JPH04501357A - フラジルｘ症候群を検出するためのプローブ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 フラジルＸ症候群を検出するためのプローブ本発明は、核酸断片およびフラジル Ｘ症候群（ｆｒａｇｉｌｅＸ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ）の診断におけるそれらの使用 に関する。

フラジルＸ（マーチン−ベル；　Ｍａｒｔｉｎ−Ｂｅｌｌ　）症候群（ＭｃＫｕ ｓｉｃｋカタログ番号：３０９５５）は精神遅滞と、大きな耳、楕円形の顔貌お よび男性患者での巨大事実を含む身体異常により特徴づけられる（１．２）。

患者由来のリンパ球をチミジン欠損培地で培養すると、２−５０％の細胞がＸｑ ２７．３にフラジルサイトを発現する（４．５）。男性の場合の０．６−１／１ ０００および女性の場合の０．２−０．６／１０００の最近の罹患数は、フラジ ルＸ症候群がダウン症候群後の精神遅滞の最も共通の遺伝的原因であることを示 唆する（６．７）。しかしながら、信頼できるキャリア検出およびこの障害の胎 児期診断は、リンパ球および羊水細胞におけるフラジルサイトの発現が変動する ために、まだ利用できない（８，９，１０）。遺伝学的カウンセリングもまた、 外見上表現型が正常な男性を介しての突然変異の継承およびヘテロ接合性の女性 での発現変動性ゆえに難しい状態にある（１１．１２．１３）。

フラジルＸ症候群に関連したＤＮＡマーカーが開示されているが、フラジルサイ トから遠位にあるマーカーの順位決定は、マーカー同土間の組み換えと比較して 、マーカーとフラジルサイトとの組み換えがより高い頻度で起こるために、困難 であることが分かった（文献１４−２３）。いくつかの研究は順位ＦＲＡＸＡ− ＤＸＳ５２−Ｆ８−Ｘｑｔｅｒを支持しく　２４．２７　）、他の研究はＦＲＡ ＸＡ−Ｆ８−ＤＸＳ５２−Ｘｑｔｅｒを支持する（　２６．２７）。比較的最近 になって、ＤＸＳ１３４をＦ８およびＤＸＳ　１５から分離する交差（ｃｒｏｓ ｓ−ｏｖｅｒ　）が見いだされた（２８）、ＤＸＳ５２とＤＸＳ１５の間のＤＸ Ｓ　１３４の物理的地図を考慮すると（２９）、このデータからは順位ＤＸＳ５ ２−ＤＸＳ１３４−ＤＸＳ　１５−Ｆ８か得られよう。最も接近した近位マーカ ーＤＸ３９８　（４Ｄ８）は０．０３−０．０６の組み換え率で連結しており（ ２３，３０）　、一方遠位マーカーＤＸＳ５２　（Ｓｔ　１４）は組み換え率０ ．１０で連結される（１７）。この領域での高頻度の単一および二重交差現象を 考えると、これらの遺伝子座は日常的な臨床使用に足りるだけの信頼がもてない 。

遺伝パターンの複雑性および近接して連結されたマーカーの欠如を回避するもの である、フラジルＸ遺伝子座を同定するための１つの戦略は、Ｘ　ｑ　２７−ｑ ｔｅｒの物理的地図を作成することである。これによりマーカー順位を決定的に 確立できかつ病気の遺伝子座を同定できる筈である。これまで、これらの遺伝子 座は約２メガベースＤＮＡ配列にわたる３つの非連結遺伝子群として物理的地図 が作成されている（２９．３１−３４　）。

従って、約１２メガベースであると概算された（３２）、この領域の完全な物理 的地図は新しいＤＮＡ配列の単離を必要としている。

この度本発明者らは意外にも、フラジルサイトから遠位にあるがＤＸＳ５２より も近接して存在するＩＡＩと呼ばれる新しい遺伝子座を発見した。このＩＡＩ遺 伝子座は制限断片長条型性（ＲＦ　Ｌ　Ｐ）を示し、そしてＩＡＩ遺伝子座は近 位側のＤＸＳ９８と一緒になってフラジルＸ遺伝子座の有用な隣接マーカーを提 供するであろうことがさらに見出された。従って、ＩＡＩ遺伝子座を検出できる プローブはフラジルＸ症候群および多数の他のＸ染色体関連疾患、例えばＸ染色 体性繰うつ病、Ｘ染色体性精神分裂病、Ｘ染色体性双極疾患（ｂｉｐｏｌａｒ　 １ｌｌｎｅｓｓ　）　、エメリー・ドレフユース（Ｅｍｅｒｙ　Ｄｒｅｉｆｕｓ ｓ）ジストロフィーおよび副腎ロイコジストロフィーの診断に有用であるだろう （文献１５参照）。この遺伝子座はＦ８、ＤＸＳ５２および色盲（ＣＢ）のよう なこの領域のマーカーとして以前に報告されたものと相違している（　２９．３ １−３３　）。それゆえＩＡＩ遺伝子座検出用のプローブは付加的な診断用途を 有する。

それゆえ本発明は領域Ｘｑ２７．３−ＤＸＳ５２でヒトＸ染色体と選択的にハイ ブリダイズできる核酸断片を提供する。

本発明の断片は低または高緊縮条件下でＸｑ２７．３−ＤＸＳ５２領域とハイブ リダイズでき、これらの条件下で他のヒト染色体ＤＮＡとハイブリダイズしない という点で選択的であろう。この核酸断片はＲＮＡであってもＤＮＡであっても よいが、後者が好適である。

より好ましくは、この断片は二本鎖ＤＮＡである。好ましくは、この核酸断片は 以下で定義されるＩＡＩ遺伝子座でハイブリダイズしよう。

プローブとして使用する場合、本発明の断片はヒトＤＮＡとのハイブリダイゼー ション後に検出可能であることが必要であり、これは任意の既知標識技法により 達成できよう。代表的には、プローブはオートラジオグラフィーによって検出で きる放射性同位元素の、例えばニック・トランスレーションによる組み込みによ り標識されよう。その他の標識方法には蛍光標識のような直接検出できる標識の 導入、および酵素標識のような間接的に検出できる標識の導入が包含される。

当業者はこれらおよび他の既知標識の導入並びにかかる標識の検出に必要とされ る技法を熟知していよう。

従って、本発明は検出可能な標識が結合されている上記核酸断片を包含するプロ ーブをも提供する。

ＩＡＩ遺伝子座はワラジルＸサイトとＤＸＳ５２との間の少なくとも２Ｍｂにわ たる（しかし、ＤＸＳ５２遺伝子座と重ならない）Ｘ染色体の領域から成る。

制限酵素Ｍ１ｕＬ　Ｎｏｔｌ、　ＮｒｕＩまたはＳａｃ　ｌ　Ｉを用いて得られ たヒトＸ染色体の消化物はいろいろなりＮＡ断片を生成しく以下の実施例１に記 載される）、各断片はＩＡＩ遺伝子座とハイブリダイズする。それゆえ、ｌＡ１ 遺伝子座は１種またはそれ以上の前記Ｍｌｕｌ、　ＮｏｔＩ。

Ｎｒｕ　ＩおよびＳａｃ　Ｉ　！断片がハイブリダイズするヒトＸ染色体のＸ　 ｑ　２７−ｑｔｅｒ領域の部分であると規定される。

前記ＭｌｕＩ、　Ｎｏｔｌ、　ＮｒｕＩまたはＳａｃ　Ｉ　Ｉ断片はすべて本発 明による断片の例である。本発明による他の断片は、先に定義したＩＡＩ遺伝子 座とおよび／または１種またはそれ以上の前記Ｍ１ｕＩ、　ＮｏｔＩ、　Ｎｒｕ ＩまたはＳａｃ　Ｉ　Ｉ断片とハイブリダイズする核酸断片である。既知の技法 を使うことにより、本発明の断片はワラジルＸサイトと先に定義したＩＡＩ遺伝 子座との間のヒトＸ染色体にハイブリダイズする別の断片を同定するのに使用で きよう。

この種の断片の一部は１種またはそれ以上の前記ＭｌｕＩ、　Ｎｏｔｌ、　Ｎｒ ｕｌまたはＳａｃ　Ｉ　ｒ断片とハイブリダイズしよう。ワラジルＸサイトとＩ ＡＩ遺伝子座との間でハイブリダイズする断片の他のものは前記ＭｌｕＩ、　Ｎ ｏｔｌ。

ＮｒｕＩまたはＳａｃ　Ｉ　Ｉ断片のどれともハイリダイズしないであろうが、 それにもかかわらずそれらはＩＡＩ遺伝子座によりもワラジルＸサイトに近い領 域を同定できるので、フラジルＸ疾患の診断に関しヒトＸ染色体を検索する上で 有用であろう。

本発明の別の断片はＩＡＩ遺伝子座とＤＸＳ５２遺伝子座との間のヒトＸ染色体 とハイブリダイズする；この種の断片は前記Ｍｌｕ１．　Ｎｏｔｅ、　ＮｒｕＩ またはＳａｃ　Ｉ　Ｉ断片とハイブリダイズするかもしれないし、しないかも知 れない。フラジルＸ疾患の診断におけるそれらの使用に加えて、ワラジルＸサイ トとＩＡＩ遺伝子座との間でハイブリダイズする本発明による断片は、他のＸ関 連遺伝子座の診断において更なる用途を有しうるし、また先に言及した他のＸ染 色体性疾患の診断にも使用できよう。本発明による断片はＩＡＩ遺伝子座とＤＸ Ｓ５２疾患の間でハイブリダイズする。

ここに記載のハイブリダイゼーションは、ハイブリダイズ予定の断片を３ｘＳＳ Ｃ，Ｏ，１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１０％デキストラン硫酸、お よび１　ｘ　Ｄｅｎｈａｒｄｔ溶液を含有する緩衝液中４２°Ｃで混合し、次に 高または低緊縮緩衝液中６５°Ｃで洗浄することにより実施される。ＳＳＣは０ ．１５Ｍ塩化ナトリウム、０．０１５Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ７，０緩衝溶 液である。Ｄｅｎｂａｒｄｔ溶液は０．０２％ポリビニルピロリドン、０．０２ ％フィコール４００、および０．０２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）である。

低緊縮緩衝液は３ｘＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳを含有するが、高緊縮緩衝液は ０．１ｘＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳを含有する。ここで用いる用語“ハイブリ ダイゼーション”、“低緊縮”および“高緊縮”はこの通りに解釈されるべきで ある。

本発明による断片はヒト染色体Ｘ１好ましくはＸ染色体のＸ　ｑ　２７−ｑｔｅ ｒ領域を消化し、必要に応じて断片をクローニングし、そしてＸ　ｑ　２７．３ とＤＸＳ　５２の間で、例えばＩＡＩでハイブリダイズできる断片を選択するこ とにより得ることができる。当業者は先に定義した断片を作製するための消化、 クローニングおよびスクリーニングの実施に必要とされる技法を承知していよう 。

先に述べたように、本発明の核酸断片は特に検出可能な標識を担持する場合に、 フラジルＸ症候群の診断に使用できる。従って、本発明は潜在的にフラジルＸ症 候群にかかる危険のある個体からのＤＮＡを、先に定義した核酸断片またはプロ ーブと適当なハイブリッド形成条件下で接触させることから成るフラジルＸ症候 群の診断方法をも提供する。断片またはプローブのハイブリダイゼーションは慣 用技法により検出できる。

本発明の診断方法には、好ましくは、潜在的に危険のある個体の近いかまたは遠 い血縁者、特にその個体の祖父母、両親、おじとおば、兄弟姉妹および／または 子供からのＤＮＡサンプルの同様のスクジー・ニングもさらに包含される。ＤＮ Ａサンプルは新しく得ることができるし、またはこの方法はガスジー（Ｇｕｔｈ ｒｉｅ　）試験の一部として誕生直後に得られたもののような保管物質にも適用 できる。フラジルＸ症候群の発生を示す症歴と結び合わせた、血縁者のこのよう な試験を用いて、家系図を通して感受性ＤＮＡを追跡し、このようにして潜在的 に危険にさらされている個体が感受性Ｘ染色体骨は継いでもっているか否か判定 する。本発明の特定面においては、この診断方法はフラジルＸ症候群のキャリア をスクリーニングするために、および／または危険にさらされている胎児を識別 するための胎児期スクリーニングとして実施される。

また、本発明による断片は先に述べた他のＸ染色体性疾患を診断するのにも同様 に使用できる。

本発明はさらに、先に定義した核酸断片またはプローブ、および１種またはそれ 以上の次の副成分：すなわち、核酸断片を標識するための１種以上の試薬；患者 のＤＮＡを消化するための１種以上の制限酵素；消化を実施しかっ／またハイブ リダイゼーション担体または支持体上へ消化ＤＮＡを負荷するための１種以上の 緩衝液；ハイブリダイゼーションを実施するためのハイブリダイゼーションフィ ルターのような担体または支持体；ハイブリダイゼーションフィルターを洗うた めの１種以上の緩衝液−低または高緊縮条件下でハイブリダイゼーションを実施 するための１種以上の緩衝液；先に定義したプローブを検出するための１種以上 の試薬；およびヒトＤＮＡのフラジルＸ陽性および／または陰性サンプルおよび ／またはヒト以外のＤＮＡサンプルのような対照試薬、並びに検出可能な標識か らのシグナルを比較するための標準品；を含有するフラジルＸ症候群の診断試験 を実施するためのキットをも提供する。

ヒトＸ染色体のＸＡＩ遺伝子座は高度に保存された配列を有することが見いださ れており、このことはｌＡｌ遺伝子座が１以上の機能遺伝子に相当することを示 している。ＩＡＩの遺伝子または遺伝子群が１種以上の蛋白をコードしておりそ してこれらの蛋白は免疫原として使用する場合抗体を誘導しようことは当然予測 される。これらの遺伝子は慣用技法により単離および発現でき、そして遺伝子に より発現された蛋白は公知方法によって抗体を生成させるために使用できる。

蛋白、および蛋白に対する抗体はそれら自体、フラジルＸ症候群の診断に使用で きる。

従って、別の面においては本発明は、ｌＡｌ遺伝子座に対応する遺伝子またはか かる遺伝子に対応するＣＤＮＡのような、先に定義した本発明の核酸断片を１つ またはそれ以上含有するクローニングおよび発現ベクター（この発現ベクターは 適宜に正しい位置、方向および読み枠で開始および終止シグナル、調節およびプ ロモーター配列をさらに含有する）；前記クローニングまたは発現ベクターで形 質転換された宿主細胞−発現ベクターを含有するかかる形質転換宿主細胞を培養 することにより発現されたポリペプチドまたは蛋白：かかるポリペプチドおよび 蛋白に対するポリクローナルおよびモノクローナル抗体、並びにかかる抗体を分 泌できるハイブリドーマのような抗体産生細胞；をも提供する。

本発明は添付図面を参照することによってさらに詳しく説明されよう： 図１０体細胞ハイブリッドを使用したＤＮＡの位置推定を示す。ＤＮＡｔ−Ｐｓ 　ｔ　Ｉで消化した。プロットはＡにおいては冷ヒトＤＮＡ競合物質と共に全Ｉ ＡＩコスミドと、ＢにおいてはサブフラグメントＩＡ１．６とハイブリダイズさ せた。Ａ：１、全ヒトＤＮＡ　；　２、Ｘｐｔｅｒ−Ｘｑｔｅｒを含有するヒト ／チャイニーズハムスターハイブリッド；３、チャイニーズハムスターＤＮＡ、 ４、Ｘｐｔｅｒ−Ｘｑ２６を含有するヒト／マウスハイブリッド；５、Ｘｑ２６ −ｑｔｅｒを含有するヒト／マウスハイブリッド：６、Ｘｐ　ｔ　ｅ　ｒ−Ｘｃ ｅｎを含有するヒト／チャイニーズハムスターハイブリッド。Ｂ：１．チャイニ ーズハムスターＤＮＡ、２、ヒト男性ＤＮＡ、３、ヒト女性ＤＮＡ、４、Ｘｑ２ ７−ｑｔｅｒを含有するハイブリッドＢ１７゜図２．Ａ：正常個体のＰｓｔＴ消 化後に現れたＩＡＩＲＦＬＰ、（Ｑｑ、ＩＡＩの対立遺伝子）フラジルＸ家族に おけるＩＡＩ　ＲＦＬＰの分離を示す。

図３．ヒト精子ＤＮＡのＮｒｕ！消化を示す（トラック１および２）。パルスタ イムおよび長さ。ＩＡＩとハイブリダイゼーション。ゲルは５Ｃ，１００Ｖ、２ ００Ｓで６０時間操作した。

図４．異なる個体のＥＢＶリンパ芽球細胞系から単離し、Ｎｏｔｌ消化しそして ＩＡＩ（ＡとＣ）およびＦ８　（ＢとＤ）とハイブリダイズさせたＤＮＡのサザ ンプロット分析を示す。プロットＡおよびＢ：１、フラジルＸ男性；２、痙性対 麻痺男性患者；３、フラジルＸキャリア女性；４、Ｘ：常染色体転座をもつ女性 ；５、正常男性ワラジルＸキャリア。プロットＣおよびＤ：１，２、フラジルＸ 男性；３．５、正常女性；４、男性血友病患者；６、正常男性精子ＤＮＡサンプ ル。

ゲルは５０Ｖ、２０分、パルスタイム５Ｃで１３０時間操作した。

図５．Ｍ１ｕｌ（Ａ）およびＳａｃ　Ｉ　Ｉ　（Ｂ）で消化して、ＩＡＩとハイ ブリダイズさせた、ＥＢＶリンパ芽球細胞系から単離したヒトＤＮＡのサザンプ ロット分析を示す。Ａ：１．５．６．７．９．１Ｏ１１１゜；２．１の祖母の祖 母；３、正常女性。Ｂ：ｌ、２、正常男性；３．４．５、フラジルＸ男性；６、 正常女性；７、男性血友病患者：８、男性副腎を髄神経障害患者；９、トラック １０のフラジルＸ男性の祖母の祖母。ゲルは５０Ｖ、２０分のパルスタイム、１ ０Ｃで１３０時間操作した。

本発明は以下の実施例を参照することにより説明さ本実施例では、フラジルサイ トから遠位に存在する新しい遺伝子座ＩＡＩの遺伝子地図および物理的地図の作 成を説明する。本発明者らは、この遺伝子座がこの領域の物理的地図を少なくと も２メガベースのＤＮＡ分延長させることを証明する。ＮｏｔＩ消化物では、Ｉ ＡＩについて観察されたパルスフィールドゲルパターンが他の遠位マーカーと違 って個体間で変動する。

物質および方法 コスミドの単離　唯一のヒト成分としてヒトＸ染色体を含有するヒト／チャイニ ーズハムスターハイブリッドＤＮＡから作製したコスミドライブラリーをＬＴＣ ベクター中に構築した（３５）。このライブラリーを標準条件下にニック・トラ ンスレートしたヒトゲノムＤＮＡを使って低密度でスクリーニングし、０．１Ｘ ＳＳＣを用いて６５℃で洗った。陽性クローンを微量調製し、そして消化したコ スミドＤＮＡのサザンプロットをチャイニーズハムスターおよびヒトＤＮＡにハ イブリダイズさせて、ヒトＸ染色体配列の存在を確認した。

体細胞ハイブリッド　ヒトＸ染色体のみのハイブリッドおよびＸ染色体の短腕を 含有するハイブリッドは以前に開示されている（３６）。ヒトＸ染色体の長腕の 種々の領域を含有する体細胞ハイブリッドも使用された。２つの相反するマウス ／ヒトハイブリッドは細胞系ＧＭ３８８４．４６、Ｘ、　ｔ　（Ｘ；　１６）　 （ｑ２６；ｑ２４）に由来する。一方は唯一のヒト染色体として誘導体Ｘを含有 し、他方は唯一のヒト染色体として誘導体１６を含有する（３７）、Ｘｑ２７− ｑｔｅｒを含有する第三のハイブリッドは唯一のヒト染色体としてｔ　（Ｘ：１ ９）（Ｘｑｔｅｒ−ｑ２４：１９ｑ１３．２−ｐｔｅｒ）を含有する微小核ハイ ブリッド系から照射により誘導された。このハイブリッドはＦ８Ｃ，ＤＸＳ５２ およびＤＸＳ　１１５を含めた既知のＸｑ２８マーカーをすべて含むが、ＤＸ３ ９８のようなフラジルＸに近位のマーカーは何ら含まない（３８；およびｖａｎ 　０ｏｓｔ　ｅｔ　ａｌ、未刊行）。

サザンブロツティング　サザンプロット（３９）は以前に記載された通りに実施 した（４０）。コスミドはランダムブライミング（４１）またはニック・トラン スレーション（４２）により標識し、熱変性し、そして熱変性および超音波処理 を行ったヒトＤＮＡ　（１ｍｇ／ｍｌ）と２時間ブレインキュベートした。次に 混合物を適当なプロットを包含するハイブリダイゼーション緩衝液中に１０倍希 釈した。フィルターは０．１ｘＳＳＣを使って６５°Ｃで洗った。

連結プログラム　２ポイントおよび多重ポイント計算のために、連結プログラム を用いた（４３．４４）。

正常な家族はパリのｔｈｅ　Ｃｅｎｔｒｅ　Ｄ’Ｅｔｕｄｅ　ｄｕ　Ｐｏｌｙｍ ｏｒｐｈｉｓｍｅ　Ｈｕｍａｉｎ　（Ｃ，Ｅ、Ｐ、Ｈ，）から得られた。

プローブ　本発明者らはプローブの入手に対して次の人々に感謝する：５ｔ１４ 　（ＤＸＳ５２）（１７）および５５Ｅ　（ＤＸＳ１０５）（４５）については Ｊ−ＬＭａｎｄｅｌ博士、Ｒ８（４６）についてはＪ、　Ｇｉｔｓｃｈｉｅｒ博 士、７６７　（ＤＸＳ１１５）（４５）についてはＰｅａｒｓｏｎ教授、および ４Ｄ８（４７）についてはＲ９Ｎｕｓｓｂａｕｍ博士。

パルスフィールドゲル電気泳動　これは以前に記載されたように六角形配置の電 極を使って実施した（３３゜４８）。アガロースブロック中でのＤＮＡの酵素消 化は製造者の説明書に従って行い、Ｋｅｎｗｒｉｃｋら（４９）に詳述されてい る。

ＩＡＩの単離および位置推定 唯一のヒト成分としてＸ染色体を含有する体細胞ハイブリッド細胞系から構築さ れたライブラリーを、ヒ）ＤＮＡ配列を含有するコスミドを選択するために、全 ヒトＤＮＡを使って低密度でスクリーニングした。

フラジルサイトの周囲のＤＮＡ配列マツピングはＸ；１６転座をもつ細胞系由来 の２つのハイブリッドを含有する体細胞ハイブリッドパネルを使って位置推定し た。一方のハイブリッドは誘導Ｘ染色体を含有し、他方は誘導染色体１６を含有 していた。標識したコスミドを全ヒト競合ＤＮＡの存在下でプロットとハイブリ ダイズさせた（方法を参照）が、試験したあらゆるコスミドに関して恐らく高レ ベルの反復配列ゆえにシグナルが見られなかった。これらの条件下でうまくハイ ブリダイズした１つの配列ＩＡＩは、Ｘ　ｑ　２６−ｑｔｅｒへのその局在を示 すシグナルを生じた（図ＩＡ参照）。

トラック２および５に見られるパターンは完全に同一というわけではなく、この ことにより我々はＰｓｔＩＲＦＬＰの可能性の研究をすることとなった（以下参 照）。この配列かフラジルサイトから遠位にあるかまたは近位にあるかを確立す るために、コスミドＩＡＩの単一コピー断片をＸｑ２７−Ｘｑｔｅｒを含有する ハイブリッドＢ１７由来のＤＮＡとハイブリダイズさせた（方法を参照）。図Ｉ Ｂの結果から、この断片はこのハイブリッドＤＮＡで明確な陽性シグナルを生ず ることが分かり、このことはＢ１７　ＤＮＡで陰性シグナルを生ずる遺伝子座Ｄ Ｘ３９８の遠位にＩＡＩが存在することを示している。

ＩＡＩの遺伝子地図作成 ＩＡＩコスミドから単一コビーＰｓｔＩ断片を取り出し、種々の異なる制限酵素 で消化した正常個体からのＤＮＡに対してハイブリダイズさせた。ＩＡｌ、１と 名づけた１つの特定の断片は試験した白色人種集団においてＰｓｔｌ制限断片長 多型性（ＲＦＬＰ）を示した。対立遺伝子（５，２ｋｂのバンドまたは２．９お よび２．３ｋｂでの２本のバンド）を図２に示す。

試験した女性の３５％はＩＡＩ位置でヘテロ接合性であった。

本発明者らが以前にＸｑ２６−ｑｔｅｒ領域における他のマーカーを使って分類 したＣ、　Ｅ、　Ｐ、　Ｈ、パネルからの正常ＤＮＡをＩＡＩ多型注型性いて分 類した。２ポイントロツドスコアが表１に示しである。

（本頁以下余白） 多重ポイント分析は、最もありそうな順位のうちで、順位Ｘｃｅｎ−ＤＸＳ１０ ５−ＩＡＩ−ＤＸＳ５２−Ｆ２Ｏ−ＤＸＳＩ　ｌ　５−ＸｑｔｅｒがＤＸＳ１０ ５−ＤＸＳＩ　１５−Ｆ２Ｏ−ＤＸ５２−ＩＡＩ−Ｘｑｔｅｒの２倍ありそうで あることを示唆している。ＲＦＬＰが一家族で情報を得られたにすぎなかったの で、ＤＸＳ９８について有意義なデータは得られなかった。

また、ＩＡＩをフラジルＸ家族に対しても試験した。

２ポイントロツドスコアを表１に示す。この家族および他の家族のデータは、フ ラジルサイトから遠位にあるがＤＸＳ５２には近位にあるＩＡＩの位置推定が一 致している（位置スコアｘｘｘｘ）。

パルスフィールドゲル電気泳動実験 パルスフィールドゲル電気泳動実験は、分子量範囲８００−２０００ｋｂのバン ドを分離できるような方法で記載の通りに行った。得られた結果の例を図３に示 す。ＩＡＩはヒト精子ＤＮＡのＮｒｕＩ消化物中の１．２メガベース（Ｍｂ）の バンドを識別する（図３）。

このＩＡＩ断片はＦ８およびＤＸＳ５２並びに色盲（ＣＢ）のようなこの領域の マーカーについて以前に報告されたものと相違している（２９．３ｌ−３３）。

ＩＡＩに関する特異な発見は、異なる個体のＮｏｔＩ消化後に観察されるバンド サイズの変動である（図４Ａ）。これは、Ｆ８にハイブリダイズした同じプロッ トが全ての個体において同じ分子量バンドを生ずるので、ゲルの人工産物ではな い（図４Ｂ）。このパターンはまたゲル間で再現性がある。同一個体からの精子 およびリンパ球ＤＮＡのサンプルは同一のバンドパターンを生ずる（データは示 さず）。遺伝子解析においてはフラジルサイトにＩＡＩが近接していることを考 慮して、本発明者らはフラジルＸ陽性の男性および女性におけるＩＡＩ　Ｎｏｔ Ｉパターンも研究した（図４Ａのトラック１．３および５、図４Ｃのトラック１ および２）。正常な個体ばかりでなく、血縁関係のないフラジルＸ陽性の男性に おいても変動が観察される。Ｎ０ｔｌ消化後、ＩＡＩは約０．８５Ｍｂ、１．２ Ｍｂおよび１．４Ｍｂの３つの異なるバンドのすべてを検出する。２本のバンド が往々にして男性にも女性にも見られ、このことはこのパターンが断片長条型性 によって生ずるのではなく、むしろ制限酵素部位の可変的なメチル化によって生 ずることを示唆している。

また、ＩＡＩにハイブリダイズさせたヒトＤＮＡのＭｌｕＩ消化物も可変的なパ ターンを示し、このパターンはフラジルＸ陰性および陽性の両方の個体に現れる （図５Ａ）。この実験では、本発明者らはまた、細胞の増殖状態がゲルパターン を変化させるかどうか調べるために、その増殖状態について検べた。図５Ａのト ラック５および６（それぞれ初期および後期対数期に細胞を収穫した）から分か るように、バンドパターンは同一である。

個体の５ａｃＩＩ消化物もＩＡＩにハイブリダイズさせた場合に数本のバンドを 示す。しかしながら、この場合、観察されたバンドパターンは全てのサンプルに おいて類似している（図５Ｂ）。（わずかな見掛は上の変動は負荷人工産物のた めと考えられる）。

ＩＡＩによって検出された断片はどれも、この領域で以前に地図作成がなされた 遺伝子座に関して観察されたものと重複しない。例えば、ＩＡＩ、ＤＸＳ５２お よびＦ２Ｏに対するＮ０ｔＩ断片はそれぞれ１．　２Ｍｂ、１．０Ｍｂおよび１ ．８Ｍｂである。従って、ＩＡＩはＤＸＳ５２と物理的に別個の遺伝子座である 。

ＰＦＧＥバンドのどれも最も接近した近位マーカーＤＸＳ９８に関して観察され たバンドと重複しない（Ｂｅ１１　ａｎｄ　ＤａＶｉｅＳ、未発表の観察）。

考察 本発明者らは、ヒトＸ染色体の長腕の末端小粒領域の種々の部分を含有する体細 胞ハイブリッドを用いて、ＤＮＡ配列ＩＡＩを領域Ｘｑ２７−ｑｔｅｒに局在決 定した。従って、ＩＡＩはフラジルＸ症候群の分離（ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ　 ）分析のための有用な新しいマーカーであろう。Ｃ，Ｅ、　Ｐ、　Ｈ，家族での ＩＡＩの遺伝子解析は、ＩＡＩとＤＸＳ５２およびＦ２Ｏの両方（Ｘｑ２７゜３ のフラジルサイトに最も接近した遠位マーカー）との密接な連結を示している。

これらの正常家族におけるデータの多重ポイント分析は、ＩＡＩがＤＸＳ　５２ およびＦ２Ｏの近位に存在する順位支持している。ｌＡｌと、ＤＸＳ１０５　（ ５５Ｅ）のようなＸｑ２６／ｑ２７のマーカーとの間には、これらの家族のフラ ジルサイト領域を横断する密接な連結が観察されない。

フラジルＸ家族では、ＩＡＩとＤＸＳ５２間の密接な連結が再び観察される。マ ーカーの分離の多重ポイント分析は、ＩＡＩがＤＸＳ５２の近位に存在するとい う正常家族から示唆された順位を支持している。

集団での高頻度のＩＡＩ　ＲＦＬＰを考えると、ＩＡＩは近位側のＤＸＳ９８と 一緒になってフラジルＸ遺伝子座のための有用な側面マーカーである筈である。

また、この遺伝子座はＸ染色体性双極疾患、エメリー・ドレフユースジストロフ ィーおよび副腎ロイコジストロフィーのような、ＤＸＳ５２と密接に関連するこ とが分かっている他の症候群の研究にも有用であろう（文献１５参照）。

ＰＦＧＥを使った物理的地図作成実験は、ＩＡＩが以前に報じられた遺伝子座と 重複しないＸｑ２７の新しい領域を規定することを示している（２９．３ｌ−３ ４）。用いたプローブにより検出された最大断片から誘導されたＮｏｔＩ地図を 以下に要約する：ＦＲＡＸＡ　−ＩＪｌ−ＤＸＳ５２．　ＤｘＳ３３．　ＤＸ！ ；１５−　Ｇ６ＰＤ、　ＦＢ、　Ｄｘｓｌ１５−　ＸｑｔａｒＷｂ　ｌ−２１， ００，３０，！、、２色盲プローブにより検出された最大ＮｏｔＩ断片は３００ ｋｂより小さい（３２，５０）が、この遺伝子座は上に示した他の遺伝子座に対 して順位が規定されていない。

このように、ＩＡＩは物理的地図をかなり延長させる。ＩＭｂより大きいバンド が酵素Ｎｏｔ　Ｉ、ＮｒｕＩ、Ｍｌｕ！および５ａｃＩＩに関して観察されると いう事実にもかかわらず、重複する断片がＩ　Ａ、　１とＤＸＳ５２の間に見ら れない。ＩＡＩにより同定された最大Ｍ　１　ｕ　Ｉバンドは、最も接近した隣 接遺伝子座ＤＸＳ５２（ヒトＤＮＡのＭｌｕｌ消化物中の約５５０ｋｂの部分消 化物バンドを検出する）と重複しない２Ｍｂにわたって広がっている（３１）。

図５Ａのフィルターと同じフィルターにハイブリダイズしたＤＸＳ５２はどの高 分子量バンドともハイブリダイズしない。

ＩＡＩによるＰＦＧＥ実験では常に多重バンドパターンか得られ、このことはＸ ｑ２７／２８のこの領域での個体間の可変的なメチル化度を示している。これら のバンドパターンは各個体のＤＮＡサンプルにおいて再現性がある。ＤＮＡを５ ａｃＩＩで消化した後のプロット中に数本のバンドが得られたということは特に 注目に値する。本発明者らの経験では、多くの５ａｃＩＩ部位はＨＴＦ島中の非 メチル化ＣｐＧジヌクレオチドと関係があるという観察と一致して、この酵素は 試験したこの領域の他の全ての遺伝子座の付近においてほぼ完全な消化を常にも たらしている（５１）。

ＩＡＩは認識部位中にＣｐＧをもつ数種の酵素に対して大きい断片（１メガベー スまたはそれ以上）を生ずる。それ故に、ＩＡＩはＦ２Ｏ，Ｇ６ＰＤおよびＤＸ Ｓ５２と比べて相対的にＣｐＧリッチでない領域に存在する。ゲノム構造に関す るこの観察の生物学的意義はまだ解明されないでいる。近年、ＧＣリッチ領域は Ａｉｕ配列を含有する可染色Ｇバンドと関連があることが示されており（５２） 、ＩＡＩは暗染色バンドＸｑ２７内に存在するのかもしれない。他方では、ＩＡ ＩはＸｑ２８内の異なる機能を有する領域を規定するのかもしれない。この疑問 を解くためには、更なる物理的地図作成が必要とされよう。

Ｍｌｕ！およびＮｏｔＩの場合に見られたサイズの変動は数百ｋｂの準位であり 、断片長条型性と一致しない。Ｍ　１　ｕ　Ｉ消化物において比較的小さいバン ドを生ずる個体はＮｏｔＩ消化物で最小のバンドを必ずしも生じず、その逆も言 える。いくつかのＮｏｔｌ消化男性および女性ＤＮＡサンプルでは、主要ハイブ リッド形成バンドのほかに、弱いバンドが可視化できよう。

それゆえこのパターンはＸｑ２７／２８のこの領域でのＣｐＧ部位の異なるメチ ル化のためであると思われる。Ｌａ１ｒｄ　（５３）はフラジルＸ症候群で観察 される分離パターンを説明するためにインプリンティング理論（ｉｍｐｒｉｎｔ ｉｎｇ　ｔｈｅｏｒｙ　）を最近提案し、メチル化がこのインプリンティングが 達成されうる１つの手段でありうることを示唆した。ここに記載された実験は、 活性Ｘ染色体メチル化パターンを保持していないがもじれないＥＢＶ系において 行われた。現在、本発明者らは、いずれにしてもフラジルＸ症候群の表現型発現 およびＸｑ２７．３でのフラジルサイトの細胞遺伝学的発現にＩＡＩメチル化多 化性型性係しているがどうか調べるために、パルスフィールドゲル実験に適する フラジルＸ患者のリンパ球由来のＤＮＡサンプルを収集している。

説明と実施例１のための文献 工、　τｕｒｎ＠ｒ、Ｇ＋、Ｄａｎ工・１．入、＆　Ｆｒｏｓｔ、Ｍ、（１９８ ０）コ、Ｐａｄ工ａｔ−９６，Ｂ５７−２−　τｕｒｎ＠ｒ、Ｇ、＆　０ｐｉｔ ｚ、Ｊ、Ｍ、（１９５１０）Ａａ、コ、Ｍａｄ、Ｇｓｎ−ｔ、７，４０７−４１ ５＋ ３＋　Ｐ＠ｍｂｒ＠ｙ、Ｍ、に、、Ｗｉｎｔ＠ｒ、１．Ｍ、＆　Ｄｅｗｉ・ｇ、 Ｉｃ、に−（１９８６）　テｒ働ｎａ。

ｉｎ　Ｇ＊ｎ＠ｔ、　９．５５１−６２．　。

４＋　Ｌｕｂｓ、Ｍ、入＋　（１９６９）　入ｍ、コ、Ｈｕｍ、Ｇａｎ＊ｔ、２ １，２３１−２４４゜５−　５ｕｔｈａｒ！ａｒｏ！、Ｇ、Ｒ＋　（１９７９） 人肌　コ＋　Ｈｕｍ、Ｇａｎｅｔ−３！、１２５−１３５゜Ｌ　Ｗａｂｂ、τ、 Ｐ−、！１ｕｎｄ＠ｙ、Ｓ、Ｌ、τｈａｋｓ、入、工、６　テｏｄｄ、Ｓ、（１ ９８６）Ａｍ、　Ｊ＋Ｍａｄ、　Ｇａｎａｔ、　２３．５７３−５８０゜７、　 Ｋａｈｋｏｎ＊ｎ、Ｍ、、入１１ｔａｌｏ、τ、、＾工ｒａｋｓｉｎ＊ｎ、！、 、Ｍａｔｉユａ工ｎｏｎ、Ｆｌ、。

Ｌａｕｎｉａｌｇ、）Ｃ，、入ｕｔ工ｏ、Ｓ、＆　Ｌｍ工ｇｔｉ、コ、（１９８ ７）Ｈｕｍ、Ｇａｎｓｔ、７７゜ａ＋　Ｊ＠ｎｋｉｎ＊、Ｌ　Ｃ，、！１ｒｏｖ ｎ、Ｗ、丁−、Ｂｒｏｏｋｓ、Ｊ、、Ｄｕｎｅａｎ、Ｃ，３，。

Ｒｕｄｅ工ｌｉ、Ｒ＋　Ｄ＋＆　Ｗｉｇｎｉｅｗｓｋｉ、Ｈ，Ｍ、（１９８４） λｍ、Ｊ、Ｍａｄ、Ｇａｎ＊ｔ。

１７、２１５−２３９゜ ９＋　テｏｍｍ＠ｒｕｐ、Ｎ＋、５ｏｎｄ＠ｒｇａａｒｄ、Ｆ、、ＴＯ！’ｕ’ ｌ＠ｊ＠！’ｌ、τ、、）Ｃｒ工ｍｔａｎｓａｎ、Ｍ、。

Ｍ＠（！、　Ｇ＠ｎｅｔ−２３，５３１−５３５゜ユ１．Ｓｈ＠ｒｍａｎ、Ｓ、 Ｌ、＃　コａｃｏｂ＊、Ｐ、Ａ、、Ｍｏｒｔｏｎ、Ｎ、！、、Ｆｒｏｇｔ＊ｒ− ヱｍｋ＠ｎ工ｕｓｉ、υ、、Ｈｏｖａｒｄ−Ｐ＊ａｂ！ａｍ、Ｐ、Ｎ、、Ｎ工・ ヱｍｏｔｈ、Ｋ、１．。

Ｐａｒｔｉｎｇｔｏｎ、　Ｍ、Ｗ、ｐ　５ｕｔｈｓｒｌａｎｃｉ、Ｇ、！！−， テｕｒｎ＠ｒ、Ｇ−、Ｗａｔｓｏｎ、Ｍ。

（１９１５）Ｈｕ＋ｎ、Ｇ＠ｎ＠ｔ、６９，２１ｉ１９−２９９Ｆｒｏｓｔ＠ｒ −工ｓｋ＠ｎ１ｕｓ、υ、、５ｃｈｕ工ｚ＠、Ａ、＆　Ｓｃｈｗｉｎｇｅｒ、Ｅ 、（１９８５）Ｈｕｍ。

Ｇａｎ＠ｔ−６７，４１９−４２７＋ ！３．Ｆｒｏｓｔ＠ｒ−工ｓｋ＊ｒＩＬｕｓ、υ、、ＭｃＧエエ１ｉｖｒａｙ、 Ｂ、Ｃ，、Ｄｉｌｌ、Ｆ−３，、Ｈａｌｌ。

３．０−、！　Ｆｎｒｂｓｔ　Ｄ−５，（＋９１１６）入！ｌｌ＋　Ｊ、Ｍ＠（ ！、Ｇ＠ｎ＠ｔ−２３，６Ｌ９−６３１゜Ｘ４．Ａｒｖｓｉｌ＊ｒ、Ｂ、、Ｏｂ ＠ｒ工ｅ、Ｘ、、Ｖｉｎｅａｎｔ、λ、、Ｈｏｔｋ＊ｒ、Ｍ、、Ｐ＊ａｒｓｏｎ 。

Ｐ、＆　Ｍａｎｄｅ工、３．−Ｌ、（１９１ｉ＋８）　λｍ、コ−Ｈｕｍ、Ｇｓ ｎ＊ｔ、、４２，３８０−３８９゜１５＋Ｄａｖｉｅｓ、に、ｉ：、、Ｈａｒｄ ｅｎ、コ、Ｌ、、Ｗｅ工５ｓａｎｂａｃｈ、コ、＆Ｆａ工１ｏｕｇ、Ｍ。

（１９８１３）Ｃｙｔｏｇ＊ｎ＠ｔ−Ｃｍ工ｌ　Ｇ＠ｒｎｔ＋４６．フック−３ １５゜ユ６．Ｈ＊１１１ｇ、Ｒ，、Ｏｂ＊ｒｌ＠、工９．入ｒｖ・工１＊ｒ、Ｂ 、、Ｈａｎａｕｓｒ、＾−、Ｖｉｖａｕｄ、Ｍ。

＆　Ｍａｎｃｉ＊工、Ｊ、Ｌ、（１９８８）入ｍ、３．Ｍ＠（！、Ｇ＠ｎｅｔ− ，工ｎ　ｐＨ拳１１！。

ニア、０ｂａｒｌ＠、工、、Ｈ＠エエエｇ、Ｒ，、Ｍａ工ｍａｎ、Ｓ、Ｐ、、Ｋ ｌｏ＊ｐｆ＊ｒ、Ｃ０，Ｍａｔｔｅ工。

Ｍ、Ｇ、、Ｍａｔｔ＊ｉ、３．Ｆ、、Ｂｏｕ・、コ、、Ｆｒｏｓｔ＠ｒ−工５ｋ ｉｎ工ｕｓ、υ、、Ｊａｃｏｂｓ。

Ｐ、　＾、、！、ａｔｈｒｏｐ、Ｇ、Ｍ、、Ｌａ１ｏｕ偕１．　Ｊ、Ｍ、＆　Ｈ ａｒｄｅｎ、−コ、Ｌ　（１９１３６）ｐｒｏｃ、Ｎａｔユ、Ａｃａｄ、Ｓｃｌ 　υＳ大入。３，１０工５−１０２０゜１８、Ｂｒｏｗｎ、Ｗ、τ、、　Ｗｕ、 Ｙ、、Ｇｒｏｓｓ、＾−Ｃ，、Ｃｈａｎ、Ｃ，Ｂ、、Ｄｏｂｋ工ｎ、Ｃ。

Ｓ、＆　Ｊ＠ｎｋ４ｎｇ、Ｅ、Ｃ，＋１９８７）Ｌａｎｃｅｔ　工２８０゜１９ 、τｈＬｂｏｄ＠ａｕ、Ｓ、Ｎ、、Ｄｏｒｋｉｎｉ、Ｍ、Ｒ，、Ｆａｕ！に、Ｌ 　Ｒ，、Ｂｅｒｒｙ、Ｒ，。

Ｓｍ１ｔｈ、入＋　Ｃ，Ｍ、、Ｈａｇ＊ｒｍａｎ、Ｒ，、に工ｎｇ、＾、＆　Ｄ ａｖｉｅｓ、に、！、（１９８８）Ｈｕ＋ｎ、Ｇ＠ｎｅｔ、７９，２１９−２２ ７゜２０、ＭｕＬＬ＊ｙ、５．５丁ｕｒｎ＠ｒ、Ｇ、、Ｂａｒｎ、Ｓ、＆　Ｓｕ ’ｔｈ−ｒ工ａｎｄ、Ｇ、Ｒ，（１９８８）講二、コ、Ｈｕｍ−Ｇ＠ｎｅｔ、３ ０．　５６７−５８０゜２工、Ｖ＠＠ｎａｍａ、！＋、Ｃａ１ｒｐ＊ｎｔ＠ｒ、 Ｎ、コ、、Ｂａｋｋ＊ｒ、）：、、ＨＯｆｋ＠ｒ、Ｍ、Ｈ，。

Ｍｉｎ工ｉｎｇｔｏｎ　Ｗａｒｄ、Ａ、＆　Ｐ＠ａｒｇｏｎ、Ｐ、Ｌ　（１９８ ７）Ｊ、Ｍａｄ、Ｇｓｎ＊ｔ。

２４．４１３−４２１゜ ２２、Ｂｒｏｗｎ、Ｗ−７，、Ｇｒｏｓｓ、入、、Ｃｈａｎ、Ｃ，、Ｊｔｎ）ｃ Ｌｎｓｔ、Ｌ　Ｃ，、Ｍａｎｄ＊工。

Ｊ、Ｌ、Ｏｂ＠ｒ４＊、工＋、入ｒｖ＠ｉｌ＊ｒ、Ｂ、、Ｎｏｖｓエエエ、Ｇ、 、τｈｉｂｏｄ＊ａｕ、Ｓ、。

Ｈａｇ＊ｘｒｎａｎ、ＩＮ−、Ｓｕｍｍｅｒｓ、に、、丁ｕｒｎ＊ｒ、Ｇ−、Ｗ ｈ工ｔｏ、ｌ−Ｎ−。

Ｍｕ１工Ｌｇａｒｓ、Ｔａ、、Ｆｏｓｉｔａｒ−Ｇよりｇｏｎ、Ｃ，、Ｍａｉｄ ｅｎ、Ｊ、Ｊ、入−、Ｚｏｌｌ、Ｂ、。

ＫｒａｗｅｚａＪ＜、Ｍ、、Ｇｏｏｎａｗａｒｄ＊ｎａ、Ｐ、、Ｇｕｓｔａｖｓ ｏｎ、に、Ｈ−、Ｐ＊ｔｔｓｒｓｓｏｎ。

υ−、Ｈｏ１ｍｇｒｓｎ、Ｇ−，５ｃｂｖａｒｔｚ、Ｃ，，１！ｏｗａｒｄ−Ｐ ａｅｂＬａｓ、Ｐ−Ｎ、。

（Ｌ９８８）ｆ！ｕＩ！Ｉ＋Ｇ＠ｎ・ｔ−７ｇ、２ＯＬ−２０５−２３、Ｐａｔ ｔｅｒｓｏｎ、Ｍ−、ｍｅ工り、Ｍ、、Ｋｒ＊ｍ＊、Ｗ、、Ｄａｖｉｅｓ、に− Ｅ−＆　Ｆｒｏｓｔｅｒ−工ｓｋ＊ｎ１ｕｓ、υ、（１９８８ｍ）　λｍ、Ｊ、 Ｈｕｍ−Ｇ１１ｔ−、ｉｎ　ｐｒｅｓｓ。

２４−　Ｍｕ１工ｉｇａｎ、Ｔａ−Ｍ−、Ｇｒｏｖ＠ｒ、Ｈ，Ｊ、、Ｂ！ａｎｃ ｈａｔｔｓ、ｖ＋　ｓ−、Ｇｉｌ＠ｓ、入。

Ｒ，、Ｌｊ、ｌ工１ｃｒａｐ、Ｄ、Ｐ、、Ｐｈ工１工ｐｓ、Ａ、、Ｈａｒｄｅｎ 、Ｊ、Ｊ、入、、ｗｈ工ｔｅ。

３％、Ｎ、（１９１３７）入ｍ、コ、Ｍａｄ、Ｇ＠ｎ＠ｔ、２６，７５１−７６ ０−２５、Ｄｒａｙｎａ、Ｄ−、Ｖｈｉ七ｍ、Ｒ，（１９１３５）Ｓｃｉａｎｃ ＊、２３０．　７５３−７５８−２Ｌ　Ｃａｒｐ＠ｎｔｅｒ、Ｎ＋　コ＋、Ｂａ ｋｋ＠ｒ　Ｅ＋、Ｄｒｓｓｓ＊ｎ　Ｓ、Ｃ−Ｆ、Ｍ、、Ｂｒｏｃｋａｒ−Ｖｒｉ ｓｎｂ、入＋　Ｈ，Ｊ、Ｔ、、Ｖｓｓｒｘ＊ｍａ、Ｈ，、Ｂｒｉ＊ｔ、！、、Ｐ ＊ａｒｇｏｎ、Ｐ−Ｌ。

（１９８７）Ｃｙｔｏｇ＠ｎｅｔ、Ｃ＠ｌｌ　Ｇａｎ＠ｔ−４６，５９０゜２７ 、　？ａｎｔｒａｖａｈｉ、υ、、　Ｍｕｒｔｙ、　Ｖ−Ｖ、　Ｖ、、　Ｊｈａ ｎｗａｒ、　Ｓ、　Ｃ，、τｏｏＬ＊、　Ｊ。

Ｊ、ｐ　Ｗｏｏｚ＠ｙ、Ｊ、Ｍ、、Ｃｈａｇａｎｔｉ、Ｒ−Ｓ、に、、ａｎｄ　 Ｌａｔｔ＝、Ｓ−人−（１９８６）Ｃｙｔｏｇ＠ｎｅｔ−ｅｅｌ工　Ｇａｎ５ｔ 、４２，７５−７９゜２１３、　Ｋｎｏ＠ｒｇ、　Ｎ、、　ｖａｎ　ｄ＠ｒ　Ｈ ｅｈｙｅｌ＊ｎ、　Ｉｌ、、　ｖａｎ　０ｏｓｔ、　Ｂ−Ａ、、　Ｒｏｐ＊ｒｓ 、@Ｈ− Ｈ，、Ｍｏｎｎ５ｎ４　Ｌ、ａｎｄＷ工１ｉｏＩＩＩｓ、　Ｊ、　（１９８Ｂ） ）ｆｕｒｎ、Ｇｓｎ＊ｔ、Ｂｏ、３１−３８゜ ２９、Ｂａ１工、　Ｍ、　Ｖ、、　Ｐａｔｔ＠ｒｓｏｎ、　Ｍ、　Ｎ−、Ｄｏｒ ｋｉｎ４１１．　Ｒ−、Ｄａｖｉｓｓ、　Ｋ、　！。

（工９８１３）Ｈｕｍ、Ｇ＠ｎｅｔ、工ｎ　ｐｒ＠！ｌ！−コＯ−Ｂｒｏｗｎ、 　Ｗ−Ｔ、　Ｒｕｃｉ＊１１１．　Ｒ＋Ｄ、、　ａｎｄ　Ｗｉｇｎｉｅｗｓｋｉ 、　Ｈ，Ｍ、　（１９８８）　Ａｍ。

コ、Ｍａｄ−Ｇ＠ｎ＊ｔ、３０，２０Ｌ−２０７−３Ｌ　Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ、 　Ｍ、、　Ｋｓｎｗｒ土ｃｋ、　Ｓ、、τｈｉｂｏｄ＊ａｕ、　Ｓ、、　Ｆａｕ ｌｋ、に、。

Ｍａｔｔ＠丈、　Ｍ＋Ｇ、、　Ｍａｔｔ＠ｉ、　Ｊ、　Ｆ−＆　Ｄａｖｉｅｓ、 に、！、（１９１３７ａ）Ｎｕｃｌ−ＡｓＬ６．Ｒ＠！ｌ−１５，２６３９−２ ６５１゜４　、Ｐａｔｔ＊ｒｓｏｎ、Ｍ−、Ｓｃｈｗａｒｔｚ、Ｃ，、＋３ｓＬ 工、Ｍ−、Ｓａｕ＊ｒ、Ｓ、、Ｈｏｆｋ・ｒ、Ｍ、。

τｒＩＬｓｋ、Ｂ−、ｖａｎ　ｄｅｎ　Ｅｎｇｈ、Ｇ、＆　Ｄａｖｉａｓ、に、 Ｅ−（工９８７ｂ）ＧａｎｏｍＩＣ３゜工、２９７−３０６゜ ３３−　Ｐａｔｔ＠ｒｓｏｎ、Ｍ−、Ｂａｈ工ｉ、Ｍ、、Ｓｃｈｗａｒｔｚ、Ｃ ，ａｎｄ　Ｄａｖｉａｓ、に、（１９８８ｂ）Ａｍ、Ｊ−Ｍｏａ−Ｇａｍｕｔ− ，３０，５８１−５９１゜３４゜Ｐａｔｔ＊ｒｓｏｎ、Ｍ、、Ｇｉｔｓｃｈ土ｔ ｒ、Ｊ、、Ｂｌｏｏｍｆ工ｓａｄ、Ｊ、、Ｂｅ１ｌ、Ｍ、。

Ｄａｒｋシ１１Ｌ、Ｆｒｏｓｔａｒ−工５ｋｓｎ土ｕｓ、υ、、Ｓｏｍｍｓｒ、 Ｓ−，５ｏｂｅｌＬ、Ｊ−。

５ｅｈａｉｄ、Ｄ、、丁ｈｉｂｏｄ＠ａｕ、Ｌ　＆　Ｄａｖｉａｓ、に−Ｅ、（ Ｌ９１ｉ１８）Ｓｕｂｍｉｔｔ＊ｃｌｆｏｒ　ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ。

３５、Ｖｉｓａｉｎｇ、Ｌ、Ｇｒｏｇｖ＊１４　Ｆ、、ＳｏＬｏｍｏｎ、Ｅ、、 Ｍｏｏｒ：＊、Ｇ−、Ｌａｎｃｈ、Ｎ、。

Ｓｈ＠ｎｎａｎ、Ｎ−＆　ＷｉｎＡｎｎｍｓｏｎ、Ｒ，（１９８７）Ｎｕｃｌ、 入Ｃ土ｄ−Ｒｅｓ、１５゜Ｌ３６３Ｊ３７５．。

３６−　Ｗｉｅａｃｋ＊ｒ、Ｐ、、Ｄａｖｉａｓ、に、Ｅ、、Ｃｏｏｋｅ、Ｈ， Ｊ、、Ｐｅａｒｇｏｎ、Ｐ、Ｔａ、。

Ｗｉエエｉａｍｓｏｎ、Ｒ−、Ｂｈａｔｔａａｈａｒｙａ、Ｓ、、Ｚｉｍｍｓｒ 、、Ｊ、ａｎ！　Ｒｏｐｐｅｒｓ、Ｈ，−Ｌ、（１９８４）　入ｍ＋　コ＋　Ｈ ｕｍ＋　Ｇ＊ｎａｔ＋　３５，２６５−２７６゜３７、Ｃａｎ工ａｎ、ｏ、Ｆ、 （１９８６）Ａｎｎ−Ｇ＠ｎ＠ｔ。２９，２３５−２３９゜３Ｂ−Ｗｉａｒｉｎ ｇａ、Ｂ＋、Ｂｒｕｎｎ＊ｒ、！、、Ｈｕｂ＊ｂｏｓ、Ｔ、、５ｃｈｏｎ３ｃ、 Ｄ−、Ｒｏｐｅｒｓ。

Ｈ−Ｌ　（１９ｇｇ）　入ｃ！ｖ、Ｎｅｕｒｏｎ。４Ｂ、４７−６９゜３９．５ ｏｕｔｈｅｒｎ、Ｅ−Ｍ＋　（１９７５）Ｓ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ＋　９８，５０ ３−５１７−４０、Ｄａｖｉｅｓ、に−Ｅ、、Ｐｅａｒｇｏｎ、Ｐ、Ｌ、Ｈａｒ ｐｅｒ、Ｐ−Ｓ、、Ｍｕｒｒａｙ、　Ｊ−Ｍ、。

０’Ｂｒｉ、ａｎ、Ｔ、、５ａｒｆａｒａｚｉ、　Ｍ−ｆａ　ＷｉｎＡｎｎｍｓ ｏｎ、Ｒ−（１９１３３）Ｎｕｃｌ。

Ａｃ１−ｄ、Ｒ＠ｓ、ｌ工、２３０３−２３１．２゜４Ｌ　Ｆｓｉｎｂ＠ｒｇ、 八、Ｐ−＆　Ｖｏｇｅｌｓｔ＠ｉｎ、Ｂ、（１９８３）Ａｎａｌ、ＢＬｏｃｈ＊ ｒｎ−１３２゜６−４３゜ ４２−　Ｒｌｇｂｙ、Ｐ、ｊ、Ｗ、、Ｄｉｅｃｋｍａｎｎ、Ｍ−、Ｒｈｏｄａｓ ＋、Ｃ−＆　Ｂｓｒｇ−Ｐ、（１９７７）Ｊ−Ｍｏ１−　Ｂｉｏニー　１１３， ２３７−２５１゜４３−　Ｌａｔｈｒｏｐ、Ｇ、Ｍ−、Ｌａ１ｏｕａＬ、Ｊ、Ｍ 、、Ｊｕｌ工ｏｒ、Ｃ−＆　Ｏｔｔ、、７−　（１９８５）ｋｎ−Ｊ、　Ｈｕａ ＋−Ｇ＠ｎｅｔ−３７，４８２−４９８゜４４、Ｌａｔｈｒｏｐ、ｃ、Ｍ−＆　 ｃａ工□ｕａＬ、コ、Ｍ、＜１９８４）　入−Ｊ−Ｍｕｍ−Ｇａｍｕｔ、３６゜ ４６０−４６５゜ ４５．１ｌｏｆｋｓｒ、Ｍ−Ｈ，、Ｗａｐ＊ｎａａｒ、Ｍ−Ｃ，、Ｇｏｏｒ、Ｎ −、Ｂａｋｋａｒ、！、、ＶａｎＯａｍｙ、Ｇ−Ｊ、！！、＆　Ｐｅａｒｇｏｎ 、Ｐ、Ｘａ−（１９８５）Ｈｕｍ、Ｇ働ｒｗｅｔ−７０，１４８−１５６＋ ４ｇ、Ｇｉｔｓａｈｉａｒ、コ−，Ｄｒａｙｎａ、Ｄ、、τｕ！ｄａｎｈａｍ、 Ｅ、Ｇ、Ｄ−，Ｗｈａｔ’ｓ、ＩＲ，Ｌａ　Ｌａｗｎ、Ｒ−Ｍ、（工９ａ５ｂ） Ｎａｔｕｒｅ　３１４，７３８−７４０゜４フ、Ｂｏｇｇｓ、１Ｂ−人、＆　Ｎ ｕｓｓｂａｕｍ、１．Ｌ、（１９８４）Ｍｏ１．Ｃｅ１１．Ｍｏ１．Ｇａｍｕｔ −エロ：６０７−６ｉ３ ４Ｌ　Ｃｈｕ、Ｇ、、Ｖｏｌｌｒａｔｈ、Ｄ＋＆　Ｄａｖｉｔ、Ｒ，ｗ、（１９ １０１）Ｓｃｉａｎｅｅ　２３４゜１５８２−Ｌ５８５゜ ４９、）Ｃ＠ｎｗｒｉｅｋ、Ｓ、、’　ＰａｔｔｓｒＪｏｎ、Ｍ、Ｎ１，５ｐｅ ａｒ、Ａ、、Ｆｉｓｃｈｂ＊ｃｋ、に、ＥＤａｖｉｅｓ、　に、！、（１９８７ ）Ｃａｌｌ　４Ｂ、３５！−３５７゜５０、Ｖｏｌｌｒａｔｈ、Ｄ、、Ｎａｔｈ ａｎｓ、Ｊ、、Ｄａｖｉｓｉ、Ｒ，Ｗ、（１９８８）Ｓｃｉａｎｅｅ　２４０゜ 工６６９−１６７２゜ ５Ｌ　Ｂｉｒｄ、入−Ｐ、Ｑ９１３５）Ｎａｔｕｒｅ　３２１，２０９−２１３ ゜５２＋　）Ｃｏｒ＠ｎｂ＠ｒｇ、Ｊ、Ｒ，ｙＡ　Ｒｙｋｏｗｓｋｉ、Ｍ、Ｃ， （１９−ａＥＩ）Ｃａ１．Ｌ　５３，３９Ｌ−４００−５３゜Ｌａ１ｒｄ、Ｃ， Ｄ、（１９８７）Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　１１７，５８７−５９９−ｂ Ｍｂ ＡＩ ＩＡＩ Ｍｂｌ　２　３　４　Ｉ５　６ ０　Ｆ８ Ｍｂ 国際調査報告 ＋＃ＩｍＡＭ　Ｍｅ、　ＰＣＴ／ＧＲ％７６１３Ｑ３に＋、ｆｖ＋ｗａ、１ｍ＋ ＾６ｍＨｂ１Ｍ　Ｎ＠、ＰＣＴ／田８９１０１３０３国際調査報告 ρＣＴ／ＧＢ　８９１０１３０３

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．領域Ｘｑ２７．３−ＤＸＳ５２でヒトＸ染色体と選択的にハイブリダイズし うる核酸断片。
2. ２．高緊縮条件下でハイブリダイズしうる、請求項１記載の断片。
3. ３．請求項１または請求項２に記載の二本鎖ＤＮＡ断片。
4. ４．１Ａ１遺伝子座でハイブリダイズする、請求項１−３のいずれか１項記載の 断片。
5. ５．請求項１−４のいずれか１項記載の断片およびそれに結合した検出可能な標 識を含んで成る核酸プローブ。
6. ６．標識が放射性標識、蛍光標識または酵素標識である、請求項５記載のプロー ブ。
7. ７．潜在的にフラジルＸ症候群または他のＸ染色体性疾患にかかる危険のある個 体からのＤＮＡを、請求項１−５のいずれか１項に記載の核酸断片またはプロー ブと適当なハイブリッド形成条件下で接触させることから成る、フラジルＸ癌候 群または他のＸ染色体性疾患の診断方法。
8. ８．フラジルＸ症候群を診断するための、請求項７記載の方法。
9. ９．Ｘ染色体性躁うつ病、Ｘ染色体性精神分裂病、Ｘ染色体性双極疾患（ｂｉｐ ｏｌａｒｉｌｌｎｅｓｓ）、エメリー・ドレフュース（ＥｍｅｒｙＤｒｅｉｆｕ ｓｓ）ジストロフィーまたは副腎ロイコジストロフィーを診断するための、請求 項７記載の方法。
10. １０．請求項１−６のいずれか１項記載の核酸断片またはプローブ、および１種 またはそれ以上の次の副成分：核酸断片を標識するための１種以上の試薬；患者 のＤＮＡを消化するための１種以上の制限酵素；消化を実施しかつ／またハイブ リダイゼーション担体または支持体上へ消化ＤＮＡを負荷するための１種以上の 緩衝液；ハイブリダイゼーションを実施するための担体または支持体；ハイブリ ダイゼーションフィルターを洗うための１種以上の緩衝液；低または高緊縮条件 下でハイブリダイゼーションを実施するための１種以上の緩衝液；先に定義した プローブを検出するための１種以上の試薬；ヒトＤＮＡのフラジルＸ陽性および 陰性サンプル並びにヒト以外のＤＮＡサンプルから選ばれた１種以上の対照試薬 ；および検出可能な標識からのシグナルを比較するための１種以上の標準品；を 含有するフラジルＸ症候群または他のＸ染色体性疾患の診断試験を実施するため のキット。
11. １１．請求項１−４のいずれか１項記載の核酸断片を１つまたはそれ以上含有す るクローニングまたは発現ベクターであって、該発現ベクターが適宜に正しい位 置、方向および読み枠で開始および終止シグナル、調節およびプロモーター配列 をさらに包含する、上記のクローニングまたは発現ベクター。
12. １２．請求項１１記載のクローニングまたは発現ベクターで形質転換された宿主 細胞。
13. １３．請求項１１記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養すること により得られたポリペプチドまたは蛋白。
14. １４．請求項１３記載のポリペプチドまたは蛋白に対するポリクローナルまたは モノクローナル抗体。
15. １５．請求項１４記載の抗体を分泌できる抗体産生細胞。