JPH04504574A

JPH04504574A - 免疫抑制のためのｕｖ―誘発因子

Info

Publication number: JPH04504574A
Application number: JP2505104A
Authority: JP
Inventors: ウルリッヒ，スチーブン　イー．
Original assignee: University of Texas System
Current assignee: University of Texas System
Priority date: 1989-03-14
Filing date: 1990-03-14
Publication date: 1992-08-13
Also published as: AU630184B2; DE69013002D1; EP0489732A1; WO1990010461A1; AU5330290A; ATE112171T1; EP0489732B1; DE69013002T2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

免疫抑制のためのＵＶ−誘発因子紫外線（ＵＶ）照射は、その発癌性効果に加えて免疫応答を抑制する（１）。準発癌的投与量のＵＶ照射に曝されたマウスの高度に抗原性のＵＶ−誘発腫瘍に対する減じられた能力は、ＵＶ−照射受容体マウスの免疫応答の抑制に帰因する〔２〕。−回のＵＶ照射に曝されたマウスは、離れた非照射部位に適用された接触性アレルゲンに対する過敏性過敏性（ＣＨＳ）反応を生じることができない〔３〕。同様にして、ＵＶ照射への単一の曝露は、ハブテン修飾細胞〔４〕、外来エリスロサイトおよび蛋白質抗原〔５〕ならびに同種異形牌臓細胞〔６゜７〕に対する遅延過敏性（ＤＴＨ）応答の発生も阻害した。ＵＶ−照射が免疫応答の全身的抑制を誘発する機構は、完全に明確にはなっていない。最近の研究は、ＵＶ−照射上皮細胞からの可溶性因子の放出が、抑制誘導に寄与することを示唆している。ｓｗａｒｔｚは、ＵＶ−照射動物由来の血清を正常受容動物に移入すると、接触性アレルゲンに対する応答能力が顕著に抑制されることを見出した〔８〕。またＨａｒｒｉｏｔ　ｔ−Ｓｍ１　ｔｈもＵＶ−照射マウスノ血清中の抑制因子の存在について記述している

〔９〕。Ｄｅ−ＦａｂｏおよびＮｏｏｎａｎは、皮膚内のＵＶ−照射に対する光受容体は、ウロカニン酸であろうことを示唆した〔１ｏ〕。彼らは、ＵＶ−照射によるｔｒａｎｓ−ウロカニン酸のｃｉｓ−ウロカニン酸への光異性化が、全身性抑制の誘発に重要であることを示唆している。この仮説を支持するデータは、ｃｉｓ−ウロカニン酸の注射投与か単純ヘルペスウィルスに対するＤ　Ｔ　Ｈ応答を抑制することができ、牌臓の抗原−表現細胞機能の損傷を生ずることを示したＲｏｓｓ〔１１〕およびＮｏｏｎａｎら〔１２〕の実験に由来する。別の仮説が、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎらの研究から立てられた〔１３〕。組換えインターロイキン−＋　（ＩＬ−１）のマウスへの注射は、それらか接触性アレルゲンに応答することを妨げた。これらのマウスの牌臓細胞中に、感作動物に移入された場合にＣＨ３誘引を阻害することができる抑制細胞が見出された。プロスタグランジンシンセターゼインヒビターであるインドメタシンの投与が抑制効果を打消すことから、抑制はプロスタグランジン放出に依存するものと思われる。これらの著者は、ＵＶ−照射曝露により生じる炎症か、全身性抑制の誘導において役割を演じるＩＬ−］およびプロスタグランジン類等の物質の放出を生じることを示唆している。ＵＶ−照射マウスの血清中の増大したＩＬ−１濃度を示したＧａｈｒｉｎｇらの研究〔１４〕は、この仮説を支持している。しかしなから、Ｈａｒｒｉｔｔ−Ｓｍｉ抽およびＨａｌｌｉｄａｙは、彼らの研究へ

〔９〕においてＣＨ３を抑制された血清試料中のＩＬ−１の存在を実証することかできなかった。最後に、Ｓｗａｒｔｚらは、始原上皮細胞培養物および／またはケラチノサイト細胞株のインビトロにおけるＵＶ−曝露が、上澄中への可溶性因子の放出を生じることを示した〔１５〕。該上澄のマウスへの注射は、全身ＵＶ−照射の効果に類似し、接触性アレルゲンに対する動物の応答能力を抑制した。顕著には、Ｓｗａｒｔｚらはインドメタシンが抑制因子の生成を打消さないことを決定した（８）。ＵＶ−照射による免疫系の全身的抑制の研究は、多くの理由から重要である。第１には、免疫抑制と、マウスにおける始原的皮膚癌の発生との間の関連が示されている〔１６〕。ＵＶ−照射が免疫応答を抑制する機構の洞察は、皮膚癌の治療および／または防止への新しい取組みを提供することにおいて有用であろう。第２には、ＵＶ−照射により生じる全身性免疫的変化、特にはＤＴＨの抑制は、感染症の増大する発症率の素因となる因子であり得る。このことは、大気のオゾン層の減少と合わせて、ＵＶ−誘発免疫抑制が人口の広範な部分の儂康に不利に影響するであろうことを示唆している。最後には、ＵＶ−照射により生じる免疫抑制は、例えば同種移植片拒絶の抑制において、治療的応用を有するであろう。ＵＶ−誘発ＣＨＳおよびＤＴＨ抑性のｍ構か何であるかはなおも決定されなければならないか、一般的にこの分野の研究者らは、単一の機構が、両者に対して対応可能であろうと考えてきた。しかしなから、本発明者は、異なった波長のＵＶ −照射の後に細胞から各々放出される少なくとも２種類の因子か関連することを示した。本発明者ｉｔ、長波長ＵＶ−照射、ＵＶＡ　（３２０−４００ｎｍ）に曝された上皮細胞からの上澄は、ＤＴＨを抑制するがＣＨＳを抑制しないことを決定した。この結果は、２種類の異なる免疫抑制因子がＵＶ−照射細胞から放出されることを示す。第１の免疫抑制因子は、ＵＶＢへの曝露で放出されてＤＴＨを抑制し、第２のものはＵＶＡへの曝露で放出されてＣＨ３を抑制する。従って、あらかじめ定めた波長の紫外線照射（ＵＶＲ）　、例えば、ＵＶＡまたはＵＶＢを使用することによって、哺乳動物の免疫応答を選択的に抑制し得る。典型的には、移植組織（同種移植片）の免疫的拒絶を克服するために、免疫抑制剤が使用さねている。しかしながら、これらの薬剤の多くの深刻な副作用の一つに、汎免疫抑制を生じることがある。同種移植片拒絶の抑制に加えて、宿主のウィルス性および細菌性病原からの保護等に関連する他のすべての免疫応答も抑制される。結果として、免疫抑制された患者は、種々の日和見感染に対して感受性となる。従って、同種異植片に対する免疫応答のみを抑制し、その一方、他の免疫機能を元のままとする方法は極めて存利である。同種移植片への直接ＵＶ−照射（ＵＶＲ）が、該同種移植片の生存期間を長（し得ることか知られている。ここで示唆された機構は、移植組織のＵＶＲによりアレルゲン性成分か変性し、同種移植片を非抗原性にするものである。しかしながら、本発明においては、受容体を同ＵＶＲの充分量を照射された対象動物によりインビボにおいて、または動物細胞によりインビトロにおいて特定の免疫抑制因子か産生される。これらの免疫抑制因子は、引続（動物の抗原的感作と組合わされて動物の感作に用いられた抗原性決定基に対して特異的な免疫抑制を誘発する。かくして、汎免疫抑制が避けられる。これに関して、選択的免疫抑制を誘導するための、あらかじめ定められた波長のＵＶＲの使用は、アザチオプリンまたはコルチコステロイド等の免疫抑制剤の使用に対して著しい優位性をもつ。従って、動物において特定の同種抗原に対する免疫応答を選択的に抑制するために、あらかじめ定められた波長のＵＶＲの充分量を投与する方法は、器官移植後の同種移植片拒絶の抑制において優れた応用を有する。例えば、本発明の方法を、患者の免疫系を他の点では非妥協的としたままでＤＴＨおよび同種移植片拒絶を選択的に抑制するために使用して好都合であろう。本発明は、その−面において、動物の特定同種移植片に対する免疫応答を選択的に抑制する方法を包含する。該方法は数工程を含んでいる。第１工程は、動物に対して所定波長のＵＶ−照射の有効量を投与することである。ＵＶ−照射の該所定波長は、好ましくはＵＶＢ−照射（２８０ｎｍ　〜３２０ｎｍ）である。ここにおいて、ＵＶＢ照射か動物においてＣＨＳ応答およびＤＴＨ応答を抑制することが示される。該発明方法の他の工程は、哺乳動物を特定の同種抗原に対して鈍感にすることを含む。動物が所定波長のＵＶＲで照射され、次いで特定の同種抗原により感作されると、該対象動物は該特定同種抗原に対して寛大になることか決定された。本発明の別の一面は、免疫抑制因子の投与および引続く特定同種抗原に対する動物の感作による、動物における特定同種抗原に対する免疫応答の選択的抑制方法である。該方法は、複数工程を含む。第１工程は、複数の動物ＩＢ胞を所定波長を育するＵＶ−照射の充分量で照射し、免疫抑制因子を生じさせることである。ＵＶＢ照射（ＵＶＢ照射の所定波長は、２８０〜３２０ｎｍ）を受けた哺乳動物上皮細胞は、哺乳動物においてＤＴＨ応答を選択的に抑制する免疫抑制因子を産生ずることが分かった。他方、ＵＶＡ照射（ＵＶＡの所定波長は、３２０口ｍ〜４００ｎｍ）を受けた哺乳動物上皮細胞は、哺乳動物においてＣＨ３Ｉ’？答を選択的に抑制する免疫抑制因子を産生ずることか分かった。該発明方法の他の工程は、ＵＶ−照射細胞から免疫抑制因子を抽出することを含む。該発明方法の更なる工程は、哺乳動物に対する有効量の免疫抑制因子の投与に関する。その後に、該哺乳動物は、寛大であることか好ましい特定同種抗原に対して感作を受ける。本発明の更に他の面は、免疫抑制因子および免疫学的抑制因子自体の製造方法である。本発明のこの面においては、好ましくは免疫抑制因子が製造され、これは次いで対象動物に投与されて、特定の同種抗原に対する特定の免疫応答の選択的抑制を生じる。該発明方法は、所定波長のＵＶ−照射の充分量を複数の哺乳動物細胞にインビトロで照射して、免疫抑制因子産生ＵＶ−照射細胞を生成することを含む。充分量のＵＶＢ　（所定波長は２８０〜３２０　ｎｍ）によりインビトロで照射を受けた哺乳動物細胞は、充分な量をもって投与された場合に哺乳動物でＤＴＨ応答を選択的に抑制する免疫抑制因子を産生ずるであろうことが分かった。他方、ＵＶＡ　（所定波長は３２０ｎｍ〜４００　ｎｍ）により照射を受けた哺乳動物細胞は、充分な量をもって投与された場合に哺乳動物でＣＨ３応答を選択的に阻害する免疫抑制因子を産生ずるであろうことか分かった。紫外線照射への１回の曝露は、同種異系の組織適合性抗原に対する免疫応答の全身的抑制を誘発する。この抑制は、牌臓性同種抗原特異性抑制Ｔ細胞の出現に関連している。ＵＶ−照射に対する皮膚の曝露か、とのようにして牌臓性抑制Ｔ細胞を誘発するか、完全に明確にはなっていない。ここに記述されるデータは、ＵＶ−照射ケラ千ノサイトー誘導抑制因子の関与を示唆している。ケラチノサイト株Ｐａｍ　２　］　２を、単一のＦＳ−４０サンランプにより２００　Ｊ／＋ｎ ”のＵＶＢ照射に曝し、血清不含有培地中で一夜培養した。ＵＶ−照射ケラチノサイトからの培養上澄をマウスに注射すると、同種抗原に対する遅延形過敏症の誘発が抑制された。非照射Ｐａｍ　２１２細胞由来の上澄の注射は、何ら抑制効果をもたなかった。抗原特異性Ｔ抑制細胞が、抑制性上澄を注射したマウスの膵臓から見出された。ケラチノサイトのシクロへキシミド処理およびＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄のトリプシン処理は、抑制活性の喪失を生じ、蛋白質の関与を示唆している。コンカナバリンＡ−アがロースレクチンーアフィニティ力ラムに結合した抑性物質は、α−Ｄ−マンノピラノシドを用いて溶出し、該抑制物質が糖蛋白であることか示唆された。該抑制物および対照上澄のポリアクリルアミドゲル電気泳動は、非抑制分画中に存在しない顕著なバンドを抑制分画中に示した。固有のバンドのおよその分子量は、６８キロダルトンであった。かくしてこれらのデータは、Ｕ　Ｖ−照射ケラチノサイトから放出される可溶性因子が、これらの因子の注射が抗原特異性抑制Ｔ細胞を誘発することを示すことにより、ＵＶ照射への曝露に続く全身性抑制の誘発の原因となるという仮説か支持される。第１図は、ＵＶ−照射された始原上皮細胞培養物由来の上澄のＣＨ３（Ａ）またはＤＴＨ（Ｂ）誘発に対する効果を示す。マウスに、ＵＶ−照射（ＵＶＢ−３Ｎ）または対照（ＮＲＳＮ）の上皮細胞培養物由来の上澄を注射するか、あるいはマウスを４０　ｋＪ／　ｍ”のＵＶＢ照射特表千４−５０４５７４　（７）（ＵＶＢ）に曝露した。パネル八において、Ｃ３ＨマウスをＴＮＣＢに感作させ、パネルＢにおいて、Ｃ３ＨマウスをＢＡＬＢ／ｃ＃臓細胞に感作させた。アステリスクは、正の対照（ＮＲ）について観察される応答との有意な差（Ｐ＜０．００１）を示す。背景応答は、抗原（ＮＳ）による感作を受けずに攻撃を受けたマウスにて測定した。１群あたり５匹のマウスであった。単位＝Ｃｍ澄のＣＨ３（Ａ）またはＤＴＨ（Ｂ）誘発に対する効果を示す。マウスに、ＵＶ−照射（ＵＶＳＮ）または対照（ＮＲＳＮ）の非照射のケラチノサイト細胞由来の上澄を注射するか、あるいはマウスを４０　ｋＪ／　ｍ”のＵＶＢ照射（ＵＶＢ）に曝露した。パネル八において、Ｂａ１ｂ／ＣマウスをＴＮＣＢに感作させ、パネルＢにおいて、Ｂａ１ｂ／ｃマウスをＣ３Ｈ牌臓細胞に感作させた。アステリスクは、正の対照（ＮＲ）について観察される応答との有意な差（Ｐ＜０．００１）を示す。背景応答は、抗原（ＮＳ）による感作を受けずに攻撃を受けたマウスにて測定した。１群あたり５匹のマウスであった。単位＝ｃｍｌ０−２第３図は、ＵＶ−照射されたＰａｍ　２１２細胞由来の上澄の、ＴＮＰ−接合同系膵臓細胞に対するＤＴＨｉ！！発への効果を示す。マウスに、ＵＶ−照射（ＵＶＢ−３Ｎ）または対照（ＮＲＳＮ）ケラチノサイト細胞由来の上澄を注射するか、あるいはマウスを４０ｋＪ／　ｍ２のＵＶＢ照射（ＵＶ）に曝露した。アステリスクは、正の対照（ＮＲ）について観察される応答との有意な差（Ｐ＜０．００１）を示す。背景応答は、ＴＮＰ−接合正常牌ｍ細胞（ＮＳ）による感作を受けずに攻撃を受けたマウスにて測定した。１群あたり５匹のマウスであった。単位＝ｃｍＸ］０“３第４図は、ＭＬＲの抑制と与えらねたＵＶＢ投与量との関係を示す。マウスを種々の投与量のＵ　Ｖ　Ｂに曝露し、５Ｘ１０’の同種異系細胞により感作させた。これらのマウス由来の細胞をＭＬＲ中で培養し、それらの応答を非照射抗原感作マウスから単離された細胞を用いて観察される応答と比較した。第５図は、ＧＶＨＤに対するＵＶＢ照射および抗原感作の効果を示す。致死的Ｘ −線照射（８５０ラツト）を受けたＢａ１ｂ／ｃマウスを、５Ｘ１０’のＴ細胞 −放血Ｃ３Ｈ骨髄細胞（ＡＴＭＢ）　、抗−Ｔｈｙ　１．２モノクローナル抗体、Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｖｉｅｗ、　ＣＡ：補体付加）および５　Ｘ　１０’　Ｃ３ＨＲ臓細胞により再構成した。Ａ　Ｔ　Ｍ　Ｂ単独（塗潰四角）。膵臓細胞は、正常対照マウスから得た（中ぬきの四角）；ＵＶＢのみに曝露したマウス（塗潰の円）；同種抗原で感作したマウス（塗潰三角）、またはＵ　Ｖ　Ｂに曝露され同種抗原で感作されたマウス（中ぬき円）。動物を、毎日病的状態および死亡率について検査した。実験は９０日で終了した。生存ＡＴＢＭ十感作ＵＶＢ＃臓細胞対ＡＴＢＭ十感作ＮＲ牌臓細膵臓ｎ＝１０゜第６図は、ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄をマウスに注射して誘導された抑制細胞の表現型を示す。ＵＶ−照射ケラ千ノサイト由来の上澄を注射されたマウスからの膵臓細胞、正常Ｃ３Ｈ応答細胞およびガンマ線−照射Ｂ６刺激細胞を含む一方向ＭＬＲ培養物に添加されている。抑制的サイトカインを注射したマウス由来の膵臓細胞を、種々のモノクローナル抗体および補体により処理した。細胞の一群を２０００ラツドのガンマ照射に曝露した。対照細胞（ＵＶおよびＮＲ）を補体で処理した。本は、対照の増殖からの有意な差（Ｐ＜０．００１）を示す。第７図は、ＵＶ−照射ケラチノサイトから放出される抑制的サイトカインの物理的性質を示す。パネルＡにおいてＰａｍ　２１２細胞は、２００　Ｊ／ｍ”のＵＶ照射に曝露され、次いで、１０マイクログラム／ｍｌのインドメタシンまたは１０マイクログラム／ｍｌのシクロヘキシミドにより処理された。処理細胞および対照培養物由来の上澄は、透析され、次いでマウスに注射された。パネルＢにおいて、上澄は採取され、次いて熱またはトリプシン（１０マイクログラム／ｍｌ）により処理された。次いで、該処理上澄をマウスに注射し、生しるＭＬＲを測定した。単独に培養された応答細胞の背景応答は、４２９０±９６０ＣＰＭてあった。＊は、対照からの有意な差異を示す；Ｐ＜０．００１第８図は、ＭＬＲ抑制についての投与量一応答曲線を示す。ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の培養物上澄の種種の濃度をマウスに注射し、同種抗体に対する応答においてそれらの膵臓細胞の増殖能力を測定した。データは、対照応答の百分率として表されている（媒質を注射さねたマウス；３４．４５６±２２１５ｃｐｍか１００％に等しい；背景応答は３．０７２±４９５　ｃｐｍであった）。斜線を付けた部分は、非照射ケラチノサイト由来の上澄を注射されたマウスからの膵臓細胞の増殖を表している。第９図は、ＵＶ−照射および対照ケラチノサイトのＩＬ−１産生を示す。上澄をＵＶ−照射または対照の非照射Ｐａｍ　２１２細胞から得た。蛋白質濃度を測定し、種々の濃度のものをＩＬ−１依存性ＤＩＯ，Ｇ４．Ｉヘルパー細胞株に添加した。標準曲線は、細胞にネズミｒｌＬ−１希釈物を加えることにより作成した。第１Ｏ図は、コンカナバリン−Ａ　（Ｃｏｎ−Ａ　）−アガロースカラムから溶出された抑制物質のドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）分析を示す。同等量（２００ｎｇ）のＣｏｎ−Ａ　−アガロースカラムから溶出された物質を、還元条件下にて１２．５％５ＤＳ−ＰＡＧＥゲル上て分析した。レーンｌはＵＶマンノソド溶出物を含み、レーン２はＵＶグルコシド溶出物、レーン３は非照射細胞由来の対照マンノシド溶出物、レーン４は、非照射細胞由来の対照ゲルコンド溶出物を含む。免疫抑制分画（レーン１）中にのみ存在し、非抑制的分画（レーン２−４）のいずれにも存在しない固有のバンドは、分子量６８ｋＤａに帰するものと思われる。所定波長の紫外線照射による特定の同種抗原に対する特異的免疫応答の選択的抑制が、マウスに充分量のＵＶ−照射を与え、次いで特定の同種抗原に対し感作させる実験によって例示される。好ましい一実施態様に従えば、特定の同種抗原に対するＣＨ３応答が、全身のＵＶＢ−照射（所定波長２８０ｎｍ〜３２０　ｎｍ）および続く特定同種抗原を用いた感作により抑制される。全身照射は、対象動物の外皮に照射する工程として定義される。他の好ましい態様に従えば、特定の同種抗原に対するＤＴＨ応答が、全身ＵＶＢ−照射（所定波長２８０ｎｍ−３２０ｎｍ）および引続く特定同種抗原による感作によって抑制される。全身ＵＶ−誘発免疫抑制の機構は、ＵＶ−照射細胞による免疫抑制因子の放出である。しかしなから、本発明者は、所定波長のＵＶ照射に曝露された上皮細胞培養物由来の上澄中に免疫抑制因子が含まれることを示した。更に、インビトロにおいて産生される免疫抑制因子が、ＵＶ−照射に使用した波長に依存してＣＨ３またはＤＴＨ誘発の抑制に有能である。加えて、これらの免疫抑制因子により誘導される抑制が、性質において選択的である点に注意すべきである。かくして、選択された、または所定の波長のＵＶ−照射、例えばＵＶＡ　（３２０ｎｍ　〜４００ｎｍ）　、またはＵＶＢ（２８０ｎｍ〜３２０　ｎｎ＋）により照射を受けた細胞はインビトロにおいて、免疫抑制因子を産生し、これは対象個体に投与した場合に、対象個体中において免疫応答を選択的に抑制する。従って、対象個体の免疫応答は、完全に無能力化されることなく、日和見的病原に対する保護に妥協しない多くの免疫応答が保たれる。本発明の一局面は、ＵＶ−照射細胞から得られる免疫抑制因子を対象哺乳動物に投与し、その後に特定の同種抗原に対して感作させることによる、哺乳動物における特定同種抗原に対する特異的免疫応答の抑制に向けられている。本発明の他の面は、全身ＵＶ−照射および引続く特定同種抗原に対する感作による特定同種抗原に対する特異的免疫応答の抑制に向けられている。発明者は、ＵＶＢ−照射Ｐａｍ　２　］　２細胞または始原上皮細胞培養物のいずれかに由来する免疫抑制因が、全身ＵＶ−照射の効果を模倣し、ＤＴＨを抑制し得ることを示した。他方、これらの同じ免疫抑制因子は、ＣＨ３を抑制することが出来なかった。しかしながら、ＵＶＡ−照射されたケラチノサイトは、ＣＨ３を抑制する免疫抑制因子を生成し得た。更には、Ｕ　Ｖ　Ａ−照射ケラチノサイト由来の免疫抑制因子の注射は、ＤＴＨを抑制しなかった。従って本発明者は、ＵＶ−照射上皮細胞から放出される免疫抑制因子が、ＵＶ照射による選択的な全身的免疫抑制の誘導の原因となることを示した。ここにおいて最初に提示されたデータは、ＵＶ−照射による選択的な全身的免疫抑制が、異なる波長のＵＶ−照射後の細胞からそれぞれ放出される２種類の免疫抑制因子により制御されることを示している。本発明の一面は、哺乳動物の特定同種抗原に対する免疫応答の選択的抑制方法に向けられている。この発明方法は：（ａ）所定波長を有するＵＶ−照射の有効量の哺乳動物に対する投与；および（ｂ）その後の該動物に対する特定同種抗原による感作の工程を含んでなる。該発明方法の第一工程は、所定波長を育するＵＶ−照射の有効量を、哺乳動物に投与することである。最も好ましい実施態様において、ＵＶ−照射は、所定波長２８０ｎｍ　−３２０ｎｍを存するＵＶＢ−照射である。該ＵＶ−照射は、哺乳動物の表皮への照射、例えば全身照射により好適に哺乳動物に投与される。ＵＶ −照射の有効量は、好ましくは約１０〜約１００ｋＪ／　ｍ”　、最も好ましくは約３０〜約６０ｋＪ／　ｍ”である。該発明方法の次の工程は、該動物に対して引続いて特定同種抗原により感作させることである。該哺乳動物は、好ましくは特定同種抗原の注射により感作される。注射は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、または靴内的であってよい。発明の一実施態様によると、哺乳動物は特定同種抗原の筋肉内注射により感作される。本発明の好ましい一実施態様に従うと、哺乳動物は、特定同種抗原の皮下注射により感作される。他の好ましい一実施態様に従うと、哺乳動物は、特定同種抗原の皮下への適用により感作される。ここにおいて、感作されたＵＶ−照射動物は、感作同種抗原に対して特異的な免疫耐性を発生する。例えば、ＵＶＢ照射を受けたマウスは、特定の感作同種抗原に対するＤＴＨ応答を抑制し、かつ特定の感作同種抗原に対するＣＨＳ応答を抑制した。従って、哺乳動物におけるＤＴＨまたはＣＨ３応答は、哺乳動物に与えられるＵＶ照射の波長に依存して特定同種抗原に対して選択的に抑制されるてあろう。本発明の池の一局面は、対象哺乳動物において特定の同種抗原に対する特異的免疫耐性を誘導する免疫抑制因子の製造および使用方法に向けられている。該発明方法は：（ａ）インヒドロにおいて複数の哺乳動物細胞を、所定波長のＵＶ−照射の有効量により照射して免疫抑制因子産生ＵＶ−照射細胞を生成し；（ｂ）ＵＶ−照射細胞から免疫抑制因子を抽出し、（Ｃ）該免疫抑制因子の有効量を哺乳動物に投与し；および（ｃｌ）　Ｍ哺乳動物を、次いて特定の同種抗原で感作する工程を含む。該発明方法の第１工程は、インヒ）・口において複数の哺乳動物細胞を、所定波長のＵＶ−照射の有効量により照射して免疫抑制因子産生ＵＶ−照射細胞を生成させる特表千４−５０４５７４　（９）ことである。好ましい細胞は、上皮細胞を含み、また処理すべき対象のものであってよい。好ましくは、ＵＶ−照射はＵＶＢ−照射である。ここにおいて、インビトロでＵＶＡ−照射の有効量により照射された哺乳動物細胞は、免疫抑制因子を産生し、これは対象哺乳動物に有効量をもって投与され、該動物が特定同種抗原により感作された場合に、その動物に特定同種抗原に対するＣＨ３応答の選択的抑制を起こすことか示される。他方において、インビトロでＵＶＢ−照射の有効量により照射された哺乳動物細胞は、免疫抑制因子を産生し、これは対象哺乳動物に有効量をもって投与され、該動物が特定同種抗原により感作された場合に、その動物に特定同種抗原に対するＤＴＨ応答の選択的抑制を起こすことが示される。好ましい一実施態様に従えば、哺乳動物細胞、好ましくは上皮細胞が、非毒性の栄養含有培地中に懸濁物の形で入れられる。懸濁状態において、該細胞に所定波長を育するＵＶ−照射を行なう。ＵＶ−照射の供給源は、例えば所定波長のＵＶ−照射を発生する商業的に入手可能な任意の“サンランプ（ｓｕｎｌａｍｐ）”であってよい。好ましい一実施態様において、ＦＳ−４０サンランプ（Ｗｅｓｔｉｎｇｈｏｕｓｅ、　Ｂｌｏｏｍｆｉｅｌｄ。Ｎ、　Ｊ、　）はＵＶＢ−照射を提供する。他の好ましい実施態様において、ダーマライト（Ｄｅｒｍａｌｉｇｈｔ）２００１（Ｄｅｒｍａｌｉｇｈｔ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、　５ｔｕｄｉｏ　Ｃ１ｔｙ、　ＣＡ　）は、ＵＶＡ−照射を提供する。細胞に投与されるＵＶ−照射は、免疫抑制因子を産生するＵＶ−照射細胞を生じるために充分な量でなければならない。細胞に投与される照射量は、好ましくは約１０〜約］、　００　Ｊ／ｍ”、最も好ましくは約１０〜約４０Ｊ／ｍ”である。該免疫抑制因子は、好ましくは細胞により栄養培地中に分泌される。その後、免疫抑制因子は、ＵＶ−照射細胞から抽出される。この抽出工程は、単にＵＶ−照射細胞を栄養培地から分離する工程であってよい。しかしながら、公知のいずれの分離技術も本発明方法において採用され得る。該免疫抑制因子は、投与前にこの分野で周知の方法により濃縮されてもよい。その後、治療的に有効な量の該免疫抑制因子か、哺乳動物に投与される。好ましい一実施態様において、該免疫抑制因子の治療学的に有効な量は、特定同種抗原に対する特定の免疫応答を抑制するために必要な免疫抑制因子の量として、対象患者の担当医（または動物の場合には動物医）により決定される。しかしながら、最も好ましくは、治療的有効量は、特異的同種抗原に関連する特定の病理の発生を防止する量である。該免疫抑制因子の投与は、−回または分割された投与量として投与されつる。該免疫抑制因子は、好ましくは注射により、例えば腹腔内的、皮下的、筋肉内的、または管内的に投与される。しかしながら、該免疫抑制因子は、最も好ましくは静脈内注射または注入により投与される。対象哺乳動物は、その後に免疫耐性を考慮している特定の同種抗原により感作される。好ましい一実施態様によると、皮膚移植片から誘導される上皮細胞は同種抗原を含み、対象哺乳動物を感作して、一般に同種移植片と称される後に移植された皮膚移植片に対する免疫耐性を生しさせるために使用される。第２の好ましい実ＭｆＬ態様によると、対象哺乳動物の感作に膵臓細胞が使用される。この態様において、上皮細胞または膵臓細胞（同種抗原）は、後に移植される移植片（同種異種片）と実質的に同等な抗原性プロフィールを有してもよい。本発明の方法は、免疫関連病理の治療または発症防止に向けられている。一実施態様において該免疫関連病理は、移植片対宿主疾患または宿主対移植片疾患、例えば移植片拒絶である。他の実施態様において、免疫関連病理は、特定同種抗原に対するＤＴＨ応答である。更に池の実施態様において、免疫関連病理は、特定抗原に対するＣＨ３応答である。一般的に、免疫関連病理は、特定同種抗原に対する特異的免疫応答の抑制が利益をもたらすような病理学的状態である。同種異系の組織適合性抗原に対する免疫応答は、あらかじめＵＶ−照射に曝露されたマウスに同種異系の膵臓細胞を注射することにより抑制され得る。該抑制は、ＵＶ−照射マウスの膵臓中に見出された抗原特異的抑制Ｔ細胞により媒介される。先に解答されていない疑問は、動物の上方表面皮膚の照射が、とのように膵臓の抗原特異性抑制細胞の誘発に導くかという点である。本発明における知見は、ＵＶ−照射ケラチノサイトから放出される可溶性因子が、抗原特異性抑制細胞の誘発に関与していることを示唆している。ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の培養上澄の正常マウスへの注射は、全身ＵＶ照射の効果に類似し、同種抗原に対する遅延型過敏症の誘発を抑制した。更には、これらのマウス由来の肺臓細胞は、混合リンパ球応答において同種抗原に対して応答不能であった。抗原特異的抑制Ｔ細胞（Ｌ）’ｔｌ＋２−＝、照射耐性）が、抑制上澄を注射されたマウスの肺臓中に見出された。抑制的サイトカインの産生は、ケラチノサイトのインドメタシン処理によって阻害されず、プロスタグランジン類か関与しないことが示唆される。シクロへキシミドによる蛋白質合成の阻害又はＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄のトリプシンによる処理は、すべての抑制活性を除き、該活性物質が蛋白質であることが示唆された。この抑制的サイトカインにより誘発された同種抗原に対する免疫応答の抑制か、ＵＶ照射への曝露後に見出される抑制に類似することから、これらの知見は、ＵＶ−照射による全身的抑制の誘発が、ＵＶ−照射ケラチノサイトによる抑制性物質の放出に帰因するという概念を支持している。加つるに、これらのデータは、この因子（ＵＶ照射により誘発される糖蛋白質）による抗原−特異性抑制をも示唆し、同種移植片拒絶の新規抑制方法を提供するであろう。以下の例は、本発明を更に記述するために含められ、また別途特定的に示されない限り本発明を制限することを意図するものではない。特異的病原−非含有の雌Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ　Ｃｒ　（ＭＴＶ−）およびＢＡＬＢ／ＡｎＮマウスは、ＮＣ［−Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＦａｃｉｌｉｔｙ’、動物生産部門（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　ＳＭＤ、　）から供給された。該動物を、実験動物取扱い指針（Ｔｈｅ　ＧｕｉｄｅＦｏｒ　Ｔｈｅ　Ｃａｒｅ　Ａｎｄ　Ｌｌｓｅ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒｏｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａｌｓ　）（ＤＨＨＳ発行番号（ＮＩＨ）７８−２３）にある指針に従い、米国実験動物管理認定協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ　ｆｏｒｔｈｅ　Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃａｒｅ　）に完全に認定された設備において、研究動物管理および使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃａｒｅ　ａｎｄ　Ｌｌｓｅ　Ｃｏｍｍ１ｔｔｅｅ　）の認可のもとに使用した。ＵＶ−照射に対するマウスの曝露マウスの背部柔毛を電気バリカンで刈り取って除去した。次いで、マウスを６個のＦＳ−４０サンランプ（Ｗｅｓｔｉｎｇｈｏｕｓｅ、　Ｂｌｏｏｍｆｉｅｌｄ、　ＮＪ　）の列から供給されるＵＶＢ　（２８０ｎｍ　〜３２０ｎｍ）照射に３時間曝露した。これらのランプから輻射される放射光の約７０％はＵＶＢの範囲にある。光源の放射強度は、ＵＶＢ　３２０フイルタおよびＡ１２７石英回折格子（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＬｉｇｈｔ、　Ｉｎｃ、、　Ｎｅｗｂｕｒｙｐｏｒｔ、　ＭＡ　）を備えたＰＴ１７ＩＣＵＶＢ検出器を用い、ＴＬ−７００放射測定器で測定して平均１０　ｗ／ｍ’であった。かごの蓋の遮蔽のため、動物が受けた入射投与量は、約４．５　ｗ／ｍ２であった。受けたＵＶの全投与量は、約４０　ｋＪ／　ｍ”であった。照射の間、マウスの耳をテープでおおい、ＵＶ照射による障害を防止した。上皮細胞培養物のインビトロにおけるＵＶ−照射上皮細胞懸濁物を、マウスの耳および胴部の皮膚から調製した。柔毛を除去し、皮膚を取出してＩ　ｍｍ”細片にきざんだ。これらを０．７５％トリプシン／ＥＤＴＡ中に３７℃にて浮遊させた。６０分後に鉗子で梳いて真皮から真皮を分離した。上皮を切断して細片とし、０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ中で３０分間攪拌した。得られた細胞懸濁物を、ナイロン網を通してろ過し、計数後、５％ウシ胎仔血清、２ｍＭグルタミンおよび１％非必須アミノ酸類を加えた最少必須培地（ＭＥＭ）　（Ｇｉｂｃｏ　Ｌａｂｏ−ｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｇｒａｎｄ　ｌ５ｌａｎｄ、　ＮＹ　）中に、ｌＸｌ０＠細胞／ｍｌて再懸濁した。５ｍｌの細胞懸濁物を、１００ｍｍ組織培養皿に入れた。２４時間後に、非付着細胞を除去し、ＰＢＳ中に再懸濁した単層を、ＵＶＡ又はＵＶＢのいずれかにて２００　Ｊ／ｍ２て照射した。ＵＶＢ照射の光源は、出力１．４３　ｗ／ｍ”の単一のＦＳ−４０サンランプであり、電球と標的との間の距離は２０ｃｍであった。このランプは、３１３ｔ＋ｍおよび３６５ｎｍにピークをもって２７０ｎｍから３９　’Ｏｎｍまての連続スペクトルを放射する。このランプによる放射エネルギーの約７０％はＵＶＢ領域であった。Ｕ　Ｖ　Ｂ照射の光源は、混入するＵＶＢを除去するための光学フィルタ（Ｈ −１）を備えたＤｅｒｍａｌ　ｉｇｈｔ２００１　（Ｄｅｒｍａｌｉｇｈｔ　Ｓｙｓｔｅｍｓ、　５ｔｕｄｉｏ　Ｃ１ｔｙ、　ＣＡ）であった。このランプから放射される照射光の実質的に全部（９９，５％）が０ｐｔｒｏｎｉｃｓ　７４２分光放射測定器（Ｏｐｔｒｏｎｉｃ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ、、　０ｒｌａｎｄｏ、　ＰＬ、）にて測定されたとおりＵＶＡの範囲であった。このランプの出力は、電球と標的との間２０ｃｍにおいて５６　ｗ／ｍ”であった。照射直後に、細胞をＰＢＳにより３回洗浄し、血清非含１１ｒＭＥＭ中に再懸濁した。１８〜２４時間後に、培養物から上ｆｉ　（ＵＶＢ−３Ｎ＊たはＵＶＡ− ３Ｎ）を取出し、０．２２ミクロンフィルタを通した。ある実験においては、ケラチノサイト株ＰＡＭ２１２１”ｌ　９）を使用した。該細胞をｌＸｌ０＠細胞／ｍｌに調節し、５ｍｌの細胞懸濁物を１００ｍｍの組織培養皿に塗布した。これらの細胞に、２４時間後に前述したと同様に照射を行なった。該細胞を血清非含存ＭＥム４に再懸濁し、１８〜２４時間後に上澄を得た。対照上澄（ＮＲ−ＳＮ）は、同様の方法で処理し、ＵＶ照射には曝露していない細胞から得らマウスに、０．５　ｍｌのＵＶＡ、−３Ｎ、ＵＶＢ−３ＮまたはＮＲ− ３Ｎを尾部静脈を通して注射した。５日後に、該動物をそった胴部皮膚上においてトリニトロクロロベンゼン（ＴＮＣＢ、アセトン中の３％ｗ／ｖ溶液１００ｕｌ）またはジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ、アセトン中の０．３％Ｖ／Ｖ溶液５０ｕｌ）の成上適用によって感作させた。６日後に、該マウスに対して各耳部表面に５ｕｌのＴＮＣＢＩ％溶液またはＤＮＦＢｏ、２％溶液を適用することによって攻撃した。各耳介の厚さを、攻撃直前および２４時間後にスプリング負荷マイクロメータ（Ｓｗｉｓｓ　Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｌｏｓ　Ａｎｇｅｌｅｓ、ＯＡ、）　により測定した。背景応答は、感作されずに攻撃された動物で見られる腫張の測定により決定された。特異的腫張は、実験群に見られた腫張から背景腫張を差し引くことにより計算された。１群あたり５匹のマウスであった。ＵＶ−照射細胞由来の上澄のＤＴＨに対する効果マウスに、０．５　ｍｌのＵＶＢ−３Ｎ、ＵＶＡ−８ＮまたはＮＲ−３Ｎを尾部静脈を通して注射した。５日後に、これらのマウスを同系のＣ３ＨＲｆｆｌ細胞を用いて各側腹部に２．５Ｘ１０’個の細胞を注射することにより感作させた。６日後に、これらのマウスを、Ｃ３Ｈ牌臓細胞を用いて各後足装置に１０７個の細胞を注射することにより攻撃した。生した装置の腫張を２４時間後に測定した。先と同様に背景腫張は、非感作マウスをＣ３Ｈて攻撃することにより測定され、また特異的腫張は、実験群の内針腫張から背景腫張を差し引くことにより計算された。１群あたり５匹のマウスであった。別法として、ＢＡＬＢ／Ｃ７ウスを、５ｈｅａｒｅｒ　（２０）により記述されているようにトリニトロフェノール特表千４−５０４５７４　（１１）（ＴＮＰ）ハブテンで修飾された５Ｘ１０’個の同系肺臓細胞を用いて感作させた。６日後に、これらのマウスを各々の後足肉旺に１０’のＴＮＰ−接合肺臓細胞を注射することによって攻撃した。２４時間後に内置腫張を測定した。抗体産生の測定ＪｅｒｎｅおよびＮｏｒｄｉｎのプラークアッセイ〔２２〕のスライド修飾〔２１〕を用いた。マウスに０．５　ｍｌのＵＶＢ−ＳＮ、ＵＶＡ−ＳＮまたはＮＲ −３Ｎを注射し、５日後にヒツジエリスロサイト（ＳＲＢＣ）の１％溶液を静脈注射（ｉｖ）することにより免疫した。免疫から５日後にマウスの＃臓を取出し、直接プラーク形成細胞の数を５ＲＢＣまたはウマエリスロサイト（ＨＲＢＣ）を指示細胞として用いて測定した。統計解析実験および対照群の間の統計的に有意な差を決定するために、分散の一方向分析を用いた多項比較法（ｍｕ　Ｉ　ｔ　ｉ　−ｐｌｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）を使用した（２３）。０．０５未満の確率は、有意なものと考えた。代表的な実験を示す；各実験は、同様な結果をもって少なくとも２回反復した。例ＩＵＶＢ−照射上皮細胞由来の上澄注射後のＣＨ３は抑制しないＤＴＨ抑制始原上皮細胞培養物を、Ｃ３Ｈマウスの背部皮膚および耳から調製した。該培養物を、２００　Ｊ／ｍ２のＵ　Ｖ　Ｂ照射に曝露し、２４時間後にこれらの培養物の上澄を正常マウスに注射した。５日後、マウスの半数をＴＮＣＢにより感作させ、残る半数にＢａ１ｂ／ｃ牌臓細胞を注射した。６日後にマウスを、各々の抗原を用いて攻撃し、２４時間後にＣＨ３およびＤＴＨ応答を測定した。実験全身のＵＶＢ照射（ＵＶＢ）への曝露は、非照射対照（ＮＲ，Ｐ＜０．００１）と比較してＣＨ３（パネルＡ）およびＤＴＨ（パネルＢ）の両者を抑制した。ＵＶＢ−３Ｎの注射も、ＤＴＨを抑制した（第１図Ａ）。期待に反して、ＵＶＢ−３Ｎの注射は、ＣＨＳに対して有意な効果を持たなかった（第１図Ａ）。対照上澄（ＮＲ−ＳＮ）の注射は、ＣＨ３またはＤＴＨに対する抑制効果をもたなかった。ケラチノサイト株、Ｐａｍ　２１．２も可能性ある免疫抑制上澄の供給源として用いた。これらの上澄の注射のＣＨ３およびＤＴＨ発生に対する効果か第２図（ＡおよびＢ）に示されている。前述したと同様に、この実験についての対照は、マウスの４０　ｍＪ／　ｍ”のＵＶＢ照射からなる。全身Ｕ　Ｖ　Ｂ照射（ＬＴＶＢ）後におけるＣＨ３およびＤＴＨの有意な抑制（Ｐ＜０．００１）か、非照射動物（ＮＲ）にて生じる免疫応答と比へた場合に見られた。ＵＶＢ−３ＮをＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　Ｃ７ウスに注射し、続いてＴＮＣＢで感作させた場合、抑制効果は無かった（第２［１ＷＡ）、しかしながら、同じＵＶＢ −ＳＮをＢＡＬＢ／Ｃマウスに注射し、続いてＣ３Ｈ牌臓細胞を注射した場合には、同種抗原に対するＤＴＨは有意に抑制された（Ｐ＜ｏ、ｏｏｌ）（第２図Ｂ参照）。非照射Ｐａｍ　２　＋　２細胞（ＮＲ−３Ｎ）由来の上澄の注射は、何ら抑制効果を有していなかった。この実験は、他の２種類の接触抗原であるジニトロフルオロベンゼンおよびオキサシフオンを用いて反復された。両者の場合において、ＵＶＢ照射されたＰａｍ　２１２細胞により生成されたＵＶＢ−３Ｎは、ＣＨ３に対して効果を示さなかった。上述のデータは、ＵＶＢ−照射上皮細胞由来の免疫抑制因子か、ＤＴＨを抑制するが、ＣＨ３は抑制しないことを示している。ＵＶＢ−３Ｎの注射の異なる抗原に対するＤＴＨへの効果も試験された。ＴＮＰ−接合同系肺臓細胞を抗原として使用した。ＵＶＢ−照射および非照射Ｐａｍ　２１２細胞由来の上澄をＢａ１ｂ／ｃマウスに注射しに要約しである。非照射対照（ＮＲ）に比べて、ＵＶＢ−ＳＮの注射およびマウスの全身ＵＶＢ−照射（ＵＶＢ）は、両者ともにＴＮＰ修飾牌臓膵臓に対するＤＴＨの有意な（Ｐ＜０．００１）抑制を生じた。このデータは、使用する抗原にかかわらずＵＶＢに曝露された上皮細胞が生成する上澄は、ＤＴＨを抑制するが、ＣＨ３を抑制しないことを示している。ｓｃｈｗａｒｚらにより出版された結果とは反対に、ＵＶＢ−照射上皮細胞から放出された上澄は、ＣＨ８を抑制出来なかった。Ｓｃｈｗａｒｚら〔１５〕においては、使用されたＵＶＢ−照射の光源は、Ｏｓｒａｍ　Ｖｉｔａｌｕｘ　を球で３１０ｎｍおよび３９０ｎｍにピークを育した３００ｎｍと６００ｎｍとの間の連続スペクトルを放射する。本発明において使用したＦＳ−４０ランプは、３１２ｎｍおよび３６５ｎｍにピークを存する約２７０ｎｍから３９０ｎｍまでの連続スペクトルを育する。従って、Ｓｃｈｗａｒｔｚらは、彼らの抑制因子の生成において、かなりな量のＵＶＡを使用していたと思われ、ここに示したように細胞のＵＶＡ−照射は、ＣＨ３を選択的に抑制する因子を生成し、一方ＵＶＢ− 照射は、ＤＴＨを選択的に抑制する因子を生成する。分離したＰａｍ　２　＋　２培養物を２００　Ｊ／＋ｎ２のＵＶＢまたはＵＶＡ照射のいずれかで照射した。２４時間後、非照射培養物からの対照上澄０．５ｍｌに加えて各上澄０．５　ｍｌを、マウスの種々の群に注射した。５日後に半数のマウスをＤＮＦＢにより感作させ、残る半数は同系肺臓細胞を注射した。感作後６時間後に、該マウスを適当な抗原で攻撃し、１日後に発生したＤＴＨおよびＣＨ３反応を測定した。この実験の結果を表１に要約しである。表　１無　３　＋　１　ＯＮＲ１６＋　４　１３　０　− ＣＨ５ＮＲ−ＳＮ　１４＋６　１１　１５　Ｎ５ＵＶＡ−ＳＮ　９　＋　２　６　５４　０．００２ＵＶＢ−ＳＮ　１２＋３　９　３１　ＮＳ無　３　＋３　ＯＮＲ３１＋５　２８　０ＤＴＨＮＲ−ＳＮ　２９＋７　２６　８　Ｎ５ＵＶＡ−ＳＮ　２５＋５　２２　２１　Ｎ５ＵＶＢ−３Ｎ　１９　＋　３　１６　４３　０．００２ｆｉ、７ウスに、２００Ｊ／ｍ’のＵＶＡ　（ＵＶＡ−ＳＮ）またはＵＶＢ　（ＵＶＢ−８Ｎ）照射に曝露したＰａｍ２１２培養物由来の上澄０．５ｍｌ、または非照射細胞（ＮＲ−３Ｎ）由来の上澄０．５ｍｌを注射した。これらのマウスにおける応答を対照動物（ＮＲ）の応答と比較した。ＣＨ８実験においてはマウスをＤＮＦＢで感作し、ＤＴＨ実験においてはマウスに同種膵臓細胞を注射した。ｂ、単位−ｃ＋ｎＸ　１０−”；　１群あたり５匹のマウス。Ｃ１非感作対照マウスで得られた背景腫張を実験群で得た腫張から差引いた。ｄ、ｃｌ−（実験群の特異的腫張／対照群の腫張）〕×ｅ、Ｐ値は、一方向ＡＮＯＶＡ　：　ＮＳにより決定した。＝ＮＲ対照と有意には異ならない（Ｐ＞０．０５）。前述のように、非２照射細胞（ＮＲ−３Ｎ）由来の上澄の注射は、ＣＨ３応答の強度に対して有意な効果をもたなかった（正常マウス（ＮＲ）をＮＲ−３Ｎに対して比較、Ｐ＞０．５　’）、ＵＶＢ−照射Ｐａｍ　２１２細胞（ＵＶＢ−３Ｎ）由来の上澄の注射は、ＣＨＳ抑制の最小水準を生じたが、他方これら２群の間（ＮＲ対ＵＶＢ−ＳＮ、Ｐ＞０．０５）には有意な差は無かった。しかしながら、ＵＶＡ−照射細胞（ＵＶＡ−３Ｎ）由来の上澄をマウスに注射した場合、ＣＨ３応答の有意な抑制かあった（　ＮＲ対０ＶＡ−３Ｎ、Ｐ＜０．００２）。ＤＴＨを測定した場合には、逆の状況が観察された。非照射細胞（ＮＲ−ＳＮ）由来の上澄またはＵＶＡ−照射細胞（ＵＶＡ−３Ｎ）由来の上澄を注射した得に見出されるＤＴＨ応答は、対照（ＮＲ対ＮＲ−３ＮおよびＮＲ対ＵＶＡ−８Ｎ、Ｐ＞０．０５）から区別されなかった。しかしなから、先に示したように、ＵＶＢ−照射Ｐａｍ　２１２細胞（ＵＶＡ−ＳＮ）由来上澄の注射は、同種抗原に対するＤＴＨ応答の有意な抑制を生じた（ＮＲ対ＵＶＢ −３Ｎ、Ｐ＜０．００２）　。こｔｖデータハ、ＵＶ−照射ケラチノサイトからは少なくとも２種類の因子が放出され、１つはＵＶＡ照射が引金となってＣＨＳを抑制するもので、第２は、ＵＶＢ照射が引金となってＤＴＨを抑制するものである。例３抗体産生に対するＵＶＢ−３Ｎの効果マウスに、例２と同様に調製したＵＶＢ−ＳＮを注射するか、または４０ｋＪ／ｍ”のＵＶＢ−照射を行なった。５日後に、５ＲＢＣの１％溶液０．１　ｍｌを尾部静脈を通して注射した。この免疫後５日目に、それらの肺臓細胞を取出し、抗体形成細胞の数を測定した。この実験の結果を表２に要約しである。＋　ＨＲＢＣＯ＋　５ＲＢＣ＋１４４±９０ＵＶＢ　＋　５ＲＢＣ１０５２＋　４２ＬＩＶＢ−５Ｎ　−ＳＩ？ＢＣ］０８１　ｆ　７８ＮＲ−ＳＮ　＋　５ＲＢＣ１３１７±　６８１．　７ウスに対して、４０ｋＪ／ｍ”のＵＶ照射（ＵＶＢ）を行なうか、またはＵＶＢ−照射始原上皮細胞培養物（ＵＶＢ−３Ｎ）由来の上澄もしくは非照射対照（ＮＲ−３Ｎ）由来の上澄を注射した。次いで、これらのマウスにヒツジエリスロサイトを注射した。プラーク形成細胞（ＰＥＣ）の数を、５ＲＢＣを指示細胞に用いて測定した。ヒツジエリスロサイトで免疫した正常マウス細胞（＋５ＲＢＣ）の応答を、ＵＶＢに曝露されるが、上皮細胞培養物由来の上澄を注射されたマウスで得られた応答と比較した。背景応答は、マウスにウマエリスロサイトを注射しく十ＨＲＢＣ）　、抗−３ＲＢＣプラーク数を測定することにより決定した。ｂ、１群あたり２匹のマウスを用いた。各肺臓は、それぞれ３薄片でアッセイされた。データは、６薄片の平均値を表している。ＵＶＢ−照射の全身曝露、またはＵＶＢ−３Ｎ抑制上澄の注射のいずれによっても抗体形成に対しては有意な効果か無かった。このことは、ＵＶＢ照射への全身曝露により誘発される抑制と同様に、免疫抑制因子により誘発される抑制か選択的であることを示している。例４−９についての材料および方法マウス病原非含有雌Ｃ３Ｈ／ＨＥＮ　（ＭＴＶ−）ＢＡＬＢ／特表千４−５０４５７４　（１３）ＣおよびＣ５７ＢＬ／６７ウスは、Ｎａｔｉｏｎａｌ　ＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　ＦａｃｉｌｉｔｙＡｎｉｍａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ａｒｅａから得られた。該マウスは、実験動物取扱い指針（ＤＨＨ３発行番号（ＮＩＨ）７８−２３）にある指針に従い、認定された動物設備であるＡＡＡＬＡＣ内にて、研究動物管理および使用委員会の認可のもとに使用した。マウスのＵＶＢ−照射処理マウスを、６個のＦＳ−４０サンランプ（Ｗｅｓｔｉｎｇ　−ｈｏｕｓｅ、　Ｂｌｏｏｍｆ　１ｅｌｄ、　Ｎ　Ｊ　）の列から供給されるＵＶＢ（２８０−３２０）に曝露した。ＦＳ−４０バルブの出カスベクトルは、マウスを照射するために用いた方法と共に例１−３の材料および方法中に詳細に記述されている。ＵＶＢの同種移植片拒絶に対する効果受容体Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスをθ８目に４ｋＪ／ｍ２で照射した。照射の間、それらの耳を損傷防止のためにテープでおおった。５日後に、マウスを、５Ｘ１０”個のＣ３Ｈ牌臓細胞の皮下注射により抗原に感作させた。１週間後に、Ｃ３Ｈ心臓断片を１Ｃｌｅｉｎら（２５）の方法に従って受容体マウスの耳に移植した。各移植片の生存を、鼓動組織の視覚的検査により評価した。移植片は、最初に５８目（この時は１００％生存した）に調べ、その後２−３日毎１こ調べられた。移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）の誘発ＧＶＨＤを、Ｋｏｒｎｇｆｌｄおよび５ｐｒｅｎｔ　（２６）の方法を使用して誘発させた。致死的Ｘ−線照射（８５０ラツド）したＢＡＬＢ／Ｃ７ウスを、５ＸＩＯ’個のＴ細胞−放血Ｃ３Ｈ骨髄細胞（ＡＴＢＭ、抗Ｔｂｙ　１．２クローン３０−　ＨＩ　２　、Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｖｉｅｗ　。ＣＡ、補体添加）および５Ｘ１０’個のＣ３Ｈ牌臓細胞で再構成した。肺臓細胞を、正常Ｃ３Ｈマウス、４０ｋＪ／ｍ”ＵＶＢ曝露したＣ３Ｈ７ウス、ＵＶＢに曝露されＵＶＢ曝露後５日目ローＸｌＯ’個のＢＡＬＢ／ｃ牌臓細胞で膵臓されたＣ３Ｈマウス、および５Ｘ１０’Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ細胞により感作されたＣ３Ｈマウスから得た。肺臓細胞および同種異系Ｔ−細胞−放血骨髄（ＡＴＢＩＪ）を、尾部静脈を通して受容体マウスに注射した。該受容体Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスを、オートクレーブ処理した餌、床、および抗生物質添加水により維持した。該動物を毎日発症率および死亡率について検査した。腫瘍移植片拒絶に対するＵＶＢの効果Ｃ３Ｈ７ウスを、４０ｋＪ／ｍ”のＵＶＢ−照射に曝露し、５日後に５ＸＩ０７個のマイトマイシン処理（５０ｕｇ／ｍｌ）　Ｂ　Ｉ　６黒色腫細胞（２７）の皮下注射によって感作させた。１週間後、これらのマウスを２Ｘ］０６個の■ＩＡＢＬＥ　Ｂ１６細胞により攻撃した。同時に、正常ｃ５７ＢＬ／６マウスの１群を同じ数のＢ１６細胞により攻撃した。加うるに、ＢＡＬＢ／ｃマウスをＵＶＢに曝露し、５Ｘ１０”個のマイトマイシンＣ−処理ＵＶ２２３７細胞（Ｃ３Ｈマウス中に生成された進行性ＵＶ−誘発腫瘍（２８））により感作した。感作から１週間後に、該マウスを２８１０”個の生存ＵＶ２２３７細胞により攻撃した。対照として、正常のＣ３Ｈマウスに２百万のＵＶ２２３７細胞を注射した。混合リンパ球培養物肺臓細胞を、ＵＶＢに曝露され、ＢＡＬＢ／Ｃ細胞により感作されたＣ３Ｈマウス、またはＢＡＬＢ／ｃ細胞により感作された非照射のマウスから取出し、単一細胞懸濁物を調製した。エリスロサイトを塩化アンモニウムにて分離し、該細胞を洗浄し、ＲＰＭＴ１６４０培地（３１）中に再懸濁した。一般に、２Ｘ１０’ 個のガンマ−照射（５０００ラツド）刺激細胞を、９６穴丸底マイクロタイタープレート中で培養した。該細胞を３７°Ｃにて５日間培養し、その最後の６時間において］ｕＣｉ／穴のトリチル化チミジン（Ｉ　ＣＮ　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ。Ｉｒｖｉｎｅ、ＣＡ　）を添加した。応答細胞による放射性同位体の取込みを、細胞のグラスファイバフィルタへの回収および引続く液体シンチレーション計数により測定した。モノクローナル抗体および補体処理によるリンパ球サブセットの除去特異的モノクローナル抗体類および補体によるリンパ球サブセット除去に使用した方法は、記述がある（２９．３０）。使用した抗体は、抗−Ｔｈ）１．２　（クローン３０−　Ｈｌ　２　、　Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ　Ｖｉｅｗ、　ＣＡ）、抗−Ｌｙｔ−１およびＬ　ｙ　ｔ　−２（Ｎｅｗ　ＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、　ＭＡ）　、抗−Ｌ３Ｔ４ａ　（クロー：／ＧＫ−１５）、ならびに抗−ＩＪ’　（クローンＷＦ８ｃ。１２．８）であった。抗Ｌ３Ｔ４ａおよび抗１−Ｊｋは、Ｍ。Ｄ、　Ａｎｄｅｒｓｏｎ　Ｈｏ５ｏｐｉｔａｌ、Ｈｏｕｓｔｏｎｅ、ＴＸのＤｅｐｔ、　ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙから得た。図４は、与えられたＵＶ投与量と生じた抑制との関係を示す。種々の投与量のＵＶＢに曝露され、次いで同種抗原で感作されたＣ３Ｈマウスから取出された肺臓細胞の増殖を測定した。この増殖を、ＵＶＢに曝露されず、同種抗原に感作されたＣ３Ｈマウスから単離された肺臓細胞の場合に観察された応答と比較した。図４に示したデータは、与えたＵＶＢ投与量が減少するに従って生じた抑制が低減することを示している。このことは、抑制の程度とＵＶＢへの曝露との間に直接的関係かあることを示している。これらのデータに基き、ＵＶＢへの４０ｋＪ／ｍ”の曝露を、続く実験において使用した。例５同移異系心臓移植片拒絶に対するＵＶＲ曝露の効果受容体ＢＡＬＢ／ｃマウスは、４種の処理のうち１種を受けた。第１群は、正常対照、第２群は、ＵＶＢに対する曝露、第３群は、ＵＶＢに対する曝露およびＣ３Ｈ牌臓細胞による感作、ならびに第４群は、Ｃ３Ｈ牌臓細胞により感作された非照射対照であった。感作から７日後、新生Ｃ３Ｈ心臓断片（同種移植片）を、ＢＡＬＢ／Ｃマウスの左耳に移植した。表３中に示されるように、ＵＶＢに曝露され同種抗原に感作されたマウスにおいて、移植片生存の有意な延長が見られた（Ｐ＜０．００１、Ｗｉ　１ｃｏｘｏｎランクサム試験）。受容体の処理　心臓移植片の生存。ＭＴＳ（日）　範囲対照　５５−７ＵＶＢ　５　５−７ＵＶＢ＋　Ｃ３Ｈ肺臓細胞　＋４”　７−２８Ｃ３Ｈ牌臓細胞　５５−７＊各移植片の生存は、１０倍の立体顕微鏡を用いた組織鼓動の視覚的試験により評価した。移植片は、５日目に最初に評価され、その後は２−３日毎に評価された。対照Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ心臓断片は、各右耳に移植された：〉日のＭＳＴを測定した。各群１０匹のマウスであった。 ”Ｐ　＜、００１　、　Ｗｉｌｃｏｘｏｎランクサム試験。受容体のＵＶＢ曝露のみ、あるいは同種抗原による感作のみでは、同種移植片の生存は、正常対照に比べて延長されなかった。この実験の追加的対照として、ＢＡＬＢ／Ｃの心臓をこれらのマウスの右耳に移植した。これらの移植片の生存時間中央値（ＭＳＴ）は、６０日間より長Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＵＶＢ１：曝露し、ＢＡＬＢ／ＣまたはＣ３Ｈ牌臓細胞のいずれかにて感作させた。感作から７日後、ＢＡＬＢ／ｃ心臓断片（同種移植片）を一方の耳に移植し、Ｃ３Ｈ心臓断片を他方の耳に移植した。同種移植片の生存を、正常動物中に移植された心臓断片の平均生存時間（ＭＳＴ）と比較した。この実験の結果は、表゛Ａに要約されているように、同種移植片が、ＵＶ−照射動物を感作するために使用した抗原に対して同種異系的である場合にのみ生存時間か延長されることを示している。表　４ＢＡＬＢ／ｃ　Ｃ３ＨＵＶＢ＋ＢＡＬＢ／ｃ　１４（１４−２１）　’　５　（５−７）ＵＶＢ＋Ｃ３Ｈ７（５−７）　１４（７−２１）’無　５（５−７）　５（５−７）１受容体Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、ＵＶＢ照射に曝露され、Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃまたはＣ３Ｈ牌臓細胞のいずれかにより感作された。１週間後、感作に続いてＣ３Ｈ心臓断片が左耳に移植され、またＢＡＬＢ／ｃ心臓断片か右耳に移植された。各群は５匹のマウスを含んだ。ｌ′Ｐ　＜、００１　対正常対照。同種抗原に対する免疫応答の他の尺度は、腫瘍同種移植片拒絶の能力である。ＵＶＢおよび同種抗原感作が腫瘍同種移植片拒絶に対して有する効果を、以下の実験により測定した。マウスは、４群、すなわち正常対照、ＵＶＢ−照射のみ、ＵＶＢ−照射および同種抗原にょる感作、ならびに同種抗原による感作のみに分けられた。次いで、これらのマウスを同種異系腫瘍で攻撃した。表５に示したように、同種異系腫瘍は、すべて正常マウスにより拒絶された。ＵＶＢ”　感作”　ＵＶＢ　”　感作０１５ｄ　−０／１０’ ＋　０１５　＋　−０／１０Ｂ１６　０１５　−　ＵＶ２２３７　０／１０＋　８１６　４１５　＋　ＵＶ２２３７　６／１０１１マウスは、そられた背部皮膚に４０ｋＪ／ｍ”のＵＶＢを受けた。 ’５Ｘ１０’のマイトマイシンＣ−処理Ｂ１６細胞、照射後５日。 ”５Ｘ１０”のマイトマイシンＣ−処理ＵＶ２２３７細胞、照射後５日。 ’５Ｘ１０’のマイトマイシンＣ−処理ＵＶ２２３７細胞、照射後５日。ＩＰ＜、０１対非照射感作マウス、カイ平方試験（ｃｈｉ−ｓｑｕａｒｅ　ｔｅｓｔ）　：　Ｂ　１６を注射された正常Ｃ５７ＢＬ／６対照マウスの１００％、およびＵＶ２２３７を注射された正常Ｃ３Ｈ対照マウスの８０％において腫瘍は進行した。ＵＶＢによる処理のみ、または同種抗原にょる感作のみでは、腫瘍拒絶において何ら効果がながった。しがしながら、マウスを第１ＨＵＶＢに曝露し、次いて腫瘍同種抗原で感作させると、腫瘍拒絶が、同種異系マウスにおける腫瘍成長により明らかなように抑制される。これらの結果が、抗原不在変異種の選択による可能性を調べるために、腫瘍を切断して正常マウスに移植した。Ｂ１６は、Ｃ５７ＢＬ／６において急速に成長したが、Ｃ３Ｈマウス中では拒絶された。同様に、Ｕ　Ｖ　２２３２７は、正常Ｃ３Ｈマウス中では成長したか、正常ＢＡＬＢ／Ｃマウス中では拒絶された。例８ＵＶＢおよび同種抗原性感作のＧＶＨＤに対する効果ＵＶＢおよび同種抗原性感作が、致死的ＧＶＨＤを伴うマウスの生存に影響する能力を試験した。ＧＶＨＤを、致死的にＸ−線照射されたＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスに、Ｔ細細胞供与体のＵＶＢ処理および引続く同種抗原性感作が、移植片の対宿主反応を阻止するであろう抑制状態を誘発するであろうかという点に向けられている。供与体マウスは、４種の処理、正常対照、ＵＶＢのみ、ＵＶＢと同種抗原性感作、および感作のみを受けた。感作後７日目に、これらのマウス由来の膵臓細胞に同種異系Ｔ細胞除去骨髄（ＡＴＢＭ）を加えてＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスに注射した。図５に示されるように、ＢＡＬＢ／ｃマウスがＡＴＢＭのみによって再構成された場合には、９０日以上のＭＳＴが観察された。正常肺臓細胞をＡＴＢＭと共に注射した場合に、１２日のＭＳＴをもったＧＶＨＤの誘発を生じた。ＵＶＢ曝露のみのマウス（ＵＶＢＮ臓細胞）または抗原感作のみのマウス（感作ＵＶＢ牌臓膵臓）由来の膵臓細胞の使用は、ＭＳＴを変化させなかった。しかしながら、ＵＶＢに曝露され、次いてＢＡＬＢ／Ｃ細胞て感作されたＣ３Ｈマウスから膵臓細胞を得た場合（感作ＵＶＢ牌臓膵臓）には、　ＭＳＴの有意な延長か観察された。骨髄移植の主な問題点は、ＧＶＨＤの誘発である。ＧＶＨＤ低減方法は、一般に、供与者と受容者との間の組織適合性、免疫抑制剤の使用および移植片からのＴ細胞除去を含んている（２４）。本発明の方法の使用は、ＵＶＢ−照射抗原−感作マウス由来の膵臓細胞か、主要な組織適合性の障壁を越えて異なる受容体に移された場合に、免疫抑制剤無して生存の有意な延長を達成する。本発明の方法は、ＧＶＨＤ発症低減の他の方法をもたらす。本発明者は、先に、抗原特異性抑制細胞（多分子−リンパ球）が、紫外−照射同種抗原感作マウスの肺臓に存在することを示した（３１）。これらの抑制細胞の同一性を確立するために、ＵＶ−処理抗原感作マウス由来の細胞を、第１の混合リンパ球反応物（ＭＬＲ）に添加する前に抗−Ｔｈ５！１．２に補体を加えたもので処理した。表６に表したデータに示されるように、抑制細胞母集団からのＴ細胞の除去は、抑制効果を消去した。培養ｍ胞”　ＣＰＭ＋ＳＥＭ″′　％ｅ　Ｐ６抑制Ｃ３）１　４．１７６±１５７１Ｃ３）１＋ＢＡＬＢ／ｃ　９９．４４４±７１３０　０Ｃ３Ｈ＋ＢＡＬＢ／ｃ＋ＵＶＢ　２０．２５１：ｔ：　１２８８　８０　＜、００１Ｃ３）１＋ＢＡＬＢ／ｃ＋ＮＲ１０２，７０３±９０１７　０Ｃ３Ｈ＋ＢＡＬＢ／ｃ＋ａＴｈｙ１．２ＵＶＢ　１６７．２４９±２６．０７３　０Ｃ３Ｈ＋ＢＡＬＢ／ｃ＋ａＬｙｔ１．］ＵＶＢ　１３５．０２６±１５．３２３　０Ｃ３）ｆ＋ＢＡＬＢ／ｃ＋ａＬｙｔ２．ＩＬＩＶＢ　２０．２３７±３１９２　８０　＜、００１Ｃ３Ｈ＋ＢＡＬＢ／ｃ＋ａｌＪ　ＫＵＶＢ　１０２，５２９±７３０３　０Ｃ３Ｈ＋ＢＡＬＢ／ｃ＋ａＬ３Ｔ４ＵＶＢ　１１２．０４３±４６８７　０ＣＨ３＋ＢＡＬＢ／ｃ＋ａ１ｇＧＵＶ　５５．３５８±３１８　４５　＜、００２’２Ｘ１０’のＣ３Ｈ細胞に加え、２Ｘ１０’マイトマイシンＣ−処理ＢＡＬＢ／ｃ細胞を、ＵＶ −処理またはＮＲ対照マウス由来の２Ｘ１０’ナイロンウール精製牌臓細胞と共に培養した。１三つ組培養からの平均値上ＳＥＭ０ ’　（１−（ＣＰＭ　Ｃ３Ｈ十ＢＡＬＢ／ｃ＋ＵＶＢ細胞／、ＣＰＭ　Ｃ３Ｈ＋ＢＡＬＢ／ｃ））ｘ１００ｄＰ値は両側５ｔｕｄｅｎｔ　を試験（ｔｗｏ　ｔａｉｌｅｄ　５ｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ　ｔｅｓｔ）により決定した：　Ｃ３Ｈ＋ＢＡＬＢ／ｃ対Ｃ３Ｈ十ＢＡＬＢ／ｃ＋ＵＶＢ細胞。加うるに、Ｌｙｔ　ｌ　”　［Ｊ’″およびＬ３Ｔ４ａ”細胞の除去は、抑制効果を除いたが、ｔ、ｙｔ　２″″またはＩｇ′″細胞の除去は効果か無かった。これらのデータは、ＵＶ−照射マウスの同種抗原感作により誘発される抑制細胞か、事実、Ｔ細胞であることを示している。マウスのＵＶ照射への曝露および引続く同種異系細胞の注射は、同種抗原に対する免疫応答の抑制を生じた。遅延過敏症（ＤＴＨ）の誘発、およびＵＶ−照射同種抗原感作マウス由来の肺臓細胞の混合リンパ球反応物（ＭＬＲ）における同種抗原に対する増殖能力は、両者共に抑制された。該抑制は特異的であって、ＵＶ照射後のＣ３ＨマウスのＢＡＬＢ／ｃ細胞による感作は、Ｃ３ＨマウスのＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ抗原に対する応答を抑制するが、これらのマウスの他の同種抗原、例えばＣ５７Ｂ１／６　（Ｂ６）に対する応答は抑制されなかった。これらのマウスの膵臓中に、抗原特異性のＴｈｙ　１．２＋、Ｌｙｔｌ＋、２−抑制細胞が見出された。該抑制細胞の誘発には２種類の信号が必要とされ、該マウスは、ＵＶ照射に曝露され、かつ同種抗原に感作されなければならない。ＵＶ照射への曝露のみ、あるいは単に抗原性感作では、抑制誘発に充分でない。同種移植片拒絶もまた、ＵＶに曝露され同種抗原で感作されたマウスにおいて抑制された（３２）。同種異系心臓断片を拒絶する能力は、受容体マウスをＵＶ照射処理することによって有意に抑制された。ここにおいても抑制は特異的であって、ＢＡＬＢ／ｃマウスのＵＶ曝露およびＣ３Ｈ牌臓細胞の注射は、Ｃ３Ｈ心臓断片の生存を延長したが、Ｂ６心臓断片では延長されなかった。Ｂ６心臓の生存は、非照射正常対照において見られる生存と同様てあった。加うるに、ＵＶ曝露および同種抗原感作マウス由来の肺臓細胞の、致死的な移植片対宿主疾患をＸ−線照射同種異系マウスに誘発する能力を、有意に抑制した（３２）。これらのデータは、器官移植の拒絶反応を抑制するためにＵＶ曝露を使用することかできることを示している。抑制を誘発させるためにＵＶ曝露を同種抗原感作と組合せて使用することの主な利点は、得られる抑制細胞の抗原特異性にある。興味あるか完全には理解されていないＵＶ照射に誘発される抑制に関する疑問は、とのようにして抑制Ｔ細胞が誘発されるか、という点にある。明らかなことであるか、ＵＶ照射の透過力は、膵臓を直接に照射するには不充分である（３３）。一つの仮説は、ＵＶ照射上皮細胞から可溶性の光生成物が放出され、これが抑制細胞の発生を導くとするものである。この仮説は、多くの最近の研究により支持されている。ＤｅＦａｂｏおよびＮｏｏｎａｎ（１０）は、皮膚のＵＶ−照射が、抑制細胞の誘発に役割を演じるであろうウロ力イン酸の異性化（ｔｒａｎｓからｃｉｓへ）を生じることを示唆した。Ｒｏｓｓら（３４）は、正常マウスへのｃｉｓ−ウロカイン酸の注射が抗原特異性抑制細胞を誘発し得ることを示した。Ｓｗａｒｔｚ　（８）は、ＵＶ−照射マウス由来の血清の正常動物への注射か、接触抗原に対する応答能力を有意に抑制することを見出した。Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎらの実験（１３）は、！Ｌ−１の静脈注射がＵＶの効果に類似し、ＣＨＳの抑制を生しることを示した。この効果は、インドメタシンにより打負かされ、プロスタグラ〉ジンの役割の可能性を示唆している。ＵＶ照射後に、マウスの血清中にＩＬ−１か放出されることから、Ｇａｈｒｉｎｇら（１４）は、ＵＶ曝露から生じる重傷の光毒性かＩＬ−１の循環系への放出を招き、ＣＨＳの制御低下の原因となることを示唆した。ＵＶ−照射上皮細胞からのサイトカイン類の放出の直接的証拠は、上皮細胞培養物のインビトロにおける照射が、可溶性媒介因子の培養上澄への放出を招くことを示したＳｗａｒ　ｔ　ｚら（３５，３６）による。培養物上澄のマウスへの注射は、全身　ＵＶ−照射の効果に類似し、ＣＨ３の発生を抑制する。更には、抑制上澄から単離された４０キロダルトン分子は、胸腺細胞増殖を刺激するＩＬ−］の能力を阻害した。上皮細胞培養物へのインドメタシンの添加は、抑制上澄の生成に影響を与えず、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら（１３）により記述されたものとは異なった機構を示唆している。この例において向けられた疑問は、同種抗原感作されたＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄の注射が、同種抗原−特異的Ｔを誘発し得るかという点である。ここにおいてデータは、ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の可溶生成物か、全身のＵＶ−照射への曝露の効果に類似し、同種抗原に対するＤＴＨおよびＭ　Ｌ　Ｒを抑制することを示している。抗原特異的抑制Ｔ細胞が、ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄を注射した動物の膵臓に見出された。これらのデータは、ＵＶ−照射ケラチノサイトから放出される抑制サイトカインか、ＵＶ−照射に曝露後に抗原特異的抑制Ｔ細胞の誘発において役割を演しることを示唆している。更に、これらのデータは、ｔＪＶ−照射ケラチノサイトから放出される因子の使用か器官移植の拒絶の新たな取組方法を提供することを示唆している。例１０に対する材料および方法特異的病原−非含有の雌Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ、　Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ／　ｃ、およびＣ５７Ｂ１／６ｖウスは、Ａｎｉｍａｌ　ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＡｒｅａ、　Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｆａｃｉｌｉｔｙ、　Ｆｒｅｄｅｒｉ−ｃｋ、　ＭＤから入手した。該動物を、実験動物取扱い指針（ＤＨＨ３発行番号（ＮＩＨ）７８−２３）に従って取扱い、これらの使用は研究動物管理および使用委員会の認可のもとに使用した。ＵＶ−照射に対するマウスの曝露使用した方法は、他に詳細な記述がある（６）。マウスの背部皮膚をそって６個のＦＳ−４０サンランプ（Ｗｅｓｔｉｎｇｈｏｕｓｅ、　Ｂｌｏｏｍｆｊｅｌｄ、　ＮＪ）により供給されるＵＶＢ　（２８０ｎｍ　〜３２０ｎｍ）に曝露した。３時間の曝露でのマウスへの全投与量は、４０ｋＪ／ｍ”であった。上皮ｍ胞培養物のインビトロにおけるＵＶ−照射上皮細胞培養物の照射のために５ＷａｒｔＺら（３５）の方法を使用した。５００万個のＰａｍ２１２細胞（ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅの、５ｔｕａｒｔ　Ｙｕｓｐａ博士から提供された）を１００ｍｍの組織培養皿のウシ胎仔性血清ｌＯ％を加えた最少必須培地（ＭＥＭ）に入れ、−夜培養した。培地を除去し、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁した。次いて単層を２００Ｊ／ｍ”のＵＶＢ照射に曝露させた。照射の光源は、出力が１．４３Ｗ／ｍ２の単一のＦＳ−４０ｆサンライトバルブ（Ｗｅｓｔｉｎｇｈｏｕｓｅ　、　Ｂｌｏｏｍ−ｆｉｅｌｄ　ＳＮ、　Ｊ、　）で、バルブと標的間距離は２０ｃｍであった。照射後に、細胞をＰＢＳにて３回洗浄し、血清非含有ＭＥＭ中に再懸濁させた。２４時間後に上澄を取出し、０．２マイクロ−Ｍフィルタを通した。蛋白質濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ　アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ　Ｃｅｎｔｅｒ、　ＮＹ）にて測定した。約５〜１０マイクログラムの蛋白質を各マウスに注射した。対照上澄を、同様の方法で処理し、ＵＶ−照射に曝露していないＰａｒｎ２１２細胞から得た。エンドトキシン夾雑量は、Ｌｉｍｕｌｕ３アメーバ様細胞溶解産物アッセイ（Ｃａｐｅ　Ｃｏｄ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ、　Ｗｏｏｄｓ　Ｈｏ１ｅ、　ＭＡ）により測定して検出限界（０，１２５ｎｇ／ｍｌ）未満であった。ＵＶ−照射上皮細胞由来の上澄の同種抗原に対するＤＴＨへの効果Ｃ３ＨまたはＢＡＬＢ／ｃｖウスにＵＶ−照射Ｐａｗ２１２細胞由来の上澄０．５　ｍｌ、または対照上澄０．５　ｍｌをｉ、ｖ、（静脈内的）に注射した。５日後に、マウスを５Ｘ１０”個の同種異系膵臓細胞の皮下注射により免疫した。６日後に、該マウスを１０７個の同種異系膵臓細胞を各後足装置に注射することにより攻撃した。内針腫張を２４時ｒｒＩＩ後に技術者用マイクロメータ（Ｓｖｊ　５ｓＰｒｅｃｉｓｉｏｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　、ＬｏｓＡｎｇｅｌｅｓ、　ＣＡ）により測定した。背景応答は、非免疫マウスにおいて得られる肉旺腫張から計算した。特異的内針腫張は、免疫マウスで見られた応答から背景応答を差引いて決定された。ＤＴＨ応答が抑制されたマウスから肺臓を取出した。単一細胞懸濁物を調製し、１０”細胞を同系の受容体マウスの尾部静脈に注射した。細胞移入後ただちにこれらのマウスを、５Ｘ１０’個の同種異系膵臓細胞で免疫した。６日後に、該マウスを上述したように攻撃した。同種異系膵臓細胞に対する免疫応答を、２４時間後に動物の内針腫張の測定により決定した。ＵＶ−照射細胞由来の上澄の混合リンパ球応答（ＭＬＲ）に対する効果Ｃ３Ｈマウスに、ＵＶ−照射Ｐａｍ２１２細胞由来の上澄の０．５ｍ１（５−１０マイクログラムの蛋白質）をｉ、　Ｖ。にて注射した。５日後に該マウスを５Ｘ］　０’個のＢ６牌臓細胞の皮下注射により免疫し、７日後にそれらの肺臓を取出し、単一細胞懸濁物を調製した。応答細胞を、ＲＰ　Ｍ　Ｉ培地（１）中に再懸濁し、２Ｘ１０’個の応答細胞を同数のガンマ−照射（５０００ラツド）Ｂ６刺激細胞と混合し、９６大丸底マイクロタイタープレートにて５日間培養した。培養の最後の１８時間にトリチウム化チミジン（Ｉ　ＣＮ　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｒｖｉｎｅ、　ＣＡ）の１マイクロＣｉを各ウェルに加えた。新たに合成されたＤＮＡへの放射性同位体の取込みを、自動試料回収装置で細胞を回収し、液体シンチレーション計数により測定した。Ｔ細胞の除去ある実験においては、Ｔリンパ球およびＴ細胞のサブセットを、前述したように（３２）、モノクローナル抗体および補体を用いて除去した。Ｐａｍ２１２細胞を前述のようにＵＶ照射で処理した。曝露後ただちに、１０マイクログラム／ｍｌのインドメタシンまたは１０マイクログラム／ｍｌのシクロへキシミドを培養物に添加した（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）。２４時間後に、上澄を回収し、低分子量阻害物質をＰＢＳに対して透析することにより除去した。（５ｐｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅ透析チユーブ、６−８０００分子量除去、Ｆｉｓｈｅｒ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　、　Ｈｏｕｓｔｏｎ　、　ＴＸ）　、該上澄を、上述したようにＢＡＬＢ／Ｃ牌臓細胞に膵臓作したＣ３ＨマＵＶ−照射または対照ケラ千ノサイト由来の上澄（１００μｇ全蛋白質）を、ＣｏｎＡ結合アガロース（０，５ｍｌ充填ゲル、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）に加えた。上澄およびＣｏｎＡ−アガロースを、４°にて３０分間混合し、次いて１ｍｌのシリンジに入れた。非結合物質を、５１＋１１のＰＢＳにて溶出させた。結合物質を、５ｍｌのＩＭα−メチル−Ｄ−グルコシド、次いで５１Ｉ］ｌのＩＭ　α −メチル−Ｄ−マンノシドを加えて溶出させた。結合および非結合物質の両者を、限外口過により濃縮し、ＩＯμｇをＣ３Ｈマウスに注射した。５日後、該動物を上述したように同種抗原により感作させ、ＭＬＲの抑制をとの分画が抑制活性を保持するか示すために用いた。ＣｏｎＡカラムからの分画を、Ｌａｅｍｍｌ　ｉにより記述された方法に従って還元および非還元条件下にて更に５ＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した（４２）。蛋白質を銀染色により可視化した（Ｂｊｏ−Ｒａｄ　５Ｒｏｃｋｖｉｌｌ　Ｃｅｎｔｒｅ　、　ＮＹ）。ＴＬ−１生物アツセイＩＬ−１活性を、記述されているように（２５）ＩＬ−１依存性ネズミヘルパー細胞系Ｄ１０．Ｇ４．１゜１の増殖により測定した。該細胞を、９６六マイクロタイタ一皿の２．５　ｕｇ　／ｍｌのＣｏｎ−Ａ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　、　Ｓｔ。Ｌｏｕｉｓ　、　ＭＯ）中に、ＵＶ−照射または対照ケラチノサイト由来の上澄の種々の希釈物と共に入れた。加うるに、種々の量のネズミ７１　Ｌ　−１（Ｇｅｎｚｙｍｅ　Ｃａｒｐ、　Ｂｏｓｔｏｎ。ＭＡ）を標準曲線の作成に使用した。４８時間の培養後、１μＣｉ／穴のトリチウム化チミジンを加え、２４時間後に細胞をグラスファイバーフィルタ上に集め、取込まれた放射活性を上述のように測定した。統計分析両側５ｔｕｔｅｎｔ　を−試験を、実験および対照群の間の統計的に存意な差を決定するすために用いた。ＤＴＨを免疫応答性の尺度として用いる実験において、１群あたり５匹のマウスであった。ＭＬＲ応答測定の実験においては、一般に１群あたり２−３匹のマウスであった。各個体動物の応答を測定し、データを蓄積した。各実験は、少なくとも２回反復した。結果ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄の、同種抗原に対する免疫応答への効果。この研究室からの先の報告は、マウスの感作に先行するＵＶ照射か、同種抗原に対するＤＴＨの誘発を抑制することを示した（３］、３２）。ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄の注射が、全身ＵＶ照射の効果に類似し、ＤＴＨを抑制するかを決定するために研究された。マウスに抑制上澄を注射するか、または４０ｋＪ／ｍ”のＵＶ照射に曝露させた。対照マウスは、そったが、照射せず、あるいは非照射Ｐａｍ２１２細胞由来の上澄を注射した。５日後に、該マウスを同種抗原で感作した。次いで、同種抗原に対するＤＴＨを７日後に測定した。表７に表したデータは、ＵＶ−照射上皮細胞由来の上澄を注射したマウスが、同種異系細胞に対してほとんどまたは全く応答を示さないことを示している。表　７ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄のＤＴＨに対する効果無　２±３ＯＮＲ４２±７４００Ｅｘｐ、Ｉ　ＬＩＶ　１９±ＩＩ　１７　５８　．００１Ｐａｍ　ＳＮ　３２± ９　３０　２５　ＮＳＵＶ−Ｐａｍ　ＳＮ　１９±４　１７　５８　．００１無　１３±５ＯＮＲ４１±６２８ＥＸＩ）、２　ＵＶ　２６±４　１３　５４　０．００１ＵＶへし９２９　ＳＮ　３３±６　２０　２９　Ｎ５ＵＶ−Ｊ７７４．ｌＳＮ　３５±４　２２　２１　ＮＳ無　３±３ＯＮＲ２１±３１８０Ｅｘｐ、３　ＵＶ　９±５　６　６７　．００１Ｐａｍ　ＳＮ　２９±６　２６　０　ＮＳＵＶ−Ｐａｍ　ＳＮ　４±４　１　９５　．００２０マウスに、ＵＶ −照射Ｐａｍ２　＋　２細胞由来の５Ｎ（ＵＶ−３Ｎ）　、非照射対照細胞由来のＳＮ　（ＰＡＭ−３Ｎ）を１．ｖ、にて注射し、または４０ｋＪ／ｍ”のＵＶ照射を行なった。実験（Ｅｘｐ、　）　１および２においては、Ｃ３ＨマウスをＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ肺臓細胞て感作させた。実験３においては、Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃマウスをＣ３Ｈ牌臓細胞で感作させた。１群あたり５匹のマウスであった。ｂ単位：ｃｍＸｌｏ−” ζ％抑制＝　（１−（実験特異的内針腫張／対照特異的内針腫張））Ｘ１００ ’ＰＷは、両側５ｔｕｄｅｎｔ　を試験により決定、実験対ＮＲ（非照射対照マウス）；Ｎ５＝Ｐ＞、０１゜先にＵＶに曝露したマウスにおいて観察される応答は、非照射対照マウス（ＮＲ）にて観察されるものに比べて有意に小さかった。同様に、ＵＶ−照射Ｐａｍ２１２細胞由来の上澄を注射したマウスに見られる応答は、有意に抑制され、その一方、非照射Ｐａｍ２１２細胞由来の上澄の注射は、ＤＴＨの有意な抑制を生じなかった。Ｐａｍ２１２１Ｍ胞系は、Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃに由来することに注意すべきである。外来組織適合性抗原の静脈内的導入は、ＤＴＨを抑制することから、実験１において観察される抑制は、ＵＶ− 照射Ｐａｍ２　＋　２細胞による上澄中へのＨ−２抗原の放出に帰因する人工物の可能性がある。この可能性を調べるために、ＵＶ−照射Ｐａｍ２１２細胞由来の上澄を、ＢＡＬＢ／ｃマウスに注射した（実験３、表７）。次いで、これらのマウスをＣ３Ｈ牌臓細胞で免疫した。ＢＡＬＢ／ｃマウスのＣ３Ｈ抗原に対するＤＴＨ応答も抑制され、このことは、該効果か照射Ｐａｍ２１２細胞による培地中への同種抗原の放出に帰因するものではないことを示唆している。また、これらのデータは、上澄による抑制誘発は、Ｈ−２限定的ではないことを示している。ＤＴＨ応答が抑制されたマウスの膵臓中の抑制細胞の存在を評価した。表８に示されるように、ＵＶ−照射Ｐａｍ２１２細胞由来の上澄を注射したマウス（ＵＶＰａｍ２１２　ＳＮ）からの肺臓細胞の移入は、正常受容体動物におけるＤＴＨの誘発を阻害し得た。表　８ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄を注射したマウスの膵臓中に抗原−特異的抑制細胞が存在する無　無　１４±５０無　ＢＡＬＢ／ｃ　５７±１３　４３Ｐａｍ　２１２　ＳＮ　ＢＡＬＢ／ｃ　５７±１３　４３　０ＵＶ　Ｐａｍ　２１２　ＳＮ　ＢＡＬＢ／ｃ　３５±５本’２１５］無　無　１７±５０無　Ｂ６３２±７　１５Ｐａｍ２１２　ＳＮ　Ｂ６　３８±８　２１　０ＵＶ　Ｐａｍ　２１２　ＳＮ　Ｂ６　３６±７１９０６供与体マウスは、非照射対照Ｐａｍ２１２細胞またはＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄（１０マイクログラムの蛋白質）の注射を受けた。５日後に、すべての供与体マウスに５Ｘ１０”のＢＡＬＢ／ｃ牌臓細胞を膵臓した。感作後７日目に供与体マウスのＤＴＨを測定し、ｌＸｌ０”の供与体膵臓細胞を２群の受容体マウスに移入した。一つの群は、ＢＡＬＢ／Ｃ牌臓細胞で膵臓され、第２の群は、Ｂ６牌臓細胞によった；受容体マウスの感作抗原に対するＤＴＨを７日後に測定した。背景応答は、感作されずに抗原により攻撃されたマウスにより測定された。１表７の脚注参照。 ”　＊　Ｐ＜０．Ｏｏ　＋　両側５ｔｕｄｅｎｔ　ｔ−試験　対対照。対照上澄（Ｐａｍ２１２　ＳＮ）を注射されたマウス由来の肺臓細胞の注射は、受容体動物の免疫応答を有意に抑制しなかった。抑制の特異性も試験した。ＵＶ −照射ケラチノサイト由来の上澄を注射され、ＢＡＬＢ／ｃ細胞て感作されたＣ３Ｈマウス由来の肺臓細胞を、正常Ｃ３Ｈマウス中に移入した。次いて受容体を感作し、Ｂ６牌臓細胞で攻撃した。一方、抑制上澄を注射され、ＢＡＬＢ／ｃ細胞で感作されたマウス由来の抑制細胞の移送は、受容体かＢ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ細胞で感作された場合にＤＴＨを抑制し、これらの細胞は、Ｂ６に対するＤＴＨ応答の強度に何ら影響を与えず、抑制細胞の特異性を示した。ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄の注射の、処理マウス由来の肺臓細胞がＭＬＲを生じる能力に対する効果も試験した。Ｃ３Ｈマウスに、ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄（１０マイクログラムの蛋白質）を注射するか、あるいはＵＶ−照射に曝露した。５日後に、すべてマウスにＢ６稗臓細胞を注射した。このことは、先の研究が、ＭＬＲを抑制するためにはマウスを第１にＵＶ−照射に曝露し、次いで同種抗原に感作させなければならないことを示していたので行なわれた。ＵＶ−照射への曝露のみでは抑制は誘発されないであろう（６〕。７日後に、これらのマウスの肺臓細胞をＭＬＲにおける応答細胞として使用した。表９に示されているように、ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄を注射したマウスからの肺臓細胞は、同種抗原に応答して増殖することがない。表　９ＵＶ−韮情（ケライツサイト由紗−Ｈ登を注射されたマウスからの暦曝鞠１脱に）同種抗原に対するｊ窄前ｖノの欠如 γＣＰＭ実験ｌ　実験２処理　３目　５１　３日　５日ＮＲ６ＺＱ！’Ｌ１＋４１）Ｍ　代部ｆ１３１２　６０１８２＝’％５７１　４２４Ｒ９±５１３’ａ［ＩＲ（’Ｙｔ、：：ｉ、−１７３８”　７１）４！ｌｆ７：Ｉ”　３２０２Ｆ＋：’Ｃ１３５６”　１３２０Ｇｆ４４’？’ｒ“肺臓細胞を、非照射対照（ＮＲ）　、４６　Ｊ　／ｍ２ノＵＶ照射に曝露されたマウス（ＵＶ）　、非照射対照培養物由来の上澄を注射されたマウス（Ｐａｍ　ＳＮ）　、またはＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄（１０μｇの蛋白質）を注射されたマウスから得た。すべてのマウスを、ＵＶ曝露後、またはケラチノサイトー誘導上澄の注射後、５日目に同種抗原について感作させた。細胞をガンマ−照射同種異系刺激剤と共に３〜５日間培養した。データは、ΔＣＰＭとして表されている；応答細胞の背景応答は、単独で培養したものを差引いた。零Ｐ＜０．００１、両側５ｔｕｄｅｎｔ　を−試験　対ＮＲ対照対照（同種抗原により免疫された正常マウス、ＮＲ）にみられる応答と比較して、感作に先行するＵＶ−照射への曝露、またはＵＶ−照射ケラ千ノサイト由来の上澄の注射は、増殖的応答の有意な抑制を生じた。非照射ケラチノサイト由来の上澄の注射は、何ら抑制効果を有さなかった（Ｐ＞０．０５）。細胞は、３または５日の培養後に回収された。培養期間の持続とは関係なく、マウスのＵＶ照射への曝露またはＵＶ照照射ケラソノサイト由来上澄の注射は、増殖的応答の有意な抑制をもたらした（Ｐ＜０．００１）。従って、応答の動力学における単純な変位は、観察される増殖抑制を説明できない。３日培養物の増強された応答は、同種抗原を注射されたマウスから単離された細胞であるという事実により説明できる。しかしながら、３日培養後は、正常細胞が同種抗原に対して増殖しないため（データ示さず）、我々は、抑制の特異性を測定すべく更なる実験においては５日培養の使用を選択した。抑制の特異性を試験するために、抑制上澄を注射し、Ｂ６細胞て感作したマウスから肺臓細胞を得た。前述と同様に、これらの細胞をガンマ−照射Ｂ６刺激細胞と共に培養した場合に、はとんと、または全（増殖が起こらなかった（表１０）。！［１０ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄の注射により誘発された抑制の特異性恥　細胞　３１８８±８６７　３１５Ｆ！２±２５１９　よ■陀±１１４９十％　細胞　四θ±８３２　６１４２８±７１００　７（Ｆ７５４士田１５［ＪＶ　ＰＷ　２１２訓＋噛胞　２７４９±４沁　シ花±材四〇　訂４４８＋５７２４１マウスは、ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄（ＵＶ　Ｐａｍ２１２　ＳＮ）または対照細胞由来の上ａ　（Ｐａｍ２１２　ＳＮ）を注射され、次いてＢ６またはＢＡＬＢ／ｃ牌臓細胞で膵臓された。それらの肺臓細胞の増殖的応答を、正常対照細胞細胞と比較した。 ”Ｐ＜０．００１　両側５ｔｕｄｅｎｔ　を−試験同じ細胞を、Ｂ６刺激細胞ではなく、ＢＡＬＢ／ｃ刺激細胞と共に培養した場合に、それらは正常対照細胞のものとは区別できないＭＬＲを生じた（ＥＸｌｌ、２）。これらの知見は、マウスのＵＶ曝露により誘発された抑制と同ｉに、ＵＶ−照射Ｐａｍ２１２細胞由来の上澄の注射により誘発される抑制が、引続いて動物の感作に使用した抗原に対して特異的であることを示している。Ｔ−細胞がＭＬＲ抑制の原因となるか否かを決定するために、抑制上澄を注射され、かつＢ６により感作されたＣ３Ｈマウス由来の肺臓細胞を、抗−ＴＭ　１．２モノクローナル抗体および補体と共に処理した。残る細胞は、正常Ｃ３Ｈ牌臓細胞およびガンマ−照射ＢＡＬＢ／Ｃ刺激細胞の培養物に添加した。第６図に示されるこの実験のデータは、ＵＶ−照射Ｐａｍ２　＋　２細胞由来上澄を注射されたマウスの膵臓中にＴが生成することを示している。一方において補体処理細胞（ＣＳ　Ｈ十８６　＋ＵＶ）の添加は、対照（Ｃ３Ｈ十８６）に比べて有意なＭＬＲ（Ｐ＜０．００１）の抑制を生じるが、Ｔリンパ球の除去は、抑制効果を完全に消去した。加えて、Ｔ細胞のＬｙｔ　１＋サブセツトの除去も、抑制の完全な消去を生じた。い＝１２＋細胞の除去は、ＭＬＲの抑制に何ら影響しなかった。抑制細胞の２０Ｇｙのガンマ照射は、抑制効果をある程度低減したか、それてもなお対照とは有意な差異（Ｐ＜０．００１）があった。抑制の特異性に関して言えば、最初に抑制上澄を注射され、Ｂ６細胞により感作されたマウス由来の肺臓細胞の添加は、Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　／　ｃ肺臓細胞を刺激因子として使用した場合に（３４５２８±４８６８ＣＰＭ、Ｃ３Ｈ＋Ｂ６）、ＵＶ−照射Ｐａｍ２１２細胞由来の上澄が注射された場合（３］９８３±４５２４ＣＰＭ、Ｃ３Ｈ＋Ｂ６　ＵＶＢ）と比較して抑制効果がなかった。従って、Ｔｈｙ　１　＋Ｌｙｔ　１　＋、２−１照射抵抗性、抗原−特異的抑制細胞か、ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄をマウスに注射した後に誘発される。該抑制物質のいくつかの特徴が、第７図に示されている。この実験においては、２種類の方法を使用した。パネル八においては、Ｐａｍ２１２細胞をＵＶに曝露し、次いてプロスタグランジン合成酵素阻害剤、インドメタシン、または蛋白質合成を干渉するシクロへキシミドのいずれかにより処理した。２４時間後に、すべての上澄を集め、低分子量阻害剤を除去するために透析し、マウスに注射した。蛋白質合成の阻害は、ＵＶ−照射細胞の抑制サイトカイン生成能力と干渉するが、一方、プロスタグランジン合成の阻害は干渉しないことに注意したい。透析は、ＵＶ−照射ケラ千ノサイト由来の上澄のＭＬＲ誘発を抑制する能力に何ら影響しなかった。パネルＢにおいては、ＵＶ−照射ケラ千ノサイト由来の上澄を集め、加熱し、煮沸するか、あるいは１０マイクログラム／ｍｌのトリプシンにより処理した。対照（非照射細胞由来の培地または上澄を注射したマウス）と比較して、ＵＶ−曝露ケラチノサイト由来の上澄の注射は、ＭＬＲの発生を抑制した。上澄の煮沸またはそのトリプシン処理は、抑制効果を完全に除いた。５６ °Ｃにおいて３０分間または１時間曝露した場合は、該上澄のＭＬＲ抑制能力に対して影響しなかった。これらのデータからの結論は、ＵＶ−照射ケラチノサイトから放出される抑制的サイトカインは、非−ブロスタグランジン様であり、非 −透析蛋白質であることである。興味あるが完全に解答されていないＵＶ照射に誘発される抑制に関する質問は、マウス背部皮膚のＵＶ照射への曝露が、とのようにして膵臓性抗原−特異的抑制Ｔ細胞の出現により特徴付けられるものである免疫応答の全身的抑制を生じるか、ということである。明らかに、ＵＶ−照射は、肺臓までは侵入せず〔３３〕、従って肺臓のＴ細胞の直接的照射は不可能である。種々の理論が提案されているが、今日まてのほとんとの実験的証拠は、ＵＶ−誘発可溶性抑制因子が関与するという概念を支持している。しかしながら、文献をふり返ると、ＵＶ−照射による抑制誘発における可溶性因子の正確な役割は明確でない。Ｓｗａｒｔｚ　Ｃ８）は、ＵＶ−照射動物の血漿を正常受容体に移すと、それらの接触アレルゲンに対する応答能力が有意に抑制されることを見出した。またＨａｒｒｉ−ｏｔｔ− ５ｍｉｔｈおよびＨａｌｌｉｄａｙもＵＶ−照射マウスの血清中に抑制因子が存在することを記述している

〔９〕。ＤｅＦａｂｏおよびＮｏｏｎａｎは、皮膚中のＵＶ−照射の光受容体がウロカニン酸であろうことを示唆している。彼等は、ＵＶによるｔｒａｎｓ−ウロカニン酸のｃｉｓ−ウロカニン酸への異性化が、全身的抑制の誘発に重要であることを示唆している。この仮説を支持するデータは、Ｒｏｓｓら〔３〕およびＮｏｏｎａｎら〔１２〕の実験によるもので、ｃｉｓ　−ウロカニン酸の注射が、単純ヘルペスウィルスに対するＤＴＨを抑制でき、また肺臓性抗原提示細胞機能の損傷を招くことを示した。別の仮説は、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら〔１３〕の研究に由来するもので、ここでは組換えインターロイキン−１（ＩＬ−１）のマウスへの注射が、接触アレル抑制細胞が見出された。ＩＬ−１による抑制は、プロスタグランジン合成酵素阻害剤であるインドメタシンの投与が、抑制効果を消去したことから、プロスタグランジンの放出に依存するものと思われる。これらの著者らは、ＵＶ曝露により生じる炎症が、全身的抑制の誘発において役割を演じるＩＬ− １およびプロスタグランジン類等の放出を生じることを示唆している。Ｇａｈｒｉｎｇら〔１４〕による研究は、ＵＶ−照射マウスの血清中の増大したＩＬ−１濃度が、この仮説を支持することを示した。しかしながら、Ｈａｒｒｉｏｔｔ− ３ｍｉｔｈおよびＨａｌｌｉｄａｙ　（９：］は、彼らの研究において、ＣＨＳを抑制した血清試料中にＩＬ−１の存在を実証することができなかったことに注意すべきである。Ｓｗａｒｔｚは、彼の抑制物質が１〜１０キロダルトンの分子量を有し、ｃｉｓ−ウロカニン酸ではないことを示唆することを見出した〔３８〕。最終的にＳｗａｒｔＺら〔３５，３６〕は、始原上皮細胞培養物および／またはケラチノサイト細胞系のインビトロにおけるＵＶ−処理が、抑制的サイトカイン類の上澄への放出を生しることを示した。該上澄のマウスへの注射は、全身ＵＶ照射の効果に類似し、動物の接触アレルゲンへの応答能力を抑制する。この研究におけるインドメタシンの使用は、抑制因子の産生を消去しない点に注意することは興味ある。これらのデータは、ＵＶ−照射による免疫応答の全身的抑制における可溶性抑制因子の役割を支持するものではあるが、Ｕ　Ｖ曝露後の免疫応答の全身的抑制の原因となる因子の正確な性質は、これらの研究からは完全に定義することかできない。ＵＶ照射の限定的侵入か、その第１義的効果を主に皮膚に制限することから、ＵＶ−処理上皮細胞による可溶性抑制因子の放出は、Ｕ　Ｖ−照射による免疫応答の全身的抑制を説明するためには魅力ある仮説である。本発明は、同種抗原に対する免疫応答の抗原特異的な様式での抑制のための特異的ＵＶ照射の使用に関する。ＵＶ−照射ケラ千ノサイト由来のサイトカイン類の同種抗原特異的抑制Ｔ細胞の誘発能力を、ここに記述されるように試験した。これらのデータは、以下を示している＝　（１）同種抗原に対するＤＴＨは、ＵＶＢ−照射ケラチノサイトから放出される因子により抑制され得る；　（２）該因子の抑制活性は、Ｈ−２制限的ではない；　（３）抑制細胞が誘発される。（４）該抑制細胞は、抑制的サイトカインの注射を受けたマウスを感作するために用いた抗原に対して特異的である；および（５）該抑制細胞はＴ細胞である。この因子の注射により誘発される免疫抑制は、マウスをＵＶ照射に曝露した後に見られるものに極めて類似しているため〔６，３２〕、これらの知見は、ＵＶＢ−照射に続くインビボのＤＴＨ全身抑制が、ＵＶＢ−照射ケラチノサイトによる抑制的サイトカインの放出の結果であるという仮説を支持している。該抑制物質の正体は、現在のところ完全には定義されていない。活性が、インドメタシン処理によっても消去されず、また透析後にも活性が残るという事実は、この因子か、プロスタグランジンまたはウロカニン酸ではないことを示唆している。加うるに、ＨＰＬＣ分析は、抑制上澄中にｃｉｓ−ウロカニン酸の存在を示すことができなかった。細胞のシクロヘキシミド処理および／または上澄のトリプシン処理による全抑制活性の除去は、該抑ロースビーズに結合し、このことは、それか糖蛋白質であることを示唆している。これらのデータは、ＵＶ−照射ケラチノサイトから放出される抑制的サイトカインが、同種抗原特異的抑制Ｔ細胞の誘発において役割を演じることを示唆している。更に、これらのデータは、ＵＶ−照射ケラチノサイトから放出される因子の使用が、器官移植拒絶反応抑制のための新規な方法を提供することを示唆している。ＵＶ照射（１００ｍＪ／ｍ２〜３００　ｍＪ／ｍ２）への曝露が、ケラチノサイトにょるＩＬ−１産生を調節することか示されている事実〔３９，４ｏ〕、およびＩＬ−１のｉ、　ｖ、注射が、インビボにおいてＣＨ３の誘導を抑制することが示されたという事実は、ＩＬ−１を有力な候補にする。しかしながら、予備的な研究は、ＵＶ−照射細胞および対照非照射細胞の両者に由来する上澄のＩＬ−］依存性細胞系Ｄ１０．Ｃ；、４の増殖を支持する能力が同等であることを示唆した。免疫応答は、非照射細胞由来の上澄によっては抑制されないことから、ＩＬ−１は明らかに関与しない。ここに記述された因子が５ＷａｒｔＺらによって記述されたものと類似するか否かということが、知るべきこととして残されている。予備的研究は、そうてはないことを示唆している。ＵＶＢ−照射ケラチノサイトから放出された因子によって、ＣＨ３は抑制されなかった。細胞のＵＶＡ処理後にのみ、ＣＨ８を抑制し得る因子が生成する。該ＵＶＡ−誘発因子はＣＨＳを抑制するが、ＤＴＨを抑制せず、またＵＶＢ−誘発因子はＤＴＨを抑制するがＣＨ３を抑制しない。従って、異なった２種類の抑制サイトカインが、細胞照射に用いた光の波長に応じてケラチノサイトから放出されるものと思われる。ＵＶ−照射ケラ千ノサイト由来の上澄の抑制誘発に要すす。Ｃ３Ｈマウスに、ＵＶ−照射および非照射ケラチノサイト由来の種々の濃度の上澄を注射し、５日後にＢ６細胞で感作させた。１週間後にそれらの膵臓を取出し、同種抗原に応答する増殖の測定を行なった。対照応答（３４，４５６ｃｐｍ＝１００％）を、培地を注射し、同種抗原で免疫されたマウスから単離した膵臓細胞の増殖測定により決定した。非照射細胞由来の上澄の注射は、抑制効果をもたなかったが、ＵＶ− 照射ケラチノサイト由来の上澄の注射量の増大に従って抑制の程度が増大した。これらのデータから、我々は、応答の５０％の抑制を生ずるために必要な抑制物質の量が７〜１０μｇ蛋白質の間であることを決定した。従って、引続くすべての実験において、少なくとも１０μｇの蛋白質が注射された。ＵＶ−照射ケラチノサイト培養物由来の上澄中に存在するＴＬ−１の測定Ｐａｍ２１２は、本質的にＴＬ−１を産生ずる。Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら（２０）により発行されたデータは、ＩＬ−１のｉｖ（静脈内的）注射が接触性過敏症反応の誘発を抑制し得ることを示し、またＵＶ曝露がＴＬ−］ｍＲＮＡの発現およびケラチノサイトによるＩＬ−１放出を調節することから（２７，２８）、我々のＵＶ−照射Ｐａｍ２１２細胞によるＩＬ−１の過剰生産か、我々の観察した抑制の原因となっている可能性がある。この疑問に向けて、我々は、ケラチノサイトをＵＶ−照射に曝露した後の培地に放出されるＩＬ−１の量を測定した。該ケラチノサイトを前述したようにＵＶ−照射に曝露し、１８時間後に上澄を集め、ＩＬ−１依存性Ｄ１０．Ｇ４．ｌ、Ｔヘルパー細胞系を加えた。対照上澄は、同様の方法で処の２００Ｊ／ｍ”のＵＶ照射への曝露は、ＩＬ−１の放出について有意な増大を生じなかった。ＵＶ−照射Ｐａｒｎ２１２細胞由来の上澄を用いて培養したＤＩＯ，Ｇ４．ｌ細胞の増殖は、非照射対照ケラ千ノサイト由来の上澄を用いた場合に見られるものと同等であった。対照非照射ケラチノサイト細胞由来の上澄の注射は、免疫応答の誘発を抑制せず、その一方ＵＶ−照射細胞由来の注射は抑制したことから、ケラチノサイトによるＩＬ−１の放出は、観察された抑制の原因とならないものと結論した。抑制物質のＣｏｎＡ−アガロースカラムへの結合ＵＶ−照射および対照非照射ケラ千ノサイト由来の上澄を、ＣｏｎＡか結合したアガロースビーズに加えたく表１１）。表１ルクチンアフィニティ力うムトσ）ｆｌｆｔｉｌＰｔＭｉＰｌｉＦｊ）培地　５４１７：１３４　４６７８６＋３７９１　４１３６９　−１１？！ＩＮ　剥±１２０　３９６５７±４８５３３昭関　１２Ｗ　出発物質　７５２５＋３８３　２９８３３±８”　２２３０８　４７Ｗ　非結合　５２１７ゴ５２５　３！用９士駒特　３低　１７α　グルコシド溶出液　５５２７４：８５０　４Ｆｒ？Ｒ±５７７４　４３２１２　０ＩＮマンノシド溶出液　５２０８±１０１３　２８８１５ −１−５２０”　Ｚ３Ｏｆｆ７　４３圏、Ｉｆ詰合　瞳±１９２　４ｆＥ５７壮７０２９　４０３４２　２Ｍ　グルコシド溶出液　３１２２±１８４３　４２９８６±６２５９　３９８６４　４Ｍ　マンノシド溶出液　４７７５寸９８１）（６）ぢ上潮　工［Ｆ］幻　頷６　対照非照射（ＮＲ）ケラチノサイトおよびＵＶ −照射ケラチノサイト（ＵＶ）由来の上澄（ｌｏＯＩｌｇの蛋白質）をＣｏｎＡアガロース（０，５ｍｌ充填ゲル）と混合し、４°にて３０分間インキュベートした。該ゲルを１．　Ｑ　ｍｌのシリンジに入れ、５ｍｌのＰＢＳを加えて非結合物質を溶出した。結合物質を、５ｍｌのＩＭ　α−メチル−Ｄ−グルコシド、次いて５ｍｌのＩＭ　α−メチル−Ｄ−マンノシドを加えて溶出させた。溶出画分をＰＢＳに対して透析し、限外ろ過により濃縮し、１０μｇの蛋白質をＣ３Ｈマウスに注射した。該マウスを同種抗原により感作した。ＭＬＲは、材料および方法において記述したように測定された。 ”　Ｐ　＜０．００１ＳＳｔｕｄｅｎｔの両側を試験　対培地対照表１１に見られるように、通過物質（ＵＶ非結合）は、出発物質（ＵＶ　ＳＮ）と比較してほとんと抑制活性を有さず、抑制物質のほとんどかＣｏｎＡに結合したことを示している。α−Ｄ−グルコシルおよびα−Ｄ−マンノシル残基の両者ともにＣｏｎＡに結合するので、結合物質を過剰量のα−メチル−Ｄ−グルコシドおよびα− メチル−Ｄ−マンノシドにより競合的に溶出することを試みた。抑制活性は、マンノシドによる溶出画分（ＵＶマンノシド溶出液）中に見出されたか、グルコシド（ＵＶグルコシド溶出液）には見出されなかった。対照上澄をＣｏｎＡ−アガロースカラムで分画した場合には（ＮＲマンノシド溶出液、ＮＲグルコシド溶出液）、有意な抑制非抑制画分との間に示される主な差異は、６８ｋＤａの分子量の固有のバンドの出現である。このバンドは、抑制を誘発する画分（ＵＶマンノシド溶出液）中にのみ存在し、何ら抑制活性を有していない他の両分（ＵＶグルコシド溶出液（レーン２）　、ＮＲマンノシド溶出液（レーン３）およびＮＲグルコシド溶出液（レーン４））には存在しないことから、これらのデータは、抑制物質の分子量が６８ｋＤａであることを示唆している。物質を非還元条件下で電気原電した場合にも、同様な移動パターンが観察された。ＵＶ−照射細胞および対照非照射細胞の両者に由来する上澄の、ＩＬ−１依存性細胞系Ｄ１０．Ｇ４．ｌの増殖を支持する能力は同等であることから、ＵＶ−照射ケラチノサイトによるＩＬ−１の過剰生産が、我々の記述した抑制の原因であるとは考えられない。ここに記述した抑制因子は、コンカナバリン−Ａアガロースカラムに結合し、このことは糖蛋白質であることを示し、一方、ＩＬ−１はグリコジル化されておらず、更にはＵＶ−照射ケラチノサイト由来の上澄の注射後に観察されるＤＴＨ抑制か、ＩＬ−１の注射によるものではないことを示している。５ＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、ＭＬＲの誘発を抑制する画分（ＵＶマンノシド溶出液物質）中に存在するが、非抑制画分（ＵＶグルコシド溶出液、ＮＲグルコシド溶出液、およびＮＲマンノシド溶出液）にはない固有な６８ｋＤａバンドの存在を示した。これらのデータは、６８ｋＤａ蛋白質が、この免疫抑制の原因となることを示している。該抑制物質の更なる精製および該６８ｋＤａ蛋白質の活性試験か、この蛋白質をより完全に定義するために行なわれるであろう。ケラナノサイト類または他の上皮細胞等の免疫抑制糖蛋白質を産生可能であると信じられる他の細胞も、該６８ｋＤａ糖蛋白質の供給源として使用することができる。同様に、この免疫抑制糖蛋白質は、ここにおいて粗製の細胞性ＵＶ−誘発細胞生成物について他の個所に記述したように、望ましからぬ免疫応答を防止するために有用であることを証明するであろう。ＵＶ照射により誘発される免疫抑制と、温度的損傷により誘発されるものとの間にはいくつかの類似点がある。火傷後初期のマウスの肺臓中のＴ−Ｊ＋　ｔ、ｙｔｉ＋２−Ｔｓ細胞の存在〔４１〕ならびに、ＵＶ照射および抗原感作後のマウスの肺臓中の同様な細胞の存在〔３２〕は、それらの誘発において同様な機構が関与するという推測を導くであろう。多分、損傷上皮細胞からの可溶性生成物の放出か、これら両者の系において抑制細胞の誘発に関与している。移植生物学の主要な目標点は、外来移植片に対する宿主の応答の、抗原特異的な様式での抑制にある。多分、ここに示したデータに関する最も存意な局面は、ＵＶ−照射ケラ千ノサイト由来の上澄または６８ｋＤａ糖蛋白質を有する類似の調製物を、同種抗原に対する免疫応答の抗原特異的様式での抑制に使用する能力である。従って、この因子を抗原特異的抑制細胞の誘発および外米組織移植片の拒絶反応の抑制のために使用することも可能てあろう。従って、ＵＶ−照射ケラチノサイト由来の抑制サイトカイン類の注射は、同種移植片拒絶反応の特異的抑制を誘発する新規な方法を提供する。以下の文献は、本文中に引用したことから参考として関連個所に取入れる。ｒａｄｉａｔｉｏｎ、　Ｘｍ１ｕｒＩｏＬ、罠＠Ｖ、８０！１０２−１１７．　１９８４゜２、）Ｃｒｉｐｋ＠絋ａｍ−：鉱　Ｔｈ　’ｖｉｖｏ　−圓ｅ　ｒａｓｐｏｎｓ＊ｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅｄｕｒｉｎｇｃａｒｃｉｎｏｇ＊ｎｍ１ｓ、　ＪＮｃ工　５９：１２２フ−１２３０，１９７７３、Ｎ０ＯｎａＪｔ絋ＩＬＬ− ！５ｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｎｔａｃｔｈｙｐａｒ録正１ｔｉｖｉｔｙ　ｂｙ　ＩＪＶ　ｒａｄｉ、ａｔｉｏｎ：　Ａｎ　ｅｑ＊ｒｉｍ＊ｎｔａｌ−＠１．　Ｓｐｒｉｎｇａｒ　Ｓ＠Ｊｌ１１ｓ−Ｘｗａｘａｎｏｐａｔ）ｎ、４！２９：ｌ−２３０４，１９１１１１ｍ　ａｒ＠＠ｒｍ＊　Ｓ工　ａλ＋：　Ｚｌｐａｉｒｍ・ｎｔ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒａｓａｎｔｉｎｇ　ｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ＵＶ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ、　ｐｒｏｃ−Ｎａｔｌ、　Ａｃａ、　Ｓｃｉ　ｏｓａｔ７６：６５９１−６５１！１５．　１９７９５、　υ１ｌｒｉｃｈ　５Ｅ、　Ａｚｉｚｉ　Ｅ、　Ｋｒ１ｐｋ＊　ＭＬ＝　５ｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｒ　ｔｈｅＩｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　雇ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｍ１ｃｅ　ｂｙ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ鯨芦ｓｕｘ＊　ｔｏ　Ｗ　ｒａｄ４．ａｔｉｏｎ−Ｐｈｏｔｏｃｈａｍ、Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ。４３＠６３コー６３１１．　１９１６６＋　υ１ｌｒｉｃｈ　５Ｅ：　５ｕｐｐｒ＠５ｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　１ｍ１ｕｎｅ　ｒ・卵卯紳ｔ。ａｌｌｏｇ＊ｎｅｉａ　ｈｉｓｔ韓■ａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ａｎｔｉｇ蛙感ｂｙ　ａａ　ｓｉｎｇｌ・＠ｘｐｏＩＩＩｕ！″・　ｔｏ　ＩＪＶ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ、　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　４２：２ｇフー２９１．１９８６？−Ｍｏｉ＠ｎｃ！ｉｊｋ　Ａ、　ｖａｎ　Ｇｕｒｐ　ＲＪＩ（Ｍ、　Ｄｏｎｓ會１ａａｒ工Ｇ−Ｂａｎｎｅｒ　Ｒ１Ｚ膿ｕｎｏ工ｏｇｙ、　６２：２９９−３０５．　１９１１７ｓ、　Ｓｗａｘｔｚ　ＲＰ：　Ｒｏｌ＠ｏｆ　ＵＶＢ−１ｎｄｕｃｅｄ　ｓａｒｕｍ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎｇｕｐｐｒａｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｔａｃｔ　ｈｙｐａｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｍ１ｃｔ−Ｊ− 工ｎｖ＠ｓｔ＋　Ｄｅｎｍａｔｏｌ、８３＝３０５−：１０７．　１９８４９、Ｈａｒｒｉｏｔｔ−９ｍｉ廿ｒ　ＴＧ、　Ｈａｌｌｉｄａｙ　ＷＪ：　Ｃｌｒｅｕｌａｔｉｎｇ５フ：２０７−２１１．　１９１１６＋ｉｔｓ　ｒｏｌａ　ｉｎ　ｐｈｏｔｏｈｏ＋ｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｊ、　Ｅｘｐ−Ｍａｄ、　１５７：８４ −９８゜１１　Ｒｏｓｓ　ＪＡ、　Ｆｌｏｗｉａ　ＳＥＮ、　１ａｒｖａｅ　Ｌ　Ｍａｉｎｇａｙ　Ｊ、　Ｓｂｘｐｍｏｎ　ＴＪ：ｍ１ｃｅ−Ｊ−工ｎｖａｓｔ 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Δうτ貰Ｔ→日（ＤＴＨＩ０　リ　２０　３０　４０ＵＶＢ（ｋＪ／ｍ２）係÷日ｆｌ＆、ｔ）ｌ−６６１三ＩＣｙ、１１ζ）補正書の翻訳文提出書　く特許娼１８４条ノ８）

Claims

【特許請求の範囲】

１．（ａ）哺乳動物にあらかじめ定めた波長範囲を有するＵＶ−照射の所定量を与え、前記量が選択的免疫抑制について有効であり；および、（ｂ）次いで前記哺乳動物を特定の同種抗原で感作すること、を含んでなる特定同種抗原に対する哺乳動物の選択的免疫応答抑制方法。
２．前記同種抗原に対してＤＴＨが選択的に抑制される請求項１に記載の方法。
３．前記同種抗原に対してＣＨＳが選択的に抑制される請求項１に記載の方法。
４．選択的に抑制される免疫応答が、同種移植片の拒絶における原因因子である請求項１に記載の方法。
５．前記投与工程が、全身皮上ＵＶ−照射である請求項１に記載の方法。
６．前記ＵＶ−照射が、約３２０ｎｍ未満の所定の波長を有するＵＶ−照射である請求項５に記載の方法。
７．前記ＵＶ−照射が、約２８０ｎｍ〜約３２０ｎｍの所定波長範囲を有するＵＶＢ−照射である請求項５に記載の方法。
８．前記ＵＶ−照射の量が、約１０ｋＪ／ｍ２〜約１００ｋＪ／ｍ２である請求項７に記載の方法。
９．前記ＵＶ−照射の量が、約３０ｋＪ／ｍ２〜約６０ｋＪ／ｍ２である請求項７に記載の方法。
１０．前記感作工程が、前記特定同種抗原の非経口投与を含む請求項１に記載の方法。
１１．該非経口投与が、脈管内、腹腔内、筋肉内、または皮下的注射である請求項１０に記載の方法。
１２．前記感作工程が、前記特定同種抗原の皮下注射を含む請求項１に記載の方法。
１３．前記感作工程が、同種抗原試料の皮上適用を含む請求項１に記載の方法。
１４．（ａ）哺乳動物にあらかじめ定めた約４０００未満の波長を有するＵＶ− 照射の所定量を与え、前記量が免疫抑制的に有効であり；および、（ｂ）次いで前記哺乳動物を特定の同種抗原で感作すること、を含んでなる特定同種抗原に対する哺乳動物のＣＨＳ応答の選択的抑制方法。
１５．前記投与工程が、全身皮上ＵＶＡ−照射である請求項１４に記載の方法。
１６．前記ＵＶ−照射の量が、約１０ｋＪ／ｍ２〜約１００ｋＪ／ｍ２である請求項１５に記載の方法。
１７．前記ＵＶ−照射の量が、約４０ｋＪ／ｍ２〜約６０ｋＪ／ｍ２である請求項１５に記載の方法。
１８．前記感作工程が、特定同種抗原の非経口投与を含む請求項１４に記載の方法。
１９．該非経口投与が、脈管内、腹腔内、筋肉内または皮下的注射による請求項１８に記載の方法。
２０．前記感作工程が、特定同種抗原の皮下注射を含む請求項１４に記載の方法。
２１．前記感作工程が、特定同種抗原を保有する組織試料の皮上適用を含む請求項１４に記載の方法。
２２．（ａ）哺乳動物にあらかじめ定めた約２８０〜約３２０ｎｍの波長を有するＵＶＢ−照射の有効量を投与し；および（ｂ）次いで前記哺乳動物を特定同種抗原で感作すること、を含んでなる特定同種抗原に対する哺乳動物のＤＴＨ応答の選択的抑制方法。
２３．前記投与が、全身上皮的ＵＶＢ−照射である請求項２２に記載の方法。
２４．前記ＵＶＢ−照射の量が、約１０ｋｊ／ｍ２〜約１００ｋＪ／ｍ２である請求項２３に記載の方法。
２５．前記ＵＶＢ−照射の量が、約４０ｋＪ／ｍ２〜約６０ｋＪ／ｍ２である請求項２３に記載の方法。
２６．前記感作工程が、前記特定同種抗原の非経口的注射を含む請求項２２に記載の方法。
２７．前記注射が、脈管内、腹腔内、筋肉内、または皮下的である請求項２６に記載の方法。
２８．前記感作工程が、前記特定同種抗原の皮下的注射を含む請求項２２に記載の方法。
２９．前記感作工程が、前記特定同種抗原を保有する試料の皮上適用を含む請求項２２に記載の方法。
３０．（ａ）哺乳動物に有効量のＵＶＢ−照射を投与し；および、（ｂ）次いで前記哺乳動物を特定同種抗原で感作し、前記同種抗原が同種移植片に対して同系であること、を含んでなる哺乳動物における同種移植片に対する特異的免疫耐性の誘発方法。
３１．前記同種移植片に対するＤＴＨが選択的に抑制される請求項３０に記載の方法。
３２．前記免疫耐性が、同種移植片拒絶の発症を阻止する請求項３０に記載の方法。
３３．前記有効量のＵＶＢ−照射が、約１０ｋＪ／ｍ２〜約１００ｋＪ／ｍ２であり、かつ皮上照射により投与される請求項３０に記載の方法。
３４．前記感作工程が、前記特定同種抗原の注射を含む請求項３０に記載の方法。
３５．前記注射が、静脈内、腹腔内、筋肉内または皮下的である請求項３４に記載の方法。
３６．前記感作工程が、前記特定同種抗原の皮下注射を含む請求項３０に記載の方法。
３７．ＵＶＢ−照射哺乳動物細胞から得られ、哺乳動物においてＤＴＨを選択的に抑制し、かつＣＨＳに影響せず、熱または蛋白質分解的消化により不活性化され、透析不能である免疫抑制因子。
３８．ＵＶＡ−照射哺乳動物細胞から得られ、哺乳動物においてＣＨＳを選択的に抑制し、かつＤＴＨに影響しない免疫抑制因子。
３９．約１０Ｊ／ｍ２〜約１００Ｊ／ｍ２のＵＶＢ−照射を受けた哺乳動物細胞から得られる調製物であって、哺乳動物において同種移植片の宿主拒絶の防止に使用可能な調製物。
４０．（ａ）免疫抑制因子産生可能な哺乳動物細胞の細胞培養物に、所定波長を有するＵＶ−照射のある量を照射し、該量は、ＵＶ−照射細胞が免疫抑制因子を産生するに充分な量であり；（ｂ）前記ＵＶ−照射細胞培養物から免疫抑制因子を抽出し；（ｃ）前記免疫抑制因子の有効量を哺乳動物に投与しおよび、（ｄ）次いで前記哺乳動物を特定同種抗原で感作する、ことを含んでなる哺乳動物における特定同種抗原に対する免疫応答の選択的抑制方法。
４１．前記哺乳動物細胞培養物が、哺乳動物上皮細胞培養物である請求項４０に記載の方法。
４２．前記哺乳動物細胞培養物が、単一の体性細胞型の哺乳動物細胞培養物である請求項４０に記載の方法。
４３．前記照射工程が、約２８０ｎｍ〜約３２０ｎｍの所定波長を有するＵＶＢ −照射に関連する請求項４０に記載の方法。
４４．前記照射工程が、約３２０ｎｍ〜約４００ｎｍの所定波長を有するＵＶＡ −照射に関連する請求項４０に記載の方法。
４５．該免疫抑制因子が、哺乳動物においてＤＴＨ応答を選択的に抑制する請求項４３に記載の方法。
４６．該免疫抑制因子が、哺乳動物においてＣＨＳ応答を選択的に抑制する請求項４４に記載の方法。
４７．前記照射細胞培養物由来の細胞を、工程（ａ）の後、ただちに非毒性栄養培地中に懸濁する請求項４０に記載の方法。
４８．工程（ｂ）が、非毒性栄養培地からの細胞の分離を含み、ここで前記非毒性栄養培地は、免疫抑制因子を含有する請求項４７に記載の方法。
４９．前記照射工程が、約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２のＵＶ−照射量を含む請求項４３または４４に記載の方法。
５０．工程（ｄ）が、前記特定同種抗原の非経口投与を含む請求項４０に記載の方法。
５１．該非経口投与が、静脈内、腹腔内、皮下、または筋肉内的注射である請求項５０に記載の方法。
５２．工程（ｄ）が、前記特定同種抗原の皮下注射を含む請求項４０に記載の方法。
５３．工程（ｃ）が、前記免疫抑制因子の前記哺乳動物に対する非経口投与を含む請求項４０に記載の方法。
５４．非経口投与が、脈管内、腹腔内、皮下、または筋肉内的注射である請求項５３に記載の方法。
５５．工程（ｃ）が、静脈内注射を含む請求項４０に記載の方法。
５６．（ａ）免疫抑制因子産生可能な哺乳動物細胞の細胞培養物に、照射細胞が免疫抑制因子を産生するに充分な量のＵＶＢ−照射を行ない；（ｂ）前記照射細胞により産生された免疫抑制因子を抽出し；（ｃ）免疫抑制因子の有効量を哺乳動物に投与し；および、（ｄ）次いで該哺乳動物を特定同種抗原で感作する、ことを含んでなる哺乳動物における特定同種抗原に対するＤＴＨ応答の選択的抑制方法。
５７．前記細胞が、哺乳動物の上皮細胞である請求項５６に記載の方法。
５８．前記細胞が、単一細胞型の哺乳動物体性細胞である請求項５６に記載の方法。
５９．前記照射工程が、約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２のＵＶＢ−照射量を含む請求項５６に記載の方法。
６０．照射細胞が、工程（ａ）の後ただちに非毒性栄養培地に懸濁される請求項５６に記載の方法。
６１．免疫抑制因子の抽出が、照射細胞の該非毒性栄養培地からの分離を含み、ここにおいて前記非毒性栄養培地が前記免疫抑制因子を含有する請求項６０に記載の方法。
６２．該感作工程が、特定同種抗原の非経口投与を含んでなる請求項５６に記載の方法。
６３．非経口投与が、脈管内、腹腔内、筋肉内、または皮下的注射を含んでなる請求項６２に記載の方法。
６４．該感作工程が、特定抗原の皮下的注射を含んでなる請求項５６に記載の方法。
６５．前記投与工程が、免疫抑制因子の非経口投与を含んでなる請求項５６に記載の方法。
６６．前記非経口投与が、脈管内、腹腔内、皮下的または筋肉内注射を含む請求項６５に記載の方法。
６７．前記投与が、静脈内注射を含んでなる請求項５６に記載の方法。
６８．（ａ）免疫抑制因子産生可能な哺乳動物細胞の細胞培養物に、照射細胞が免疫抑制因子を産生するに充分な量のＵＶＡ−照射を行ない；（ｂ）該照射細胞培養物から免疫抑制因子を抽出し；（ｃ）免疫抑制因子の有効量を哺乳動物に投与し；および、（ｄ）次いで該哺乳動物を特定同種抗原で感作することを含んでなる哺乳動物における特定同種抗原に対するＣＨＳ応答の選択的抑制方法。
６９．前記照射工程が、哺乳動物上皮細胞培養物を含んでなる請求項６８に記載の方法。
７０．前記照射工程が、単一細胞型の哺乳動物体性細胞培養物を含んでなる請求項６８に記載の方法。
７１．前記照射工程が、約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２のＵＶＡ−照射量を含む請求項６８に記載の方法。
７２．該照射細胞培養物からの細胞が、工程（ａ）の後にただちに非毒性栄養培地中に懸濁される請求項６８に記載の方法。
７３．前記抽出工程が、照射細胞の非毒性栄養培地からの分離を含み、該非毒性栄養培地が免疫学的抑制因子を含有する請求項７２に記載の方法。
７４．前記感作工程が、特定同種抗原の非経口投与を含む請求項６８に記載の方法。
７５．非経口投与が、脈管内、腹腔内、筋肉内または皮下的注射を含む請求項７４に記載の方法。
７６．前記感作工程が、特定同種抗原の皮下注射を含む請求項６８に記載の方法。
７７．前記投与工程が、免疫抑制因子の非経口投与を含む請求項６８に記載の方法。
７８．非経口投与が、脈管内、腹腔内、皮下的または筋肉内的注射を含む請求項７７に記載の方法。
７９．前記投与工程が、免疫抑制因子の静脈注射を含む請求項６８に記載の方法。
８０．哺乳動物において免疫応答を選択的に抑制する免疫抑制因子の製造方法であって、免疫抑制因子産生可能な複数の哺乳動物細胞に、ＵＶ−照射細胞が免疫抑制因子の産生可能となる充分量の所定波長を有するＵＶ−照射を得ない；および前記免疫抑制因子を抽出する、ことを含んでなる製造方法。
８１．前記哺乳動物細胞が、インビトロにおいて照射を受ける請求項８０に記載の方法。
８２．該哺乳動物細胞が、上皮細胞である請求項８０に記載の方法。
８３．ＵＶ−照射量が、約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２である請求項８１に記載の方法。
８４．ＵＶ−照射量が、約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２である請求項８２に記載の方法。
８５．ＵＶ−照射量が、約３０ｋＪ／ｍ２〜約６０ｋＪ／ｍ２である請求項８２に記載の方法。
８６．ＵＶ−照射が、ＵＶＢ−照射である請求項８０に記載の方法。
８７．ＵＶ−照射が、ＵＶＡ−照射である請求項８０に記載の方法。
８８．哺乳動物細胞が、インビトロにおいて約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２の量をもってＵＶＢ−照射を受ける請求項８０に記載の方法。
８９．哺乳動物細胞が、インビトロにおいて約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２の量をもってＵＶＡ−照射を受ける請求項８０に記載の方法。
９０．哺乳動物においてＤＴＨ応答を選択的に抑制する免疫抑制因子の製造方法であって、免疫抑制因子産生可能な哺乳動物細胞の細胞培養物に約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２のＵＶＢ−照射を行なって前記細胞による免疫抑制因子の産生を誘発し；および、該免疫抑制因子を抽出する、ことを含んでなる製造方法。
９１．哺乳動物においてＣＨＳ応答を選択的に抑制する免疫抑制因子の製造方法であって、免疫抑制因子産生可能な哺乳動物細胞の細胞培養物に約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２のＵＶＡ−照射を行なって前記細胞による免疫抑制因子の産生を誘発し；および該免疫抑制因子を抽出する、ことを含んでなる製造方法。
９２．哺乳動物におけるＧＶＨＤの発病を低減する方法であって、（ａ）期待される骨髄細胞供与体に、約２８０〜約３２０ｎｍの所定波長を有するＵＶＢ−照射の有効量を投与し；（ｂ）次いで前記期待される供与体を、期待される骨髄細胞受容体の同種抗原により感作させ；および（ｃ）骨髄細胞を前記期待される供与体から期待される骨髄細胞受容体に移植する、ことを含んでなる方法。
９３．前記投与工程が、全身の上皮ＵＶＢ−照射を含む請求項９２に記載の方法。
９４．投与される有効量が、約１０ｋＪ／ｍ２〜約１００ｋＪ／／ｍ２である請求項９３に記載の方法。
９５．投与される有効量が、約４０ｋＪ／ｍ２〜約６０ＫＪ／ｍ２である請求項９３に記載の方法。
９６．前記感作工程が、該同種抗原の非経口投与を含む請求項９２に記載の方法。
９７．該非経口投与が、脈管内、腹腔内、筋肉内または皮下的注射である請求項９６に記載の方法。
９８．前記感作工程が、皮下注射である請求項９２に記載の方法。
９９．前記感作工程が、該期待される骨髄受容体の同種抗原を保有する試料の皮上適用である請求項９２に記載の方法。
１００．ＵＶ照射に供された哺乳動物細胞から得られる哺乳動物の免疫応答を抑制し得る糖蛋白質。
１０１．ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて約６８キロダルトンの大きさを有することにより更に定義される請求項１００に記載の糖蛋白質。
１０２．ＵＶ照射がＵＶＢ照射である請求項１００に記載の糖蛋白質。
１０３．コンカナバリンＡ−アガロースアフィニティ担体に結合され、前記担体からアルファＤ−マンノピラノシドにより溶離されることにより更に定義される請求項１００に記載の糖蛋白質。
１０４．免疫応答がＤＴＨである請求項１００に記載の糖蛋白質。
１０５．該哺乳動物細胞がケラチノサイトである請求項１００に記載の糖蛋白質。
１０６．該哺乳動物細胞が、上皮細胞である請求項１００に記載の糖蛋白質。
１０７．該哺乳動物細胞が、Ｐａｍ２１２細胞である請求項１００に記載の糖蛋白質。
１０８．哺乳動物における特定同種抗原に対するＤＴＨ応答の選択的抑制方法であって、（ａ）ＵＶＢ−照射量の照射を受けた哺乳動物細胞培養物から免疫抑制糖蛋白質を得；（ｂ）該糖蛋白質の有効量を哺乳動物に投与し；および、（ｃ）次いで該哺乳動物を特定同種抗原で感作させる、ことを含んでなる方法。
１０９．前記哺乳動物細胞が、上皮細胞である請求項１０８に記載の方法。
１１０．前記哺乳動物細胞が、単一細胞型の体性細胞である請求項１０８に記載の方法。
１１１．前記哺乳動物細胞が、ケラチノサイトである請求項１０８に記載の方法。
１１２．前記哺乳動物細胞が、Ｐａｍ２１２細胞である請求項１０８に記載の方法。
１１３．前記照射が、約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２のＵＶＢ−照射量を含む請求項１０８に記載の方法。
１１４．該感作工程が、該特定同種抗原の非経口投与を含んでなる請求項１０８に記載の方法。
１１５．該非経口投与が、脈管内、腹腔内、筋肉内または皮下的注射を含む請求項１１４に記載の方法。
１１６．前記投与工程が、該糖蛋白質の非経口投与を含んでなる請求項１０８に記載の方法。
１１７．哺乳動物における免疫応答を選択的に抑制する免疫抑制糖蛋白質の製造方法であって、免疫抑制糖蛋白質産生可能な哺乳動物細胞に、インビトロにおいて免疫抑制糖蛋白質産生の誘発に充分量のＵＶＢ−照射を行ない；および前記免疫抑制糖蛋白質を抽出する、ことを含んでなる方法。
１１８．該動物細胞が、上皮細胞である請求項１１７に記載の方法。
１１９．該哺乳動物細胞が、ケラチノサイトである請求項１１７に記載の方法。
１２０．該哺乳動物細胞が、Ｐａｍ２１２細胞である請求項１１７に記載の方法。
１２１．ＵＶＢ−照射量が、約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２である請求項１１７に記載の方法。
１２２．ＵＶＢ−照射量が、約３０ｋＪ／ｍ２〜約６０ｋＪ／ｍ２である請求項１１７に記載の方法。
１２３．哺乳動物におけるＤＴＨ応答を選択的に抑制する免疫抑制糖蛋白質の製造方法であって、免疫抑制糖蛋白質産生可能な哺乳動物上皮細胞培養物に、約１０Ｊ／ｍ２〜約２００Ｊ／ｍ２の量のＵＶＢ−照射を行なって免疫抑制糖蛋白質産生を誘発し；および、該免疫抑制糖蛋白質を抽出することを含んでなる方法。