロバイオロジー（Journal of general
Microbiology）、71巻、77頁、1972年〕に従
い、菌体内の脂質を分析した結果、LCN−Ａ
（Lipids characteristic of Nocardia）が存在
していた。 上記の如きSANK 64282株の諸性状のうち特
に菌糸が分断すること、細胞壁が型で全菌
体中の糖型がＡ型であること、菌体内にLCN
−Ａが存在すること等から、本菌株は、放線菌の
中でもノカルジアセアエ（Nocardiaceae）科の
ノカルジア（Nocardia）属に属する菌株である
ことが明らかとなり、ノカルジア・エスピー
（Nocardia sp.）SANK 64282と命名した。 本菌株は通産省工業技術院微生物工業技術研究
所に寄託されておりその微生物受託番号は第6986
号である。 以上、スピロカルデインＡまたはＢの生産菌に
ついて説明したが、放線菌、特にノカルジア属の
諸性質は一定したものでなく、自然的、人工的に
容易に変化することは周知の通りであり、本発明
で使用しうる菌はノカルジア属に属するスピロカ
ルデインＡまたはＢを生産するすべての菌株を包
含するものである。 本発明における培養は、一般放線菌における培
養方法に準じて行われ、液体培地中での振盪培養
あるいは通気撹拌培養によるのが好ましい。培地
成分としては、たとえば炭素源としてブドウ糖、
マルトース、シユクロース、マンニツト、糖蜜、
グリセリン、デキストリン、澱粉、大豆油、綿実
油などが、窒素源として大豆粉、落花生粉、綿実
粉、フアーマミン、魚粉、コーン・スチープ・リ
カー、ペプトン、肉エキス、イースト、イース
ト・エキス、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫
酸アンモニウムなどが、また無機塩として食塩、
燐酸塩、炭酸カルシウム、微量金属塩などが必要
に応じて適宜添加される。液体培養に際しては、
シリコン油、植物油、界面活性剤等が消泡剤とし
て適宜使用される。 培地のPHは中性附近、培養温度は24℃から30
℃、特に28℃前後が好ましい。 培養の経過に伴つて生産されるスピロカルデイ
ンＡまたはＢの力価の経時的変化は、スタフイロ
コツカス・アウレウス（Staphylococcus
aureus）FDA 209P JC−１を被検菌としてペー
パーデイスク（東洋科学産業(株)製、直径８mm、
Thick）検定法により測定される。 通常72〜120時間の培養でスピロカルデインＡ
またはＢの生産量は最高値に達する。主として培
養液中の液体部分に存在するスピロカルデインＡ
またはＢは、培養終了後、菌体その他の固型部分
をけいそう土等を過助剤とする過操作、ある
いは遠心分離によつて除去し、その液あるいは
上清中から抽出、精製することによつて得られ
る。 スピロカルデインＡまたはＢは、その物理化学
的性状を利用することにより、たとえば吸着剤を
用いて採取することができる。吸着剤としてはた
とえば活性炭、あるいは吸着用樹脂であるアンバ
ーライトXAD−２、XAD−４、XAD−７等
（ローム・アンド・ハース社製）またはダイヤイ
オンHP10，HP20，HP20AG，HP50等（三菱化
成工業(株)社製）が使用される。 スピロカルデインＡまたはＢスピロカルデイン
ＡまたはＢを含む液を上記の如き吸着剤の層を通
過させて、スピロカルデインＡまたはＢを含む液
に含まれる不純物を吸着させて取りのぞくか、ま
たはスピロカルデインＡまたはＢを吸着させた
後、メタノール水、アセトン水、ｎ−ブタノール
水などを用いて溶出することによつて得られる。
また中性脂溶性物質を培養液から採取する方法、
たとえば水と混和しない有機溶媒（たとえばクロ
ロホルム、酢酸エチル、ｎ−ブタノールなどの単
独またはそれらの組み合せ）により培養液また
は水溶液から抽出することも可能である。更に、
スピカルデインＡまたはＢを含む有機溶媒層を稀
アルカリ水、稀酸性水などで洗浄することにより
混在する酸性あるいは塩基性物質を除去すること
も可能である。 このようにして得られたスピロカルデインＡま
たはＢを精製するためには、アビセル（旭化成工
業(株)社製）などのセルロースもしくはセフアデツ
クスLH−20（フアルマシア社製）などを用いた
分配カラムクロマトグラフイー；シリカゲル、ア
ルミナ、フロリジルのような担体を用いた吸着カ
ラムクロマトグラフイー；逆相用担体を用いた逆
相カラムクロマトグラフイー；またはスピロカル
デインＡまたはＢと混在する不純物との溶媒に対
する分配率の差を利用した抽出法、あるいは向流
分配法などが有効な方法といえる。以上の精製手
段を単独あるいは適宜組み合せ、反復して用いる
ことによりスピロカルデインＡまたはＢを精製す
ることができる。あるいは、スピロカルデインＡ
またはＢは一般の脂溶性抗生物質と同じく、培養
条件によつては培養液中の菌体部分に存在する。
この場合はアルコール類、アセトン等の親水性有
機溶媒を用いて抽出し、抽出液より溶媒を除去
し、次いで水溶液とした後、培養液からと同様
の方法で抽出・精製することができる。 このようにして得られたスピロカルデインＡは
次の理化学的および生物学的性状を有する。 (1) 物質の性状：中性の淡黄色粉末。 (2) 比旋光度：〔α〕25 D−52.7°（ｃ，0.48，CHC
３） (3) 分子式：C20H30O6（高分解能マススペクトル
法により測定） (4) 分子量：366（FD／MS） (5) 紫外線吸収スペクトル：λnaxｎｍ（Ｅ１％ １cm） メタノール中で測定した紫外線吸収スペクト
ルは第１図に示した通り280（sh）ｎｍ（Ｅ１％ １cm
10）に極大吸収を示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：νnaxcm-1 液膜法で測定した赤外線吸収スペクトルは第
２図に示す通りである。 (7) 核磁気共鳴スペクトル：δ：ppm クロロホルム中、内部基準にTMS（テトラメ
チルシラン）を使用して測定した核磁気共鳴ス
ペクトル（400MHz）は第３図に示す通りであ
る。 (8) 溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセト
ン、エタノールおよびメタノールに可溶、水に
不溶。 (9) 呈色反応：過マンガン酸カリウムおよび硫酸
に陽性。 (10) 薄層クロマトグラフイー：Rf値0.30 吸着剤；メルク社製シリカゲルプレートNo.5715 展開溶媒；酢酸エチル：ベンゼン（１：１） (11) 抗菌スペクトル 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するス
ピロカルデインＡの最小発育阻止濃度（MIC）
は２％グリセリン添加感受性デイスク用寒天培
地（日水製薬(株)製）、カビ、酵母類に対しては
0.2％イーストエキス添加サブロー寒天培地、
嫌気性菌に対してはGAM寒天培地（日水製薬
(株)製）、マイコプラズマに対してはフレツシユ
イーストエキス、DNA、リン酸二カリウム、
PC−Ｇ添加PPLO寒天培地を用いた寒天培地
希釈法によつて測定した。その結果は第４〜６
表に示す通りである。 また、スピロカルデインＢは次の理化学的およ
び生物学的性状を有する。 (1) 物質の性状：中性の淡黄色粉末。 (2) 比旋光度：〔α〕25 D−35.5°（ｃ，0.62，CHC
３） (3) 分子式：C20H32O6（高分解能マススペクトル
法により測定） (4) 分子量：366（FD／MS） (5) 紫外線吸収スペクトル：λnaxｎｍ（Ｅ１％ １cm） メタノール中で測定した紫外線吸収スペクト
ルは第４図に示した通り280（sh）ｎｍ（Ｅ１％ １cm
５）に極大吸収を示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：νnaxcm-1 液膜法で測定した赤外線吸収スペクトルは第
５図に示す通りである。 (7) 核磁気共鳴共鳴スペクトル：δ：ppn 重クロロホルム中、内部基準にTMS（テトラ
メチルシラン）を使用して測定した核磁気共鳴
スペクトル（400MHz）は第６図に示す通りで
ある。 (8) 溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセト
ン、エタノールおよびメタノールに可溶、水に
不溶。 (9) 呈色反応：過マンガン酸カリウムおよび硫酸
に陽性。 (10) 薄層クロマトグラフイー：Rf値0.15 吸着剤；メルク社製シリカゲルプレートNo.5715 展開溶媒；酢酸エチル：ベンゼン（１：１） (11) 抗菌スペクトル 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するス
ピロカルデインＢの最小発育阻止濃度（MIC）
は２％グリセリン添加感受性デイスク用寒天培
地（日水製薬(株)製）、カビ、酵母類に対しては
0.2％イーストエキス添加サブロー寒天培地、
嫌気性菌に対してはGAM寒天培地（日水製薬
(株)製）、マイコプラズマに対してはフレツシユ
イーストエキス、DNA、リン酸二カリウム、
PC−Ｇ添加PPLO寒天培地を用いた寒天培地
希釈法によつて測定した。その結果は第４〜６
表に示す通りである。
せず
(4) 菌体内成分について エム・ピー・レシエバリヤー（M.P.
Lechevalier）らの方法〔エイ・デイーツ（A.
Dietz）ら著、放線菌の分類（Actinomycete
taxonomy）、225頁、1980年〕に従い、菌体の
酸加水分解物のペーパークロマトグラフイーに
よる分析を行つた結果、メソジアミノピメリン
酸およびアラビノース、ガラクトースが認めら
れ、細胞壁型のタイプは型であることが確認
された。また全菌体糖型はＡ型であつた。さら
にエツチ・モルダルスカ（H.Mordarska）ら
の方法〔ジヤーナル・オブ・ジエネラル・マイ
クロバイオロジー（Journal of general
Microbiology）、71巻、77頁、1972年〕に従
い、菌体内の脂質を分析した結果、LCN−Ａ
（Lipids characteristic of Nocardia）が存在
していた。 上記の如きSANK 64282株の諸性状のうち特
に菌糸が分断すること、細胞壁が型で全菌
体中の糖型がＡ型であること、菌体内にLCN
−Ａが存在すること等から、本菌株は、放線菌の
中でもノカルジアセアエ（Nocardiaceae）科の
ノカルジア（Nocardia）属に属する菌株である
ことが明らかとなり、ノカルジア・エスピー
（Nocardia sp.）SANK 64282と命名した。 本菌株は通産省工業技術院微生物工業技術研究
所に寄託されておりその微生物受託番号は第6986
号である。 以上、スピロカルデインＡまたはＢの生産菌に
ついて説明したが、放線菌、特にノカルジア属の
諸性質は一定したものでなく、自然的、人工的に
容易に変化することは周知の通りであり、本発明
で使用しうる菌はノカルジア属に属するスピロカ
ルデインＡまたはＢを生産するすべての菌株を包
含するものである。 本発明における培養は、一般放線菌における培
養方法に準じて行われ、液体培地中での振盪培養
あるいは通気撹拌培養によるのが好ましい。培地
成分としては、たとえば炭素源としてブドウ糖、
マルトース、シユクロース、マンニツト、糖蜜、
グリセリン、デキストリン、澱粉、大豆油、綿実
油などが、窒素源として大豆粉、落花生粉、綿実
粉、フアーマミン、魚粉、コーン・スチープ・リ
カー、ペプトン、肉エキス、イースト、イース
ト・エキス、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫
酸アンモニウムなどが、また無機塩として食塩、
燐酸塩、炭酸カルシウム、微量金属塩などが必要
に応じて適宜添加される。液体培養に際しては、
シリコン油、植物油、界面活性剤等が消泡剤とし
て適宜使用される。 培地のPHは中性附近、培養温度は24℃から30
℃、特に28℃前後が好ましい。 培養の経過に伴つて生産されるスピロカルデイ
ンＡまたはＢの力価の経時的変化は、スタフイロ
コツカス・アウレウス（Staphylococcus
aureus）FDA 209P JC−１を被検菌としてペー
パーデイスク（東洋科学産業(株)製、直径８mm、
Thick）検定法により測定される。 通常72〜120時間の培養でスピロカルデインＡ
またはＢの生産量は最高値に達する。主として培
養液中の液体部分に存在するスピロカルデインＡ
またはＢは、培養終了後、菌体その他の固型部分
をけいそう土等を過助剤とする過操作、ある
いは遠心分離によつて除去し、その液あるいは
上清中から抽出、精製することによつて得られ
る。 スピロカルデインＡまたはＢは、その物理化学
的性状を利用することにより、たとえば吸着剤を
用いて採取することができる。吸着剤としてはた
とえば活性炭、あるいは吸着用樹脂であるアンバ
ーライトXAD−２、XAD−４、XAD−７等
（ローム・アンド・ハース社製）またはダイヤイ
オンHP10，HP20，HP20AG，HP50等（三菱化
成工業(株)社製）が使用される。 スピロカルデインＡまたはＢスピロカルデイン
ＡまたはＢを含む液を上記の如き吸着剤の層を通
過させて、スピロカルデインＡまたはＢを含む液
に含まれる不純物を吸着させて取りのぞくか、ま
たはスピロカルデインＡまたはＢを吸着させた
後、メタノール水、アセトン水、ｎ−ブタノール
水などを用いて溶出することによつて得られる。
また中性脂溶性物質を培養液から採取する方法、
たとえば水と混和しない有機溶媒（たとえばクロ
ロホルム、酢酸エチル、ｎ−ブタノールなどの単
独またはそれらの組み合せ）により培養液また
は水溶液から抽出することも可能である。更に、
スピカルデインＡまたはＢを含む有機溶媒層を稀
アルカリ水、稀酸性水などで洗浄することにより
混在する酸性あるいは塩基性物質を除去すること
も可能である。 このようにして得られたスピロカルデインＡま
たはＢを精製するためには、アビセル（旭化成工
業(株)社製）などのセルロースもしくはセフアデツ
クスLH−20（フアルマシア社製）などを用いた
分配カラムクロマトグラフイー；シリカゲル、ア
ルミナ、フロリジルのような担体を用いた吸着カ
ラムクロマトグラフイー；逆相用担体を用いた逆
相カラムクロマトグラフイー；またはスピロカル
デインＡまたはＢと混在する不純物との溶媒に対
する分配率の差を利用した抽出法、あるいは向流
分配法などが有効な方法といえる。以上の精製手
段を単独あるいは適宜組み合せ、反復して用いる
ことによりスピロカルデインＡまたはＢを精製す
ることができる。あるいは、スピロカルデインＡ
またはＢは一般の脂溶性抗生物質と同じく、培養
条件によつては培養液中の菌体部分に存在する。
この場合はアルコール類、アセトン等の親水性有
機溶媒を用いて抽出し、抽出液より溶媒を除去
し、次いで水溶液とした後、培養液からと同様
の方法で抽出・精製することができる。 このようにして得られたスピロカルデインＡは
次の理化学的および生物学的性状を有する。 (1) 物質の性状：中性の淡黄色粉末。 (2) 比旋光度：〔α〕25 D−52.7°（ｃ，0.48，CHC
３） (3) 分子式：C20H30O6（高分解能マススペクトル
法により測定） (4) 分子量：366（FD／MS） (5) 紫外線吸収スペクトル：λnaxｎｍ（Ｅ１％ １cm） メタノール中で測定した紫外線吸収スペクト
ルは第１図に示した通り280（sh）ｎｍ（Ｅ１％ １cm
10）に極大吸収を示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：νnaxcm-1 液膜法で測定した赤外線吸収スペクトルは第
２図に示す通りである。 (7) 核磁気共鳴スペクトル：δ：ppm クロロホルム中、内部基準にTMS（テトラメ
チルシラン）を使用して測定した核磁気共鳴ス
ペクトル（400MHz）は第３図に示す通りであ
る。 (8) 溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセト
ン、エタノールおよびメタノールに可溶、水に
不溶。 (9) 呈色反応：過マンガン酸カリウムおよび硫酸
に陽性。 (10) 薄層クロマトグラフイー：Rf値0.30 吸着剤；メルク社製シリカゲルプレートNo.5715 展開溶媒；酢酸エチル：ベンゼン（１：１） (11) 抗菌スペクトル 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するス
ピロカルデインＡの最小発育阻止濃度（MIC）
は２％グリセリン添加感受性デイスク用寒天培
地（日水製薬(株)製）、カビ、酵母類に対しては
0.2％イーストエキス添加サブロー寒天培地、
嫌気性菌に対してはGAM寒天培地（日水製薬
(株)製）、マイコプラズマに対してはフレツシユ
イーストエキス、DNA、リン酸二カリウム、
PC−Ｇ添加PPLO寒天培地を用いた寒天培地
希釈法によつて測定した。その結果は第４〜６
表に示す通りである。 また、スピロカルデインＢは次の理化学的およ
び生物学的性状を有する。 (1) 物質の性状：中性の淡黄色粉末。 (2) 比旋光度：〔α〕25 D−35.5°（ｃ，0.62，CHC
３） (3) 分子式：C20H32O6（高分解能マススペクトル
法により測定） (4) 分子量：366（FD／MS） (5) 紫外線吸収スペクトル：λnaxｎｍ（Ｅ１％ １cm） メタノール中で測定した紫外線吸収スペクト
ルは第４図に示した通り280（sh）ｎｍ（Ｅ１％ １cm
５）に極大吸収を示す。 (6) 赤外線吸収スペクトル：νnaxcm-1 液膜法で測定した赤外線吸収スペクトルは第
５図に示す通りである。 (7) 核磁気共鳴共鳴スペクトル：δ：ppn 重クロロホルム中、内部基準にTMS（テトラ
メチルシラン）を使用して測定した核磁気共鳴
スペクトル（400MHz）は第６図に示す通りで
ある。 (8) 溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセト
ン、エタノールおよびメタノールに可溶、水に
不溶。 (9) 呈色反応：過マンガン酸カリウムおよび硫酸
に陽性。 (10) 薄層クロマトグラフイー：Rf値0.15 吸着剤；メルク社製シリカゲルプレートNo.5715 展開溶媒；酢酸エチル：ベンゼン（１：１） (11) 抗菌スペクトル 一般グラム陽性、グラム陰性細菌に対するス
ピロカルデインＢの最小発育阻止濃度（MIC）
は２％グリセリン添加感受性デイスク用寒天培
地（日水製薬(株)製）、カビ、酵母類に対しては
0.2％イーストエキス添加サブロー寒天培地、
嫌気性菌に対してはGAM寒天培地（日水製薬
(株)製）、マイコプラズマに対してはフレツシユ
イーストエキス、DNA、リン酸二カリウム、
PC−Ｇ添加PPLO寒天培地を用いた寒天培地
希釈法によつて測定した。その結果は第４〜６
表に示す通りである。
【表】
【表】
【表】
イフイシル
【表】
【表】
上記の如きスピロカルデインＡまたはＢの特性
を既知抗生物質の諸性状と比較した結果、一致す
るものはなく新抗生物質と判定された。 以上から、スピロカルデインＡまたはＢは各種
細菌感染性疾患を対照とする抗菌剤として使用さ
れる。その投与形態としては皮下注射、静脈内注
射、筋肉注射、坐剤などによる非経口投与法ある
いは錠剤、カプセル剤、酸剤、顆粒剤などによる
経口投与法があげられる。投与量は対象疾患、投
与経路および投与回数などによつて異なるが、例
えば成人に対して通常は１日500mg乃至2000mgを
１回または数回に分けて投与するのが好ましい。 次に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説
明する。 実施例 １ ノカルジアSP.SANK64282株を培地組成−１
で示される培地80mlを含む500ml容三角フラスコ
に一白金耳接種し、220rpmの回転振盪培養機に
より28℃で96時間培養した。この培養液25mlを培
地組成−２で示される培地500mlを含む２容三
角フラスコ４本に接種し、220rpmの回転振盪培
養機により28℃で24時間培養した。得られた培養
液を同一の培地15を含む30容ジヤーフアーメ
ンター２基に各々750mlずつ接種し、28℃、撹拌
150回転／分、通気量10／分で67時間通気撹拌
培養した。得られた培養液30に過助剤として
セライト545（米国ジヨンズ・マンビル・プロダク
ト・コーポレーシヨン製）を1.5Kg加えて過す
ると、液30（PH7.1）が得られた。この培養
液を15の酢酸エチルで２回抽出し、30の飽
和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで脱水
し、源圧下で濃縮乾固すると1.2の油状物が得
られた。この油状物をベンゼンに溶解し、あらか
じめベンゼンで調製したシリカゲルカラム（米国
マリンクロツト社製、シリカゲル10ｇ）に吸着さ
せ、ベンゼンで洗浄後、順次、ベンゼン：酢酸エ
チルの３：１、１：１、１：２の混合溶媒で20ml
ずつ分画し展開・溶出した。スピロカルデインＡ
はフラクシヨンNo.６〜９に溶出され、スピロカル
デインＢはフラクシヨンNo.10〜13に溶出された。
それぞれを源圧下で濃縮乾固すると、スピロカル
デインＡが油状物として260mg、スピロカルデイ
ンＢが油状物として235mg得られた。得られた粗
スピロカルデインＡは再度シリカゲルカラム（10
ml）に吸着させ各々60mlのベンゼン、クロロホル
ム、５％アセトン−クロロホルムの混合溶媒で展
開し、５mlずつ分画してフラクシヨンNo.36まで溶
出した。スピロカルデインＡはフラクシヨンNo.15
〜24に溶出された。活性分画を併せ減圧下で濃縮
乾燥固することにより27mgのスピロカルデインＡ
が得られた。一方、得られた粗スピロカルデイン
Ｂは再度シリカゲルカラム（10ｇ）に吸着させ
各々50mlのベンゼン、ベンゼン：酢酸エチルの
３：１、２：１、１：１、１：２の混合溶媒で展
開し、７mlずつ分画してフラクシヨンNo.43まで溶
出した。スピロカルデインＢはフラクシヨンNo.19
〜31に溶出された。活性分画を併せ減圧下で濃縮
乾固することにより80mgのスピロカルデインＢが
得られた。 培地組成−１ グルコース １％ グリセリン １％ シユクロース １％ 生イースト １％ 大豆粉 ２％ オートミール 0.5％ カザミノ酸 0.5％ 炭酸カルシウム 0.1％ ニツサンデイスホームCB−442（消泡剤）PH7.0
0.01％ 培地組成−２ グルコース ２％ ラスターゲンFK １％ 生イースト 0.9％ 肉エキス 0.5％ ポリペプトン 0.5％ 炭酸カルシウム 0.3％ 塩化ナトリウム 0.5％ ニツサンデイスホームCB−442（消泡剤）PH7.0
0.01％ 実施例 ２ ノカルジアSP.SANK64282株を培地組成−１
で示される培地80mlを含む500ml容三角フラスコ
に一白金耳接種し、200rpmの回転振盪培養機に
より28℃で96時間培養した。この培養液25mlを培
地組成−２で示される培地500mlを含む２容三
角フラスコ２本に接種し、220rpmの回転振盪培
養機により28℃で48時間培養した。得られた培養
液750mlを培地組成−２で示される培地15を含
む30容ジヤーフアーメンターに接種し、28℃で
24時間培養した。得られた培養液15を同一培地
300を含む600容タンクに接種し、28℃、撹拌
100回転／分、通気量300／分で115時間通気撹
拌培養した。得られた培養液300に過助剤と
してセライト545を15Kg加えて過すると、液
290が得られた。この培養液を160の酢酸エ
チルで２回抽出し、減圧下で濃縮乾固すると43ｇ
の油状物が得られた。この油状物をｎ−ヘキサン
に溶解し、あらかじめｎ−ヘキサンで調製したシ
リカゲルカラム（米国マリンクロツト社製、シリ
カゲル250ｇ）に吸着させ、各々500mlの５，10，
20，30，40，50％アセトンを含むｎ−ヘキサン溶
液の混合溶媒で20mlずつ分画し展開・溶出した。
スピロカルデインＡはフラクシヨンNo.54〜85に溶
出され、スピロカルデインＢはフラクシヨンNo.86
〜100に溶出された。それぞれを減圧下で濃縮乾
固するとスピロカルデインＡが7.6ｇ、スピロカ
ルデインＢが4.5ｇそれぞれ油状物として得られ
た。得られた粗スピカルデインA7.6ｇは再度シ
リカゲルカラム（50ｇ）に吸着させ各々300mlの
ベンゼン：酢酸エチルの４：１、３：１、２：
１、１：１の混合溶媒で展開し、20mlずつ分画し
て溶出した。フラクシヨンNo.14〜44をあつめ、減
圧下で濃縮乾固すると、スピロカルデインA2.4
ｇの油状物がられた。一方、得られた粗スピロカ
ルデインB4.1ｇも同様に再度シリカゲルカラム
（50ｇ）によるクロマトに付した。各々300mlのベ
ンゼン：酢酸エチルの３：１、２：１、１：１、
１：２の混合溶媒で展開し20mlずつ分画して溶出
した。フラクシヨンNo.45〜60をあつめ、減圧下で
濃縮乾固すると、スピロカルデインB471mgの油
状物が得られた。得られたスピロカルデインＡま
たはＢを逆相クロマトグラフイー（メルク社製、
ローバー・カラムリクロプレツプRP−８（サイズ
Ｂ））に付して更に精製した。スピロカルデイン
A2.4ｇを４mlのメタノールに溶解し、そのうち
１mlをあらかじめ60％メタノール水で調製したロ
ーバー・カラムリクロプレツプRP−８（サイズ
Ｂ）に吸着後、屈折計を用いて溶出液の屈折率を
調べながら60％メタノール水で展開、溶出した。
スピロカルデインＡはサンプル吸着後30分より36
分の間に溶出され、活性分画として60mlが得られ
た。更に残る３mlのサンプルについて同様の操作
を３回くりかえすと、活性分画として合計180ml
が得られた。得られた活性分画より、減圧下でメ
タノールを留去し、100mlの酢酸エチルで抽出し、
抽出液を飽和食塩水で洗浄後、芒硝で脱水し濃縮
乾固することにより黄色粉末のスピロカルデイン
Ａが170mg得られた。同様に、スピロカルデイン
B470mgを２mlのメタノールに溶解しスピロカル
デインＡと同一条件で同様の操作を行つた。スピ
ロカルデインＢはサンプル吸着後33分より43分の
間に溶出され活性分画として110mlが得られた。
残る１mlのサンプルについても同様の操作をくり
かえすと、活性分画として110mlが得られた。得
られた活性分画より、減圧下でメタノールを留去
し、100mlの酢酸エチルで抽出し、抽出液を飽和
食塩水で洗浄後、芒硝で脱水し濃縮乾固すること
により黄色粉末のスピロカルデインＢが190mg得
られた。 本実施例において使用された培地組成−１およ
び２は、実施例１で使用されたものと同じであ
る。
を既知抗生物質の諸性状と比較した結果、一致す
るものはなく新抗生物質と判定された。 以上から、スピロカルデインＡまたはＢは各種
細菌感染性疾患を対照とする抗菌剤として使用さ
れる。その投与形態としては皮下注射、静脈内注
射、筋肉注射、坐剤などによる非経口投与法ある
いは錠剤、カプセル剤、酸剤、顆粒剤などによる
経口投与法があげられる。投与量は対象疾患、投
与経路および投与回数などによつて異なるが、例
えば成人に対して通常は１日500mg乃至2000mgを
１回または数回に分けて投与するのが好ましい。 次に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説
明する。 実施例 １ ノカルジアSP.SANK64282株を培地組成−１
で示される培地80mlを含む500ml容三角フラスコ
に一白金耳接種し、220rpmの回転振盪培養機に
より28℃で96時間培養した。この培養液25mlを培
地組成−２で示される培地500mlを含む２容三
角フラスコ４本に接種し、220rpmの回転振盪培
養機により28℃で24時間培養した。得られた培養
液を同一の培地15を含む30容ジヤーフアーメ
ンター２基に各々750mlずつ接種し、28℃、撹拌
150回転／分、通気量10／分で67時間通気撹拌
培養した。得られた培養液30に過助剤として
セライト545（米国ジヨンズ・マンビル・プロダク
ト・コーポレーシヨン製）を1.5Kg加えて過す
ると、液30（PH7.1）が得られた。この培養
液を15の酢酸エチルで２回抽出し、30の飽
和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで脱水
し、源圧下で濃縮乾固すると1.2の油状物が得
られた。この油状物をベンゼンに溶解し、あらか
じめベンゼンで調製したシリカゲルカラム（米国
マリンクロツト社製、シリカゲル10ｇ）に吸着さ
せ、ベンゼンで洗浄後、順次、ベンゼン：酢酸エ
チルの３：１、１：１、１：２の混合溶媒で20ml
ずつ分画し展開・溶出した。スピロカルデインＡ
はフラクシヨンNo.６〜９に溶出され、スピロカル
デインＢはフラクシヨンNo.10〜13に溶出された。
それぞれを源圧下で濃縮乾固すると、スピロカル
デインＡが油状物として260mg、スピロカルデイ
ンＢが油状物として235mg得られた。得られた粗
スピロカルデインＡは再度シリカゲルカラム（10
ml）に吸着させ各々60mlのベンゼン、クロロホル
ム、５％アセトン−クロロホルムの混合溶媒で展
開し、５mlずつ分画してフラクシヨンNo.36まで溶
出した。スピロカルデインＡはフラクシヨンNo.15
〜24に溶出された。活性分画を併せ減圧下で濃縮
乾燥固することにより27mgのスピロカルデインＡ
が得られた。一方、得られた粗スピロカルデイン
Ｂは再度シリカゲルカラム（10ｇ）に吸着させ
各々50mlのベンゼン、ベンゼン：酢酸エチルの
３：１、２：１、１：１、１：２の混合溶媒で展
開し、７mlずつ分画してフラクシヨンNo.43まで溶
出した。スピロカルデインＢはフラクシヨンNo.19
〜31に溶出された。活性分画を併せ減圧下で濃縮
乾固することにより80mgのスピロカルデインＢが
得られた。 培地組成−１ グルコース １％ グリセリン １％ シユクロース １％ 生イースト １％ 大豆粉 ２％ オートミール 0.5％ カザミノ酸 0.5％ 炭酸カルシウム 0.1％ ニツサンデイスホームCB−442（消泡剤）PH7.0
0.01％ 培地組成−２ グルコース ２％ ラスターゲンFK １％ 生イースト 0.9％ 肉エキス 0.5％ ポリペプトン 0.5％ 炭酸カルシウム 0.3％ 塩化ナトリウム 0.5％ ニツサンデイスホームCB−442（消泡剤）PH7.0
0.01％ 実施例 ２ ノカルジアSP.SANK64282株を培地組成−１
で示される培地80mlを含む500ml容三角フラスコ
に一白金耳接種し、200rpmの回転振盪培養機に
より28℃で96時間培養した。この培養液25mlを培
地組成−２で示される培地500mlを含む２容三
角フラスコ２本に接種し、220rpmの回転振盪培
養機により28℃で48時間培養した。得られた培養
液750mlを培地組成−２で示される培地15を含
む30容ジヤーフアーメンターに接種し、28℃で
24時間培養した。得られた培養液15を同一培地
300を含む600容タンクに接種し、28℃、撹拌
100回転／分、通気量300／分で115時間通気撹
拌培養した。得られた培養液300に過助剤と
してセライト545を15Kg加えて過すると、液
290が得られた。この培養液を160の酢酸エ
チルで２回抽出し、減圧下で濃縮乾固すると43ｇ
の油状物が得られた。この油状物をｎ−ヘキサン
に溶解し、あらかじめｎ−ヘキサンで調製したシ
リカゲルカラム（米国マリンクロツト社製、シリ
カゲル250ｇ）に吸着させ、各々500mlの５，10，
20，30，40，50％アセトンを含むｎ−ヘキサン溶
液の混合溶媒で20mlずつ分画し展開・溶出した。
スピロカルデインＡはフラクシヨンNo.54〜85に溶
出され、スピロカルデインＢはフラクシヨンNo.86
〜100に溶出された。それぞれを減圧下で濃縮乾
固するとスピロカルデインＡが7.6ｇ、スピロカ
ルデインＢが4.5ｇそれぞれ油状物として得られ
た。得られた粗スピカルデインA7.6ｇは再度シ
リカゲルカラム（50ｇ）に吸着させ各々300mlの
ベンゼン：酢酸エチルの４：１、３：１、２：
１、１：１の混合溶媒で展開し、20mlずつ分画し
て溶出した。フラクシヨンNo.14〜44をあつめ、減
圧下で濃縮乾固すると、スピロカルデインA2.4
ｇの油状物がられた。一方、得られた粗スピロカ
ルデインB4.1ｇも同様に再度シリカゲルカラム
（50ｇ）によるクロマトに付した。各々300mlのベ
ンゼン：酢酸エチルの３：１、２：１、１：１、
１：２の混合溶媒で展開し20mlずつ分画して溶出
した。フラクシヨンNo.45〜60をあつめ、減圧下で
濃縮乾固すると、スピロカルデインB471mgの油
状物が得られた。得られたスピロカルデインＡま
たはＢを逆相クロマトグラフイー（メルク社製、
ローバー・カラムリクロプレツプRP−８（サイズ
Ｂ））に付して更に精製した。スピロカルデイン
A2.4ｇを４mlのメタノールに溶解し、そのうち
１mlをあらかじめ60％メタノール水で調製したロ
ーバー・カラムリクロプレツプRP−８（サイズ
Ｂ）に吸着後、屈折計を用いて溶出液の屈折率を
調べながら60％メタノール水で展開、溶出した。
スピロカルデインＡはサンプル吸着後30分より36
分の間に溶出され、活性分画として60mlが得られ
た。更に残る３mlのサンプルについて同様の操作
を３回くりかえすと、活性分画として合計180ml
が得られた。得られた活性分画より、減圧下でメ
タノールを留去し、100mlの酢酸エチルで抽出し、
抽出液を飽和食塩水で洗浄後、芒硝で脱水し濃縮
乾固することにより黄色粉末のスピロカルデイン
Ａが170mg得られた。同様に、スピロカルデイン
B470mgを２mlのメタノールに溶解しスピロカル
デインＡと同一条件で同様の操作を行つた。スピ
ロカルデインＢはサンプル吸着後33分より43分の
間に溶出され活性分画として110mlが得られた。
残る１mlのサンプルについても同様の操作をくり
かえすと、活性分画として110mlが得られた。得
られた活性分画より、減圧下でメタノールを留去
し、100mlの酢酸エチルで抽出し、抽出液を飽和
食塩水で洗浄後、芒硝で脱水し濃縮乾固すること
により黄色粉末のスピロカルデインＢが190mg得
られた。 本実施例において使用された培地組成−１およ
び２は、実施例１で使用されたものと同じであ
る。
第１図はスピロカルデインＡの紫外線吸収スペ
クトルを示し、第２図は同物質の赤外線吸収スペ
クトルを示し、第３図は同物質の核磁気共鳴スペ
クトルを示す。第４図はスピロカルデインＢの紫
外線吸収スペクトルを示し、第５図は同物質の赤
外線吸収スペクトルを示し、第６図は同物質の核
磁気共鳴スペクトルを示す。
クトルを示し、第２図は同物質の赤外線吸収スペ
クトルを示し、第３図は同物質の核磁気共鳴スペ
クトルを示す。第４図はスピロカルデインＢの紫
外線吸収スペクトルを示し、第５図は同物質の赤
外線吸収スペクトルを示し、第６図は同物質の核
磁気共鳴スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式 を有するスピロカルデインＡまたはＢ。 但し、式中、スピロカルデインＡはＸが基 【式】を示し、スピロカルデインＢ はＸが基【式】を示す。 ２ ノカルジア属に属するスピロカルデインＡま
たはＢ生産菌を培養してその培養物よりスピロカ
ルデインＡまたはＢを採取することよりなるスピ
ロカルデインＡまたはＢの製造法。 ３ ノカルジア属に属するスピロカルデインＡま
たはＢ生産菌がノカルジア sp.SANK 64282
株（微工研菌寄第6986号）である特許請求の範囲
第２項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58234037A JPS60126089A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | 抗生物質スピロカルディンａまたはｂ並びにその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58234037A JPS60126089A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | 抗生物質スピロカルディンａまたはｂ並びにその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60126089A JPS60126089A (ja) | 1985-07-05 |
| JPH0445516B2 true JPH0445516B2 (ja) | 1992-07-27 |
Family
ID=16964570
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58234037A Granted JPS60126089A (ja) | 1983-12-12 | 1983-12-12 | 抗生物質スピロカルディンａまたはｂ並びにその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60126089A (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5745415A (en) * | 1980-09-02 | 1982-03-15 | Tokyo Electric Co Ltd | Measuring label issuer |
-
1983
- 1983-12-12 JP JP58234037A patent/JPS60126089A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60126089A (ja) | 1985-07-05 |
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