JPH04504127A - 喘息の処置における細胞間付着分子とその結合性リガンド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 この発明は、細胞間付着分子、例えばＩＣＡＭ−１等の、喘息の処置における使 用に関する。さらにこの発明は、この種の細胞間付着分子に結合し得るリガンド 分子並びに、喘息の処置において治療能を有する検出剤用アッセイに関する。

関連技術の説明 Ａ、細胞付着 白血球は、外部からの侵入物、例えばバクテリアやウィルス等に対するホストを 適切に防御するために、細胞基質に対する付着能を有していなければならない。

この防御システムに関する優れたレヴユーは、アイゼン（Ｅ　１ｓｅｎ、　Ｈ， Ｗ、　）によってなされている（Ｉｎ：Ｍｉｃｒｏ−弧厨！鉦、第３版、ハーバ −・アンド・ロウ、フィラデルフィア、ＰＡ（１９８０年）、第２９０頁〜第２ ９５頁および第３８１頁〜第４１８頁参照）ｅ白血球は、内皮細胞に付着し得る ので、循環系から進行中の炎症部位へ移動できる。さらに、白血球は抗原供給性 細胞に付着するので、普通の特異的免疫反応が起こり、最終的には、白血球は適 当な標的細胞に付着することによってウィルス感染細胞または腫瘍細胞を溶解す る。

このような付着に媒介する白血球の表面分子はハイブリドーマ技術の利用によっ て同定されている。簡単に言えば、ヒトのＴ−細胞［ダヴイグノン（Ｄ　ａｖｉ ｇｎｏｎ、　Ｄ　）ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｉ ：　Ｓ　Ａｓ第７８巻、第４５３５頁〜＄４５３９頁（１９８１年）参照］およ びて作用するモノクロナル抗体（ｒＭＡｂｓＪ）は白血球の表面に付着し、照コ 。これらの抗体によって同定された分子はＭａｃ−１およびリンパ球機能に関連 する抗原−１（ＬＦＡ−１）と呼ばれていた。Ｍａｃ−１はマクロファージ、顆 粒性白血球および大顆粒状リンパ球において見出されている。ＬＦＡ−１は大抵 のリンパ球において見出されている。これらの２種の分子と第３の分子であるｐ １５０．９５（該分子はＭａｃ−１と類似の組織分布を示す）は細胞付着におい て役割を果たす［カイザー（Ｋｅｉｚｅｒ、　Ｇ）ら、Ｅｕｒ、　Ｊ　、　Ｉｍ ｍｕｎｏｌ、、第１５巻、第１１４２頁〜第１１４７頁（１９８５年）参照コ。

ＬＦＡ−１フアミリーの分子のような分子は細胞付着過程に関連するもので、「 付着分子（ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）Ｊと呼ばれている。

上記の白血球分子は、構造的には相互に類似し、糖蛋白の関連ファミリーのメン バーを構成する［サンチェス・マドリッド（Ｓａｎｃｈｅｚ−第１５巻、第１１ ４２頁〜第１１４７頁（１９８５年）参照］にの糖蛋白ファミリーは、１つのア ルファサブユニットと１つのベータサブユニットを有するヘテロダイマーから構 成される。個々の抗原のアルファサブユニットは相互に異なるが、ベータサブユ ニットは一定に保たれることが見出されている［サンチェス・マド°リッドら１ 、とＭ狂コ４−ユ、篤１５８巻、第１７８５頁〜第１８０３頁（１９８３年）参 照］ｅ　ｒＣＤ１８Ｊファミリーと呼ばれる糖蛋白ファミリーのベータサブユニ ットは９５ｋｄの分子量を有するが、アルファサブユニットの分子量は１５０ｋ ｄ〜１８０ｋｄに変化する［スブリンガー、Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、、第４４巻、 第２６６０頁〜ｊｌＩ２６６３頁（１９８５年）参照コ。膜蛋白のアルファサブ ユニットは、ベータサブユニットによって共有される広範囲のホモロジーを共有 しないが、糖蛋白のアルファサブユニットの精密な分析によって、これらの間に は実質的な類似性があることが明らかになった。ＬＦＡ−１に関連する糖蛋白の アルファサブユニットとベータサブユニットの間の類似性に関するレヴユーはサ ンチェス・マドリッドらによってなされている［　Ｊ　、　Ｅ　ｘｐｅｒ、　Ｍ ｅｄ、、第、１５８巻、第５８６頁〜第６０２頁（１９８３年）およびＪ　、　 Ｅ　ｘｐｅｒ、　Ｍｅｄ、、第１５８巻、第１７８５頁〜第１８０３頁（１９８ ３年）参照］。

この付着蛋白ファミリーのいずれかのメンバーを、白血球の細胞表面において普 通量発現できない患者群が確認されている［アンダ参照コ。この症状は「白血球 付着欠乏症」またはｒＬＡＤＪ症候群として知られている。これらの患者の白血 球は、ＣＤ１８フアミリ一分子が抗体によって拮抗される普通のカウンターパー トに類似する生体外欠損（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｄｅｆｅｃｔｓ）を示す。さらに 、これらの患者は、細胞が細胞基質に付着できないことに起因して、通常の免疫 反応を発揮することができない［アンダーソンら、Ｆ　ｅｄ、　Ｐ　ｒｏｃ、　 、第４４巻、第２６７１頁〜第２６７７頁（１９８５年）およびアンダーソンら 、Ｊ　、　Ｉ　ｎｆｅｃｔ、　Ｄｉｓ、、第１５２巻、第６６８頁〜第６８９頁 （１９８５年）参照］。Ｌ　Ａ　Ｄ患者は臨床的にはへその緒の遅延離脱、頻発 性および進行性の軟組織感染症を示し、著しい白血球増加にもかかわらず、膿形 成が損われる。Ｌ　Ａ　Ｄ患者について調べた結果、ＣＤｌ８フアミリーの機能 性付着分子の欠乏のためにリンパ球が普通の付着作用を示さないときに、免疫反 応が弱められることが判明した。

即ち、白血球、特にリンパ球が動物の健康と生存力を維持する能力を発揮するた めには、他の細胞、例えば内皮細胞に付着することが必要である。このような付 着がおこなわれるためには、特異的なレセプター分子がリンパ球の細胞表面上に 存在することを伴う細胞−細胞接触が必要である。これらのレセプターは、ある リンパ球を他のリンパ球または内皮細胞や他の非管系細胞に付着させる。細胞表 面のレセプター分子は相互に密接に関連することが判明している。

これらの細胞表面レセプター分子を欠くリンパ球を有する患者は、不完全な抗体 反応、慢性および頻発性の感染症および他の臨床的症状を示す。

Ｂ、　ｖ、息：臨床的特徴 喘息は、異質な疾患群であり、刺激に対する気管気管支の超過散性によって特徴 づけられる［マクファデン（ＭｃＦａｄｄｅｎ、　Ｅ、　Ｒ，）ら、Ｉｎ：Ｈａ ｒｒｉｓｏｎ’ｓ　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒｎａｌ　Ｍｅｄｉ ｃｉｎｅ、第１０版、ベータースドルフ（Ｐ　ｅｔｅｒｓｄｏｒｆ　）ら編、マ クグロウーヒル、ニューヨーク（１９８３年）、第１５１２頁〜第１５１９頁お よびカイ（Ｋａｙ、　、Ａ、　Ｂ、　）、アレルギーと炎症、アカデミツクプレ ス、ニューヨーク（１９８７年）参照］。これらの文献も本明細書の一部を成す ものである。臨床的には、喘息は気管気管支の広範囲の狭窄、粘着性の濃厚分泌 物、呼吸困難な発作、咳および喘鳴等の症状となって現われる。これらの症状の 相対的な寄与については知られていないが、総合的な結果として、気管抵抗の増 大、肺と胸郭の極度の膨張および換気と肺血液流の異常な分配がもたらされる。

この疾患は、症状の現われない期間の間の一時的な急性疾患として現われる。こ の急性的な症状の発現は低酸素症をもたらし、死に至らしめることがある。世界 の人口の約３％がこの疾患を煩っている。

２つのタイプの喘息、即ち、アレルギー性喘息と特異体質性喘息が知られている 。アレルギー性喘息は通常は遺伝的なアレルギー性疾患、例えば鼻炎、じん麻疹 および湿疹等と関係している。この症状は、風媒抗原、例えば、花粉、環境から の汚染物または職業上受ける汚染物等の皮肉注入に対する陽性の膨疹−発赤拡張 反応およびＩｇＥの血清濃度の増加によって特徴づけられる。アレルギー性喘息 の発現は、多くの患者においてみられるＩｇＥ抗体の存在と関係があると考えら れている。上記の症状を示さない喘息患者は、特異体質性喘息を煩っていると考 えられる。

アレルギー性喘息は、Ｔリンパ球と８９２８球によって制御されかつ風媒抗原と 前もって形成されたマスト細胞結合ＩｇＥ分子との相互作用によって活性化され るＩｇＥ反応に依存すると考えられている。抗原エンカウンター（ａｎｔｉｇｅ ｎｉｃ　ｅｎｃｏｕｎｔｅｒ）は、患者を抗原に敏感にするために、長期間にわ たってＩｇＥを生産するのに十分な濃度のところで発生しなければならない。抗 原に対していったん敏感になると、喘息患者は、極めて低濃度の抗原に対して反 応し、症状を発現する。

喘息の症状は誘発抗原、環境要因、職業上要因、肉体的作業および精神的ストレ スによって悪化する。

喘息はメチルキサンチン（例えば、テオフィリン）、ベータ・アドレナリン作用 薬（例えば、カテコールアミン、レゾルシノール、サリゲニンおよびエフェドリ ン）、グルココルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン）、マスト細胞の脱顆粒 阻害剤（即ち、クロモリンナトリウムのようなりロモーン）および抗コリン作用 薬（例えば、アトロピン）等によって処置できる。

Ｃ１喘息：免疫学的特徴 喘息は、肺組織への好酸球の流入（好酸球増加症）を伴うものと考えられている ［フリーガス（Ｆｒｉｇａｓ、　Ｅ、）ら、Ｊ、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ。

Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、、第７７巻、第５２７頁〜第５３７頁（１９８６年）参照： この文献も本明細書の一部である］。好酸球はアルギニンを多（含くむ強塩基性 蛋白で、ｒＭＢＰＪと呼ばれている［グライヒ（Ｇ　１ｅｉｃｈ。

Ｇ、Ｊ、）ら、Ｊ　、　Ｅｘｐｅｒ、　Ｍｅｄ、　、第１３７巻、第１４５９頁 （１９７３年）参照］ｃＭＢＰは好酸球の顆粒蛋白を５０％以上含有する。

ＭＢＰは通常の哺乳類の細胞に対して毒性があり、組織、例えば、喘息患者の肺 組織中に毒性濃度で存在することは好酸球増加症の発現を示すことが判明してい る［グライヒら、Ｊ　、　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、、第１２３巻、篇２９２３頁（１ ９７５年）参照コｃＭＢＰの発現と喘息との関連性は、喘息患者の唾液中のＭＢ Ｐの濃度が正常人に比較して高いことによって支持されている〔フリーガスら、 Ｍａｖｏ　Ｃ１１ｎ、　Ｐｒｏｃ、、第５６巻、＊３４５頁（１９８１年）参照 ］。ＭＢＰの発見以来、他の細胞毒性好酸球が発見されている［フリーガスら、 Ｊ　、　−Ａ　１１ｅｒｇ３Ｃｌｉｎ、　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、　、第７７巻、第 ５２７頁〜第５３７頁（１９８６年）参照］。

喘息についての免疫学的な基礎的考察は上述の諸研究並びに気管支肺胞の洗浄に 関する研究［ゴダルト（Ｇｏｄａｒｄ）ら、主−リとコ■−Ｃ１ｉｎ、　Ｉ　ｍ ｍｕｎｏｌ、、第７０巻、第８８頁（１９８２年）参照］および上皮を剥離した 呼吸系平滑筋に関する研究［フラヴアハン（Ｆ　１ａｖａｈａｎ。

８６巻、第６８５頁（１９８５年）参照］等に基づいておこなうことができる。

喘息の免疫学的な機構はこれらの研究によって明らかにされてはいないが、この 疾患の免疫学的原因に関して一般的に容認されている仮説の発展についてはこれ らの研究から構成される装置リーガスら、Ｊ　、へｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　 Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７７巻、第５２７頁〜第５３７頁（１９８６年）参照］。

喘息の病理学的な顕著な特徴は、肺の広範囲の実質組織に及ぶ浸潤と粘膜繊毛の 機能破壊である。「好酸球仮説」は、肺のマスト細胞によって放出される有害な メディエータ−（ｍｅｄｉａｔｏｒ）を中和するために、好酸球が気管支に誘引 されることを提案する。この仮説によれば、好酸球は気管支へ誘引され、そこで 脱顆粒してＭＢＰや他の細胞毒分子を放出する。脱顆粒により、好酸球は酵素、 例えば、ヒスタミナーセ、アリールスルファターゼおよびフォスフォリバーゼＤ 等を放出し、これらの酵素はマスト細胞の有害なメディエータ−を酵素的に中和 する。これらの分子は、粘膜繊毛器官の破壊を促進し、気管支分泌物の洗浄を阻 害し、さらに、喘息の特徴である肺損傷に寄与する。

従って、抗原の存在による一次的効果に対して異常な反応を示して気管支を侵す 好酸球によって、喘息は引き起こされるものと考えられている。好酸球のＭＢＰ は、気管支の上皮細胞を損傷させる。

ロイコトリエンおよび血小板活性要因（Ｐ　Ａ　Ｆ　）は好酸球によって生産さ れ、気管支の拡張をもたらす。好酸球によって放出されるＭＢＰのような分子は 、マスト細胞を活性化してロイコトリエンとヒスタミンを放出させ、これによっ て気管支痙牽と好酸球増加症がもたらされる。

喘息の臨床的な観点からは、喘息患者を処置するための新規なまたは改良された 療法を見出すことが非常に望ましい。

発明の概要 この発明は、喘息の処置において、細胞間付着分子（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕ−１ ａｒ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：　Ｉ　Ｃ、ＡＭｓ）、例えばＩ Ｃ，ＡＭ−１およびＩＣＡＭｓの機能性誘導体を使用することに関する。さらに この発明は、喘息の処置において、細胞間付着分子またはＩＣＡＭの誘導体に結 合し得る分子、例えば抗体、抗体フラグメントおよびレセプター分子等を使用す ることにも関する。また、この発明には、喘息の処置における治療剤の検知用ア ッセイも含まれる。

さらにまた、この発明は、下記の（ａ）〜（ｈ）から成る群から選択される成分 を、喘息患者に有効治療量投与することを含む、喘息患者の処置方法に関する： （ａ）ＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体、（ｂ）ＩＣＡＭ−１に結合し得る、抗体 （ａ）のフラグメント、（ｃ）天然の汚染物を実質上含有しないＩＣＡＭ−１、 （ｄ）ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体、 （ｅ）糖蛋白のＣＤ１８フアミリーのメンバーと結合し得る抗体、（ｆ）糖蛋白 のＣＤ１８フアミリーのメンバーと結合し得る、抗体（ｅ）のフラグメント、 （ｇ）天然の汚染物を実質上含有しない、糖蛋白のＣＤ１８フアミリーのメンバ ー、および （ｈ）糖蛋白のＣＤ１８フアミリーのメンバーの機能性誘導体。

なお本発明は、喘息の処置における治療剤を、抗原を複数回吸入させたヒト以外 の哺乳類、特に霊長類に投与し、次いで、気管の応答の増加率を測定することを 含む、該治療剤の確認法も提供する。

図面の簡単な説明 第１図はＩＣＡＭ−１ｃＤＮ、Ａのヌクレオチドとアミノ酸配列を示す。最初の ＡＴＧは５８の位置にあるｃ　ｌＣＡλ４−１トリプシンペプチドに対応する翻 訳配列には下線を示す。疎水性の推定シグナルペプチドとトランスメンブラン配 列には太い下線を示すｅＮに結合したグリコシレージョン（ｇｌｙｃｏｓｙｌａ ｔｉｏｎ）サイトはボックスで囲む。２９７６の位置にあるポリアゾニレ−ジョ ン（ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ）シグナルＡ　Ａ　Ｔ　、Ａ、　Ａ　、Ａ は上線を示す。表示する配列はＨＬ−６０ｃＤＮＡクロンに関するものである。

内皮細胞ｃＤＮＡに関してはその長さの大部分の配列が示され、わずかの違いの みが示される。

第２図はＩＣＡＭ−１のドメイン（ｄｏｍａｉｎ）構造を示す。

第３図は刺激を与えないで蛋白で被覆した平底組織培養プレートウェル、ＰＡＦ （１０−７Ｍ）刺激を与えて蛋白で被覆した平底組織培養プレートウェル、刺激 を与えて免疫コンプレックス（ＩＣ）で被覆した平底組織培養プレートウェルま たは刺激を与えず被覆もしない平底組織培養プレートウェルに対する好酸球の付 着を示す。付着細胞は、好酸球パーオキシダーゼ（ＥＰＯ）に対する比色アッセ イにょうて、平均ＥＰＯユニット±Ｓ、Ｄ、とじて定量した。

第４図は免疫コンプレックス（ＩＣ）で被覆した平底組織培養プレートウェルへ の好酸球の付着に対する種々のモノクロナル抗体（ＭＡｂｓＸ上清１：４希釈物 ）の効果を示す。付着細胞は、好酸球パーオキシダーゼに対する比色アッセイに よって定量した（平均ＥＰＯユニット±Ｓ、Ｄ、）。付着に対する統計的に有意 な弱減効果は星印で示す。

第５図は、ＬＰ　Ｓ（１０ｎｇ／ｍ６）で刺激されてグルタルアルデヒドで固定 された内皮へのＰＡＦ（１０−’Ｍ）で誘発された好酸球の付着に対する種々の モノクロナル抗体（ＭＡｂｓＸ上清１；４希釈物）の効果を示す。付着細胞は、 好酸球パーオキシダーゼに対する比色アッセイによって定量した（ＥＰＯユニッ ト±Ｓ、Ｄ、）。付着に対する統計的に有意な弱減効果は星印で示す。

第６図は、（Ａ）リポポリサッカライド（ＬＰＳＸＩＯｎｇ／ｍＡ）で刺激され たヒトのへそ静脈内皮への血小板活性化因子（Ｐ　Ａ　Ｆ　）（１０−７Ｍ）で 誘発された好酸球の付着または（Ｂ）回虫抽出物（刺激なし）もしくは免疫コン プレックス（ＩＣ刺激）で被覆した平底組織培養プレートへの好酸球の付着に対 する、抗−ＩＣＡＭ−１（ＲＲＩ／１）、抗−ＬＦＡ−１ベータ（Ｒ１５，７） および抗−ＨＬＡクラス１（Ｗ６／３２）モノクロナル抗体（上清１：４希釈物 ）の効果を示す。

付着に対する統計的に有意な弱減効果は星印で示す。

第７図は、（Ａ）気管への好酸球の浸潤または（Ｂ）回虫に対して過敏なシノメ ガルス・モンキー（ｃｙｎｏｍｅｇａｌｕｓ　ｍｏｎｋｅｙＸＭａｃａｃａ　ｆ ａｓ−ｃｉｃｕｌａｒｉｓ）への三日おきの回虫の吸入によって誘発される気管 の応答の増加（メタコリンＰＣ，。。の減少）に対する抗−ＩＣＡＭ−１モノク ロナル抗体Ｒ６，５の効果を示す。Ｒ６，５を用いる処理試験の結果は、各動物 についておこなった一連のコントロール試験の結果と比較される。

第８図は、（、Ａ）吸入メタコリンＰ　Ｃ＋ｏｏ、　（Ｂ）気管支肺胞性洗浄（ ＢＡＬ）好酸球、（Ｃ）ＢＡＬ好中球、（Ｄ）ＢＡＬマクロファージ／単球また は（Ｅ）ＢＡＬリンパ球における、抗原の単一吸入によって誘発される変化を示 す。図中、ＮＳＤは有意差のないことを示す。

図中の文字は個々のモンキーを示す。

第９図は、（Ａ）吸入メタコリンＰＣ１００または（Ｂ）気管支肺胞性洗浄（Ｂ ＡＬ）好酸球における、抗原の複数回吸入によって誘発される変化を示す。Ｘｓ ｑはクラスカルーワリス（Ｋｒｕｓｋａｌ−ｗａｌｌｉｓ）試験（カイ二乗近似 ）を示す。図中の文字は個々のモンキーを示す。

好ましい態様の説明 Ａ、喘息の免疫病理学 前述のように、喘息の最も重要で特有の特徴の一つは、吸入される物理的、化学 的および生理学な作因（ａｇｅｎｔ）に対して気管支が異常に過敏（正常の１０ 〜１０００倍）であることである［ボーンエイ（Ｂ　ｏｕｓｈｅｙ、　Ｈ，、Ａ 、　）ら１．八ｍ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１２１巻、第３ ８９頁（１９８０年）およびハルグリープ（Ｈａｒｇｒｅａｖｅ、　Ｆ、　Ｅ、 　）ら、Ｊ、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第６８巻、第３４ ７頁（１９８１年）参照〕。

この「気管の超過敏性（ａｉｒｗａｙ　ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓ ｓ）Ｊ（臨床的には、吸入されるヒスタミン、メタコリン、冷気または身体運動 に対する気管の応答を調べることによって決定される）の激しさは、喘息症状の 程度［ハルグリープら、Ｊ、Ａ１１ｅｒ　ｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、 第６８巻、第３４７頁（１９８１年）、ボーレット（Ｂｏｕｌｅｔ、　Ｌ、　Ｐ 、　）ら、Ｊ、、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７１巻、第 ３９９頁（１９８３年）およびチャン・ヨン（Ｃｈａｎ−Ｙｅｕｎｇ、　Ｍ、　 ）ら、Ａｍ、　Ｊ　、　Ｍｅｄ、、第７２巻、第４１１頁（１９８２年）参照］ 、ピーク流速の日中の変化［リアン（Ｒｙａｎ、Ｇ）ら、Ｔｈｏｒａｘ、第３７ 巻、第４２３頁（１９８２年）参照コおよび必要な療法［ハルグリープら、Ｊ、 、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ。

Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、、第６８巻、第３４７頁（１９８１年）およびジュニパ−（ Ｊ　ｕｎｉｐｅｒ、　Ｅ、　Ｆ、　）ら、Ｔ　ｈｏｒａｘ、第３６巻、第５７５ 頁（１９８１年）参照コと関連する。

喘息患者における気管の超過敏性は数年間にわたって安定に保持されるが［ジュ ニパーら、Ｔｈｏｒａｘ、第３７巻、第２８８頁〜第２９１頁（１９８２年）参 照コ、この過敏性はアレルゲン［ボーレットら、Ｊ、、Ａｌｌｅｒｇｙ、　Ｃ１ １ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７１巻、第３９９頁〜第４０６頁（１９８３年） 、カルチール（Ｃａｒｔｉｅｒ、　Ａ　）ら、Ｊ　、　、Ａ　ｌｌｅｒｇｙ　Ｃ ｌｉｎ。

Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、、東７０巻、第１７０頁〜第１７７頁（１９８２年）、コツ 第５０３頁〜第５１３頁（１９７７年）、グンデル（Ｇｕｎｄｅｌ、　Ｒ，Ｈｏ ）９８６年）、フルシュ（Ｍａｒｓｈ、　Ｗ、　Ｒ，）ら１．へｍｅｒ、　Ｒｅ ｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ。

Ｄｉｓ、、第１３１巻、第８７５頁〜第８７９頁（１９８５年）およびソトマヨ ール（Ｓ　ｏｔｏｍａｙｏｒ、　Ｈ，）ら、Ａｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉ ｒ、　Ｄｉｓｌ、第１３０巻、第５６頁〜第５８頁（１９８４年）参照コ、空気 中の汚染物［ゴルデン（Ｇｏｌｄｅｎ、　Ｊ　、　Ａ、　）ら１、へｍｅｒ、　 Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１１８巻、第２８７頁〜第２９４頁（ １９７８年）参＠］、ウィルス性感染［エムベイ（Ｅ　ｍｐｅｙ、　Ｄ　、　Ｗ 、　）ら１．Ａｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１１３巻、 第１３１頁〜第１３９頁（１９７６年）参照コおよび特定の職業上使用する化学 薬品［チャン・ヨンら１、へｍｅｒ、　Ｊ　、　Ｍｅｄ、、第７２巻、第４１１ 頁〜第４１５頁（１９８２年）、ドウルノ凡ム（Ｄｕｒｈａｍ、　Ｓ、　Ｒ，） ら、Ｊ、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、第７９巻、篤３９８頁 〜第４０６頁（１９８７年）、ラム（Ｌａｍ、Ｓ、）ら、Ｊ、へ１ｌｅｒ　ｙ　 Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７２巻、第１３４頁〜第１３９頁（１９８３ 年）およびラムら、Ｊ、、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第６ ３巻、第２８頁〜第３４頁（１９７９年）参照コの作用を受けることによって増 大することが知られている。実際、気管の超過敵性が喘息の疾病素因によっても たらされるという提案を支持する証拠が示さ巻、第３９９頁〜第４０６頁（１９ ８３年）、チャン・ヤンら、７９年）参照］。

気管の超過敵性についての病原論的な機構は解明されていないが、前述のように 、多くの研究の結果から、好酸球の浸潤と気管支上皮の落屑が関係していること が提案されている：デモンキー（ＤｅＭｏｎ−好酸球メディエータ−は気管の上 皮細胞を生体外て損傷させることが知られているのて、これらの２つの事象は関 連があるものと考えられている［フリーガスら、Ｊ、Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ 、Ｉｗｕｎｏｌ、第７７巻、第５２７頁（１９８６年）参照］。

Ｂ、喘息と細胞間付着 本発明は部分的には、喘息の処置において治療能を有する剤の識別アッセイの発 達に基づく。

本明細書等で使用する「喘息」という用語には、アレルギー性喘息と特異体質性 喘息のいずれもが含まれる。喘息の処置において治療能を有する剤とは、喘息症 状の激しさ、程度または持続期間を低減または縮減させる作用を有する剤である 。この種の剤は、以下の「喘息モデルシステム」の使用によって識別するのが好 ましい。喘息を処置し得る剤とは、患者に投与したときに、喘息症状の激しさ、 程度または持続期間を低減または縮減させる作用を有する剤である。

本発明の一つの態様は、好酸球の肺への移動が細胞間付着によって左右され、特 にこのような付着はｒｌｃＡＭ−ＩＪ（細胞間付着分子−１）の相互作用に依存 するという知見に基づくものである。

本明細書等で使用する分子は、糖蛋白のＣＤ１８フアミリーのメンバーであり、 糖蛋白のＣＤ１．８フアミリーのメンバーのアルファサブユニット（即ち、ＣＤ １１サブユニツト）、糖蛋白のＣＤ１８フアミリーのメンバーのベータサブユニ ット、または糖蛋白のＣＤ１８フアミリーのメンバーのアルファサブユニットと ベータサブユニットの両方を含む。従って、糖蛋白のＣＤ１８フアミリーのメン バーは、ＣＤ１８メンバーの１つのサブユニットのみを有する分子およびヘテロ ダイマー（即ち、ＣＤ１８フアミリーのメンバーのアルファサブユニットとベー タサブユニットの両方を有する分子）を含む。

全てのこのような分子は、膜もしくは固体状サポートに結合していてもよく、あ るいは非結合状態（即ち、可溶性）であってもよい。

ｒＩＣＡＭ−ＩＪは、糖蛋白レセプター分子のＣＤ１８フアミリーに対する天然 のリガンドである［ロースライン（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，）ら、Ｊ　、　Ｉ 　ｍｍｕｎｏｌ、、東１３７巻、第１２７０頁（１９８６年）およびフルリン（ Ｍａｒｌｉｎ、　ｓ、　Ｄ、　）ら、ｍｍ、第５１巻、第８１３頁（１９８７年 ）参照〕。ＩＣＡＭ−１はヘテロダイマーではない。ＩＣＡＭ−１の識別、特性 およびアミノ酸配列、並びにＩＣＡＭ−１および他の付着分子と反応性のある抗 体の生産に関しては次の文献に開示されており、これらの文献も本明細書の記載 内容を成すものである：ヨーロッパ特許出願第２８９．９４９号明細書；ロース ラインら、Ｊ。

Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、、第１３７巻、第１２７０頁〜第１２７４頁（１９８６年） ニスミス（Ｓｗｉｔｈ、　Ｃ，Ｗ、　）ら、白血球の付着に関係する分子の構造 とＩ　ｎｖｅｓｔ、、第８２巻、第１７４６頁（１９８８年）；バートン（Ｂ　 ａｒ−ｔｏｎ、　Ｒ，Ｗ、　）ら、Ｊ　、　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、、第１４３巻（ １９８９年）Ｃ要するに、ＩＣＡＭ−１は、非造血細胞（例えば、管系内皮細胞 、胸腺上皮細胞、他の特定の上皮細胞および繊維芽細胞）および造血細胞（例え ば、組織のマクロファージ、有糸分裂促進物質で刺激されたＴリンパ珠芽細胞並 びに扁桃、リンパ節およびバイエル集線における胚中枢Ｂ細胞と樹状突起細胞） 上において発現される細胞表面糖蛋白であるｅ　ＩＣＡＭ−１は、反応性の過形 成を示す扁桃とリンパ節のＴ細胞領域における管系内皮細胞上において多（発現 される。末梢の血液リンパ球上におけるＩＣＡＭ−１の発現量は少ない。

炎症組織への好中球の移動に際しては、必要量のＩＣＡＭ−１が発現される。骨 髄性単球セルラインをホルボールエステルによる刺激で分化させることによって 、ＩＣＡＭ−１の発現量は著しく増加する。従って、ＩＣＡＭ−１は炎症部位に おいて優先的に発現され、鎮静細胞によっては一般に発現されない。皮膚の繊維 芽細胞上でのＩＣＡＭ−１の発現量は、インターロイキン（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋ ｉｎ）　ｌまたはガンマ−インターフェロンをそれぞれ４時間または１０時間に わたってＩＯＬ；／ｓｒ作用させることによって３〜５倍増加する。この感応は 蛋白およびｍＲＮＡ合成によって左右され、可逆的である。

ＩＣＡＭ−１は異なるタイプの細胞中では分子量の不均一性を示す。即ち、繊維 芽細胞上での分子量は９７ｋｄで、骨髄性単球セルラインＵ９３７上での分子量 は１１４ｋｄであり、また、Ｂリンパ芽球細胞ＪＹ上での分子量は９０ｋｄであ る。ＩＣＡＭ−１の生合成には、分子量約７３ｋｄの細胞内前駆体が含まれる。

グリコリル化を抑制するトウニカマイシン（ｔｕｎｉｃａｍｙｃｉｎ）で処置し て得られる非−Ｎ−グリコジル化型の分子量は３５ｋｄである。

ホルボールエステルで刺激したＬ″９３７９３７細胞維芽細胞から単離されたＩ ＣＡＭ−１は、化学的な脱グリコジル化によって、分子量が６０ｋｄの同等の主 生成物をもたらす。ＩＣ，ＡＭ−１モノクロナル抗体は、ＬＦＡ−１欠乏性セル ラインに対するフィトヘマグルチニン芽細胞の付着を妨げる。ＩＣＡＭ−１と結 合し得るモノクロナル抗体を用いて、リンパ球ではなくて、繊維芽細胞を前処理 することによって、リンパ球−繊維芽細胞付着は妨げられる。Ｌ　Ｆ　、Ａ−１ に対する抗体を用いて、繊維芽細胞ではなくて、リンパ球を前処理することによ っても、リンパ球−繊維芽細胞付着は妨げられる。

このように、ＩＣＡＭ−１は、糖蛋白のＣＤ１８フアミリーの分子に対する結合 性リガンドである。該分子は、生体内での炎症性病巣へのリンパ球の浸潤と矛盾 しない時間枠内において、炎症性メディエータ−１例えばＩＬ−１、ガンマイン ターフェロンおよび腫瘍壊死因子等によって、生体外の繊維芽細胞や内皮細胞上 で誘導される第１８９３頁〜第１８９６頁（１９８６年）参照コ。さらにＩＣ， ＡＭ−１は、非造血細胞（例えば、管系内皮細胞、胸腺上皮細胞、他の上皮細胞 および繊維芽細胞等）および造血細胞（例えば、組織マクロファージ、有糸分裂 促進物質で刺激されたＴリンパ珠芽細胞並びに扁桃、リンパ節およびバイエル集 線等）上において発現される［ダスチンら、Ｊ　、　１　ｍｍｕｎｏｌ、第１３ ７巻、第２４５頁〜第２５４頁（１９８６年）参照〕。ＩＣＡＭ−１は良性の炎 症性病変、例えば、アレルキー性湿疹、扁平苔蘇、発疹、じん麻疹および水痘性 疾患等において、ケラチン生成細胞上で発現される。アレルギー性患者の皮膚に ハプテンを塗布することによって誘発されるアレルギー性皮膚反応によっても、 ケラチン生成細胞上でＩＣＡＭ−１が多く発現する。

一方、皮膚上の毒性集線は、ケラチン生成細胞上でＩｃＡλト１を発現させない 。種々の皮膚科的障害の皮膚病巣のバイオプシーがらのケラチン生成細胞上にも ＩＣＡＭ−１は存在し、また、ＩＣＡＭ−１の発現は、アレルギー性の貼布試験 から得られる病巣上において誘発されるが、毒性の貼布試験から得られるケラチ ン生成細胞はＩＣＡＭ−１を発現させない。

本発明の別の態様は、細胞の付着を防止もしくは抑制する剤が喘息の処置に使用 し得るという知見に基づくものである。

本発明によって使用し得るこの種の剤としてはＩＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１ の機能性誘導体が例示される。ＩＣＡＭ−１は、好酸球細胞表面上のレセプター 分子に結合することによって細胞付着に媒介するので、好酸球上に存在するＩＣ ＡＭ−ルセブターに結合し得るＩＣＡＭ−１の機能性誘導体は、肺の内皮細胞上 のＩＣＡＭ−１と拮抗するので、好酸球の細胞付着が弱められ、喘息の処置がお こなわれる。

ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体は、ＩＣＡＭ−１の生物学的活性と比べて、機能的 または構造的に実質上置等の生物学的活性を有する化合物である。「機能性誘導 体」という用語には、分子の「フラグメント」、「変異体」、「同族体」および 「化学的誘導体」が含まれる。ＩＣＡＭ−１のような分子のフラグメントには該 分子のいずれのポリペプチドのサブセットが含まれる。ＩＣＡＭ−１の活性を有 しかつ可溶性（即ち、膜に非結合性）のＩＣＡＭ−１フラグメントは特に好まし い。

ＩＣＡＭ−１は７つのドメインから成る［スタウントン（Ｓｔａｕｎｔｏｎ。

Ｄ、Ｅ、）ら、Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、　Ｔｏｄａｙ、第９巻、第２１３頁〜第２１ ５頁（１９８８年）、スタウントンら、胆腫、第５２巻、第９２５頁〜第９３４ 頁（１９８８年）およびスタウントンら、組織抗原、第３３巻、第２８７頁（１ ９８９年）参照。これらの文献の記載内容も本明細書の一部に含まれるものであ る］ｃ　ＴＣＡＭ−１のこれらのドメインを第２図に示す。ドメイン１および２ は、ＩＣＡＭ−１がそのレセプター分子に結合するために重要なことが判明して いる［スタウシ参照。これらの文献の記載内容も本明細書の一部に含まれるもの である；・。本発明によれば、ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体、および特に、ドメ イン１と２の両方を有するＩＣＡＭ−１の突然変異体もしくはフラグメントを含 むこの種の誘導体は、喘息の処置または治療に使用することがてきる。このよう な処置または治療用としてより好ましいものは、ＩＣＡＭ−１のドメイン２を有 するＩＣＡＭ−１の突然変異体もしくはフラグメントである。このような処置ま たは治療用として最も好ましいものは、ＩＣＡＭ−１のドメイン１を有するＩＣ ＡＭ−１の突然変異体もしくはフラグメントである。

ＩＣＡＭ−１のような分子の「変異体」は、該分子全体もしくはそのフラグメン トと比べて、構造および機能の点で実質上類似している分子を意味する。

両方の分子が実質上類似した構造を有しているか、または両者が類似の生物学的 活性を有する場合には、一方の分子は他方の分子に「実質上類似する」という。

従って、両方の分子が類似の活性を有する場合には、たとえ一方の分子の構造が 他方の分子に含まれていな（でも、あるいはたとえアミノ酸残基の配列が同一で なくても、両者はここで言う変異体とみなされる。ＩＣＡＭ−１のような分子の 「同族体」は、該分子全体もしくはそのフラグメントに比べて実質上類似の機能 を有する分子を意味する。一方の分子が、普通は分子の一部ではない付加的な部 分を有するときには、他の分子の「化学的誘導体」という。このような付加的な 部分は、分子の溶解性、吸収性および生物学的半減期等を改良する。あるいはこ のような付加的部分は、分子の毒性を低減させ、また、分子の望ましくない副作 用を除去もしくは弱化させる。このような作用効果を媒介し得る部分は、「レミ ングトン（Ｒｏｍｉｎｇｔｏｎ）の薬剤科学Ｊ（１９８０年）に記載されている 。「毒素−誘導体化」分子は、「化学的誘導体」の特別な一群を構成する。「毒 素−誘導体化」分子は、毒素部分を有する分子、例えばＩＣＡＭ−１もしくは抗 体等である。この種の分子が細胞に結合すると、該毒素部分は細胞にきわめて接 近するので、これによって該細胞の死滅が促進される。適当な毒素部分は利用し てもよい。

しかしながら、毒素、例えば、リジン毒素、ジフテリア毒素、放射性同位元素毒 素および膜通路形成性（ｍｅｍｂｒａｎｅ　−ｃｈａｎｎｅｌ　−ｆｏｒｍｉｎ ｇ）毒素等を利用するのが好ましい。この種の部分を分子に結合させる方法は当 該分野においては周知である。

本発明により喘息の処置に使用してもよ５１剤の別の例は、ＬＦＡ−１、ＭａＣ −１もしくはｐ１５０．９５またはこれらの分子の機能性誘導体である。この種 の分子およびこれらの機能性誘導体は、内皮細胞のＩＣＡＭ−１に結合すること によって、該細胞に、好酸球に結合して付着し得る能力を付与するので、喘息の 処置に供することができる。

本発明において特に重要なものは、可溶性分子であるＬＦＡ−１、Ｍａｃ−１ま たはｐ１５０，９５の機能性誘導体である。なかでも重要なものは、該分子のア ルファサブユニットとベータサブユニットの両方を有するヘテロダイマーである これらの分子の機能性誘導体およびＩＣＡＭ−１に結合し得るモノマー性誘導体 である。可溶性のヘテロダイマーは特に好ましい。

ＩＣＡＭ−１およびＣＤ１８フアミリ一分子のメンバーは免疫原性分子である。

従って、ＩＣＡＭ−１またはＣＤ１８フアミリ一分子のメンバーに結合し得る抗 体を得ることが可能である。本発明により、このような抗体を喘息の処置に使用 してもよい。

この種の抗体は、精製分子またはこれらの分子を自然に発現する細胞を適当な動 物の体内へ、例えば腹膜内注射等によって導入することによって得ることもでき る。所望により、このような動物から血清を採取し、これを、これらの分子に結 合し得るポリクロナル抗体源として使用してもよい。しかしながら、このような 動物がら牌細胞を採取し、該牌細胞を骨髄腫細胞系統と融合させ、該融合細胞か ら、ＩＣＡＭ−１またはＣＤ１８フアミリ一分子のメンバーと結合し得るモノク ロナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を形成させるのが好ましい。

上記のようにして得られるハイブリドーマ細胞を、前述のようなスクリーン処理 に付すことによって、ＩＣ，ＡＭ−１またはＣＤ１８フアミリ一分子のメンバー （アルファサブユニットまたはベータサブユニット）に結合し得る抗体を分泌す る所望のハイブリドーマ細胞を選別してもよい。

この種の抗体はＩＣＡＭ−１またはそのレセプターに対する結合能を有するので 、該抗体および抗原結合能を有するこれらのフラグメント、例えば、Ｆａｂおよ びＦ（ａｂ）２等を使用して細胞付着性を低減させることができる。従って、こ の種の抗体等は、本発明によって喘息の処置に使用してもよい剤の別の例である 。

前記のように、ポリクロナル抗体とモノクロナル抗体のいずれも本発明によって 使用してもよい。本発明において特に重要な抗体は、ＩＣＡＭ−１（もしくはこ れらの機能性誘導体）またはＣＤ１８フアミリーのメンバー（もしくはこれらの 機能性誘導体）に対する抗体であり、これらの抗体はヒトの体内で生産させるか 、または組換え技術等によって人体に適応させる（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）　（即 ち、ヒトの体内で非免疫原性にさせる）。人体に適応させた抗体は、例えば、抗 体の免疫原性の部分を、対応する非免疫原性部分（即ち、キメラ抗体）で置き換 えることによって生産される［ロビンソン（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ、　Ｒ，Ｒ，）ら 、国際公開公報ＰＣＴ／ＵＳ　８６１０２２６９号、アキラ（Ａｋｉｒａ、　Ｋ ）ら、ヨーロッパ特許出願第１８４．１８７号明細書、タニグチ（Ｔ　ａｎｉｇ ｕｃｈｉ、　Ｍ　）、ヨーロッパ特許出願第１７１．４９６号明細書、モリソン （Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、　Ｓ、　Ｌ、　）ら、ヨーロッパ特許出願第１７３．４９ ４号明細書、ノイベルガ−（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、　Ｓ　）ら、ＰＣＴ出願ＷＯ ３６１０１５３３号明細書、キャビンー（Ｃａｂｉｌｌｙ、　Ｓ、　）ら、ヨー ロッパ特許出願第１２５，０２３号明細書、ペター（Ｂ　ｅｔｔｅｒ、　Ｍ）８ ８年）、リュー（Ｌｉｕ、　、Ａ、　Ｙ、　）ら、Ｊ　、　Ｐ　ｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、　、へｃａｄ、　Ｓｃｉ。

見旦Ａ１第８４巻、第３４３９頁〜第３４４３頁（１９８７年）、リューら、Ｊ 　、　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌ、、第１３９巻、東３５２１頁〜第３５２６頁（１９８ ７年）、サン（Ｓｕｎ、　Ｌ、　Ｋ、　）ら、Ｐ　ｒｏｃ、　Ｎ　ａｔｌ、　、 Ａ　ｃａｄ、　Ｓ　ｃｉ。

ＵＳ、６．、第８４巻、第２１４頁〜第２１８頁（１９８７年）、ニジムラ（Ｎ ｉｓｈｉｍｕｒａ、　Ｙ、　）ら、Ｃａｎｅ、　Ｐｅｓ、、第４７巻、第９９９ 頁〜第１００５頁（１９８７年）、ウッド（Ｗａｏｄ、　Ｃ，Ｒ，）ら、ネイチ ャー、第３１４巻、第４４６頁〜第４４９頁（１９８５年）およびショー（Ｓ　 ｈａｔ）ら、Ｊ　、　Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉ　ｎｓｔ、、第８０巻、第 １５５３頁〜第１５５９頁（１９８８年）参照コ。

人体に適応させたキメラ抗体に関する一般的なレビューはモリソ（Ｂ　１ｏｔｅ ｃｈｎｉｑｕｅｓ）、第４巻、第２１４頁（１９８８年）参照コによっておこな われている。

人体に適応させた適当な抗体は、ＣＤＲもしくはＣＥＡ置換によっても生産する ことができる［ジョーンズ（Ｊ　ｏｎｅｓ、　Ｐ、　Ｔ、　）ら、ネイチャニ、 第３２１巻、第５５２頁〜ｌ！５２５頁（１９８６年）、フェアホーサン（Ｖｅ ｒｈｏｅｙａｎ）ら、サイエンス、第２３９巻、第１５３４頁（１９８８年）お よびバイドラ−（Ｂｅｉｄｌｅｒ、　Ｃ，Ｂ、　）ら、Ｊ　、　Ｉ　ｍｍｕｎｏ ｌ、、第１４１巻、第４０５３頁〜第４０６０頁（１９８８年）参照］。

本発明による抗喘息剤は天然法［例えば、動物、植物、菌類またはバクテリア等 を誘発させてＩＣＡＭ−１の非免疫グロブリン拮抗体を生産させるか、または動 物を誘発させてＩＣＡＭ−１に対する結合能を有するポリクロナル抗体を生産さ せる方法コ、合成法［例えば、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）のポリ ペプチド合成法によってＩｃＡＭ−１、ＩＣ，ＡＭ−１の機能性誘導体またはＩ ＣＡＭ−１の蛋白拮抗体（免疫グロブリンまたは非免疫グロブリン）を合成する 方法］、ハイブリドーマ技術［例えば、ＩＣＡＭ−１と結合し得るモノクロナル 抗体を生産する方法〕、組み換え技術口例えば、別種のホスト、即ち、酵母、バ クテリア、菌類または嘩乳類の培養細胞等において、または組み換えプラスミド もしくはウィルス性ベクターから、本発明による抗喘息剤を生産する方法二また は蛋白質分解法によって得ることができる。簡便さや所望の収量等の要因に応し て適宜の方法を選択すればよい。特定の抗喘息剤を製造するためには、上記の方 法や技術のうちの１種のみを用いることは必ずしも必要ではなく、上記の方法や 技術等を適宜併用してもよい。

ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体、または約１００個までの残基を有するＣＤ１８フ アミリーのメンバーは、生体外て合成するのが便利である。所望により、この種 のフラグメントは、精製もしくは粗製蛋白質の標的とするアミノ酸残基に、選択 された側鎖もしくは末端残基と反応し得る有機誘導体化剤を反応させることによ って変性させてもよい。得られる共有結合性誘導体は、生物学的活性に対して重 要な残基の同定に用いてもよい。以下に示す態様においては、本発明のこの点に 関しては、ＩＣＡ〜１−１の機能性誘導体に基ついて説明する。このような方法 は、ＣＤ１８フアミリ一分子のメンバーのいずれの機能性誘導体の製造に適用し てもよい。

最も一般的な／ステイニル残基にα−ハロアセテート類（および対応するアミン ｇＩ）、例えばクロロ酢酸またはクロロアセトアミドを反応させる二とによって 、カルボキシメチル誘導体もしくはカルボキシアミドメチル誘導体が得られる。

また、ンスティニル残基にプロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５ −イミドジイル）プロピオン酸、タロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマ レイミド類、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジス ルフィド、ｐ−クロロ水銀安息香酸塩、２−クロロ水銀−４−二トロフェノール またはクロロ−７−ニドロベンゾー２−オキサ−１，３−ジアゾールを反応させ ることによって、対応する誘導体が得られる。

ヒスチジル残基にシニチルプロカーポネートを反応させる誘導体化は、該試薬が ヒスチジル側鎖に対して比較的特異的なために、ｐＨが５５〜７．０の範囲でお こなう。ｐ−プロモフエナンルブロミドも有用な試薬であるが、この場合には、 ０．１Ｍカコジル酸ナトリウム溶液（ｐＨ６，０）中で誘導体化反応をおこなう のが好ましい。

リジニル末端残基およびアミノ末端残基にはコハク酸または他のカルボン酸の無 水物を反応させる。これらの試薬を用いる誘導体化反応によって、リジニル残基 の電荷を逆転させることができる。

α−アミノ基含有残基に反応させる他の適当な誘導体化剤にはイミドエステル類 、例えばメチルピコリンイミデート、ピリドキサールホスフェート、ピリドキサ ール、クロロホーロハイドライド、トリニトロベンゼンスルホン酸、０−メチル イソウレア、２．４−ベンタンシオーンおよびアミノ基転移酵素を触媒とするグ リオキシレートとの反応物等が含まれる。

アルギニル残基は１種もしくは数種の常套の試薬、就中、フェニルグリオキサー ル、２．３−ブタンジオン、１．２−シクロヘキサンジオンまたはニンヒドリン と反応させることによって変性される。

アルギニン残基の誘導体化反応は、グアニジン官能基のｐＫａが高いので、アル カリ性条件下でおこなうここが必要である。さらに、これらの試薬はリジン基や アルキニンε−アミノ基と反応させてもい。

チオニル残基自体の特殊な変性については広く研究されてきているが、特に重要 な反応は、芳香族ジアゾニウム化合物もしくはテトラニトロメタンと反応させる ことによってチロシル残基にスペクトル標識を導入するものである。最も一般的 には、Ｎ−アセチルイミジゾールおよびテトラニトロメタンを使用して０−アセ チルチロンル種および３−ニトロ誘導体をそれぞれ形成させる　＋２３１または ＋３１　■を用いてチロシル残基をヨウ化することによって、放射免疫検定法、 特にタロラミンＴ法に有用な標識化蛋白質が調製される。

カルボキシル側鎖基（アスパルチル基またはグルタミル基）は、カルボジイミド 類（Ｒ’−Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｒ’）、例えば、１−シクロへキシル−３−（２−モル ホリニル−（４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３（４−アゾニア −４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドと反応させることによって選択的 に変性させることができる。さらに、アスパルチル残基およびグルタミル残基は 、アンモニウムイオンと反応させることによってそれぞれアスパラギニル残基お よびグルタミニル残基に変換できる。

二官能能性試薬を用いる誘導体化は、ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体分子を水不溶 性の支持マトリックスもしくは表面へ架橋させるのに有用であり、該架橋化物は 、ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体と融合したポリペプチドを開裂させて開裂化ポリ ペプチドを回収する方法に供される。通常使用される架橋剤には、例えば次のも のが含まれる：１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン、グルタ ルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル類、例えば、４−アジド サリチル酸とのエステル、３，３”−ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネ ート）のようなジスクシンイミジルエステルを含むホモ三官能性イミドエステル 、およびビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンのような二官能性マレイミド 。メチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオコプロビオイミデートのような 誘導体化剤は、光の存在下て架橋を形成し得る光活性化性中間体を与える。ある いは、水不溶性の反応性マトリックス、例えば、臭化シアンで活性化された炭水 化物および反応性基質［米国特許第３．９６９，２８７号、同第３．６９１，０ １６号、同第４．１９５．１２８号、同第４゜２４７．６４２号、同第４，２２ ９，５３７号および同第４．３３０゜４４０号各明細書参照］は蛋白質の固定化 に使用できる。

グルタミニル残基およびアスパラギニル残基はしばしば脱アミド化反応によって 対応するグルタミル残基およびアスパルチル残基に変換される。これらの残基は 温和な酸性条件下で脱アミド化される。

これらの残基のいずれの形態のものも本発明の範囲内に包含される。

その他の変性法には、プロリンとリジンのヒドロキシル化、セリル残基もしくは チオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニンおよびヒスチジ ン側鎖のα−アミノ基のメチル化［クレイトン（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、　Ｔ　、 　Ｅ　、　）、蛋白質：構造と分子特性、フリーマン（Ｆ　ｒｅｅｍａｎ、　Ｗ 、　Ｈ，）・アンド・カンパニー、サンフランシスコ、第７９頁〜第８６頁（１ ９８３年）参照］、Ｎ−末端アミンのアセチル化および、場合によっては、Ｃ− 末端カルボキシル基のアミド化等が含まれる。

変化したアミノ酸配列を有するＩＣＡＭ−１の機能性誘導体はまたＤＮＡの突然 変異によっても調製することができる。ＩＣＡＭ−１の遺伝子をコードするヌク レオチドの配列はＦｊｇ、ｌに示されている。このような変異体は例えばＦｉｇ 、ｌに示したアミノ酸配列中の残基からの欠失または残基の挿入あるいは置換を 含む。最終的な誘導体が所望の活性を有するならば、欠失、挿入および置換のど のような組み合わせも最終的な誘導体を得るために使用してもよい。明らかに、 その変異体をコードするＤＮＡ中で行われる突然変異によって、その配列が読み 枠（ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｌａｍｅ）外に配置されてはならず、そして好ましくは ２次的なｍＲＮ、Ａ構造を生成することのできる相補的領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅ ｎｔａｒｙ　ｒｅｇｉｏｎ）が形成されないようにする（欧州特許願公開第７５ ．４４４号参照）。

遺伝子レベルにおいて、これらの機能性誘導体は通常、ＩＣＡＭ−１分子をコー ドするＤＮ、Ａ内のヌクレオチドの部位特異的突然変異誘発によって調製され、 これによって、該機能性誘導体をコードするＤＮＡが生産され、その後組換え細 胞培養中にＤＮＡが発現される。機能性誘導体は、典型的には天然に存在する類 縁体と質的に同じ生物学的活性を有する。それらはしかし、普通に生成されたＩ ＣＡＭ−１分子と比べた場合には、実質的にそのような性質を興にする。

アミノ酸配列を変化させる部位は予め決定されているが、突然変異自体は予め決 定されている必要はない。例えば、所定の部位において突然変異を最適におこな うためには、標的とするコドンあるいは領域においてランダムな突然変異誘発を おこなえばよく、発現したＩＣＡＭ−１の機能性誘導体の最適な希望する活性の 組み合わせを有するものをスクリーニングすればよい。既知の配列をもつＤＮＡ の特定した部位に置換突然変異を起こす方法はよく知られており、例えば部位特 異的突然変異誘発（ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）が ある。

ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体分子をここへ述べた方法に沿って調製するには、好 ましくは先に調製した機能性誘導体あるいはタンパク質のノンバリアント・バー ジジン（ｎｏｎνａｒｉａｎｔ　ｖｅｒｓｉｏｎ）をコードするＤＮＡの部位特 異的突然変異誘発が行われる。部位特異的突然変異誘発はその希望する突然変異 のＤＮＡ配列を＝−ドする特定のオリゴヌクレオチド配列および十分な数の隣接 ヌクレオチドを使用することによるＩＣＡＭ−１の機能性誘導体の製造を可能と し、これによっで欠失接合部の両端において安定な２重らせんが交差するのに十 分なサイズおよび配列の複雑さを有するのプライマー配列が得られる。典型的に は、およそ２０から２５個のヌクレオチドを有し、接合部の両端においてのおよ そ５から１０個の残基が変化しているプライマーが好ましい。一般的に、ニーデ ルマン（Ａｄｅｌｍａｎ）の開示も本明細書の一部である）に例証されるように 、部位特異的突然変異誘発は当業者にはよく知られている。

認識されるてあろうように、部位特異的突然変異誘発の手法は典型的には１本鎖 および２本鎖の形態で存在するファージ・ベクターを便する。部位特異的突然変 異誘発に有用な典型的なベクターには、例えばメツシング（Ｍｅｓｓｉｎｇ）ら 、マクロモレキュールおよびリコンビンナントＤＮＡに関する第３回クリーブラ ンドシンポジウム、編集者ワルトン（Ａ、　Ｗａｌｔｏｎ）　、Ｅｌｓｖｉｒｅ 　Ａｍｕｓｔｅｒｄａｍ（１９８１年）に開示されている（該文献の開示は本明 細書の一部である）Ｍ１３ファージのようなベクターが含まれる。これらのファ ージは市場入手が簡単にでき、そしてその使用は当業者には一般的によく知られ ている。あるいは複製の１本鎮ファーン源を含有するプラスミドベクター（ベイ ラ（Ｖｅｉｒａ）ら、ｌ１ｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ、、第１５３巻、第３頁（ １９８７年）参照）を１本鎮ＤＮＡを得るために使用してもよい。

一般的にここに述べたような部位特異的突然変異誘発は、関連するタンパク質を コードするあるＤＮＡ配列を、その配列内に含有する１本輪のベクターを得るこ とから始められる。希望する突然変異した配列を有するオリゴヌクレオチドプラ イマーは一般的には合成的に、たとえばフレア（Ｃｒｅａ）らの方法（Ｐｒｏｃ 、　Ｎａｔｉ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ。

（ＵＳＡ）、第７５巻、第５７６５頁（１９７８年）参照）で調製される。この プライマーはその後、１重鎮タンパク質重列含有ベクターとアニーりングし、次 いで突然変異自体の合成を完成させるためにＥ、ｃｏｌｉポリメラーゼＩクレノ ウ・フラグメントのようなり　Ｎ　Ａの重合酵素を用いる処理を行う。かように して突然変異配列および２次鎖によって希望する突然変異が行われる。このへテ ロ２本輪ベクターはその後、ＪＭＩ０１細胞のような適当な細胞を形質転換する のに使用され、突然変異配列配置を有する組換えベクター類を含有するクローン が選択される。

このような１個のクローンが選択された後、突然変異タンパク質部位を取り出し 、それをタンパク質合成用の適当なベクター、一般的には、適当な宿主の形質転 換に使用出来るタイプの発現ベクター内へ入れてもよい。

アミノ酸配列の欠失は一般的にはおよそ１から３０個の残基、より好ましくは１ から１０個の残基におよび、典型的には隣接しておこなわれる。

アミノ酸配列の挿入は、１個の残基から実質的に長さの制限のないポリペプチド までのアミノおよび／またはカルボキシ末端の融合を、単独あるいは多数のアミ ノ酸残基の配列内挿入と同様に含む。

配列内挿入（例えば、完全なＩＣＡＭ−１分子配列中への挿入）は一般的にはお よそ１から１０個、より好ましくは１から５個の残基の範囲であってよい。末端 挿入の例としては宿主細胞に対して相同的であれ異種であれ、組換え宿主からの ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体の分泌を促進する分子のＮ末端へのシグナル配列の 融合が挙げられる。

機能性誘導体の第３の群は、ＩＣＡＭ−１分子からの少なくとも１個のアミノ酸 残基、好ましくは１個の残基のみが除かれ、違う残基がその箇所に挿入された化 合物である。このような置換は、ＩＣＡＭ−１分子の性質をよく調節することが 望まれているときには、好ましくは以下の表１に沿って行うべきである。

表１ オリジナル残基　典型的な置換残基 Ａｌａ　ｇｌｙ；　ｓｅｒ 八ｒへ　１ｙｓ Ａｓｎ　ｇｉｎ：　ｈｉｓ Ｇｌｙ　ａｌａ：　ｐｒ。

Ｈｉｓ　ａｓｎ；　ｇｉｎ ｌｌｅ　ｌｅｕ：　ｖａｌ Ｌｅｕ　ｉｌｅ：　ｖａｌ Ｌｙｓ　ａｒｇ；　ｇｉｎ：　ｇｌｕ Ｍｅｔ　ｌｅｕ：　ｔｙｒ；　１ｌｅ Ｐｈｅ　ｍｅｔ：　ｌｅｕ：　ｔｙｒ Ｓｅｒ　ｔｈｒ Ｖａｌ　ｉｌｅ：　ｌｅｕ 機能的または免疫的性質の実質的な変化は、表１の置換よりも制約の少ない置換 の選択、即ち、（ａ）例えばシート状あるいは螺旋状配座を有する置換部位のポ リペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷あるいは疎水性また は（Ｃ）側鎖のかさ高さ、を保持する効果においてその違いがより顕著である残 基の選択によっておこなわれる。一般的におこなわれる置換は次のものである： （ａ）グリシンおよび／またはプロリンの他のアミノ酸による置換、欠失または 挿入（ｂ）親水性残基、例えばセリルまたはスレオニル基の疎水性残基、例えば ロイシル、イソロイシル、フェニルアラニン、バリルまたはアラニル基による置 換；　（Ｃ）システィン残基の他の残基による置換：　（ｄ）正電荷をもつ側鎖 を有する残基、例えばリシル、アルギニルまたはヒスチジル基の負電荷を有する 側鎖をもっ残基、例えばグルタミルまたはアスパルチル基による置換：または（ ｅ）かさ高い側鎖を有する残基、例えばフェニルアラニンのそのような側鎖をも たない残基、たとえばグリシンによる置換。

殆どの欠失および挿入、特に置換によってＩＣＡＭ−１分子の性質を大きく変化 させることは期待できない。しかしながら、実行に先立ってこの置換、欠失ある いは挿入の正確な効果を予測するのが困難なときには、当業者は常套のスクリー ニングアッセイによってその効果を評価すればよい。例えば、機能性誘導体は典 型的には天然のＩＣＡＭ−１をコードする核酸の部位特異的突然変異誘発、組換 え細胞培養物中における変異した核酸の発現、及び該細胞培養物の所望による精 製、例えば抗ＩＣＡＭ−１分子抗体カラム上での免疫アフィニティー吸着による 精製（機能性誘導体は少なくとも１つの残存免疫エピトープへ結合させることに よって吸着される）によって調製される。

細胞の溶解物あるいは精製したＩＣＡＭ−１分子の機能性誘導体の活性は、所望 の性質に適合したスクリーニングアッセイ法でスクリーニングされる。例えば、 所定の抗体に対するアフィニティーのようプ；機能性誘導体の免疫的性質は拮抗 的なイムノアッセイで測定される。免疫調節活性の変化は適当なアッセイ法で測 定される。酸化還元あるいは熱に対する安定性、生物学的半減期、疎水性、蛋白 質分解性減成の受けやすさまたは担体もしくはマルチマーとの凝集傾向などのタ ンパク質の性質の変化は、当業者によく知られている方法でアッセイされる。

Ｃ１本発明の組成物の投与 本発明の抗喘息剤の治療効果は適当な投与方法（例えば、静脈内投与、筋肉的投 与、皮下投与、腸管内投与または腸管外投与）によってこの物質を患者に投与す ることで得られる。本発明による該寥（′１鼻腔内へ鼻腔用スプレーまたは綿棒 等で投与するのが好ましい。また核剤を経口吸入、あるいは経口用スプレーまた は経口用二一口ゾルによって投与することは特に好ましい。核剤を注入投与する ときには、連続的な点滴あるいは、１個または複数個の巨丸薬の投与がおこなわ れる。

前記の抗喘息剤の治療上の利点は、キャリアとのカップリングを増強するか、核 剤の活性を増強するために加えられられた他のアミノ酸残基を有する機能性誘導 体の使用によって増強することができる。本発明の範囲には、特定のアミノ酸残 基を欠損している、または変性したアミノ酸残基を有しかつ細胞付着能を有する ＩＣＡλ４−１の機能性誘導体も含有される。

本発明の抗体およびＩＣＡＭ−１分子及びここに開示されたＣＤ１８フアミリー のメンバーは、もしこれらを含有する製剤が、普通は天然にこれらと共に見いだ される物質を実質的に含有しなければ、「実質的に天然の汚染物質を有さない」 と言われる。

本発明には喘息の処置においてＩＣ，ＡＭ−１またはＣＤ１８フアミリーのメン バーへ結合てきるポリクロナルまたはモノクロナル抗体類、およびそれらの生物 学的に活性なフラグメントの使用が含まれる。

患者に抗体類またはＩＣＡＭ−１もしくはＣＤ１８フアミリーのメンバーに結合 し得るそれらのフラグメントを投与するとき、またはＩＣＡＭ−１またはＣＤ１ ８フアミリーのメンバー（またはそれらのフラグメント、変異体あるいは誘導体 ）を被験患者に投与するどきのこれらの量は患者の年令、体重、身長、性別、一 般的な医学的状態、以前の病歴等のような要因に依存して様々に違って（るであ ろう、一般的な投与量は患者の体重１ｋｇあたり１ｐｇ〜１０ｍｇの範囲にする ことが望ましいがこれよりも少な（するかまたは多くしてもよい。有効な投与量 は、前記の剤との併用（例えば、抗ＩＣＡ＼４−１抗体と抗ＬＦＡ−１抗体との 併用）によって低減させることができる。ここで用いているように、２つの化合 物の投与が両者が同時に患者の血清中に探知できるような近接した時間内て行わ れたときには、一方の化合物に対して第２の化合物が追加的に投与されたと言わ れる。

本発明の抗喘息剤は被験者に対して、その喘息症状のひどさ、程度あるいは持続 期間を減弱または軽くするのに十分な量が投与される。

本発明の抗体剤あるいはそれらのフラグメント類は、単独で使用してもよく、あ るいは喘息症状を処置するのに必要なこれらの物質の量を減らすため、これに加 えて１種あるいはそれ以上の抗喘息剤、例えばメチルキサンチン類（テオフィリ ン等）、ベーターアドレナリン性のアゴニスト類（カテコールアミン類、レゾル ジノル類（ｒｅｓｏｒｃｉｎｏｌｓ）　、サリケニン（ｓａｌｉｇｅｎｉｎｓ） およびエフェドリン（ｅｐｈｅｄｒｉｎｅ）等）、グルココルチコイド（）＼イ ドロコルチゾン等）、クロモーン（ナトリウムクロモ−リン等）および抗コリン 作用剤（アトロビン等））と組み合わせて使用してもよい。

本発明による前記の剤は「予防」あるいは「治療」目的のために投与することが できる。予防目的のためには、核剤は喘息症状に先立って投与される。核剤の予 防的投与によって、その後の喘息応答を抑制あるいは減弱する。治療目的のため には核剤は喘息症状の兆候時、あるいはその少し後に投与される。核剤の治療的 投与は実際の喘息症状の発現の低減に役立つ。このように本発明による前記の剤 を一連の予想される喘息症状の発現に先立って投与することによって、その症状 の予想されるひどさ、程度あるいは期間を減弱または縮減することができ、また はその症状の発現後にも投与することができる。

被験患者に対する投与が許容（ｔｏｒｅｌａｔｅ）される組成物は「薬理学的に 許容されれる」ものである。その投与量が生理学的に有意である剤は「有効治療 量」を投与されたことになる。その存在によって、被験患者に検知可能な生理学 的変化をもたらす剤は生理学的に有意である。

本発明による剤は薬学的に有用な組成物を調製する既知の方法によって調製する ことができる。この場合、これらの物質、またはその機能性誘導体は薬学的に許 容されるキャリアービヒクルとの混合物として使用される。ヒトの他のタンパク 質、たとえばヒト血清アルブミンを含む適当なビヒクルおよびこれらの配合処方 は、例えば「レミングトン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）の薬剤化学」第１６版；オー ツル（Ｏｓｏｌ、　Ａ、）編集Ｊａｃｋ、　Ｅａｓｔｏｎ　ＰＡ　（１９８０年 ）に述べられている。

効果的投与に適した薬学的に許容される組成物を調製するためには、このような 組成物に有効量の抗ＩＣＡＭ抗体あるいはＩＣＡＭ−１分子またはそれらの機能 性誘導体を適当な量のキャリアービヒクルと共に配合する。

活性の持続時間を調節するため、他の製剤学的方法を使用してもよい。抗ＩＣＡ Ｍ−１抗体あるいはＩＣＡＭ分子またはそれらの機能性誘導体を吸収するか、ま たはこれらとのコンプレックスを形成するポリマーを使用することによって徐放 性製剤を調製してもよい。

適当な高分子の種ｇｌ（例えば、ポリエステル類、ポリアミノ酸類、ポリビニル ピロロリドン、エチレンビニルアセテート、メチルセルロース、カルボキシメチ ルセルロースまたは硫酸プロタミン）、および高分子類の濃度および放出を制御 するための配合法を適宜選択することによって有効成分の放出を調整してもよい 。徐放性製剤によって作用持続時間を調節する他の方法は、抗ＩＣＡＭ−１抗体 あるいはＩＣＡＭ−１分子またはそれらの機能性誘導体をポリエステル類、ポリ アミノ酸類、ヒドロゲル類、ポリ（酪酸）またはエチレンビニルアセテートコポ リマー類のような高分子の粒子に配合する方法である。あるいは、これらの剤を 高分子の粒子中に配合せずに、これらの剤を、たとえば、コアセルベーンコン法 および界面重合法によってそれぞれ調製したヒドロキシメチルセルロースまたは セラチン製マイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）製マイクロカ プセル等のマイクロカプセル、あるいは例えばリポソーム、アルブミン微小球、 マクロエマルジョン中ナノパーティクルおよびナノカプセルのようなコロイド状 薬剤放出系、またはマクロエマルジョン中に存在させることも可能である。この ような調製法は「レミングトンの薬剤科学Ｊ　（１９８０年）に開示されている 。　以上、本発明を一般的に記述した。さらに理解を容易にするために本発明を 以下の実施例によって例証するが本発明はこれらの実施例に限定されるものでは ない。

実施例ｌ ＣＤ１１およびＩＣＡＭ−１細胞付着分子に依存する肺好酸球の付着反応 好酸球の遊走能と細胞毒性機能に関する好酸球の細胞付着に対する要件を評価す るために、インビトロでの好酸球付着を検討した。

特に、蛋白質で被覆したプラスチック、およびヒト内皮細胞への霊長類の好酸球 の付着における細胞間付着分子ＣＤ１８フアミリーおよびＩＣＡＭ−１の役割を 調べた。

記法によって精製しく形態学的純度：９３％以上）、洗浄し、そして９６ウェル 平底組織培養プレートに５×１０３細胞／ウエルの濃度で移したＣ３７℃で、６ ０分間の培養の後、非付着細胞をプレート洗浄器を用いて除いた。付着細胞は視 覚的に計数するとともに（凝集と脱顆粒は認められなかった）、好酸球パーオキ シダーゼ（ＥＰ○）を測定する比色定量法によって計数した。

好酸球は無処理ウェルの底または免疫複合体（回虫（Ａｓｃａｒｉｓ）抽出物お よび回虫免疫性モンキーの血清からの調製品）で被覆したウェルの底に自発的に 付着して拡散した。これとは対照的に、好酸球は、牛血清アルブミン、正常なモ ンキーの血清または回虫抽出物を含むタンパク質で被覆したウェルにはよ（付着 しながった。試験した様々な溶解性の刺激剤のうち、血小板活性化因子（Ｐ　Ａ 　Ｆ　）は、タンパク質で被覆したウェルに対する最も顕著で安定した、好酸球 の付着を誘発した（Ｆｉｇ、３参照）ｅ この付着過程における付着分子ＣＤ１８とＩＣＡＭ−１の役割を、これらの膜糖 タンパク質のそれぞれと反応するモノクロナル抗体を用いて試験した。使用した 抗体は以下のものを含む：Ｒ３，３およびＲ１５，７（抗ＣＤ１８）；Ｒ３，１ （抗ＣＤ１１ａ）：Ｍ１／７０およびＬＭ２／１　（抗ＣＤ１１ｂ）；ＲＲＩ／ １およびＲ６，５，Ｄ６　（抗ＩＣＡＭ−１）；およびＷ６／３２（抗ＨＬ−Ａ クラスり。

免疫複合体で被覆したウェルへの好酸球の付着は、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ１８に 対するｍＡｂｓが付着を阻害するが、ＣＤ１１ａ。

ＩＣＡＭ−１およびＨＬ−Ａに対するｍＡｂｓが付着を阻害しなかったことから ＣＤ１１ｂ依存性であることがわかった（Ｆｉｇ、４参照）。

同様の結果は、Ｐ　Ａ　Ｆを含む可溶性の刺激剤で活性化した好酸球とタンパク 質で被覆したウェルを用いて得られた。

ＬＰＳ　（１０ｎｇ／ｍｌ）で活性化し、グルタルアルデヒドで固定化した内皮 細胞に対する好酸球の付着もまた試験した。ヒト謄帯静脈内皮細胞をスミス（Ｓ ｍｉｔｈ、　Ｃ，Ｉ、　）らの方法、（Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ。

第８２巻、第１７４６頁（１９８８年）参照；この参考文献は本明細書の一部で ある）によって調製した。この活性化内皮細胞に対する、ＰＡＦ　（１０−７Ｍ ）によって誘発された好酸球の付着は、ＣＤ１１ａＳＣＤ１１ｂおよびＩＣＡ〜 １に対するｍ、Ａｂｓで部分的に阻害され、抗ＣＤ−１８で完全に阻害されるが 、抗ＨＬ−Ａによっては阻害されなかった（Ｆｉｇ、　５参照）にれらの実験か ら、観察された付着が部分的にＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂおよびＩＣ，ＡＭ　１に 依存することが明らかになった。

まとめると、霊長類の肺好酸球は、ＣＤＩ　１ａ、ＣＤＩ　ｌｂおよびＩＣＡＭ ７１を含む膜付着反応において、ヒトの好中球とほぼ同じ挙動を示す。従ってＣ ，ＡＭｓのＣＤ１８フアミリーは好酸球の付着に主要な役割を果し、Ｌ　Ａ　Ｄ 患者における好酸球の選択的な組織蓄積の原因となる。

実施例２ 好酸球浸潤におけるＩＣＡＭ−１の役割気管支喘息のちととなる気道の炎症を特 徴付ける好酸球浸潤、気道上皮落屑および上昇した気道応答性にＩＣＡＭ−１が 寄与することを示すため、ＩＣＡＭ−１と反応するモノクロナル抗体の霊長類の 喘息に対する効果を調べた。特に、（ａ）インビトロにおける血管内皮に対する 好酸球の付着に対するＩＣＡＭ−１の寄与、（ｂ）インビボにおける気管支血管 内皮並びにインビトロおよびインビボにおける気道上皮上でのＩＣＡＭ−１の誘 発、および（Ｃ）インヒポにおける抗原の多数回吸入によって誘発された好酸球 の浸潤および気道応答性の増加に対するＩＣＡＭ−１の寄与を調べた。

細胞付着を評価するために霊長類の肺好酸球を血小板活性化因子（ＰＡＦ、ＩＣ Ｉ’Ｍ）で刺激し、リポポリサッカライド（ＬＰＳ。

１０ｎｇ／ｍ］）で刺激した培養ヒト謄帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）の存在 下で培養した。好酸球は好酸球増加症を煩う成長ジノモルガス・モンキー（Ｍａ ｃａｃａ　ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）より気管支肺胞洗浄によって採取し、パ ーコール連続密度勾配法によって精製した後、９６ウ工ル平底組織培養用プレー トへ移した（５Ｘ１０３細胞／ウエル）。３７℃で６０分間の培養の後、非付着 細胞を自動プレート洗浄器で除いた。付着細胞は視覚的に定量すると共に、好酸 球パーオキシダーゼＥＰＯに対する比色定量法で計数した（ストラス（Ｓｔｒａ ｔｈ、　Ｍ、　）ら、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、、第８３巻、第２０ ９頁（１９８５年）参照）。ヒト履帯静脈内皮細胞を単離し、それぞれのウェル において融合性の単層になるよう培養し、ＬＰＳで４時間刺激し、最後に１％グ ルタルアルデヒド中で固定した（スミス（Ｓｍｉｔｈ、　Ｃ，ｊ　）。免疫複合 体のウェルは、回虫抽出物をウェルに被覆した後、回虫感受性モンキーの血清で 被覆して調製した。

付着は抗ＩＣＡＭ−１モノクロナル抗体であるＲ　Ｒ１／１で有意に抑制された （ロスライン（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，）ら、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第１ ３７巻、第１２７０頁（１９８６年）：マーリン（ｌｌａｒｌｉｎ、　Ｓ、Ｄ、 ）ら、Ｃｅ　］　］、第５１巻、第８１３頁（１９８７年）参照）　（Ｆｉｇ、 　６Ａ参照）。

これに対して、ＨＵＶＥＣｓにも結合する抗ＨＬＡクラス１コントロール・モノ クロナル抗体Ｗ６／３２は好酸球の付着を抑制しなかった（Ｆｉｇ、６Ａ参照） ｅ 免疫複合体被覆プラスチックに対する霊長類肺好酸球の付着はＲＲ１／１では阻 害されず（Ｆｉｇ、６　Ｂ参照）、このことは内皮への付着の阻害に対する特異 性を示すものである。これらの結果は、ＩＣＡＭ−１が内皮に対する好酸球の付 着に対して重要であり、インビボにおける炎症組織への好酸球の遁走に寄与する ことを示す。

組織内への遊走に対して必要なだけでなく、白血球の付着は細胞毒性組織損傷の 前提条件である。標的細胞に対するエフェクター細胞の付着の阻害は、インビト ロにおけるリンパ球と顆粒球が媒介する組織損傷の両方、およびインビボにおけ るアロ移植片拒絶を減少させる（マーク（Ｍａｒｔｚ、　Ｅ、）ら、Ｊ、　Ｉｍ ｍｕｎｏｌ８、第１３３巻、第２９７２頁（１９８４年）参照）。好酸球および その生産物は気道上皮の落屑にかかわっているだけでなく　（フリガス（Ｆｒｉ ｇａｓ、　Ｅ、）ら、よび喘息症状（ハーグレープ（Ｒａｒｇｒｅａｖｅ、　Ｆ 、Ｅ、）ら、Ｊ、　Ａｌｌｅｒｇｙ３９９頁（１９８３年）：チャンーイエン（ Ｃｈａｎ−Ｓ’ｅｕｎｇ、組）ら１、Ａｍ、　Ｊ、　ｌｅｄ、、第７２巻、第４ １１頁（１９８２年）、フリーカス（Ｆｒｉｇａｓ、Ｅ、）ら、Ｊ、Ａｌｌｅｒ ｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７７巻、第５２７頁（１９８６年）参 照）とも密接に関連しているので、インヒドロての気道上皮細胞におけるｊＣ， ＡＭ−１誘発に対する様々な前炎症性すイトカイン類の効果を調べた。

抗ＩＣＡＭ−１モノクロナル抗体ＲＲＩ／１およびＲ６，５（スミス（Ｓｍｉｔ ｈ、　Ｃ１ｔ、　）ら、Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、、第８２巻、第１７ ４６頁（１９８８年）参照）を用いることによって、インターロイキン−１ベー タ（ＩＬ−１ｂ）　、ヒト組換え腫瘍壌死因子アルファ（ＴＮＦａ）およびヒト 組換えインターフェロンガンマ（ＩＦＮｇ）による１６時間の刺激が培養したモ ンキーの気管支上皮細胞の単層上におけるＩＣＡＭ−１の発現が増強さねること が認められた（表２参照）Ｃ 表２はインビトロにおける気管支上皮細胞上でのＩＣＡＭ−１の誘発に対する前 炎症すイトカイン類の影響を示す。アカゲサル（ｒｈｅｓｕｓ　ｍｏｎｋｅｙ） の気管支上皮セルライン４ＭＢｒ−５（アメリカン、タイプ・カルチャー・コレ ク／ヨン（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　ＣｕｌｔｕｒｅＣｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ）から入手）を融合性の単層に培養した後、ＩＬ−１ｂ。

ＴＮＦａまたはＩＦＮｇＴ１６時間刺激した。Ｉ　ｃＡｈｑ−１１モノクロナル 抗体ＲＲＩ／１（ロスレイン（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，）ら、Ｊ、　Ｉｍｍｕ ｎｏｌ、、第１３７巻、第１２７０頁（１９８６年）；マーリン（Ｍａｒｌｉｎ 、　Ｓ、　Ｄ、　）第１７４６頁（１９８８年）コおよびＬＦＡ−１アルフア［ モノクロナル抗体Ｒ３，１（ロスレイン（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ，）ら、Ｊ、 　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第１４１巻、第１６６５頁（１９８８年）参照）コの発現 に対するエリサ試験は先に述べたごと（行った（ロスレイン（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ 、　Ｒ，）表中の数値は２回の培養における正常マウスのガンマグロブリン・ハ ックグラウンドに対する光学密度ユニットの平均値を表し、４種の独立した実験 の代表値である。

表２ 光学密度ユニット ＲＲＩ／Ｉ　Ｒ６，５Ｒ３，１ 刺激　濃度　（抗ＩＣＡｌｌ−１）　（抗ＩＣＡＭ−１）　（抗ＬＦ＾−１８） 非刺激　９２　２０６　−２７ ＩＬ−１ｂ　Ｏ，１−Ｌニット／ｍｌ　１３０　２５３　−３３１ユニット／ｍ １　、　１６６　２５３　−３２１０ユニット／ｍｌ　１４９’　３２２　−３ ７ＴＮＦａ１ユニット／ｍｌ　１００　２３６　−３０１０ユニット／ｍｌ　１ ３１　２６６　−２９１００ユニット／ｍｌ　１５９　３４６　−３１１０００ ユニット／ｍ１　１７８　４１６　−３６ＩＦＮｇ　０．１ユニット／ｍｌ　１ ３ｇ　２７６　−１６１ユニット／ｍｌ　２６３　４２３　−１７１０ユニット ／ｍｌ　４１３　６７３　−２６１００ユニット／ｍｌ　５７６　９４０　−２ ７増強されたＩＣＡＭ−１の発現の経時変化（表３参照）はインビトロにおける ＨＵＶＥＣ５（スミス（Ｓｍｉｔｈ、　Ｃ，ｆ、　）ら、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、、第８２巻、第１７４６頁（１９８８年）参照）およびインビボ におけるヒトの皮膚のケラチン生成細胞（ワンツイン頁（１９８９年）参照）に 関して以前に報告されたものと同じであった。予期されたように、抗ＬＦＡ−１ アルファ・モノクロナル抗体Ｒ３，１（Ｏスレイン（Ｒｏｔｈｌｅｉｎ、　Ｒ， ）ら、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第１４１巻、第１６６５頁（１９８８年）参照 ）は非刺激または刺激した気管支上皮には結合しなかった（表２）。これらの結 果は、白血球（例えば好酸球）が媒介するインビボの気道上皮落屑にＩＣＡＭ− １が寄与していることを示唆する。

表３はインビトロの気管支上皮細胞におけるＩＣＡＭ−１の誘発の経時変化を示 す。アカゲザル気管支上皮セルライン４ＭＢｒ−５（アメリカン・タイプ・カル チャー・コレクションから入手）を融合性のｍ＠に培養したと後、Ｉ　Ｌ−１ｂ 　（１０ｎｇ／ｍｌ）またはＩＦＮｇ（１０ユニ、）／ｍｌ）でさまざまな時間 刺激した。ＩＣ，ＡＭ−１の発現［モノクロナル抗体Ｒ６，５（スミス（Ｓｍｉ ｔｈ、　Ｃ，ｊ　）ら。

に対するニリサ試験は、先に述べられたようにしておこなった（口５頁（１９８ ８年）参照）。表中の数値は３回の培養における正常マウスガンマグロブリンに 対する光学密度ユニットの平均値を表し、２種の独立した実験の代表値である。

表３ 刺激時間　刺激剤 （時間）　ＩＬ−１ｂ　ＩＦＮｇ ｏ　２１５　２１５ 実施例３ インビボ落屑に対するＩＣＡＭ−１の寄与インビボにおける好酸球が媒介する気 道上皮の落屑に対するＩＣ７八Ｍ−１の寄与能をさらに研究するために、抗原の 多数回吸入がインビボで気道上皮上でのＩＣＡＭ−１の発現を誘導するかどうか を決定するため免疫組織化学的染色を行った。

組織は先に述べたプロトコール（ワンツイン（Ｗａｎｔｚｉｎ、　Ｇ、　Ｌ、　 ）　ラ、Ｊ、　Ａｍ、＾ｃａｄ、　Ｄｅｒｍａｔｏｌ、、第２０巻、第７８２頁 （１９８９年）参照）の変法を用いて染色した。簡単に述べると、組織試料を採 取し、液体窒素中で凍結した。組織を薄片状に凍結切断した後、５−１０ミクロ ンの切片をアセトン中１０分間固定化した後、すぐに染色するか、あるいは−２ ０℃で保存した。染色はＢｉｏｔｅｉｎ−５ｔｒｅｐｔ　Ａｖｉｄｉｎシステム キットを用いて製品のプロトコールに従っておこなった（バイオジェネックス（ ＢｉｏＧｅｎｅｘ）　、ＣＡ）。最初に抗体を無希釈培養上清（１０％ＦＢＳ含 有ＲｐＨ１１６４０培地）として組織とともに１時間室温で培養した。非特異的 なタンパク質結合の抑制は、正常ヤギ血清を適応して行ったｅＡＥＣ（３−アミ ノ−９−エチルカルバゾール）を基質として用い、切片をメイヤーのヘマトキシ リン（Ｍａｙｅｒ’　ｓＨｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ）で対比染色した。

隔日３回のうちの３回目の回虫吸入から２０分間経過後の回虫抗原過敏性モンキ ーから採取した上皮（外側基底部のみ）および気管部血管内皮のどちらにもＩＣ ＡＭ−１に対する明白な染色が認められたｃＬＦＡ−１アルフアに対しては染色 が認められたが（アンダーワン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、Ｃ１）ら、］、　Ｉ ｎｆ、　Ｄｉｓ、、第１５２巻、第６６８頁（１９８５年）；アンダーワン（Ａ ｎｄｅｒｓｏｎ、　Ｄ、Ｃ，）ら、＾ｎｎ、　ＲｅｓＭｅｄ、、第３８巻、ｔｉ ｇ１７５頁（１９８７年）；トッド（Ｔｏｄｄ、　Ｒ，Ｆ、　）ら、）ｌｅｍａ ｔｏｌ、１０ｎｃｏ１．　Ｃ１１ｎｉｃｓ　Ｎ、　Ａｍｅｒ、、第２巻、第１３ 頁（１９８８年）参照）気道上皮には染色は認められず（表２参照）、このこと は上皮の基底膜のすぐ下に最も顕著に認められた間質への白血球の浸潤を表して いる。さらに、白血球は、ＩＣＡＭ−１染色が最も顕著であった上皮の外側基底 部に主としである上皮細胞の間に顕著であった。マウスの血清を使用しても、は とんどあるいは全く非特異的染色は認められなかった。回虫を一回吸入させてか ら２０分間経過後の回虫過敏性モンキーから採取した気管部が染色したことは（ Ｉ　ＣＡＭ−１、ＬＦＡ−１アルフアおよびマウス血清を使用）は、その発現に 必要な時間から予期されるように（表３およびワンッ、イン（Ｗａｎｔｚｉｎ、 　Ｇ、Ｌ、）ら、］、　Ａｍ、＾ｃａｄ、　Ｄｅｒｍａｔｏｌ、第２０巻、胆罫 Ｓ１、第８２巻、第１７４６頁（１９８８年）参照；これらの参考文献は本明細 書の一部である）、この部位の上皮あるいは血管内皮上にはほとんど、あるいは 全＜ＩＣＡＭ−１染色がなかったことを示す。

さらに、白血球の浸潤ポケットが認められたにもかかわらず、白血球は上皮基底 膜のすぐ下には蓄積せず、上皮細胞の間には認められなかった。かようにして、 これらの免疫組繊化学的染色試験の結果はＩＣＡＭ−１に依存する好酸球と上皮 細胞との相互作用が喘息患者にみられる気道上皮落屑に寄与するであろうことを 示すものである。

実施例４ 喘息におけるＩＣＡＭ−１のインビボ効果上に述べたインヒドロおよび免疫組織 化学的プロトコールを用いて、気道過応答性および喘息の発病におけるＩＣＡＭ −１の果している重要な役割が明らかになっテニので、次に抗ＩＣＡＭ−１抗体 のインビボ効果を調べた。これらの研究のため、喘息動物モデルを使用した。こ のモデルはどの哺乳類を使用してもよいが、霊長類をこのモデルに用いるのがも っとも好ましい。喘息症状を誘発するために、１匹のモンキーに抗原の吸入を隔 日３回行った。この処置によってモンキーにおいてメサコリン吸入に対する気道 応答性の一定の上昇（通常は８倍以上）が誘発された（ウニブナ−（％ｅｇｎｅ ｒ、　Ｃ，Ｄ、）＾ｍ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１３９巻、 第Ａ３２４頁（１９８９年）参照：この参考文献は本明細書の一部である）。こ の気道応答性の上昇に先立って強い好酸球の浸潤が起こり、この上昇は、花粉の 季頁（１９８４年））または職業的なアレルゲンの持続的暴露による９７９年） 参照）において誘発されるものと程度において同じである。メサコリンの代わり にヒスタミンあるいは他の類似の化合物、およびメサコリン等価物を使用するこ とができる。

この動物モデルを使用し、インビボにおける好酸球浸潤および気道過応答性の誘 発に対する抗ＩＣＡＭ−１モノクロナル抗体Ｒ６，５の効果を調べた。

このモデルにおいて、気道細胞組成および気道反応性を、隔日３回（第３．５． 及び７日）の抗原吸入を行った３日前（第０日）および３日後（第１０日）に測 定した（ウニブナ−（Ｗｅｇｎｅｒ、　Ｃ，Ｄ、）Ａｍ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐ ｉｒｅ、　Ｄｉｓ、、第１３９巻、第Ａ３２４頁（１９８９年）参照）。気道細 胞組成は気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）によって測定した。気道応答性は呼吸器系の 抵抗が１００％増加するメサコリンの吸入濃度（ＰＣ＋ｏｏｅを確定することに よって測定した。Ｒ６，５は静脈内に１．７６ｍｇ／ｋｇを第２−９日に毎日投 与した。Ｒ６，５投与に関する実験はそれぞれの動物について行われた一連のコ ントロール実験と比較した。

Ｒ６，５（抗ＩＣＡＭ−１）処理は５匹の被検動物すべてにおいて好酸球の＆潤 を減少させた（Ｆｉｇ、７．Ａ参照）ｅ気道応答性の増加（吸入したメサコリン ＰＣ，。。の減少）もまた５匹すべての動物において抑制され、特に４匹におい て顕著であった（Ｆｉｇ、７Ｂ参照）Ｃ驚くべきことに２匹の動物（Ｃおよびｄ ）においては、Ｒ６゜５処理によって、抗原の多数回吸入にもがかわらず、コン トロール実験においてそうであったように、気道応答性は増加しなかったたけて なく実際減少し、（メサコリンＰＣ，。。の増加）、このことは、これらの動物 において上昇した基本的な気道応答性が反転したことを示す。

まとめると、これらの結果は、ＩＣＡＭ−１がインビボにおいて慢性的に炎症を おこしている気管支血管内皮上に選択的に誘発され、このＩＣＡＭ−１はインビ トロにおける好酸球の血管内皮に対する付着に寄与し、抗ＩＣＡＭ−１モノクロ ナル抗体はインビボにおける抗原吸入によって誘発された好酸球浸潤を減少させ ることを証明している。さらにＩＣＡＭ−１の発現は、インビトロにおいてサイ トカインで刺激された気道上皮上で増強され、インビボにおける慢性炎症性気管 支上皮上に選択的に誘発され、これらのことはインビボにおける気道上皮落屑の 原因にＩＣＡＭ−１が寄与していることを示している。抗ＩＣＡＭ−１モノクロ ナル抗体は、モンキーにおいて抗原の多数回吸入によって誘発される気道応答性 の増加を抑制することができる。

これらの結果は、ＩＣＡＭ−１が気道過応答性および喘息の病因の中軸的な役割 をはたしていることを示す。ＴＣＡＭ−１は同様に気道の炎症で特徴づけられる 他の疾病［例えば、慢性気管支炎、気（）Ｉｕｎｎｉｎｇｈａｋｅ、Ｇ、　Ｙ、 ）ら、Ａｍ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１２３巻、第４０７頁 （１９８１年）参照）：：または好酸球の浸潤および組織の感作／破壊で特徴づ けられる他の疾病［例えば鼻炎、鼻茸腫、慢性辱麻疹、アトピー性皮膚炎（マイ ジンド（Ｍｙｇｉｎｄ、　Ｎ、）ら、Ａｌｌｅｒｇｙ、第３４巻、第１９５頁（ １９７９年）：ムラーキー（Ｍｕｌｌａｒｋｅｙ、　Ｍ。

第８１巻、第３９頁（１９８３年）：レイファーマン（Ｌｅｉｆｅｒｍａｎ。

進行に寄与する。従ってこのような細胞付着を妨げるか減少させる剤は、これら 疾病の処置において、これらを喘息の処置において使用出来る場合と同様の方法 で使用することができる。

実施例５ モンキーにおける気道応答性に及ぼす一回および多数回抗原吸入の効果 第８６４頁〜第８７２頁（１９８６年）；フルシュ０１ａ？ｓｈ、　Ｉ、　Ｒ， ）ら、Ａｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１３１巻、第８７ ５頁〜第８７９頁（１９８５年）参照）およびヒト（カルチ！　（Ｃａｒｔｉｅ ｒ、　Ａ）ら、Ｊ、　Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７０ 巻、藁１７０頁〜第１７７頁（１９８２年）、コックロフト（Ｃｏｃｋｒｏｆｔ 、　Ｄ、Ｗ、）ら、Ｃ１１ｎｉｃａｌ什独■、第７巻、第５０３頁〜第５１３頁 （１９７７年）参照）においては、アレルゲンの一回吸入は穏やかな（２〜６倍 ）気道応答性の上昇をもたらす。花粉の季節（ボウレット（Ｂｏｕｌｅｔ、　Ｌ 、−Ｐ、）ら、Ｊ、Ａｌｌｅｒｇｙ、　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７１ 巻、第３９９頁〜第４０Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１３０巻、第 ５６頁〜第５８頁（１９８４年）参照）または職場状況（チャンーイニン（Ｃｈ ａｎ−Ｙｅｕｎｇ、　Ｍ、　）ら、＾ｒｎｅｒ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、第７２巻、第 ４１１頁〜第４１５頁（１９８２年）、参照）においては、ヒトはアレルゲンに 繰り返しさらされるので、より大きな（しばしば＝１０倍）気道応答性の増加が もたらされることが報告されている。

モンキーに週に１度４週間抗原被覆ビーズを点滴投与したところ、気道応答性は １０倍に増加した（ガンデル（Ｇｕｎｄｅｌ、　Ｒ，Ｈ，）ら、Ａｍｅｒ、　Ｒ ｅｖ、　Ｒｅｓ　ｉｒ、Ｄｉｓ、、（１９８９年）参照：この参考文献は本明細 書の一部である）。

有用な動物喘息モデルをさらに開発するため、モンキーにおけるメサコリン吸入 に対する気道応答性におよぼす一回および多数回抗原吸入の効果を調べた。気道 の炎症（フルシュ（ｉｌａｒｓｈ、　Ｗ、　Ｒ，）ら、０巻、第５７５頁〜第５ ７７頁（１９８６年）参照）特に好酸球の浸潤は（カンデル（Ｇｕｎｄｅｌ、　 Ｒ，Ｈ，）ら、Ａｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、３７巻、第 ６９頁〜第６９頁（１９８８年））、気道過応答症の発症にある役割を果たすと 仮定されており、気道細胞組成も付随的に調べた。

これらの効果を調べるために、体重４．６〜８．２ｋｇの７匹の成長オス、ジノ モルガス・モンキー（ＣＭａｃａｃａ　Ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）チャールズ ・リバー・ブリメート・インボーツ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｐｒｉｍａ ｔｅＩｎｐｏｒｔｓ）、ポート、ワンントン、ＮＹ）を使用した。全ての被験動 物は吸入させたブタ回虫（Ａｓｃａｒｉｓ　ｓｕｕｍ）抽出物に対して、自然発 生的で再視可能な呼吸器系過敏症を示した。被検動物は塩酸ケタミ＞　（１ｍｇ ／ｋｇ、　ｉ、ｍ、；ケタセット（Ｋｅｔａｓｅｔ）、ブリストル・ラボラトリ ーズ（Ｂｒｉｓｔｏｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））およびキシラシン（４ｍ ｇ／ｋｇ、ｉ、　ｍ、　；ロンブン（Ｒｏｍｐｕｎ）、マイルス・ラボラトリー ズ・インコーホレイテッド（Ｍｉｌｅｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ 、　））で麻酔し、折り返しをつけた気管内チューブ（５，５ｍｍ１　Ｄ　：マ リンクロラド・クリティカル・ケア（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ　Ｃｒ１ｔｉｃ ａｌ　Ｃａｒｅ）　ｃａｔ：８６０４８）を挿管し、特別にデザインされた支持 椅子に垂直に座らせて実験した。ケタミン（４ｍｇ、’ｋｇ、ｉ、　ｍ、　）は 必要時に麻酔の補足のために単独で使用した。

気道応答性（メサコリンＰ　Ｃ＋　ｏｏ）、および気道細胞組成（Ｂ　Ａ　Ｌ　 ）を、回虫抽出物の一回吸入の１日前と２０時間後、あるいは回虫抽出物の３回 の隔日吸入（第３．５及び７日）の３日前（第０日）および３日後（第１０日） に測定した。すべての７匹の被験動物をこの両方のプロトコールで実験した。結 果を表すため、それぞれの動物に１文字の呼び名を与えた。

喘息患者においては、気道応答性の上昇のピークはアレルゲンのチャレンジ後３ 〜２４時間の間に起こる（カルチェ（Ｃａｒｔｉｅｒ、　Ａ）ら、ＪＡｌｌｅｒ ｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７０巻、第１７０頁〜第１７７頁（１ ９８２年）、コックロフト（Ｃｏｃｋｒｏｆｔ、　Ｄ、Ｗ、）ら、Ｃ１ｉｎｉｃ ａｌハム（Ｄｕｒｈａｍ、　Ｓ、Ｒ，）ら、Ｊ、　Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、 　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７９巻、第３９８頁〜第４０６頁（１９８７年）参照） ｅそこで、気道応答性は抗原の一回吸入から２０時間後に測定した。

しかしながら、それぞれの動物に６日間の間に４回目の麻酔をすることを避ける ため、気道応答性は抗原の多数回吸入の２０時間後には測定しなかった。その代 わり、気道応答性の測定は抗原の多数回吸入の３日後に行った。気道の炎症（即 ち、好酸球の浸ｆｆ１）が抗原吸入の３日後でもまだ持続していることが分かっ た（ウニブナ−（Ｗｅｇｎｅｒ、　Ｃ，Ｄ、）ら、Ａｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１３５巻、第Ａ２２１頁（１９８７年）参照：この参 考文献は本明細書の一部でこの実験においては、豚回虫（Ａｓｃａｒｉｓ　ｓｕ ｕｍ）抽出物（ＧｒｅｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ｃａｔ　ｅＢ−３３）を 抗原として使用した。この抽出物はｌ。

ン酸塩緩衝（５ｍＬ　ｐＨ７，４）食塩水（０，５％）（ＰＢＳ）で希釈し、空 気噴霧器（ａｉｒ　ｎｅｂｕｌｉｚｅｒＸバード・マイクロネブライザー、モデ ル８１５８）で圧縮し、およそ２分間に２ＱｃｍＨ２０までの３０回の吸入を行 う断続的正圧呼’Ｑｋ　（Ｂｉｒｄ　Ｍａｒｋ７Ａ型ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒ）に よって投与した。それぞれの動物に対して、可逆的に１５０〜３００％の呼吸器 系抵抗の急性的増加を起こす回虫抽出物の１度をあらかじめ確定し、これを使用 した。メサコリンのチャレンジは、１分間に１５回の呼吸のみとする以外は同じ 方法で行った。

呼吸器系のインピーダンス（Ｚｒｓ）はウニブナ−（Ｉｅｇｎｅｒ、　Ｃ，Ｄ、 ）らの方法に従い（Ｒｅｓｐｉｒ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、、第５５巻、第４７頁〜 第６１頁（１９８３年）参照：二の参考文献は本明細書の一部である）、呼吸気 を表すシヌソイド型の振動の不連続な周波数（４〜４０Ｈｚを１１の等しい対数 段階に分けた）によって測定した。Ｚｒｓの実成分もしくは同相成分の周波数の 範囲にわたる平均値を計算し、呼吸器系抵抗（Ｒｒｓ）を表す単一値を得た。Ｒ ｒｓはの抗原吸入から３．　７．　１０．　１５．　２０および３０分後、およ びそれぞれのメサコリンチャレンジから１及び３分後に測定した。

気道応答性はＲｒｓの１００％の増加を誘発する噴霧吸入したメサコリンの濃度 （Ｐ　Ｃ＋。。）を決定することによって評価した。これは基底状態からＲｒｓ の１００％以上の増加が得られるまでメサコリン（ＰＢＳで希釈）を半対数段階 で濃度を増加して投与（７分間隔）することによって行った。ＰＣ＋ｏｏはその 後、メサコリンの対数濃度の最後の２もしくは３点に対するＲｒｓの増加％のプ ロットの線形回帰分析によって計算した。

気道の細胞組成は気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）によって調べた。小児用光フアイバ ー気管支鏡（オリンパス社、モデルＢＦ−３Ｃ４）を、分岐櫛（ｃａｒｉｎａ） を過ぎ、典型的には第５から第７ジエネレーシヨン気管支に分は入るまで挿入し た。重炭酸塩緩衝（０，５ｍＭ）正常生理的食塩水（ｐＨ７，４）のアリコート １５ｍ１をその後注入し、気管支鏡内のチャネルを通して穏やかに吸引した（吸 引体積、７〜１０ｍ１）。

１ｍＭのＢＡＬあたりのトータルの白血球数はクールターカウンター　（Ｃｏｕ ｌｔｅｒ　ｃｏｕｎｔｅｒ）（クールター　エ／クトｏニクス、モデルＺ０．） を用いて測定した。鑑別細胞計数（トータルで２００個の細胞を計数した）は、 ライトーギムザ精製遠心分離（ンヤンドン・サイトスピン（Ｓｈａｎｄｏｎ　Ｃ ｙｔｏｓｐｉｎ）　、モデル２）で調整して行った。後のＢ　Ａ　Ｌの結果への 先のＢ　Ａ　Ｌの影響を防ぐため、抗原吸入の前後に行うＢ　Ａ　Ｌは肺の違っ た方で行った。

平方偏差の解析はノンパラメトリック・クラス力ルークリス（ＫｒｕｓｋａｌＪ ａｌｌｉｓ）テスト（カイ二乗近似）によって行った。相関はバーツン（Ｐｅａ ｒｓｏｎ）のプロダクトーモメントおよびスペアマン（Ｓｐｅａｒｍａｎ）の変 数のランクを用いて行った。ｐ値が０．０５以上を有意でないとした。

抗原の一回吸入はチャレンジ後１０〜１５分に最高となるＲｒｓの急性増加（３ ０’７：６２％）、気道白血球の増加（ＢＡＬｌｍｌあたり２６７−：１９Ｘ１ ０”が６９４立１４２Ｘ１０”／ｍｌへ、ｐ）Ｘ２＝０．０１８）および３匹の 動物にメサコリンＰＣ，。Ｏの低下、これは２匹においては中程度（〉８倍）で あった（Ｆｉｇ、８Ａ参照）、を引き起こした。気道白血球の増加は、すべての 動物における好酸球（Ｆｉｇ、８Ｂ参照）、３匹における好中球（Ｆｉｇ、８（ 参照）、５匹におけるマクロファー′；／モノサイト（Ｆｉｇ　８ｐ参照）およ び４匹におけるリンパ球（Ｆｉｇ、８　Ｅ参照）の浸潤からなる。気道応答性（ メサコリンＰＣ１゜。）の変化の程度および方向ははＲｒｓの急性増加の強度と も、またはどの白血球のサブタイプの＆潤の量／存在とも相関しなかった（表４ 参照）。

抗原の多数回吸入はＲｒｓの急性増加（それぞれ、１７８＝４８％、３８０土８ ３％および３３１：６３％）および気道白血球数の増加（Ｂ、ＡＬ１ｍｌ当たり ２０９＝４２Ｘ１０３が５５３±１２９×１０３へ、ｐ＞Ｘ２＝０．００８８） および７匹すべてにおいて、２匹は中程度（〉８倍）および３匹は激しく　（＞ ８０倍）メサコリンＰ’Ｃ１００の減少を引き起こした。気道白血球の増加は、 好酸球の顕著な浸ａ　（Ｆｉｇ、９　Ｂ参照）および好中球のほんの少しの浸１ （Ｂ、へＬｌｍｌあたり８．５＝２．６　Ｘ　１０３が３１．０ニア、　５Ｘ　 １０”へ、ｐ＞Ｘ”＝０．０１０）からなる。マクロファージ／モノサイト（Ｂ ＡＬｌｍｌあたり１７９±３６ｘ１０３が２０９±４０×１０３へ）およびリン パ球（ＢＡＬｌｍｌあたり３．０＋１．２Ｘ１０３が３．０±１．２Ｘ１０３へ ）の有意な浸潤はなかった。気道反応性における増加（ＰＣ＋ｏｏの減少）の程 度は、好酸球の＆潤の強度とも抗原の一回吸入によって導かれる気道反応性（Ｐ Ｃ，。０）の変化の程度／方向とも相関しなかった（表５参照）０表４ メサコリンＰＣ，。。の変化と抗原の一回吸入に誘導される気管支収縮および白 血球の浸潤との比較 ＬＯｇＰＣ＋ｏｏ　Ｒｒｓ（％）　白血球浸潤（ＸＩＯ”／ｍ１ＢＡＬ）動物　 の変化　の増加　Ｅｏｓｉｎ、Ｎｅｕｔ、１ｉａｃ、／１ｌｏｎｏ、　Ｌｙｍｐ ｈｏ。

ａ　−１，０２４９４２３２９７１０５３，３ｂ　−０，９５２７８２６６−３ ３４２１２０，５ｃ　−０，７５１８１６６８８７１０４２，７ｄ　Ｏ，１６２ ４４２４２６２５３１８，６ｅ　Ｏ，２１５２５３８−６−７３−１，６ｆ　Ｏ ，２４６６１２４−２−７８−３，０ｇ　０．３６　３６０　２２１　１７８　 ２６４　−０．４平均　−０，２５３０７２２６７６１４２５，８Ｓ、　Ｅ、　 出０．２４　±６３　±８２　±４６　±６９　土３．７略号：Ｌｏｇ＝基底１ ０の対数値：　Ｐ　Ｃ＋ｏｏ＝Ｒｒ　Ｓを１００％増加させるのに必要なメサコ リン刺激濃度：Ｒｒｓ＝呼吸器系の抵抗：　ＢＡＬ＝気管支肺胞洗浄；Ｅｏｓｉ ｎ、＝好酸球＋Ｎｅｕｔ、好中球：Ｍａｃ、／Ｍｏｎｏ、＝フルロファージ／モ ノサイト：Ｌｙｍｐｈｏ、＝リンパ球 本有意な相関は認められなかった。

表５ 抗原の多数回吸入によって誘導されたメサコリンＰＣ＋ｏｏと好酸球浸潤の変化 、抗原の一回吸入によって誘導されたメサコリンＰＣ＋ｏ。

の変化の比較＊ 抗原の多数回吸入　Ａｇの一回吸入 Ｌｏｇ、　ＰＣ，ｏｏ　Ｅｏｓｉｎ、　Ｌｏｇ、　ＰＣ，ｏ。

動物　の変化　（ＪＯ３／ｍｌ　ＢＡＬ）　の変化ｄ　−２，６６１４４０，１ ６ ｂ　−２，１３３５２−０，９５ ｅ　−１，９５４０９０，２１ ａ−１，０７１３５−１，０２ ｇ　−０，９７１７４０，３６ Ｃ刊、　４３　２０６　−０．７５ ｆ　−０，２７１０９０，２４ 平均　−１，３６２０８−０，２５ Ｓ、Ｅ　±０．３４　：４４　±０２４略号　Ｌｏｇ＝基底１０の対数値；ＰＣ １ｏｏ＝呼吸器系の抵抗を１００％増加させるのに必要なメサコリン刺激濃度、 Ｂ、ＡＬ＝気管支肺胞洗浄：Ｅｏｓｉｎ、＝好酸球：、へｇ＝抗原本　有意な相 関は認められなかった これらの実施例は非特異的気道過応答性、これは臨床的には吸入したヒスタミン 、メサコリン、運動あるいは冷気に対する気道の応答性によって評価され、喘息 の特徴的な性質である（ボウノニイ（Ｂｏｕｓｈｅｙ、　ｔｌ、Ａ、）ら、Ａ＋ ｒ＋、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１２１巻、第３８９頁〜第４ １３頁（１９８０年）、ハーグレープ（Ｈａｒｇｒａｖｅ、　Ｆ。

Ｅ、）ら、Ｊ、＾ｌｌｅｒｇｙ　Ｃ１１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第６８巻、第 ３４７頁〜第３５５頁（１９８１年）参照）を示した。この気道過応答性の発症 のメカニズムは分かっていないが、多くの研究の結果は白血球の浸潤第１３１巻 、第８７５頁〜第８７９頁（１９８５年）、ラザルス５７５頁〜第５７７頁（１ ９８６年）、デモンン−（ＤｅＭｏｎｃｈｙ、　Ｊ。

Ｇ、Ｒ，）ら、＾ｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１３１巻 、第３７３頁〜第３７６頁（１９８５年）、ワードｏ　−（Ｗａｒｄｌａｗ、＾ 、Ｊ、）ら、態ジ１Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、第１３７巻、第６２ 頁〜第６９頁（１９８８年）、メツツガ−（Ｍｅｔｚｇｅｒ、　Ｗ、Ｊ、）ら、 Ｃｈｅｓｔ、第８９巻、第４７７頁〜第４８３頁（１９８６年）参照）、および ／またはもとがらある細胞あるいは浸潤してきた細胞から遊離したメデノニータ ー類（ランス（Ｌａｎｅｓ、　Ｓ、）ら、Ｊ、　Ａｐ　１．　Ｐｈｙｓｉｏｌ、 、第６１巻、第８６４頁（０°Ｂｙｒｎｅ、　Ｐ、Ｍ、）ら、Ｃｈｅｓｔ、第９ ０巻、第５７５頁〜第５７７頁８頁〜第１９２３頁（１９８５年）、オヒルン（ ０°Ｂｙｒｎｅ、　Ｐ、ｉｌ、）ら、第５８６頁（１９８６年）参照）が含まれ ていることを示唆する。

抗原吸入は急性の好中球及び、それ以上に慢性型好酸球の気道への浸潤を誘導す る（ウニブナ−（Ｗｅｇｎｅｒ、　Ｃ，Ｄ、）ら、Ａｍｅｒ、　ＲｅｖＲｅｓｐ ｉｒ、　Ｄｉｓ、、東１３５巻、第、へ２２１頁（１９８７年）参照）Ｃ慢性自 然発症的好酸球増多症は、激しい（〉８０倍）の気道過応答性と連動しているこ とが認められている（ウニブナ−（Ｗｅｇｎｅｒ、　Ｃ。

Ｄ、）ら、Ａｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、第１３５巻、箪Ａ ２２２頁（１９８７年）参照）。多数回（週に１回４週間）抗原被覆ビーズの気 管内滴下は顕著な気道好酸球および応答性の増加（〉８倍）を誘導−口封多数回 （隔日３回）吸入の気道応答性および白血球組成におよぼす影響の比較ができる 。

抗原の一回吸入は急性の気管支収縮、および２０時間後に測定されるように、７ 匹中３匹に認められ、２匹において中程度（〉８倍）であった気道応答性の上昇 （メサコリンＰＣ＋ｏｏ吸入量の減少）と同様、白血球の浸潤（最初からそして 、最も一貫して好酸球が）を引き起こす。これらの影響はそれらの発生する頻度 と同様、ヒトに対しての報告と一致する。これは、アレルギー性喘息患者におい ては抗原の一回吸入は好酸球優勢な白血球の浸潤（デモンシー（ＤｅＭｏｎｃｈ ｙ、　Ｊ、Ｇ、Ｒ，）ら、Ａｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒｅ５ｐｉｒ、　Ｄｉｓ、、 第１３１巻、蔦３７３頁〜第３７６頁（１９８５年）参照）およびいくつかの個 体における気道応答性の増加（通常は穏やか、〈８倍）（カルチェ（Ｃａｒｔｉ ｅｒ、　Ａ、　）ら、Ｊ、Ａｌｌｅｒｇ＞Ｃｌ１ｎ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、第７ ０巻、第１７０頁〜第１７７頁（１９８２年）、コックロフト（Ｃｏｃｋｃｒｏ ｆｔ、　Ｄ、　Ｌ　）ら、Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ａｌｌｅｒｇｙ、第７巻、第５０ ３頁〜第５１３頁（１９７７年）参照）を誘発する。

これに対して、抗原の多数回吸入は、最後のチャレンジから３日後に調べると、 ７匹すべてのモンキーにおいて気道応答性の増加を誘発し、これは２匹において は中程度（〉８倍）、３匹においては激しく〉８０倍）かった。これらの影響も また、ヒトに対する報告と一致する。花粉の季節中、アレルギー性喘息患者の気 道応答性が、程度の差はあるにせよ、すべての個体において増加することが報告 されている（ボウレット（Ｂｏｕｌｅｔ、　Ｌ、Ｐ、）ら、Ｊ　＾ｌｌｅｒｇｖ Ｃ１ｉｎＩｍｍｕｎｏ１．、第７１巻、第３９９頁〜第４０６頁（１９８３年） 、ソトマイヤ−（Ｓｏｔｏｍａｙｏｒ、　Ｈ，）ら、Ａｍｅｒ、　Ｒｅｖ、　Ｒ ｅ５ｐｉｒ、Ｄｉｓ、、第１３０巻、第５６頁〜第５８頁（１９８４年）参照） 。同様に、感受性の個体において職業的なアレルゲンの繰り返し暴露は気道応答 性を増加することが示されている（チャンーイエン（Ｃｈａｎ−１’ｅｕｎｇ　 Ｍ、　）ら、照）Ｃ 抗原の一回及び多数回吸入のどちらのプロトコールにおいても気道応答性の変化 の程度／方向は、白血球浸潤の強さと相関しなかった。この知見は白血球の浸潤 単独ではその気道過応答性の発症への直接的な関与を推断するには十分てないこ とを強調する。むしろ浸潤した、およびもとからある細胞から遊離されるメディ ニーター類の量および種類（刺激剤あるいは抑制剤）が、浸潤してきた細胞とも とからある細胞（例えば好酸球と気道上皮細胞）に発生する相互作用と同様重要 な要因となる。

まとめると、喘息患者において以前に報告されたように、モンキーにおいても抗 原の多数回（−回ではなく）吸入は一貫した気道応答性の増加（通常、〉８倍） を誘発する。これらの知見は、この動物モデルが喘息の治療をすることができる 物質のスクリーニングおよび同定に使用することができることを指摘する。

以上、本発明を特定の実施態様と関連して説明したが、さらにこれを修正、変更 することができ、また本発明は、一般的には本発明の原理に従うどのような変形 態様、使用または適応をカバーするものである。この場合、本明細書で開示した 内容を越える範囲であっても当該分野において既知の技術または常用の技術であ って、以下の請求の範囲に含まれるものとしてこれまでに述べた本質的特徴に適 用できる技術内容も本発明に包含されるものである。

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Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）ＩＣＡＭ−１に結合し得る抗体；（ｂ）ＩＣＡＭ−１と結合し得る、 上記抗体（ａ）のフラグメント；（ｃ）天然の汚染物質を実質上含有しないＩＣ ＡＭ−１；（ｄ）ＩＣＡＭ−１の機能性誘導体； （ｅ）糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーと結合し得る抗体； （ｆ）糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーに結合し得る、上記抗体（ｅ ）のフラグメント； （ｇ）天然の汚染物質を実質上含有しない、糖タンパクのＣＤ１８ファミリーの メンバー、：および （ｆ）糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーの機能性誘導体から４る群か ら選択される成分を、喘息患者に有効治療量を投与することを含む喘息患者の処 置方法。
2. ２．該成分がＩＣＡＭ−１に結合し得る該抗体（ａ）あるいはＩＣＡＭ−１に結 合し得る、該抗体（ａ）のフラグメントである請求項１記載の方法。
3. ３．該抗体（ａ）がモノクロナル抗体である請求項２記載の方法。
4. ４．該モノクロナル抗体がモノクロナル抗体Ｒ６．５である請求項３記載の方法 。
5. ５．該成分が天然の汚染物質を実質上含有しないＩＣＡＭ−１である請求項１記 載の方法。
6. ６．該成分がＩＣＡＭ−１の機能性誘導体である請求項１記載の方法。
7. ７．ＩＣＡＭ−１ドメイン１を含有する請求項６記載のＩＣＡＭ−１の機能性誘 導体。
8. ８．ＩＣＡＭ−１ドメイン２を含有する請求項６記載のＩＣＡＭ−１の機能性誘 導体。
9. ９．ＩＣＡＭ−１の可溶性誘導体である請求項６記載のＩＣＡＭ−１の機能性誘 導体。
10. １０．該成分が糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーに結合し得る該抗体 （ｅ）あるいは該糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーに結合し得る、該 抗体（ｅ）のフラグメントである請求項１記載の方法。
11. １１．該抗体（ｅ）が該糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーのアルファ サブユニットに結合し得る請求項１０記載の方法。
12. １２．該抗体（ｅ）が該糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーのベータサ ブユニットに結合し得る請求項１０記載の方法。
13. １３．該成分が天然の汚染物質を実質上含有しない該糖タンパクのＣＤ１８ファ ミリーのメンバーである請求項１０記載の方法。
14. １４．該糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーが糖タンパクのＣＤ１８フ ァミリーのメンバーのアルファサブユニットを含有する請求項１３項記載の方法 。
15. １５．該糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーが糖タンパクのＣＤ１８フ ァミリーのメンバーのベータサブユニットを含有する請求項１３記載の方法。
16. １６．該糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーが糖タンパクのＣＤ１８フ ァミリーのメンバーのアルファおよびベータサブユニットの両方を含有するヘテ ロダイマーである請求項１３記載の方法。
17. １７．該成分が糖タンパクのＣＤ１８ファミリーのメンバーの機能性誘導体であ る請求項１３記載の方法。
18. １８．抗原の多数回吸入を受けたヒト以外の哺乳類へ投与することを含む、喘息 の処置において治療能力を有する成分の確認方法。
19. １９．該哺乳類における気道応答性の上昇をメサコリンまたはヒスタミンを用い て測定する請求項１８記載の方法。