JPH0459732A - 抗癌剤 - Google Patents
抗癌剤Info
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- JPH0459732A JPH0459732A JP2171978A JP17197890A JPH0459732A JP H0459732 A JPH0459732 A JP H0459732A JP 2171978 A JP2171978 A JP 2171978A JP 17197890 A JP17197890 A JP 17197890A JP H0459732 A JPH0459732 A JP H0459732A
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/80—Scrophulariaceae (Figwort family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ナンバンギセルの種子より抽出されるインタ
ーロイキン−２、及びインタ−フェロン−Ｔ誘起能を有
する抽出物からなる抗癌剤に関する。
ーロイキン−２、及びインタ−フェロン−Ｔ誘起能を有
する抽出物からなる抗癌剤に関する。
インターロイキンまたインターフェロン誘起剤は、ヒト
、動物の細胞に作用して、インターロイキン（ＩＬ）、
インターフェロン（ＩＦＮ）を誘起する物質である。こ
のような作用を有する天然物質は種々知られており、例
えば、漢方薬「当帰」を熱水で処理し、その抽出液から
ＩＦＮ誘起活性を有する物質が単離され（特開昭５３−
３２１０７号公報）、また漢方薬「桑白皮」から同様に
ＩＦＮ誘起活性物質が単離されて（特開昭５３−９９３
１３号公報）いる。
、動物の細胞に作用して、インターロイキン（ＩＬ）、
インターフェロン（ＩＦＮ）を誘起する物質である。こ
のような作用を有する天然物質は種々知られており、例
えば、漢方薬「当帰」を熱水で処理し、その抽出液から
ＩＦＮ誘起活性を有する物質が単離され（特開昭５３−
３２１０７号公報）、また漢方薬「桑白皮」から同様に
ＩＦＮ誘起活性物質が単離されて（特開昭５３−９９３
１３号公報）いる。
ナンバンギセル（Ａｅｇｌｎｅｔｉａ Ｉｎｄｉｃａ
Ｌ；＾ＩＬ）は、強壮剤として知られ、ハマウツボ科ナ
ンバンギセル属の１年生無葉緑植物で、ススキ、ミョウ
ガ、サトウキビ等の根に寄生し、果実のうちに無数のほ
こりのように細かい種子を入れている。（広Ｊ書店、総
合薬用植物、第１０６〜１０７頁、昭和１１年発行） 本発明者等は、このナンバンギセルの種子からの抽出物
質が、著しいＩＬ−２、及びＩＦＮ−ｒ誘起活性を有す
る成分を有し、かつ副作用を有しないことを見出し、先
に出願した。
Ｌ；＾ＩＬ）は、強壮剤として知られ、ハマウツボ科ナ
ンバンギセル属の１年生無葉緑植物で、ススキ、ミョウ
ガ、サトウキビ等の根に寄生し、果実のうちに無数のほ
こりのように細かい種子を入れている。（広Ｊ書店、総
合薬用植物、第１０６〜１０７頁、昭和１１年発行） 本発明者等は、このナンバンギセルの種子からの抽出物
質が、著しいＩＬ−２、及びＩＦＮ−ｒ誘起活性を有す
る成分を有し、かつ副作用を有しないことを見出し、先
に出願した。
本発明は、このナンバンギセルの種子からの抽出物から
なる抗癌剤の提供を課題とする。
なる抗癌剤の提供を課題とする。
〔課題を解決するための手段］
本発明の抗癌剤は、ナンバンギセルの種子から抽出され
るインターロイキン−２、及びインタ−フェロン−Ｔ誘
起能を有する抽出物からなることを特徴とする。
るインターロイキン−２、及びインタ−フェロン−Ｔ誘
起能を有する抽出物からなることを特徴とする。
このインターロイキン−２、及びインタ−フェロン−Ｔ
誘起剤は、ナンバンギセルの種子より■、蒸溜水、特に
蒸溜水がリン酸緩衝生理食塩水により抽出されるか、ま
た、 ■、ナンバンギセルの種子より水飽和ブタノールにより
抽出され、得られた水層をプロナーゼ処理し、その沈澱
除去液を限外濾過して回収されるか、 ■、ナンバンギセルの種子より水飽和フェノールにより
抽出され、得られた水層を酢酸カリウム、及びエタノー
ル処理し、その沈澱除去液を蒸溜水に対して透析し、そ
の透析内液よりＲＮＡを除去後、得られた水層を更に酢
酸カリウム、及びエタノール処理し、沈澱除去液を蒸溜
水に対して透析し、その透析内液を濃縮することにより
得られるものである。
誘起剤は、ナンバンギセルの種子より■、蒸溜水、特に
蒸溜水がリン酸緩衝生理食塩水により抽出されるか、ま
た、 ■、ナンバンギセルの種子より水飽和ブタノールにより
抽出され、得られた水層をプロナーゼ処理し、その沈澱
除去液を限外濾過して回収されるか、 ■、ナンバンギセルの種子より水飽和フェノールにより
抽出され、得られた水層を酢酸カリウム、及びエタノー
ル処理し、その沈澱除去液を蒸溜水に対して透析し、そ
の透析内液よりＲＮＡを除去後、得られた水層を更に酢
酸カリウム、及びエタノール処理し、沈澱除去液を蒸溜
水に対して透析し、その透析内液を濃縮することにより
得られるものである。
以下、ナンバンギセルの種子よりインターロイキン−２
、及びインタ−フェロン−ｒ誘起能を有する抽出物の抽
出方法について具体的に説明する。
、及びインタ−フェロン−ｒ誘起能を有する抽出物の抽
出方法について具体的に説明する。
〔抽出例 １〕
ナンバンギセルの種子のリン酸緩衝生理食塩水抽出物（
以下、粗抽出物という）の調製ナンバンギセルの種子４
０ｍ ｇに、カルシウムイオン、マグネシウムイオンを
含有しない０．１モルリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７，
２） １ ｍｆｌを加え、乳鉢中において粉砕した。
以下、粗抽出物という）の調製ナンバンギセルの種子４
０ｍ ｇに、カルシウムイオン、マグネシウムイオンを
含有しない０．１モルリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７，
２） １ ｍｆｌを加え、乳鉢中において粉砕した。
この粉砕物を１５０００ｘｇ、１５分間、４℃で遠心処
理し、得られた上滑を、１］、、４５μｍ径のミリポア
フィルタ−を通して無菌化し、本発明の抽出物を得た。
理し、得られた上滑を、１］、、４５μｍ径のミリポア
フィルタ−を通して無菌化し、本発明の抽出物を得た。
〔抽出例 ２〕
上記ナンバンギセルの種子の粉砕物に、等容量の水飽和
ｎ−ブタノールを加え、０℃で１５分間撹拌した。この
混和物を３５０００ｘｇで２０分間遠心して、分離した
下層の水層を集めた。なおブタノール層および沈澱物は
更に２回ブタノール抽出を行ない、得られる水層分画を
更に遠心処理して不溶物を除去し、蛋白質分解酵素であ
るプロナーゼを最終濃度２０μｇ７ｍｌｌになるように
添加し、３７℃で一夜処理した。このプロナーゼ処理に
よりプロナーゼを含む蛋白質からなる白色沈澱が生じ、
この沈澱を遠心処理により除去した。
ｎ−ブタノールを加え、０℃で１５分間撹拌した。この
混和物を３５０００ｘｇで２０分間遠心して、分離した
下層の水層を集めた。なおブタノール層および沈澱物は
更に２回ブタノール抽出を行ない、得られる水層分画を
更に遠心処理して不溶物を除去し、蛋白質分解酵素であ
るプロナーゼを最終濃度２０μｇ７ｍｌｌになるように
添加し、３７℃で一夜処理した。このプロナーゼ処理に
よりプロナーゼを含む蛋白質からなる白色沈澱が生じ、
この沈澱を遠心処理により除去した。
次いで、沈澱除去液をカットオフ分子量３５００、コア
サイド３０００の限外濾過膜（アミコン社、米国）を使
用し、圧力１．５ｋｇ／ｃｍ”で濃縮し、本発明の抽出
物を得た。収量はウロン酸定量によりナンバンギセルの
種子１ｇにつき４５ ｍｇであった。
サイド３０００の限外濾過膜（アミコン社、米国）を使
用し、圧力１．５ｋｇ／ｃｍ”で濃縮し、本発明の抽出
物を得た。収量はウロン酸定量によりナンバンギセルの
種子１ｇにつき４５ ｍｇであった。
〔抽出例 ３〕
上記ナンバンギセルの種子の粉砕物に、等容量の水飽和
フェノールを加えて０℃で３０分間撹拌した後、２００
ｘｇで１０分間遠心処理し、水層を分離した。水層中に
混入しているフェノールをエーテルで抽出除去し、水層
に溶解したエーテルは窒素ガスを通気することにより除
去した。このようにして得られるフェノール抽出物に酢
酸カリウムを２％（ｗ／ｗ）の割合で添加し、１０倍容
量の９５％エタノールを添加し、４℃、−夜装置した後
形成される沈澱物を蒸溜水に溶解させた。
フェノールを加えて０℃で３０分間撹拌した後、２００
ｘｇで１０分間遠心処理し、水層を分離した。水層中に
混入しているフェノールをエーテルで抽出除去し、水層
に溶解したエーテルは窒素ガスを通気することにより除
去した。このようにして得られるフェノール抽出物に酢
酸カリウムを２％（ｗ／ｗ）の割合で添加し、１０倍容
量の９５％エタノールを添加し、４℃、−夜装置した後
形成される沈澱物を蒸溜水に溶解させた。
この溶液に上記同様２％の割合に酢酸カリウムを添加し
た後等容量のエタノールと混和させ、０℃で３０分間静
置した。その後５０００ｘｇ、２０分間遠心し、主とし
てＲＮＡを含有する沈澱を廃棄した。
た後等容量のエタノールと混和させ、０℃で３０分間静
置した。その後５０００ｘｇ、２０分間遠心し、主とし
てＲＮＡを含有する沈澱を廃棄した。
更に上滑に６倍容量のエタノールを添加し、１時間静置
した後生じた沈澱を５０００ｘｇ、２０分間遠心処理し
て集め、蒸溜水に溶解させ、蒸溜水に対して透析した。
した後生じた沈澱を５０００ｘｇ、２０分間遠心処理し
て集め、蒸溜水に溶解させ、蒸溜水に対して透析した。
この透析内液には多糖類と微量のＲＮＡが混在している
ので、ＲＮＡを破壊する目的で１ｆｆ１１あたり３０〜
４０μｇの牛膵由来ＲＮＡ分解酵素（Ｐａｎｃｒｅａｔ
ｉｃ ＲＮａｓｅ）を添加し、３８℃で１時間処理した
。
ので、ＲＮＡを破壊する目的で１ｆｆ１１あたり３０〜
４０μｇの牛膵由来ＲＮＡ分解酵素（Ｐａｎｃｒｅａｔ
ｉｃ ＲＮａｓｅ）を添加し、３８℃で１時間処理した
。
処理後、酢酸カリウム２％と６倍容量のエタノールを添
加し、生じた沈澱を遠心処理により集ｔ１蒸溜水に溶解
し、２００ ｘｇで遠心処理した。得られた上清を蒸溜
水に対して透析し、透析内液を濃縮し抽出例３による標
品とした。収量はウロン酸定量によりナンバンギセルの
種子１ｇあたり３８ ｍｇであった。
加し、生じた沈澱を遠心処理により集ｔ１蒸溜水に溶解
し、２００ ｘｇで遠心処理した。得られた上清を蒸溜
水に対して透析し、透析内液を濃縮し抽出例３による標
品とした。収量はウロン酸定量によりナンバンギセルの
種子１ｇあたり３８ ｍｇであった。
本発明における抽出物質は、ナンバンギセルの種子から
蒸溜水、特にリン酸緩衝生理食塩水により抽出されるか
、またはモリソン等の方法（ｉｌｏｒｒｉｓｏｎ＆Ｌｅ
ｉｖｅ、 Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｏｌ
ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍ Ｂｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ ０１１ＣＢ４ Ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂ
ｙ Ｔｗｏ Ｂｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒ
ｅｓ、Ｊ、Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ２５０；２９１１
−２９１９．１９７５） 、更に同様の方法であるウェ
ストファール等の方法（Ｗｅｓｔｐｈａｌ、口、、ａｎ
ｄ Ｌｕｄｅｒｉｔｚ、０．Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｂｒ
ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ ｗｏｎ Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ
ｃｈｒｉｄｅｎ ｇｒａｍｍｎｅｇａｔｉｖｅｒ Ｂａ
ｋｔｅｒｉｅｎｌ ＾１ｇｅｗ、Ｃｈｅｍ。
蒸溜水、特にリン酸緩衝生理食塩水により抽出されるか
、またはモリソン等の方法（ｉｌｏｒｒｉｓｏｎ＆Ｌｅ
ｉｖｅ、 Ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｏｌ
ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍ Ｂｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ ０１１ＣＢ４ Ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂ
ｙ Ｔｗｏ Ｂｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒ
ｅｓ、Ｊ、Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 ２５０；２９１１
−２９１９．１９７５） 、更に同様の方法であるウェ
ストファール等の方法（Ｗｅｓｔｐｈａｌ、口、、ａｎ
ｄ Ｌｕｄｅｒｉｔｚ、０．Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｂｒ
ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ ｗｏｎ Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ
ｃｈｒｉｄｅｎ ｇｒａｍｍｎｅｇａｔｉｖｅｒ Ｂａ
ｋｔｅｒｉｅｎｌ ＾１ｇｅｗ、Ｃｈｅｍ。
６６ ；４０７−４１７．１９５４）により得られる高
分子多糖体である。
分子多糖体である。
抽出物質における多糖類の構造、組成は、いまだ充分に
は判明していないが、ナンバンギセルの種子を抽出する
際に、ウェストファール等の方法により水飽和フェノー
ルで抽出すると、蛋白質成分が殆ど結合していない多糖
類が得られ、一方、モリソン等の方法を使用し、水飽和
ｎ−ブタノールにより抽出すると、脂質であるリピドＡ
が蛋白により結合した多糖類が抽出されるものと思われ
る。
は判明していないが、ナンバンギセルの種子を抽出する
際に、ウェストファール等の方法により水飽和フェノー
ルで抽出すると、蛋白質成分が殆ど結合していない多糖
類が得られ、一方、モリソン等の方法を使用し、水飽和
ｎ−ブタノールにより抽出すると、脂質であるリピドＡ
が蛋白により結合した多糖類が抽出されるものと思われ
る。
本発明における抽出物質は、後述するように水可溶性、
ｎ−ブタノール不溶性であり、ＲＮＡ （オルシノール
反応を利用したメジャバウム（Ｍｅｚｂａｕｆｆｌ）法
、および紫外部吸収による）は含有されてなく、分子量
は１０万〜２０万の範囲と思われる。
ｎ−ブタノール不溶性であり、ＲＮＡ （オルシノール
反応を利用したメジャバウム（Ｍｅｚｂａｕｆｆｌ）法
、および紫外部吸収による）は含有されてなく、分子量
は１０万〜２０万の範囲と思われる。
次に、このようにしてナンバンギセルの種子から抽出さ
れる物質が、インターロイキン−２、及びインタ−フェ
ロン−Ｔの誘起能を有することを説明する。
れる物質が、インターロイキン−２、及びインタ−フェ
ロン−Ｔの誘起能を有することを説明する。
まず、上記各抽出例により抽出した多糖類分画について
の化学分析は、次のように行った。
の化学分析は、次のように行った。
ウロン酸の定量は、カルバゾール反応を利用したビター
等の方法（Ｂｉｔｔｅｒ、Ｔ、、ａｎｃｌ ＥｗＩｎｓ
、Ｒ，＾ｍｏｄｉｆｉ＋Ｊ ｃａｒｂａｚｏｌｅ ｒｅ
ａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄｓＢｉ
ｏｃｈｅ＋ｎ、 Ｊ、 ８１；４３．１９６１．）によ
り、またＲＮＡはオルシノール反応を利用したメジャバ
ウムの方法（Ｍｅｚｂａｕｍ、Ｗ、Ｃｏ１ｏｒ ｒｅａ
ｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｃｏｍ
ｐｏｎｅｎｔｓ： Ｉｎ Ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａ
ｃｉｄｓ、（Ｃｈａｒｇａｆｆ。
等の方法（Ｂｉｔｔｅｒ、Ｔ、、ａｎｃｌ ＥｗＩｎｓ
、Ｒ，＾ｍｏｄｉｆｉ＋Ｊ ｃａｒｂａｚｏｌｅ ｒｅ
ａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄｓＢｉ
ｏｃｈｅ＋ｎ、 Ｊ、 ８１；４３．１９６１．）によ
り、またＲＮＡはオルシノール反応を利用したメジャバ
ウムの方法（Ｍｅｚｂａｕｍ、Ｗ、Ｃｏ１ｏｒ ｒｅａ
ｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｃｏｍ
ｐｏｎｅｎｔｓ： Ｉｎ Ｔｈｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａ
ｃｉｄｓ、（Ｃｈａｒｇａｆｆ。
Ｂ、 、 ａｎｄ Ｄａｖｉｄｓｏｎ、 Ｊｌｅｄｉｔ
ｏｒｓ）、＾ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ。
ｏｒｓ）、＾ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ。
〜ｅｗ Ｙａｒｋ、 １； ２８３−３０５．１９３９
． ） 、及び紫外部吸収を指標として定量した。また
蛋白質定量はフォリン等の方法（Ｆｏｌｌｉｎ、０．、
ａｎｄ Ｃ１ｏｃａｌｔｅａｕ、Ｖ、 Ｏｎ ｔｙｒｏ
ｓｉｎｅ ａｎｄ ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｅ ｄｅｔｅ
ｒｍｉｎａｔｉｏｎ １ｎｐｒｏｔｅｉｎｓ、 Ｊ、
口ｉｏ１．Ｃｈｅｍ、７３ ；６２７−６５０．１９
２７．）、及び紫外部吸収を指標として定量した。
． ） 、及び紫外部吸収を指標として定量した。また
蛋白質定量はフォリン等の方法（Ｆｏｌｌｉｎ、０．、
ａｎｄ Ｃ１ｏｃａｌｔｅａｕ、Ｖ、 Ｏｎ ｔｙｒｏ
ｓｉｎｅ ａｎｄ ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｅ ｄｅｔｅ
ｒｍｉｎａｔｉｏｎ １ｎｐｒｏｔｅｉｎｓ、 Ｊ、
口ｉｏ１．Ｃｈｅｍ、７３ ；６２７−６５０．１９
２７．）、及び紫外部吸収を指標として定量した。
ヘパリン添加ヒト末梢血より密度勾配遠心法（密度％１
．０７７ 、Ｂｏｙｕｍ、＾、 ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｍｏｎｏ−ｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ａ
ｎｄ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｈ
ｕｍａｎ ｂｌ。
．０７７ 、Ｂｏｙｕｍ、＾、 ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ
ｏｆ ｍｏｎｏ−ｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ａ
ｎｄ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｈ
ｕｍａｎ ｂｌ。
ｏｄ、５ｃａｎ、Ｊ、［”ｌｉｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、 ２
１ ；７７−８９．１９６７、）を用いて、末梢血単核
球（以下、ＰＢＭＣという）を分離し、１０％胎児牛血
清を含有する白血球増殖培養液（ＲＰＭＩ−１６４０）
を使用して１０７／ ｍｌの細胞浮遊液を調製した。
１ ；７７−８９．１９６７、）を用いて、末梢血単核
球（以下、ＰＢＭＣという）を分離し、１０％胎児牛血
清を含有する白血球増殖培養液（ＲＰＭＩ−１６４０）
を使用して１０７／ ｍｌの細胞浮遊液を調製した。
このＰＢＭＣ浮遊液１ ｍｌに上記各抽出例で抽出した
各分画を各々１ ｍＡ添加し、５％炭酸ガスを含む空気
中で３７℃で２４時間、４８時間培養した。
各分画を各々１ ｍＡ添加し、５％炭酸ガスを含む空気
中で３７℃で２４時間、４８時間培養した。
この培養上清を５００ｘｇ、 １５分間遠心した後、ミ
リポアフィルタ−を通して無菌化した標品を得、以下に
記載するＩＬ−２、及び■ＦＮ−γ活性検索に供した。
リポアフィルタ−を通して無菌化した標品を得、以下に
記載するＩＬ−２、及び■ＦＮ−γ活性検索に供した。
ＩＬ−２活性測定法
細胞増殖がＩＬ−２依存性であるＣＴＬＬ細胞を、９６
穴マイクロプレートに、１０％被検標品を含む増殖培養
液５００μｌに５Ｘ１０’個のＣＴＬＬ細胞を浮遊させ
各ホールに植え込み、５％炭酸ガス培養器中で３７℃で
２４時間培養した。その後各ホールに３Ｈ−チミジン（
アマジャム社、 １１） ５０μＣｉを添加して更に１
６時間培養を継続し、３Ｈチミジンの取り込み量を液体
シンチレーションカウンターで測定した。この場合、Ｉ
Ｌ−２力価の算定は、組み換え型ＩＬ−２（ジオツギ社
製）を、最終濃度５．０．２．５．１．２５．０，６３
．０６３１単位／ｍｌになるように調製した標準標品に
よりＣＴＬＬ細胞を処理した場合の３Ｈ−チミジンの取
り込み量より換算した。
穴マイクロプレートに、１０％被検標品を含む増殖培養
液５００μｌに５Ｘ１０’個のＣＴＬＬ細胞を浮遊させ
各ホールに植え込み、５％炭酸ガス培養器中で３７℃で
２４時間培養した。その後各ホールに３Ｈ−チミジン（
アマジャム社、 １１） ５０μＣｉを添加して更に１
６時間培養を継続し、３Ｈチミジンの取り込み量を液体
シンチレーションカウンターで測定した。この場合、Ｉ
Ｌ−２力価の算定は、組み換え型ＩＬ−２（ジオツギ社
製）を、最終濃度５．０．２．５．１．２５．０，６３
．０６３１単位／ｍｌになるように調製した標準標品に
よりＣＴＬＬ細胞を処理した場合の３Ｈ−チミジンの取
り込み量より換算した。
ＩＦＮ−ｒ活性測定法
ヒト羊膜由来ＰＬ細胞（１０８）を６０１１１ｍ径のプ
ラスチックベトリ皿に植え込み、５％炭酸ガス培養器中
で３７℃、２日間培養し、ＰＬ単層細胞を調製した。
ラスチックベトリ皿に植え込み、５％炭酸ガス培養器中
で３７℃、２日間培養し、ＰＬ単層細胞を調製した。
次に被検標品０．２ｍｊ！に最少必須培地０．８ｆｆｌ
Ｉｌを添加して、被検標品の５倍希釈したちの０．５ｍ
ｌによりＦＬ単層培養細胞を１２時間、３７℃で処理し
た。その後この処理ＦＬ単層培養細胞における水痘性口
内炎ウィルス（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ Ｓｔｏｍａｔｉｔ
ｉｓ ｖｉｒｕｓ 、以下、ＶＳＶという）のブラック
形成能を、未処理ＰＬ単層培養細胞でのＶＳＶブラック
形成能との比較により算定した。ＩＦＮ力価はｖＳＶブ
ラック形成能を５０％減じるために必要な被検標品の最
高希釈率でもって表現される。
Ｉｌを添加して、被検標品の５倍希釈したちの０．５ｍ
ｌによりＦＬ単層培養細胞を１２時間、３７℃で処理し
た。その後この処理ＦＬ単層培養細胞における水痘性口
内炎ウィルス（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ Ｓｔｏｍａｔｉｔ
ｉｓ ｖｉｒｕｓ 、以下、ＶＳＶという）のブラック
形成能を、未処理ＰＬ単層培養細胞でのＶＳＶブラック
形成能との比較により算定した。ＩＦＮ力価はｖＳＶブ
ラック形成能を５０％減じるために必要な被検標品の最
高希釈率でもって表現される。
ＩＦＨのタイピング方法
被検標品中に含有されるＩＦＮのタイピングは、被検標
品０．２＋ｎＩｌに抗ＩＦＮ−α／β抗体（米国国立衛
生研究所（ＮＩＨ） ＩＮＣ，米国）を０．２＋＋＋ｊ
！、そして被検標品０，２ｍｌに抗ＩＦＮ−ｒ抗体（イ
ンターフェロン サイエンシーズＪＮＣ，米国）０．２
ｍｌを添加して、３０分間、３７℃で培養した後、最少
必須培地０．６ｍｊ！を添加して総容量１１Ｔｌ′ｌと
し、この標品０．５ｍＪによりＰＬ単層培養細胞を３７
℃、１２時間処理し、上記同様にＶＳＶブラック減少率
を測定した。尚抗ＩＦＮ−α／β抗体、或いは抗ＩＦＮ
−ｒ抗体は、ＩＦＮ−α、またはＩ ＦＮ−βの１００
単位、或いはＩＦＮ−ｒの１００単位を中和する力価を
有するように調製し、試験に供した。
品０．２＋ｎＩｌに抗ＩＦＮ−α／β抗体（米国国立衛
生研究所（ＮＩＨ） ＩＮＣ，米国）を０．２＋＋＋ｊ
！、そして被検標品０，２ｍｌに抗ＩＦＮ−ｒ抗体（イ
ンターフェロン サイエンシーズＪＮＣ，米国）０．２
ｍｌを添加して、３０分間、３７℃で培養した後、最少
必須培地０．６ｍｊ！を添加して総容量１１Ｔｌ′ｌと
し、この標品０．５ｍＪによりＰＬ単層培養細胞を３７
℃、１２時間処理し、上記同様にＶＳＶブラック減少率
を測定した。尚抗ＩＦＮ−α／β抗体、或いは抗ＩＦＮ
−ｒ抗体は、ＩＦＮ−α、またはＩ ＦＮ−βの１００
単位、或いはＩＦＮ−ｒの１００単位を中和する力価を
有するように調製し、試験に供した。
抽出物のクロマトグラフィー
抽出例２で調製した抽出物を、カラムクロマトグラフィ
ー （５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２００フアーマシア、ス
工−デン、カラムサイズ；φ０．９ＣＩ！ｌ Ｘ３０Ｃ
Ｔ１１）を使用し、０．１５モルＮａ Ｃｆ−０，０２
モルＴｒｉｓ−ＨＣ１ｌ緩衝液（ｐＨ７，４）により溶
出させ、１分画２Ｉｎｌとして２０分画採取した。それ
ぞれの分画について、ＰＢＭＣ１ｘｌＯ’個／ｒｎｌｌ
を２４穴プレートの各ホールに植え込み、更に、各分画
０．ＩＪずつ添加して２４時間、３７℃で培養した。そ
の後培養上清を採取し、ＩＦＮ活性、ＩＬ−２活性を測
定した。
ー （５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２００フアーマシア、ス
工−デン、カラムサイズ；φ０．９ＣＩ！ｌ Ｘ３０Ｃ
Ｔ１１）を使用し、０．１５モルＮａ Ｃｆ−０，０２
モルＴｒｉｓ−ＨＣ１ｌ緩衝液（ｐＨ７，４）により溶
出させ、１分画２Ｉｎｌとして２０分画採取した。それ
ぞれの分画について、ＰＢＭＣ１ｘｌＯ’個／ｒｎｌｌ
を２４穴プレートの各ホールに植え込み、更に、各分画
０．ＩＪずつ添加して２４時間、３７℃で培養した。そ
の後培養上清を採取し、ＩＦＮ活性、ＩＬ−２活性を測
定した。
次に、抽出例１で抽出した粗抽出標品のＩＬ−２誘導能
測定方法を示す。
測定方法を示す。
抽出例１で抽出した粗抽出標品とＰＢＭＣとを、２４時
間、４８時間培養して調製した培養上清について、上記
ＩＬ−２シー２力 した。
間、４８時間培養して調製した培養上清について、上記
ＩＬ−２シー２力 した。
第８１！ｌは標準ＩＬ−２（組み換えＩＬ−２）を用い
て作成された定量曲線であり、横軸は標準■Ｌ−２（単
位／ｍｌ）、縦軸は３Ｈ−チミジンの取り込み量を表す
。上言己２４時間、４８時間培養して調製した培養上清
についての、それぞれの３Ｈ−チミジンの取り込みを示
すカウント数（単位はＤＰＭ）を計測し、第８図により
そのカウント数に相当するＩＬ−２ （単位／ｍＡ）を
求めた結果を第１表に示す。
て作成された定量曲線であり、横軸は標準■Ｌ−２（単
位／ｍｌ）、縦軸は３Ｈ−チミジンの取り込み量を表す
。上言己２４時間、４８時間培養して調製した培養上清
についての、それぞれの３Ｈ−チミジンの取り込みを示
すカウント数（単位はＤＰＭ）を計測し、第８図により
そのカウント数に相当するＩＬ−２ （単位／ｍＡ）を
求めた結果を第１表に示す。
第１表により本発明におけるナンバツギセルの種子の粗
抽出標品は、ＩＬ−２誘導能を有していることがｍ認さ
れる。
抽出標品は、ＩＬ−２誘導能を有していることがｍ認さ
れる。
次に、抽出例１で調製したナンバツギセルの種子の粗抽
出標品のＩＦＮ産生能測定方法を示す。
出標品のＩＦＮ産生能測定方法を示す。
抽出例１で調製したナンバツギセルの種子の粗抽出標品
とＰＢＭＣとを、２４時間、或いは４８時間培養した後
採取し、得られた上清を１０倍に希釈したものにより、
ＰＬ単層培養細胞を処理して■Ｓ■ブラック形成能を測
定した。またブラック減少率は下式により算出される。
とＰＢＭＣとを、２４時間、或いは４８時間培養した後
採取し、得られた上清を１０倍に希釈したものにより、
ＰＬ単層培養細胞を処理して■Ｓ■ブラック形成能を測
定した。またブラック減少率は下式により算出される。
２回にわたって実験した結果を第２表に示す。
第２表
ナンバツギセルの種子の粗抽出標品によりＰＢＭＣを２
４時間処理して得た培養上清を５倍に希釈した標品を本
実験で使用した。２回実験し、その測定結果を第３表に
示す。
４時間処理して得た培養上清を５倍に希釈した標品を本
実験で使用した。２回実験し、その測定結果を第３表に
示す。
第３表
第２表により、ナンバツギセルの種子の粗抽出標品は、
ＩＦＮ産生能を有していることが確認される。特に２４
時間標品は、４８時聞標品に比較してＩＦＮ活性が高値
である。
ＩＦＮ産生能を有していることが確認される。特に２４
時間標品は、４８時聞標品に比較してＩＦＮ活性が高値
である。
続いて、ナンバツギセルの種子の粗抽出標品より誘導さ
れるＩＦＮのタイピング方法を示す。
れるＩＦＮのタイピング方法を示す。
尚、表の数値はブラック数を示し、２プレートの平均値
を示す。（）内の数値は、未処理対照ＰＬ単層培養細胞
上でのＶＳｖブラック数に対する抗体処理、或いは未処
理被検ＩＦＮａ品で処理したＰＬ単層培養細胞上でのＶ
ＳＶブラック数の減少率（％）を示している。
を示す。（）内の数値は、未処理対照ＰＬ単層培養細胞
上でのＶＳｖブラック数に対する抗体処理、或いは未処
理被検ＩＦＮａ品で処理したＰＬ単層培養細胞上でのＶ
ＳＶブラック数の減少率（％）を示している。
本実験によりナンバツギセルの種子の粗抽出標品は、Ｉ
ＦＮ−ｒ誘導能を有していることが確認される。
ＦＮ−ｒ誘導能を有していることが確認される。
また、ナンバツギセルの種子の粗抽出標品を上記クロマ
トグラフィーにかけ、その各分画におけるＩＬ−２、及
びＩＦＮ誘導能の検索、及びウロン酸（００５３０ｎｍ
、カルバゾール反応）、蛋白質（ＯＤＤ ２８Ｏｒ＋
＋ｎ）の定量を行い、その結果を第９図に示す。尚この
測定においてＩＦＮ力価は５倍希釈品についてのＶＳＶ
ブラック減少率（％）を示す。
トグラフィーにかけ、その各分画におけるＩＬ−２、及
びＩＦＮ誘導能の検索、及びウロン酸（００５３０ｎｍ
、カルバゾール反応）、蛋白質（ＯＤＤ ２８Ｏｒ＋
＋ｎ）の定量を行い、その結果を第９図に示す。尚この
測定においてＩＦＮ力価は５倍希釈品についてのＶＳＶ
ブラック減少率（％）を示す。
第９図かられかるように、各分画におけるＩＬ−２、及
びＩＦＮ誘導能、ウロン酸量、及び蛋白質量は同一の傾
向を示しており、このことから本発明の粗抽田物は単一
物質であることが想定される。
びＩＦＮ誘導能、ウロン酸量、及び蛋白質量は同一の傾
向を示しており、このことから本発明の粗抽田物は単一
物質であることが想定される。
次に、ナンバツギセルの種子から抽出例２、および抽出
例３により調製した分画をそれぞれ５００μｇウロン酸
定量による）ずつ用いて、ＰＢＭＣを２４時間刺激して
、その培養上清についてＩＬ２力価を測定した。ＰＢＭ
ＣはＡ、Ｂ、Ｃ，Ｄ。
例３により調製した分画をそれぞれ５００μｇウロン酸
定量による）ずつ用いて、ＰＢＭＣを２４時間刺激して
、その培養上清についてＩＬ２力価を測定した。ＰＢＭ
ＣはＡ、Ｂ、Ｃ，Ｄ。
Ｅ、Ｆの６人の人から調製した。ＩＬ−２力価の測定結
果について下記第４表に示す。
果について下記第４表に示す。
単位は、単位／ｍβ。
第４表
第４表かられかるように、抽出例２、抽出例３により調
製した抽出物はいずれもＩＬ−２誘導能を有するが、抽
出例２による抽出物はより強い工Ｌ−２誘導能を保有す
ることが明らかである。
製した抽出物はいずれもＩＬ−２誘導能を有するが、抽
出例２による抽出物はより強い工Ｌ−２誘導能を保有す
ることが明らかである。
また下記第５表に抽出例２、抽出例３により調製した抽
出物のＩＦＮ−γ力価の測定結果を示す。
出物のＩＦＮ−γ力価の測定結果を示す。
測定にあたっては、まず抽出例２、抽出例３により調製
した各多糖類分画により２４時間、ＰＢＭＣを処理して
得た培養上清を５倍に希釈し、この希釈した標品を抗Ｉ
ＦＮ−γ処理したもの、または未処理のものにわけ、次
いでこの標品をＦＬ単層培養細胞を処理してＶＳＶブラ
ックを形成させ、抗ＩＦＮ−γ処理、または未処理のＰ
Ｌ単層培養細胞でのｖＳＶブラック数を比較したもので
ある。
した各多糖類分画により２４時間、ＰＢＭＣを処理して
得た培養上清を５倍に希釈し、この希釈した標品を抗Ｉ
ＦＮ−γ処理したもの、または未処理のものにわけ、次
いでこの標品をＦＬ単層培養細胞を処理してＶＳＶブラ
ックを形成させ、抗ＩＦＮ−γ処理、または未処理のＰ
Ｌ単層培養細胞でのｖＳＶブラック数を比較したもので
ある。
尚、数値は減少率（％）を示す。
第５表
この第５表から分かるように抽出例２、抽出例３により
抽出されたものは、共に強いＩＦＮ−ｒ誘導能を保有し
ていることがわかる。
抽出されたものは、共に強いＩＦＮ−ｒ誘導能を保有し
ていることがわかる。
次に、抽出例２で調製した多糖類分画でＰＢＭＣを２４
時間ｖＪＷＩＬで得た培養上清について、ＩＬ２、及び
ＩＦＮ力価を測定した結果を第１０図に示す。ＩＦＮ力
価はＰＢＭＣ上清を５倍希釈した標品についてＶＳＶの
ブラック減少率により測定した。尚、黒丸によりＩＬ−
２活性の推移を示し、白三角によりＩＦＮ力価の推移を
示す。
時間ｖＪＷＩＬで得た培養上清について、ＩＬ２、及び
ＩＦＮ力価を測定した結果を第１０図に示す。ＩＦＮ力
価はＰＢＭＣ上清を５倍希釈した標品についてＶＳＶの
ブラック減少率により測定した。尚、黒丸によりＩＬ−
２活性の推移を示し、白三角によりＩＦＮ力価の推移を
示す。
第１０図かられかるように、多糖類の量に応じてＩＬ−
２、ＩＦＮ力価共に増大することがわかる。
２、ＩＦＮ力価共に増大することがわかる。
また、バルブ−シーマウス（Ｂａｌｂ−Ｃマウス）１０
匹の腹腔に抽出例２で調製した多糖類を、ウロン酸定量
で５００μｇを１ ｆｆ１ｇ、３ ｒｎｇを注射したが
、２８日後においても異常は認められなかった。
匹の腹腔に抽出例２で調製した多糖類を、ウロン酸定量
で５００μｇを１ ｆｆ１ｇ、３ ｒｎｇを注射したが
、２８日後においても異常は認められなかった。
本発明は、上記各抽出例により抽出されるＩＬ−２、Ｉ
ＦＮ誘起剤が、抗癌剤として作用することを見出したも
のである。
ＦＮ誘起剤が、抗癌剤として作用することを見出したも
のである。
以下、実施例により本発明を説明する。
尚、下記実施例においては、動物としてｄｄＹマウスを
、腫瘍細胞としてｄｄＹマウスに移植可能なＳａｒｃｏ
ｍａ−１８０（以下、Ｓ−１８０という）を用いた。
、腫瘍細胞としてｄｄＹマウスに移植可能なＳａｒｃｏ
ｍａ−１８０（以下、Ｓ−１８０という）を用いた。
また、下記実施例においては、上記抽出例２により得ら
れるものを抽出物２、抽出例３により得られるものを抽
出物３と称する。
れるものを抽出物２、抽出例３により得られるものを抽
出物３と称する。
〔実施例１〕
腹水型腫瘍に及ぼす抽出物２の治療効果ｄｄＹ７ウスに
、２Ｘ１０６個のＳ−１８０腫瘍細胞を腹腔内に移植し
生存率を見た。
、２Ｘ１０６個のＳ−１８０腫瘍細胞を腹腔内に移植し
生存率を見た。
第１１！ｌに示すように、抽出物２の投与を受けないマ
ウス（△印）はＳ−１８０の移植を受けた１７日目まで
にすべてのマウス（６匹）が腫瘍死した。
ウス（△印）はＳ−１８０の移植を受けた１７日目まで
にすべてのマウス（６匹）が腫瘍死した。
それに対して、腫瘍移植の同日から２日ごとに抽出物２
を０．６■／ｋｇ（目印）、１．２■／ｋｇ（十印）
、２．５ ｍｇ／ｋｇ （◇印）を腹腔内に投与したマ
ウスはいずれも生存率が上昇した。
を０．６■／ｋｇ（目印）、１．２■／ｋｇ（十印）
、２．５ ｍｇ／ｋｇ （◇印）を腹腔内に投与したマ
ウスはいずれも生存率が上昇した。
即ち、腫瘍移植後２９日目までに、抽出物２を０．６■
／ｋｇ投与したマウスは６匹中３匹が、また１、２■／
ｋｇ投与群では６匹中５匹が、更に２．５■／ｋｇ投与
群では６匹中４匹が生存した。
／ｋｇ投与したマウスは６匹中３匹が、また１、２■／
ｋｇ投与群では６匹中５匹が、更に２．５■／ｋｇ投与
群では６匹中４匹が生存した。
尚、データには示さないが、正常マウスに０．６■／
ｋｇ〜２，５■／ｋｇを２日おきに投与してもＳ忍む゛
べき副作用はなかった。
ｋｇ〜２，５■／ｋｇを２日おきに投与してもＳ忍む゛
べき副作用はなかった。
次に、担癌マウスにおける腹腔内腫瘍細胞の増殖を体重
増加で評価した結果を第２図に示す。
増加で評価した結果を第２図に示す。
抽出物２の投与を受けなかった担癌マウス（印）は、腫
瘍を腹腔内に移植後２０ｇＪＪ上の体重増加を示したが
、０．６■／ｋｇ（−印）、１．２■／ ｋｇ （−−
−口印）、２．５■／ｋｇ（・・・印）の投与を受けて
２９日目まで生存したマウスの体重増加はいずれも５ｇ
以内であった。
瘍を腹腔内に移植後２０ｇＪＪ上の体重増加を示したが
、０．６■／ｋｇ（−印）、１．２■／ ｋｇ （−−
−口印）、２．５■／ｋｇ（・・・印）の投与を受けて
２９日目まで生存したマウスの体重増加はいずれも５ｇ
以内であった。
〔実施例２〕
長期生存（２９日以上）したマウスに、投薬を中止し、
再度、Ｓ−１８０腫瘍細胞を腹腔内に再移植した結果を
第３図において、目印で示す。
再度、Ｓ−１８０腫瘍細胞を腹腔内に再移植した結果を
第３図において、目印で示す。
また、対照群として無処置のｄｄＹマウスに５１８０を
移植した場合をΔ印で示す。
移植した場合をΔ印で示す。
第３図から明らかなように、長期生存マウスにおいては
、再移植後においても対照群に比して著明に生存率が高
かった。
、再移植後においても対照群に比して著明に生存率が高
かった。
また、これらの実験群における体重変化を第４図に示す
。
。
第４図かられかるように、長期生存マウスに８１８０を
再移植した場合（□印）には、対照群（−一一一印）に
比して体重増加の抑制が顕著であった。
再移植した場合（□印）には、対照群（−一一一印）に
比して体重増加の抑制が顕著であった。
〔実施例３〕
（抽出物２と抽出物３の抗腫瘍効果に関する比較）ｄｄ
Ｙマウスに２１１０”個のＳ−１８０腫瘍細胞を移植後
、２５■／ｋｇの抽出物２、或いは同量の抽出物３を２
日目ごとに投与して生存率を見た。その結果を第５図に
示す。
Ｙマウスに２１１０”個のＳ−１８０腫瘍細胞を移植後
、２５■／ｋｇの抽出物２、或いは同量の抽出物３を２
日目ごとに投与して生存率を見た。その結果を第５図に
示す。
第５図かられかるように、生存率は抽出物２投与群（目
印）が抽出物３投与群（十印）に比してわずかに高かっ
た。
印）が抽出物３投与群（十印）に比してわずかに高かっ
た。
次に、これらの処理マウスにおける腫瘍増殖の抑制度を
体重増加の抑制度で見た結果を第６図に示す。
体重増加の抑制度で見た結果を第６図に示す。
この場合にも、抽出物２投与群（□印）が抽出物３投与
群に比して僅かに抑制度が強かった。
群に比して僅かに抑制度が強かった。
いずれの投与群も無処理マウスに腫瘍を移植したとき（
・・・・印）と比較した場合には著明な抑制効果が見ら
れた。
・・・・印）と比較した場合には著明な抑制効果が見ら
れた。
〔実施例４〕
（皮下移植腫瘍への抽出物２の抗腫瘍効果）ｄｄＹ７ウ
ス背部皮下に、ｌＸｌ０’個のＳ−１８０の腫瘍細胞を
移植後５日目より腫瘍内に抽出物２を連日投与した後の
腫瘍の大きさで比較した結果を第７図に示す。
ス背部皮下に、ｌＸｌ０’個のＳ−１８０の腫瘍細胞を
移植後５日目より腫瘍内に抽出物２を連日投与した後の
腫瘍の大きさで比較した結果を第７図に示す。
これかられかるように、０．５■／ｋｇ投与群（・・・
・印）、２．５■／ｋｇ投与群（−一一一印）とも非投
与群（−印）に比して著明な腫瘍増殖抑制が見られたが
、特に２，５■／ｋｇ投与群においてはほぼ完全に腫瘍
の増殖は抑制された。
・印）、２．５■／ｋｇ投与群（−一一一印）とも非投
与群（−印）に比して著明な腫瘍増殖抑制が見られたが
、特に２，５■／ｋｇ投与群においてはほぼ完全に腫瘍
の増殖は抑制された。
本発明は、ナンバツギセルの種子からの抽出物を担癌マ
ウスに投与した場合に、腫瘍増殖抑制作用を有すること
を見いだしたもので、データに示す投与量では認むべき
副作用はなく、癌治療に有用であることが期待される。
ウスに投与した場合に、腫瘍増殖抑制作用を有すること
を見いだしたもので、データに示す投与量では認むべき
副作用はなく、癌治療に有用であることが期待される。
第１図は、腹水型腫瘍に及ぼす本発明の抗癌剤の治療効
果を生存率で説明するための図、第２図は、担癌マウス
における腹腔内腫瘍細胞の増殖を体重増加で説明するた
めの図、第３図は、腫瘍を腹腔内に移植後、本発明の抗
癌剤の投与を受は長期生存したマウスに投薬を中止後、
再度腫瘍を移植した場合の影響を説明するための図、第
４図は、第３図に示す実験群における体重変化を示す図
、第５図は、本発明の抗癌剤である抽出物２と抽出物３
の抗腫瘍効果に関する比較を示す図、第６図は、第５図
に示す処理マウスにおける体重増加の抑制度を示す図、
第７図は、皮下移植腫瘍への抽出物２の抗腫瘍効果を説
明するための図、第８図、第９ＦｇＪ、第１０図はナン
バツギャルの種子からの抽出物がＩＬ−２及びＩＦＮ誘
起能を有することを説明するための図である。 ０／、生存中 丁曽カロイ本−＊＜ｑ） 増ｊＪＤ俸重（９） ’１０生ｒ＋牟 瑞癩−入長（長径Ｘ短径、ｍｍ２） 第８ 図 ２．５０ ５００ １−１イ４５・１六！ 番−一−４つロア峡（ＯＤ５３０ｎｍ：カルバゾールに
ソ止）ゝ−一つ゛ タノパバ○Ｄ２８０ｎｍ）訃−一−
１ Ｌ−２
果を生存率で説明するための図、第２図は、担癌マウス
における腹腔内腫瘍細胞の増殖を体重増加で説明するた
めの図、第３図は、腫瘍を腹腔内に移植後、本発明の抗
癌剤の投与を受は長期生存したマウスに投薬を中止後、
再度腫瘍を移植した場合の影響を説明するための図、第
４図は、第３図に示す実験群における体重変化を示す図
、第５図は、本発明の抗癌剤である抽出物２と抽出物３
の抗腫瘍効果に関する比較を示す図、第６図は、第５図
に示す処理マウスにおける体重増加の抑制度を示す図、
第７図は、皮下移植腫瘍への抽出物２の抗腫瘍効果を説
明するための図、第８図、第９ＦｇＪ、第１０図はナン
バツギャルの種子からの抽出物がＩＬ−２及びＩＦＮ誘
起能を有することを説明するための図である。 ０／、生存中 丁曽カロイ本−＊＜ｑ） 増ｊＪＤ俸重（９） ’１０生ｒ＋牟 瑞癩−入長（長径Ｘ短径、ｍｍ２） 第８ 図 ２．５０ ５００ １−１イ４５・１六！ 番−一−４つロア峡（ＯＤ５３０ｎｍ：カルバゾールに
ソ止）ゝ−一つ゛ タノパバ○Ｄ２８０ｎｍ）訃−一−
１ Ｌ−２
Claims (3)
- （１）ナンバンギセルの種子から抽出され、インタ−ロ
イキン−２及びインタ−フェロン−γ誘起能を有する抽
出物からなる抗癌剤。 - （２）前記抽出物が、ナンバンギセルの種子より水飽和
ブタノールにより抽出され、得られた水層をプロナーゼ
処理し、その沈澱除去液を限外濾過して回収されるもの
である請求項１記載の抗癌剤。 - （３）前記抽出物が、ナンバンギセルの種子より水飽和
フェノールにより抽出され、得られた水層を酢酸カリウ
ム、及びエタノール処理し、その沈澱除去液を蒸溜水に
対して透析し、その透析内液よりＲＮＡを除去後、得ら
れた水層を更に酢酸カリウム、及びエタノール処理し、
沈澱除去液を蒸溜水に対して透析し、その透析内液を濃
縮することにより得られるものである請求項１記載の抗
癌剤。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2171978A JPH0645550B2 (ja) | 1990-06-27 | 1990-06-27 | 抗癌剤 |
| EP19910911865 EP0489178A4 (en) | 1990-06-27 | 1991-06-27 | Antitumor agent |
| PCT/JP1991/000864 WO1992000086A1 (fr) | 1990-06-27 | 1991-06-27 | Agent antitumoral |
| US08/048,206 US5366725A (en) | 1990-06-27 | 1993-04-20 | Method for the treatment of cancer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2171978A JPH0645550B2 (ja) | 1990-06-27 | 1990-06-27 | 抗癌剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0459732A true JPH0459732A (ja) | 1992-02-26 |
| JPH0645550B2 JPH0645550B2 (ja) | 1994-06-15 |
Family
ID=15933273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2171978A Expired - Fee Related JPH0645550B2 (ja) | 1990-06-27 | 1990-06-27 | 抗癌剤 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0489178A4 (ja) |
| JP (1) | JPH0645550B2 (ja) |
| WO (1) | WO1992000086A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0798111B2 (ja) * | 1986-06-14 | 1995-10-25 | 岩瀬プリンス株式会社 | 布団等のミシン装置 |
| DE60220949T2 (de) | 2001-12-20 | 2008-03-06 | Bone Support Ab | Neuer knochenmineralien-ersatzstoff |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3070086D1 (en) * | 1979-12-03 | 1985-03-14 | Kitasato Inst | A process for preparing substances having interferon inducing activity |
| JPS57118519A (en) * | 1980-12-02 | 1982-07-23 | Kitasato Inst:The | Preparation of interferon-inducing agent |
| JPS61263923A (ja) * | 1985-05-17 | 1986-11-21 | Tsumura Juntendo Inc | インタ−ロイキン−２誘起剤 |
| JPH0283331A (ja) * | 1988-09-17 | 1990-03-23 | Shinya Okubo | インターロイキン−２、及びインターフェロン−γ誘起剤とその製造方法 |
-
1990
- 1990-06-27 JP JP2171978A patent/JPH0645550B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1991
- 1991-06-27 WO PCT/JP1991/000864 patent/WO1992000086A1/ja not_active Ceased
- 1991-06-27 EP EP19910911865 patent/EP0489178A4/en not_active Withdrawn
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1992000086A1 (fr) | 1992-01-09 |
| JPH0645550B2 (ja) | 1994-06-15 |
| EP0489178A1 (en) | 1992-06-10 |
| EP0489178A4 (en) | 1993-04-28 |
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