JPH04502257A - 菌類ストレス蛋白 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 菌類ストレス蛋白 発明の技術分野 本発明は菌類ストレス蛋白、対応するＤＮＡ配列、菌類ストレス蛋白のインヒビ ター、そしてこれらの医学及び診断における利用に関する。

発明の背景 環境のストレスは原核細胞や真核細胞の、いわゆる熱シヨツク蛋白（即ちストレ ス蛋白）の合成速度の増加を誘導することができる（例えばシュレジンガーら（ Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ、）纒、殺菌からヒトにおける熱シａ’７ り（ｒＨｅａｔ　５ｈｏｃｋ　ｆｒｏｍ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｏ　Ｍａｎ　Ｊ 　）　、コールドスプリングハーバ−研究所（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒ ｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）　、コールドスプリングハーバ−（ＣｏｌｄＳｐ ｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　）　、：、−ヨーク（１９７２年）を参照）。ストレ ス蛋白の機能はまだ最終的に解明されてはいないが、い（つかはある種の細胞蛋 白やウィルス蛋白の集合と構造の安定化に参加しており、これらが高濃度に存在 する場合は有害な条件に対して追加の安定化作用を育するかもしれないと報告さ れている。

多（の病原微生物がストレス蛋白を産生ずることが知られている（例えばディー ・ヤングら（Ｙｏｕｎｇ　Ｄ、、　ｅｔａｌ、　）　、プロシーディングズ　オ ブ　ナショナル　アカデミ−オブ　サイエンシーズ　オブ　ニーニスニー（Ｐｒ ｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）第８５巻、４２６７−４ ２７０頁（１９８８年）を参照）。これらの蛋白は感染のストレスに応答して、 侵入する病原物を防御するために産生されると考えられる。例えばストレス蛋白 を産生ずる能力が、マクロファージ内で病原殺菌が生存できることに関係してい る（エム・エフ・クリスマスら（Ｍ。

Ｆ、　Ｃｈｒｉｓｔｍａｓ　ｅｔ　ａｌ、　）　、セル（Ｃｅｌｌ）第４１巻、 ７５３−７６２頁（１９８５年）、アール・ダブリュー・モルガンら（Ｍｏｒｇ ａｎ、　Ｒ，Ｗ、　ｅｔ　ａｌ、）　、プロシーディングズ　オブ　ナショナル 　アカデミ−オブ　サイエンシーズ　才ブ　ニーニスニー（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ　）第８３巻、８０５９−８０６３頁（１９８６年））。

ヒトの種々の病原物においてストレス蛋白が存在することは、ストレス応答は感 染の１つの一般的な要素であり、ストレス蛋白はサブユニットワクチンの候補の １つであると考えられるべきであると示唆されている（ディー・ヤングら（Ｙｏ ｕｎｇ　Ｄ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、前述）。

カンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）は医学の面から ヒトに病原性の菌類の中で最も重要なものであ因の１つとしてますます増加して おり、死亡率は７０％を越える（ジェイ・ダブリュー・エム・ゴールド（Ｇｏｌ ｄ、　Ｊ、　Ｗ、Ｍ、　）　、アメリカン　ジャーナル　オブメディシン（Ａｍ 、、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　）第７６巻、４５８−４６３頁（１９８４年））；口部 カンジダ症はしばしば後天性免疫不全症の初期症状である（アール・ニス・フレ インら（に１ｅｉｎ、　Ｒ，Ｓ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、二、−イングランドジ ャーナル　オブ　メディシン（Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、）第３１１巻 、３５４−３５７頁（１９８４年））。カンジダ症は診断が難しく、一般的な治 療法ではそれ自身毒性が強いアンホテリシンＢを使用するため治療も簡単ではな い。従ってカンジダ感染症は、高感度の診断法と副作用の少ない治療法に対する ニーズが存在する。

全身性カンジダ症患者の血清中にいくつかのカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ　）抗原 が検出されている（アール・シー・マシューズら（Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｒ，Ｃ ，ｅｔ　ａｌ、　）　、ジャーナルオブ　クリニカル　マイクロバイオロジー（ Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　）第２５巻、２３０−２３７頁（１９８７年））。その １つは相対的分子量が約４７キルダルトン（Ｋｄ）のイミュノドミナント（ｉｍ ｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｔ　）な抗原であり、４カ所の別々のグループが報告して いる（アール・シーーｖシューズら（Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｒ，Ｃ，ｅｔ　ａｌ 、　）、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ）第ｉｆ巻、１４１５−１４１８頁（１９８ ４年）；ジェイ・ケー・オーヤングら（Ａｕ−Ｙｏｎｕｇ、　ＪＫ　ｅｔ　ａｌ 、）　、ディアグノ・マイクロビオル・イン７エクト・ディグ（Ｄｉａｇｎ、　 Ｍｊｃｒｏｂｉｏｌ、　ＩｎｆｅｃｔＤｉｓ、　）第３巻、４１９−４３２頁（ １９８５年）：ティー・ジェイ・ニールら（Ｎｅａｌｅ　Ｔ、Ｊ、　ｅｔ　ａｌ 、　）　、オースト・エン・ゼット・ジェイ・メッド（Ａｕｓｔ、　Ｎ、Ｚ、Ｊ 。

Ｍｅｄ、　）第１７巻、２０１−２０９頁（１９８７年）；及びアール・ビー・ フェレイラら（Ｆｅｒｒｅｉｒａ　Ｒ，Ｐ、　ｅｔａｌ、）、ジャーナル　オブ 　クリニカルマイクロバイオロジー（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 　）第２８巻、１０７５−１０７８頁（１９９０年））。この４７Ｋｄ抗原は、 ストロツクパインら（エン・ニー・ストロツクパインら（Ｓｔｒｏｃｋｂｉｎｅ 　Ｎ、Ａ、　ｅｔ　ａｌ、）　、イン７エクシシン　アンド　イミユニティ（Ｉ ｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、）第４３巻、７１５−７２１頁（１９８４年））の 報告している４８−５２Ｋｄ抗原とは以下の２つの理由で異なる：（１）４８− ５２Ｋｄ抗原に対して作成したモノクローナル抗体は１２０−１３５Ｋｄと３５ −８３Ｋｄの位置の抗原と交差反応する（エン・ニー・ストロツクパインら（Ｓ ｔｒｏｃｋｂｉｎｅ　Ｎ、Ａ、　ｅｔ　ａｌ、）　、イン７エクシヨン　アンド 　イミユニティ（Ｉｎｆｅｃｔ、　ｆｍｍｕｎ、）第４３巻、１゜１２−１０１ ８頁（１９８４年）；エイチ・アール・バックレイら（Ｂｕｃｋｌｅｙ　Ｈ，Ｒ ，ｅｔ　ａｌ、）　、米国特許第４６７０３８２号（１９８７年））、そして（ ２）４ｇ−５２Ｋｄ抗原がエノラーゼである（ダブりニー・ダブりニー・サブラ ネックとエイチ・アール・バックレイら（Ｓａｆｒａｎｅｋ　Ｗ、Ｗ、　ａｎｄ 　Ｂｕｃｋｌｅｙ　Ｈ，Ｒ，）　、カンジダとカンジダ症に関する第２回会ＩＩ 　（ＳｅｃａｎｄＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　Ｃａｎｄｉｄａ　ａｎｄ　Ｃａ ｎｄｉｄｉａｓｊｓ　）　、抄録Ａ７（１９９０年））。一方４７Ｋｄ抗原に対 する抗体は約９２Ｋｄで抗原に交差反応する（下記参照）。５４．３Ｋｄ　（４ ８，９から５９，７Ｋｄの範囲）のイミュノドミナント（ｉｍｍｕｎｏｄｏｔｎ ｉｎａｎｔ）なカンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ） 抗原がアール・ニー・グリーンフィールドとジエイ・エム・ジョーンズ（Ｇｒｅ ｅｎｆｉｅｌｄ　Ｒ，Ａ、ａｎｄ　Ｊｏｎｅｓ　Ｊ、Ｍ、）により報告されてい る（インフエクシ３ン　アンド　イミユニティ（Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、 ）第３４巻、４６９−４７７頁（１９８１年）。

発明の要約 われわれは現在４７Ｋｄ抗原をコードするＤＮＡ配列の一部をクローン化し発現 させることが可能であり、その過程で驚くべきことに、他の微生物の既知のスト レス蛋白、特にサツカロミセス　セレビッシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　 ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）の熱シヨツク蛋白ｈｓｐ９０（エフ・ダブリュー・ファ レリーとディー・ビー・フィンケルスタイン（Ｆａｒｒｅｌｌｙ　Ｆ、Ｗ、　ａ ｎｄ　ＦｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎＤ、Ｂ、）、ジャーナル　オブ　バイオロジカル 　ケミストリー（Ｊ、　Ｂｊｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）第２５９巻、５７４５−５７ ５１頁（１９８４年））と配列が非常によく似ているポリペプチド配列を見いだ した。サツカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　）では、９８％の相同性 のある蛋白をコードする２つの遺伝子（ｈｓｐ９０とｈ　ｓ　ｃ　９０）が存在 する（ディー・ビー・フィンケルスタインとエフ・、ダブりニー・ファレリー（ Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ　Ｄ、Ｂ、　ａｎｄＦａｒｒｅｌｌｙ　Ｆ、Ｗ、　）　 、フェト・ブロク（Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、）第４３巻、１４９９頁抄ｆｉ（１９ ８４年）。これらの遺伝子のいずれかが欠失しても細胞の生存に影響を与えない が、両方が欠失すると細胞は死亡する。別々の遺伝子が構成壓（ｃｏｎｓｔｉｔ ｕｔｉｖｅ　ｆｒｏｍ　）と誘導型（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ　ｆｏｒｍ）を産生ず る（ディー・フィンケルスタイン（Ｄ。

Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ　）　、リントクイスト・ニス・アン・レブ・バイオケ ム（Ｌｉｎｄｑｕｉｓｔ　Ｓ、　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）第 ５５巻、１１５１−１１９１頁（１９８６年）中の私信）。

われわれはカンジダ　アルビカンス （Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｊｃａｎｓ）のストレス蛋白即ち熱シヨツク蛋白ｈｓ ｐ９０には２つの梨が存在することを示唆することができる。即ち４７Ｋｄ分解 産物は３７℃又は２３℃で増殖させたカンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）のイミュノプロット（ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔ）で現れるが、 ９２Ｋｄ抗原は３７°Ｃでのみ現れる。これは熱誘導性の安定なｈｓｐ９０は３ ７℃で産生されるが２３°Ｃでは産生されず、より不安定なｈｓｐ９０は２３℃ で現れ、不活性化条件で４７Ｋｄ成分に分解してい（ことを示唆している。われ われはこの発見を利用して、カンジダ感染症とこれに関連する菌類の疾患の、改 良された診断法と治療法を開発した。

即ち本発明の１つの面において、少なくとも式（１）の配列、又はその断片、又 はその類似体を含むアミノ酸配列を存する菌類ストレス蛋白が与えられる：ｌｔ ｌ　２０　エＱ　為ｏ　ｓｏ　ａ。

ＫｒｕｌＵ’ｔｎｍｒＱＩＩｕｕＫＤＪＮＩＫＬＹＶｔｌ’ｆｆ！Ｔ口ｆｆＦ１ ｕ■すＥ　ＥＤＬＰアｏｓｏｅロ１００１１０１２０ ｕｌＬＪｔＥ器ム９９ｍＬｍｌＥ諺τマＷ冨τｎ冨！＄ｔＤＱＱｎｌＱｍｊＬＦ １１に１１’Ｉｒ！ＩＩ１ｍＱＩｌ（１）　１３０　１４０　１５０　１６０　 １７１）　ＬＩＤ＄ＬＪＪＪＪＪｒｎＷ■社ｆＬＳＩＷｕＱＩＪｍＩＥＥＳ山■ ｔｕｒｕｔｕａ。

＄９０　２（ＸＩ　ｎｏ　２８　２３０　２４０ＭＰＩＤＷＱＬＥｍＸＪＩＩＩ 、ＶＤ！ＴＫＯＦＥＥ、ｔＦＩＪ部αムｕＩＩＩ　ｍｔ’ＫＩＩＪＪｚｓｏ　２ ４＠　２７０　２ｓｏ　２ｔｏ　ｓｏ。

１１ｎ５ＱＴｕＷ轄η１■蹟１１ＸＩＴＯＱＷａＷｌｕｒｎｔ■ｎ更−α＝蘭ａ ｒｒｔ３　Ｓ　■コ肛３ＬＯ３２６３３０３４１）　３５６　３６０ｓｔｕｖ■ ｍｏｃｍｏマａＴｒＬｔＪＤＴＡＬ１．ＭＮＦ超Ｉ　１１１１１ＪｊｌＪ：３１ ６　３１０　３Ｈ ＴＪｎＤＤロｇＥＨムマｔＰ！Ａ丁τ丁１１１０）！？ムＣｕｌＪｒｍＤ会式（ １）の各１文字は１個のアミノ酸を意味し、それぞれ従来使用されているアミノ 酸の記号と同じである。

本発明のストレス蛋白は菌類に由来し、例えばカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ　）属 （例えば、カンジダ　パラブシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏ ｓｉｓ）　、カンジダ−クルゼイ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｋｒｕｓｅｉ）　、特にカ ンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）とカンジダ　トロ とカリス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）　！　（例えばクリプトコツカス　ネオ ホルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　）　）　；ヒ ストブラズｖ　（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ　）　＠（例えばヒストプラズマ　カ ブスラツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ　ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）　）及び関連す る酵母：そしてアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　）　＠（例えばアス ペルギルス　フミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｕｍｉｇａｔｕｓ　）　） 　、及び関連する糸状菌に属する株から得られる。

本発明のストレス蛋白の特定の断片はペプチド性エピトープ（例えば数個のアミ ノ酸又はその類似体）でもよい。このようなエピトープの例としては、ＳＴＤＥ ＰＡＧＥＳＡＳＬＳＲＥＭｌＬＫＶ　ＩＲＫ、　又ｉ−！ＬＫＶ　ＩＲＫＮ　Ｉ ＶＫＫＭＩ　Ｅなどがある。この種のペプチドは、従来の液相又は固相ペプチド 合成法により合成することができる。

本発明のストレス蛋白の類似体としては、式（１）の配列中の１つ又はそれ以上 のアミノ酸が別のアミノ酸で置換されている蛋白で、蛋白の全体の機能は保持さ れている蛋白がある。

本発明のストレス蛋白は精製された形で得られ、従って本発明の別の面において 、少なくとも式（１）の配列及びその類似体を含むアミノ酸配列を有する、実質 的に純粋な菌類ストレス蛋白が与えられる。

実質的に純粋であるという用語は、本発明のストレス蛋白は菌類由来の他の蛋白 を含まないことを意味する。

後記する本発明の種々の面において、菌類ストレス蛋白とは実質的に純粋な該蛋 白の調製物を含むものと解するべきである。

さらに別の面において本発明は特に、少なくとも式（１）の配列、又はその断片 、又はその類似体を含むアミノ酸配列を育する組替え菌類ストレス蛋白を与える 。

本発明のストレス蛋白はさらに以下の特徴の１つ以上を有する： （１）　大体ｐ１４からｐｌ５の範囲の等電点を（ｐｌ）を有する； （２）　イミュノドミナント（ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ）な保存抗原（ｃ ｏｎｓｅｒｖｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ　）である；（３）　全身性カンジダ症から 回復している患者はストレス蛋白に対して血清変換をする（ｓｅｒｏｃｏｎｖｅ ｒｔ　）　；（４）　後天性免疫不全症患者はストレス蛋白に対して抗体を有す る； （５）　４７キルダルトン抗原に対する、アフィニチイ精製したポリクローナル モノスペシフィック抗体を用いると、カンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ 　ａｌｂｉｃａｎｓ）の４７キルダルトン及び約９２キルダルトン抗原と交差反 応する。

本発明のストレス蛋白はいくつかの利用法がある。例ば該蛋白は菌類感染の診断 検査（例えば基本的に微生物中の該蛋白に特異的な抗体を測定するための、酵素 結合免疫吸着測定法、ラジオイムノアッセイ又はラテックス凝集法）の基本とす ることができる。

別の利用法としては、本発明のストレス蛋白は従来の技術を用いて、菌類感染症 の治療に利用される活性阻害剤を得るためにスクリーニングに使用することもで きる。

このようなスクリーニング法は本発明の別の面を構成する。

さらに別の利用法では、本発明のストレス蛋白は抗体の産生に特に適している。

即ち本発明のさらに別の面において、免疫原として利用される、少な（とも式（ １）の配列、又はその断片、又はその類似体を含むアミノ酸配列を存する菌類ス トレス蛋白が与えられる。　゛ストレス蛋白を免疫原として使用するためには、 漂準的免疫学的方法が使用される。例えば適当な宿主に該蛋白を注射し、血清を 集めて精製及び／又は濃縮をして目的のポリクローナル抗ストレス蛋白抗体が得 られる。宿主へ注射する前にストレス蛋白は適当な担体中で製剤化してもよい。

即ち本発明の別の面において、１つ又はそれ以上の薬剤として許容される賦形剤 とともに少なくとも式（１）の配列又はその類似体を含むアミノ酸配列を育する 菌類ストレス蛋白が与えられる。

抗ストレス蛋白抗体の精製には、アフィニティ媒体として本発明の固定化ストレ ス蛋白を使用するアフィニティクロマトグラフィーを利用することもできる。即 ち本発明の別の面において、不溶性支持体に共存結合した、少なくとも式（１） の配列、又はその一部、又はその類似体を含むアミノ酸配列を育する菌類ストレ ス蛋白が与えられる。

抗体産生の免疫原として本発明のストレス蛋白を使用することにより、該蛋白の 作用の１つの型のインヒビターが産生される。一般的にストレス蛋白のインヒビ ターは、菌類感染症の診断そして特に治療に有用な可能性があり、これは本発明 のまた別の面を与える。インヒビターとしてはストレス蛋白の作用のアンタゴニ スト、又はその産生を妨害する薬剤があり、そして特に菌類感染症の治療に使用 されるものがある。適当なインヒビターとしては、例えば抗体を含む薬理学的試 薬、ストレス蛋白の作用に拮抗するストレス蛋白の化学的類似体、そしてストレ ス蛋白の産生を妨害する抗センスＲＮＡ及びＤＮＡがある。適当なインヒビター は、試験モデル（例えば以下の例に示すマウスモデルのような動物モデル）中で 、適当なスクリーニング法（例えばインヒビターが本発明のストレス蛋白又はそ の断片又は類似体の作用に拮抗、又は防止する能力を測定）により、測定できる 。

本発明のまた別の面では、菌類感染症の診断又は治療に使用される、少なくとも 式（１）の配列、又はその断片、又はその類似体を含むアミノ酸配列を存する蛋 白である菌類ストレス蛋白が与えられる。

インヒビターは単独で、又は必要な場合は他の薬剤（例えばアンホテリシン（ａ ｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ）又はフルシトシン（ｆｌｕｃｙｔｏｓｉｎｅ　）のよ うな他の抗菌剤）と−緒に使用される。

本発明のこの面における特に有用な一部のインヒビターは、ストレス蛋白を認識 し、かつ結合することができる抗体である。

本発明のさらに別の面において、少なくとも式（１）の配列、又はその断片、又 はその類似体を含むアミノ酸配列を有する菌類ストレス蛋白の１つ又はそれ以上 の工・ピトーブに特異的な抗体が与えられる。

この抗体は抗体全体又はその断片でもよく、一般的には任意の免疫グロブリンク ラス（例えば免疫グロブリンＭ抗体、又は特に免疫グロブリンＧ抗体）に属する 。抗体又はその断片の起源は動物（例えば哺乳類、藁歯動物、ラット又はヒト） でもよいし、天然の抗体又はその断片、又は必要な場合は組換え抗体又は抗体断 片（即ち組換えＤＮＡ法を使用して産生された抗体又は抗体断片）でもよい。

具体的な組換え抗体又は抗体断片としては、（１）少なくともその一部は異なる 抗体由来の、抗原結合部位を育するもの（例えばある抗体の高度可変領域又は相 補性決定領域が第２の別の抗体の可変フレームワーク領域に結合されているもの ）（ヨーロッパ特許明細書第２３９４００号に記載されている’）；　（２）非 Ｆｖ配列が他の異なる抗体の非Ｆｖ領域で置換されている組換え抗体又は断片（ ヨーロッパ特許明細書第１７１４９６．１７３４９４、及び１９４２７６号に記 載されている）；又は（３）実質的に天然の免疫グロブリンの構造を有する組換 え抗体又は断片であるが、ヒンジ部位には天然の免疫グロブリンに存在するもの とは異なる数のシスティン残基を有するか、又は組換え抗体又は断片の表面ポケ ット（ｓｕｆａｃｅ　ｐｏｃｋｅｔ　）中の１つ又はそれ以上のシスティン残基 が、天然の免疫グロブリンの別のアミノ酸残基の位置に存在する、組換え抗体又 は断片（それぞれ国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ　８８１００７３０号及びＰＣＴ ／ＧＢ８８１００７２９号に記載されている）がある。

抗体又は抗体断片はポリクローナル抗体でもよいが、好ましくはモノクローナル 抗体である。これはストレス蛋白に関連する複数のエピトープに特異的でもよい が、好ましくは１つのみに特異的である。

抗体結合断片としては例えば、抗体分子全体の蛋白分解的切断により得られる断 片（例えばＦ（ａｂ’）ｓ、Ｆａｂ’、又はＦａｂ断片、又は組換えＤＮＡ法に より得られる断片、例えばＦｖ断片（国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ８８１００７ ４７号に記載されている）がある。

本発明の抗体は、ストレス蛋白を抗原として使用して公知の免疫学的方法により 調製できる。例えば適当な宿主にストレス蛋白を注射し、血清を集めて適当な方 法（例えば固定したストレス蛋白をアフィニティ媒体として使用するアフィニテ ィクロマトグラフィー）で精製及び／又は濃縮して目的のポリクローナル抗体を 得る。又はストレス蛋白を注射した宿主から牌ｆｆｌ細胞又はリンパ球を回収し て、コーラ−ら（Ｋｏｈｌｅｒ　ｅｔ　ａｌ、　）　、ヨーロピアン　ジャーナ ル　オブ　イミュノロジー（Ｅｕｒ、　Ｊ。

１＋＋ｏｒ＋ｕｎｏ１．　）第６巻、５１１頁（１９７６年）の方法を使用して 不死化（ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅ　）　Ｌ／て、得られる細胞を分離してモノク ローナル抗菌類ストレス蛋白を産生ずる単一の遺伝株を得る。抗体断片は通常の 方法を使用して産生される（例えばペプシン（バーハム（Ｐａｒｈａ、ｍ）　、 ジャーナル　オブ　イミュノロジ−（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　）第１３１巻、 ２８９５頁（１９８３年））、又はパパイン（ラモイルとニソノフ（Ｌａｍｏｙ ｌ　ａｎｄ　Ｎ１５ｏｎｏｆｆ　）　、ジャーナル　オブ　イミュノロジカル　 メソッズ（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ。

Ｍｅｔｈ、　）第５６巻、２３５頁（１９８３年））のような酵素による消化） 。本発明の組換え抗体を産生ずることが必要な場合は、ヨーロッパ特許明細書第 １７１４９６．３７３４９４．１９４２７６、及び２３９４００号に記載の方法 を用いて産生される。

本発明の抗体は診断及び／又は治療に利用できる。即ち診断用には、宿主微生物 中のストレス蛋白の存在を検出するため、又は例えば真菌性膿瘍（特に肝性カン ジダ症（ｈｅｐａｔｊｃ　Ｃａｎｄｉｄｊａｓｉｓ　）　）において宿主は特定 の菌類（例えばカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ　）　、クリプトコツカス（Ｃｒｙｐ ｔｏｃｏｃｃｕｓ）　、ヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ　）又はアス ペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　）　）に感染しているか否かを確認する ため、及び／又はこのような感染症の治療の経過を追跡するのに使用される。こ の種の診断法はまた本発明の別の面を構成し、一般的に標準的方法（例えば酵素 結合免疫吸着測定法、ラジオイムノアッセイ、ラテックス凝集法又はイミュノプ ロット（ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ）法などの免疫学的方法）を使用する。

本発明の抗体は菌類感染症（例えば前記したもの）において治療に使用され、単 独で又はエフェクター分子に結合して使用される。後者の場合エフェクター分子 （例えばアンホテリシンＢ又はフラシトシンなどの抗菌剤）を感染している微生 物に向けさせて使用される。治療用には、治療すべき感染症の性質や患者の状態 により適当な投与量で、投与用に抗体は通常の方法（例えば薬剤として許容され る担体又は賦形剤、例えば等張生理食塩水）で製剤化される。

必要な場合は診断又は治療に抗体の混合物（例えば本発明の菌類ストレス蛋白の 異なるエピトープを認識する２つ又はそれ以上の抗体の混合物、及び／又は異な るクラスの抗体の混合物、例えば本発明の菌類ストレス蛋白の同じエピトープ又 は異なるエピトープを認識するＩｇＧとＩｇＭ抗体の混合物）を使用してもよい 。

本発明のストレス蛋白は種々の方法（例えばイオン交換クロマトグラフィーやゲ ルクロマトグラフィーそして電気泳動などの通常の分離法、又は組換えＤＮＡ法 （以下の例でさらに詳細に記載））を用いて、適当な菌類細胞抽出物からの蛋白 分画により調製することができる。

本発明の実質的に純粋なストレス蛋白の調製には、組換えＤＮＡ法の使用は特に 適している。

本発明のさらに別の面において、少なくとも式（１）の配列、又はその断片、又 はその類似体を含むアミノ酸配列を有する菌類ストレス蛋白の製造方法を与え、 該方法は、（１）該蛋白の前駆体をコードする遺伝子よりなるベクターで形質転 換させた宿主微生物を培養する段階、（２）該前駆体を切断して該蛋白を生産す る段階、そして（３）該蛋白を回収する段階よりなる。

本発明のこの面において切断される前駆体は好ましくは、少なくとも形質転換さ れた宿主微生物で産生される蛋白の一部と式（１）のアミノ酸配列よりなる融合 蛋白である。このような融合蛋白は本発明のさらなる１つの面を構成する。好ま しくは融合蛋白は形質転換された宿主微生物により高レベルで産生される蛋白を 含む。このような蛋白の適当なものは、少なくともクロラムフェニコールアセチ ルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）蛋白の一部、又はベータガラクトシダーゼ蛋白 の一部を含む。

本発明のさらに別の面では、実質的に式（２）のヌクレオチド配列を有する菌類 ストレス蛋白又はその同族体をコードするＤＮＡ配列が与えられる：艶にエンＣ ＾ＧＯ醒ロズ５ズＹＧｎＣＣＪＬＡＡＣＡＣＡＣロ冨−罰Ｔｃ紅Ｃαπコ１Ｍτ ｃｃ駄α１０　２０　３０　４６　５ｏ　６０ 以下の例に記載されているようにこの配列のＤＮＡは菌類のゲノムＤＮＡから得 られる。

本発明のこの面のＤＮＡ配列は通常の方法を使用して発現ベクターに取り込まれ る。即ち本発明のさらに別の面において、実質的に式（２）のＤＮＡ配列又はそ の同族体よりなる発現ベクターが与えられる。

適当な選択マーカー、プロモーター及び適宜他の制御領域を準備することにより 、このベクターはある宿主細胞中で使用できるように適応される。このようなベ クターにより形質転換される宿主細胞は本発明のさらに別の面を構成する。適当 な宿主微生物としては、細菌（例えば大腸菌（Ｅ、　ｃｏｉｉ　）　）や組織培 養における哺乳動物細胞がある。

式（２）のＤＮＡ配列はまた、感染状態中の菌類ストレス蛋白の存在を同定する ためのＤＮＡプローブを設計するのに使用することができ、本発明はこのような りＮＡプローブにも適用される。このようなプローブは、例えばポリメラーゼ連 鎖反応（Ｐｏｌｉｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｒｉ）を利用して、 菌類感染症を診断するための循環している菌類核酸を検出する方法としても使用 することができる。このプローブは通常の方法で合成することができ、固相に固 定化されるか、又は固相に固定することができるか、又は検出可能な標識物で標 識される。

適当なエピトープ　マツピング（ｅｐｉｔｏｐｅ　ｍａｐｐｉｎｇ　）により、 通常の方法（例えば以下の例２に記載）を使用して、化学的に合成されるストレ ス蛋白のペプチド断片が同定できることは理解できるであろう。この型の合成ペ プチド抗原は、前述したように診断及び／又は治療に使用される抗体を産生ずる のに使用することができるか、又はワクチンとして抗血清（例えば非特異的ポリ クローナル抗血清）を産生ずるために使用することもでき、前記したように本発 明のさらに別の面を構成する。

図面の簡単な説明 以下の記載においては、本発明の種々の悪様が添付の以下の図面に言及して説明 される： 図１−　抗原選択された抗体でプローブ結合したカンジダ　アルビカンス（Ｃａ ｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）のイミュノプロットを示す。

図２Ａ−クローンＣＡ−１から調製された組換え溶源菌（Ｉｙｓｏｇｅｎ　）の イミュノプロットを示す。

図２Ｂ−ベータガラクトシダーゼに対するモノクローナル抗体でプローブ結合し た組換え溶源菌（ｌｙｓｏｇｅｎ　）ＣＡ−１のイミュノプロットを示す。

図２Ｃ−４７Ｋｄ抗原に対する抗体を育する患者の血清とプローブ結合した組換 え溶源菌（ｌｙｓｏｇｅｎ　）　ＣＡ　−１のイミュノプロットを示す。

図３−　カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）のオーブン　リー ディング　フレーム（ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｅａｍｅ（ＣＡ−ｏｒｆ） の予想されるアミノ酸配列と、サツカロミセス　セレビッシエ（Ｓ、　ｃｅｒｅ ｖｉｓｉａｅ　）　ｈ　ｓ　ｐ　９０の比較を示す。

図４−ＬＫＶＪＲＫＮＩＶＫＫＭＩＥ−Ｃ）’５−ＫＬＨに対するウサギの抗血 清とプローブ結合した酵母相のカンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ 　）のイミュノプロットを示す。

図５−　ＬＫＶＪＲＫＮＩＶＫＫＭＩＥ−Ｃｙｓ−ＫＬＨに対するウサギの抗血 清とプローブ結合した菌糸相のカンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｊｃａｎｓ 　）のイミ二以下の例により本発明を説明する。例１は本発明のストレス蛋白の 調製を説明する；例２は本発明のストレス蛋白のエピトープマツピング、特定の ペプチドエピトーブの調製そしてカンジダ感染症を検出するためのその利用を説 明する；例３は特定のエピトープに対するモノクローナル抗体の調製を説明する ；例４はマウスにおけるカンジダ感染症を防止するための、（本発明のストレス 蛋白のエピトープに対して産生された）特定のモノクローナル抗体の使用を説明 する。

ロンドンの病院の最初の全身性カンジダ症の発生（ジエイ・ピー・バーニーら（ Ｂｕｒｎｉｅ、　Ｊ、Ｐ、　ｅｔ　ａｔ、　）　、ブリティッシュ　メゾイカア ル　ジャーナル（Ｂｒｔ、　Ｍｅｄ。

Ｊ、）第２９０巻、７４６−７４８頁（１９８３年）に関与したカンジダ　アル ビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）の充分性状解析された株（血清型Ａ１形懇 型Ａ１、バイオタイプ（ｂｉｏｔｙｐｅ　）　１５７）を、２％グルコースブロ ース中で通気しなから３７°Ｃで一晩増殖させた。

ゲノムライブラリーの調製とスクリーニングシエーラーとスティーブンズ（Ｓｃ ｈｅｒｅｒ　ａｎｄ５ｔｅｖｅｎｓ　）　、プロシーディングズ　オブ　ナショ ナルアカデミ−オブ　サイエンシーズ　オブ　ニーニスニー　（Ｐｒｏｃ、　Ｎ ａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）第８５巻、１４５２−１４５６頁（ １９８８年）の改変した、ウィルスら（Ｗｉｌｌｓ　ａｔ　ａｌ、）　、ジャー ナル　オブ　バクテリオロジ−（Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　）第１５７巻、 ９１８−９２４頁（１９８４年）の方法により、ゲノムＤＮＡを調製した。

これをＥｃｏＲＩで部分的に消化し、２−７キロ塩基対の長さの断片を発現ベク ターラムダｇｔｌｌの単一のＥｃｏＲＩ制限部位にクローン化した（ティー・フ ィンら（Ｈｕｙｎｈ、　Ｔ、　ｅｔ　ａｌ、）　、ＤＮＡクローニング法：実際 的アプローチ（ＤＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａ　Ｐｒａｃ ｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ）　、ディー・グローバー（Ｇｌｏｖｅｒ、　Ｄ、 ）　！ｉ、　４９−７８頁、アイ・アール・プレス（ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ　）　 、オックスホード（Ｏｘｆｏｒｄ）　１９８５年、及びアール・ニー・ヤングと ビー・ダブりニー・デービス（Ｙｏｕｎｇ、　Ｒ，Ａ。

ａｎｄ　Ｄａｖｉｓ、　Ｐ、Ｗ、　）　、プロシーディングズ　オブ　ナショナ ル　アカデミ−オブ　サイエンシーズ　オブ　ニーニス：ｒ−−（Ｐｒｏｃ、　 Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）第８０巻、１１９４−１１９８頁 （１９８３年））。このライブラリーを、Ｘ−プレス中で一２０°Ｃでカンジダ 　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）酵母細胞を断片化して産生した可溶 性カンジダ抗原に対するウサギ抗血清でスクリーニングした（アール・シーーｖ シューズら（Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｒ，Ｃ。

ｅｔ　ａｌ、）　、ジャーナル　オブ　クリニカル　マイクロバイオロジー（Ｊ 、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　）第２５巻、２３０−２３７頁（１９ ８７年−（１））。前述（アール・シー・マンューズら（Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　 Ｒ，Ｃ，ｅｔ　ａｌ、　）　、ランセット（Ｌａｎｃｅ’）第ｉｉ巻、１４１５ −１４１８頁（１９８４年−（２））：アール・シー・マンューズら（Ｍａｔｔ ｈｅｗｓ、　Ｒ，Ｃ，ｅｔ　ａｌ、　）　、ジャーナル　オブ　クリニカル　マ イクロバイオロジー（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）　、同上）したように、カンジダ　アルビカンス（Ｃａ ｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）に対してイミュノプロットをして、抗血清は、 ４７ＫＤ抗原を含む多くの抗原に対して高力価の抗体を含存していることが確認 された。約１０′個のプラークをスクリーニングして、５個の陽性クローンを同 定した。

陽性クローンの性状解析 リオンら（Ｌｙｏｎ　ｅｔ　ａｔ、　）　（プロシーディングズ　オブ　ナショ ナル　アカデミ−オブ　サイエンシーズオブ　ニーニスｓ−−（Ｐｒｏｃ、　Ｎ ａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）第８３巻、２９８９−２９９３頁（ １９８６年））の記載した方法により、各陽性クローンに発現されるエピトープ を抗原選択により同定した。このために、ポリスペシフィックなウサギの抗血清 を陽性の組換えプラークに対してアフィニティ精製し、グリシン緩衝液ｐＨ２， ８で溶出した結合した抗体をカンジダ　アルビカンス（Ｃ。

ａｌｂｉｃａｎｓ）のイミュノプロットに対してスクリーニングした（アール・ シー・マンューズら（Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｒ，Ｃ。

ｅｔ　ａｌ、）　、同上）。フィンら（Ｈｕｙｎｈ、　Ｔ、　ｅｔ　ａｌ、）　 （同上）の方法により、大腸菌Ｙ１０８９中で溶源菌を調製した。融合蛋白の発 現は１ａｃＺプロモーターの制御下にあるか否かを調べるために、組換え溶源菌 の溶解物（１ｙｓａｔｅ）を、１）１０ｄのイソプロピルβ−ｄ−チオガラクト シド（Ｉ　ＰＴＧ）で、４５℃で熱誘導した後、３７℃で６０分増殖させ；２） ＩＰＴＧなしで熱誘導の後、３０°Ｃで増殖させ；そして３）１０ｍＭのＩＰＴ Ｇの存在下で３２℃で増殖させた後、イミュノプロット法により調べた。

組換え溶源菌のイミュノプロットを、１）カンジダに対するウサギの抗血清（緩 衝化生理食塩水中の３％のウシ血清アルブミンで１＝２５希釈）；２）プロメタ 　バイオチック（Ｐｒｏｍｅｇａ　Ｂｉｏｔｅｃ）　、リバプール（Ｌｉｖｅｒ ｐｏｏｌ　）から市販されている、ベータガラクトシダーゼに対するモノクロー ナル抗体（１：５，０００希釈）；そして３）４７ＫＤ抗原に対する抗体を育す る患者（ＡＩＤＳの患者５人と４７ＫＤ抗原に対して血清変換した全身性カンジ ダ症から回復している患者１人を含む）の血清（１：　１０）と、融合蛋白との 反応について調べた。カンジダ症を発症していない５人のＨＩＶ陽性患者の血清 を対照として使用した。

ＤＮＡ配列決定と解析 ５つの陽性クローンからの制限酵素マツピング挿入体から、領域が重複している ことが同定され、各クローンに発現されるエピトープは単一のゲノム部分により コードされていることを示唆していた。クローンＣＡ−１のこの領域（挿入体の ５′末端から２ＫＢ伸張している）を、ｐＵＣ１９のＥｃｏＲＩ部位にサブクロ ーニングした。これをサンガーら（Ｓａｎｇｅｒ）　（プロシーディングズオブ 　ナショナル　アカデミ−オブ　サイエンシーズ　オブ　ニーニス−？−−（Ｐ ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ　’）第゛７４巻、５４６３−５４６７頁（１９７７年））のジデオキシ 鎖停止法により、配列決定した。リーディングフレーム解析は、ＥｃｏＲＩクロ ーニング部位から伸張している単一のオープンリーディングフレーム（ｏｐｅｎ 　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ）　（ＣＡ　−ｏ　ｒ　ｆ　）を示していた。Ｆ ＡＳＴＡプログラム（ダブりニー・アール・ピアソンとディー・ジエイ・リップ マン（Ｐｅａｒｓｏｎ、　Ｗ、Ｒ。

ａｎｄ　Ｌｉｐｍａｎ、　Ｄ、Ｊ、）　、プロシーディングズ　才ブ　ナショナ ル　アカデミ−才ブ　サイエンシーズ　オブユーエスエ−（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ ｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）第８５巻、２４４４−２４４８頁（１９ ８８年））を使用して、予測されたポリペプチドをＰＩＲ蛋白データベースと比 較した。

結果 ５つのすべてのクローンは、カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　 ）の４７ＫＤ抗原と９２ＫＤ抗原と交差反応するエピトープを発現した（図１） 。ＩＰＴＧ有り又は無しで増殖させた組換え溶源菌のイミュノプロットは、発現 がｌａｃプロモーターの制御下にあることを示していた（図２Ａ）。クローン化 した抗原をベータガラクトシダーゼと融合させた。クローンＣＡ−１に産生され る融合蛋白は、天然のベータガラクトシダーゼ（分子量１１６Ｋｄ）に比較して 、より大きい分子量（１６０Ｋｄ）を有していた（図２Ｂ）。抗ガラクトシダー ゼモノクローナル抗体と反応する、より分子量の小さいバンドも観察され、融合 蛋白は本質的に本来のベータガラクトシダーゼよりも不安定であることを示して いた。

カンジダに対するウサギの抗血清と同じように、融合蛋白はまた４７ＫＤ抗原に 対する抗体を有するＡＩＤＳ患者の血清と反応するが、この抗体を持たないＨＩ Ｖ抗体陽性患者の血清とは反応しなかった。４７ＫＤ抗原に対して血清変換した 全身性カンジダ症の患者は、融合蛋白に対しても血清変換した（図２Ｃ）。大腸 菌で吸収してない患者の血清は、組換え溶源菌やλｇｔｌｌ対照の他のいくつか のバンドとも反応するため、これらのバンドは大腸菌抗原であると考えられた。

クローンＣＡ−１からの挿入体ＤＮＡのヌクレオチド配列解析は、単一のオーブ ンリーディングフレーム（ｏｒｆ）を示しており、これはクローニング部位から 続いており、３９５個のアミノ酸のポリペプチド（分子量４５ＫＤ）をコードし ていた。このｏｒｆはベータガラクトシダーゼ遺伝子と同期していた。ベータガ ラクトシダーゼ（分子量１１６ＫＤ）との融合により１ａｃＺ遺伝子からＣ−末 端１９個の残基が除去されるため、融合蛋白の計算されたサイズは１５９Ｋｄで あった。これはクローンＣＡ−１に産生される融合蛋白について予測された１６ ０Ｋｄと一致する。

このｏｒｆから得られたポリペプチド配列でデータベースサーチをすると、キイ ロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）　（アール・ケー・ブラックマン とエム・メゼルラン（Ｂｌａｃｋｍａｎ、　Ｒ，に、　ａｎｄ　Ｍｅｓｅｌｓｏ ｎ、　Ｍ、　）　（１９８６年）ジャーナル　オブ　モレキュラー　バイオロジ ー（Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、　）第１８８巻、４９９−５１５頁）、鶏（エ ム・ニス・クロマアら（Ｋｕｌｏｍａａ、　Ｍ、Ｓ、。

ｅｔ　ａｌ、）　（１９８６年）バイオケムストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ ｙ）第２５巻、６２４４−８２５１頁）、そしてハムスターのマイクロソームの グルコースに制御される蛋白（ｇｒｐｓ）　（ビー・ケー・ソルガーとエイチ・ アール・ビー・ベラム（Ｓｏｒｇｅｒ　Ｐ、に、　ａｎｄ　Ｐｅ１ｈａｃｎ、　 Ｈ，Ｒ。

Ｂ、）（１９８７年）ジャーナル　オブ　モレキュラーバイオロジー（Ｊ、　Ｍ ｏ１．　Ｂｉｏｌ、　）第１９４巻、３４１−３４４頁）そしてマウス（エム・ ジエイ・スミスとジー・エル・イー・コツホ（Ｓｍｉｔｈ、　Ｍ、Ｊ、　ａｎｄ 　Ｋｏｃｈ、　Ｇ、Ｌ。

Ｅ−）（１９８７年）ジャーナル　オブ　モレキュラーバイオロジー（Ｊ、　Ｍ ｏ１．　Ｂｉｏｌ、　）第１９４巻、３４５−３４７頁）の熱シヨツク蛋白（ｈ ｓｐ　）と官憲（〉４５％）の相関が見られた。最も長い配列の類似性はサツカ ロミセス　セレビツシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ）の酵母ｈｓｐ９０蛋白（エフ・ダブりニー・ファレリーとディー・ビー・フィ ンケルスタイン（Ｆａｒｒｅｌｌｙ　Ｆ、Ｗ。

ａｎｄ　Ｆｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ　Ｄ、Ｂ、）　、ジャーナル　オブ　バイオロ ジカル　ケミストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、）第２５９巻、５７４５ −５７５１頁（１９８４年））との間で観察され、３９５個のアミノ酸が重複し ており、８３．５％が同じであった（図３）。

以下の図は前記したものである。図中：図１は、９２ＫＤ及び４７ＫＤ抗原と交 差反応性を示す陽性クローンの２つからの抗原選択抗体、そして弱いが２つの中 間成分（トラックａとｂ）；非組換えプラークからの陰性対照溶出液（Ｃ）；カ ンジダに対するウサギの抗血清（ｄ）；４７ＫＤ抗原に対して高力価の抗体を含 存するＡＩＤＳ患者の血清（ｅ）と、プローブ結合させたカンジダ　アルビカン ス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）のイミュノプロットを示す。

図２は、カンジダに対するウサギの抗血清とプローブ結合させた、クローンＣＡ −１から調製した組換え溶源菌のイミュノプロットを示し、１０ｍＭ　ＩＰＴＧ を用いて４５℃で熱誘導した後３７℃で６０分増殖させると１６０ＫＤ融合蛋白 が存在することを示している（トラックＣとｄであり、２つの異なる溶源菌調製 物を示している）。溶源菌を３２°Ｃで増殖させるか（トラックｂ）、又は熱誘 導してもＩ　ＰＴＧが無いとき（トラックｅとｆ）は産生されないことを示して いる。分子量マーカーはトラックａに示しである。

図２Ｂは、ベータガラクトシダーゼに対するモノクローナル抗体でプローブ結合 させた組換え溶源菌ＣＡ−１のイミュノプロットを示す。Ｉ　ＰＴＧで増殖させ た後（トラックａ）、及びＩ　ＰＴＧの無いとき（トラックｂ）に１６０ＫＤ融 合蛋白と分解産物が証明され、ＩＰＴＧ＊り又は無しで増殖させた非組換えλｇ ｔｌｌ溶原菌は天然のベータガラクトシダーゼ（分子量ｚ６ＫＤ）の位置を示し ている。

図２０は、４７ＫＤ抗原に対する抗体を有する患者の血清とプローブ結合させた 組換え溶源菌ＣＡ−１のイミュノプロットを示す。４７ＫＤ抗原に対する抗体を 有するＡＩＤＳ患者の血清は１６０ＫＤ融合蛋白に対して交差反応性を示してお り（トラックａ）；４７Ｋｄ抗原に対して血清変換した全身性カンジダ症から回 復している患者の初期（ｂ）及び後記（Ｃ）血清は、１６０ＫＤ融合蛋白に対し て血清変換していることを示している。

図３は、カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）オーブン　リーデ ィング　フレーム（ＣＡ−ｏｒｆ）の予想されるアミノ酸配列と、サツカロミセ ス　セレビッシエ（Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｃ　）　ｈ　ｓ　ｐ　９０　（Ｓ ＣＨ３９０）との比較である。ＣＡ−ｏｒｆ配列に対して、〉８３％の直接の相 同性（＝）、又は〉９８％の保存相同性（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｈｏＩＩｌｏｌ ｏｇｙ）を示した。

本発明のカンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）のストレス蛋白の 配列決定したカルボキシル末端を、エイチーエム・ゲイセンら（Ｇｅｙｓｅｎ　 Ｈ，Ｍ、　ｅｔ　ａｌ、）　、ジャーナル　オブ　イミュノロジカルメソッズ（ Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｂｏｄｓ　）第１０２巻、２５９−２７４ 頁（１９８７年）の方法を用いてエピトープマツピングした。この方法では、多 数の重複ペプチドを合成して、蛋白抗原上で連続的な抗原性ペプチドを同定する 。この方法では炭水化物を検出せず、エピトープを切り離すことはない。例とし てこれらのエピトープの２つにつき詳細を以下に説明する： １、５ＴＤＥＰＡＧＥＳＡ このエピトープは式（１）の配列のカルボキシル末端の５つのアミノ酸残基の前 に存在する。これは：　（１）カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ 　）の　ブレセー）　（ｐｒｅｓｓａｔｅ）で免疫した３羽のウサギのうちの２ 羽からの超免疫（ｈｙｐｅｒｉｍｍｕｎｅ　）血清（ジエイ・ビー・バーニーら （Ｂｕｒｎｉｅ　Ｊ、Ｐ、、　ｅｔ　ａｔ、　）　、ジャーナル　オブクリニカ ル　バソロジー（Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｐａｔｈｏｌ、）第３８巻。

７０１−７０６頁（１９８５年））；　（２）５人の全身性カンジダ症患者のう ちの３人（このうち２人はこのエピトープに対して血清変換している）からの血 清；（３）４人のＨＩＶ抗体陽性患者（４７Ｋｄ抗原に対して抗体を育する一ア ール・シー・マンューズら（Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｒ，Ｃ，）　、ランセット（ Ｌａｎｃｅｔ）第ｉｉ巻、２６３−２６６頁（１９８８年）を参照）からのプー ル血清と、反応した。これは７人の正常対照患者又は慢性皮膚粘膜カンジダ症（ ＣＭＣ）からの血清とは反応しなかった。

このエピトープを合成し、末端システィンを利用してキーホールリンベットヘモ シアニン（ＫＬＨ）に結合させてＫＬＨ−Ｃｙｓ−３ＴＤＥＰＡＧＥＳＡを得た 。これに対するウサギのポリクローナル抗血清は、カンジダアルビカンス（Ｃ， ａｌｂｉｅａｎｓ　）に対するイミュノプロットで、約９２Ｋｄで熱誘導性抗原 （３７°Ｃでは存在するが、２３°Ｃでは存在しない）、及び約４０Ｋｄで構成 抗原（２３℃又は３７℃で増殖させると存在する）を認識した。４７　Ｋ　ｄ抗 原は検出しなかった。サッカロミセスセレビッシェ（Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａ ｅ　）又はアスペルギルスフミガタス（Ａ、　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）とは交差反 応しなかった。

２、　ＬＳＲＥＭ−ＬＫＶＩＲＫ これらの２つのエピトープは、式（１）の配列のカルボキシル末端から３２６− ３３２アミノ酸末端の所で、お互いに接近した所にある。ＬＳＲＥＭエピトープ は；（１）３羽のウサギのうちの２羽からの超免疫血清：（２）５人の全身性カ ンジダ症患者のうちの４人（このうち１人はこのエピトープに対して血清変換し ている）からの血清：　（３）４人のＨＩＶ抗体陽性患者からのプール血清、そ して（４）ＣＭＣ患者からの血清と反応した。ＫＬＨ−Ｃｙｓ−ＬＰＬＮＬＳＲ ＥＭＬで免役したウサギは、これに対して抗体を産生しなかった。

ＬＫＶＩＲＫエピトープは感染した患者の血清により特異的に検出された。超免 疫したウサギの血清はいずれもこのエピトープを認識せず、また７人の正常対照 患者の血清もこれを認識しなかった。全身性カンジダ症の５人のすべての患者は このエピトープに対して抗体を有しており、血清を連続的に得ることができた２ 番目の症例では、このエピトープに対して血清変換していた。４人のＨＩＶ抗体 陽性患者とＣＭＣ患者のプール血清もこのエピトープを認識した。エピトープ（ ＬＫＶ　Ｉ　ＲＫＮ　ＩＶＫＫＭＩ　Ｅ−Ｃｙｓ−ＫＬＨ）に対して作成したウ サギのポリクローナル抗血清は、カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎ ｓ　）の種々の株（血清型ＡとＢを含む）のイミュノプロットで酵母泪及び菌糸 相で、４７Ｋｄ抗原と約９２Ｋｄの抗原を認識した（図４と図５）。これはまた 陽性クローンに産生される融合蛋白も認識した。合金ペプチドエピトープによる 交差吸収（ｃｒｏｓｓ　−ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）により、この抗体の活性が除 かれた。この抗体はまた、（１）カンジダ　パラブシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ 　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）のイミュノプロットー約５２Ｋｄでバンドを与え る（このサイズの抗原は、エム・ニー・ベルダーら（Ｂｅｌｄｅｒ　Ｍ、Ａ、、 　ｅｔ　ａｌ、　）　、ヨーｏビアンハート　ジャーナアル（Ｅｕｒｏｐｅａｎ 　）ｌｅａｒｔ　Ｊｏｕｒｎａｌ）第１Ｏ巻、８５８−８６２頁（１９８９年） により、既に報告されている）：　（２）アスペルギルス　フミガタス（Ａ、　 ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）のイミュノプロットー約８８Ｋｄ、５１Ｋｄ及び４０Ｋｄ でバンドを与える（これらの抗原は既に報告されている、アール・シー・マンュ ーズら（Ｍａｔｔｈｅｗｓ、　Ｒ，Ｃ，、ｅｔ　ａｌ、）　、ジャーナル　オブ 　クリニカル　バソロジ−（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｐａｔｈｏｌ、）第３８巻、１ ３００−１３０３頁（１９８５年））、及び（３）サツカロミセス　セレビッシ ェ（Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　）のイミュノブロットーサッ力ロミセス　セ レビッシエ（Ｓ。

ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）　ｈ　ｓ　ｐ　９０に一致する、約８４Ｋｄと４５Ｋｄ で、抗原を認識した。これはアスペルギルス　フミガタス（Ａ、　ｆｕｍｉｇａ ｔｕｓ）中に本発明の約８８Ｋｄのストレス蛋白が存在することを示唆している 。

前記の図４と図５では下記が証明される：図４は、ＬＫＶＩＲＫＮＩＶＫＫＭＩ Ｅ−Ｃｙｓ　−ＫＬＨに対して作成したウサギの抗血清で、このペプチドで交差 吸収の前（ＰＲＥ）及び後（ＰＯ３Ｔ）のプローブ結合させた、酵母相のカンジ ダ　アルビカンス（Ｃ。

ａｌｂｉｃａｎｓ）のイミュノプロットを示す。分子量マーカーは左側に示しで ある。レーン１、カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）のアウト ブレーク株（ｏｕｔｂｒｅａｋｓｔｒａｉｎ）　（ジェイ・ビー・バーニーら（ Ｂｕｒｎｉｅ　Ｊ、　Ｐ、。

ｅｔ’　ａｌ、）　、ビー−エム・ジエイ（Ｂ、　Ｍ、　Ｊ、）第２９０巻、７ ４６−７４８頁（１９８５年））；レーン２、カンジダアルビカンス（Ｃ，ａｌ ｂｉｃａｎｓ）ＮＣＴＣ３１５３株（血清ｆｆ１Ａ）　；レーン３、カンジダ　 アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）　ＮＣＴＣ３１５６株（血清ＷＢ）。

４７Ｋｄ抗原と約９２Ｋｄの抗原は矢印で示しである。

交差吸収後にこれらの抗原は消失していることに注意してください。

図５のレーンｌから３は図５と同じであるが、菌糸相である。ペプチドで交差吸 収する前と後に、図４と同じ抗血清でプローブ結合させた。レーン１から３の４ ７Ｋｄと９２Ｋｄ抗原のようにレーン４は、交差吸収の後に融合蛋白が消失して いることを示す陽性クローンである。

以下のようにペプチドＳ　Ｔ　Ｄ　Ｅ　Ｐ　Ａ　Ｇ　Ｅ　Ｓ　Ａ　ハＬ　Ｋ、Ｖ ＩＲＫＮＩＶＫＫＭＴＥに対して作成した抗体を使用して、全身性カンジダ症患 者の血清を調べた：血清を直接ニトロセルロース膜上にドツトプロット（ｄｏｔ 　−ｂｌｏｔｔｉｎｇ）　して抗原を調べた。簡単には、１００μｍの抗血清を バイオドツト　マイクロフィルトレージョン（Ｂｉｏ　−Ｄｏｔ　ｍ１ｃｒｏｆ ｉｌｔｒａｔｉｏｎ　）装置ｔ（バイオラッド　ラボラトリーズ（Ｂｉｏｒａｄ 　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）　）の各ウェルに加えた。ここにはあらかじめ トリス緩衝化生理食塩水ｐＨ７，５（ＴＢＳ）で洗浄したニトロセルロース膜の シートが入れである。試料は重力にまかせて流した。

各ウェルにさらに１００μｍのＴＢＳを加え、重力で流した。次に２Ｘ１００μ ｍを真空で引いて流した。次に膜をＴＢＳ中３％のＢＳＡで４°Ｃで一晩ブロッ クした。

翌朝これをＴＢＳ中３％ＢＳＡ中の適当なウサギ血清３０μｍと室温で２時間イ ンキュベートした。次にこれを２０ｍＭ！・リス、５００ｍＭ　ＮａＣ１，０， ０５％ツイーン２０、ｐＨ７，５で３０分間洗浄し、アルカリ性ホスファターゼ 結合抗ウサギ血清（１：１０００）（シグマ）で室温で１時間インキュベートし た。次にこれを再び洗浄し、ナフトールＡＳ−ＭＸホスフェート（シグマ：蒸留 水中ｏ、４ｍｇ／ｍｌ）とファーストレッドＴＲ塩（ジグ７：０．２Ｍ）リス、 ｐＨ８，２中６ｍｇ／ｍｌ）の等１混合液を新たに調製し濾過した液で、室温で １５分間染色した。抗体の強度は、あらかじめ密度をジョイスレーベル走査型デ ンシトメーター（ＪｏｙｃｅＬｏｅｂｅｌ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｄｅｎｓｉｔｏ ｍｅｔｅｒ）で測定してあった対照と比較して肉眼で判定した。結果は、アール ・シー・マンューズとジェイ・ビー・バーニー（λｌａｔｔｈｅｗｓ、　Ｒ，Ｃ 。

ａｎｄ　Ｂｕｒｎｉｅ、　Ｊ、Ｐ、）　、ジャーナル　才ブ　クリニカルマ、イ クロバイオロジ−（Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　）第２６巻、４ ５９−４６３頁（１９８８年）に従い、陽性又は微量として分類した。

３群の血清を調べた。対照血清は、全身性カンジダ症でスクリーニングして臨床 的に又は培養によっても感染の証拠のないものから得た。第２の群は、臨床的に 重要な部位（静脈内、傷、大便、尿及び膣）・でコロニー形成が見られたが転移 の証拠は見られない患者である。第３の群は、感染が疑わしい症例又は証明され た症例である。

疑わしい症例では全身性アンホテリシンＢ療法で臨床的に存意な発熱は消失した 。患者は好中球減少症であり、培養物のいくつかはカンジダ　アルビカンス（Ｃ 。

ａｌｂｉｃａｎｓ）陽性であったが、感染を証明するには不十分であった。証明 された症例では、剖検の深部からの培養による証拠又は組織学的証拠があったか 、又は生存期間中の異なる時期に２回異なる部位から採取した血液培養物の２セ ツトが陽性であった。

ペプチド５ＴＤＥＰＡＧＥＳＡ又はペプチドＬＫＶＩＲＫＮＩＶＫＫＭ、Ｉ　Ｅ に対して作成した抗体に対して血清を調べた。前者は症例の９０．４％を検出し た（微量又は陽性の応答）。後者は証明された症例の８８．２％と疑わしい症例 のすべてを検出した。局部感染で全身性アンホテリシンＢでの治療が必要であっ た４人の患者でも陽性の応答があった。いずれの抗体も、播種性カンジダ症に特 異的な循環しているカンジダ抗原を検出した。

無し　微量　陽性 対照　６５ コロニー形成　６１ 全身性感染　２　８　１１ （証明例） ２、ＬＫＶＩＲＫＮＩＶＫＫＭＩＥに対スル抗体無し　微量　陽性 対照　４０４ コロニー形成　１０　５　４” 全身性感染 （証明例）　６　９　３６ （疑わしい例）４６ 魯静脈内感染（１）、尿路感染（２）そして傷口感染ＬＫＶＩＲＫＮＩＶＫＫＭ ＩＥ−Ｃｙｓ−ＫＬＨＩ：対してネズミのモノクローナル抗体を作成した（例２ ）。

Ｂａ１ｂ／ｃとＣＢＡＸＢａ　１　ｂ／ｃＦ　ｌｖウスに無菌完全フロインドア ジュバント中の５０μｇの免疫原を皮下注射した後、１４日間の間隔で不完全フ ロインドアジュバント中５０μｇの免疫原を血清変換するまで腹腔内に注射した 。

無菌生理食塩水中５０μｇの免疫原で静脈内に最後の免疫をしてから４日後に融 合を行った。融合、ハイブリドーマスクリーニング、クローン選択及び抗体分析 は、標準的方法、特にグロスとシャイブツガ−（ｄｅ　Ｓｔ。

Ｇｒｏｔｈ　Ｓ、Ｆ、　ａｎｄ　Ｓｃｈｅｉｄｅｇｇｅｒ　Ｄ、　）　、ジャー ナル　オブイミュノロジカル　メソッズ（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈｏ ｄｓ　）第３５巻、１−２１頁（１９８０年）に従い行った。選択されたハイブ リドーマを、カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）に対するイミ ュノプロットによりカンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）　４７ 　Ｋ　ｄ抗原に対する活性についてスクリーニングした。陽性ハイブリド−マを 再クローンして再測定した。

酵母及び菌糸型で３７℃で増殖させたカンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃ ａｎｓ　）のイミュノプロットで、カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａ ｎｓ　）　４７　Ｋ　ｄ抗原と約９２Ｋｄ抗原の両方を認識する新規のハイブリ ドーマ細胞株（ＣＡ−ＳＴＲ７−１）を産生させた。このモノクローナル抗体で は、２３℃で４７Ｋｄ抗原は認められたが、９２Ｋｄ抗原は認められなかった。

例　４ 例３の方法を使用してペプチド５ＴＤＥＰＡＧＥＳＡに対するモノクローナル抗 体を作成し、マウスモデルで使用して致死量のカンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａ ｌｂｉｃａｎｓ　）の投与に対して防御効果があるか否かを調べた。マウスモデ ルは以下のようであった：平均体重２．５ｇの雄のＢａ１ｂ／Ｃマウスに、標準 バッチの凍結カンジダ　アルビカンス（Ｃ，ａｌｂｉｃａｎｓ　）の希釈液を静 脈注射した。尾側静脈を通して１００μ】を注射した。以下に示した投与量と時 間で以下のような死亡率が得られた： 死亡率 投与量　１８ｈｒ目　２４ｈｒ目　ｎ ５Ｘ１０”細胞　８９％　１００％　５４ＩＸ１０”細胞　７６％　１００％　 ４８５Ｘ１０’細胞　０％　０％　２４ 凍結分注物の注射した細胞の生存率はｑシ％であったため、投与量を少な目に調 節した。゛ 以下のようにあらかじめ注射して５ＴＤＥＰＡＧＥＳＡに対する抗体で前処理し たマウスでは、前記のようにｌＸｌ０”個のカンジダ　アルビカンス（Ｃ。

ａｌｂｉｃａｎｓ）細胞の投与量を使用した：死亡率　「防御」剤 ｎ　２４ｈｒ目　４８ｈｒ目　注射量 ５ＴＤＥＰＡＧＥＳＡ　６　６６％　８３．３％　投与１時間前にＭａｂ　Ｏ， ２ｍ１ ＭａｂＬ２　６　１００％　−投与１時間前に０．２ｍｌ 患者１　６　５０％　５０％　投与３０分前に０．５ｍｌ 患者２　７　４２．８％　４２．８％　投与３０分前に０．５ｍ１ ５　４０％　４０％　投与３０分前に ０．５ｍｌ 正常ヒト血清　６１００％　−投与３０分前（こ０．５ｍｌ ＩｇＧ画分　６　５０％　６６％　投与３０分前（こ患者２　０．５ｍｌ ＩｇＧ画分　６１００％　−投与３０分前（こ正常ヒト血清　０．５ｍｌ 「患者ｌ」と「患者２」は、全身性カンジダ症を発症し、抗体応答を示し、回復 した患者の血清である。

ｒＴｇＧ画分」は、５０％硫酸アンモニウム沈澱でｉ’Ｊ−られた画分をＰＢＳ に対して一晩透析し、最初の血清と同じ量に再懸濁した免疫グロブリン画分であ る。

Ｍａｂ　Ｌ２は無関係なＩｇＧ抗体である。

結論 ５ＴＤＥＰＡＧＥＳＡに対して作成したモノクローナル抗体は、致死量のカンジ ダ　アルビカンス（Ｃ。

ａｌｂｉｃａｎｓ）を投与した動物で２４時間目に３３％の生存率であったが、 無関係のＩｇＧと正常ヒト血清で（よ防御効果は認められなかった。あらかじめ 感染させた患者の血清は２４時間目に５５％の防御効果を示した。

ｉｇ　１ Ｆ１９２Ｃ Ｆｉｇ　３ １ＩＩＩｔｌｌＷｌ啼Ｍｌ＾帥暢嘩噛−＊＋ｍ・−’Ｍ〒／ｌ’：１１Ｑｌ’ｌ ／Ｉ’ｌｌｌＶ５１国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．少なくとも式（１）の配列、又はその断片、又はその類似体を含むアミノ酸 配列を有する菌類ストレス蛋白： （１）【配列があります】 ２．カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕ ｓ）、ヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）及び関連する酵母、又はアス ペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、及び関連する糸状菌類の株から得られ る、請求の範囲第１項に記載のストレス蛋白。 ３．下記の１つ又はそれ以上の特徴を有する請求の範囲第１項又は第２項に記載 のストレス蛋白。 （１）大体ｐＩ４からｐＩ５の範囲の等電点を（ｐＩ）を有する； （２）イミュノドミナント（ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ）な保存抗原（ｃｏ ｎｓｅｒｖｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ）である；（４）全身性カンジダ症（ｓｙｓｔ ｅｍｉｃ　ｃａｎｉｄｉａｓｉｓ）から回復している患者はストレス蛋白に対し て血清変換をする（ｓｏｒｏｃｏｎｖｅｒｔ）； （４）後天性免疫不全症患者はストレス蛋白に対して抗体を有する； （５）４７キルダルトン抗原に対するアフィニティ精製したポリクローナルモノ スペシフィック抗体を用いると、カンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌ ｂｉｃａｎｓ）の４７キルダルトン及び約９２キルダルトン抗原と交差反応する 。 ４．請求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項に記載の、実質的に純粋な ストレス蛋白。 ５．請求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項に記載の、ストレス蛋白の 断片。 ６．配列【配列があります】 、又は【配列があります】である、 請求の範囲第５項に記載の断片。 ７．菌類感染症の診断検査に使用される、前項までのいずれか１項に記載のスト レス蛋白又は断片。 ８．診断検査は酵素結合免疫吸着測定法、ラジオイムノアッセイ又はラテックス 凝集法である、請求の範囲第７項に記載のストレス蛋白又は断片。 ９．免疫原として使用される、請求の範囲第１項から第６項までのいずれか１項 に記載のストレス蛋白又は断片。 １０．請求の範囲第１項から第６項に記載の、ストレス蛋白又は断片のインヒビ ター（阻害物質）。 １１．少なくとも式（１）の配列、又はその断片、又はその類似体を含むアミノ 酸配列を有する菌類ストレス蛋白の１つ又はそれ以上のエピトープに特異的な抗 体： （１）【配列があります】 １２．少なくとも式（１）の配列を含むアミノ酸配列を有する菌類ストレス蛋白 の断片に特異的な、請求の範囲第１１項に記載の抗体。 １３．配列【配列があります】 、又は【配列があります】に特異 的な、請求の範囲第１１項に記載の抗体。 １４．エピトープＳＴＤＥＰＡＧＥＳＡに特異的な、請求の範囲第１３項に記載 の抗体。 １５．ポリクローナル抗体である、請求の範囲第１項から第１４項までのいずれ か１項に記載の抗体。 １６．モノクローナル抗体である、請求の範囲第１１項から第１４項までのいず れか１項に記載の抗体。 １７．検出できる標識物で標識されているか、又はエフェクター分子に結合して いる、請求の範囲第１１項から第１６項までのいずれか１項に記載の抗体。 １８．請求の範囲第１１項から第１７項までのいずれか１項に記載の抗体よりな る薬剤組成物。 １９．菌類の感染症の診断又は治療に使用される、請求の範囲第１１項から第１ ７項までのいずれか１項に記載の抗体。 ２０．カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃ ｕｓ）、ヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、又はアスペルギルス（Ａ ｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）微生物による感染症の診断又は治療に使用される、請求 の範囲第１９項に記載の抗体。 ２１．実質的に式（２）の配列又はその同族体を有する菌類ストレス蛋白をコー ドするＤＮＡ配列。 （２）【配列があります】 ２２．菌類感染症の診断のためのＤＮＡプローブの設計に使用される、請求の範 囲第２１項に記載のＤＮＡ配列。 ２３．実質的に請求の範囲第２１項に記載のＤＮＡ配列又はその同族体よりなる 、発現ベクター。 ２４．少なくとも式（１）の配列、又はその断片、又はその類似体を含むアミノ 酸配列を有する菌類ストレス蛋白の製造方法において、（１）該蛋白の前駆体を コードする遺伝子を含むベクターで形質転換させた宿主生物を培養する段階、（ ２）該前駆体を切断して該蛋白を生産する段階、そして（３）該蛋白を回収する 段階よりなる、上記方法。