JPH04502759A - 放射性ヨード化された１―（β―Ｄ―アラビノフラノシル）―５（Ｅ）―（２―ヨードビニル）ウラシルの生産、およびその使用、および代替的ハロゲン放射性核種を組込む関連誘導体、一般的な放射性ハロゲン化前駆体、１―（２，３，５―トリ―０―アセチル―β―Ｄ―アラビノフラノシル）―５（ＺおよびＥ）―（２―トリメチルシリルビニル）ウラシル、そのような前駆体の放射性ハロゲン化のための方法、およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 放射性ヨード化された１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（Ｅ）−（２− ヨードビニル）ウラシルの生産、およびその使用、および代替的ハロゲン放射性 核種を組込む関連誘導体、一般的な放射性ハロゲン化前駆体、１−（２，３，５ −トリー〇−アセチルーβ−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（ＺおよびＥ）−（ ２−トリメチルシリルビニル）ウラシル、そのような前駆体の放射性ハロゲン化 のための方法、およびその使用 発明の分野 この発明は新規な放射性抗ウィルス化合物、１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル ）−５（Ｅ）−（２−［”　Ｉ］　−ヨードビニル）ウラシル、以下に“〔１目 −ＩＶａｒａＵ”として示す、１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（Ｅ） −（２−［’　Ｘ］　−ハロゲノピリル〕ウラシルとして示される一群の化合物 のための基本型化合物、以下に“［”　Ｘ］　−ＸＶａ　ｒａＵ”として示す、 およびその新規な前駆体、１−　（２，３，５−トリー〇−アセチルーβ−Ｄ− アラビノフラノシル）　−５（ＺおよびＥ）−（２−）リメチルシリルビニル） ウラシル、以下に“ＴＭＳＶａｒａＵ”として示す、ならびにそれらの調製のた めの方法およびそれらの使用に関する。以上において、“［１１］”はヨウ素と の放射性核種を表わし、かっ°Ｘは任意の他の適当なハロゲン放射性核種を表わ す。

［’　Ｉ］　−ｒＶａｒａＵの構造中に適当なガンマ線もしくは陽電子を放射す るヨウ素または適当なハロゲン放射性核種を含むことは、生体外および生体内で ヘルペスウィルスの感染を検出するための診断上の手段として、この試薬を有用 にする。適切なα線および／またはβ線および／またはγ線を放射する、および ／またはオージェ電子崩壊を伴う、（特定的に放射性毒性の）ヨウ素の同位体、 またはその他の適切なハロゲン放射性核種をこの試薬の構造中に含有することは 、α線および／またはβ線の放射の致死的な効果および／またはオージェ電子崩 壊の効果をウィルスの感染部位に正確に絞ることにより、ヘルペスウィルス感染 のためのユニークな放射線治療手段としてこの試薬を有用にする。

発明の背景 ヤマサ醤油株式会社は、１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（Ｅ）−（２ −ハロゲノビニル）ウラシル（ＸＶａｒａＵ’　ｓ）として知られる一群の非放 射性抗ウィルス化合物およびその化合物の調製方法を開発してきた。接頭辞“ハ ロゲノ”、以下に省略系として“Ｘ”として示すは、ブロモ、クロロ、およびヨ ードを含む。１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（Ｅ）　−（２−ブロモ ビニル）ウラシル、またはＶＢａｒａＵ”、“ＢＶ−ａｒａｕ”、もしくは“Ｂ ＶＡＵ”として知られるブロモ誘導体は、合成が容易であり、ハロゲン、臭素の 高い反応性を有している。抗ウィルス剤、ＢＶａｒａＵは、ウィルスにより誘導 される（デオキシ）チミジンキナーゼを伴う、人および動物のヘルペスウィルス の感染に対して有効である。

抗ウイルス治療剤としてラベルされていないＢＶａｒａＵを保護する既知のヤマ サ特許のリストは次のとおりである。

米国特許＃４．３８６．０７６ カナダ特許＃１１５．０２４ カナダ特許１１，２０４．１０８ 日本特許＃１，１５７，８９７ 欧州特許＃３１１２ 生体外および／または生体内における抗ウィルス活性および／またはそれらの作 用機構に関して、ＢＶａ　ｒ　ａＵおよび／またはその他のハロゲノビニル−ア ラウラシルを記載した既知の刊行物のリストは、この出願に“付録Ａ”［参照１ −４４］　として添付されている。

これらの特許および刊行物のいずれも、ＸＶａｒａＵの［”　Ｘ］　−ＸＶａ　 ｒ　ａＵへの放射性ラベル付けまたはその関連物質について開示、考察、および 教示を行なっていない。また、それらは〔”Ｉ］−１ＶａｒａＵを生成するため に使用されるであろう実用的な合成方法を開示も提供もしていない。さらに、そ れらは、　口”　Ｉ］　−ＩＶａｒａＵの安定な前駆体の形成について、開示、 示唆、および教示を行なっていない。さらにそれらは、可能性のある診断薬とし てのＸＶａｒａＵ’　ｓ、［”　ｘコーＸＶａｒａＵ’　ｓ。

もしくはその関連物質またはそれらの放射性ラベルされた類縁体の使用について 何も言及していない。さらにそれらは、アルファ線および／またはベータ線の放 射の致死的な効果および／またはオージェ電子崩壊の抗ウイルス効果をウィルス の感染部位に正確に絞ることにより、それらの抗ウィルス活性をもたらす目標が 定められた放射線治療抗ウィルス剤として、ＸａｒａＵ’ｓの放射性ラベルされ た類縁体およびその関連物質を使用することについて何も言及していない。

単純ヘルペスウィルス、帯状ヘルペス（水痘）ウィルス、シトメガロウイルス、 およびエプスタインパールウィルス、以下にそれぞれ“ＨＳＶ”、’ｖｚｖ”、 “ＣＭｖ″、および“ＥＢＶ”　として示すは、一般的な人のヘルペスウィルス であり、人を悩ます多くの重要な慢性的な病気に顕著に関わっている。非常にし ばしば、ＨＳＶおよびｖＺｖは、皮膚または粘膜の病変を引き起こし、それらの 病変は、標準的な綿棒／培養技術を通常用いる迅速でかつ正確なウィルス診断に 速やかに供される。一方、培養法を適用すべき感染された組織への接触が困難な ために、これらのウィルスによる標的器官の生命を脅かすような感染が、しばし ば診断から逃れる。医者は、症状および徴候をもとにして患者がかかっている病 気を推測するか、または外科的もしくは内視的な方法（侵入的な試験）による解 析のために深いところにある組織片を得るかどうかの選択にしばしば直面する。

ヘルペスウィルス感染の化学療法における最近の進歩は、その固有の誤り、遅れ および罹病を伴う侵入性の試験を排除する必要性を急速に高めてきた。ある治療 の状況においては、たとえば、眼または眼の深い部分の感染、および後ヘルペス 性神経痛または横断を髄炎のようなヘルペス感染による神経疾患に対しては、侵 入性の試験は実際的でない。ウィルスの培養による解析の限界を克服するための 試みにおいて、脳を髄液（ＣＳ　Ｆ）中のウィルス抗原またはＤＮＡの検出、Ｃ ８Ｆに対する血清抗体の比率の定量的な比較等の方法を含むさまざまな、非侵入 性でありかつ／または迅速なウィルスの診断法が確立されてきた。今までのとこ ろ、それぞれの方法は感度、特異性および／または検出速度において問題を抱え ている。これらの問題を克服するため、いくつかのグループは、放射性ラベルさ れた抗ウイルスヌクレオシドの局在化された取込みにより、Ｈ８■脳炎の診断が できることを示唆してきた。そのような試薬について言及している刊行物は、付 録“Ｂ”　［参照４５−５０］にリストされている。そのような試薬は、Ｈ８Ｖ に特異的なデオキシチミジンキナーゼ、一群のヘルペスウィルス特異的な酵素、 以下に’ｄＴＫ’　ｓ”として表わす、によりリン酸化される。最初のそのよう な仮説は、サイトウ等［４５，４６］により発表された。彼等は、［１４Ｃ−ラ ベルされた］−２′　フルオロ−５−メチル−１−β−Ｄ−アラビノシルウラシ ル（［＋　４　（：コーＦＭＡＵ）のＨ３Ｖ特異的局在化について研究を行なっ た。彼等は、脳の領域における病巣感染と［”　Ｃ］　−ＦＭＡＵ取込みの増加 との高い相関関係を示した。Ｅ”　Ｃ］　ＦＭＡＵは、あるヘルペスウィルスの ｄＴＫ’　ｓによりリン酸化され、かつ感染の領域に特異的に集められる。しか しながら、これらの研究者は、特にプラズマのヌクレオシドレベルが高い場合に おける［＋　’　Ｃ］　−ＦＭＡＵからのバックグラウンド数に伴う重大な問題 を見いだし、さらにまた脈絡膜叢による取込みが、感染のレベルに不相応である ことを見いだした。急速に分裂している細胞による取込みもまた問題であった。

なぜならば、それらの化合物は細胞の酵素による顕著な非特異的リン酸化の対象 であるからであった。

さらに　［＋　４０］アイソトープは、治療の実現にとって非実用的な放射性核 種である。合成については直接記載されていないが、ＦＭＡＵはフッ素の放射性 核種でラベルすることができ、かつ陽電子放射検出のための１８Ｆの使用が示唆 された。この著者等は、２′　−フルオロ−５−ヨード−１−β−Ｄ−アラビノ シルシトシン、ＦＩＡＣを使用する可能性についても示唆した。しかしながら、 ＦＩＡＣは非特異的な分解を受ける対象として知られ、結果としてヨウ素の損失 がもたらされる。加えて、この試薬は、過度に毒性であり、かつ感染されておら ず急速に分裂する細胞によりリン酸化されて、そのいくらかが取込まれる。この 研究は、米国特許＃４，４８９．０５２にも記載され、支持されている。臨床診 断を現実のものとするために、陽電子またはγ線を放射する放射性核種のための 必要性が論しられた。米国特許＃４．４８９，０５２は、この目的に対する［” 　Ｘ］　−ＸＶａ　ｒａＵおよび［”Ｉ］　ＩＶａｒａＵの使用について、開示 、考察および教示を行なっておらず、しかも５−置換された−１−（２−デオキ シ−２−置換された一Ｄ−アラビノフラノシル）ピリジンヌクレオシドの使用に 特定的に限られていた。それはまた、これらのヌクレオシド、もしくはその他の 任意のヌクレオシドをハロゲン放射性核種を用いて放射性ラベルする方法につい て、開示、提供および教示を行なっておらず、ただ単に、それらのクラスの５− 置換された−１−（２−デオキシ−２−置換された一〇−アラビノフラノシル） ピリジンヌクレオシドの可能性について推測したに過ぎない。

アシクロビル、９−［（２−ヒドロキシエトキシ）メチル）グアニンコは、その 抗ウィルス活性が、ヘルペスウィルスに誘導されるｄＴＫ’　ｓに依存する”ヌ クレオシド類縁体”である。放射性ラベルされたアシクロビルは、診断薬として その可能性が試験されたが、それらの実験はあまりにも鈍感であったため、感染 された組織において薬剤の同化作用に基づくアシクロビルの局在化は示されなか った［４７コ。このことは、アシクロビルのリン酸化が、ウィルスに感染された 細胞において促進される傾向にあるにもかかわらず、感染されていない細胞によ るアシクロビルの受動的な取込みに起因していたであろう。安定でまた臨床的に 実用的な放射性核種のラベルを形成することが困難であり、その化学構造中にハ ロゲンを含まないため、アシクロビルもまた、診断薬として使えなかった。

アルベルタ（Ａｌｂｅｒｔａ）大学のグループは、５（Ｅ）　−（２−［＋　３ １　Ｉ］　ヨードビニル）−２′　−デオキシウリジン、以下に“［＋　３１　 Ｉ］　−１ＶｄＵ”として表す、を診断薬として研究してきた［４８］。［＋３ １Ｊ］−Ｉ　ＶｄＵは、〔′″　Ｉ］−１ＶａｒａＵと構造的に異なる。

前者は２′−デオキシウリジンの誘導体であり、後者は１−（β−Ｄ−アラビノ フラノシル）ウラシルの誘導体である。糖部分におけるこの大きな違いは、生体 内における分解に対して［”　Ｉ］　−１ＶａｒａＵが代謝的に抵抗するという 卓越した点の根拠となっている。この［”１ｌ−ＩＶａｒａＵと異なり、前者の ［１３１ＪコーＩＶｄＵは、速やかに非特異的な代謝物、［＋３＋　■］−ヨー ドビニルウラシル、以下に“［＋　３１　Ｉ］−ＩＶＵ”まタハ“［１１］−Ｉ ＶＵ”として表す、にピリジンヌクレオシドホスホリラーゼ、１群の細胞酵素で あり以下に“ＰｙＮＰ′　ｓ”として表す、により生物学的に分解された。非侵 入性のヘルペスの診断のために［”　Ｉ　Ｉ］　−ＩＶｄＵを使用するアルベル タグループによる試みは、ＰｙＮＰ’　ｓの活性による分解生成物、［＋　３１ 　Ｉ］−ＩＶＵと同様に遊離の［１３１ｉ］　−ヨウ素の形成（容易に説明され ず）からもたらされる高いバックグラウンド数によって邪魔された。この化合物 に対する代替的な放射性ラベル化の方法も報告されてきた［５０］。第２のグル ープは、ラットのモデルにおけるＨ８Ｖ脳炎の［＋３＋１コーＩＶｄＵについて 研究を行なった。彼等は、ラットの脳における取込み部位での放射線活性につい てのある相関関係を示した。しかしながら、彼等の方法は、血管−脳の障壁の化 学的な破壊を必要とするとともに、直接的な頚動脈への、注入として臨床的に非 実用的である。アルベルタ大学のグループはさらに、ＨＳＶ脳炎の非侵入的な診 断のための潜在的なプローブとして、［＋２５Ｊ］−１または［凰３Ｉ］　−５ （Ｅ）−（２−ヨードビニル）−１−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ− リボフラノシル）ウラシルおよびいくつかの誘導体の可能な使用を記載してきた 。その化合物は、ＰｙＮＰ’　ｓによるグリコシド結合の分解に対する抵抗性を 示したが、同定されていない代謝物および遊離の［＋３１ｉ］−ヨウ素への異化 作用が認められた［５２〕。

ランド（Ｒａ　ｎ　ｄ）等［５３］は、ｄＴＫ−依存化合物、トリフルオロチミ ジンを用いて探索することにより、鼠の単純ヘルペス感染の肝炎モデルにおいて １９Ｆ核磁気共鳴を用いた。トリフルオロチミジンは、治療のための投与量で与 えられた場合、著しい全身性の毒性を伴った。この方法は、高度に専門化された 装置の使用を必要とするが、ヌクレオシドプローブを放射性ラベルすることは必 要でなかった。

発明の概要 式： の放射性ハロゲン化合物を調製するためのプロセスであって、 上式においてＸは、放射性の＋２３　ｊ、１２５　■、＋２７　ＩＳ＋３１Ｊか らなる群から一選択されたヨウ素の放射性同位体、もしくは代替的に、放射性の ７５ＢＴ、７６Ｂｒ１７７　Ｂｒ、８２　Ｂｒ、３４　ＣＩからなる群から選択 された放射性ハロゲン、またはその他の適切な放射性核種であり、このプロセス は、（ａ）ウリジンをそのアラビノ類縁体に変換するステップ、（ｂ）アラビノ 糖の部分を適切な保護物質を用いて、置換または減成から保護するプロセスと、 （Ｃ）保護された類縁体をＣ５の位置でハロゲン化するプロセスと、（ｄ）ハロ ゲン化された類縁体を適切な化合物と結合して、Ｃ５の位置でビニル化合物を形 成するステップ、（ｅ）結合された化合物を０５−ビニル基の末端の炭素原子で 放射性ハロゲン化するステップ、および（ｆ）アラビノ糖の部分から保護基を取 り除くステップとを備える。

式： の放射性ハロゲン化合物を調製するためのプロセスであって、 上式においてＸは、放射性の＋２３　［１２５［１２Ｂ　ｒ　ｓ　”　Ｂ　ｒ　 ｓ　”　Ｂ　ｒ　％　８２Ｂ　ｒ　Ｎ　３４Ｃｌからなる群から選択された放射 性ハロゲン同位体、またはその他の適切な放射性核種であり、そのプロセスは、 （ａ）ウリジンをそのアラビノ類縁体に変換するステップと、（ｂ）アラビノ類 縁体をアセチル化によって保護するステップと、（Ｃ）保護された類縁体を０５ の位置でハロゲン化するステップと、（ｄ）ハロゲン化され、保護された類縁体 をトリメチルシリルアセチレンと結合するステップと、（ｅ）結合された化合物 をビニルシランで還元するステップと、（ｆ）還元された化合物を放射性ハロゲ ン化するステップと、（ｇ）アセチル基をアラビノ環から取り除くステップとを 備える。

式： の放射性ハロゲン化合物であ−って、 上式においてＸは、放射性の１２３７Ｓ＋２５７１１２７１、＋３１　１からな る群から選択されたヨウ素の放射性同位体、もしくは代替的に、放射性の７５Ｂ ｒ、７６Ｂｒ１７７　Ｂｒ、８２　Ｂｒ、３ａ　Ｃ１からなる群から選択された 放射性ハロゲン、またはその他の適切な放射性核種である。

図面 第１図は、前駆体化合物、１−　（２，３，５−トリーＯ−アセチルーβ−Ｄ− アラビノフラノシル）　−５（Ｚ）　−（２−トリノチルシリルビニル）ウラシ ルの合成、それに続く、１−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（Ｅ）　−（ ２−［’　Ｘコーハロゲノビニル）ウラシルとして表される、任意の放射性核種 がプロセスにおいて用いられる、化合物群のための基本型化合物である、１−（ β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（Ｅ）−（２−［”Ｉ］−ヨードビニル）ウ ラシルの調製のためのこの発明のプロセスを示す図式である。

第２図。ＨＳＶ−１−１−感染されたＰＲＫ細胞への［＋２５ｉコーＩＶａｒａ Ｕの取込み。種々のＨＳＶ−１変異体が比較され、ウィルスのｄＴＫ’　ｓの発 現に対する取込みの依存性が示されている。

第３図。ＨＳＶ−１−感染ＰＲＫ細胞中への［１２’Ｉ］−ＩＶａｒａＵの取込 みの可逆性。薬剤投与の中止の後、２４時間で不完全ではあるが、取込みの可逆 性が示された。

第４図。ＨＳＶ−１−感染ＰＲＫ細胞への［＋２５１コーＩＶａｒａＵの取込み ：様々な接種およびウィルスにさらす時間の影響。これらの結果は、細胞当たり ＩＰＦＵの接種において、［’　２５　Ｉ−］　ＩＶａｒａＵの取込みが、４゜ ０時間はどでＨＳＶ−１の増殖を検出することを示している。

第５図。櫛状板において感染されたニューシーラントホワイトラビットのＨＳＶ −１−感染領域における［＋２３１］−ＩＶａｒａＵの局在化。Ａ０鼻咽頭およ び嗅球で激しく感染され、感染後７日でスキャンされた動物からのポジティブ放 射能分布図の写真。Ｂ０活動的ではなく潜在的に感染されたコントロール動物の 感染後７日の放射能分布図の写真。嗅球は壊死したがウィルスは存在しなかった 。同様の徴候が、感染されなかったコントロール動物に見られた。

第６図。櫛状板に感染されかつ感染後９日間でスキャンされたＨＳＶ−１（ＫＯ ３）−感染ニュージ−ランドホワイトラビットの脳走査ラジオグラフィの画像。

それぞれ３視野での４つの連続した放射能分布図は、経過時間順にＡ−Ｄとして 示されている。放射能分布図６Ｄは、［＋２３ｉ］−ＩＶａｒａＵの注入後１４ ．５時間で得られた。強い局在化の領域（２，２Ｘ＝標的；バックグラウンド比 ）が、嗅球の領域において認められる。

発明の実施例の詳細な説明 我々は、ＨＳＶ（および推定によりこのことはＶＺＶ。

ＥＢＶまたは人の臨床上および／または獣医学的に重要な任意のｄＴＫ−生産ヘ ルペスウィルスに当てはまる）に感染された細胞が、［”　Ｉ］−ＩＶａｒａＵ 、または代替的に、ここに“［”Ｘ］　−ＸＶａｒａＵ’　ｓ”として表される 任意の抗ウィルス５　（Ｅ）−（２−ハロゲノビニル）−１（−β−Ｄ−アラビ ノフラノシル）ウラシルをリン酸化する酵素活性を生産することを示してきた。

このことは、認め得るウィルスのｄＴＫ、たとえばＣＭＶを生産することなしに 細胞の酵素を介して取込みを引き起こすウィルスについても適用できるであろう 。ウィルスのｄＴＫ’　ｓによる抗ウイルスヌクレオシドに対するこの基質選択 性は、多（の抗ウィルス化合物に対して認められてきた。しかしながら、我々は 、この場合、正常な感染されていない細胞がＣ′″ｌ］　−ＩＶａｒａＵの顕著 な取込みを示さないことを認めてきた。対照的に、我々は、ウィルスによって感 染された細胞が、［”　Ｉ］　−ＩＶａｒａＵの取込みを速やかにもたらすこと を見いだしてきた。感染された細胞への移行およびそのリン酸化された生成物へ の変換が起こる一方、［”ｌ］−ＩＶウラシルへの非特異的な分解は認められな かった。

特に、我々は、［”　ＩコーＩＶａｒａＵが、この試薬で処理された正常な細胞 中で認められる濃度のおよそ１０００ないし２０００倍で感染された細胞により 取り込まれることを見いだしてきた。感染された細胞へのこの高い特異的な集中 は、ヌクレオシドのリン酸化を起こし、かつそうすることにより得られたリン酸 エステルを細胞内に取込む、ヘルペスウィルスにより誘導されたｄＴＫ’　ｓの 作用に依存している。我々の検出水準において、［′″Ｉ］　−ＩＶａｒａＵは 正常で感染されていない細胞内で、リン酸化されずかつ／または取込まれない。

この試薬群の仮に提案された作用機構は、［“Ｉ］−１ＶａｒａＵが基本的な例 として用いられた以下の図に要約される。

上に示すように、［”　ＩＦ−ＩＶａｒａＵＭＰは、［′″Ｉ］　−ＩＶａｒａ Ｕ５’　−−リン酸の省略形であり、最初のヌクレオシド生成物はｄＴＫ’　Ｓ として知られるヘルペスウィルス特異的酵素によって形成される。［”ＩＦ−Ｉ ＶａｒａＵＭＰは、［”　ＩＦ　−”ＩＶａ　ｒａＵＤＰとして省略される［” 　ＩコーＩＶａｒａＵ　５’　−ニリン酸の形成を触媒するヘルペスウィルス特 異的チミジル化キナーゼ活性をも示す（選ばれたヘルペスウィルスのための）同 じヘルペスタンパク質（ｄＴＫ）により再びリン酸化される。

そして細胞は、さらにヌクレオチドを形成するであろう。

ＰｙＮＰ’　ｓは、ヌクレオシド抗ウィルス剤の開発を大きく妨害してきた広範 囲に存在する人の酵素である。Ｐ７ＮＰ′　Ｓは、この一連のヌクレオシドおよ びヌクレオチドのほとんどを速やかに分解する。我々は、ＰｙＮＰ’　ｓが、非 天然の糖の部分、アラビノースのため、［”　ＩＦ　−ＩＶａｒａＵに対して相 対的に不活性であることを発見してきた。ＰｙＮＰ’　ｓの作用は、ヌクレオシ ドを糖と塩基の部分に分解する“加リン酸分解”をもたらす。もしこの活性が、 ［”　１コーＩＶａｒａＵに働いたならば、それは、不活性な代謝物、［′″Ｉ ］−ＩＶＵに変換されたであろう。

我々の検出方法を用いると、［”　ＩＦ−ＩＶａｒａＵによる処理の後、［”　 ＩＦ−ＩＶＵは認められなかった。また、たとえそれが形成されても、それはと るに足らない量である。ＢＶａｒａＵもまた、ＰｙＮＰ’　ｓの分解に対して抵 抗性であり、すべての［′″ＸＸコーＸＶａｒａＵ’ｓが、同様の標的攻撃特性 を有するであろうことを示唆している。

したがって、医者は、最適な使用および安全な特性のための放射性核種を選択す ることにより、ガンマ線スキャンに対しては（たとえば、＋２３ｉ、＋３１　１ １または５１２Ｂｒを選択することにより）、それに対して陽電子のスキャンに 対しては（たとえば、＋２３　Ｉ、＋２７　■、”、Ｂｒ。

７６　Ｂｒ、７７１３ｒ、＋１２８ｒ、３４Ｃ１を選択することにより）、それ に対して生体外で簡単に使用するために半減期が長くかつ安全なものとして（た とえば　＋２５ｉを選択することにより）、それに対し、致死的な効果のあるア ルファおよび／またはベータ放射線をウィルスの感染部位に照射することにより 、致死的な放射線の集中のためにウィルスのｄＴＫ’　ｓによって媒介された放 射線治療的抗ウイルス効果をもたらすものとして（たとえば、＋３１　１１１ａ ２Ｂｒを選択することにより）、それに対し、致死的な効果のオージェ電子崩壊 を核内のウィルスＤＮＡ複製部位に照射することにより、致死的な放射線の集中 によるウィルスのｄＴＫ’　ｓによって媒介された放射線治療的抗ウイルス効果 をもたらすものとして（たとえば　１２５ｊ、７’Ｂｒを選択することにより） 、医者はその用途に従った薬剤を仕立てることができる。

我々は、新規の放射性ラベルされたヌクレオシド、１−β−Ｄ−アラビノフラノ シルー５　（Ｅ）−（２−［’″　Ｉコーヨードビニル）ウラシル（［＊Ｉ］− ＩＶａｒａＵ）を、新規の合成方法およびこの試薬を調製するための一般的な前 駆体、１−　（２，３，５−トリー〇−アセチルーβ−Ｄ−アラビノフラノシル ）　−５（ＺおよびＥ）−（２−トリメチルシリルビニル）ウラシルとともに発 明した。ここにおいて１１は生産物のための特別な使用に従って選択されたヨウ 素の放射性核種を代表し、さらに、′″ｌは、生産物のための特別な使用に従っ て選択されたハロゲン放射性核種を代表する′″Ｘによって置き換えることがで きる。上記前駆体化合物は、終りから２番目の合成工程において、放射性ラベル されたヨウ素と反応させることができ、その場合、一般的に入手可能な化合物、 ＮａＩ２５■、Ｎａ’　２３１１およびＮＢＩ　３１　１１または代替的に、よ り小さい範囲で使用されるヨウ素の放射性核種、ＮａＩ２７１を使用する。さら に、代替的には、その他のハロゲン放射性核種、たとえば、Ｎａ”Ｂｒ、Ｎａ” Ｂｒ、Ｎａ”Ｂｒ、Ｎａ”Ｂｒ、Ｎａ”ＣＩ、またはこれらの放射性ハロゲンの 代替的な塩を用いる。感染部へのヌクレオシドの局在化の機構が、本質的に、放 射性各為の性質に依存しないため、他の適切なハロゲン放射性核種が、臨床上適 用できる放射性核種の科学および技術における将来の発展的な事件においてこの 発明を用いるために、適用することかできるであろう。

これらの新規な放射性ラベルされた試薬を生産するために我々が処方した方法が 、非常に穏やかであることを留意すべきである。すなわち、化学反応は、室温ま たはそれ以下において通常の溶剤中で行なわれる。ビニル−ハロゲン結合は、共 有結合であり、かつ操作条件に対して安定である。化合物中に放射性ラベルされ たハロゲンを導入するために使用されてきたその他の方法は、しばしば荒い化学 的および／または反応の条件を含む［４９，５０］。＋２３１が、生体内におけ る診断手段として用いられる放射性核種として選ばれた場合、ガンマ線源として の特異性の程度が高く、かつ半減期か非常に短いため、放射性核種（ナトリウム またはアンモニウム塩として）の付加から、合成物を診断薬として薬理学的に純 粋な状態に仕上げるまでの間に、わずかな時間しかかからないような合成方法を 発明することか必要であった。

我々のプロセスによって、放射性薬剤は、病院の放射性物質を取り扱う薬事部に おいて小さな研究室て速やかに生成させることかできる。反応条件は穏やかであ り、標準的でかつ再現し易（、しかも高価でなくかつ使い捨てができる装置を使 用する。我々のプロセスの成功は、トリメチルシリルにハロゲンが速やかに置き 換わるよう反応する一般的な前駆体試薬によって達成されてきた。　１′■、　 ＋５■、およびＩＩＩ　ｌは、それぞれ、臨床的に使い易い、安全であるととも に半減期が長い、および致死的な放射性核種であるという理想的な組み合わせを 与えるため、初期の実験はヨウ素の放射性核種を用いて行なわれた。

我々の新規な方法は、ＩＶａｒａＵを高い収率で与えることを必要としたととも に、上記のような安定でありしかし高い反応性を存する前駆体から、ＩＶａｒａ Ｕを実際にその場で臨床的に合成するために柔軟性が必要とされた。

この一般的な方法は、個々のハロゲンに対して特定的なものではなく、しかもそ のためにその他のハロゲンに対して速やかに適用される。第１図に概要か示され るように、−塩化ヨウ素は、Ｃ５においてビニルシランと反応し、トリメチルシ リルの場所にヨウ素が置換される。−塩化ヨウ素は、放射活性の状態で購入され るＮａ”　Ｉから中間体としてその場で合成される。すべての反応は速やかであ る。加えて、我々は、そのような反応のため、ストイキオメトリなヨウ素の放射 性核種源として一塩化ヨウ素を効果的に形成するために、二塩化フェニルヨウ素 （Ｉ［）の新規な使用を行なった。代替的に、そのような反応において一般的な 放射性ハロゲン化のため、その場で混合されたハロゲン■Ｆ、ＢｒＦ、およびＣ ＩＦを形成するために、ニフフ化キセノンが使用されてきた。

例１ １ＶａｒａＵおよびそのビニルシラン前駆体の新規な調製この発明のプロセスの 反応の手順は、図面のうち第１図に図式的に示される。

第１図に示されるように、商業的に入手可能なウリジンが、公開された方法によ って高い収率でそのアラビノ類縁体に変換される［５４］。この化合物は、我々 の公表された方法に従って、アセチル化により保護され、次に０５においてヨウ 素化され、トリメチルシリルアセチレンと結合される［５５−５７］。リンドラ −触媒を用いる注意深い還元は、ＴＭＳＶａｒ　ａＵへの良好な変換を与える。

（ｃ）　トリー〇−アセチル−ＴＭＳＶ−ａｒａＵのラベル化されていないヨウ 素化 （ｉ）　二塩化フェニルヨウ素（Ｉ［）を用いてＣ”Ｉ）−１ＶａｒａＵは、前 駆体、ＴＭＳＶａｒａＵから、ヨウ化ナトリウムおよび二塩化フェニルヨウ素（ Ｉ［［）からその場で形成される一塩化ヨウ素（ＩＣＩ）を用いて合成される。

二塩化フェニルヨウ素（Ｉｆｆ）は、酸化剤および塩素供給剤として働き、引き 続いてビニル側鎖において（Ｃ２で）、トランス（Ｅ）配置で、７ＭＳ基をヨウ 素と置換させるような、−塩化ヨウ素の形成をもたらす。ヨウ化ナトリウム（１ ２ｍｇ、０．Ｏ８ｍＭｏ１．１．３ｅｑ）を、攪拌子か備えられた３ｍｌの反応 バイアルに添加し、光から守るためにアルミニウムホイルで包んだ。１５０μｍ の水を添加し、続いて分析用のグレードのベンゼン１ｍｌを添加した。バイアル を水浴に置き、２０ｍｇ　（０，０７４ｍＭｏｌｅ、１．２ｅｑ）の二塩化フェ ニルヨウ素（■）を添加し、〜１０℃で２０−３０分間攪拌して反応させた。浴 槽から残った氷を取り除き、２８ｍｇ　（０，０６ｍＭｏｌｅ）のＴＭＳＶａｒ ａＵを添加した。反応混合物を１／２時間かけて１０℃から２２°Ｃ（周囲の温 度）にまで温め、さらに２時間攪拌を続けた。この反応時間は減らすことができ る。ＨＰＬＣの研究に基づき、反応は速やかであるが、薄い溶液であるためこの 時間にわたっていた。

５５分で、７０％のヨウ素および３０％の未反応のＴＭＳＶａ　ｒａＵが存在し た。反応は、１ｍｌの５％ＮａＨＳＯ２（亜硫酸水素ナトリウム）の添加によっ て止められ、かつ未反応のＩＣＩを破壊するために、２０−３０分間攪拌させら れた。攪拌時間が短いと、シリカゲルカラムから色のついた生成物が溶出してき た。ベンゼン層を除き、１０〃パスツールピペツトに１／２だけシリカゲルを詰 めることにより調製されたシリカゲルの乾燥カラムに供した。水性の重亜硫酸層 を１ｍｌのベンゼンを添加して洗浄し、この有機層もまたカラムに供した。次に 、カラムをカラムの２倍の容量（〜２ｍ１）のジクロロメタンで洗浄し、二塩化 フェニルヨウ素（ＩＩ）の副産物を取り除いた後、カラムの３倍の容量のジクロ ロメタン：酢酸エチル［ＣＨ２Ｃｌ２　：　Ｅ　ｔＯＡｃ　（２：　Ｉ）　］に よって溶出した。生成物は、酢酸エチルを含む最初の２つの１ｍｌ各分に認めら れた。

所望のフラクションを含む反応バイアルに不活性ガスを吹き込むことにより溶剤 を除去した。

（ｉｉ）　ニフッ化キセノンを用いて 酸化剤およびフッ素供給剤としてニフッ化キセノンを用いる実験は、Ｎａｌとと もに等しくうまくいき、さらに加えて、放射性ブロモ−および放射性クロロ−ビ ニル化合物の合成のためのその他の放射性ハロゲンへの一般的な経路を与える。

（ｉ）　これらに限定されないが、Ｎ−ハロスフシイミド、クロラミン−Ｔ、ま たはポリマ結合誘導体のようなその他の酸化剤も、放射性ヨウ素塩およびＴＭＳ ＶａｒａＵとともに用いることができる。

上記トリー〇−アセチル化合物（ｃａ、２３ｍｇ）をＨＰＬＣグレードメタノー ルに溶かし、金属ナトリウムの小片（ピンヘッドよりもいくらか大きな物）を添 加した。反応が進む間、溶液を室温で４０分間攪拌した。この反応は、ＴＬＣ（ クロロホルム：メタノール、８：２）によってモニタした。脱保護された化合物 は、〜０．７５のＲｒを有することが認められた。メタノール溶液を、２．５ｍ ｌの１００％エタノール中に濃ＨＣＩを２滴添加した溶液を注意深く添加するこ とによって中和し、範囲が６．０−８゜０のＰＨ試験紙によって確かめた。溶剤 を蒸発によって除去した。残った固体は、黄色が付いており、その色は酢酸エチ ルまたは乾燥エーテルを用いてかなり攪拌することにより取り除くことができた 。この処理の結果、いくらかの塩化ナトリウムを含む黄色がかった白色の生成物 約１５ｍｇを得た。脱保護された化合物のＨＰＬＣは、次に示す条件で２．２分 の保持時間を示した：　Ｃ＋＊　（４ｍｍｘ　２５　ｃｍ）；Ａ中４７％Ｂ［Ａ ：Ｈ，Ｏ中０．］％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）；　Ｂ　：　Ｈ，０９６０％ア セトニトリル（ＭｅＣＮ）のＴＦＡ］　、この化合物は、ＩＶａｒａＵの標準試 料と直接比較した場合、同一のスペクトルおよびクロマトグラフィー上の挙動を 示した。それは、約１７５℃から分解するとともに溶融した。生成物は、２５６ および３００ｎｍで紫外吸収極大を有し、ｍ／ｚ３９６でマススペクトルの分子 イオンを与えた。この化合物の元素分析のデータは、±０．４％で理論値と一致 した。この化合物は、ジメチルスルホキシド溶液中で、＋２０核磁気共鳴の化学 シフトを、δ１４９．　１？　（Ｃ２）、１６１．　８１　（Ｃ４）、１１０． ０２　（Ｃ５）、１４０．９６　（Ｃ６）、１３７゜０６および８４．７０　（ ｅｔｈｅｎｙｌ　Ｃ１およびＣ２）、８５．２９　（ＣＭ）、７５．２３　（Ｃ ２”）、７４゜９３（Ｃ３１，７７，５４（Ｃ４−）、６０．４４　（Ｃ５′） を存した。

最初の反応（例１）は、ヨウ化ナトリウムの存在下で、大量のＩＶａｒａＵを生 成した。しかしながら、放射性ラベルされた物質を合成するために、反応は、純 粋な放射性核種として少量のＮａ　（”Ｉ）−１を提供するさらなる希釈を必要 とした。１つの“担体が添加された″生成物は、反応物の全体の濃度が変わるの を防ぐために、低い比活性形成された。このことは、Ｎａ　［”’Ｉ］　−１／ ＮａＯＨの商業的サンプル（２０８ｍ中２ｍＣ１：比活性１７Ｃｉ／ｍｇ）をラ ベルされていないＮａｌと、反応に先立って約１：５０００の比で混合すること により達成された。この溶液を同量の燐酸緩衝生理塩水（ｐＨ７，４）を用いて 、その塩溶液を放射性核種を含むＶ−バイアルに添加することにより中和した。

引続き、スペクトル用のベンゼン２５μｍを添加し、さらに０．５ｍｇのＮａＴ および１．Ｏｍｇの二塩化フェニルヨウ素（Ｉ［）を添加した。反応混合物を激 しく浸透し、プラスチックの安全容器（これは＋ｔｓ　１−ヨウ化ナトリウムと ともに供給される）に静置して、光から保護した。頻繁に浸透を行なうことによ って、反応を室温で１５分間進めた。２つの層、上には暗赤色の有機層、および 少し黄色がかった水層が眼て見えた。１．４ｍｇのＴＭＳＶａｒａＵを２５μｍ のベンゼンに溶かし、ガラスのキャピラリーピペットを用いてＶ−バイアルに添 加した。

バイアルを安全容器に戻し、１５分おきに１．５時間浸透した。この反応の終わ りで、０．５ｍｌの５％重亜硫酸水溶液を反応バイアルに添加した。１５゛の後 、抽出のプロセスを進めるためさらにベンゼンを加えた。内容物をパスツールピ ペットで取り除き、さらに層が分離された。ベンゼン層をガラスパスツールピペ ットの末端部分に形成された乾燥シリカゲルカラムに添加した。水性重亜硫酸の 層をベンゼンで抽出し、ベンゼンをカラムに添加した。カラムを１カラム容量の ジクロロメタンで洗浄した。そして、生成物をジクロロメタン：酢酸エチル（２ ：１）混合物で溶出し、１つのバイアルに集めた。バイアルにＮ２ガスの気流を くぐらすことにより溶剤を除去した。アセチル保護基を除去するために、ナトリ ウムの小片を１ｍｌのＨＰＬＣグレードメタノールに添加して、ナトリウムメト キシド溶液を形成した。この溶液０．５ｍｌを乾燥した化合物に添加した。１５ 分の後、脱保護反応の進行をシリカ被覆ＴＬはクロロホルム：メタノール（８： 　２）であった。脱保護された化合物は約０．７５のＲ１を有する。溶液は中和 されておらず、メタノールが一夜蒸発させられる。乾燥された残渣を生物学的研 究のため、０．５ｍ１ＰＢＳＳｐＨ７゜４に溶かした。

例３ 最初の放射性ラベルされた合成における生成物の分析生成物の濃度およびその比 活性を決定するために、０Ｄ２Ｉ◇においてＩＶａｒａＵのための標準曲線が確 立された以下はその分析の結果であった。

表１ これは次の回帰式を与えた。

［１１度］＝０．０７Ｘ−０．００９　この式から３０５μｇの物質か合成され たことか決定された。回帰曲線もまた商業的に入手可能な５−　［”！］−ヨー ドデオキシシチジンのガンマ線活性（２２０ＱＣｉ／ｍｍｏ　］、３７５ｐｃｉ ／ｍｌ）に対して作られ、μｃｉ／ｍ１＝５．４５１ｅ−７ｘ−３，７４６ｅ− ４であった。これにより、生）　放物、［”’Ｉ］　−１Ｖａｒ　ａＵの比活性 が４６３ｕＣｉ／μｍｏｌであることか決定された。この物質は、ここに報告さ れた実験のすべてを行なうために用いられた。

例４ ”’ＴＶａｒａＵのＨ８Ｖ−１−感染ブライマリーラビットキドネイ（ＰＲＫ） 細胞への取込 “担体付加された”　［”’Ｉ］　−１ＶａｒａＵを用いて、ラベルされていな いＩＶａｒａＵの感染された細胞、対、感染されていない細胞の取込の比活性に ついて我々の発見を確かめ、かつこの取込の比活性がガンマ線カウントにより検 出できることを確かめるために、実験を行なった。分離した＃６１５は、生体外 においてアシクロビルに非常に耐性である。６１５のプラーク生成された３つの 耐性サブストレインは、もう１つの目的のために、特徴付けされた。

その２つは、正常な量のｄＴＫを発現する一方、生体外および生体内においてア シクロビルに対し耐性を示す純粋なりＮＡポリメラーゼ変異株（６１５，５，６ １５，８）である。３番目の分離株（６１５，３）は、アシクロビルをリン酸化 せず、かつデオキシチミジンを非常にわずかしかリン酸化しないｄＴＫ欠損株で ある。前処理“野性−型”分離株（任意のその他のＨ３Ｖ−１分離株のためのよ うな薬剤に感受性のもの）もまた、プラーク生成しく２９４゜１）、かつ感受性 のコントロールとして用いた。ＡＣＧ’４として知られるＫ２Ｓ株の研究室で誘 導されたアシクロビル耐性変異株を用いた［Ｈ３Ｖ−ルファレンス株は、抗ウィ ルス剤、アシクロビルに研究室でさらすことにより、ｄＴＫ酵素か欠損するよう 人為的に誘導されたものである（ウィルスのｄＴＫ”ｓは、この株がら完全にな くなっている）。それはｄＴＫポリペプチドを欠損し、かつバーバード大学、薬 理学研究室のトン・コーエン博士から我々の研究室に提供された］。この研究の ために、ブライマリーラビットキドネイ細胞（ＰＲＫ）を、組織培養グレードの 回転瓶の中で、３７°ＣにおいてＩＰＰＭで回転しながら一夜、密集するまで増 殖させた。回転瓶は、約１．４Ｘ］０６細胞／瓶を存していた。それぞれの瓶を １．０ｍｌの培地あたりｌＯのｍｏｉで感染させ、かつ３７℃において６時間イ ンキュベートした。　［”’ＩコーＩＶａｒａＵ　（１００μｍ）の約４．８Ｘ １０＠カウントバーミニツト、以下には“ＣＰＭ”として示す、をそれぞれの瓶 に添加し、引き続いて３７℃で０．７５時間インキュベートした。次に、ＥＤＴ Ａ中０．２５％トリプシン２．０ｍｌで置き換え、細胞かプラスチックから離れ るまで３７℃でインキュベートした後、１２Ｘ７５ｒｎｍにプラスチック瓶に移 し、８００Ｘｇでペレットになるまで遠心分離し、ＰＢＳ、ＰＨ７，４，４°Ｃ において３回洗浄した後、ガンマ線カウンタ（ベックマン）で計数した。

この研究の結果を第２図に示す。

第２図に示されるように、バックグラウンドのみは、ｄＴＫ−陰性法、ＡＣＧ’ 　４て感染された細胞中で検出された。対照的に、野性−型およびＤＮＡポリメ ラーゼが変えられた（ｄＴＫ−正常）変異株で感染された細胞では、大量の取込 が検出された。低いが積極的な取込が、そのアシクロビルおよびデオキシチミジ ンリン酸化能力に基づいて予期されたように、６１５．３　（ｄＴＫ−変異）株 で見られた。

例５ Ｈ３Ｖ−１−感染ブライマリーラビットキドネイ細胞中への１２ＪＶａｒａＵの 取込の可逆性 この試薬の取込の可逆性がとのぐらいにわたって起こるか決定するために、“担 体に付加された′物質か使用された（ヌクレオシドに対する脱リン酸化および感 染細胞からの損失）。この目的のため、回転瓶に例４て記載したように、ＰＲＫ 細胞を再び植え、野性−型の分離株、２９４゜１およびＡＣＧ’　４　（ｄＴＫ 陰性）をそれぞれ１０ｍｏ　ｉで感染させた。３７℃で６時間のインキュベーシ ョンの後、４Ｘ１０’ｃｐｍのＥ　”！］　−ＩＶａｒａＵを添加し、インキュ ベーションをさらに０，７５時間続けた。次に培地を取り除き、単層をＰＢＳ、 ｐＨ７，４，３７°Ｃで洗浄し、かつ培地をヌクレオシドを添加しないで取り替 えた。

インキュベーションを３７°Ｃで回転装置において再び始めた。０．１．２．３ ．４．８．１２．１６．２０，２４時間で、中断させた。細胞をベレットにし、 洗浄しかつガンマ線カウンタて計数した。その結果を第３図に示す。取込の可逆 性か認められた。それは指数関数的な形て２４時間を通して続いた。しかしなが ら、１２時間において、２９４．１とＡＣＧ’　４の間の取込保持比は、約２倍 になったままであった。実際に、その差は２４時間においてもやはり明らかであ った。

例６ 多数の感染および時間経過後の感染の作用としてのＨ３Ｖ［”Ｉ］　−ＩＶａ　 ｒ　ａＵのＨ８Ｖ−感染細胞への取込を、時間および摂取サイズの関数として評 価するために、ＰＲＫ細胞を集まるまで、組織培養グレートのプラスチック回転 瓶の底で増殖させた。この実験において、細胞数は１．２’９Ｘ１０’てあった 。細胞当たりの摂取は、Ｈ３Ｖ−１株２９４．１＜野性型）の１．０．　ｌ、０ ．０１．０゜００１、および０．０００１プラーク形成ユニツト、以下“ＰＦＵ ”と示すを用いた。培地を取り除き、不活性化されたウシ胎児血清２％および種 々のウィルス摂取物を含むハンクス（Ｈａｎｋ’　ｓ）　“＋９９”で置き換え た。ウィルス添加の後、瓶を室温で１針当たり１８００回て３０分間回転し、３ ７℃て、２．３．４．５．６．７．８、ｌ０１１２．２０．２２．２４時間イン キュベートした。インキュヘーション期間完了前４５分で、４．０ＸＩＯ’　ｃ ｐｍの［”５１］　ＩＶａｒａＵを１００．ｃｚｌのＰＢＳてウィルス増殖培地 に添加した。次に細胞を０．２５％トリプシン２．０ｍｌでトリプシン消化し、 １２Ｘ７５ｍｌプラスチック瓶に移して８００×ｇで１０分間遠心分離した後、 冷ＰＢＳＸ３、ｐＨ７，，４で洗浄した。最終のペレットを１．０ｍｌの蒸留水 に再懸濁し、ガンマ線カウンタで計測した。この実験の結果を第４図に示す。

これらの結果は、細胞当たりＩＰＦＵの摂取において、Ｅ”’１コーＩＶａｒａ Ｕの取込か４，０時間はどてＨ８Ｖ−１の増殖を検出することを示している。こ のことは、単層においてとのような眼に見えて検出可能な変化の進行においても 少なくとも４時間でである。ｄＴＫ活性は、細胞当たり０．０００ＩＰ’ＦＵの ｍｏｉを用いるこの検定により２０時間で検出される（瓶当たり約１３０の感染 粒子）。第４図において眼ではっきりとしないか、ｍｏｉ＝０゜０００１におい て２０時間での取込はバックグラウンドの３倍である。したがって、将来の実験 ては、低い摂取のウィルスの感染のより早期の検出が可能になるであろう。

例７ 生体外におけるＨ３Ｖ感染のための［１２μｌ　−１ＶａｒａＵの的を絞られた 抗ウイルス放射線治療の効果の測定ウィルス特異的な致死を引き起こす［”’？ ］　−１ＶａｒａＵの放射線治療の分としての特異的な作用を測定するために、 生体外において、ラベルされていないＩ　Ｖ　ａ　ｒ　ａＵの抗ウイルス効果と 、同しモル（質量）の量の［”’Ｉ］−ＩＶａｒａＵの抗ウイルス効果か比較さ れた。

抗ウイルス検定の方法は、前に示したとおりである［４１］。簡単に言えば、Ｖ ＥＲＯ細胞をアメリカンタイプカルチャーコレクシ３ンから得た。細胞を集まる まで増殖させ、Ｈ３Ｖ−］、株Ｆ：またはＨ３Ｖ−２、株Ｇて感染させて、レフ ァレンス株として使用した。これらの株は、シカゴ大学（シカゴＩＬ）、バーナ ードロイツマン（ＢｅｒｎａｒｄＲｏｉｚｍｅｎ）博士から入手した。我々は、 感染を示すために処理を行なわずに４８時間経過した後、９５％≦の細胞変性効 果、以下に“ＣＰＥ”として示す、を与えるために必要とされるウィルスの量を 、ｌ　ＤＵ、”と規定した。９６ウエルプレートにウェル当たり２ＸＩＯ’ｍ胞 を摂取した。約１８時間の後に、ウィルスの貯留物を］　Ｄ　Ｕ　ｏの最終濃度 まで希釈しく１回で１）、それぞれのウェル（ウィルスが感染されておらず薬剤 の希釈物を含む細胞のコントロールを除く）に、５０μｍの容量で添加した。次 に、プレートを３７°Ｃで５％Ｃ０２の雰囲気中で一時間インキユベートした。

その間に抗ウィルス剤の希釈物を調製し、［”’Ｔ］　−１Ｖａ　ｒ　ａＵの０ ．５’０μｃｉ／ｍｌで処理されたウェル中の放射線量に等しい最も高い濃度の ＩＶａｒａＵＯ，０６５μｇ／ｍｌから初め、次に、連続的に１６回で２倍に希 釈し、そして１時間の吸着期間の終わりに、ウェルに５０μｌの容量で添加した 。すべての実験を４連で行ない、結果をそれぞれの薬剤希釈物におけるそれら４ つのウェルの平均として表した。ラベルされていないＩＶａｒａＵおよび［１２ ’Ｔ］　−１Ｖａ　ｒ　ａＵを同じ濃度および希釈で並行して比較した。９６ウ エルプレートのそれぞれについて２つのタイプのコントロールをおいた。１つの カラムには偽のウィルス摂取物［５０μｍの培地１９９（補助剤とともに）単独 コを入れ、もう１つのカラムには偽の薬剤処理物［５０μｌの培地１９９（補助 剤とともに）単独］を入れた。プレートを卿卵器に戻し、３７°Ｃて５％ＣＯ２ の雰囲気中に２日間保持した後、色素を用いて分析した。ＰＢＳＳｐＨ６，０中 １５％ニュートラルレッド５０μｍを、それぞれのウェルに添加し、３７°Ｃで ５％Ｃｏ２の雰囲気中において４５分間インキュベートした。次に色素を吸引し 、単層をＰＢＳ、ｐＨ６，０で２回洗浄した。培地を取り除き、乾燥するまでプ レートから液体を吸い取った。そして、分析か準備できるまでプレートを凍結し た。このとき、１００μｌの細胞溶解緩衝液を添加し、それぞれのウェルの吸光 度を５７０ｎｍ／４１０ｎｍにおいてダイナチック（Ｄｙｎ　ａ　ｔ　ｅ　ｃ　 ｈ＠）プレートリーダー上で測定した。

次に、コントロール（ＴＤＳ。）と比較して、ＣＰＥの５０％減少を達成するた めに必要とされた投与量を、対数−投与応答曲線を用いて算出した。試験された 最も高い投与量（０，０６５μｇ／ｍｌ）において、ラベルされていなイＴＶａ 　ｒ　ａＵテｌ、ｔ、ＨＳＶ−］またハＨＳ　Ｖ　−２ｉ：対する抗ウイルス効 果が見られなかった。このことは、我々の研究室の以前のデータと一致し、ＶＥ ＲＯ細胞においてこの形式の検定を用い、ラベルされていないＩＶａ　ｒ　ａＵ ては、ＨＳＶ−１１：対して抗ウィルスＩＤ５ｏが１．０Ｂｇ／ｍ１≦であり、 ＨＳＶ−２に対しては２０１１ｇ／ｍ１以上でも抗ウィルス活性か認められなか ったことを示している。

この実験において、０．０６５μｇ／ｍｌで、ＨＳＶ−２に対する［　”’Ｉ］ 　−１Ｖａ　ｒ　ａＵの抗ウイルス効果は認められなかった。しかしながら、対 照的に、ＨＳＶ−１、株Ｆに対する［　”’Ｉ］　−１ＶａｒａＵのＩＤ、、は 、０゜０１　Ｔｕｇ／ｍｌ　（０，１３μＣｉ／ｍｌ）であった。

我々は、ラベルされていない化合物の抗ウィルス活性に基づいて考えられるより もずっと低い濃度において、［１”Ｉ］　−１Ｖａ　ｒ　ａＵか顕著な放射線治 療的抗ウイルス効果を示すということを結論づける。このことは、この化合物の 放射線の作用が特異的に集中することから導かれる。

そのような集中された放射線治療のための最適な同位体を見い出すためのさらな る研究は進行中である。

耐性薬剤による脳のスキャン 生体内における診断用走査試薬としての［”Ｔ］−ＩＶａｒａＵの使用の可能性 を評価するために、ニューシーラントホワイトラビットにおいて、単純ヘルペス ウィルス脳炎の動物モデルを作り上げた。右の櫛状板にＨＳＶ−１、株ＫＯ３（ ３，７ｘｌＯ”　ｐｆｕ／ｍｌ）を１００μｌ摂取した後５日間で、［”’Ｔ］ 　−１ＶａｒａＵ　（１３６μＣｉ　：　３７Ｃｉ／ｍｍｏ　１）をその場にお ける潅流および献体の１時間前に３匹の感染された兎に与えた。５−７μｍ画分 を免疫パーオキシダーゼでラベルされたＨＳＶ−１モノクローナル抗体で標識し 、０．００５８ｍｍ’グリッドによってカウントし、グリッドの全数に対するパ ーオキシダーゼ陽性数を査定した。最大の感染か、３２．９％パーオキシダーゼ 陽性で右の嗅球において認められた。この領域において［”’Ｉ］　−１Ｖａｒ ａＵの取込もまた最大であり、組織１グラムあたり平均１３．８７２ｃｐｍであ った。対照的に、背面／左の脳において取込は最小であり（２，９３８ｃ　ｐｍ ／ｇ）　、そこにおいて免疫パーオキシダーゼの標識は見られなかった。兎は、 感染の後７週間で殺し、５．４μＣｉのトレーサーを注入した。右側頭葉に壊死 が局在化しているのが認められ（２８，５％パーオキシダーゼ陽性）１グラムあ たり８，２２６ｃｐｍの取込であったのに対して、左側頭葉ではグラムあたり２ ６８ｃｐｍであった。

次に、　［Ｉ２”Ｉ］　−ＩＶａ　ｒ　ａＵ　（２］。］５−８７．５Ｃｉ／ｍ ｍｏｌを感染後５日間たった２匹の兎および感染されていないコントロールに投 与した。３．５時間で小頭のガンマ線カメラにおいて得られた像は、感染された 動物において頭の前の領域における促進された取込を示した。

重要なこの領域をコンピュータによって描き、感染された動物の後の脳における 同じ領域（ｅＪ的／バックグラウンド＝１．６：］）とその感染されていないフ ントロールの前の領域（標的／バックグラウンド＝２．７：１）との間で画素あ たりのカウントの比について比較した。別の実験において、同じ兎のモデルをＨ ＳＶ脳炎にかかった患者からのＨＳＶ−１（Ｗｈｉｔｌｅｙｌ）のより悪性の株 を感染させ、感染の後７日間でスキャンを行なった。このスキャンからの側方お よび前方の観察が第５図に示される。これらのスキャンにおいて、鮮明な放射線 画像が嗅球の領域および急性のＨＳＶ−１感染が起こっている鼻咽頭において示 された。付加的な取込か、鼻咽頭の中心部および甲状腺において見られた。感染 されていない動物および（第５Ｂ図に示されるように潜在的に感染された動物） は、この中心部および甲状腺にのみ取込を示した。検体に供された後のこの動物 における感染された嗅球での取込の促進は、人におけるＣＮＳ感染の放射線走査 研究においてこの試薬か可能性かあることをはっきりさせた。第６図は、放射線 グラフプリントの形で、スキャンの９日前、櫛状板を介して感染されたＨＳＶ− １（ＫＯＳ）脳炎を有する動物からの一連のオーバータイム放射線スキャンを示 している。［１２’　Ｎ−ＩＶａｒａＵの注入の後、異なる脳の方向からの３つ の放射線分布図を得た。促進された取込の領域の局在化は、左の嗅球の領域にお いて見られ、それは感染後の早い期間において明らかであり、かつ（感染後時間 が経つとともに６Ａ−Ｄ）相対的により密になり、バックグラウンドの取込が動 物からクリアになる１４時間（６Ｄ）においては、分布図６Ｄにおいて、バック グラウンドに対するターゲットの比は２．２となる。

発明のための使用の概要 我々は、ヨウ素の任意のすなわちすべての可能な同位体を用いて、放射性ラベル された［”　Ｉ］　−ＴＶａｒａＵが形成されるであろうこと、および任意のす なわちすべての可能なハロゲンの同位体を用いて、［”　Ｘ］　−ＸＶａ　ｒ　 ａＵか形成されるであろうことを予期するであろう。適切なガンマ線もしくは陽 電子を放射するヨウ素、またはその他の適切なハロゲン放射性核種を、［”　Ｉ ］　−１ＶａｒａＵまたはピＸ］　−ＸＶａ　ｒａＵの構造中に含有することは 、生体外および生体内において、ヘルペスウィルスの感染の“検出のための診断 手段としてこの試薬を育用にする。この試薬の構造中に、適切なアルファ線およ び／またはベータ線および／またはガンマ線を放射する、および／またはオブジ ェ１子崩壊を伴う、（特定的に放射性毒性である）ヨウ素の同位体、またはその 他の適切なハロゲン放射性核種を含むことは、ウィルスの感染部位に、アルファ 線および／またはベータ線の放射および／またはオブジェ１子崩壊の作用を正確 に集中させることによるヘルペスウィルス感染のためのユニークな放射線治療手 段としてこの試薬を有用にする。この試薬の使用は、限定されるものではないか 、次のことを含む。

１、　生体外での診断 この試薬の取込に関する感染細胞と非感染細胞の比が高いため、この試薬を用い てウィルスの増殖の分量か検出できる。したかって、この化合物は生体外におけ るウィルスの増殖のマーカーとして有用である。このことは次のことを可能にす る。

（ａ）　ウィルス培養の自動化。

（ｂ）　数時間で完了し得るような時点にまで、ウィルス培養の工程の速度を早 めること。このことは、妊娠中のヘルペスのスクリーニングのプロセスにもまた 適用することができ、それによって、新生児へのヘルペスの感染の転移を防ぐた めに、培養テストをすへての女性について出産中に行なうことかできる。さらに また、迅速なテストは、診断の速さか結果から見て非常に重要な皮膚と粘膜との 感染の治療を助けるであろう。

（Ｃ）　その作用かｄＴＫ活性に依存する抗ウィルス化合物に対してのウィルス 感染の迅速な検出。

（ｄ）　研究室での研究、ウィルス感染のテスト、またはウィルスの増殖の測定 か必要などのような状況をも含む適用可能な任意の環境において、Ｈ３Ｖ増殖を 測定するためこの試薬を用いて深いところに存在する感染か検出可能になるであ ろう。現在、患部か眼で見えかつ綿棒で接触できる皮膚または粘膜でない限り、 ウィルスの診断はしばしば失敗する。しばしば、医者はＬ断をつけることができ ず、または診断してもその試験のリスクを心配する。さらにまた、ある場合では 、たとえば、眼の深いところの感染は、生体組織検査が臨床上不可能である。

ヘルペスウィルスか関連した臨床上の症候群の生体内における特定的な診断のた めに必要とされる投与量は、近い将来、臨床の状況に応じて医者により決定され ることか期待される。しかしなから、特定的には、多くの場合において、生体内 における診断は、１ないし２０ｍＣｉ、全身の投与量の範囲で、同位体か静脈よ り注入されることにより成されるであろうことか予期される。これは、ヌクレオ シドをごくわずかな量しか必要としないので、静脈の１丸注入により１回でその 投与量を投与することかできる。必要とされるモル量における試薬の量は、合成 された物質の比活性により決定され得る。とにかく、その投与されたヌクレオシ ドの形態てのこの試薬の実際の量は、１日当たり１ｍｇより少ないであろう。あ る臨床の状況では、局所的または眼科学的なとちらかで診断薬を適用することか 好ましいてあろう。したがって、他の態様では静脈に投与されるような（ｌない し２０ｍＣ１）量を用いて、眼滴または軟膏または皮膚の塗布薬もしくは軟膏を 感染部位に直接適用するのが好ましいであろう。その後、保持された（取り込ま れた）ヌクレオシドの検定を行ない、ときにその試薬を自然に体から排除するか または物理的に排除する。

診断上の問題が存在しかつここに記載されたより高められた診断能力により恩恵 を受けるようなヘルペスウィルスに関連した臨床上の症候群は、限定されないが 、次のものを含む。

（ａ’）　ＨＳＶおよびＶＺＶ脳炎。

（ｂ）　ＨＳＶおよびＶＺＶの内臓の感染。

（Ｃ）　ＨＳＶの食道炎。

（ｄ）　ＨＳＶおよびＶＺＶ（７）肺炎。

（ｅ）　ＨＳＶおよびＶＺＶの新生児への感染。

（ｆ）　網膜炎、角膜炎、虹彩炎、葡萄膵炎、網膜壊死および帯状ヘルペス眼炎 を含む、ＨＳＶおよびｖＺｖの眼の感染。

（ｇ）　しはしば生殖器へのヘルペスの感染が伴われるＨ８Ｖ髄膜炎。

（ｈ　）　ＨＳ　ＶおよびｖＺｖの骨髄炎または神経根骨髄症。

（ｉ）　単純ヘルペスウィルスに引き起こされる側頭葉の癲癲。

（Ｄ　Ｂｅ１ｌ’ｓ　Ｐａ１ｓｙ／Ｒａｍ５ａｙ　Ｈｕｎｔ症候群およびその他 の形感の帯状ヘルペス耳炎。

（ｋ）　感染性単核細胞症およびウィルスの複製を生じるその他のＥＢＶ関連感 染。

（１）　ＨＳＶおよびｖＺｖの感覚神経、感覚性根および知覚神経節の感染。

（ｍ）　ＨＳＶまたはＶＺＶまたはＣＭＶの感染に関連するであろうと考えられ るその他の臨床状態も含まれ、なぜならば、この試薬はどのようなものであれ、 ＨＳＶと臨床状態の関係を十分はっきりさせるようにＨ３Ｖ感染の把握を促進す るからである。関連付けが可能である症候群の部分的なリストは、複合硬化症、 精神分裂症、片頭痛およびその他の激しい頭痛、アルツハイマー症ならびにその 他を含む。この薬剤の使用によって得られた新しい知見は、病気に関連する知見 を増やすであろうことが予期される。

（ｎ）　獣医学に設定した場合、あるタイプの動物にそれぞれ特異的なヘルペス ウィルスに引き起こされる種々の疾患も存在する。これらのウィルスの多くは、 ヘルペスウィルス酵素、ｄＴＫを発現し、それは、特異的に［”！］−ＩＶａｒ ａＵ、および／または［′″ＸＸコーＸＶａｒａＵン酸化する。そのような状況 において、獣医は、静脈内または腹腔内に全身重量ｋｇ当たり０．０１から０． ５０μＣＩを動物に投与した後、ヘルペスウィルスの症状を診断することを選ぶ ことかできる。

３．　生体内での治療 １３１１、＠２Ｂｒおよび適切な細胞障害性のアルファ線および／またはベータ 線を放射する特性を備えるその他のもの、および／または適切なオージェ電子崩 壊現象を示す１２Ｊ、もしくは′７７Ｂｒもしくはその他のハロゲン放射性核種 を含む、ハロゲン放射性核種の利用によって、Ｈ３Ｖ、ＶＺＶ、またはＥＤＶで 活性的または潜在的に感染された細胞の局在化されたかつそれにより集中された 破壊か達成されるであろう。そのような治療は、任意の抗ヘルペスウイルス性抗 ウィルス剤とともに用いることができ、なぜならば［”　Ｉ］−１ＶａｒａＵ、 および／または［”　Ｘ］　−ＸＶａ　ｒ　ａＵの抗ウィルス作用の機構がユニ ークでかつ、そのため、安全であるが、致死的な放射線治療的抗ウイルス効果を 達成するにおいて、その他の可能な薬剤と相乗的に作用するだろうからである。

抗ウィルス剤としてのこの試薬の適切な形態、ならびにこの試薬の投与の方法お よび投与量は、特定的な臨床状態に応じて医者により決定されるであろう。しか しながら、生体外で見られた可能な抗ウイルス効果に基づき、静脈内の注入によ り投与される場合、同位体として５から１５０ｍｃｉまでの合計投与量の範囲の 投与、まζは経口から投与される場合、同位体として５ないし］　５０ｍＣｉの 合計投与量を予め設定することができる。この試薬の長期にわたる投与が必要と されることに応じて、投与のほかの懸様か可能である。必要とされるモル量での この試薬の量は、合成された物質の比活性により決定される。とにかく、そのヌ クレオノドの投与される形態でのこの試薬の実際の量は、１日当たり１ｍｇより 少ないであろう。生体内の治療か必要なある獣医学的な状況においては、０．０ ５ないし３ｍＣ１／ｋｇの合計投与量の範囲で、静脈内または経口または腹腔内 のいずれかからの治療か用いられ得る。

以上に開示してきたところにおいて当業者に明らかであろうような、多くの変更 および修飾が、この発明の思想または範囲から外れることなくこの発明を実施す るのに可能である。したがって、この発明の範囲は、次に示す請求の範囲により 規定される要旨に従って構成されるべきである。

Ｆｉｇｕｒｅ　３ 触（１除去後の時間（Ｈｏμｒｓ〕 を１懐、）時間 Ｓ Ｆｉｇｕｒｅ　５Ｂ 国際調査報告

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の放射性ハロゲン化合物であって、 Ｘが、放射性の１２３Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｉ、１３１Ｉからなる群から選択さ れたヨウ素の放射性同位体、もしくは、代替的に、放射性の７５Ｂｒ、７６Ｂｒ 、７７Ｂｒ、３２Ｂｒ、３４Ｃｌからなる群から選択された放射性ハロゲン、ま たはその他の適切な放射性核種である化合物、および二塩化フェニルヨウ素（Ｉ ＩＩ）（別名：二塩化ヨードベンゼン）のような酸化剤かつ塩素供給剤とともに 、放射性のヨウ素同位体の塩（たとえば、Ｎａ［＊Ｉ］−Ｉ）を用いるＴＭＳＶ ａｒａＵの放射性ヨード化のプロセス、または二フッ化キセノンのような代替的 な酸化剤かつハロゲン供給剤とともに、放射性のハロゲン同位体の塩（たとえば 、Ｎａ［＊Ｘ〕−Ｘ）を用いるＴＭＳＶａｒａＵの放射性ハロゲン化のプロセス であって、生体内への分配の特性を与えるであろう上式の放射性ハロゲン化合物 のその他のプロドラック形態およびアシル化された誘導体を含む。
2. ２．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ の、さらにこの明細書において“ＴＭＳＶａｒａＵ”として示される、１−（２ ，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（Ｚおよび Ｅ）−（２−トリメチルシリルビニル）ウラシルとして知られる（請求項１に規 定された放射性ハロゲン式のための）ビニルシラン前駆体化合物であって、 “ＴＭＳ”が、この分子のトリメチルシリル部分を示すために用いられ、かつ“ Ａｃ”が保護を行なう“Ｏ−アセチル”基を示すために用いられる化合物、およ びその前駆体化合物を調製するためのプロセスであって、（ａ）ウリジンをその アラビノ類縁体に変換するステップ、 （ｂ）そのアラビノ糖の部分を置換または減成から保護するステップ、 （ｃ）保護された類縁体をＣ５の位置でハロゲン化するステップ、 （ｄ）ハロゲン化され、保護された類縁体をトリメチルシリルアセチレンと結合 するステップ、および（ｅ）結合された化合物を１−（２，３，５−トリ−Ｏ− アセチル−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５（ＺおよびＥ）−（２−トリメチ ルシリルビニル）ウラシルに選択的に還元するステップ、を備えるプロセス。
3. ３．ウィルスの特異的に促進された取込およびそれに続く請求項１および／また は２に記載された放射性ハロゲン化合物からの放射線の局在化に基づいた、生体 内では、放射線走査方法を用い、生体外では放射線の検出を用いる、ヘルペスウ ィルスの感染を診断する方法。
4. ４．ウィルスの特異的に促進された取込、およびそれに続く請求項１および／ま たは２に記載された放射性ハロゲン化合物からの放射線の局在化に基づいた、生 体内でのヘルペスウィルスの感染を治療する方法。