JPH048701A - 新規ペクチン酸―セルロースゲル及びその製造法 - Google Patents
新規ペクチン酸―セルロースゲル及びその製造法Info
- Publication number
- JPH048701A JPH048701A JP2110609A JP11060990A JPH048701A JP H048701 A JPH048701 A JP H048701A JP 2110609 A JP2110609 A JP 2110609A JP 11060990 A JP11060990 A JP 11060990A JP H048701 A JPH048701 A JP H048701A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pectic acid
- cellulose gel
- protein
- treatment
- pectin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、新規ペクチン酸−セルロースゲル及びその製
造法に関する。
造法に関する。
Ｃ従来の技術〕
従来、ペクチン酸−セルロースゲルは、ペクチン含有植
物のアルコール不溶物を低温下にてケン化後、分散剤の
存在下、アルカリ条件下にて架橋試薬により不溶化する
ことによって得られることが報告されている （特開昭
６３−４３５０１号）。
物のアルコール不溶物を低温下にてケン化後、分散剤の
存在下、アルカリ条件下にて架橋試薬により不溶化する
ことによって得られることが報告されている （特開昭
６３−４３５０１号）。
しかしながら、本性で得られたペクチン酸−セルロース
ゲルは、カラムクロマトグラフィー用担体として使用し
た場合、精製しようとする蛍白によっては、吸着が発生
し、著しく回収率の低下を招くことがある。本原因とし
ては、ペクチン酸セルロースゲル中に不純物として存在
する蛋白により、疎水結合力等が働き、非特異的な吸着
が発生するためと考えられる。そこで、非特異的な吸着
を防ぐために、ペクチン酸−セルロースゲル中の蛋白を
除去する必要があった。
ゲルは、カラムクロマトグラフィー用担体として使用し
た場合、精製しようとする蛍白によっては、吸着が発生
し、著しく回収率の低下を招くことがある。本原因とし
ては、ペクチン酸セルロースゲル中に不純物として存在
する蛋白により、疎水結合力等が働き、非特異的な吸着
が発生するためと考えられる。そこで、非特異的な吸着
を防ぐために、ペクチン酸−セルロースゲル中の蛋白を
除去する必要があった。
本発明は、残存蛋白の非常に少ないペクチン酸−セルロ
ースゲル及びその製造法を提供することを目的とする。
ースゲル及びその製造法を提供することを目的とする。
本発明者らは、前記目的を達成するため、鋭意研究を重
ねた結果、蛋白除去処理を施すことにより、ペクチン酸
−セルロースゲル中に存在する蛋白を除去できることを
見出し、本発明を完成するに至った。
ねた結果、蛋白除去処理を施すことにより、ペクチン酸
−セルロースゲル中に存在する蛋白を除去できることを
見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明のペクチン酸−セルロースゲルは、構造蛋
白及び細胞壁結合蛋白が除去されていることを特徴とす
るものであり、植物細胞壁の構造を保持した状態で得ら
れる。植物細胞壁は、セルロースミクロフィブリル、キ
シログリカン、ガラクタン、アラビノガラクタンなどの
多糖類が構造蛋白（エクステンシン・アラビノガラタン
蛋白質）、細胞壁結合酵素（リンゴ酸脱水素酵素、パー
オキシダーゼ、フォスファターゼ、多糖加水分解酵素Ｉ
Ｉ）などを層状にはさみ込んだマトリックスで形成され
ており、このような形で存在する蛋白により非特異的な
吸着が発生すると考えられる。蛋白除去法として、酸ま
たはアルカリによる化学的処理と、プロテアーゼを用い
る生化学的処理の二法があるが、酸またはアルカリによ
る化学的処理では、タンパクが分解するだけでなく、ペ
クチンが低分子化を起こし、処理時に、マトリックスか
ら溶出する為、ペクチン酸−セルロースゲルのイオン交
換当量は低下する。また、セルロースも低分子化を起こ
し、マトリックスが破壊される為、膨潤率も高くなる。
白及び細胞壁結合蛋白が除去されていることを特徴とす
るものであり、植物細胞壁の構造を保持した状態で得ら
れる。植物細胞壁は、セルロースミクロフィブリル、キ
シログリカン、ガラクタン、アラビノガラクタンなどの
多糖類が構造蛋白（エクステンシン・アラビノガラタン
蛋白質）、細胞壁結合酵素（リンゴ酸脱水素酵素、パー
オキシダーゼ、フォスファターゼ、多糖加水分解酵素Ｉ
Ｉ）などを層状にはさみ込んだマトリックスで形成され
ており、このような形で存在する蛋白により非特異的な
吸着が発生すると考えられる。蛋白除去法として、酸ま
たはアルカリによる化学的処理と、プロテアーゼを用い
る生化学的処理の二法があるが、酸またはアルカリによ
る化学的処理では、タンパクが分解するだけでなく、ペ
クチンが低分子化を起こし、処理時に、マトリックスか
ら溶出する為、ペクチン酸−セルロースゲルのイオン交
換当量は低下する。また、セルロースも低分子化を起こ
し、マトリックスが破壊される為、膨潤率も高くなる。
しかしながら本発明は、ペクチン含有植物の好ましくは
アルコール不溶物を、パパイン又はプロナーゼなどのプ
ロテアーゼで処理することにより、ペクチン酸−セルロ
ースゲルの多Ｉｉ類構成部マトリックス破壊を極力抑え
、選択的な蛋白除去を可能とするものである。
アルコール不溶物を、パパイン又はプロナーゼなどのプ
ロテアーゼで処理することにより、ペクチン酸−セルロ
ースゲルの多Ｉｉ類構成部マトリックス破壊を極力抑え
、選択的な蛋白除去を可能とするものである。
本発明のペクチン酸−セルロースゲルは、例えば、下記
に示す方法に従い、製造される。即ち、ペクチン含有植
物由来の粉末、好ましくはアルコール不溶物を０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ６，８）に懸濁し、十分浸漬する。
に示す方法に従い、製造される。即ち、ペクチン含有植
物由来の粉末、好ましくはアルコール不溶物を０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ６，８）に懸濁し、十分浸漬する。
緩衝液の使用量は、アルコール不溶物１ｇ当り、通常１
０〜３０ｄ、好ましくは１５〜２０ｍとする。１０１未
満の場合、スラリー濃度が高いため、攪拌が不十分とな
り、また３０ｙｄを超えると、処理効率が低下する。緩
衝液については、プロテアーゼを安定化できるものであ
ればいずれのものでもよく、特に限定されるものではな
い。
０〜３０ｄ、好ましくは１５〜２０ｍとする。１０１未
満の場合、スラリー濃度が高いため、攪拌が不十分とな
り、また３０ｙｄを超えると、処理効率が低下する。緩
衝液については、プロテアーゼを安定化できるものであ
ればいずれのものでもよく、特に限定されるものではな
い。
緩衝液で十分浸漬後、パパイン、プロナーゼなどのプロ
テアーゼを添加する。添加量としては、試薬酵素の比活
性等に差異があるため、−概に言えないが、系内濃度０
．１〜１％、好ましくは０．４〜０．６％とするのがよ
い。また処理温度は、プロテアーゼの至適温度（−船釣
には、３０℃付近）とするのがよい。処理時間について
は、２４〜４８時間が好ましいが、特に限定されるもの
ではない。本処理により、ペクチン酸−セルロース中の
全蛋白量の９５％は除去される。なお、プロテアーゼ処
理において、試料はアルコール不溶物に限定されず、架
橋前の試料であればいかなるものでも処理は可能である
。処理後、膨潤しているペクチン酸−セルロースゲルの
濾過性を良くするために緩衝液と同量の極性溶媒（例え
ば、メタノール、アセトン）を加え、攪拌後、遠心分離
機、濾過機などの固液分層装置を用い分離し、極性溶媒
（例えば、メタノール、アセトン）で洗浄・脱水後、蛋
白除去処理アルコール不溶物を得る。このものは、その
まま架橋化工程に使用してもよいが、乾燥工程を経た後
、架橋化工程に使用してもよい。次いで、例えば特開昭
６３−４３５０１号公報記載の方法に従い、架橋反応に
より架橋することにより、本発明のペクチン酸−セルロ
ースゲルが得られる。
テアーゼを添加する。添加量としては、試薬酵素の比活
性等に差異があるため、−概に言えないが、系内濃度０
．１〜１％、好ましくは０．４〜０．６％とするのがよ
い。また処理温度は、プロテアーゼの至適温度（−船釣
には、３０℃付近）とするのがよい。処理時間について
は、２４〜４８時間が好ましいが、特に限定されるもの
ではない。本処理により、ペクチン酸−セルロース中の
全蛋白量の９５％は除去される。なお、プロテアーゼ処
理において、試料はアルコール不溶物に限定されず、架
橋前の試料であればいかなるものでも処理は可能である
。処理後、膨潤しているペクチン酸−セルロースゲルの
濾過性を良くするために緩衝液と同量の極性溶媒（例え
ば、メタノール、アセトン）を加え、攪拌後、遠心分離
機、濾過機などの固液分層装置を用い分離し、極性溶媒
（例えば、メタノール、アセトン）で洗浄・脱水後、蛋
白除去処理アルコール不溶物を得る。このものは、その
まま架橋化工程に使用してもよいが、乾燥工程を経た後
、架橋化工程に使用してもよい。次いで、例えば特開昭
６３−４３５０１号公報記載の方法に従い、架橋反応に
より架橋することにより、本発明のペクチン酸−セルロ
ースゲルが得られる。
以下、実施例及び比較例により本発明を更に詳細に説明
するが、本発明の範囲は、これらに限定されるものでは
ない。
するが、本発明の範囲は、これらに限定されるものでは
ない。
〈実施例１〉
温州蜜柑果皮のアルコール不溶物２０ｇを０．１ Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ６，８） ３４０ａｔに加え、１時間
浸漬後、パパイン（片山化学工業製１ ： ３００）
１．７０ｇを添加し、４８時間３０″Ｃで弱攪拌下、処
理を行った。
ン酸緩衝液（ｐＨ６，８） ３４０ａｔに加え、１時間
浸漬後、パパイン（片山化学工業製１ ： ３００）
１．７０ｇを添加し、４８時間３０″Ｃで弱攪拌下、処
理を行った。
処理後、緩衝液と同量のメタノールを加えた後、濾過を
行い、蛋白除去処理８４ｇを得た。その後、同温品８４
ｇを、特開昭６３−４３５０１号公報の方法に従い、６
０％メタノール１６８ｄ、エピクロヒドリン４９．６ｄ
に浸漬後、攪拌下、５ Ｍ ＮａＯＨ４２，４ｄを添加
することにより架橋反応を行い、本発明のペクチン酸セ
ルロースゲル１１．４ｇ（乾品重量）を得た。また同時
に、ブランクとしてパパイン無添加の系で同様の処理を
行った。結果を第１表に示す。
行い、蛋白除去処理８４ｇを得た。その後、同温品８４
ｇを、特開昭６３−４３５０１号公報の方法に従い、６
０％メタノール１６８ｄ、エピクロヒドリン４９．６ｄ
に浸漬後、攪拌下、５ Ｍ ＮａＯＨ４２，４ｄを添加
することにより架橋反応を行い、本発明のペクチン酸セ
ルロースゲル１１．４ｇ（乾品重量）を得た。また同時
に、ブランクとしてパパイン無添加の系で同様の処理を
行った。結果を第１表に示す。
第１表
第２表
〈実施例２〉
温州蜜柑果皮のアルコール不溶物を用い、パパイン、プ
ロナーゼの添加量及び処理時間による蛋白除去率への影
響を検討した。
ロナーゼの添加量及び処理時間による蛋白除去率への影
響を検討した。
方法としては、パパイン添加量、０．１％、０．５％、
１．０％、プロナーゼは０．５％とした。処理時間は２
４時間、４８時間で行った。なお、評価は蛍白除去処理
アルコール不溶物で行った。結果を第２表に示す。
１．０％、プロナーゼは０．５％とした。処理時間は２
４時間、４８時間で行った。なお、評価は蛍白除去処理
アルコール不溶物で行った。結果を第２表に示す。
く比較例１〉
温州蜜柑果皮のアルコール不溶物を用い、アルカリ処理
、酸処理、プロテアーゼ処理による蛋白除去率及び交換
当量、膨潤率への影響を比較検討した。
、酸処理、プロテアーゼ処理による蛋白除去率及び交換
当量、膨潤率への影響を比較検討した。
アルカリ処理、酸処理では、アルコール不溶物を６０％
メタノールに浸漬後、５Ｍ ＮａＯＨ水溶液又は１７．
５％ＨＣＩ水溶液を各々添加し、蛋白処理した。
メタノールに浸漬後、５Ｍ ＮａＯＨ水溶液又は１７．
５％ＨＣＩ水溶液を各々添加し、蛋白処理した。
プロテアーゼ処理では、アルコール不溶物を０、１ Ｍ
リン酸緩衝液に浸漬後、パパイン０．５％を添加し、
蛋白処理した。なお、評価は蛋白除去処理アルコール不
溶物で行った。結果を第３表に示す。
リン酸緩衝液に浸漬後、パパイン０．５％を添加し、
蛋白処理した。なお、評価は蛋白除去処理アルコール不
溶物で行った。結果を第３表に示す。
（本頁以下余白）
〔発明の効果〕
本発明によれば、ペクチン酸−セルロースゲル中の構造
蛋白及び細胞壁結合蛋白の選択的な除去が可能となり、
残存蛋白の非常に少ない新規ペクチン酸−セルロースゲ
ルを提供することができる。
蛋白及び細胞壁結合蛋白の選択的な除去が可能となり、
残存蛋白の非常に少ない新規ペクチン酸−セルロースゲ
ルを提供することができる。
本発明のペクチン酸−セルロースゲルをカラムクロマト
グラフィー用担体として使用すれば、残存蛋白による非
特異的吸着を低減することができる。
グラフィー用担体として使用すれば、残存蛋白による非
特異的吸着を低減することができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、構造蛋白及び細胞壁結合蛋白が除去されているペク
チン酸−セルロースゲル。 ２、ペクチン含有植物由来の粉末をプロテアーゼにより
蛋白除去処理した後、架橋試験により架橋することを特
徴とするペクチン酸−セルロースゲルの製造法。 ３、ペクチン含有植物由来の粉末がペクチン含有植物の
アルコール不溶物である請求項２記載の製造法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2110609A JPH048701A (ja) | 1990-04-27 | 1990-04-27 | 新規ペクチン酸―セルロースゲル及びその製造法 |
| PCT/JP1990/001493 WO1991007427A1 (fr) | 1989-11-16 | 1990-11-15 | Agent vehiculeur pour chromatographie sur colonne echangeuse, procede de separation et de purification d'une substance polymere hydrosoluble au moyen d'un tel agent, nouveau gel a base d'acide pectique et de cellulose et procede de preparation d'un tel gel, et adsorbant pour chromatographie par affinite |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2110609A JPH048701A (ja) | 1990-04-27 | 1990-04-27 | 新規ペクチン酸―セルロースゲル及びその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH048701A true JPH048701A (ja) | 1992-01-13 |
Family
ID=14540169
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2110609A Pending JPH048701A (ja) | 1989-11-16 | 1990-04-27 | 新規ペクチン酸―セルロースゲル及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH048701A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS624272U (ja) * | 1985-06-21 | 1987-01-12 | ||
| JPS63306352A (ja) * | 1987-06-04 | 1988-12-14 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 浴槽装置 |
-
1990
- 1990-04-27 JP JP2110609A patent/JPH048701A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS624272U (ja) * | 1985-06-21 | 1987-01-12 | ||
| JPS63306352A (ja) * | 1987-06-04 | 1988-12-14 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 浴槽装置 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5089272A (en) | Process for producing capsules having a permeability-controllable membrane | |
| US4323650A (en) | Immobilization of biologically active substances in a porous support | |
| DE2915135C2 (ja) | ||
| DE3515252C2 (de) | Verfahren zur Immobilisierung gelöster Eiweißstoffe | |
| Elnashar et al. | Covalent immobilization of β‐galactosidase on carrageenan coated with chitosan | |
| JPH0787974A (ja) | 固定化リパーゼ | |
| Iyengar et al. | Urease bound to chitin with glutaraldehyde | |
| RU2702568C1 (ru) | Способ модифицирования сорбентов на основе целлюлозы для извлечения ионов тяжелых металлов из водных растворов | |
| JPH048701A (ja) | 新規ペクチン酸―セルロースゲル及びその製造法 | |
| US4043996A (en) | Gelatin manufacture-peroxide liquefaction process | |
| Mateescu et al. | Ready to use p-Benzoquinone activated supports for biochemical coupling, with special applications for laccase immobilization | |
| Guo et al. | Crosslinked mercerized cellulose membranes for the affinity chromatography of papain inhibitors | |
| RU2712907C1 (ru) | Способ модифицирования целлюлозосодержащих сорбентов для извлечения ионов тяжелых металлов из водных растворов | |
| RU2135517C1 (ru) | Способ карбоксиметилирования лигноуглеводных материалов | |
| RU2791803C1 (ru) | Способ модифицирования сорбентов на основе целлюлозы | |
| JP3025947B2 (ja) | 乾燥固定化リパーゼ担体の製造方法 | |
| JPS5763302A (en) | Spherical particles of crosslinked porous amylose and its production | |
| JP2613153B2 (ja) | 微生物固定化用担体の製造方法 | |
| JPH0564595A (ja) | キチン含有材料の酵素的分解法 | |
| KR102416674B1 (ko) | 계면활성제를 이용한 갈조류로부터 알칼리-가용성 알긴산을 추출하는 방법 | |
| JPS60501661A (ja) | 安定化されたキチン | |
| JPH0556792A (ja) | キチン含有材料の酵素的分解方法 | |
| SU1043214A1 (ru) | Способ отбелки целлюлозы | |
| Zahrah et al. | Evaluation of dissolution of purified bromelain from pineapple core extract (Ananas comosus [L.] Merr) in the form of chitosan-coated microspheres | |
| CN119264496A (zh) | 壳聚糖微球及其制备和应用 |