JPH0449242A - 抗ヘルペス剤、動物用抗ヘルペス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は、抗ヘルペス剤、動物用抗ヘルペス剤に関する
。

［従来の技術］ ヒトに感染するヘルペスウィルス科のウィルスの最大の
特徴は潜伏感染である。このウィルスは一度感染すると
終生、体内のいずれかの組織、細胞に潜伏し、日和見感
染的に増殖して宿主に打撃を与える（昭和６１年にメデ
ィカルトリビューン社から発行された、宕坂剛等著の「
ヘルペスウィルス感染症」の序文）。

ヒトに感染するヘルペスウィルス科のウィルスには４種
類が知られている。単純ヘルペスウィルス１、単純ヘル
ペスウィルス２、ヒトヘルペスウィルス３（パリセーラ
ーゾスターが含まれる）、ヒトガンマ−ヘルペスウィル
ス４である（昭和６０年にメディカル・ジャーナル社か
ら発行された、上田泰等編の「感染症の変貌とその対策
」の１５３〜１５５頁）。

単純ヘルペスウィルス感染症は増加の一途をたどってい
る。性器の単純ヘルペスウィルス感染症はもとより、新
生児の全身感染、脳炎、角膜炎等も増加しており、複雑
な様相を呈している。このような状況のなかで、アシク
ロビルが開発されたことは治療における一大進歩である
（前掲の「ヘルペスウィルス感染症」の序文）。

動物に感染するヘルペスとしては、マレック病ウィルス
や七面鳥ヘルペスウィルス等が知られている（前掲の「
感染症の変貌とその対策」の１５４〜１５５頁）。

［発明が解決しようとする課題］ 抗ヘルペスウィルス剤は各々の作用メカニズムが明らか
であるから、その作用を受ける酵素に異常のあるウィル
スは薬剤耐性を示す。抗ヘルペスウィルス剤はその対象
感染症の性質上長期にわたって投与されることが多いの
で、耐性株の出現は不可避である（前掲の「ヘルペスウ
ィルス感染症」の２０３〜２０４頁、２１０〜２１１頁
）。従って、耐性株が出現した抗ヘルペスウィルス剤に
代わる抗ヘルペスウィルス剤の開発は常に要請されてい
る。又、−旦発生すると治癒後も生涯にわたって再発治
癒をくりかえすので、連続投与しても副作用の発生のな
い薬剤が望まれている。

かかる現状に鑑み、本発明は、抗ヘルペスウイルス効果
が高くて副作用が少なく、従って化学治療係数が高く、
アシクロビル耐性株にも効果があり、生産コストが低く
、しかも、経口、経皮、注射での投与が可能な、大量に
供給可能な新規な抗ヘルペス剤、動物用抗ヘルペス剤を
提供するために完成されたものである。

［課題を解決するための手段］ 本発明により、ＬＰＳを含む抗ヘルペス剤、動物用抗ヘ
ルペス剤が提供される。この抗ヘルペス剤、動物用抗ヘ
ルペス剤には、 インビトロで培養されるマクロファージのＴＮＦ産生能
を活性化するＬＰＳのマクロファージ活性化能を指標と
し、 縦軸に、そのＬＰＳを添加しないときのマクロファージ
のＴＮＦ産生量を与えるマクロファージ活性化能を０％
、マクロファージのＴＮＦ産生量を最大かつ一定の値（
本明細書の他の箇所においては、「最大恒量」と称す）
にする時のＬＰＳのマクロファージ活性化能を１００％
とするマクロファージ活性化能（％）を表し、横軸に、
そのＬＰＳのリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を対数尺
で表すシグモイド曲線を描くとき、 マクロファージ活性化能のＥＤ５１１を与えるリムラス
テスト陽性ＬＰＳ含有量が０．４〜１０００ｇ／培ＩＩ
液ｍｌ．であるＬＰＳの少なくとも１種が含まれる。

ここで［少なくとも１種を含む」とは、本発明のＬＰＳ
は各別に使用できることはもちろん、その意図される用
途が阻害されない限り、それらの２種以上を任怠に絹み
合わせて、又、更には他のいずれの物質とも朝み合わせ
て使用できることを意味する。

「マクロファージ」は、免疫担当細胞の一種であり、動
物体内のはとんと全ての組織に分布し、粒子状の異物や
体内の老廃細胞などを補食して消化する大型のアメーバ
状細胞の総称である。「ＴＮＦＪは、マクロファージに
より産生きれる腫瘍障害因子（Ｔｕｍｏｒ　　Ｎｅｃｒ
ｏｓｉｓＦａｃｔｏｒ）の総称であり［１９８５年に発
行された　ザ　ジャーナル　オブ　バイオロジカルケミ
ストリー（Ｔｈｅ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆＢ　ｉ　
ｏ　１．Ｃｈ　ｅｍ、　、２６０．２３４５−２３５４
頁コ、マクロファージの活性が高まるにつれてその産生
量は増していく。

「リムラステスト」は、１９６８年にレヴイン（Ｌｅｖ
ｉｎ）により創案された、カブトガニ血球抽出液と発色
合成基質を用いたエンドトキシン定量法である。

本発明の抗ヘルペス剤、動物用抗ヘルペス剤の活性成分
として使用できるＬＰＳは、特にその採取源、生産方法
、精製方法を限定されることはない。例えば、細菌や植
物から採取されるＬＰＳであっても、或は合成リビＦ’
　Ａのような合成品であってもよい、なお、水閘！Ｉｆ
、特にその特許請求の範囲において、採取源は特に名称
で特定されたそのものに限定されることなく、その採取
源の成長、保存、流通の過程で付着、共存するＩｌｍそ
の他の全てのものが含まれる。例えば、「小麦ＬＰＳ」
と特定された場合には、小麦そのものから採取されたＬ
ＰＳのみならず、小麦の成長、保存、流通の過程で付着
、共存する細菌その他の全てのものが含まれるものと理
解されたい。なぜならば、特に寄生植物、寄生動物とい
う関係が解明されているもの以外にも、特定の植物、動
物、菌界生物、地衣界生物に、それらにより付着、共存
を許されたものが棲息している例が多く存在し得ること
は当業界で良く知られていることであるからである。

これらＬＰＳのうちから、本発明の抗ヘルペス剤、動物
用抗ヘルペス剤の活性成分として使用できるＬＰＳを選
択するには、 インビトロで培養されるマクロファージのＴＮＦ産生能
を活性化するＬＰＳのマクロファージ活性化能を指標と
し、 縦軸に、そのＬＰＳを添加しないときのマクロファージ
のＴＮＦ産生量を与えるマクロファージ活性化能を０％
、マクロファージのＴＮＦ産生量を最大恒量にする時の
ＬＰＳのマクロファージ活性化能を１００％とするマク
ロファージ活性化能（％）を表し、横軸に、そのＬＰＳ
のリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を対数尺で表すシグ
モイド曲線を描くとき、 マクロファージ活性化能のＥＤ５１１を与えるリムラス
テスト陽性ＬＰＳ含有量が０．４〜１０００ｇ／培養液
ｍｌＬであるものを選択すればよい。

リムラステスト陽性細菌１１ＬＰｓ 従来より知られている大腸菌ＬＰＳ、百日咳菌ＬＰＳ、
リピドＡ等が該当する。

大腸菌ＬＰＳは、例えば、米国デイフコ（Ｄ−ｉｆｃｏ
）社から市販されている。

百日咳菌ＬＰＳは、例えば、フナコシ薬品から市販され
ている。又、公知の百日咳菌、例えば、９！浜株Ｉ相薗
の死菌体から、例えば、下記文献記載の公知方法により
調製することもてきる。

ウェブスター（Ｗｅｂｓｔｅｒ）等著の「ジエ仁イミュ
ノル（、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏ　１．）　、７４４．５５　
（１９５５）； ウエストファル（Ｗｅ−ｓｔｐｈａｌ）等著の「ツエト
、ナツールフオルシュ（Ｚ、Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ）
Ｊ、７６、］　４８　（１９５２）。

リピｌ”　Ａは、例えば、第一化学薬品から市販されて
いる。

ツムラステスト陽性植物１１ＬＰｓ 原料植物として使用できるものを下記に例示する。なお
、本明細書に記載した植物が帰属する科名、厘毛は、次
の文献の記載を照合して決定された。

裸子植物、単子葉類、双子葉類、シダ植物、ソウ類：昭
和５７年（正編）、昭和５８年（続編）に北隆館から発
行された「原色園芸植物大図鑑」の記載を照合して所属
を決定した。但し、「燕麦」は、昭和４５年に女子栄養
大学出版部から発行された「食用植物図説」と、昭和５
８年に至文堂から発行された「新日本植物誌顕花篇」の
記載を照合し、「裸麦」は、昭和４６年に東京同文書院
から発行された「総合食品事典」の記載を照合し、「鳩
麦」、「カラスビシャク」、「ジャノヒゲＪ１「ウコン
」、Ｆマタタビ」、「アマチャヅルＪ、「ドクダミ」、
「胡徹」、「トウガラシ」、「ダイウィキョウ」、「ダ
イダイ」、「クズ」、「ナンキンカンゾウ」、「オタネ
ニンジン」、「ボウフウ」、「オオツ゛ヅラフジ」、「
ウンカリフ・ヒルスタ」は、昭和６３年に北隆館から発
行された「原色牧野和漢薬草大図鑑」の記載を照合し、
ｒアボカド」は、昭和５３年に財団法人農林統計協会か
ら発行された熱帯農業技術叢書第１６号「ブラジルの果
実」の記載を照合し、「カイワレダイコン」は、昭和５
９年に北隆館から発行された「原色園芸植物大図鑑」の
記載を照合し、「ニクズク」は、昭和４４年に履用書店
から発行された「図説熱帯植物集成」の記載を照合し、
「クロレラＪは、財団法人日本健康食品協会が昭和６１
年に公示した、「クロレラ規格基準」の記載を照合して
所属を決定した。

菌類：昭和６２年に保育社から発行された「原色日本新
菌類図鑑Ｊの記載を照合して所属を決定した。但し、酵
母は、昭和３７年に技報堂から発行された「微生物学ハ
ンドブック」の記載を照合し、「冬虫夏草」は、前掲の
「原色牧野和漢薬草大図鑑」の記載を照合して所属を決
定した。

本発明で使用できる原料植物は、例えば、裸子植物、単
子葉類、双子葉類、シダ植物、ソウ類、菌類の植物であ
り、これらは個別に或は混合して使用できる。

裸子植物としては、例えば、マツ科マツ属植物であるマ
ツを使用できる。

重子葉類植物としては、例えば、イネ科イネ属植物であ
るイネ、イネ科コムギ属植物である小麦、イネ科オオム
ギ属植物である大麦、裸麦、イネ科カラス麦属植物であ
る烏麦、燕麦、イネ科ササ属植物であるクサ笹、イネ科
ジュズダマ＠植物である鳩麦、アヤメ科アヤメ属植物で
あるアヤメ、ユリ科ネギ属植物であるニンニク、ユリ科
キジカクシ属植物であるアスパラガス、ユリ科ジャノヒ
ゲ属植物であるジャノヒゲ、ショウ力科ショウガ属植物
であるミョウガ、ショウガ科ウコン属植物であるウコン
、サトイモ科ハング属植物であるカラスビシャクを使用
できる。

双子葉類植物としては、マメ科ダイズ属植物である大豆
、マメ科インゲンマメ属植物である小豆、マメ科ソラマ
メ属植物であるそら豆、マメ科クズ属植物であるクズ、
マメ科カンゾウ属植物であるナンキンカンゾウ、ナス科
ナス属植物であるジャガイモ、トウガラシ、ナス科トマ
ト属植物であるトマト、ナス科トウガラシ属植物である
トウガラシ、バラ科ビワ属植物であるビワ、バラ科サク
ラ属植物であるモモ、クスノキ科アボガド属植物である
アボガド、クルミ科りルミ属植物であるクルジ、ウリ科
トウナス属植物であるカボチャ、ウリ科アマチャヅル属
植物であるアマチャヅル、アブラナ科ダイコン属Ｍ￥Ｉ
Ｊであるカイワレダイコン、マタタビ科マタタビ属植物
であるマタタビ、ドクダミ科ドクダミ属植物であるドク
ダミ、コシヨウ科コシヨウ属植物である胡淑、シキミ科
シキミ属植物であるダイウィキョウ、ニクズク科ニクズ
ク属嫂物であるニクズク、ミカン科ミカン属植物である
ダイダイ、ウコギ科オタネニンジン属植物であるオタネ
ニンジン、セリ科サポシュニコビア属植物であるボウフ
ウ、ツツラフジ科オオツヅラフジ属植物であるオオツ゛
ヅラフジ、アカネ科カギカズラ属植物であるウンカリア
φヒルスタを使用できる。

シダ植物としては、例えば、トクサ科トクサ属植物であ
るスギナ、ゼンマイ科ゼンマイ属植物であるゼンマイを
使用できる。

ソウ類植物としては、例えば、カッソウ類植物、紅ソウ
類植物、緑ソウ類植物、ランソウ類植物を使用できる。

カッソウ類植物としては、例えば、コンブ科ワカメ属植
物であるワカメ、コンブ科コンブ属植物であるコンブ、
ホンダワラ科ヒジキ属植物であるヒジキを使用できる。

紅ソウ類Ｍ物としては、例えば、ウシケノリ科アマノリ
属植物であるアサクサノリを使用できる。緑ソウ類植物
としては、例えば、オオシスティス科クロレラ属植物で
あるクロレラを使用できる。

菌類植物としては、例えば、担子菌類植物、子ノウ菌類
植物を使用できる。担子菌類植物としては、例えば、ヒ
ラタケ科マツオウジ属植物である椎茸、キシメジ科エノ
キタケ属植物であるエノキ茸、キシメジ科シメジ属植物
であるシメジ、タコウキン科マイタケ属植物であるマイ
茸、サルノコンカケ科ポリポラス属植物であるアワビ茸
、ハラタケ科ハラタケ属植物であるマツシュルーム、キ
クラゲ科キクラゲ属植物であるキクラゲ、モエギタケ科
スギタケ属植物であるナメコを使用できる。

子ノウ菌類植物としては、例えば、エンドミセタセア科
サツカロミセス属植物であるパン酵母、醸造用酵母を使
用できる。醸造用酵母にはビール酵母、清酒酵母、葡萄
酒酵母、醤油酵母、味噌酵母等の他、サツカロミセス　
セレヴイシト′に属する多くの酵母（例えば、ウィスキ
ーや老酒の製造ここ使用される酵母）が含まれる。又、
バッカクキン科ノムンタケ属植物である冬虫夏草も使用
できる６以上に述べた原料植物中のリムラステスト陽性
ＬＰＳの検出、含量測定は、例えば、生化学工業株式会
社からトキシカラーシステムという名称で市販されてい
る試薬セットを使用して実施できる。

即ち、原料植物を同システムのＬＳ−１セツトと合わせ
て発色させ、その発色の強さを、同しく同セットのＥｔ
−２セツトを使用して作成した検量線と対比させればよ
い。

植物源ＬＰＳは、以下に述べる方法で分離、精製できる
。

■原料植物を必要に応じて適宜細切、乾燥、粉砕した後
に蒸留水によく懸濁し、上清を回収する。

例えば、原料植物が穀類の種子である場合は、種皮をつ
けたまま、或は、種皮を除いた後に簡単に砕くか、又は
、食用に供せられている程度の粉末になるまで粉砕し、
得られた粉末に水を加えて分散液とし、攪拌した後に沈
降物を静置又は遠心分離により除去するか、粉末に水を
加えて練って得られるトウをミキサー中でゆるやかに水
洗し、沈降物を除去すればよい。

原料植物がクロレラである場合には、まず細胞膜を破砕
し、エタノール洗浄により脂溶性物質を除去した後に水
抽出するとよい。

この水抽出の際の原料植物の粒度、水の温度、液性、添
加量、攪拌の速度、時間、遠心分離の際の条件等は特に
制限する必要はなく、原料植物の種類に応して適宜調整
すればよい。又、抽出水の温度は高い方がＬＰＳの採取
量、純度ともに高い傾向があるが、操作の便宜上、原料
植物に含まれる澱粉の糊化を招来しない５０℃以下とす
ることが好ましい。又、水の添加量は、原料植物の種類
、粒度により異なるが、穀類種子の場合にはその割合が
７０　ｗ　／　ｖ％以下、望ましくは２０〜５０ｗ／Ｖ
％程度とすると操作上便宜である。更に、攪拌の速度は
、起泡な引き起こさない程度のものとすることが好まし
い。なお、この段階の操作塩で、本発明のリムラステス
ト陽性植物ＬＰＳの純度は、ツムラステスト活性データ
から判断して、例えば小麦種子の場合には約３０倍に上
昇する。

以下、穀類種子を原料として使用する、場合を例にとり
説明するが、いわゆる当業者であれば、以下の記載を参
考にして、他植物から夾雑する糖、蛋白等を除去してリ
ムラステスト陽性ＬＰＳを高純度で回収する方法を実施
することは極めて容易である。

■純度を更に上げるためには、上記■て得られた上溝を
常法に従って限外濾過に付して分子ｔ５０００以下の画
分を除去すればよい。

■得られた乾燥品を、５０　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｑ、にな
るように蒸留水に懸濁し、遠心分離操作に付して上清を
回収する。

■この上清を氷水で冷却し、酸を添加して酸性にすると
沈殿が生しる。この際使用する酸は特定のものである必
要はなく、例えば、トリフルオロ酢酸（以下、ＴＣＡと
称す）、過塩素酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、ジクロロ
酢酸を使用できる。

■次いて、遠心外ａ操作に付して沈殿を回収して蒸留水
で洗浄し、再度遠心分離操作に付して沈殿を回収する。

■沈殿を蒸留水に懸濁し、沈殿が溶解するまでアルカリ
を加える。この際使用するアルカリも特定のものである
必要はなく、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
、アンモニア、炭酸ナトリウム、酢酸ナトリウムを使用
できる。沈殿の溶解時に塩基性がｐＨＩＩより大きくな
ると目的のＬＰＳが失活するので注意が必要である。

■Ｉ欠いて蚊を加えてｐＨ８としてから３７℃に加温し
、更に酸を加えて酸性にすると沈殿が生ずるので、３７
℃に保温した遠心分離器を使用して遠心分離操作に付す
。なお、この際使用する酸も特定のものである必要はな
い。

■上溝を回収して氷冷し、４℃で再び遠心分離操作に付
す′ ■上清を回収し、アルカリを添加して中和し、常法に従
って限外濾過で濃縮する。この際使用するアルカリも特
定のものである必要はない。

０次いで常法に従ってゲル濾過に付して、リムラステス
ト陽性画分を回収して併せる。ゲル濾適用の担体として
は、例えばセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−７
５、Ｇ−１００、セブアクリル（Ｓｅｐｂａｃｒｙｌ）
Ｓ−２００、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）６Ｂ
　［以上は米国ファルマシア社（ＰｈａｒｍａｃｉａＩ
ｎｃ、）製］、バイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ）Ｐ−１００
［米国バイオラッド（ＢｉｏｒａｄＩｎｃ、）社製］、
トーヨーバールＨＷ−５０、ＨＷ−５５（東洋曹達工業
社製〉を使用できる。

緩衝液はｐＨ３〜ｌＯのものならいずれでもよい。

例えば、トリス−ＨＣＩＬ又はリン酸緩衝液を使用でき
る。

０次いてこの両分に蛋白分解酵素を加え、３７℃で２時
間以上インキユヘーションして残存蛋白質を分解し、得
られた酵素処理液を常法に従って限外濾過により濃縮す
る。なお、この際に使用する蛋白分解酵素も特定なもの
である必要はなく、例えば、ｖ８プロテアーゼ、キモト
リプシン、トリプシン、サーモライシンを単独で、或は
任意に絹み合わせて使用できる。市販品としては、例え
ば、プロナーゼＥ（科研化学社）、プロティネースＫ（
メルク社）を使用できる。

＠次いでこの両分を常法に従って、例えば、米国ファル
マシア社製のＦＰＬＣシステムでファルマシア社製のモ
ノＱ−セファロース（Ｓ　ｅ　ｐ　ｈ−ａｒｏｓｅ）、
Ｑ−セファ０−ス（Ｓ　ｅ　ｐ　ｈ　ａ−ｒｏｓｅ）を
使用して陰イオン交換クロマトグラフィーに付してリム
ラステスト陽性画分を得る。

０次いて、常法に従って脱塩のためにゲル濾過に付して
リムラステスト陽性画分を回収する。

以上の操作により、小麦種子の場合には、当初のリムラ
ス活性の約２０％が回収され、純度的９５％の精製標品
が得られる。又、段階■終了時の純度に比べ約１０００
倍の純度（小麦種子の場合）になる。

以上の方法によって得られたリムラステスト、陽性植物
ＬＰＳはそのまま、或いは任意の程度に濃縮した形で提
供できる。又、保存性を高めるために、凍結乾燥や噴霧
乾燥なとの任意の手段により乾燥粉末として提供するこ
ともてきる。これらはいずれも常法で生産できる・ 動物体内にＴＮＦを産生させるためには、産生前駆（ブ
ライミング）段階と産生開始（トリガリング）段階とが
必要であることは、カーズウエル（Ｃａｒｓｗｅｌｌ）
らにより、プロシーディング　オブ　ナショナル　アカ
デミ−サイエンスオブ　ニーニスｘ−［Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔ　Ｉ。

Ａｃａｄ、Ｓｃ　ｉ、ＵＳＡ、、７２．３６６６〜３６
７０頁（１９７５年）］に報告されている。

ブライミング段階開始のために投与される薬剤が「ブラ
イマー」　（内因性ＴＮＦ産生促進剤）であり、トリガ
リング段階開始のために投与される薬剤が「トリガー」
　（内因性Ｔ　Ｎ　Ｆ産生剤）である。

ＬＰＳがマクロファージのインビトロＴＮＦ産生能を活
性化する能力を測定するには、マウスのマクロファージ
腹腔常在細胞を採取し、これにブライマーとしての組み
換えマウスＩＦＮ−γを添加し、次いで、トリガーとし
てのＬＰＳを添加し、そのＴＮＦ活性を測定すればよい
。

ＴＮＦ活性は、Ｌ−９２９細胞［プロシーディング　オ
ブ　ナショナル　アカデミ−サイエンス　オブ　ニーニ
スニー　７２．３６６６〜３６７０頁］に対する細胞毒
性を基にして、次のようにして測定する。

Ｌ９２９ｍ胞を、５％仔牛脂児血清を加えたイーグルミ
ニマムエツセンシャル培地（以下、ＭＥＭ培地と表す）
で育成し、８Ｘ１０Ａ個の細胞が１００μ艷の同上培地
に含まれる様にし、９６穴の平底プレートで育種する。

育種条件は３７℃、２時間、５％ＣＯ２，１００％Ｈ２
０であり、通常の細胞培養に用いられる方法でよい。そ
の後、アクチノマイシンＤを培地中に終濃度１μｇ　／
　ｍ　１となるように加え、培養液の液量を１５０μ（
とする。即座に、検体を適当にＭＥＭ培地で稀釈したも
のを５０μ（加える（この際稀釈率を適宜調製し、ＥＤ
５ｓを求める事ができる）。更に、最終液量２００μｔ
となったＬ９２９纏胞を上記条件で１８時間培養する。

細胞障害活性を測定するには、まず全培地を除去し、つ
いで０．１％クリスタルバイオレットを含む１％メチル
アルコール溶液を加えて固定染色する。クリスタルバイ
オレットは全有核細胞を染色するが、死細胞は染色後に
プレート底面より水洗で除去されるので、生存細胞の結
果から細胞障害活性を直接測定できる。この染色度をＯ
Ｄ　５ｅａｎａでの吸光度を指標として測定し、対照群
に対する染色度と比較する事で細胞障害活性を測定する
。活性の定義は次の様に行う。

Ｌ９２９１１胞が５０％生存できる検体の稀釈率（Ｎ）
を求める。対照としてウサギＴＮＳ　［腫瘍障害血清（
Ｔｕｍｏｒ　　ＮｅｃｒｏｓｉｓＳｅｒｕｍ）］を使用
し、このウサギＴＮＳの活性ｎ（単位／ｍ１１）を２．
４Ｘ１０”単位／　ｍ　ｇ　／ｍｆＬのＴＮＦ−αを用
いて決定する。このウサギＴＮＳのＥＤｓ＠を与える稀
釈率（Ｃ）を求める。

検体活性（ｉ位／ｍ１Ｌ）は−×　ｎ　で計算する。

提供できる剤の製造方法 本発明の抗ヘルペス剤は、常法の製剤技術により、散剤
、顆粒剤、丸鋼、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、液剤
、貼付剤、軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、半調
、注射剤等の形態で提供できる。又、動物用としては、
更に、飼料添加剤、プレミックス製剤、飲水添加剤とし
て調製することもできる。飼料添加剤とする場合には、
粉剤か顆粒剤とすることが好ましい、又、プレミックス
製剤とは、飼料との混合を容易にするために澱粉などの
飼料成分で希釈されたものを指す０本発明の抗ヘルペス
剤を飼料添加剤、プレミックス製剤として添加できる飼
料は市販されている飼料のいずれでもよい、又、ミネラ
ル、ビタミン、アミノ酸等の飼料添加物を含む飼料であ
ってもよい。

これら製剤には、所望ならば、保存性、均質性を保持す
るために、常法により、賦形剤、保存剤、緩衝剤等の添
加剤を加えることもてきる。更に、矯味剤、矯臭剤、着
色剤を含めることもできる。

賦形剤としては、例えば、乳糖、デンプンを使用できる
。保存剤としては、例えば、バラオキシ安息香酸メチル
、パラオキシ安息香酸エチル、バラオキシ安息香酸プロ
ピル等のパラオキシ安息香酸エステル類、デヒドロ酢酸
ナトリウム、フェノール、メチルパラヘン、エチルバラ
ヘン、プロピルパラベン等を使用できる。緩衝剤として
は、例えば、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩等が使用で
きる。

以下、製造例、実施例、実験例により本発明を例示する
。

製造例１（小麦ＬＰＳの製造） ■小型ニーダに、１．０９％の灰分を含む硬質小麦粉（
アメリカ又はカナダ産のハードレットスプリング）（３
，１２０ｇ）を入れ、２．０３１１の蒸留水を加えて１
０分間練ってドウとした。１６分間の静置後に１０１Ｌ
の水を加えてゆるやかに攪拌してデンプン乳液を洗い出
し、同時に可溶性成分を溶出させた。この溶出液を５℃
の冷蔵庫中で１２時間静置した後、デンプン等の沈ｐ部
を除去した。上澄み液を凍結乾燥して２０１．１ｇの粉
末を得た（粉末Ａ）。

更に、残留ドウに５地の蒸留水を加えてゆるやかに攪拌
し、以下、上記と同様に処理して４０゜１ｇの粉末を得
た（粉末Ｂ）。

■これら粉末Ａ、Ｂを米国アミコン社製限外濾過機ＨＦ
−Ｌａｂｌに供し、分子量画分５，０００については中
空系カートリッジＨＦ−ＬａｂｌＰＭ５を、分子量画分
１０，０００については中空系カートリッジＨＦ−Ｌａ
ｂｌＰＭｌｏを取り付けて限外濾過を行った［温度５〜
１０’Ｃ０人圧２５ｐｓ　ｊ　（１，７６ｋｇ／ｃｍ２
）　、比圧１５ｐｓ　ｉ　（１，０６ｋｇ／ｃｍ２）］
　ｅその結果に基づき、各部分を次のように命名した。

粉末Ａ：分子量５，０００以下の部分を８１分子量５．
０００以上の部分をａ２ 粉末Ｂ：分子量５，０００以下の部分をｂ＋分子ｆｆ１
５，０００以上の部分をｂ２粉末Ａ：分子量１０，００
０以下の部分をａ３分子量１０，０００以上の部分なａ
。

粉末８二分子量１０，０００以下の部分をｂ３分子量１
０，０００以上の部分をす。

これら各両分を後記実験例１に詳述する方法に準拠して
リムラステストに付したら、分子量５゜０００以上の画
分には多量のリムラステスト陽性成分が存在するが、分
子量５，０００以下の両分にはほとんど存在しないこと
が確認された。

■上記粉末ａ２の３０ｇをｌλ三角フラスコに入れ、６
００ｍ艷の蒸留水を注いで、６０分間スターラーで攪拌
した後、日立冷却高速遠心機５ＣＲ−２０Ｂ　（ロータ
ーＲＰＲ１６を事前に４℃に冷却しておいた）で４℃で
遠心分離操作（１０，０００ｇＸ１０分）に付して上清
を回収した。

■この上清を１を三角フラスコに入れ、水冷下（液温的
２℃）、スターターで攪拌しながら、事前に２℃に冷却
してあった１００％ＴＣＡ水溶液２０．５ｍｌを滴下し
、滴下終了後氷水中に】０分間放置した。

■次いで前記と同様にして４℃で遠心分離操作（１０，
０００ｇＸ１０分）に付して沈殿を回収し、氷水中で冷
却下、３００ｍ１Ｌの蒸留水と共に５００ｍｌのビーカ
ーに入れて懸濁し、氷水中で冷却し、前記と同様にして
４℃で遠心分離操作（１０，０００ｇＸ１０分）に付し
て沈殿を回収した。

■この沈殿をＩｔビー刀−に入れ、蒸留水５００　ｍ　
ＩＬで懸濁し、ＩＮ水酸化ナトリウム溶液約３゜５　ｍ
　Ｑ、を使用して中和（ｐＨ７）し、ついで、氷水中で
冷却しながら、ＩＮ水酸化ナトリウム溶液約２　ｍ　ｌ
を添加して０．０２Ｎ水酸化ナトリウム溶液になるよう
にして沈殿を溶解した。

■ＩＮ塩酸塩酸約１．露 次いで１００ｍ１Ｌの蒸留水を加えた後に１交三角フラ
スコに移して３７℃のインキュヘーター内で３０分間ゆ
っくり振盪した。

■１００％ＴＣＡ水溶液３　０　ｍ　ＩＬを加えて混合
した後、３７℃のインキュヘーター内で１０分間ゆっく
りＳ盪してから、約３７℃に保温した遠心分離器トミー
ＣＤ１００Ｒ　（）ミー精器社製）を使用して遠心分離
操作（３，０００ｇＸ１０分）に付した。

■上清を回収して氷冷し、４℃で遠心分離操作（１０，
０００ｇＸ１０分）に付し・た。

［相］上清を回収してＩＯＮ水酸化ナトリウム溶液約３
．６ｍ１Ｌで中和してｐＨ７とし、限外濾過器（東洋濾
紙ｔＪＨＰ−１５０、フィルター：　ＵＫ−１０、Ｎ２
圧：ａ．０ｋｇ７ｃｍ２）て濃縮した。

■得られた濃縮液６０ｍ１Ｌｅ、セファロース（Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ）６Ｂカラム［米国ファルマシア社（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ　　Ｉｎｃ．）製、カラムサイズ：５ｃ
ｍ（内径）Ｘ１００ｃｍ（２１）］を使い、ゲル濾過［
緩衝液：１０ｍＭトリス−ＨＣ１／　１　０ｍＭＮａＣ
Ｑ［Ｉ）Ｎ７．５）、流速：６０ｍ１Ｌ／時コに付して
、各２　０　ｍ　ＩＬの画分を得た。

＠初めから４３番目から５６番目迄の画分２　８　０ｍ
ｌを併せ、プロナーゼＥ（科研化学社）４５０μｇを加
え、Ｓ盪下、３７℃に２時間保温した後に、限外濾過器
（東洋濾紙ＵＨＰ−６２、フィルター：　ＵＫ−　１　
０、Ｎ２圧：４．０ｋｇ７ｃｍ２）で濃縮した。次いて
、ファルマシア社製ＦＰＬＣシステム（カラム：モノＱ
ＨＲ　１　０／　１０）を使って陰イオン交換クロマト
グラフィーに付した。即ち、１０ｍＭ）リス−ＨＣＩＬ
（ｐＨ７。

５）と１０ｍＭのＮａＣａを含む緩衝液で試料なカラム
に付した後、上記緩衝液でＮａＣλ量が１６５ｍＭに増
加された結成を持つ緩衝液（２００ｍＡ）てカラムを洗
った。次いて、ＮａＣ！Ｌ濃度を、１６５ｍＭからＩＭ
のＮ　ａ　Ｃ　１４１度勾配になるように増加させなが
ら全量４００ｍ１Ｌで目的ＬＰＳを溶出させ、各２ｍｌ
の両分を回収した。リムラステスト陽性が確認された、
濃度勾配をかけてから５〜８番目の両分を併せて゛、Ｌ
ＰＳ純度約９２％の８ｍｌ．ＣＬＰＳ　：　３．０３ｍ
ｇ　（リムラステストによる大腸菌ＬＰＳ換算値である
。以下のＬＰＳ量も全てこの換算値である）、糖：０．
２３ｍｇ、蛋白：０．０４ｍｇ）を回収した。

０次いでその８　ｍ　ＩＬを、セファデックス（Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘ）Ｇ−２５Ｃカラム：２６Ｏｃｍ（内径）×
２０．２ｃｍ　（６６ｍｌＬ）］を使ってゲル濾ｊｌ！
！（緩衝液：水）に付して各３　ｍ　ｌの画分を回収し
た。リムラステスト陽性の確認された第９〜１２番目の
画分を併せて、ＬＰＳ純度約９５％の１２ｍａ（ＬＰＳ
　：　２．７ｍｇ、糖＝０゜１８ｍｇ、蛋白：　０．０
３ｍｇ）を回収した。糖はフェノール−硫酸法で、蛋白
はローリ−法で測定した。なお、この両分は、陰イオン
交換クロマトグラフィーにより酸性であることを確認し
た。

又、ＳＤＳゲル電気泳動法による分子量は６，０００〜
１０，０００だった。

［相］上記画分を一８０℃で凍結後に恒量になるまで凍
結乾燥し、重量を測定したら０．７５ｍｇあった。（以
下、この凍結乾燥標品を小麦ＬＰＳと称す） この小麦ＬＰＳのリムラス活性を後記実験例１記載の方
法で測定したら２．７ｍｇに相当するので、その比活性
は ２　、７　÷　０．　７５＝３．　６ になる。

また、夾雑物として存在し得る単独の糖は、以上の精製
により実質１全て除去されたと考えられるので、検出さ
れた糖は全て、小麦ＬＰＳを構成している糖と考えられ
る。従って、この段階での小麦ＬＰＳの純度を重量に基
づいて計算すると、蛋白＝０．０３ｍｇ ＬＰＳ＝０．７５−０．０３＝０．７２ｍｇだから、 ０．７２÷０．７５Ｘ１００＝９６　（％）である。

小麦ＬＰＳの物性 ■分子量 小麦ＬＰＳを蒸留水に溶解して１　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌ
溶液を調製し、その４μλを１．５ｍｌのトレフチュー
ブに入れた。これに、別途、１ｍＭのＥＤＴＡに２．５
％ＳＤＳ、５％メルカプトエタノール、１０ｍＭ）リス
塩酸（ｐＨ８，ｏ）を加えて調製したＳＤＳ処理液１μ
気を加え、この混液を３分間沸騰水に浸した。ファルマ
シア社製のファストシステム（Ｐｈａｓｔ　　Ｓｙｓｔ
ｅｍ）を使用し、電極との間に５ＤＳ−バッファー　ス
トリップ（Ｂｕｆｆｅｒ　　５ｔｒｉｐ）（ファルマシ
ア社Ｗ＞が介在せられた］μλの上記混液をゲル［ファ
ルマシア社製の）７スト　ゲル　グラデイエン）（Ｐｈ
ａｓｔＧｅｌＧｒａｄｉｅｎｔ８−２５）に塗付し、最
大電圧２５０ｖ、最大電流１０ｍＡにセットして泳動を
開始させた。泳動終了後、クマシー染色と銀染色におけ
る挙動を観察した。

クマシー染色では、染色液としてファルマシア製の０．
１％ファスト　ゲル　ブルー　（Ｐｈ−ａｓｔ　　Ｇｅ
ｌ　　Ｂｌｕｅ）　　Ｒを、脱色液として、メタ／−ｔ
Ｌ：＊＊：に留水ＩＦ量比３　：　１　：６）混液を使
用し、次の順序で染色・脱色を行つた。

１５０℃で８分間染色 ２）５０℃で５分間脱色 ３）５０℃で８分間染色 ４）５０℃でｌＯ分閉放色 ５）５０℃で５分間保護（グリセロール、酢酸、蒸留水
の容量比５：１０：８５混液） ６）乾燥 銀染色は、次の順序で行った。

１５０℃で２分間、洗浄液（エタノール、酢酸、蒸留水
の容量比５：１：４混液）で処理２）５０℃で２分閏、
洗浄液（エタノール、酢酸、蒸留水の容量比１０：５：
８５混液）で処理３）５０℃で４分間、洗浄液（エタノ
ール、酢酸蒸留水の容量比１０：５：８５混液）で処理
４）５０℃で６分間、増感液（８，３％グルタルジアル
デヒド）で処理 ５）５０℃で３分間、洗浄液（エタノール、酢酸蒸留水
の容量比１０：５：８５混液）で処理６）５０℃で５分
間、洗浄液（エタノール、酢酸蒸留水の容量比１０：５
：８５混液）で処理７）５０℃で２分間、洗浄液（脱イ
オン水）で処理 ８）５０℃で２分間、洗浄液（脱イオン水）で処９）４
０℃で１３３分間０．２５　ｗ　／　ｖ％硝ｗＩ銀で処
理 １０１３０℃で３０秒間、洗浄液（脱イオン水）で処理 １１１３０℃で３０秒間、洗浄液（脱イオン水）で処理 １２１３０℃で３０秒間、現像液（０，Ｑ４ｖ／ｖ％ホ
ルムアルデヒド＋２．５ｗ／ｖ％炭酸ナトリウム洗浄液
）で処理 １３１３０℃で４分閏、現像液（０，０４ｖ／ｖ％ホル
ムアルデヒド＋２．５ｗ／ｖ％炭酸ナトリウム洗浄液）
で処理 １４１５０℃で２分間、反応停止液（５％ｖ　／　ｖ％
酢酸）で処理 １５１５０℃で３分間、保護液（酢酸、グリセロール、
蒸留水の容量比１０：８：８５混液）で処理 １６１乾燥 ＬＰＳは銀染色に染まるが、クマシー染色には染まらな
い性質を利用して染色帯を観察したら、分子量８，００
０±１，０００の位置に小麦ＬＰＳの主要染色帯が検出
された。

［相］リン含有量 チェンートリバラ（Ｃｈｅｎ−Ｔｏｒ　ｉ　ｂａ−ｒａ
）法［チェン等著、「アナリティカル　ケミストリ（Ａ
ｎａｌｙｔｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓ　−ｔｒｙ）、ｖ
ｏｌ、２８．１７５６〜１７５８頁（１９５６年）に準
拠して次の通りに行った。

小麦ＬＰＳを蒸留水に溶解して、２５μｇの小麦ＬＰＳ
を含む２０μｌの溶液を調製し、小試験管に入れた。２
０μ灸の５０ｖ／ｖ％硫酸を添加し、１６０℃で２時間
加熱した０次いで、２０μ露の１０ｖ／ｖ％過塩素酸を
添加した後にガスバーナーで１分間加熱して灰化させた
。その後に０゜５　ｍ　ｌの蒸留水、次いて０．５ｍ１
Ｌの反応試？ｌ（１ｍｆＬの６Ｎ硫酸、２ｍｌの蒸留水
、２ｍ１Ｌの２．５Ｖ　／　Ｗ％モリブデン酸アンモニ
ウム及び１ｍ１Ｌの１０ｖ／ｗ％の７スコルビン酸を混
合して調製し、その０．５ｍｌを使用）を添加して室温
で３０分閉放置した後に、８２０ｎｍての吸光度（ＯＤ
　＋１２１１ｎ−）を測定した。なお、検量線作製用の
試料としては、リン酸二水素カリウム（和光純薬社製）
を蒸留水で希釈し、リン重量としてそれぞれ２・５μｇ
、ｉμｇ・０・２５μｇ・０μｇを含む０．５ｍ１（７
）溶液を調製して使用した。なお、リン１ｇはリン酸二
水素カリウム４．３９ｇに相当する。得られた結果を次
表１に示す。

表　　ｌ 注：小麦ＬＰＳのデータは、無機リンの混入（例えば、
リン酸緩衝液に由来する）による誤差を避けるために、
加熱処理をしていない対照のデータを減した値である。

小麦ＬＰＳの分子量をｓ、ｏｏｏと仮定し、上表の結果
に基づいてその１分子当たりのリン数を次式により計算
すると１〜４になる。

上記実験でリン数がｌ〜４と変動している原因の１つと
しては、精製段階でのモノフォスフオニステラーゼの混
入により、リン酸が脱離したことも考えられる。

Ｏヘキソサミン含有量 エルソンーモルガン（Ｅｌｓｏｎ−Ｍａｒ−ｇａｎ）法
（東京化学同人出版「生化学実験講座」Ｎｏ、４の３７
７〜３７９頁）に準拠して次の通りに行った。

小麦ＬＰＳを蒸留水に溶解して１ｍｇ／ｍｌの溶液を調
製し、その１００μ鼠をスクリューキャップ付きスピッ
ツ（イワキガラス社１１）に入れ、これに１００μ虱の
８ＮＨＣｉを添加して１１０℃で１６時間加熱しｔ！、
４ＮＮａＯ）１を約２００μ化添加してｐＨ７とした。

その１００μ露を分取し、別のスクリューキャップ付き
スピッツに入れ、２００μ露の下記試薬Ａを加えた後に
、１０５℃で１．５時間加熱し、次いて流水で冷却した
０次いて、１００μ気を分取し、６７０μ地の９６％エ
タノールを加え、更に、６７μｔの下記試薬Ｂを加えた
後に室温で１時間放置し、５３５ｎｍで吸光度を測定し
た。検量線作製用試料としては０．２０〜２００μｇ　
／　ｍ露のＮ−アセチル　グルコサミン（和光純薬社製
）を使用した。

（試薬Ａ）７５μ禿の７セチルアセトンと２．５ｍ１Ｌ
の１．２５Ｎ炭酸ナトリウムを混合して調製。

（試薬Ｂ）１．６ｇのｐ−ジメチルベンズアルデヒドと
３０　ｍ　ｌの濃塩酸と３０　ｍ　ＩＬの９６％エタノ
ールを混合して調製。

結果、小麦ＬＰＳのへキソサミン数はε±２７分子（仮
定分子量８，０００）だった。

■脂肪酸含有量 ９０μ艷の小麦ＬＰＳ蒸留水溶液（１ｍ　ｇ　／ｍ５Ｌ
）に１０μ地の内部標準（０，５５ｍＭのマルガリン酸
）を加えた。１．０ｍ１Ｌの０．５Ｍナトリウムメチラ
ートを加えて脂肪酸エステルの加水分解とエステル化を
行った。室温で１詩間放ｉｔ後に９６０μｔの０．５Ｎ
ＭＣ１１を加えて中和した。

これに２ｍ１Ｌのヘキサンを加えて１５分間激しく攪拌
した。次いで、１．０００ｇで５分間遠心分離を行いヘ
キサン層を分取した。窒素ガスでヘキサンを蒸発させて
、約２０μ隻になるまで濃縮した。

このサンプルをガスクロマトグラフィー［本体：島津社
製のＧＣ８ＡＰＦ、キャピラリーカラム：カナダのスペ
ル：＋（Ｓｐｅｌｃｏ）社１！ＦＳＣＡＰ　　５ｐ２３
３０、キャリヤーガス：窒素］に付して脂肪酸量を測定
した。脂肪酸ｊｌｓ定の基準としては、第一化学薬品社
製の合成リピトＡである大１１１！！！ＬＡ−１５−Ｐ
Ｐ　（分子量２．０００で、１分子中の脂肪酸数は６で
あることが知られている）を用いた。

結果、小麦ＬＰＳの脂肪酸数は６±２７分子（仮定分子
量８，０００）であると推定された。

上記ガスクロマトグラフィーで観察されたチャートを添
付図面第１〜３図に示す、第１図は小麦ＬＰＳの、第２
図は大１１１１ｆＬＰｓの、第３図は百日咳菌ＬＰＳの
チャートである。

第１〜３図において、図示されている主要ピーク番号に
対応する保持時間（分）は次の通りであった番 第１図：　ビーク番号　　保持時間（分）１　　　　　
　　２．４５０ ２　　　　　　　２．７５８ 第２図：　ピーク番号　　保持時間（分）１’　　　　
　　　　２．４１７ ２　　　　　　　２．７４２ 第３図：　ビークυ　　保持時間（分）１　　　　　　
　　　　　　　　２、　４３３２　　　　　　　　　　
　　　３、　０２８第１〜３図の比較により、小麦ＬＰ
Ｓのチャートは大Ｎ菌ＬＰＳのチャートに似ているが、
百日咳菌ＬＰＳのものとは大きく異なることは明白であ
る。

［相］ＫＤＯ含有量 ＫＤＯ（２−ケト−３−デオキシオクトネート）含有量
をジフェニルアミン法［シャビ　アール（Ｓｈａｂｙ　
　Ｒ，）等著、アナリティカルバイオケム（ＡｎａｌＶ
ｔｉｃａｌ　　Ｂｉｏ　−ｃｈｅｍ、）　、５Ｂ　（１
）、１２３−１２９頁（１９７４年）コに準拠して次の
通りに行った。

５００ｍｇのジフェニルアミン、５ｍｌのエタノール、
４５　ｍ　ｌの氷酢酸、５　ｏｍａの濃塩酸（全て和光
純薬社製）を合わせてＫＤＯ検出試薬を調製した。その
５００　Ｂに、１．０５ｍｇ／ｍｌＬの小麦ＬＰＳを含
む蒸留水２５０μ交を合わせ、１００℃の沸騰水浴中で
３０分間加熱後に冷水（２３℃）中で３０分間冷却し、
ついて日立分光光度計３２０を使って４２０．４７０．
６３０．６５０ｎｍでの紫外部吸収を測定した（それぞ
れＡ４２１１、Ａ、７Ｉ１．Ａ６３１１．Ａ６５Ｉｌと
する）。標準試料としては、１２７μｇ　／　ｍ　ｌの
ＫＤＯアンモニウム塩［米国シグマ（Ｓｉｇｍａ）社製
］を含む蒸留水２５０μ（を使用した。

検体試料、標準試料それぞれについて、次式の値を求め
た。

Ｓ　＝Ａａ２ｓ−Ａ４７ｉｌ＋Ａａ３ｓ−Ａａｓｅ検体
試料の［（ＳＴ）は０．３７９、標８試料の値（Ｓｓ）
は０．２９４であった。この値の比較により、小麦ＬＰ
Ｓには５±１モル／分子量８千のＫＤＯが含まれると推
定された。

製造例２（クロレラＬＰＳの製造） ■細胞膜破砕クロレラ（■マンナンフーズ社製）３０ｇ
を、洗浄液が緑色に着色しなくなるまでエタノールで洗
浄した。

■この洗浄残渣２６ｇを１００ｍｇ／ｍｌの濃度で蒸留
水に溶かし、４５℃で２時間振盪後に遠心分離操作（４
℃、１０，０００ｇＸ３０分）に付した。

■上溝を回収し、東洋濾紙Ｎ００２で濾過し、次いで蒸
留水で抽出した。

■抽出液２９０ｍλを下記条件で陰イオン交換クロマト
グラフィーに付した。

カラム：Ｑ−セファ０−ス（φ３　ｃ　ｍ　Ｘ　２３ｃ
ｍ、容量約１８０ｍ１Ｌ） 緩衝剤：１０ｍＭ）リスーＨＣ込（ｐＨ７，５）、Ｎ　
ａ　Ｃ１１１度勾配：　１０ｍＭ、４００ｍＭ、１Ｍ 流速：Ｉｏｌｏｏ−２Ｏ０／時 温度：室温 ■素通りした両分３１０ｍｆ１をグルコアミラーゼで処
理して澱粉を分解した（ｐＨ５，０，４０℃、約２時間
）。澱粉の分解は、ヨウ業澱粉反応で着色が生しないこ
とにより確認した。

■遠心分離操作（１０、ＯＯＯｇ　Ｘ　１０分）ニ付シ
て上溝を回収し、１０ＮＮａＯＨ溶液て中和してｐＨ７
とし、分子量２０万カツトのポアサイズを有するウルト
ラフィルターを使って限外濾過して、分解物の除去及び
濃縮を行った。

■得られた濃縮液３ｃｍ良をファルマシア社製ＦＰＬＣ
システム（カラム：モノＱＨＲ１０／１０）を使って陰
イオン交換クロマトグラフィーに付した。即ち、１０ｍ
Ｍ）リスーＨＣ込と１０ｍＭのＮａＣｌを含むＩＩ衝液
（ｐＨ７，５）で試料をカラムに付した後、上記緩衝液
でＮａＣｌ量が１６５ｍＭに増加された組成をした液（
２００ｍ２）てカラムを洗った。次いて、目的ＬＰＳを
溶出するため、１６５ｍＭからＩＭのＮ　ａ　ＣａＪＩ
度勾配になるようにＮ　ａ　Ｃ１４１度を増加させなが
ら全量４００　ｍ　ｌてカラムを洗い、各２　ｍ　ｉｔ
の両分を回収した。リムラステスト陽性が確認された、
濃度勾配をかけてから５〜８番目の両分を併せた。

■次いてその８ｍ１Ｌを、セファデックス（Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ）Ｇ−２５［カラム＝２．０ｃｍ（内径）Ｘ２０
．２ｃｍ　（６６℃免）］を使ってゲル濾過（緩衝液：
水）に付して各３ｍｉの両分を回収した。リムラステス
ト陽性の確認された第９〜１２番目の両分を併せて１２
ｍ１Ｌを回収した（ＬＰＳ　：　１４．３ｍｇ、糖：２
．０ｍｇ。

蛋白：０．５３ｍｇ）、ＬＰＳは後記実験例１記載の方
法で、糖はフェノール−硫酸法で、蛋白はローリ−法で
測定した。

■上記画分を一８０℃で凍結後に恒量になるまで凍結乾
燥し、重量を測定したら５．８ｍｇあった。（以下、こ
の凍結乾燥標品をクロレラＬＰＳと称す） このクロレラＬＰＳのリムラス活性は１４．３ｍｇに相
当するので、その比活性は １４．３÷５．８＝２．５ になる。

また、以上の＊＊で、夾雑物として存在し得る単独の糖
は実質１全て除去されたと考えられるので、検出された
糖は全て、クロレラＬＰＳを構成している糖と考えられ
る。従って、この段階でのクロレラＬＰＳの純度を重量
に基づいて計算すると、 蛋白＝０．５３ｍｇ ＬＰＳ＝５．８−０．５３＝５．２７ｍｇだから、 ５．２７−ｉ−５，８Ｘ１００＝９１　（％）　テ＆ル
。

クロレラＬＰＳの物性 製造例１に記載の方法と同様にして、次の値が得られた
。

分子量＝４０，０００〜９０，０００ リン数＝４±１７分子量１万 ヘキソサミン数＝７±ｌ／分子量１万 脂肪酸数＝６±ｌ／分子量１万 ＫＤＯ数＝２±１７分子量１万 製造例３（百日咳菌ＬＰＳの製造） 千葉県血清研究所から入手した試験用百日咳菌液（２，
０Ｘ１０Ｉ＠細胞／　ｍ　ＩＬ）を死菌体として用いた
。

上記死菌体を２５ｍｇ（乾燥重量）／ｍｌとなるように
滅菌水に懸濁した。これに等量の９０％熱フェノール液
（６８〜７０℃）を添加し、６８℃で１時間振盪しなが
ら抽出した。ｓ、ｏｏｏｇ。

４℃で２０分間遠心分離して水層を分取した。残りのフ
ェノール層に、上記水層と等量の滅菌水を加えて同様の
抽出を行った。得られた水層な先の水層と合わせて流水
中で一晩透析後に、ロータリーエバポレータでｌ／１０
に濃縮した。これを８゜０００ｇ、４℃で２０分間遠心
分離した。上清を分取し、酢酸ナトリウムを少量加え、
０〜４℃の冷エタノールを６倍量加えて一２０℃で一晩
放置した。４，０００ｇ、４℃で３０分間遠心分離して
回収した沈殿物をエタノールで２回、次いでアセトンで
１回遠心洗浄し、アスピレータで乾燥させた。

残さを、２０ｍｇ／ｍｌとなるように蒸留水に懸濁し、
米国ブランソン（Ｂｒａｎｓｏｎ）社製のソニファイア
１８５型で超音波処理（出力コントロール５．１５分、
室温）に付した。次いて２゜５００ｇ、４℃で１０分間
遠心分離し、上清を分取した。

この上清を４℃で、米国シグマ（Ｓｉｇｍａ）社製の核
酸分解酵素ＤＮａｓｅ　　Ｉ％ＲｎａｓｅＡて１５〜１
６時間処理した（最終的には１０゜ｇ　／ｍ　ＬのＤＮ
ａｓｅ　　　Ｉ　と、２０１ｇ／ｍｌＬのＲｎａｓｅＡ
を使用した）、更に同じ濃度の核酸分解酵素を加えて３
７℃で２時間加温した０次いて２．５００ｇ、４℃で１
０分間遠心分離し、上清を分取した。

この上清を米国ゲルマン（Ｇ　ｅ　１　ｍ　ａ　ｎ　）
社のアクロディスク（Ａｃｒｏｄｉｓｃ）を使い、孔径
０．２μｍで濾過した。濾液を分子篩にかけ［樹脂：米
国ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃ　ｉ　ａ）社製セファ
ロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）６Ｂ、カラムサイズ＝内
径５　ｃ　ｍ　Ｘ長さ１００ｃｍ、緩衝液＝　１０ｍＭ
のトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＮａｃＩＬ（ｐＨ７，５
）−流速＝約３ｍａ／ｃｍ２／時）、生化学工業社製の
ＬＳ−１キツトを用いてリムラス活性陽性画分を調べて
合わせ、上記ゲルマン社のアクロディスクを使い、孔径
０．２μｍで濾過した。濾液をイオン交換にかけ［装ｒ
ｘ：米国ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃ　ｉ　ａ）社製
ＦＰＬＣ１樹脂：米国ファルマシア社製モノＱ　　ＨＲ
１０／１０、緩衝液＝１０ｍＭのトリス−ＨＣＩＬ＋１
０ｍＭのＮａＣＩＬ（ｐＨ７，５）で１５分洗浄し、次
いで、ＮａＣｌ量を１６５ｍＭに増加して３０分洗浄し
、次いで、２０分かけて、ＮａＣ交量が１６５ｍＭから
ＩＭの濃度勾配になるようにＮａＣｌ量を増加させなが
ら洗浄し、次いで、ＩＭのＮａＣＩＬ量で３０洗浄する
、流速＝　２　ｍ　ｌ／分コ、生化学工業社製のＬＳ−
１キツトを用いてリムラス活性陽性画分を調べて合わせ
た。

合わせた画分をカラムで脱塩し［樹脂：米国ファルマシ
ア（Ｐｈａｒｍａｃｊａ）社製セファデックスＧ−２５
フアイン（ｆｉｎｅ）、カラムサイズ：内径２　ｃ　ｍ
　Ｘ長さ２５ｃｍ、溶出液：蒸留水コ、次いで凍結乾燥
した。

この凍結乾燥標品（４，５０ｍｇ）に混入している可能
性の最も高い物質は核酸である。そこで、紫外吸収曲線
（２００〜４００　ｎ　ｍ　）をとり、２６０ｎｍでの
吸光度を求めた。吸光度１のときの核酸濃度が５０μｇ
　／　ｍ　ＩＬであることを用いて上記吸光度から核１
２濃度を算出したら１％以下であった。又、ＳＤＳ電気
泳動ては蛋白質は明確には検出されなかった。従って、
検出感度を考慮すると、上記凍結乾燥標品に混入してい
る蛋白質は高々０〜３％と推定される。従って、上記凍
結乾燥標品の純度は９６％以上と推定された。

製造例１に記載の方法と同様にして測定されたこの百日
咳菌ＬＰＳの物性は次の通りであった。

百日咳菌ＬＰＳの物性 分子量＝６，０００±１，０００． ９．０００±１，０００ （複数観察されたクマシー染色帯のうち、染色強度が最
高の２つの染色帯の値である。） リン数＝５／分子量８千 ヘキソサミン数＝１６±２７分子量８千脂肪酸数＝５７
分子量８千 ＫＤＯ数＝２±１／分子ｊＩ８千 なお、製造例１に記載の方法と同様にして測定された大
腸菌ＬＰＳ　［米国デイフコ（Ｄｉｆｃｏ）社製０１２
８：Ｂ１１の物性は次の通りであフた。

大腸菌ＬＰＳの物性 分子量＝３０，０００±５，０００ （Ｐ？段状に連続したクマシー染包帯のうち、染色強度
が最高のものの値である。）リン数＝１２／分子量３万 ヘキソサミン数＝４５±６／分子量３万脂肪酸数＝１８
／分子量３万 ＫＤＯ数＝５±１／分子量３万 以下は、本発明のＬＰＳを含む製剤の処方例である。な
お、ＬＰＳ量は、リムラステストによる大１１１ｉｉＬ
ＰＳ換算量である。

実施例２（内用液剤） クロレラＬＰＳ　　　　　　　　　１ｍｇ精製水　　　
　　　　　　　１００ｍ吏実施例３（軟膏剤） 小麦ＬＰＳ 精製ラノリン ０．１ｇ ０ｇ ０００ｇ 実施例１（錠剤） 小麦ＬＰ５　　　　　　　　０．０４ｇ６％ＲＰＣ乳糖
　　　　　　　１７８ｇステアリン酸タルク　　　　　
　　　８ｇバレイショデンブン　　　　　　１４ｇ以上
を混和し、打錠して、Ｏ，１ｍｇの小麦ＬＰＳを含む０
．５ｇの錠剤４００個を調製した。

実施例４（注射剤） 小麦ＬＰＳ　　　　　　　　　Ｏ，５ｍｇ合計 １０１００Ｏ。

実験例１（リムラステスト陽性植物ＬＰＳの定量）各種
植物に含まれるリムラステスト陽性ＬＰＳの定量を、生
化学工業株式会社のトキシヵラーシステムを使って行っ
た。

■９６大の平底または丸底プレートに注射用蒸留水を１
穴当たり１８０μ見入れた。試料２０μｉ（試料が固体
の場合には注射用蒸留水に溶解して調製した）をプレー
トの穴の１つに加えた。プレートミキサーで攪拌しなが
らピペッティングを行って１０倍希釈液を１ｌｌＩ！シ
た。（以後、順次希釈試料を２０μ気ずつとり、同様に
処理することで１００倍、１０００倍、・・・とｌθ倍
希釈系列液をｌｌ製できる。また、注射用蒸留水と試料
の量比を変えることにより希釈率は任意に設定できる。

）■内部標準として１．５μｇ　／　ｍ　ｌの大腸菌Ｌ
ｐｓｍ液のｉｏｏ、ｏｏｏ倍希釈液を１ｌ１１１シ、希
釈やリムラステスト発色が正常であることを確認した。

■上記■の１０倍希釈液３５μλを別のプレートの穴に
とり、生化学工業株式会社のトキシカラーシステムのＬ
Ｓ−１セツト３５μｔを添加し、３’？’Ｃで３０分間
放置した。ついで１０５μ露の１Ｍ酢酸水を加えて攪拌
して反応を停止させた。

この試料液の波長４１５ｎｍでの吸光度を、９６六用吸
光度計プレートリーダーＭＴＰ−１００（コロナ電気株
式会社製）で測定した。パックグランドとしては蒸留水
を、検量線作成用としては４２ｐｇ／ｍｌの生化学工業
株式会社のトキシカラーシステムのＥＴ−１セツトを使
用して検量線を作成し、この検量線を基準にして各試料
中のリムラステスト陽性ＬＰＳの定量を行った。（試料
が蒸留水である場合の吸光度を０とした。）なお、この
方法で前記ＬＳ−１セツトを使用した場合にはｌＯ〜４
５ｐｇ／ｍｊＬの範囲内で発色に定量性があることが確
認されたので、この範囲に入らないときは、希釈率を変
えて再実験した。

希釈試料の定量値は、 （検量線から読み取った値）Ｘ（希釈率）で計算した。

得られた結果を、固体試料の場合にはｎｇ／ｇ単位で、
液体試料の場合にはｎｇ／ｍｔ単位で次表１に示す。

なお、表中の試料の欄の会社名、地名等は、当該試料の
入手先、産地をさす、かかる記載がない品はスーパース
トアー忠実屋の神奈川県津久井郡中野町店で購入した品
で、製造者が不明なものを指す。

表　　ｌ リムラステスト陽性 松の実（輿南貿易）　　　　　　　　　　１２５単子葉
類 硬質系小麦種子（千葉製粉）　　　　　２．２５０硬質
系小麦種子（千葉製粉） （分子量５０００以上）　　１，０００，０００硬貢系
小麦粉（千葉製粉）　　　　　７，５００小麦ふすま（
千葉製粉） （分子量５０００以上）　　　　　　　　　３００小麦
胚芽（千葉製粉）　　　　　　　　　１，６００小麦胚
芽（千葉製粉） （分子量５０００以上）　　　　　＜１０，０００玄米
　　　　　　　　　　　　　　　　１，１００米粉（日
の本穀粉） （分子量５０００以上）　３１゜ 米ぬか 米ぬか（分子量５０００以上） コーンフラワー（大洋飼料） （分子ｆｆ１５０００以上） コーングリッツ（大洋飼料） （分子量５０００以上） コーン（和光食糧） クマ笹（開本物産） アヤメ（種子） ニンニク（鱗茎） アスパラガス（芽） ミョウガ（花房） ヨクイニン（ウチダ和漢薬） （原植物は鳩麦） ハング（松浦薬業） （原植物はカラスビシャク） バクモントウ（栃木天海堂） （原植物はジャノヒゲ） ｏｏｏ、　　ｏｏ。

２９、　０００ ５００、　０００ 〈　０　、３ １５．０００ ３、　３００ ４、　５００ ４１、　０００ ２、　３００ ５、　５００ ４、　０００ ターメリック（エスピー食品’）　　　１９５，０００
（原植物はウコン） 双子葉類 大豆（王女食品）　　　　　　　　　　　１５０大豆（
はぐれん）（分子量５０００以上）４００丹波黒大豆（
和光食糧）８５ 小豆（和光食糧）　　　　　　　　　　　４５０小豆（
和光食糧） （分子量５０００以上）　３６，０００，０００ひたし
豆（和光食糧）　　　　　　　　　　８００大正金時（
和光食？り　　　　　　　　　　　５５０大福豆（和光
食糧）　　　　　　　　　　３５０そら豆（生）　　　
　　　　　　　　　　７５０ジヤガイモ（はぐれん） （分子量５０００以上）　　　　　　　　＜０．３ビワ
（種子）　　　　　　　　　　　　　　８００アボガド
（種子）　　　　　　　　　　　　９５０モモ（種子）
　　　　　　　　　　　４．５００クルミ（種子’）　
　　　　　　　　　　　１，９００ソラ豆（種子）　　
　　　　　　　　　　７５０カポチヤ（種子） トマト（生の実） カイワレダイコン（根を除く） マタタビ（丸久物産） アマチャズル（Ｋ、に、桜井） ドクダミ（湿潤重量当たり） （帝京大学薬用植物園） 胡橡（白）（エスピー食品） トウガラシ（興南貿易） バラ（興南貿易） ナツメグ（ライオン） （原植物はニクズク） トウヒ（ウチダ和漢薬） （原植物はダイダイ） カッコン（栃木天海堂） （原植物はクズ） ナンキンカンゾウ（ウチダ和漢薬） オタネニンジン（ウチダ和漢薬） ボウフウ（栃木天海堂） ｔｏ、　　ｏｏ。

１０、　５００ ５０、　０００ ４０、　０００ ？３．　０００ ８、　０００ ３、　０００ １８、　０００ ４５、　０００ ５０、　０００ カンボウイ（栃木天海室）　　　　６００゜（原植物は
オオツヅラフジ） チョウトウコラ（ウチダ和漢薬）　　７゜（原植物はウ
ンカリア・ヒルスタ） 八味地黄丸（カネボウ薬品）　　　１７゜小柴胡１（ツ
ムラ）　　　　　　　　１３゜五苓ａＩ（ツムラ）　　
　　　　　　　１２゜猪苓１（ツムラ）　　　　　　　
　　１４゜十全大補１（ツムラ）　　　　　　　　８゜
八味地黄丸（ツムラ）　　　　　　　　８゜ローヤルゼ
リー　　　　　　　　　　１゜［ペキン　ローヤル　ゼ
リー （Ｐｅｋｉｎ　　Ｒｏｙａｌ　　Ｊｅｌｌｙ）ハチミツ
（加藤美峰園本舖） シダ植物 スギナ（湿潤重量当たり） （帝京大学薬用植物園） ゼンマイ（閉本物産） ソウ類 わかめ（三陸天然品）　　　　　　１ １．０００ １０、　０００ 　ＯＯ ＯＯ わかめ芽株（森谷健康食品） ひしき（生） 芽ひしき（小善本店） コブ（ヤマトタカハシ） アサクサノリ（乾燥相ノリ） クロレラ （Ｈヘルスタージャパンｙｓ） クロレラ （Ｈマンナンフーズｙｓ＞ 菌類 椎茸（下仁田産） えのき茸（長野県中懸重） しめしく勢多郡宮城町） まいたけ（大利根） あわび茸（羽生） マツシュルーム きくらげ ナメコ エビオス（アサヒビール社製 ビール酵母） ２００　。

８５　。

１０５　。

２３５　。

１３０　。

１、　９００．　０００ ３、　０００．　０００ １６　。

２０゜ ４０　。

２０５　。

８　。

２０゜ ７５　。

２１　。

２５０　。

　ＯＯ 冬虫夏ｊ　　　　　　　　　　　　２４０，０００その
他 雪印ナチュレヨーグル）　（ｉｌｌ雪印）　　５，００
０グリコビフイズスヨーグルト（■グリコ）　　５０リ
ムラステスト陽性 試料（液体） ＬＰＳ量　（ｎ　　） ビール キリン アサと ファインとルスナー ラガービール ハートラント ファインドラフト スーパーイースト ワイン １、　１５０ １、　２５０ １、　５５０ １．４００ サントリー サントネージュ（白） （赤） ジードル（アップル） 日本酒 大間−級（大間酒造） 黄桜二級（黄桜酒造） ２　、４ １　、７ 大寒吟醸二級（玉泉堂酒造） 玄米酒 日々−献（大間酒造） 薬味酒 陶陶酒デルカップ（陶陶酒本舗） 宝焼耐（宝酒造） その他 キヨーレオビン（湧水製薬） ニンニク抽出液（湧水製薬） グロスキュー（クロレラ工業） 大麦健康メツコール（韓国・−和） サクロンハーブ液（エーザイ） ヘチマ水（自家製） パイオアルゲン（クロレラ工業） パンシロン内服液（ロート製薬） ユンケルファンティー（佐原製薬） コリホグス（小林製薬） ツティ（二接） ミオＤコーワ１００（コーツ） ２．１ １　、２ 〈　２　、０ ６、　０００ ２、　０００ １、　０００ 】　０ リゲイン（二接）　　　　　　　　　　　　　　９０ブ
レン５０（第一製薬）　　　　　　　　　　？ソルマッ
ク（大１製薬）　　　　　　　　　　　６０−ゼリーゴ
ールト（中外製薬）　　　　　　５バスビタン３０（常
盤製薬）　　　　　　　　５チオビタ（大ｌ！製薬）　
　　　　　　　　５未満リボビタン（大正製薬）　　　
　　　　　５未満アスパラゴールド（田辺！２Ｎ）　　
　　　　５未満＊ＭＭ２＜マクロファージのインビトロ
ＴＮＦ産生能を活性化する際のＥＤ５ｅを与えるリムラ
ステスト陽性ＬＰＳの含有量が０゜４〜１１００ｎ／培
養液ｍａであるＬＰＳの選択方法） ９週齢の、平均体重２９ｇの各群３匹のオスのＣ３Ｈ／
Ｈｅマウスのマクロファージ腹腔常在細胞２００μ交（
２Ｘ１０’１ｉｌ）／穴を９６穴の平底プレートに入れ
、ブライマーとしての組換えマウスＩＦＮ−ｒ　（１０
０単位／ｍｌ）を甚大に１０μ鼠宛加えた。別途、各種
ＬＰＳＲを６５℃の熱水（ｇ／ｍｉ）で５時間抽出して
調製した抽出液を各種希釈し、そのｌＯμλ／穴をブラ
イマー投与の３時間後にトリガーとして加えた。２時間
培養後に遠心分離操作に付した（３０００ｇ、２０分）
。甚大から得られた１３０μ２の、ＴＮＦ活性はＬ９２
９ｍ胞に対する毒性に基づいて測定し、又、リムラステ
スト陽性ＬＰＳ含有量は生化学工業株式会社のトキシカ
ラーシステムを使用して測定した。

測定値を、縦軸にＴＮＦ産生Ｉ（単位／培養液ｍ１ｋ）
を、横軸（対数尺）に対応リムラステスト陽性ＬＰＳ含
有量（ｎｇ／培養液ｍｌ）を表す座標にプロットし、プ
ロットされた各点から推定されるシグモイド曲線を描い
た。トリガーを投与しなかった場合のＴＮＦ産生量を与
える各トリガーのマクロファージ活性化能を０％とし、
トリガー投与の効果として増大するＴＮＦ産生量が最大
恒量に達したときの各トリガーのマクロファージ活性化
能を１００％とし、その５０％に相当するマクロファー
ジ活性化能を与えるリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を
曲線から読み取った。

マクロファージ活性化能とリムラステスト陽性ＬＰＳ含
有量との相間間係が上記条件を満たしたＬＰＳ採取源の
結果を次の表２に示す。表中で、ｒＴＮＦＪはＴＮＦ産
生量（単位／培Ｉｆ液ｍ１Ｌ）を、「活性化能」はマク
ロファージ活性化能（％）を、ｒＬＰＳＪはリムラステ
スト陽性ＬＰＳ含有量（ｎｇ／培養液ｒｒｌｋ）を表す
。なお、トリガー無添加時のＴＮＦ産生量は０．７５単
位／ｍｌ．てあったので、ＴＮＦ産生量が０．７５単位
／ｍλ以下である場合をマクロファージ活性化能θ％と
し、マクロファージ活性化能（％）は次式により計算し
た。

表　　２ 表２に示された結果を第４〜７図に示す。

第４〜７図において、縦軸はマクロファージ活性化能（
％）を表し、横軸（対数尺）はリムラステスト陽性ＬＰ
Ｓ含有量（ｎｇ／培養液ｍ１Ｌ）を表している。

第４図において、○はターメリックの、・は力ンボーイ
の、口はコンブの、■はアサクサノリのデータを示す。

第５図において、○はワカメ芽株エキスの、口は芽ヒジ
キの、■はエビオスのデータを示す。

第６図において、○は冬虫夏草の、・はワカメ芽株の、
口はクロレラのデータを示す。

第７図において、○は大腸菌ＬＰＳの、・は小麦ＬＰＳ
の、口は百日咳ＭＬＰＳの、腸はりとドＡのデータを示
す。

実験例３（抗ヘルペス効果の測定） 治験前に蛍光抗体法或は血清学的にヘルペス感染を確認
できた６症例に対して、製造例１て生産された粉末Ａａ
２を１ｍｇ／ｍｌ（リムラステスト陽性ＬＰＳ量でｌμ
ｇ／ｍＡ）含む５０　ｗ　／　ｖ％グリセリン液（グリ
セリン：水＝１：１）（以下、この液を「薬剤Ａ」と称
す）を患部に１日１回の割合で１〜２ｍλを塗付した。

結果は次の通りてあった。

患者Ａ（女性３５才） ［１９８９年１２月１４日］ 外陰部隔て来院。単純ヘルペス１　（＋十〜＋）、２（
＋） ［１９８９年１２月１４〜１７日］ゾビラツクス（英国
ウエルカムファウンデイション社製のアシクロビル）静
注及びゾビラックス軟膏塗付するも症状悪化。

［１９８９年１２月１８〜２２日、２５〜２８日］薬剤
Ａ塗付。

［１９８９年１２月２５日コ薬剤有効を認定。

Ｅｌ　９９０年１月８日コ完治を認定。

［１９９０年３月１４日］再発なしく−）を確認。

［担当医師の評価］著効。

患者Ｂ（女性２１才） ［１９８９年ｌＯ月２３日］ 排尿時疼痛て来院。単純ヘルペス抗体価３２×（＋） ［１９８９年１０月２４〜２７日］ゾビラツクス静注及
びゾビラックス軟膏受付。疼痛は軽減したが、圧痛あり
。

［１９８９年１０月３１日〜１１月ＩＯ日、１１月１３
日コ薬剤Ａ塗付。

［１９９０年１月］り治を認定。

［１９９０年３月１４日］再発なしく−）を確認。

［担当医師の評価コ著効。

患者Ｄ（女性４８才） ［１９８９年１０月１２〜１９日］ ヘルペス外陰炎て入院。ゾビラックス軟膏で処置。

［１９９０年１月１３日コ ヘルペス外陰炎再発。単純ヘルペス２（±）［：１９９
０年１月１３〜１７日コ薬剤Ａ塗付。

［１９９０年１月１７日］薬剤有効を認定。

［１９９０年１月２４日］完治を認定。

［１９９０年３月１４日コ再発なしく−）を確認。

［担当医師の評価コ著効。

患者Ｃ（女性２３才） ［１９９０年１月２２日コ 排尿時隔で来院。単純ヘルペス２（±）［１９９０年１
月２２〜２７日、２９〜３１日コ薬剤Ａ塗付。

［１９９０年１月２９日］薬剤有効を認定。

［１９９０年１月３１日］完治を認定。

［１９９０年３月１４日３再発なしく−）を確認。

［担当医師の評価］著効。

患者Ｅ（女性・年令不祥） ［１９日９年１０月１７日コ 肛門周囲隔て来院。パリセーラーゾスター抗体陽性。ゾ
ビラックス軟膏塗付するも症状は悪化。

［１９Ｂ９年１０月２０〜２８日、１０月３０日〜１１
月２日、１１月４．６．１３．２０日、１２月１１日］
薬剤Ａ塗付。

［１９８９年１０月２８日］薬剤有効を認定。

［１９９０年１１月２０日コ完治を認定。

［１９９０年３月１４日］再発なしく−）を確認。

［担当医師の評価コ著効。

患者Ｆ（女性・年令不祥） ［１９８９年１２月２７日］ 外陰部隔て来院。ヘルペス外陰部と判断。

［１９８９年１２月２７日〜１２月２８日、１９９０年
１月９〜１２日、１月１７日コ 薬剤Ａ塗付。

［１９９０年１月１１日］薬剤有効を認定。

［１９９０年１月１７日］完治を認定。

［１９９０年３月１４日］再発なしく−）を確認。

［担当医師の評価コ著効。

上記全例において、薬剤Ａ塗付開始後２〜３日で痛みは
減少ないし消失し、全例で、薬剤Ａｍ付開始後１週間以
内で臨床症状は全く認められなくなった。臨床的には全
例で塗付開始後１月以内に完治と認められた。副作用は
塗付部位の軽度の魅惑以外は認められなかった。

投与量、投与間隔、毒性値 本発明のＬＰＳを抗ヘルペス剤、動物用抗ヘルペス剤と
して投与するさいの量、投与間隔は、当然、担当医師或
いは獣医師の厳重な管理下、投与対象の年齢、症状、体
重、投与効果を勘案して個別に決定されるが、入部の成
人（６０ｋｇ）で、経口投与でｌμｇ〜１００ｍｇ、静
脈投与で１０ｎ　ｇ　〜１　ｍ　ｇ、経皮投与で１００
　ｎ　ｇ　−１ｒｎ　ｇが１日１回の投与量の一応の目
安となる。なお、動物では、牛、馬等の大型動物は上記
の量の６０分のｌを体重１ｋｇ当たりの量の目安とし、
豚、犬、猫等の中型、小型の動物ではその２倍量を本型
１ｋｇ当たりの量の目安とし、鶏等の鳥類では更にその
２倍量を体重１ｋｇ当たりの量の目安とし投与できる。

又、小麦ＬＰＳ　（製造例１）、クロレラＬＰＳ（製造
例２）、大腸菌ＬＰＳ　［米国デイフコ（Ｄｉｆｃｏ）
社製０１２８：Ｂ８）、百日咳菌ＬＰＳ　（＆Ｉ造例３
）の毒性値ＬＤｓ＠（１群２匹の雄ＢＡＬＢ／Ｃマウス
、平均体重４５ｇ、における平均値）は次の通りであっ
た。

［発明の効果コ 本発明により、抗ヘルペスウイルス効果が高くて副作用
が少なく、従って化学治療係数が高く、アシクロビル耐
性株にも効果があり、生産コストが低く、しかも、経口
、経皮、注射で投与可能な、大量に供給可能な抗ヘルペ
ス剤、動物用抗ヘルペス剤が提供される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、小麦ＬＰＳをガスクロマトグラフィーにかけ
て得られる、分子中における脂肪酸の存在を示すピーク
を図示したチャートである。 ３１！２図は、大腸菌ＬＰＳをガスクロマトグラフィー
にかけて得られる、分子中における脂肪酸の存在を示す
ピークを図示したチャートである。 第３図は、百日咳菌ＬＰＳをガスクロマトグラフィーに
かけて得られる、分子中における脂肪酸の存在を示すピ
ークを図示したチャートである。 第４〜７図は、マクロファージ活性化能とリムラステス
ト陽性ＬＰＳ含有量との相間間係が本発明の条件を満た
している各種ＬＰＳの当該相関関係を示すグラフである
。 第４〜７図において、縦軸はマクロファージ活性化能（
％）を表し、横軸（対数尺）はリムラステスト陽性ＬＰ
Ｓ含有量（ｎｇ／培養液ｍＱ、）を表している。 第４図において、Ｏはターメリックの、・は力ンボーイ
の、口はコンブの、腸はアサクサノリのデータを示す。 第５図において、○はワカメ芽株エキスの、・は芽ヒジ
キの、口はエビオスのデータを示す。 第６図において、○は冬虫夏草の、・はワカメ芽株の、
口はクロレラのデータを示す。 第７図において、○は大腸菌ＬＰＳの、・己よ／Ｉ’１
麦ＬＰＳの、口は百日咳菌ＬＰＳの、■こよＩＪビドＡ
のデータを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）ＬＰＳを含む抗ヘルペス剤であり、 インビトロで培養されるマクロファージのＴＮＦ産生能
   を活性化するＬＰＳのマクロファージ活性化能を指標と
   し、 縦軸に、そのＬＰＳを添加しないときのマクロファージ
   のＴＮＦ産生量を与えるマクロファージ活性化能を０％
   、マクロファージのＴＮＦ産生量を最大恒量にする時の
   ＬＰＳのマクロファージ活性化能を１００％とするマク
   ロファージ活性化能（％）を表し、横軸に、そのＬＰＳ
   のリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を対数尺で表すシグ
   モイド曲線を描くとき、 マクロファージ活性化能のＥＤ＿５＿０を与えるリムラ
   ステスト陽性ＬＰＳ含有量が０．４〜１００ｎｇ／培養
   液ｍｌであるＬＰＳの少なくとも１種を含む抗ヘルペス
   剤。 （２）ＬＰＳが、植物から得られるＬＰＳ、細菌から得
   られるＬＰＳ及びリピドＡからなる群から選択される、
   請求項１記載の抗ヘルペス剤。 （３）植物が裸子植物、単子葉類植物、双子葉類植物、
   シダ植物、ソウ類植物、菌類植物及びそれらの混合物か
   らなる群から選択されるものである、請求項２記載の抗
   ヘルペス剤。 （４）裸子植物がマツ科マツ属植物である、請求項３記
   載の抗ヘルペス剤。 （５）マツ科マツ属植物がマツである、請求項４記載の
   抗ヘルペス剤。 （６）単子葉類植物がイネ科のイネ属植物、コムギ属植
   物、オオムギ属植物、カラス麦属植物、ササ属植物、ジ
   ュズダマ属植物、アヤメ科のアヤメ属植物、ユリ科のネ
   ギ属植物、キジカクシ属植物、ジャノヒゲ属植物、ショ
   ウガ科のショウガ属植物、ウコン属植物、サトイモ科ハ
   ンゲ属植物及びそれらの混合物からなる群から選択され
   るものである、請求項３記載の抗ヘルペス剤。 （７）イネ科イネ属植物がイネである、請求項６記載の
   抗ヘルペス剤。 （８）イネ科コムギ属植物が小麦である、請求項６記載
   の抗ヘルペス剤。 （９）イネ科オオムギ属植物が大麦、裸麦及びそれらの
   混合物からなる群から選択されるものである、請求項６
   記載の抗ヘルペス剤。 （１０）イネ科カラス麦属植物が烏麦、燕麦及びそれら
   の混合物からなる群から選択される、請求項６記載の抗
   ヘルペス剤。 （１１）イネ科ササ属植物がクサ笹である、請求項６記
   載の抗ヘルペス剤。 （１２）イネ科ジュズダマ属植物が鳩麦である、請求項
   ６記載の抗ヘルペス剤。 （１３）アヤメ科アヤメ属植物がアヤメである、請求項
   ６記載の抗ヘルペス剤。 （１４）ユリ科ネギ属植物がニンニクである、請求項６
   記載の抗ヘルペス剤。 （１５）ユリ科キジカクシ属植物がアスパラガスである
   、請求項６記載の抗ヘルペス剤。（１６）ユリ科ジャノ
   ヒゲ属植物がジャノヒゲである、請求項６記載の抗ヘル
   ペス剤。 （１７）ショウガ科ショウガ属植物がミョウガである、
   請求項６記載の抗ヘルペス剤。 （１８）ショウガ科ウコン属植物がウコンである、請求
   項６記載の抗ヘルペス剤。 （１９）サトイモ科ハンゲ属植物がカラスビシャクであ
   る、請求項６記載の抗ヘルペス剤。 （２０）小麦から得られるＬＰＳが次の物性を有するも
   のである、請求項８記載の抗ヘルペス剤。 分子量：８，０００±１，０００（ＳＤＳ電気泳動法） リン数：１以上／分子量８千 ヘキソサミン数：６±２／分子量８千 脂肪酸数：６±２／分子量８千 ＫＤＯ数＝５±１／分子量８千 （２１）双子葉類植物がマメ科のダイズ属植物、インゲ
   ンマメ属植物、ソラマメ属植物、クズ属植物、カンゾウ
   属植物、ナス科のナス属植物、トマト属植物、トウガラ
   シ属植物、バラ科のビワ属植物、サクラ属植物、クスノ
   キ科アボガド属植物、クルミ科クルミ属植物、ウリ科の
   トウナス属植物、アマチャヅル属植物、アブラナ科ダイ
   コン属植物、マタタビ科マタタビ属植物、ドクダミ科ド
   クダミ属植物、コショウ科コショウ属植物、シキミ科シ
   キミ属植物、ニクズク科ニクズク属植物、ミカン科ミカ
   ン属植物、ウコギ科オタネニンジン属植物、セリ科サポ
   シュニコビア属植物、ツヅラフジ科オオツヅラフジ属植
   物、アカネ科カギカズラ属植物及びそれらの混合物から
   なる群から選択されるものである、請求項３記載の抗ヘ
   ルペス剤。 （２２）マメ科ダイズ属植物が大豆である、請求項２１
   記載の抗ヘルペス剤。 （２３）マメ科インゲンマメ属植物が小豆である、請求
   項２１記載の抗ヘルペス剤。 （２４）マメ科ソラマメ属植物がそら豆である、請求項
   ２１記載の抗ヘルペス剤。 （２５）マメ科クズ属植物がクズである、請求項２１記
   載の抗ヘルペス剤・ （２６）マメ科カンゾウ属植物がナンキンカンゾウであ
   る、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （２７）ナス科ナス属植物がジャガイモ、トウガラシ及
   びそれらの混合物からなる群から選択されるものである
   、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （２８）ナス科トマト属植物がトマトである、請求項２
   １記載の抗ヘルペス剤。 （２９）ナス科トウガラシ属植物がトウガラシである、
   請求項２１記載の抗ヘルペス剤。（３０）バラ科ビワ属
   植物がビワである、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （３１）バラ科サクラ属植物がモモである、請求項２１
   記載の抗ヘルペス剤。 （３２）クスノキ科アボガド属植物がアボガドである、
   請求項２１記載の抗ヘルペス剤。（３３）クルミ科クル
   ミ属植物がクルミである、請求項２１記載の抗ヘルペス
   剤。 （３４）ウリ科トウナス属植物がカボチャである、請求
   項２１記載の抗ヘルペス剤。 （３５）ウリ科アマチャヅル属植物がアマチャヅルであ
   る、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （３６）アブラナ科ダイコン属植物がカイワレダイコン
   である、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （３７）マタタビ科マタタビ属植物がマタタビである、
   請求項２１記載の抗ヘルペス剤。（３８）ドクダミ科ド
   クダミ属植物がドクダミである、請求項２１記載の抗ヘ
   ルペス剤。（３９）コショウ科コショウ属植物が胡椒で
   ある、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （４０）シキミ科シキミ属植物がダイウイキョウである
   、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （４１）ニクズク科ニクズク属植物がニクズクである、
   請求項２１記載の抗ヘルペス剤。（４２）ミカン科ミカ
   ン属植物がダイダイである、請求項２１記載の抗ヘルペ
   ス剤。 （４３）ウコギ科オタネニンジン属植物がオタネニンジ
   ンである、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （４４）セリ科サポシュニコビア属植物がボウフウであ
   る、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （４５）ツヅラフジ科オオツヅラフジ属植物がオオツヅ
   ラフジである、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （４６）アカネ科カギカズラ属植物がウンカリア・ヒル
   スタである、請求項２１記載の抗ヘルペス剤。 （４７）シダ植物がトクサ科トクサ属植物、ゼンマイ科
   ゼンマイ属植物及びそれらの混合物からなる群から選択
   されるものである、請求項３記載の抗ヘルペス剤。 （４８）トクサ科トクサ属植物がスギナである、請求項
   ４７記載の抗ヘルペス剤。 （４９）ゼンマイ科ゼンマイ属植物がゼンマイである、
   請求項４７記載の抗ヘルペス剤。（５０）ソウ類植物が
   カッソウ類植物、紅ソウ類植物、緑ソウ類植物、ランソ
   ウ類植物及びそれらの混合物からなる群から選択される
   ものである、請求項３記載の抗ヘルペス剤。（５１）カ
   ッソウ類植物がコンブ科のワカメ属植物、コンブ属植物
   、ホンダワラ科ヒジキ属植物及びそれらの混合物からな
   る群から選択されるものである、請求項５０記載の抗ヘ
   ルペス剤。 （５２）コンブ科ワカメ属植物がワカメである、請求項
   ５１記載の抗ヘルペス剤。 （５３）コンブ科コンブ属植物がコンブである、請求項
   ５１記載の抗ヘルペス剤。 （５４）ホンダワラ科ヒジキ属植物がヒジキである、請
   求項５１記載の抗ヘルペス剤。 （５５）紅ソウ類植物がウシケノリ科アマノリ属植物で
   ある、請求項５０記載の抗ヘルペス剤。 （５６）ウシケノリ科アマノリ属植物がアサクサノリで
   ある、請求項５５記載の抗ヘルペス剤。 （５７）緑ソウ類植物がオオシスティス科クロレラ属植
   物である、請求項５０記載の抗ヘルペス剤。 （５８）オオシスティス科クロレラ属植物がクロレラで
   ある、請求項５７記載の抗ヘルペス剤。 （５９）クロレラから得られるＬＰＳが次の物性を有す
   るものである、請求項５８記載の抗ヘルペス剤。 分子量＝４０，０００〜９０，０００（ＳＤＳ電気泳動
   法） リン数＝４±１／分子量１万 ヘキソサミン数＝７±１／分子量１万 脂肪酸数＝６±１／分子量１万 ＫＤＯ数＝２±１／分子量１万 （６０）菌類植物が担子菌類植物、子ノウ菌類植物及び
   それらの混合物からなる群から選択されるものである、
   請求項３記載の抗ヘルペス剤。 （６１）担子菌類植物がヒラタケ科マツオウジ属植物、
   キシメジ科のエノキタケ属植物、シメジ属植物、タコウ
   キン科マイタケ属植物、サルノコシカケ科ポリポラス属
   植物、ハラタケ科ハラタケ属植物、キクラゲ科キクラゲ
   属植物、モエギタケ科スギタケ属植物及びそれらの混合
   物である、請求項６０記載の抗ヘルペス剤。 （６２）ヒラタケ科マツオウジ属植物が椎茸である、請
   求項６１記載の抗ヘルペス剤。 （６３）キシメジ科エノキタケ属植物がエノキ茸である
   、請求項６１記載の抗ヘルペス剤。 （６４）キシメジ科シメジ属植物がシメジである、請求
   項６２記載の抗ヘルペス剤。 （６５）タコウキン科マイタケ属植物がマイ茸である、
   請求項６１記載の抗ヘルペス剤。（６６）サルノコシカ
   ケ科ポリポラス属植物がアワビ茸である、請求項６１記
   載の抗ヘルペス剤。 （６７）ハラタケ科ハラタケ属植物がマッシュルームで
   ある、請求項６１記載の抗ヘルペス剤。 （６８）キクラゲ科キクラゲ属植物がキクラゲである、
   請求項６１記載の抗ヘルペス剤。（６９）モエギタケ科
   スギタケ属植物がナメコである、請求項６１記載の抗ヘ
   ルペス剤。（７０）子ノウ菌類植物がエンドミセタセア
   科サッカロミセス属植物、バッカクキン科ノムシタケ属
   植物及びそれらの混合物である、請求項６０記載の抗ヘ
   ルペス剤。 （７１）エンドミセタセア科サッカロミセス属植物が、
   パン酵母、醸造用酵母及びそれらの混合物である、請求
   項７０記載の抗ヘルペス剤。 （７２）バッカクキン科ノムシタケ属植物が冬虫夏草で
   ある、請求項７０記載の抗ヘルペス剤。 （７３）細菌が大腸菌、百日咳菌及びそれらの混合物か
   らなる群から選択されるものである、請求項３記載の抗
   ヘルペス剤。 （７４）大腸菌から得られるＬＰＳが次の物性を有する
   ものである、請求項７３記載の抗ヘルペス剤。 分子量＝３０，０００±５，０００（ＳＤＳ電気泳動法
   ） リン数＝１２／分子量３万 ヘキソサミン数＝４５±６／分子量３万 脂肪酸数＝１８／分子量３万 ＫＤＯ数＝５±１／分子量３万 （７５）百日咳菌から得られるＬＰＳが次の物性を有す
   るものである、請求項７３記載の抗ヘルペス剤。 分子量＝６，０００±１，０００ ９，０００±１，０００ （ＳＤＳ電気泳動法） リン数＝５／分子量８千 ヘキソサミン数＝１６±２／分子量８千 脂肪酸数＝５／分子量８千 ＫＤＯ数＝２±１／分子量８千 （７６）ＬＰＳを含む動物用抗ヘルペス剤であり、 インビトロで培養されるマクロファージのＴＮＦ産生能
   を活性化するＬＰＳのマクロファージ活性化能を指標と
   し、縦軸に、そのＬＰＳを添加しないときのマクロファ
   ージのＴＮＦ産生量を与えるマクロファージ活性化能を
   ０％、マクロファージのＴＮＦ産生量を最大恒量にする
   時のＬＰＳのマクロファージ活性化能を１００％とする
   マクロファージ活性化能（％）を表し、横軸に、そのＬ
   ＰＳのリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を対数尺で表す
   シグモイド曲線を描くとき、 マクロファージ活性化能のＥＤ＿５＿０を与えるリムラ
   ステスト陽性ＬＰＳ含有量が０．４〜１００ｎｇ／培養
   液ｍｌであるＬＰＳの少なくとも１種を含む動物用抗ヘ
   ルペス剤。