JPH045287A - ビタミンｄ類定量用試薬およびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は振光註発色りあるいは化学発光能を有するｂ能
基な持つ求ジエン試薬とその製法に関する。史にはその
試薬を用いてのｃｐｓ−ジエンな持つ化合物、特にビタ
ミンＤ、ビタミンＡおよびそれらの代謝物の検出、定置
分析法に関する。 −Ｘ （式中、Ｘは螢光発色団またはポテンシャル化学発光基
を示し、Ｙはスペーサーな示す）または−船蔵（ａ） ｘ 活性ビタミンＤ３代謝物の１α、２５−ジヒドロキシビ
タミンＤ、がカルシウム代謝のみならず標的細胞の様々
なものの増殖や分化ｖｈｉｉする多くの機能な持ったス
テロイドホルモンであることは現在よく知られている。 ビタミンＤの生物学的役割を十分理解するために様々な
臨床の場におけるヒト血漿中の主要代謝物の濃度を正確
に知ることは塩蟹なことである。 一般に使用されている競合的結合分析は特異性を欠くの
で、ｉｔな代＆物は２分析に先立って分けられていなげ
ればならない。また、この分析法は正確さに欠ける。ガ
スクロマトグラフィー−寅蓋分析法は劇１」定の操作が
煩雑であるなどの間組がある。 従ってビタミン９代縮物を分析するための正確で特異的
かつ高感度の方法が必歎とされていた。 各式中、Ｘは螢″ｊｔ、発色団筐たはホテンシャル化学
発光基であり、Ｙはスペーサーである。 Ｘの例としては下記式 本発明者らは、ビタミンＤ、ビタミンＡｉたはそれらの
代謝物の共役したトリエンの部分と速く特異的かつ定量
的に反応する新規な、に光もしくは化学発光試薬（Ｉ）
および（ＩＩ）を合成した。 本発明の化合物は下記−船蔵（Ｉ）および（ａ）で示さ
れる。 −Ｘ 二　二 ＼　ｌ ＋Ｌ４　　出 二　田 （式中Ｚは酸の共役塩基を示し； ＲおよびＲ′　は同一でも異なっていてもよ水素原子ま
たはアルキル基を示す） で示されるものが挙げられる。 Ｘの好ｆしい（ハ）としては下記式 である場合が特に好ましい。 一方、Ｙの例とし℃は下記式 ％式％） （式中、−Ａ−は−０−または−Ｎ）Ｉ−を示し。 −Ｂ−は−ＮＨ−−ＣＯＯ−−８０□Ｎ）ｉ−〔式中Ｚ
は前記と同じ意味２示す〕 で示されるものが挙げられる。式 選ばれた一員を示し、ｔは１から５までの整数を示し１
ｍは０から５までの整数を示し、ｎは０または１のいず
れかを示す〕 で示されるものが挙げられる。但しＹのそれぞれの式の
左端は一般蔵ｉｌ＋または（Ｉｌｌの塩の音素原子と。 右端はＸと結合する。 Ｙの好ましい例としては下記式 ％式％） （但しｎは前記と同じ意味を示す）で示されるものか卆
けられる。式 Ａ）　　）リアゾリジンシント／と発色団シントンとの
カップリングによる方法。 である場合か特に好ましい。 本発明の化合物の好ましい例としては。 式 ％式％（） セミカルバジド体を最後に閉環する方法。 で表されるものが挙げられる。 本発明σ）−船蔵（Ｉ）およびｔｉｌｌで示される化合
物は、以下の徐にして合成される。 （式中。 （Ｖ釦 ＸおよびＹは前記と同じ意味な示し。 Ｑはヒドロキシメチル基またはアミノ基ケ示し。 ＷはＣ□−０３アルキル基會示す〕 Ａ）法として一般式（Ｖ）と（νｌＩ）から

【１】を得
る反応または一般式（ｖ１〕とＣＶＤ）から（ｉｔ、ｌ
を傅る反応は。 酸クロリド体Ｃｖｕ）’ｒ：ｓ水ベンセン等の溶媒に鹸
解し、ＣＶ）　ｔ　ｃｉｓ　＜Ｖｌ）　ノ１ｓｔ水Ｄ　
Ｍ　Ｆ　＃Ｈｗ加工、　、ＩＩ流することによって行う
。 Ｂ〕法として一般式（ｖｌ）から（ｌｌ）を侍る反応は
。 無水炭酸カリウム等の共存下（■を無水、エタノール等
の溶媒に懸濁し、１に流することによって行う。 また、Ｖ：、薬Ｉｌ＋が不安定な場合、下記反応式のよ
うＫ１１ｌｌより用時調製する。 −Ｘ −Ｘ （［１）（Ｉ） 一般式ｔｉｌｌから１１１を得る反応は、Ｐｂ（ＯＡｃ
）、。 ＰｈＩ（ＯＡｃ）２　等の緩和な酸化剤で酸化すること
により行う。 作用 本発明の一般式（Ｉ）および（ＩＩ）で示される化合物
ハ、ビタミンＤ、ビタミンＡおよびそれらの代紺物のｃ
ｉｓ−ジエンの部分な特異的に検知する螢光の強い求ジ
エン試薬である。 求ジエングループとして選ばれた４−！ｌ換−１゜２、
４−　）リアゾリン−３，５−ジオンは反応性が高く、
緩和な条件下で少量の基質と定置的に反応する。また対
称であるので１穐の幾何異性体しかできないという利点
な持つ。 螢光発色団またはポテンシャル化学発光基として選ばれ
たＸで示される基は、高い螢光効率を持っており、また
これらはドリアシリジン環の酸化条件下でも安定である
。 以下に本発明な製造例及び実施例によりて更に詳しく説
明するが２本発明はこれらの製造例及び実施例によって
何ら限定されない。 融点は、微量融点側定器（柳本製作所製）にて測定し、
未補正、ＩＲスペクトルは１日本分光ＦＴ／ＩＲ−７Ｑ
Ｑ［］型に℃泗」定。ＭＳスペクトルは。 日本電子ＪＭＳ−Ｄ３００型にて電子ｇｉＩ撃法（ＥＩ
）あるいは１日立Ｍ−２０００型にてＳＩＭＳ法にて測
定ｏ’Ｈ−ＮＭＦＩスペクトルは１日本電子ＧＸ−２７
０型にて御、定し、　　ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｓｌｌ
ａｎｅ　　ｋ内す標準として、化学シフトをδ値で示し
た。Ｉｆ＋定溶媒は、各化合物ごとに記した。なおり２
０中での測定には、５−（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｙ
ｌ　）　−ｐｒｏｐｉｏｎｉｃａｃｉｄ−ｄ４ｓｏｄｉ
ｕｍ　５ａｌｔ　９を内部標準に用いた。 ＮＭＲの記載は、次σ）略号ニーＣッだ。ｓ＝＝ｓｉｎ
ｇｌｅｔ　：ｄ　＝　ｃｌｏｕｂｌｅｔ　；　ｔ　＝　
ｔｒｉｐｌｅｔ　；　ｑ　＝　ｑｕａｒｔｅｔ　；ｍ　
＝　ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ　；　ａｒｏｍ　＝　ａｒｏｍ
ａｔｉｃ　；　ｂｒ　＝ｂｒｏａｄ；　Ｂｉｇ　＝　ｓ
ｉｇｎａｌ。ＴＬＣ（薄層りＯｆｆトゲラフイー）は、
Ｋ１８Ｓｅｌｌ　ｇｅｌ　ＧＦ２５４（ＭｅｒＣｋ社製
）を使用。カラムクロマトグラフィーは、特記しない限
り、シリカゲルは、Ｍｅｒｃｋ社製Ｋｉｅｓｅｌ　ｇｅ
ｌ　６０（３５−７０ｍｅｓｈ）　ｋ使用。反応は、ル
ーティンにアルゴン気流下で行なった。 エテル４−インシアナトベンゾエイト（５，０５’。 ０．０２６　ｍｏｔ）　ノ無水ベンセンｌ’ｇ（２６０
ｓｕＪ中に、室温撹拌下カルバジン酸エテル（３，ｌ’
。 ０、０３３　ｍｏｌを加えた後１反応混合物を２時間加
熱還流した。室温に戻した後、１ｔ′ｒ出結晶を吸引ｒ
取し、粗セミカルバジ）１（７，２５）、収率９３．９
％）を得た。本島なＥｔＯ）ｉより阿結晶し。 無色鱗片状晶（６，８０Ｐ）ｆｌを得た。 化合物１： ｍｐ　１９４−１９５℃ ＭＳ　　ｍ／ｚＮ：２９５（Ｍ”、６）、２５０（７）
、２０４１５１゜１６７６ＣＣ＝Ｄ） ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣ６３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．
２８　　（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、Ｃ：Ｈ２ＣＨ３
）１．３８　　（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、ＣＨ２Ｃ
Ｈ３）４．１９　　（２Ｍ　、　Ｑ　、　Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ、０Ｈ２０Ｈ３）４．３３　　（２８，ｑ、Ｊ＝７．
３）１ｚ、ＣＨ２０Ｈ３）７．５２及び７．９２ （４Ｈ、ＡＡ’ＢＢ’、Ｊ：８．６Ｈｚ、ａｒｏｍＨ）
７．７０　　（ＩＨ，ｂｒ、ｓｉｇ、　ＮＨ）７．８０
　　（ＩＨ，ｂｒ、ｓｉｇ、　ＮＨ）８．５７　　（Ｉ
Ｈ，ｂｒ、ｓｉｇ、ＮＨ）元票分析二計算値 （Ｃ；１３Ｈ１７Ｎ、０．）　：　Ｃ，５２，８７；　
Ｈ，５，ｓＯ；　Ｎ、１４．２３測定値　　　：　Ｃ，
５２，７１；　Ｈ，５，７２；　Ｎ、１４．１４（製造
例２ノ セミカルバジド１　（Ｉ，１８１Ｐ　、　４ｍｍｏｚ）
　ｌＩｔｍ水ＥｔＯ）ｉ　（５Ｑａ／）に浴解し、粉砕
した無水縦機カリウム（５５６■、　４ｍｍｊ）ｔ）を
加えた後１反応液を５時間加熱還流した。減圧下ＥｔＯ
）ｉｆｔｍ去し。 残１１ＥＫ水冷水を加え、さらに希塩酸ケ用い℃水層１
ｋｉ！１２註とした。水層は、　ＡＣＯＥｔ　（３Ｘ　
６０鹸）にて抽出し、　Ａｃｏｇｔ層は、飽和食頃水に
て洗浄。 無水硫酸マグネシウムにて乾燥し、＃媒留去した。 結晶ａ残ｆｆｉ（９０１ａｇ）は、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（４５））にて精製し、１０％ＭｅＯ
Ｈ含有Ａｃ０Ｅｔ　＃山部よりトライアゾリジン２（８
０８４’、収率８１１％〕な結晶状に得。 Ａｃ　ＯＥｔより鼻結晶し無色針状晶ケ得た。 化合物２ ＩＪ）２０６〜２０７℃ ＭＳ　　ｍ／Ｚ（％）：２４９（Ｍ”、３５）、２２１
（３１）。 ２（７４（Ｉ００）、１９１（Ｉ３）。 ＩＨ−ＮＭＲ（ＣＤＣ；ｔ、　＋ＤＭＳＯ−ｄ、）δ：
１．４０　　（３Ｈ，ｔ、Ｊ　＝７．３Ｈｚ、０Ｈ２０
Ｈ，）４．３７　　（２Ｈ，Ｑ、Ｊ＝７．３）ｉｚ、Ｃ
Ｈ２０Ｈ３）７．７１及び８．１０　　（４Ｈ，ＡＡ’
ＢＢ’　。 Ｊ　＝８．９　Ｈｚ　、　ａｒｏｍ　Ｈ）１０．２９　
　（２Ｍ、ｂｒ、ｓ、２ｘＮＨ）元素分析：１１算値 （Ｃ１ｌＨ１□Ｎ３０４）：Ｃ，５３，０ろ；Ｈ，４，
４５；Ｎ、１６．８６測定ｍ　　　　：Ｃ，５３，００
：Ｈ，４，５１；Ｎ、　１６．９５（製造例３） く方法１〉 エステＡ’＃２Ｃ５５５ｍ９．１４５ｍｍｏｔ）ｆ）無
水Ｔ）ＩＦ（８，５ｊ１７）溶液なドライアイス及び四
塩化Ｒ＊浴を用いて一２０℃に冷却し、本冷却・撹拌溶
液に水嵩化ジインプデルアルミニウム（６４２ｍ／　；
　１　ｍｏｔ／ｌ　）　ｋエン溶液）１に一約２０分間
にわたって酬加した。反応混合液は、更に一２０℃にて
４時間撹拌した後、希塩酸（２ｓｕ、　１９．３ｍｍ０
６の塩化水素な含む〕を加えて酸性にした。減圧下塔ｔ
＆を留去し得られた残虐な２１のシリカケルに吸着し、
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（４０Ｓｆ）に付
しＭｅした。カラムは、１０％ＭｅＯＨ含有ｃＨａｔ３
にて浴出し、臣を含む分画を固陣状（３３７Ｉｖ）に侍
、ＭｅＯＨＫ！すＭＪ＆化させ。 純粋なベンジルアルコール体３（２４０■、収率８’Ｌ
４％〕な無色針状晶として得た。 く方法１）−一スケールの大きい反応に適する一エステ
ル陣２（ｔ５７６１ｔ５．３２ｍｍｏｔ１用いて、方法
ｌと一様に反応・後処理な行なった。 塩酸処理後の生成物を水（６０１１１７）Ｋ懸〜させ。 不溶物な綿栓テ過した。Ｆ液は、水にて充填したＡｍｂ
ｅｒｌｉｔｅ　ＸＡＤ　−２カラＡＣ７００ａ／）Ｋ通
しベンジルアルコール体６な樹脂に吸着させた後。 水（Ｉ５００ａ／）ｔｃてカラムな洗浄した。ＭｅＯＨ
を用い℃吸着し℃いる６を溶出すると、固体状物ｆｉ（
−１１７ｃｌ）が侮られ１本島′Ｉｋ：ＭｅＯＨｚり再
結晶し、ベンジルアルコールに３（７９４〜、収率６０
．６％〕を得た。 化合物６： ｍｐ　＞ａｏｏ℃ ＭＳ　ｍ／Ｚ（％）　：２０７ＣＭ”、　８２）　、　
１７８（Ｉ　ＤＯ）　。 １４８（２２）、ｔ３２Ｎ４）、１２０（２９）、１０
７（４７）、５８（５５）。 Ｂｒ ＩＲνｍａＸ　ｃｓ−”　：　３３４４（ＯＨ）　、　
１６８２（Ｃ＝０）’）１−ＮＭＦＩ（ＤＭＳＯ−ｄ、
）δ：４．５４　　（２Ｈ，Ｓ、０Ｈ２Ｐｈ）７．４０
　　（４Ｈ，Ｓ、ａｒｏｍＨ）１０５Ｂ　　＜２８．Ｓ
、２ｘＮＨ） 元素分析二計算値 （Ｇ、Ｈ，Ｎ、Ｏｊ）　：　Ｃ，５２，１７；Ｈ，４，
３８；Ｎ、　２０．２８＃ｊ定値　　：　Ｃ，５１，９
９；Ｈ，４４４；Ｎ、２０．２５インシアンｅｐ−二ト
ロアｚニル（５，０？。 ３０．５　ｍｍｏｔ　）　、カルバジン飯エテル（３，
９１−。 ３　Ｑ、　５　ｍｍ０ｔ）及び無水ペンゼ：／＜　１３
０Ｗｉｔ）ノ混合液な１５時間、加熱１１流した。析出
した淡黄色粗結晶な吸引Ｐ取し、べｙ七ンにてよく洗浄
し。 セミカルバジド４（７，８５Ｎ、収率９７．６％）な得
た。本島ｙ　ＭｅＯＨよりＰ＋結晶し、無色麟片状晶を
得た。 化合物４： Ｊ）２１６〜２１７℃　（Ｌｉ　ｔ、　ｍｐ２１　Ｂ−
０〜２１８．５℃）ＭＳ　　ｍ／Ｚ（％）：２６Ｂ（Ｍ
”、０．５）、２２２（３）。 １５５３及び１３３８（ＮＯ２） ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−（Ｉ，）δ：ｔ２１　　（３
Ｈ，ｔ、Ｊ　〜６．９ｈｚ、ＣＨ２Ｃ；Ｈ３）４．０８
　　（２Ｈ，Ｑ、Ｊ＝＝６．９Ｈｚ、ＣＨ２０Ｈ３）７
．７３　　（２Ｈ，ｂｒ、ｓｉｇ、ａｒｏｍＨ）８．１
５　　（２Ｈ，ａｒｏｍＨ） ８．３６．９−０２及び９４８ Ｃ！々　ＩＨ，ｂｒ、ｓ、３ＸＮ）ｌ）（文献）　Ｆ、
Ａｒｎａｔ、Ｌ、Ｌｏｅｗｅ、ａｎｄ　Ａ、Ｔａｒｌａ
ｎ−ＡｋＯｎ。 Ｒｅｖ、Ｆａｃ、ＳＣｉ、Ｆｏｒｅｓｔ　Ｕｎｉｖ、ｌ
５ｔａｎｂｕｌ。 奥、１２７（Ｉ９４８）； ｃｈｅｍ、Ａｂｓｔｒ、、４２．８１９０（Ｉ９４Ｂ）
（製造例５） 粉砕した無水炭酸カリウム（２，５Ｃ１，１５，２ｍｍ
ｏｔ　）及び無水、ＥｔＯＨ（２００ａｔ）　９）ｓ〜
ｇ’ｔ　５時間加熱Ｒ流した。反応混合液は、黄色から
晰赤色へと変化した。諷圧下ＥｔＯＨを苗去した敏、残
虐に氷冷水（５００ｄ）？ｒ加え、２Ｎ　ＨＧｔ　ｖｃ
−ｃ＆註とした。本水層は、Ａｃ０Ｋｔ、（３ｘｌ　５
０献）にて抽出、芒硝にて乾燥し、　ＡＣＯＥｔ　Ｉｋ
餉去すると。 粗結晶酸生成＠（６，７ＣＪ１ｆ）を得、このものゲア
七トンよりＰ＋結晶すると、無色針状晶の５（２，７３
ｔ、収率８０．７％）が得られた。 化合物５： ｍｐ２６７−２６９℃（Ｌｉｔ、ｍｐ２７０．０−２７
１５℃）セミカルバジド４（４，０８？、１５．２ｍｍ
ｏｔ）。 １５２８及び１３４８（Ｎｏ□） ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δニ ア、９０及び８．３４　（４Ｈ、ＡＡ’　ＢＥｙ、　Ｊ
＝９．２Ｈ２゜ａｒｏｍ　Ｈ） １０．７８　　（２Ｈ１ｂｒ、ｓ、２ｘｌ）（文献）　
Ｇ、Ｚｉｎｎｅｒ　ａｎｄ　Ｗ、Ｄａｕｃｋｅｒ、Ａｒ
ｃｈ、Ｐｈａｒｍ、　。 ２９４．３７０（Ｉ９６１） （劣ｉ雪ｆｌ１６） 化合物６： ｍｐ　＞ｓｏｏ℃ ＭＳ　　ｍ／Ｚ（％）：１９２（Ｍ”、９９）、１５４
（Ｉ００）。 ＮＯ□　　　　　　　　　ＮＨ２ 二トロ１５　（７８７’％’　、　＆５４　ｍｍｏｚ　
）　ｃｂＥｔＤＨ溶液（６０ｙ）　ｉ　ＰｔＯ□（８０
ｍｇ）　存在下、　常圧・富瀉にて水素気流中接触還元
を行なった。水ｔ８開始約４０〜５０分後１反応容器内
に結晶が析出し始めた。２時間後に理論水素消費量（２
４０ＩＥ／）Ｋｉ！Ｉしたので反応を終了した。析出結
晶は。 ＡＣＯＥｔ及びｇｔｏＨを用いて溶解させたｆｋ、セラ
イトな通して吸引濾過した。Ｆ液な減圧下溶媒留去する
と粗アミノ体６（７２０■、収率定量的）な結晶状に得
た。本島は、　ＥｔＯＨ−ＡＣＯＥｔ（Ｉ：　１；　Ｖ
／Ｖ　）にて再結晶すると無色針状晶

【与えた。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＋５：５．２１　　（
２Ｈ１ｂｒ、ｓ、ＮＨ２）６．６０及び６．９７　　（
４Ｈ１ＡＡ’ＢＢ’　。 Ｊ　＝８．６　Ｈｚ　、ａｒｏｍ　Ｈ）１０．１４　　
（２Ｈ，ｂｒ、ｓ、２ｘＮＨ）（Ｉ！！造例７） Ｃ，ｔＡＡＮ＝Ｑ＝Ｑ　−＋０１ＡＡＮＨ−ン引ＨＮＨ
■ＯＥｔ３−クロロプロピルイソサイアネイト（５，Ｃ
１゜４’ｔ、ｓｍｍｏｚ）の無水ベンゼン溶液（Ｉ２０
ａ／）にカルバジン酸エチル（５，２ＳＦ、５α２　ｍ
ｍｏｚ　）な加え、加熱還流１時間行なった。減圧下溶
媒な留去すると粗生成物（９，２５？　）が結晶状に得
られ１本品なＡｃＯＥｔ−ｇｔ、ｏ　　より再結晶し、
純品のセミカルバジド７Ｃ１＞５９ｔ）’ｌ得た。ｌｈ
晶母液（２，２４Ｐｌ’シリカゲルカラムクロマトグラ
フ４−　（Ｗａｃｏｇｅｌ　Ｇ−２００、Ｉ　０Ｏｆｆ
）　　にて！１ｌｉＬ。 ２〜５％ＭｅＯＨ含有ｃｓｃｔｐ出部よりさらにＺ（５
１７ａｖ）が得られた。合計収率は、７６．０％であっ
た。 化合物７： ｍｐ　１０７．０−１０８．５℃ ＭＳ　　ｍ／Ｚ（％り：２２５（Ｍ”＋２．０．０８）
、２２３（Ｍ”０．２）、１７８（２）、１８０（０，
７）。 １７２１及び１６４９（Ｃ＝０） ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）δ： ＋２９　　（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、ＯＨ，０Ｈ３
）２．００　　（２Ｈ，ｍ、　　０Ｈ２０Ｈ２０Ｈ，）
＆３９　　（２Ｈ，ｍ、　　　−ＯＨ，ＮＨ−）３．５
９　　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝５，８Ｈｚ、ＣｔＣＨ２−）４
．２１　　（２Ｈ，ｑ、Ｊ＝＝６．９Ｈｚ、ＯＨ，ＯＨ
，）５．６８　　（ＩＨ，ｍ、ＮＨ） ６．７６及び６．８１（各々Ｉ　Ｈ、ｂｒ、ｓ。 ２ＸＮ）ｌ） （Ｉ！！造例８） ｃｚ／ＸＡｓＨ−ｃ−ＮＨｓＨｃｏｏｇｔ　　＋セミカ
ルバジド７　（５，２５６Ｆ　、　２３．５ｍｍｏｚ）
の無水ＤＭＦ＃液（５５Ｎｔ）ＫＮａＮ３（Ｉ８３０Ｐ
。 ２８．２ｍｍｏｚ）ｋ加え、１００℃にて６．５時間。 加熱撹拌した。減圧下ＤＭＦ％：留去し、残渣に水（５
０ａ／）な加えて、ＡｃＯＥｔ（５ｘ７０ｍ／）Ｋて抽
出した。合一したＡｃ０Ｅｔ　＃は、水洗、芒硝乾諏し
、Ｌ！媒留去すれば、粗アジド陣８（５，１３１収率９
４６８％〕が結晶状に得られた。本島なエーテルより貴
結晶し、無色結晶（＆６Ｃ１）な得た。 化合物８： Ｊ）　８１〜８２℃ ＭＳ　ｍ／Ｚ（％）：ｎｏｍ−１８５（２）、１４１　
（３）。 １１６（２）、１０４（Ｉ００） ２１０２（Ｎ３） １７６４及び１６７１　Ｃ０＝０） 〆）１−ＮＭＲ（ＧＤＣ；ｔ３）δ： ｔ２９　　Ｃ３Ｈ０ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、０Ｈ２０Ｈ８
）ｔ８０　　（２Ｈ０ｍ、　　　　０Ｈ２０Ｈ２Ｃ）（
２）３．３５　　（２）１．ＩＩ＋、　　　　　−０Ｈ
２８Ｈ−）３．３７　　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、
Ｎ３０Ｈ２−）４．２１　　（２Ｈ，ｑ、Ｊ＝７．３Ｈ
ｚ、ＣＨ２０Ｈ３）５．６４　　（ＩＨ，ｍ、ＮＨ） と６６及び６．７３　　（各ｔｒ　　ＩＨ，ｂｒ、ｓ。 ２ｘＮＨ） （製造例９） 及び無水ＥｔＯＨ（Ｉ４０ｄ）の懸濁液を加熱還流６時
間行なった。減圧下ＥｔＯＨな留去し、残渣に水（５０
ｗＬｌ）′Ｉｋ加え、２ＮＨＣ；ｔにて＃酸性とした。 こ０）＠陛の水層は、あらかじめ水にて調整しておイタ
Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ　ＸＡＤ−２２うＡ（４５０紅）＆
通した。アラムは水（７５０１１７）にて水洗した後。 ＭｅＯＨにて、生成’ｍ１１Ｋ：樹脂より脱着・溶出さ
せた。 合一したＭｅＯＨ溶出部＊山部留去し、粗結晶生成物を
得、このもの９Ｉ′ＡＯＯＥｔより再結晶し、純品の９
（２，５８Ｐ、収率８９８％）な、無色−片状品として
得た。 化合物９ ｍ９１４０〜１４１℃ ＭＳ　ｍ／ｚ（％）　：ｎｏＭ”　、　１４１　（２０
）　、　１２９（３９）　。 アジド体８（５，６ｃ１．１５．６ｍｍｏｔ）、粉砕し
た無水炭酸カリウム（２，６０？　、　１８．７　ｍｍ
ｏｔ）１６６７（Ｃ＝Ｏ） ’）（−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１．７８　　（
２Ｈ，ｑｕｉｒｌｔｅｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ。 −ＣＨ２Ｃす２０Ｈ２−） ３．３８　　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）３．４３　
　（２Ｈ１ｔ、Ｊ＝６．６Ｈ２）１０．０６　　（２）
１．ｂｒ、ｓ、２ｘＮＨ）（製造例１０〕 アジドｔＫ９　（ｔ７（Ｉｎ　、　９．２３ｍｍｏｚ）
ｖＥｔＯＨ＜１９１Ｌｔ）及ヒＨ，Ｏ（７，５ｍ／）　
Ｋ溶解し、１０％ｐａ−Ｃ：（Ｉ７７ａｇ）存在下常圧
水素接触還元に付した。Ｎｉ！下９６時間反応を行なっ
た後１反応液は。 セライトを通して触Ｓな除去した。Ｆ液は、ｍ圧下溶液
協去すると結晶性残渣（Ｉ，６２９１が得られ、Ｈ，Ｏ
−ＭｅＯＨより再結晶すると遊離アミノ捧１，０（ｔＯ
Ｏ７Ｆ、収率６９０％〕が無色針状晶として得られた。 化合物１０ Ｊ）２２７〜２２９℃ １２９（４７）、１０１　（９５）、５６（９４）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２０）　　δ： ２．００　　（２Ｈ，ｍ、−ＣＨ２にＨ２０Ｈ２−）３
．０３　　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝Ｚ４Ｈｚ、０Ｈ２ＮＨ２）
３．６０　　（２Ｈ、ｔ　、　Ｊ　＝６．６Ｈ２、−Ｃ
Ｈ２−Ｎ　）化合物１０の塩＃Ｉ１．塩 アジド体９　（Ｉ４０Ｉｖ、　０．７６　ｍｍｏｔ）’
ｋＥｔＯ）ｉ（２０ｍ）及び−塩酸（０，４ｄ）に溶解
し、１０％ｐｄ　−Ｃ（３０５ｉ＆）存在下、　３．０
　ｈ／　ｏｎ２水素圧にて中圧接触還元な行なった。冨
温にて４時間後。 反応な終了し、上記と同様に処理すると、１０のＨＣｌ
塩が結晶状に得られ、　ＭｅＯＨ−Ｅｔ２０　！　ｒ）
再結晶し、純品の１［ＩＨＣＡ塩　（９３，Ｏｍｇ）、
　　収率６３．０％〕が無色針状晶として得られた。 ＭＳ　ｍ／ｚ＜９！ｏ）：１５８（Ｍ”、１００）、１
４１（５０）。 ジニトロベラトロール１１　（２，２８Ｆ　、　１０ｍ
ｍｏｔ）ｖｍ温下ＥｔＯＨ（，１００ａ／）に溶解させ
た。−２Ｐω２（０，２３））存在下、室温、常圧水素
気流中接触還元を行なった。撹拌２３６５時間後、水素
の消費が児全に停止（理論水素消費量１．３ｔ）したの
で反応を終了した。還元生成物は１丁はやく音素気流下
、セライトな通し触媒を除き、Ｆ液は、ジエテルケトマ
ロネー）　（Ｉ７４１，１（）ｍｍｏｔ）をあらかじめ
入れておいた反応容器内へ直接導入した。反応混合溶液
は、直ちに加熱還流１時間行なった後、室温にて一晩放
置した。析出した結晶を吸引Ｅ取し。 粗結晶生成物１２（２，１１？、収率７５．８％）を得
。 ＥｔＯＨ−ＯＨ２０ｔ２より再結晶を行ない、黄緑色針
状晶（Ｉ９８Ｐ）を得た。一方、結晶Ｆ液（０，８０ｔ
〕は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（４Ｆｌ）
にて精製し、１％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣ６３溶出部より、
さらに１２（０，３３））を得、合計収率は、８４０％
であった。 化合物１２ ｍｐ２５０−２５１℃（Ｌｉｔ、２５５℃）ＭＳ　　ｍ
／Ｚ（％）：２７８℃Ｍ　　、１００）、２３３（７）
。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＯ１３＋ＣＤ３０Ｄ）δ：１．４８
　　（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝ＺＯ）１２．Ｃ１Ｈ２Ｃ）ｉ３）
３．９９及び４．０６　　（ｅａｃｈ５Ｈ，ｓ、２ｘＯ
ＣＨ３）４．５６　　（２Ｈ，ｑ、Ｊ＝ＺＯＨｚ、ＣＨ
２ＣＨ３）６．９４及び１３８　（各々　ＩＨ，ｓ、ａ
ｒｏｍＨ）（文献）　　ｚ、５ｕａｅｓｉｎｓｋｙ　ａ
ｎｄ　Ａ、Ｖａｌｅｎｔａ。 Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖ、Ｃｈｅ
ｍ、Ｃｏｍｍｕｎ、。 ３６．２５２７（Ｉ９７１） （製造例１２） ＮａＨ（０，２６）　、１１９７ｍｍ０ｔ）な無水ＤＭ
Ｆ（５ｓｌ）に懸濁し１本冷却（０℃）、撹拌懸濁液に
、１２（２，０３５’、７．３１　ｍｍｏｔ）の無水Ｄ
ＭＦ　（６０ａｔ）溶液を約２０分間かけて泗加した。 水素ガスの発生が終わり、溶液の色が黄色から黄褐色に
変化したのを確ｍ＆（約２０−３０分）、ヨウ化メチル
（０，６８ｉｄ、１αｑ７ｍｍｏｔ）を約５分間かけて
滴加した。反応混合溶液は、更に水冷下１５時間撹拌後
、氷冷水（Ｉ５０ＩＬｌ）中に注ぎ、Ｃ；ＨＧｔ３ｉＸ
１５ＱＭｌ）にて抽出した。 ＧＨＧｔ、抽出層は、飽和食塩に℃洗浄、芒硝乾燥。 溶媒留去して、黄色残ａｃ２．７４ｔ）ｋ得た。不生成
物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｉ３０）
）により＊ａし、　ＧＨＧｔ３：　Ｂｅｎｚｅｎｅ（Ｉ
：１；ｖ／ｖ）溶出部より、０−メチル体１４（０，１
０？、収率４．７％］を淡黄色結晶として。 またｃａｃｚ３　溶出部からＮ−メチル体１ノ（Ｉ，７
２Ｆ。 収率８０．４％）な黄色結晶として得た。Ｎ−メチル体
１〜６は、ＥｔＯＨ−Ｅｔ、Ｏより再結晶し、黄色針状
晶を得、１ノは、　ｇｔ、ｏ−ｎ−Ｈｅｘａｎｅ　　Ｊ
：り再結晶し、淡黄色針状晶な得た。 化合物１６ ｍ９１６６〜１６７℃ ＭＳ　ｍ／Ｚ（％）：２９２（Ｍ　　、１００）、２７
８（Ｉ１）。 ２７７（Ｉ２）、２４７（Ｉ６）、２２０（４５）　、
２０５（６）　、１９２（２２）　。 ’ｆ（−ＮＭＲ（ＣＤＣ６３）δ： ｔ４４　　（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、０Ｈ２（Ｊ、
）３．７３　　（３Ｈ，ｓ、Ｎ−０Ｈ３）３．９４及び
４．Ｃ５（ｅａｃｈ　３Ｂ、　６゜２ｘｏｃａ、） ４．５１　　（２Ｈ，Ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＯＨ，０Ｈ
３）６．７１及びｚ５６　　（ｅａｃｈ　ＩＨ，ｓ、ａ
ｒｏｍ）ｉ）化合物１４ ｍｐ１２３〜１２５℃ ＭＳ　　ｍ／Ｚ（％Ｉ）：２９２（Ｍ”、１００）、２
４７（Ｉ６）。 ２２０（４５）、２０５（Ｉ８）、１９０’Ｈ−ＮＭＲ
（Ｃ；ＤＧｔ、）−二 ｔ４６　　（３Ｈ，ｔ、Ｊ＝８．ＱＨｚ、０Ｈ２０Ｈ，
）４．００　、４．０６及び４．１６　　（ｅａｃｈ　
５Ｈ。 Ｓ、３ｘＯＯＨ，） ４．５２　　（２Ｈ，ｑ、Ｊ＝８．０）１ｚ、０Ｈ２０
Ｈ８）７．１０及び７．４１　　（６ａＣｈＩＨ，Ｓ、
＆ｒＯｍＨ）元素分析：計算値 測定ＷＬ： 液（５１〕を加え、冨温下１０分間撹拌した。反応液は
ＩＮＨＣｚを用いて弱ｆＩＲ注とした後、　ｃＨａｔ。 Ｋて、水層の１１元が消失するまで繰り返し抽出した。 合一したＣＨＣ／、層は、水洗、芒硝乾Ｖ＆後、溶媒を
留去し、黄色粗結晶カルボンａｌ１５（Ｑ、３１゜収率
９０．７％ｌ得た。本品は、ＣＨＣＬ３より再結晶な行
ない、黄色針状晶′に得た。 化合物１５ ｍｐ２４１−２４３℃（Ｌｉｔ、ｍ９２２２℃）ＭＳ　
ｍ／Ｚ（％）：２６４（Ｍ”−２７）−２２０（Ｉ００
）−（文献）　　Ｔ、Ｉｗａｔａ、　Ｍ、Ｙａｍａｇｕ
ｃｈｉ、　Ｓ、Ｈａｒａ。 Ｍ、Ｎａｋａｍｕｒａ、ａｎｄ　Ｙ、０ｈｋｕｒａ。 Ｊ、Ｇｈｒｏｍａｔｏｇｒ、、３６２．２０９（Ｉ９８
６）（製造Ｎ１４） υ　　　　　　　　　　や Ｎ−メチル体１３　（Ｄ、４８ｔ　、　ｔ６３ｍｍｏ４
）　ノ１．４−ジオキサン（５ｍ）溶液１１ＣＩ　Ｎ　
ＮａＯＨ水溶ｐルボン酸１５　（４７０ｍ９．１７８ｍ
ｍｏｚ　）及び５ＯＣｚ、（Ｉ０ｍ　）の混合溶液な１
時間加熱還流した。減圧下、過剰の５ＯＣｚ２％：＠ｉ
去し、得られた赤褐色結晶會無水ベンゼンーｎ−ヘキサ
ンより再結晶し、＊赤色針状晶の酸クロリド１６（４３
５Ｉｖ。 収率８６．６％〕を得た。 化合物１６ ｍｐ　２７２−２７５℃（分解）　［Ｌｉｔ、ｍｐ２６
１℃〕ＭＳ　ｍ／Ｚ（％り：２８４（Ｍ”＋２．２１）
、２８２（Ｍ”、６２）。 （文献）　　Ｔ、Ｉｗａｔａ、　Ｍ、Ｙａｍａｇｕｃｈ
ｉ、Ｓ、Ｈａｒａ　ａｎｄＭ、Ｎａｋａｍｕｒａ、Ｊ、
Ｇｈｒｏｒｍｔｏｇｒ、　、、　３６２　。 （実施例１〕 酸クロリド１６Ｃ１１３ｊｌＳ’、　０．４ｍｍ０Ｌ）
　　ｆｋ無水ベンセン（８ＷＬｔ）に溶解し１本攪拌還
流溶液に、ベンジルアルコール陣３（Ｉ２４〜、　０．
６　ｍ　ｍｏｔ）の無水ＤＭＦ’（Ｑ、５１１＋１７）
溶液な一気に加え、１５時間還Ｒを継続した。６の添加
と同時に黄色沈殿物が生成し始めた。反応液ｔＯ℃に冷
却し、析出結晶を吸引枦取し、ベンゼンにて洗浄した。 黄色粗結晶（Ｉ８４〜）は、クロロホルムにて膨潤シた
セファデックスＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー＜
２００ｄ）にてｗｉ製し、５％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｔ３
溶出部より［１３［１０３１１ｇ、収率５６．８％］を
得た。本品は、　ＭｅＯＨ−ＣＨＣ；ｔ３　　より再結
晶し、黄色結晶な得た。 化合物ｉＩＡ ｍｐ　２７９〜２８０℃（分解〕 ＭＳ（＋ＳＩＭＳ）ｍ／ｚ：４５４（Ｍ”＋１）’Ｈ−
ＮＭＲ（ＣＤＣ６３＋ＤＭＳＯ−ｄ、）Ｊ：′５．７５
　　（６Ｈ，ｓ、Ｎ−１ｃ）Ｉ３）３．９２及び４．０
５（各々３Ｈ、ｓ　、　２ｘＯＣＨ，）５．４３　　（
２Ｈ，ｓ、ＯＨ２ｐｈ）６９１及びＺ３６　（各４１　
Ｈ、ｓ　、　ａｒｏｍ　Ｈ）７．５４及び７．５８　　
（４Ｈ，ＡＡＪ３Ｂ’　。 Ｊ＝８．６Ｈｚ、ａｒｏｍＨ。 １０．５６　　（２Ｈ，ｂｒ、ｓ、　　２ＸＮＨ）元素
分析：計′ｌＩ１．値 （Ｃ２□Ｈ１ｇＮ５０．）ＯＨ３０Ｈ：Ｃ，５４，４３
；　ｆ−ｉ、４．７８　；Ｎ、　１４．４５測定値　　
　　：　Ｃ，５４，４２；Ｈ，４，３５；Ｎ、１４．８
３（実施例２） 液％：案温に戻してから、析出している結晶な吸引Ｐ取
すると、ｊｋ色粗結晶生成物［ＩＢ（Ｉ１，３智、収率
５５．１％〕が得られた。本島は、極めてＪｋ１１ｉ！
註のため、以下の反応には、精製することなく使用する
。 化合物１１Ｂ ’Ｈ−ＮＭＦＩ　　（ＤＭＳＯ−ｄ６）−二３．７８　
　（３Ｈ，ｓ、Ｎ−ＯＨ，）６．８９及び４．０３　　
（各々３Ｈ、ｓ　、　２ｘＯｃＨ３）Ｚｌｏ及びＺ４７
　（各々Ｉ　Ｈ、Ｓ　、ＭＯｍ　Ｈ）７．４５及ヒフ、
８５　　（４Ｈ、ＡＡ’　ＢＢ’　。 Ｊ＝９．０ｆ（ｚ、　ａｒｏｍ　Ｈ） １０．４２　　（２Ｈ，８，２ＸＮＨ）（製造例１５〕 酸クロリド１６（２０ｊｌｌｆ、　Ｑ、０７ｍｍｏｚ）
　ノ無水ベンセン（２，５ｉｄ）還流溶液に、　６　（
９１１１１Ｆ　、　０．０４７ｍｍｏｔ）ノ無水ＤＭＦ
（０，１ｄ）溶液な一気に加え１反応混合液は、１時間
、加熱１ｌｉｊｉした。反応ジニトロベラトロール１１
　（０，９１？　、　４　ｍｍｏｔ）をＥｔＯＨ（８０
ｄ）に＃解し、Ｐｔｏ□（８９＃）存在下室温にて常圧
水素気流中接触還元を行なった。水素の消費（理論消費
１５４０１７）が完全に停止するまで約１７時間反応を
継続した。生じた淡黄緑色浴液は、窯素気流中セライト
を通し触媒を除去し、ｔＦ液は、２−ケトグルタル酸（
０，５８ｙ、４ｍｍｏｚ）な含む反応容器中に＠級集め
、直ちに加熱還施した。１５時間後１反応？：Ｐ、了し
。 反応液な冷却すると、橙黄色結晶が析出して来た。 析出結晶を吸引戸数し、キノキサリノン捧１７（０，８
０）、収率７１．９％〕を得、　ＥｔＯ）ｌより弗結晶
し黄色針状晶（０，６２）１−得た。 化合物１７ ｍｐ２５０〜２５２゜ Ｍ３　ｍ／ｚ（％り　：　２７８　（Ｍ”　、３６）　
、２６０　（Ｉ００）　。 ２３２（８８ン、２１７（３２）、１８９’Ｈ−ＮＭＲ
＜ＣＤＣ；ｔ３）　ａ　：２．８０　　（２Ｈ，ｔ、Ｊ
＝７．５Ｈｚ、−０Ｈ２Ｃｏ−）３、ｔｓ　（２Ｈ，ｔ
、Ｊ＝７．ｓＨｚ、’ｃＨ−）３．９２及び３．９３（
各々３Ｈ、ｓ　、　２ｘＯＣＨ３）６．７８及び１１８
　（各々１Ｈ，Ｓ、２ＬｒＯｍＨ）１１．９２　　（Ｉ
Ｈ，ｂｒ、ｓｉｇ、−Ｃ；０ＯＨ）１８　　Ｅｌ二Ｇ０
０ＣＨ８ ２０ｈ＝ｃｏｏＨ く方法Ｉ〉 氷冷ＬりＮａＨ（Ｉ７６Ｗ、　　７．３ｍｍｏｚ）ｏ＞
無水ＤＭＦ（３ａ（）懸濁液に、撹拌上化合物１７（６
０６智、　２．２　ｍｍ０６）　ｆ）無水ＤＭＦ（２０
ｍ）溶液な約２０分間かけテＭ７１［ＩＬ、　！ＦＬＫ
０．５１４関ｏ″ＣＫて撹拌ｔａけた。次に反応容１ｉ
ＦＫヨウ化メチル（４５５ｐｉ　、　７．３ｍｍｏｔ）
　ｋ約１０分間かけて滴加し、全反応液は、引き続き０
℃にて１５時間撹拌し、氷冷水（５０ｍ）中に注いだ。 混合浴液は。 ＣＨＣｔ３Ｃ５ｘ５０ｍｌ）にて抽出し、有機層は、飽
和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去すると。 粗生成物（５７０ｍｙ）が得られた。本成構体は。 シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｗａｃｏｇｅｌ
Ｇ−２００，２４））にて精製り、　ｎ−Ｈｅｘａｎｅ
　：Ａｃ０Ｅｔ　（４：　１−２　：　１　；　ｖ／ｖ
　）　ｔｙ＞溶出ＨよりＮ−メチル体１８（４９２ｍｇ
、収率７３ｏ８％）を得ＭｅＯＨ−ｃＨｃｔ３　より再
結晶し、淡黄色針状晶を得た。０−メチル体１９は、極
微量得られたにすぎなかった（方法Ｉ参照）。 一方、　ＣＨＯ６，抽出後の水層は、Ｑ、５ＮＨＣ６に
て酸性とした後、５％ＭｅＯＨ含有ＧＨＣ１３にて再抽
出し、有機層は、飽和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒
留去するとカルボン酸２０（８６■。 １３．５％）が結晶状に得られた。本島ｆＭｅＯＨ−ｃ
Ｈｃｔ３　より再結晶すると黄色針状晶が得られた。 く方法ｌ〉 カルボン［１７（ｔ００？　、　３．６０　ｍｍｏｚ）
　％：ＯＨ，ＯＬ、−ＭｅＯＨ（Ｉ：　１　：　Ｖ／Ｖ
　、　１００ＷＬｔ）Ｋ＆濁し、室温撹拌下ジアゾメタ
ンのエーテル浴液Ｖ原料の１７が消失するまで酬加した
。過剰のジアゾメタンは、急累気流にて留去した後、減
圧下＃媒１ｋｆｔｊＩ去すると、結晶跣残麿（ｉ、１４
Ｎ）が得られた。本生成物は、シリカゲルカラムクロマ
トグラフ４−（Ｗａｃｏｇｅｌ　Ｃ；−２［］０　、５
Ｑｆ）Ｋて軸製し、ｎ−Ｈｅｘａｎｅ：　Ａｃ０Ｊ？：
ｔ（６：　１　；　Ｖ／Ｖ）溶出部よりＯ−メチル体１
９　　Ｃ４８０１１ｊｆ、収率４３．６％）及びｎ−ｆ
（ｅｘａｎｅ：Ａｃ０ｊｉ：ｔ　（Ｉ：　１　；ｖ／ｖ
）溶出部よりＮ−メチル体１８　　（５２８１Ｉｙ。 収率４８．０％）なそれぞれ得た。０−メチル体１９は
、ＮａＯＨ−ＣＨＯＰ３　！り再結晶し、無色プリズム
晶を得た。 化合物１８ ｍｐ１７４−１７５℃ ＭＳ　ｍ／ｚ（％）：３０６　　ＣＭ”、１００）、２
７４（Ｉ５）。 ２５８（Ｉ４）　、２４７（８８）　、２３１（２４）
　、２０３（２０） Ｂｒ ＩＲｙｍａＸ５＋＋−１：１７４０及び１６５１　（Ｃ
＝０）’）ｉ−ＮＭＲ（ＣＤＣｊ３）δ： ２−８６　　（２）１．ｔ−Ｊ＝ＺＩＨ２−ＣＨｚＧＯ
）３．２５　（２８，ｔ、Ｊ＝ＺＩＨｚ、　）−ａ）Ｃ
２−〕６．６９及び３．７０　　（各々３Ｈ，Ｓ、Ｎ−
ＣＨ３゜Ｃ１００ＣＨ３） ６．９６及び４．０１　　（各々３Ｈ，ｓ、２ｘＯＣＨ
３）６．６８及び１２５　（各々ＩＨ，ｓ、ａｒｏｍＨ
）化合Ｔｈ１９ ｍｐ　１３７〜１６９℃ ＭＳ　ｍ／ｚ（％）：３０６　　（Ｍ”、５１）、２７
５（Ｉ０）。 化合物２０ ｍｌ）２３９〜２４１℃ ＭＳ　ｌ／Ｚ（％）：２９２　　（Ｍ”　、５３３．２
７４（９９）　。 ２４６（Ｉ００）、２３１（５３）、２０３（４１）、
１７５（２７） Ｂｒ ＩＲｙｍａＸａ＊−”　：１７６４及び１６２８（０＝
０）’）１−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．７０　
　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、０Ｈ２ＣＯ）＆００　
　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝４９Ｈｚ、０Ｈ２０８２Ｇｏ）６−
６５　　（３Ｈ−ｓ　−Ｎ　−Ｇ　Ｈｓ　）五８４及び
５．９４　　（各々６Ｈ、ｓ、　２ｘＯＣＨ，）６．９
８及び１２２　（各々ＩＨ，ＳｌｒＯｍＨ）’）ｌ　−
ＮＭＲ（Ｃ；ＤＣ，Ｃ３）δ：２．８９　　（２Ｈ，ｍ
） ３．２４　　Ｃ２Ｈ，ｍ） ３．７１　　（３Ｈ０，ｓ、Ｃ００ＣＲ，）４．００及
び４０２及び４．０７　　（各々３Ｈ。 、ｓ、５ｘＯＣ；Ｈ，） ７．１７及び７．２７　（ｅａｃｈｌｌ（、ｓ、ａｒｏ
ｍＨ）１８　　　　　　　　　　　　２Ｏ Ｎ−メチル体１８　（ｔｌ　５１３．７５　ｍｍｏｊ　
）　ｔｌ、　４−シ：ｉｒ＊ｔｙ　（Ｉ８ｓｕ　）及び
Ｉ　Ｎ　ＮａＯＨ７ｊＣ溶液（ＩＤｉａ／）Ｋ溶解し、
Ｎ温下１０分間撹拌反応させた。反応混合液は、希塩ｔ
Ｉｔ酸註酸性た後。 １０％ＭｅＯＨ含有ｃＨｃｔ、にて水層の蓋元か消失す
るまで抽出を−り返した。合一した有機層は。 飽和食塩水にて洗浄、芒硝乾燥、＃媒留去し、粗結晶カ
ルボン酸２０（Ｉ，ＯＦｌ、収率９５．９％〕を得た。 本島は、ＭｅＯＨ−Ｏｆ（Ｃｚ３より再結晶し。 純品２０　　（８５２〜〕得、このものは、先に侍てい
る化合！１１２０　と一致した。 （製造例１８） カルボン酸２０　（５００Ｉｖ、　１７１　ｍｍｏｔ）
ｔ’無水ＤＭＦ（Ｉ２ｊｌ／）Ｋ溶解し１本撹拌溶液に
トリエチルアミン（０，３６ｗｒ！　、　２．５７　ｍ
ｍｏｚ　）　、　シフ　エニにリン酸アジド（０，５５
ｍｌ　、　２．５７　ｍｍｏｌ）を顯次滴加した。反応
１時間後にジフェニルリンｅ１７）　）”　（０，５４
ｍｍｏｔ）　ｋ追加し、史［１５時間呈室温撹拌な行な
い、＃！黄黄緑色液液傅た。減圧下達やかに浴謀餉去し
、残渣を高真空上乾燥した。乾燥生成物に無水ペンセン
（２０１１Ｊ）’に加え、混合溶液な１時間加熱還流し
た。−度反応液を冨温に戻した後、カルバジン酸エテル
（Ｉ７８ｍ＆。 ｔ７１１［１ｍ０ｔ）を加えた。反応液は、Ｍび０．５
時間還ＩＷｌ、後、史にＭ湿下０．５時間撹拌し、　＃
ａｎ−留去した。得られた淡黄色残ａＣ１，９７６ｔ）
は。 シリカゲルカラムクロマトグラフィー（９１：ｌ）にて
精製し、４〜５％Ｍ８０Ｈ含有ＣＨＣ４３溶出郵よりセ
ミカルバジド２１　　（２３０ｍ９）”ｋ得た。未分離
分画は、再シリカゲルカラムクロｉトゲラフ４−（Ｉ５
Ｐ）Ｋ対し、更に２１　　（Ｉ６４ｍｇ）を得１合計収
率は５８．６％であった。 化合物２１ ＭＳ　ｍ／Ｚ（％）：３９３（Ｍ”、５）、３４７（０
，８）。 ろ３０（Ｉ）、２８９（９２）、２４６（４７）。 ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）δ： １．１８　　（３Ｈ，ｔ、Ｊ　＝６．９Ｈｚ、０Ｈ２Ｃ
Ｈ３）２．９５　　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、ＣＨ
２０Ｈ２ＮＨ−）３．５２　　（２Ｈ，ｍ、　　ＣＨ，
ＮＨ）１６７　　（５Ｈ，ｓ、Ｎ−ＣＨ，） ３．８９及び３．９７　　（各々３Ｈ，ｓ、２ｘＯＣＨ
３）４．０２　　（２Ｈ，Ｑ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、（Ｈ２
０Ｈ３）６．４０　　（ＩＨ，ｂｒ、ｓｉｇ、ＮＨ）６
．９１及びｚ３１　（各々ＩＨ，Ｓ、ｌＬｒｏｍＨ）７
．７０　　（ＩＨ，ｂｒ、ｓ、ＮＨ）８．６５　　（Ｉ
Ｈ，ｂｒ、ｓｉｇ、ＮＨ）セミカルバジド２１（２７２
〜、　０．６９　ｍｍｏｔ）　。 栓枠した無水炭酸カリウム（Ｉ９１〜、ｉ８ｍｍｏｔ）
及びａｂｓ　ＥｔＯＨ（２０ｙｓｉ　）の懸〜敵紮６時
間、加熱還流した。減圧上溶媒留去し、残ａＫ水（６０
Ｍり’に加え、２ＮＨＣ６Ｋて酸性とした。水１１６４
！、　１０％ＭｅＯ）１　＊有ＯＨＣ；ｔ３（３ｘ５０
ａｕ）　Ｋて抽出し、有機層は、飽和食塩水にて洗浄、
芒硝乾燥、溶媒留去すると、淡黄色結晶（２２２Ｉ４ｇ
）が得られ＝　ＭｅＯｆ（−ＣＨＣＬ３より爵結晶し、
黄色プリズム晶として、９０（Ｉ３０％’）　９を得た
。結晶母液（７０ｍｇ）は、シリカゲルカラムクロマト
グラフィー（Ｉ（Ｉ）にて精製し、５％ＭｅＯＨ含有Ｇ
ＨＧｔ３＃ａ［ＳＣ’）更ｔ／Ｃｒ１ＯＣ６４１１９）
’ｌ得０合計収率は８０．８％であった。 化合物−Ｃ ｍｌ）２５０〜２５５℃ ＭＳ　Ｖｚ（％）：５４７　　（Ｍ”、５）、２８９（
２）。 ２４６　（Ｉ００）　、２３１　（３５）　、２０５Ｉ
ＲｙｍａＸａ＊−１：１６９４及び１６４０（Ｃ＝０）
’Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： ３．０２　　（２）１．ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ。 ３．６５　　（３Ｈ，ｓ、Ｎ−０Ｈ３）３．８０　　（
２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ。 ３．８４及び３．９５　　（各々３Ｈ，８，２ＸＯＣＨ
３）６．９６及びＺ２６　（各々ｌＨ，ｓ、ａｒｏｍＨ
）９．９５　　（２Ｈ，Ｓ、２ＸＮｆｔ）る。 （夾施例５） トリアゾ’）　シフ　ＩＣ（Ｉ　Ｑ、Ｑａｐ　、　０．
０２９ｍｍｏｔ）の無水ＤＭＦ（Ｉｍ）溶液にＰｈＩ（
ＯＡｃ）、（Ｉ１２〜、０．０３５ｍｍｏｔ）９を加え
、室温にて１時間撹拌した。減圧下ＤＭＦｌｋ貿去する
と赤色固体状残渣か得られた。本島ｖ　ｃＨ２ａｔ２−
　ｂｅｎｚｅｎｅ　ｚり結晶化すると、極微量であるが
、目的のＩＣの赤色プリズム晶が得られて来た。現在、
大量に純品の１０な得るための方法（昇華法等）な検討
中であ財 アミノ捧す（９８幅、　０．０５　ｍｍｏｔ）及び炭鈑
カリウム（Ｉ５，２■、　０．１１　ｍｍｏｔ　）の水
溶液（０，２５ｍ）に７−クロロ−４−二トロペンゾフ
ラザン（８，３４’、α０４１　ｍｒｎｏｌ　）　ノＥ
ｔＯＨ（Ｉ−）溶液な約５分間かけて諷加した。生じた
暗紫色溶液は、室温で１０分撹拌した後、６０−７０℃
にて５分間加熱撹拌した。暗紫色反応懸橋液は。 ２ＮＨＯ１Ｋて酸性にすると暗赤色溶液となった。 減圧下溶媒留去し、得られた残ｆｉ（４４，５〜）は。 ＯＤＳカラムクロマトグラフィー（ＷａｔｅｒＳ社。 分散用ＯＤＳ充填剤５？）にて＆製した。カラムは、２
０％ＭθＯＨ含有水にて溶出し、トライアゾリジンｔｌ
　Ｄ　Ｃ９，５〜、収率７０．９％〕を黄赤色粘着性物
質として得た。 化合物［ＩＤ Ｂｒ ＩＲνｍａｘ　ｃｍ−”　：　１６８８　（Ｃ＝０　）
１５８６及び１３０１　（ＮＯ，） ＭＳ　ｌ／Ｚ（％）：ｎｏＭ” ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）ａ： ｔ９９　　（２Ｈ，ｍ） 五４−＆５　　（４Ｈ，ｍ） ６．４２　　（Ｉ）１．ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、ａｒｏｍ
Ｈ）８５１　　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、ａｒｏｍ
Ｈ）９．４２　　（Ｉｆ（０ｍ、Ｎｆ（） ＩＱ、１０　　（２Ｈ，ｓ、２ｘＮＨ）（実＃ｉｌＩ例
６） ｆｉＥ　　　　　　　　　Ｏ Ｎ−メチルアクリジニウム（２２〜、０．０３８ｍ　ｍ
ｏｔ）　１７）無水ＤＭＦ（０，５ｍｇ）ｉｌ：液に７
ｔ／陣Ｕ　Ｃ７，６Ｉｖ、０．０４８ｍｍ０６ｌ−加え
、生じた反応懸濁液を外温５０−６０℃にて６時間加熱
撹拌した。減圧下ＤＭＦを留去し、暗黄色残渣（４３，
５〜）に塩酸水溶液（０，０５７ｍｍｏｚの塩化水素に
相当する量）及びＭｅＯ）ｌ　　な加え残＆な溶解した
。再び溶媒な留去し、残渣なセファデックスＬＨ−２［
１カラムクロマトグラフイー（５５１〕にて＆灸した。 ＥｔＯ）１　　にてカラムを充填し。 ＥｔＯＨにて溶出せしめた。溶出容量６７〜４６ｄの黄
色分ｔｈｌｔ集め化合物ｒＪＥｃ２２．４■、収率９４
．８％）を得た。 化合物ｌＩＥ ’Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： １６７　　（２Ｈ，ｍ、−ＨＮＣＨ，ＣＨ２Ｏ）（２−
）２．４６　　（２Ｈ，ｔ、Ｊ　＝７．３Ｈｚ、−（）
１２Ｇ−）２．９４　　（２Ｈ０ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、
Ｐｈ０Ｈ２−）３．０６　　（２Ｈ，ｍ　　　　　　−
ＨＮＣＨ２−）５．３６　　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．６ｆ
（ｚ、　　−０Ｈ２Ｎ　　）４．９７　　（３Ｈ，ｓ、
　　　　　　十Ｎ−ＣＨ５）７４６及び７．６５　　（
４Ｈ，ＡＡ’　ＢＢ’　。 Ｊ：８．６Ｈ２，ａｒｏｍＨ） ７．９２　　（ＩＨｏｍ、　　ＮＨ） ８．１９　　（２）１　、　ｍ　、　　ａｒｏｍ　Ｈ）
８．５７　　（２Ｈ、ｍ　、　　ａｒｏｍ　Ｈ）８．６
２　　（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、ａｒｏｍＪ８．９
６　　（２）１．ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、ａｒｏｍＨ）１
０．１０　　（２Ｈ，ｂｒ、ｓ、　　２ＸＮＨ）以下に
本発明化合物とビタミンＤ類との反応例について説明す
る。 （実施例７） ａｍ　Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒｇ＝Ｈ ｂ＝　Ｒ１＝Ｒ３＝ＨＲ２＝ＯＨ Ｃ＝Ｒ□：ＯＨＲ２，Ｆ１３＝ｆ（ ｄ　：　Ｒ、＝Ｒ２＝Ｏ）Ｉ　　Ｒ３＝Ｈｅ　＝　Ｒ１
＝Ｒ３＝ＯＨＲ！＝Ｈ く方法１　）　　Ｐｂ（ＯＡｃ）４による１邊の酸化、
弓き続りり、Ａ、反応 Ｖｌ　ｔａｍｔｎ　　Ｄ３　２２　ａ　　　（９１Ｗ　
　、　０．０　２　４　　ｍｍ０１）Ｌ［Ｉ　Ａ　（Ｉ
２，９Ｗ、　０．０２８ｍｍｏｔ）　、無水ＤＭＦ（０
，２ｄ）、無水ＴＨＦ（０，３ｉｄ）及びｇ４．ＡＣＯ
Ｈ（５μｔ）の懸濁液を一７５℃に冷却し１本撹拌ｉニ
Ｐｂ（ＯＡｃ）、　（Ｉ８，９ｍｇ、　０．０４３　ｍ
ｍＯ／−）な加えた。反応懸濁液は、ＰｂＣ０Ａｃ）４
添加５分後より赤色な帯びて来た。反応液は１時間−７
５℃にて撹拌した後、室温に戻し更に１時間反応な行な
った。反応混合物を氷冷水に注ぎ、ｃＨｃｔ３（３Ｘ１
５ａｗｊ）Ｋて抽出した。ｃＨａｔ３層は、飽和食塩水
にて洗浄、芒硝乾燥、溶媒留去した。得られた黄色粘着
性物質（２２，［３Ｗ　）　ハ、　Ｐｒｅｐａｒａｔｉ
ｖｅＴＬＯ（Ｍｅｒｃｋ社ｌｉｔ　、　５ｉｌｉｃａ　
ｇｅｌ　６ＯＦ２５４゜２０　ｔｘ　（Ｗ）　Ｘ　Ｉ　
Ｑ　ｃｍ　（Ｈ）　Ｘ　Ｏ，５ａｍ　（Ｔ）　Ｘ　４枚
、展開溶媒２％ＭｅＯＨ含ＷＣ；ＨＣ；ｔ３）　Ｋテ精
製シ、主成積体厘ａ（Ｃ６−αＨ；９０■〕　及びその
Ｊ！跣体鳳ａ’　（Ｇ、−βＨ：１．６＃）’ｉ’得た
。合計収率は。 ５５５％であった。ｌ　ａ　（Ｃ６−αＨ〕は、黄色結
と一−ノ 晶として得られ、ＭｅＯＨ−Ｃ；Ｈ２Ｏ１２より杏結晶
し。 黄色針状晶を得た。 化合物−ａ（Ｇ６−αＨ） ｍｐ　　１４５〜１４５℃ ＵＶλＩＪＱＨｎｍ（ｌｏｇ　ｇ）　：　２１７　（４
，７２）　。 ２４（Ｓｈｏｕｌｄｅｒ）　、３２２（３，８０）　。 ４ＯＮ４．０７）。 元素分析二計算値 （０４８Ｈ６１Ｎ５０１１−Ｈρ）：　Ｃ，６７，５０
：Ｈ，７，４５：　Ｎ、８．２０゜１１Ｊ定１１　　　
　　：Ｃ，６７，０８：）１．７．１８；Ｎ、８．１２
゜＜方法２＞　　ＰｈＩ（ＯＡｃ）２にヨル１１Ａ４）
酸化、ｉＪき続くビタミンＤとの反応 （Ｉｉｄ　）　ＦＩｔＫ、　ＰｈＩ（ＯＡＣ）、（７，
５ａｖ　、　１０２！１ｍｍ０Ａ）ｔ’加え、室温撹拌
下１反応液が十分な赤色な呈するまで約０．５〜１時間
撹拌を継続した。 本赤色溶液ニ、２４．２５　（ＯＨ）、Ｄ、２２ｅ　（
５，Ｏａｖ。 メーＮ−） ０．０１２　ｍｍ０Ｌ）を加え、溶液の赤色が消失する
まで更Ｋｔ５時間撹拌した。減圧上溶媒を留去し。 員纏色粘着註物質（２４，１〜）を得、　ｐｒｅｐａｒ
ａｔｉｖｅＴＬＣＣＭｅｒｃｋ社Ｈ５ｉｌｉｃａ　ｇｅ
ｌ　６０　Ｆ２．　。 ２０ｃｍ（Ｗ）　Ｘ　１０ｍ（Ｈ）　Ｘ　Ｏ，５ａａ＊
（Ｔ）　Ｘ　４枚、展８溶媒５％ＭθＯＨ含＠ＧＨ２Ｃ
Ｌ２）に℃精製し、付加体しくｃ６−αＨ反βｈの混合
物、１０．４■。 収率定置的）な非結晶ａ′Ｒ色粘着注物賢として得た。 このようにして得たビタミンＤ類と本発明試薬との付加
体の異注俸生成比及び収率な第１表に示すつ ビタミンＤ３訪導体と本発明臥薬（化合物ＩＡ）との付
加物である化合物１ｃ、ｌｄ及びＩｅグ）混合ど＼ノ　
　ｒ−ノ　　　　　ど−−ノ 液について、　ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー
）による分＊Ｖ次の条件により行なった。 ＨＰＬＣ分離条件 カラＡ　：　Ｌｉ　ｃｈｒｏｓｐｈｅｒ　１０ＣＩＲＰ
　　１５ｌｅｌ　（５，ｃｚｍ）４　ａａ　Ｘ　２５０
　ｍ ＃＊剤：　水：メタノール＝２７　：　７３　（ｖ／ｖ
）流　速：　１１／分 検　出二　ＥＸ３９５ｎｍ、Ｅｍ５００ｎｍ６ｎＰ））
／１０μｔエタノール 結果を第１図に示す。図中、　ｌｃ、ｌ（Ｉ，ｌｅｔど
Ｎ）　　　ｌ＼ノ　　　ｌ−一／ は主生成ｍｌ　Ｉｃ’　、腫ｄ′０膳ｅ′はｌ１ｌｌ生
ＷＶそれｌ〜ノ　　ｒ＼／／−＋＋／ ぞれ表わす。 化合物ｐＨａの２つ異性Ｋ（Ｃ；６−αＨ及びβＨ）は
ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ　ＴＬＣによりそれぞれ分離し
てから、’Ｈ−ＮＭＲｋａＪ定した。結果を第４表に示
す。 ビタミンＤ３窮導内と本発明試薬（化合１１１１Ｇ）と
の付加物である化合物ｒｖｂ、ｒｖｃ及びｌ′Ｖｄの混
／＋＋／　　　／２−ノ　　　　　　−−一ノ合液につ
いｉ、１−ｉＰＬｃによる分離な次の条件で行なった。 ＨＰＬＣ分離条件 カラム：　Ｌｉ　ｃｈｒｏｓｐｈｅｒ　１０ＣＩＲＰ−
１８ｆ８１　（５μｍ）４ｇｍ８２５０ｇ＋ ＃離削：【＠線的勾配浴嘔による】 ０分　　　水：メタノール＝４０：６０′５０分汝　水
：メタノール＝２０：８０４０分後　水：メタノール＝
２０：８０流　速＝１１Ｅ／／分 検　出：　　ＥＸ、３７Ｑｎｍ、Ｅｍ、４４Ｑｎｍ。 ＩＶｄ（−１５ｎｆＰ）：ｌ／１０μｔｚり／−ル結果
な第２図ニ示す。図中、ＩＶｂ、ＩＶＣ，ＩＶｄど一ノ
　　　／１Ｎノ　　ノアーノ れそれ表わす。 以下に本発明化合物とビタミンＡ類との反応例について
説明する。 螢光注水ジエン試薬とビタミンＡｐ導俸との反応（実施
９１Ｊ８〜１０） １）＝Ｙ＝　　−０Ｈ２０１−１２ １１Ａ　（２２！、５０μｍ０６）のＤＭＦ溶Ｑ（２ｍ
＋／）にＰｈＩ（ＯＡＣ）２　（Ｉ６１＋１９．５０μ
ｍｏｚ）Ｙ加え室温で３０分撹拌し、ＩＡ？調製する。 この溶液Ｙｒｅｔｔｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　（Ｉ［］ａｌ
　、　３３μｍｏｔ）　１７）Ｃ）１２Ｇｔ２　（２０
ａｊ）溶ＮＫＯ℃Ａｒ気流下滴下する。Ｑ℃６０分浸溶
媒を留去し、シリカゲルのＴ　Ｌ　Ｃテ１０　％　Ｍ　
ｅ　ＯＨ／Ｇ　ＨＣＺ　３　　を用イ１ａＨ’Ｔ２４７
．２１８ｈｍ、　　ＩＲ（ＫＢｒ）１７７０　。 １７１９　、１６５５ｃｌＲ−１ ′ＨトＭＲＣＣＤＧＬ３）６１．０５及び１．１４（各
々５Ｈ，＆　、Ｍｅ−１）、１．７５（３Ｈ，ｓ　、Ｍ
ｅ−５）。 １．８１（３）１．ｓ、Ｍｅ−９）、２．２１　（３ｆ
（、ｓ。 Ｍｅ−１３）、３．７３（６Ｈ，ｓ　、ＮＭ６）、３．
９４及び４．０４（各々３Ｈ、ａ　、　ＯＭｅ）　、　
４．８５　（Ｉｈ。 ｔ、、Ｈ７）、４．８５（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８．６．Ｈ−
１０）、５．４７（ＩＨ，ａ、、Ｈ−８）、５．８３（
ＩＨ，ｔ、Ｈ−１４）、５．４５（２Ｈ，ｓ。 ０−ＯＨ）、６．０２１）１．ｄｄ、Ｊ＝１５及び８．
６．Ｈ−１１）、６．４７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１５゜Ｈ−
１２）、６．６７及び７．３７　（ｅａｃｈ　Ｉ　Ｈ、
ｓ　。 キ／１ｒ４ｊす７）、７．５５及び７．５８　（ｅａｃ
ｈ２　Ｈ。 ＡＡ’　ＢＢ’　　、　　Ｊ＝９　　、　Ａｒ　）（９
０ｆＮｆ’Ｊ９　）　とｌ　ミｙＡ酸（Ｅ６ｔｉｎＯｉ
ＣａＣｉｄ）（２６）とを、との反応 の溶液にＰｈＩ（ＯＡｃ）２　（７，８ｍＷ、２４．ｇ
ｍｏｔ）を加え室温で３０分撹拌し、１ｃの淡赤色溶ｆ
ｆ！Ｌな―製する。Ｆｌｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　（
３−５ＩＩＩ　、　１２　ｐＵａＯＬ）のＣＨ２Ｃｌ２
　（Ｉ０ｍ／）浴液に上記比の酸液な０℃にて加えＡｒ
気流下６０分間撹拌する、爵媒ヲ餉去し残＃ｔなシリカ
ゲルのＴＬ、Ｇで１０％ＭθＯＨ／Ｃ：Ｈ２Ｇｔ２　に
て精製し、付加陣Ｑｂ（５！。 ６６％）を得る。 Ｖｂ　ＵＶ（９５％ＥｔＯＨ）３６８，２４４．２１３
ｎｍｒ−ノ ＩＦｌ（ＫＢｒ）１７７１．１７１５．１６４９ｚ−１
Ｍ８　　ｍ／８６４６ＣＭ”−１）、６０１，３９９．
３５５／ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ２）δ０．８８及び０．９
５（各々３Ｈ、ｓ　、Ｍｅ−１）、’Ｌ５９　（３Ｈ、
ｓ、Ｍｅ−５）。 ｔ７７（３Ｈ，＠、Ｍｅ−９）、２．１９（３Ｈ，ｒ、
。 Ｍｅ−１３）、！１．６７　（３Ｈ、＠、ＮＭｅ）、３
．９３及び４．０１（各々”ｋｉ、ｓ　、ＯＭＢ）　、
４．６１（ＩＨ，＠、Ｈ−７）、４．７４（ＩＨ，ｄ、
Ｊ＝８．６．Ｈ−１０）、５．３７（ＩＨ，ｓ、Ｈ−８
）。 ５．８６（ＩＨ，ｉ、Ｈ−１４）、５．９６（ＩＨ。 ｄｄ、Ｊ＝１５及び８．６　、８−１１）　、　６．３
５（ＩＨ。 ｄ、Ｊ＝１５．）ｉ−１２）、３−２及び４．０（各々
２Ｈ１ｍ　、−０Ｈ２０Ｈ２−３ 込の反応 ｔｌＡ　（Ｉ５ｍｇ、　３５．ａｍＯＬ）より調製した
ＩＡ１７）ＤＭＦ溶液ｆ　ｒｅｔｉｎｏｌ　（２４）　
（Ｉ　Ｑｌｌ　、　３５　ｐｍｏｔ　）ノＯＨ，Ｃ；ｔ
２（２０５１／）溶液に一７８℃で加え、６０分撹拌す
る。溶媒留去ｆｌｋ残渣をシリヵゲＡ／１７）カラムチ
Ａ　ＯＯＥ　ｔ　／　Ｇ　ＨＣＺ　ａ　／　Ｅ　ｔ　Ｏ
ｆ（５Ｑ　：５０：１な溶媒に用いて精製し、付加体ｖ
ｌ（Ｉ４９，５５％）を得る。 化合物Ｖ＋： ＩＲ（ＫＢｒ）３４４０．１７７１．１７１１．１６５
５ｆｆｉ　−” ／ＨＮＭＲ（ＧＤＣ，ｔ３）　０．９９２及び０．９８
７（各々６Ｈ，ｓ、Ｍｅ−１）、　ｔ６６（５Ｈ，ｓ、
Ｍｅ−５）。 ｔ９９ｃ５Ｈ、ｓ　、Ｍｅ−９）、１．９１　　（３Ｈ
、ｓ　　。 Ｍｅ−１３）、３．７４（３ｆ（、ｓ、ＮＭｅ）、１９
５及び４．０５（各々３）１．ａ、ＯＭｅ）　、５．５
６（ＩＨ，ｄｄ。 Ｊ＝８及び４　、ＯＨ、Ｄ、０ｆｆｉ７ＦＯ消失）　、
４．２４及び３．８７（各々ＩＨ，ｒｎ、Ｈ−１５）、
４．４４−（ＩＨ。 （Ｉ，Ｊ＝６．８−１４）、５．２２（Ｉ８，ｄ、Ｊ＝
凱Ｈ−１０）　、５．３１　（Ｉ　Ｈ，ｍ、Ｈ−１１）
　、５．７０（ＩＨ，ｍ、Ｈ−１２）、５．９９（Ｉ）
１．ｄ、Ｊ＝１６．５．Ｈ−８）、６．１７（ＩＨ，ｄ
、Ｊ＝１６．５゜３０２．２２０ 発明の詳細 な説明したように本発明により合成した螢光もしくは化
学発光試薬はＣ１５−ジエンな持つ化合物と速く特異的
かつ定普的に反応する。従つてこれらの試薬はｃｐｓ−
ジエンを持つ化合物、待にビタミンＤ、Ａおよびそれら
の代謝物の検出、定量分析に適している優れた試薬であ
るということができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ビタミンＤ、各肋導陣と本発明試薬ＩＡとの
付加体ｖＨｐＬｃにより℃分離した徽に検出した各々の
付加体のピークを表わすクロマトグラムである。 第２図は、ビタミンＤ３各誘導体と本発明試薬ＩＣとの
付加体なｔ−１ｐＬｃによって分離した後に検出した各
々の付加体のピークを表わすクロマトグラムである。 特許出願人　　株式会社バイオセンサー研究所代理人　
弁理士　湯　浅　恭　三、：　’、−、’鬼Ｉ（外４名
）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｘは蛍光発色団またはポテンシャル化学発光基
   を示し、Ｙはスペーサーを示す） で表される化合物。 ２、一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ｘは蛍光発色団またはポテンシャル化学発光基
   を示し、Ｙはスペーサーを示す） で表される化合物。 ３、Ｘが下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ は同一でも異なっていてもよく、水素原子またはアルキ
   ル基を示す〕 で示される基よりなる群から選ばれた一員であり、Ｙが
   下記式 −（ＣＨ＿２）＿ｌ− ▲数式、化学式、表等があります▼ −（ＣＨ＿２）＿ｌ−Ｂ−（ＣＨ＿２）＿ｌ−（式中−
   Ａ−は−Ｏ−または−ＮＨ−を示し；−Ｂ−は、−ＮＨ
   −、−ＣＯＯ−、−ＳＯ＿２ＮＨ−、▲数式、化学式、
   表等があります▼および▲数式、化学式、表等がありま
   す▼よりなる群から選ばれ た一員を示し、 ｌは１から５までの整数を示し、 ｍは０から５までの整数を示し、 ｎは０または１のいずれかを示す） で示される基よりなる群から選ばれた一員である（但し
   、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子と右端はＸと
   結合する）、 請求項１または２に記載の化合物。 ４、Ｘが下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中Ｚは酸の共役塩基を示す） で示される基よりなる群から選ばれた一員であり、Ｙが
   下記式 ▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、
   表等があります▼ −（ＣＨ＿２）＿ｎ− （式中ｎは０または１のいずれかを示す） で示される基よりなる群から選ばれた一員である（但し
   、Ｙのそれぞれの式の左端は環の窒素原子と、右端はＸ
   と結合する）。 請求項３に記載の化合物。 ５、Ｘが下記式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（III） およびＹが下記式（IV） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） で示される基である、請求項３に記載の化合物。 ６、一般式（Ｖ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ） または（VI） ▲数式、化学式、表等があります▼（VI） （式中、Ｙはスペーサーを示し、 Ｑはヒドロキシメチル基またはアミノ基を示す）で表さ
   れる化合物を一般式（VII） Ｘ−ＣＯＣｌ（VII） （式中、Ｘは蛍光発色団またはポテンシャル化学発光基
   を示す） で表される化合物とカップリングすることを特徴とする
   一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する）または一般
   式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する）で表される
   化合物の製造方法。 ７、一般式（VIII） ▲数式、化学式、表等があります▼（VIII） （式中、Ｘは蛍光発色団またはポテンシャル化学発光基
   を示し、Ｙはスペーサーを示し、ＷはＣ＿１〜Ｃ＿３ア
   ルキル基を示す） で表されるセミカルバジド体を閉環することを特徴とす
   る一般式II ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する）で表される
   化合物の製造方法。 ８、一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｘは蛍光発色団またはポテンシャル化学発光基
   を示し、Ｙはスペーサーを示す） または一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する）で表される
   化合物を蛍光もしくは化学発光試薬として用いることを
   特徴とする、化学構造中にＣｉＳ−ジエン構造を持つ化
   合物の検出および定量分析法。 ９、一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｘは蛍光発色団またはポテンシャル化学発光基
   を示し、Ｙはスペーサーを示す） または一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、ＸおよびＹは前記の意味を有する）で表される
   化合物を蛍光もしくは化学発光試薬として用いることを
   特徴とする、ビタミンＤ、ビタミンＡまたはこれらの代
   謝物の検出および定量分析法。