JPH0468588B2 - - Google Patents
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- JPH0468588B2 JPH0468588B2 JP56171467A JP17146781A JPH0468588B2 JP H0468588 B2 JPH0468588 B2 JP H0468588B2 JP 56171467 A JP56171467 A JP 56171467A JP 17146781 A JP17146781 A JP 17146781A JP H0468588 B2 JPH0468588 B2 JP H0468588B2
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- Japan
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- tube
- substance
- immobilized
- reagent
- antigen
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
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- Biomedical Technology (AREA)
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- Cell Biology (AREA)
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- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
本発明は、免疫学的凝集反応を利用してヒトま
たは動物の体液中の成分を検出ないし測定する免
疫学的検査管に関する。抗原と抗体との反応を利
用してそのいずれか一方を免疫学的に検出または
定量する場合に、測定したい物質に結合する側の
物質を適当な大きさの担体粒子に固定させてお
き、その粒子が被測定物質の存在下に凝集を起こ
す現象を利用して高感度の測定を行なう方法は免
疫学的臨床検査の重要な手段となつている。ま
た、逆に測定したい物質を粒子に固定しておき、
その被測定物質と特異的に反応する抗原または抗
体の存在による被測定物質固定化粒子の凝集が、
被測定物質の存在により阻止されることにより被
測定物質を検出または定量する方法も免疫学的臨
床検査において広く用いられている。 従来、免疫活性物質固定化微粒子が検体液中の
被測定成分との反応により凝集するか否か、また
は予め準備された試薬と免疫活性物質固定化微粒
子との反応による凝集を検体液中の被測定成分が
阻止するか否かという判定は、主に平板上あるい
はマイクロプレート上で検体と凝集反応用試薬を
混合することにより行なわれている。しかし平板
上で凝集反応は非常に迅速であるが感度が低い。
一方マイクロプレート上での凝集反応は感度が高
いが、判定に要する時間が２時間以上と長い。 本発明者らは、これら従来の欠点を解決すべ
く、高感度で判定時間が短く、かつ簡便な検査管
について検討した結果、本発明に到達した。 すなわち本発明は担体としてポリマーマイクロ
ビーズを用いた免疫学的凝集反応試薬を、毛細管
内で凍結乾燥させてなる免疫学的検査管により達
成できる。 本発明で用いられる凝集反応試薬とは、測定し
たい物質に特異的に結合する物質あるいは測定し
たい物質を担体に固定化させたものである。これ
ら担体に固定化させる物質としては、例えば梅毒
トレポネーマ抗原、リウマチ因子、Ｂ型肝炎表面
抗原（HBs抗原）、HBs抗原に対する抗体（抗
HBs抗体）、トキソプラズマ抗原、ストレプトリ
ジン−Ｏ、抗ストレプトリジンＯ抗体、マイコプ
ラズマ抗原、ヒト繊毛性ゴナドトロピン
（HCG）、抗HCG抗体、熱凝集ヒト免疫グロブリ
ンＧ、核蛋白、デオキシ核酸、抗Ｃ反応性蛋白抗
体、エストロゲン、抗エストロゲン抗体、補体成
分（C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、
C7、C8、C9）およびそれらに対する抗体などの
免疫活性物質が挙げられる。担体としては、ポリ
スチレンラテツクス、その他ポリマーマイクロビ
ーズが挙げられる。 具体的には、特願昭55−58677で用いられるア
クリロニトリルまたはメタクリロニトリルを主成
分とする平均直径0.03ないし10μｍの微粒子を加
水分解して得られる微粒子であり、さらに好まし
くはグルタルアルデヒドで活性化された微粒子で
ある。 免疫活性物質の担体への固定化は、物理吸着イ
オン結合または共有結合によつて行なわれる。 本発明で用いる毛細管は0.5〜５mm、好ましく
は約１mmの均一な内径を有し、さらに好ましくは
50〜100mmの長さのガラスまたはポリメチルメタ
クリレート、ポリスチレン、ポリカーボネート、
ポリ塩化ビニル、ポリスルホンなどのプラスチツ
クを材質とする透明な管状物である。 この毛細管は、検体あるいは凝集反応用試薬を
一定量吸入する目的ピストンあるいはキヤツプ状
ピペツター、さらに目盛を備えている方が好まし
い。 本発明では毛細管に凝集反応試薬を注入した
後、該試薬を凍結乾燥する。凍結乾燥法は通常の
方法で構わないが、液体窒素中で凍結させる方が
好ましい。凝集反応は、血清または血漿などの検
体を毛細管に注入し、凝集反応試薬と混合させて
行なう。凍結乾燥した凝集反応用試薬は、検体と
混合させる前に水で溶解させることが好ましい。
凝集反応には、従来から知られている凝集反応用
添加剤を添加することももちろん可能であ。検体
と試薬を充分に混合させた後、毛細管をほぼ水平
方向に静置させると、数十分後には（＋）像と
（−）像を判別できる沈降像が得られる。 本発明は、Ｕ字型マイクロプレートと同程度の
高感度を示し、しかも判定に要する時間を短縮で
きるという優れた検査管であり、また凍結乾燥し
た凝集反応用試薬は保存性が良いため、予め調整
しておくと、検体を毛細管に注入するだけで検査
ができるという利点もある。 以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に
説明する。 参考例 １ 内径1.2mm、高さ75mmのガラス製ヘマトクリツ
ト管中に、梅毒HA抗原（富士臓器製薬）の抗原
感作ヒツジ血球浮遊液を10μ採り、液体窒素中
で凍結し減圧乾燥した。管中に蒸留水10μを注
入して感作血球を再分散した後、血清希釈液で希
釈した血清を10μ注入し、管軸方向に管を上下
して充分に混合し、水平面上に静置した。30分後
の判定結果を表１および第１図に示す。第１図
中、ａは陽性（＋）、ｂは陰性（−）を示す。な
お、マイクロプレート（Ｕ字型）の場合の沈降像
を比較対照として第２図に示す。第２図は第１図
と同様ａが陽性、ｂが陰性を示す。マイクロプレ
ートの場合は、判定に18時間要した。
たは動物の体液中の成分を検出ないし測定する免
疫学的検査管に関する。抗原と抗体との反応を利
用してそのいずれか一方を免疫学的に検出または
定量する場合に、測定したい物質に結合する側の
物質を適当な大きさの担体粒子に固定させてお
き、その粒子が被測定物質の存在下に凝集を起こ
す現象を利用して高感度の測定を行なう方法は免
疫学的臨床検査の重要な手段となつている。ま
た、逆に測定したい物質を粒子に固定しておき、
その被測定物質と特異的に反応する抗原または抗
体の存在による被測定物質固定化粒子の凝集が、
被測定物質の存在により阻止されることにより被
測定物質を検出または定量する方法も免疫学的臨
床検査において広く用いられている。 従来、免疫活性物質固定化微粒子が検体液中の
被測定成分との反応により凝集するか否か、また
は予め準備された試薬と免疫活性物質固定化微粒
子との反応による凝集を検体液中の被測定成分が
阻止するか否かという判定は、主に平板上あるい
はマイクロプレート上で検体と凝集反応用試薬を
混合することにより行なわれている。しかし平板
上で凝集反応は非常に迅速であるが感度が低い。
一方マイクロプレート上での凝集反応は感度が高
いが、判定に要する時間が２時間以上と長い。 本発明者らは、これら従来の欠点を解決すべ
く、高感度で判定時間が短く、かつ簡便な検査管
について検討した結果、本発明に到達した。 すなわち本発明は担体としてポリマーマイクロ
ビーズを用いた免疫学的凝集反応試薬を、毛細管
内で凍結乾燥させてなる免疫学的検査管により達
成できる。 本発明で用いられる凝集反応試薬とは、測定し
たい物質に特異的に結合する物質あるいは測定し
たい物質を担体に固定化させたものである。これ
ら担体に固定化させる物質としては、例えば梅毒
トレポネーマ抗原、リウマチ因子、Ｂ型肝炎表面
抗原（HBs抗原）、HBs抗原に対する抗体（抗
HBs抗体）、トキソプラズマ抗原、ストレプトリ
ジン−Ｏ、抗ストレプトリジンＯ抗体、マイコプ
ラズマ抗原、ヒト繊毛性ゴナドトロピン
（HCG）、抗HCG抗体、熱凝集ヒト免疫グロブリ
ンＧ、核蛋白、デオキシ核酸、抗Ｃ反応性蛋白抗
体、エストロゲン、抗エストロゲン抗体、補体成
分（C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、
C7、C8、C9）およびそれらに対する抗体などの
免疫活性物質が挙げられる。担体としては、ポリ
スチレンラテツクス、その他ポリマーマイクロビ
ーズが挙げられる。 具体的には、特願昭55−58677で用いられるア
クリロニトリルまたはメタクリロニトリルを主成
分とする平均直径0.03ないし10μｍの微粒子を加
水分解して得られる微粒子であり、さらに好まし
くはグルタルアルデヒドで活性化された微粒子で
ある。 免疫活性物質の担体への固定化は、物理吸着イ
オン結合または共有結合によつて行なわれる。 本発明で用いる毛細管は0.5〜５mm、好ましく
は約１mmの均一な内径を有し、さらに好ましくは
50〜100mmの長さのガラスまたはポリメチルメタ
クリレート、ポリスチレン、ポリカーボネート、
ポリ塩化ビニル、ポリスルホンなどのプラスチツ
クを材質とする透明な管状物である。 この毛細管は、検体あるいは凝集反応用試薬を
一定量吸入する目的ピストンあるいはキヤツプ状
ピペツター、さらに目盛を備えている方が好まし
い。 本発明では毛細管に凝集反応試薬を注入した
後、該試薬を凍結乾燥する。凍結乾燥法は通常の
方法で構わないが、液体窒素中で凍結させる方が
好ましい。凝集反応は、血清または血漿などの検
体を毛細管に注入し、凝集反応試薬と混合させて
行なう。凍結乾燥した凝集反応用試薬は、検体と
混合させる前に水で溶解させることが好ましい。
凝集反応には、従来から知られている凝集反応用
添加剤を添加することももちろん可能であ。検体
と試薬を充分に混合させた後、毛細管をほぼ水平
方向に静置させると、数十分後には（＋）像と
（−）像を判別できる沈降像が得られる。 本発明は、Ｕ字型マイクロプレートと同程度の
高感度を示し、しかも判定に要する時間を短縮で
きるという優れた検査管であり、また凍結乾燥し
た凝集反応用試薬は保存性が良いため、予め調整
しておくと、検体を毛細管に注入するだけで検査
ができるという利点もある。 以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に
説明する。 参考例 １ 内径1.2mm、高さ75mmのガラス製ヘマトクリツ
ト管中に、梅毒HA抗原（富士臓器製薬）の抗原
感作ヒツジ血球浮遊液を10μ採り、液体窒素中
で凍結し減圧乾燥した。管中に蒸留水10μを注
入して感作血球を再分散した後、血清希釈液で希
釈した血清を10μ注入し、管軸方向に管を上下
して充分に混合し、水平面上に静置した。30分後
の判定結果を表１および第１図に示す。第１図
中、ａは陽性（＋）、ｂは陰性（−）を示す。な
お、マイクロプレート（Ｕ字型）の場合の沈降像
を比較対照として第２図に示す。第２図は第１図
と同様ａが陽性、ｂが陰性を示す。マイクロプレ
ートの場合は、判定に18時間要した。
【表】
＊ 管内における最終希釈倍率
実施例 １ 参考例１と同様のヘマトクリツト管中に特願昭
55−58677に記載のBSA固定化ポリマーマイクロ
ビーズ分散液10μを採り、凍結乾燥した。管中
に蒸留水10μを注入してBSA固定化ポリマーマ
イクロビーズを再分散した後、200μgAb／mlの抗
BSA抗血清（兎）のリン酸緩衝生理食塩水溶液
10μを採つて管軸方向に上下して充分に混合
し、水平面上に静置した。なお、陰性対照として
抗BSA抗血清（兎）をBSAのリン酸緩衝生理食
塩水溶液（BSA1mg／ml）で同率に希釈し使用し
た。20分後に判定すると、リン酸緩衝生理食塩水
溶液にBSAを添加した陰性対照は第１図の（−）
像を示し、BSAを添加しなかつた試料は（＋）
像を示した。 実施例 ２ ヘマトクリツト管中に特願昭55−58677に記載
の梅毒抗原固定化ポリマーマイクロビーズ分散液
を10μ採り、管両端にキヤツプを付けて冷蔵庫
中に保存した。管両端のキヤツプを取り、血清希
釈液により40倍に希釈したTPHA力価1280の血
清を10μ採つて管軸方向に上下して充分に混合
し、水平面上に静置した。対照として陰性血清で
同じ操作をくり返した。20分後に判定すると、陽
性血清では（＋）像が、陰性血清では（−）像が
得られた。
実施例 １ 参考例１と同様のヘマトクリツト管中に特願昭
55−58677に記載のBSA固定化ポリマーマイクロ
ビーズ分散液10μを採り、凍結乾燥した。管中
に蒸留水10μを注入してBSA固定化ポリマーマ
イクロビーズを再分散した後、200μgAb／mlの抗
BSA抗血清（兎）のリン酸緩衝生理食塩水溶液
10μを採つて管軸方向に上下して充分に混合
し、水平面上に静置した。なお、陰性対照として
抗BSA抗血清（兎）をBSAのリン酸緩衝生理食
塩水溶液（BSA1mg／ml）で同率に希釈し使用し
た。20分後に判定すると、リン酸緩衝生理食塩水
溶液にBSAを添加した陰性対照は第１図の（−）
像を示し、BSAを添加しなかつた試料は（＋）
像を示した。 実施例 ２ ヘマトクリツト管中に特願昭55−58677に記載
の梅毒抗原固定化ポリマーマイクロビーズ分散液
を10μ採り、管両端にキヤツプを付けて冷蔵庫
中に保存した。管両端のキヤツプを取り、血清希
釈液により40倍に希釈したTPHA力価1280の血
清を10μ採つて管軸方向に上下して充分に混合
し、水平面上に静置した。対照として陰性血清で
同じ操作をくり返した。20分後に判定すると、陽
性血清では（＋）像が、陰性血清では（−）像が
得られた。
第１図は本発明による検査結果を示す拡大縦断
面図であり、第２図は従来法のマイクロプレート
による方法の検査結果を示す拡大平面図である。
各々ａは＋像、ｂは−像を示す。
面図であり、第２図は従来法のマイクロプレート
による方法の検査結果を示す拡大平面図である。
各々ａは＋像、ｂは−像を示す。
Claims (1)
- １ 担体としてポリマーマイクロビーズを用いた
免疫学的凝集反応試薬を、毛細管内で凍結乾燥さ
せてなる免疫学的検査管。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17146781A JPS5873866A (ja) | 1981-10-28 | 1981-10-28 | 免疫学的検査方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17146781A JPS5873866A (ja) | 1981-10-28 | 1981-10-28 | 免疫学的検査方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5873866A JPS5873866A (ja) | 1983-05-04 |
| JPH0468588B2 true JPH0468588B2 (ja) | 1992-11-02 |
Family
ID=15923641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17146781A Granted JPS5873866A (ja) | 1981-10-28 | 1981-10-28 | 免疫学的検査方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5873866A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0616045B2 (ja) * | 1985-10-24 | 1994-03-02 | ヒユ−・ブイ・コツチンガム | 液体粒子試薬の凝集反応スライド |
| WO1990007716A1 (fr) * | 1988-12-23 | 1990-07-12 | Toray Industries, Inc. | Tube d'inspection immunologique |
| EP0414223B1 (en) * | 1989-08-23 | 1996-06-26 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for measuring an immunologically active material and apparatus suitable for practising said method |
| EP0466170B1 (en) * | 1990-07-13 | 1997-11-05 | Canon Kabushiki Kaisha | Detection reagent |
| US7850917B2 (en) | 2008-03-11 | 2010-12-14 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Particle agglutination in a tip |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4117920Y1 (ja) * | 1964-03-09 | 1966-08-19 | ||
| CH625626A5 (en) * | 1976-03-25 | 1981-09-30 | Hoffmann La Roche | Process for the preparation of stable immunological reagents |
-
1981
- 1981-10-28 JP JP17146781A patent/JPS5873866A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5873866A (ja) | 1983-05-04 |
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