JPH0476429B2 - - Google Patents
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- JPH0476429B2 JPH0476429B2 JP60040258A JP4025885A JPH0476429B2 JP H0476429 B2 JPH0476429 B2 JP H0476429B2 JP 60040258 A JP60040258 A JP 60040258A JP 4025885 A JP4025885 A JP 4025885A JP H0476429 B2 JPH0476429 B2 JP H0476429B2
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
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- H02—GENERATION; CONVERSION OR DISTRIBUTION OF ELECTRIC POWER
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- H02K19/16—Synchronous generators
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- H—ELECTRICITY
- H02—GENERATION; CONVERSION OR DISTRIBUTION OF ELECTRIC POWER
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- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
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- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Description
本発明の主題を形成する生物体液中の全カルシ
ウムの電位差測定のための方法を研究するにあた
り次の文献を考慮した。 (a) 特許 米国特許第3957607号（1976年４月、サイモ
ン（Simon）ら204／195M）米国特許第
3932233号（1976年１月、ルジツカ（Ruzicka）
ら204／195M） (b) 刊行物 (イ) ムーア（Moore）W.E. “生物体液中におけるイオン交換カルシウ
ム電極を用いる研究；生物医学研究ならびに
臨床医薬における用途”、R.A.ダースト
（Durst）、イオン選択電極。 NBS特別刊行物、314、215〜285頁。 (ロ) スコツト（Scott）J.B.およびブラツドウ
エル（Bradwell）A.R.鉄、亜鉛、カドミウ
ム、ニツケルおよびカルシウムのための血清
結合蛋白質の同定、 臨床化学（Clin chem.）29、629−633
（1983）。 (ハ) D.アンマン（Amman）、H.B.ジエニー
（Jenny）P.C.、マイヤー（Meier）および
W.サイモン（Simon） 衛生化学、環境化学、臨床化学および薬化学に
おける電気分析における新しいイオン選択電極な
らびにその臨床および生物学的応用、1979年４月
17日〜20日ロンドン大学チエルシーカレツジにお
いて開催されたロンドン化学会の電気分析グルー
プにより組織された会議の議事録。 W.フランクリンスミス（Franklin Smith）著
エルセビア・サイエンテイフイツク・パブリツシ
ング・カンパニー。 上記先行文献の教示を十分に考慮し、改良し、
その結果、本発明者は本発明方法に到達した。 本発明はとりわけ、カルシウムイオンが遊離の
状態および錯化された状態の両者で存在している
血清中の全カルシウム量を定量分析する方法に関
する（ムーアW.E.参照）。 本発明で採用する測定装置は参照電極（この場
合、飽和カロメル／塩化カリウム）に連結された
カルシウムイオン選択電位差検出要素を使用する
ものである。 このカルシウムイオン選択電極はプラスチツク
材料例えばポリ塩化ビニル製の充実フイルムで構
成され、適当な可塑剤中に電気活性物質（サイモ
ンらの米国特許第3957607号に記載されたニユー
トラルキヤリヤータイプまたはルジツカらの米国
特許第3932233号に記載されたイオン交換タイプ
のもの）を含んでいる。 本発明の第二の目的は試料をPH7.5の緩衝溶液
で希釈することにより血清中の全カルシウム量を
自動的に測定することである。 本発明の方法は血清やその他の生物液体中の全
カルシウム量の測定に広く使用されている原子吸
光分光分析、比色分析あるいは蛍光分析のような
方法の有効な代替方法を提供するものである。 この方法は特定の自動装置と組合せて使用する
場合、以下に説明するような電気化学系またはそ
の他の同等の系について起電力を測定することに
より血清中の全カルシウム濃度を与える：Hg；
Hg2Cl2：飽和KCl／／試料Ca++膜／10-2CaCl2、
AgCl；Ag 本発明方法をさらによく理解するために以下図
面を参照し、さらに詳細に説明する。 第１図は本発明方法を実施するのに使用するこ
とができる装置のブロツクダイアグラムである。 第２図はカルシウムイオン選択電極の構造の詳
細を示すための概略図である。 測定電極１２と参照電極２６は、温度を安定化
するための陽極酸化されたアルミニウムブロツク
１０の中に収納されている。 測定セルは透明アクリル材料１４のブロツクで
構成され、試料の入口１８と出口２０を備えた流
路が組込まれている。 測定はすべて室温で行われる。試料は好ましく
は蠕動ポンプ１６により流速１ml／分で吸引され
る。 起動力は15秒後に測定される。この時間は安定
な測定のために必要な時間である。 ２２は逆流濯ぎ液の入口を示し、２４はその出
口を示している。 このカルシウムイオン選択電極は第２図に示す
ように銀線２８、２つのセクシヨン３０，３２か
らなるボデーならびにＯリング３４、膜４４およ
びタイゴン（Tygon）シールリング４２を備え
ている。 ３２は充填溶液を含むハウジング３６を示し、
３０′は栓３０の小径部分を示している。ハウジ
ング３６は小径のもう１つのハウジング４０とつ
ながつており、このハウジング４０は充填溶液を
保持すると共に銀栓２８を収納する。本発明の方
法をさらに詳細に説明する。分析すべき試料（血
清、血漿、尿または検量線作製用の標準溶液）を
25℃でPH7.5の0.1Mの緩衝液で１：20の比で希釈
する。このPHで使用する緩衝液にはトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノエタン（トリス）およびト
リス誘導体がある。この緩衝液にシリコーンオイ
ル／水エマルジヨンをエマルジヨン１部に対して
緩衝液９〜19部の割合で加える。これは記憶効果
をほぼ完全に消滅させることによつて、カルシウ
ムイオン感受性膜の最適有効表面積を最大にする
ことにより電極性能を改良することを目的とする
ものである。 さらにこの装置は試料を酸性化する必要がな
く、従つて電極の安定性および長寿命が保証され
るという点で現在市販されているその他の種類の
ものとは異なつている。濃縮エマルジヨンはシリ
コーンオイル（ダウコーニングDC200またはウエ
イカーAK10）と非イオン界面活性剤（I.C.I.の
Brij35またはGAFのアンタロツクスCo530）を均
質化することによつて調製された。 カルシウムは血清中にイオンの形でおよびある
種の蛋白質と結合した形で含まれている（スコツ
トJ.B.およびブラツドウエルA.R.）。従つて緩衝
液に蛋白質錯化剤を加えると（D.アンマン、H.
B.ジエニーら）、カルシウム−蛋白質錯化平衡は
イオン型の方にづれる。 錯化剤は蛋白質に対して結合親和性を示す金属
（スコツトJ.B.およびブラツドウエルA.R.）、例え
は鉄、亜鉛、カドミウム、ニツケルおよび銅から
選択された。 希釈に使用する緩衝溶液に0.2ミリモル／の
亜鉛を加えることによつて最善の実験結果が得ら
れた。 この実験の段階で到達した考察およびこの実験
段階で得られた結果からこの系の検量線作製用の
溶液を処方の基本的な重要性が証明された。 この自動装置で行つた実験の結果、緩衝液で血
清、血漿および尿を適切に希釈することにより錯
化したカルシウムの量が常に４〜５％以下に保た
れることがわかつた（対照値は原子吸光分光分析
により測定される）。 この不正確さの割合は通常の操作条件のもとで
の二価イオン用の電極において見出される不正確
さの程度と同じである。 同時にこの誤差は4.5〜8.5ｇ／dlの血清中の蛋
白質濃度とは無関係であることがわかつた。 従つて検量線作製用の溶液は測定すべき溶液に
できる限り近似するように処方された（イオン型
または錯化型のカルシウム含有量に関して）。 適切な検量線を作製するのに使用する標準液の
調製に２，２−ビス−（ヒドロキシメチル）−２，
2′，2″−ニトリロトリエタノール（ビス−トリ
ス）を用いたときに最もよい結果が得られた。 このビス−トリスはカルシウムに対してキレー
ト化（すなわち錯化）親和性を示すので、電極の
電気化学的性質を変更することなく検量線を補正
する。 さらに300〜400mg／dlのビス−トリスの添加は
重大なものではないことがわかつた。 使用した検量線作製用の溶液の基本的な組成は
希釈用に使用した緩衝液の組成と同じであつた。
しかしイオン物質（Zn++）は含まずビス−トリ
ス塩化カルシウムを含んでいた。 最後に本発明の方法はまた検量線の作製または
分析の度ごとに既知のカルシウム組成物を含む緩
衝溶液を用いて正常な試料の流れ方向に対して逆
方向に自動的に濯ぎが行われる。 本発明方法についてさまざまな実験が行われ
た。以下の実施例はその結果を示すものである。 例 １ 希釈に使用した緩衝溶液の影響は得られた結果
（回収率）を対照分析法〔原子吸光分光分析（A.
A.S.）〕の結果と比較することにより評価した。
緩衝溶液は0.1モルトリス緩衝液100mlに
ZnCl22.73mgを溶解しPHを塩酸で所定の値に調節
することにより調製した。 検量線はビス−トリス3.5ｇ／を含むPH7.5の
0.1Mトリス緩衝液に10-3モルと３×10-3モルの
カルシウムを含む２種類の溶液を用いることによ
り行つた。希釈比は１：20であつた。結果を表１
に示す。 表 １ PH Ca++（記載した方法）／Ca++A.A.S. ％ 7.0 95 7.2 98 7.5 100 8.0 95 8.5 80 例 ２ 血清中の蛋白質濃度の影響は起源の異なる試験
血清を用いて評価した。PH7.5のトリス緩衝液の
処方は例１に記載されている。実施例１はまた検
量線溶液の組成も示している。 試料は１：20の比で希釈された。得られた結果
をA.A.S.でえられた結果を比較した。結果を表
２に示す。
ウムの電位差測定のための方法を研究するにあた
り次の文献を考慮した。 (a) 特許 米国特許第3957607号（1976年４月、サイモ
ン（Simon）ら204／195M）米国特許第
3932233号（1976年１月、ルジツカ（Ruzicka）
ら204／195M） (b) 刊行物 (イ) ムーア（Moore）W.E. “生物体液中におけるイオン交換カルシウ
ム電極を用いる研究；生物医学研究ならびに
臨床医薬における用途”、R.A.ダースト
（Durst）、イオン選択電極。 NBS特別刊行物、314、215〜285頁。 (ロ) スコツト（Scott）J.B.およびブラツドウ
エル（Bradwell）A.R.鉄、亜鉛、カドミウ
ム、ニツケルおよびカルシウムのための血清
結合蛋白質の同定、 臨床化学（Clin chem.）29、629−633
（1983）。 (ハ) D.アンマン（Amman）、H.B.ジエニー
（Jenny）P.C.、マイヤー（Meier）および
W.サイモン（Simon） 衛生化学、環境化学、臨床化学および薬化学に
おける電気分析における新しいイオン選択電極な
らびにその臨床および生物学的応用、1979年４月
17日〜20日ロンドン大学チエルシーカレツジにお
いて開催されたロンドン化学会の電気分析グルー
プにより組織された会議の議事録。 W.フランクリンスミス（Franklin Smith）著
エルセビア・サイエンテイフイツク・パブリツシ
ング・カンパニー。 上記先行文献の教示を十分に考慮し、改良し、
その結果、本発明者は本発明方法に到達した。 本発明はとりわけ、カルシウムイオンが遊離の
状態および錯化された状態の両者で存在している
血清中の全カルシウム量を定量分析する方法に関
する（ムーアW.E.参照）。 本発明で採用する測定装置は参照電極（この場
合、飽和カロメル／塩化カリウム）に連結された
カルシウムイオン選択電位差検出要素を使用する
ものである。 このカルシウムイオン選択電極はプラスチツク
材料例えばポリ塩化ビニル製の充実フイルムで構
成され、適当な可塑剤中に電気活性物質（サイモ
ンらの米国特許第3957607号に記載されたニユー
トラルキヤリヤータイプまたはルジツカらの米国
特許第3932233号に記載されたイオン交換タイプ
のもの）を含んでいる。 本発明の第二の目的は試料をPH7.5の緩衝溶液
で希釈することにより血清中の全カルシウム量を
自動的に測定することである。 本発明の方法は血清やその他の生物液体中の全
カルシウム量の測定に広く使用されている原子吸
光分光分析、比色分析あるいは蛍光分析のような
方法の有効な代替方法を提供するものである。 この方法は特定の自動装置と組合せて使用する
場合、以下に説明するような電気化学系またはそ
の他の同等の系について起電力を測定することに
より血清中の全カルシウム濃度を与える：Hg；
Hg2Cl2：飽和KCl／／試料Ca++膜／10-2CaCl2、
AgCl；Ag 本発明方法をさらによく理解するために以下図
面を参照し、さらに詳細に説明する。 第１図は本発明方法を実施するのに使用するこ
とができる装置のブロツクダイアグラムである。 第２図はカルシウムイオン選択電極の構造の詳
細を示すための概略図である。 測定電極１２と参照電極２６は、温度を安定化
するための陽極酸化されたアルミニウムブロツク
１０の中に収納されている。 測定セルは透明アクリル材料１４のブロツクで
構成され、試料の入口１８と出口２０を備えた流
路が組込まれている。 測定はすべて室温で行われる。試料は好ましく
は蠕動ポンプ１６により流速１ml／分で吸引され
る。 起動力は15秒後に測定される。この時間は安定
な測定のために必要な時間である。 ２２は逆流濯ぎ液の入口を示し、２４はその出
口を示している。 このカルシウムイオン選択電極は第２図に示す
ように銀線２８、２つのセクシヨン３０，３２か
らなるボデーならびにＯリング３４、膜４４およ
びタイゴン（Tygon）シールリング４２を備え
ている。 ３２は充填溶液を含むハウジング３６を示し、
３０′は栓３０の小径部分を示している。ハウジ
ング３６は小径のもう１つのハウジング４０とつ
ながつており、このハウジング４０は充填溶液を
保持すると共に銀栓２８を収納する。本発明の方
法をさらに詳細に説明する。分析すべき試料（血
清、血漿、尿または検量線作製用の標準溶液）を
25℃でPH7.5の0.1Mの緩衝液で１：20の比で希釈
する。このPHで使用する緩衝液にはトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノエタン（トリス）およびト
リス誘導体がある。この緩衝液にシリコーンオイ
ル／水エマルジヨンをエマルジヨン１部に対して
緩衝液９〜19部の割合で加える。これは記憶効果
をほぼ完全に消滅させることによつて、カルシウ
ムイオン感受性膜の最適有効表面積を最大にする
ことにより電極性能を改良することを目的とする
ものである。 さらにこの装置は試料を酸性化する必要がな
く、従つて電極の安定性および長寿命が保証され
るという点で現在市販されているその他の種類の
ものとは異なつている。濃縮エマルジヨンはシリ
コーンオイル（ダウコーニングDC200またはウエ
イカーAK10）と非イオン界面活性剤（I.C.I.の
Brij35またはGAFのアンタロツクスCo530）を均
質化することによつて調製された。 カルシウムは血清中にイオンの形でおよびある
種の蛋白質と結合した形で含まれている（スコツ
トJ.B.およびブラツドウエルA.R.）。従つて緩衝
液に蛋白質錯化剤を加えると（D.アンマン、H.
B.ジエニーら）、カルシウム−蛋白質錯化平衡は
イオン型の方にづれる。 錯化剤は蛋白質に対して結合親和性を示す金属
（スコツトJ.B.およびブラツドウエルA.R.）、例え
は鉄、亜鉛、カドミウム、ニツケルおよび銅から
選択された。 希釈に使用する緩衝溶液に0.2ミリモル／の
亜鉛を加えることによつて最善の実験結果が得ら
れた。 この実験の段階で到達した考察およびこの実験
段階で得られた結果からこの系の検量線作製用の
溶液を処方の基本的な重要性が証明された。 この自動装置で行つた実験の結果、緩衝液で血
清、血漿および尿を適切に希釈することにより錯
化したカルシウムの量が常に４〜５％以下に保た
れることがわかつた（対照値は原子吸光分光分析
により測定される）。 この不正確さの割合は通常の操作条件のもとで
の二価イオン用の電極において見出される不正確
さの程度と同じである。 同時にこの誤差は4.5〜8.5ｇ／dlの血清中の蛋
白質濃度とは無関係であることがわかつた。 従つて検量線作製用の溶液は測定すべき溶液に
できる限り近似するように処方された（イオン型
または錯化型のカルシウム含有量に関して）。 適切な検量線を作製するのに使用する標準液の
調製に２，２−ビス−（ヒドロキシメチル）−２，
2′，2″−ニトリロトリエタノール（ビス−トリ
ス）を用いたときに最もよい結果が得られた。 このビス−トリスはカルシウムに対してキレー
ト化（すなわち錯化）親和性を示すので、電極の
電気化学的性質を変更することなく検量線を補正
する。 さらに300〜400mg／dlのビス−トリスの添加は
重大なものではないことがわかつた。 使用した検量線作製用の溶液の基本的な組成は
希釈用に使用した緩衝液の組成と同じであつた。
しかしイオン物質（Zn++）は含まずビス−トリ
ス塩化カルシウムを含んでいた。 最後に本発明の方法はまた検量線の作製または
分析の度ごとに既知のカルシウム組成物を含む緩
衝溶液を用いて正常な試料の流れ方向に対して逆
方向に自動的に濯ぎが行われる。 本発明方法についてさまざまな実験が行われ
た。以下の実施例はその結果を示すものである。 例 １ 希釈に使用した緩衝溶液の影響は得られた結果
（回収率）を対照分析法〔原子吸光分光分析（A.
A.S.）〕の結果と比較することにより評価した。
緩衝溶液は0.1モルトリス緩衝液100mlに
ZnCl22.73mgを溶解しPHを塩酸で所定の値に調節
することにより調製した。 検量線はビス−トリス3.5ｇ／を含むPH7.5の
0.1Mトリス緩衝液に10-3モルと３×10-3モルの
カルシウムを含む２種類の溶液を用いることによ
り行つた。希釈比は１：20であつた。結果を表１
に示す。 表 １ PH Ca++（記載した方法）／Ca++A.A.S. ％ 7.0 95 7.2 98 7.5 100 8.0 95 8.5 80 例 ２ 血清中の蛋白質濃度の影響は起源の異なる試験
血清を用いて評価した。PH7.5のトリス緩衝液の
処方は例１に記載されている。実施例１はまた検
量線溶液の組成も示している。 試料は１：20の比で希釈された。得られた結果
をA.A.S.でえられた結果を比較した。結果を表
２に示す。
【表】
例 ３
希釈に使用した緩衝溶液のZn++の濃度の影響
は例１に記載した緩衝液にZn++を0.05〜0.5ミリ
モル／の量で加えることにより評価した。例１
は検量線標準液の組成も示している。希釈比は
１：20であつた。
は例１に記載した緩衝液にZn++を0.05〜0.5ミリ
モル／の量で加えることにより評価した。例１
は検量線標準液の組成も示している。希釈比は
１：20であつた。
【表】
実施例 １
この実施例では本発明方法の精度のレベルを改
良するために緩衝液にシリコーンオイル／水エマ
ルジヨンを加えることの影響を評価した。シリコ
ーンオイル10％（DC200ダウコーニングまたは
AK10ウエイカー）を１％の界面活性剤
（Brij35I.C.I.またはアンタロツクスCo530GAF）
と均質化することにより調製した。このように調
製した溶液を例１に記載した緩衝液を用いてエマ
ルジヨン１部に対して緩衝液９部の割合となるよ
うに希釈した。検量線の作製および希釈は例１に
記載した通りに行つた。結果を表４に示す。
良するために緩衝液にシリコーンオイル／水エマ
ルジヨンを加えることの影響を評価した。シリコ
ーンオイル10％（DC200ダウコーニングまたは
AK10ウエイカー）を１％の界面活性剤
（Brij35I.C.I.またはアンタロツクスCo530GAF）
と均質化することにより調製した。このように調
製した溶液を例１に記載した緩衝液を用いてエマ
ルジヨン１部に対して緩衝液９部の割合となるよ
うに希釈した。検量線の作製および希釈は例１に
記載した通りに行つた。結果を表４に示す。
【表】
実施例 ２
本発明の方法の精度のレベルを改良するために
濯ぎ溶液として実施例１に記載したエマルジヨン
を、エマルジヨン１部に対して25℃でPH7.5のト
リス0.1M緩衝液９部の割合で加えた場合の影響
を評価した。この濯ぎ溶液のカルシウム濃度は
0.05ミリモル／であつた。カルシウム測定の自
動装置として、インストラメンテイシヨンラボラ
トリー（Instrumentation Laboratory）製のモ
ナークシステム（Monarck Systems）を使用し
た。血清試料の分析後、この装置では自動的に約
10秒間、流体通路の濯ぎが実施された。この濯ぎ
工程は濯ぎ溶液と空気とで互い違いに実施され
る。結果を表５に示す。表中、Ｘは血清中の平均
総カルシウム濃度を表し、SDは標準偏差を表し、
C.V.は変動係数を表す。３段階の各平均値
（1.95、2.73及び3.30ミリモル／）において各変
動係数は、１％という要求値よりも十分に低い値
であつた。
濯ぎ溶液として実施例１に記載したエマルジヨン
を、エマルジヨン１部に対して25℃でPH7.5のト
リス0.1M緩衝液９部の割合で加えた場合の影響
を評価した。この濯ぎ溶液のカルシウム濃度は
0.05ミリモル／であつた。カルシウム測定の自
動装置として、インストラメンテイシヨンラボラ
トリー（Instrumentation Laboratory）製のモ
ナークシステム（Monarck Systems）を使用し
た。血清試料の分析後、この装置では自動的に約
10秒間、流体通路の濯ぎが実施された。この濯ぎ
工程は濯ぎ溶液と空気とで互い違いに実施され
る。結果を表５に示す。表中、Ｘは血清中の平均
総カルシウム濃度を表し、SDは標準偏差を表し、
C.V.は変動係数を表す。３段階の各平均値
（1.95、2.73及び3.30ミリモル／）において各変
動係数は、１％という要求値よりも十分に低い値
であつた。
【表】
例 ４
0.3〜0.4mg／dlの範囲で検量線作製溶液に加え
たビス−トリスの量の影響を調べた。検量線の作
製と希釈は例１に記載されたとおりに行つた。ビ
ス−トリスの三種類の濃度について得られた結果
を表６に示す。希釈比は１：20であり比較方法は
A.A.S.により行つた。
たビス−トリスの量の影響を調べた。検量線の作
製と希釈は例１に記載されたとおりに行つた。ビ
ス−トリスの三種類の濃度について得られた結果
を表６に示す。希釈比は１：20であり比較方法は
A.A.S.により行つた。
第１図は本発明方法を実施するのに使用するこ
とができる装置のブロツクダイアグラムであり第
２図はカルシウムイオン選択電極の構造の詳細を
示す概略図である。 １０……アルミニウムブロツク、１２……測定
電極、１４……透明アクリル材料ブロツク、１６
……蠕動ポンプ、１８……試料入口、２０……試
料出口、２２……濯ぎ液入口、２４……濯ぎ液出
口、２６……参照電極、２８……銀線、３０，３
２……ボデー、４４……膜。
とができる装置のブロツクダイアグラムであり第
２図はカルシウムイオン選択電極の構造の詳細を
示す概略図である。 １０……アルミニウムブロツク、１２……測定
電極、１４……透明アクリル材料ブロツク、１６
……蠕動ポンプ、１８……試料入口、２０……試
料出口、２２……濯ぎ液入口、２４……濯ぎ液出
口、２６……参照電極、２８……銀線、３０，３
２……ボデー、４４……膜。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ カルシウムイオン選択電極、 参照電極、 温度安定装置を備えた絶縁材料製の測定セル、
容量希釈器、 鉄、亜鉛、カドミウム、ニツケルおよび銅から
選ばれるイオン性物質とシリコーンオイルエマル
ジヨンを含む希釈用緩衝液、 ２，２−ビス−（ヒドロキシメチル）−２，2′，
2″−ニトロトリエタノール（ビス−トリス）を含
む検量線用の標準緩衝溶液、 を使用する電位差測定装置により血清中のカルシ
ウムイオンの量を測定する方法。 ２ 25℃においてPH7.5の0.1Mのトリスを含む希
釈用の緩衝溶液を使用することを特徴をする特許
請求の範囲第１項記載の方法。 ３ 緩衝溶液がZnCl2として0.1〜0.3ミリモル／
のZn++を含む特許請求の範囲第２項記載の方
法。 ４ 10〜20％のシリコーンオイルを１〜５％の非
イオン界面活性剤と水中で均質化することによつ
て調製されたシリコーンオイル／水エマルジヨン
を含む特許請求の範囲第２項または第３項記載の
方法。 ５ エマルジヨンが５〜20％の濃度である特許請
求の範囲第４項記載の方法。 ６ 緩衝液を用いて１：10〜１：50の希釈比で、
試料または標準液を希釈する特許請求の範囲第３
項記載の方法。 ７ 希釈比が１：20である特許請求の範囲第６項
記載の方法。 ８ 生体試料が血清、血漿または尿である特許請
求の範囲第１項記載の方法。 ９ ビス−トリスを300〜400mg／dl含む25℃でPH
7.5のトリス0.1M溶液で緩衝されたCa++の既知濃
度の標準液を用いて検量線を作製することを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 １０ カルシウムイオン選択電極、 参照電極、 温度安定装置を備えた絶縁材料製の測定セル、
容量希釈器、 鉄、亜鉛、カドミウム、ニツケルおよび銅から
選ばれるイオン性物質とシリコーンオイルエマル
ジヨンを含む希釈用緩衝液、 ２，２−ビス−（ヒドロキシメチル）−２，2′，
2″−ニトロトリエタノール（ビス−トリス）を含
む検量線用の標準緩衝溶液、及び 標準化または試料採取ごとの濯ぎ工程 を使用する電位差測定装置により血清中のカルシ
ウムイオンの量を測定する方法。 １１ カルシウムイオン選択電極、 参照電極、 温度安定装置を備えた絶縁材料製の測定セル、 容量希釈器、 鉄、亜鉛、カドミウム、ニツケルおよび銅から
選ばれるイオン性物質とシリコーンオイルエマル
ジヨンを含む希釈用緩衝液、 ２，２−ビス−（ヒドロキシメチル）−２，2′，
2″−ニトリロトリエタノール（ビス−トリス）を
含む検量線用の標準緩衝溶液、及び 標準化または試料採取ごとの濯ぎ工程 を使用する電位差測定装置により血清中のカルシ
ウムイオンの量を測定する方法において使用する
濯ぎ溶液であつて、 10〜20％のシリコーンオイルと１〜５％の非イ
オン界面活性剤を水中で均質化することによつて
調製されたシリコーンオイル／水エマルジヨンを
５〜20％の濃度で含む、25℃においてPH7.5のト
リス0.1M緩衝溶液中のカルシウム濃度が0.01〜
0.1ミリモル／である濯ぎ溶液。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| IT19826A/84 | 1984-02-28 | ||
| IT19826/84A IT1174501B (it) | 1984-02-28 | 1984-02-28 | Metodo per la determinazione quantitativa del calcio nei liquidi biologici mediante potenziometria diretta |
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|---|---|
| JPS60203849A JPS60203849A (ja) | 1985-10-15 |
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-
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