JPH049792B2

JPH049792B2 -

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Publication number: JPH049792B2
Application number: JP57199652A
Authority: JP
Priority date: 1981-11-16
Filing date: 1982-11-12
Publication date: 1992-02-21
Also published as: IE822714L; KR860000488B1; EP0079785B1; KR840002399A; DK161254B; HU189620B; IE54172B1; GR77791B; US4375432A; EP0079785A2; JPS5890591A; DK504882A; DK161254C; CA1180328A; IL67219A; GB2109378A; GB2109378B; EP0079785A3; DE3277200D1

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、動物の悪性腫瘍の治療に有用なイン
ドール−ジヒドロインドール二量体の１−ホルミ
ル同属体の製造法に関する。本発明は、ヴインカ・ロゼア（Vinca rosea）
の葉から抽出により得られる未分離のインドール
−ジヒドロインドール二量体アルカロイド
（VLB）のテトラヒドロフラン（THF）溶液を、
−80℃から−50℃の範囲内の温度で、最初に存在
した全ての１−メチル同属体が実質的に１−ホル
ミル同属体に変換するまで、水性クロム塩酸−硫
酸溶液と接触させ、必要に応じて、存在する１−
デスホルミル同属体をホルミル化し、その１種以
上の１−ホルミル同属体を取得することから成る
類縁性イドール−ジヒドロインドール二量体の１
種以上の１−ホルミル同属体を製造する方法を提
供する。現在までに、VLBをビンクリスチン
（vincristine、VCR）に変換する方法は公知技術
において４種類の方法が知られている。即ち、
「ペルオキシダーゼおよびH₂O₂による酵素的酸
化」（Vorman、アメリカ合衆国特許3354163）、
「ギ酸中における室温での分子状酸素による触媒
酸化」（ソビエト連邦特許521845に基いた
Derwent Abstract33812Y／19）、氷酢酸および
アセトン中における−60℃での酸化第二クロムに
よる硫酸VLBの酸化」（アメリカ合衆国特許
3899943）および「テトラヒドロフラン中におけ
る−50℃以下での水性クロム酸塩−硫酸溶液によ
るVLBの酸化」（ヨーロツパ特許庁刊行物
0037290）である。第二者の方法は１−ホルミル
リユーロシデンを製造するのに用い得る。しかしながら、−60℃でのクロム酸−アセトン
−酢酸による酸化法は次の様な欠点を有する。即
ち、製造プラントにおいて反応温度を低く維持す
ることが困難であり、温度がそれ以上に高くなれ
ば所望でない副産物の量が増加する。更には、ア
メリカ合衆国特許4110330（Barnett et al.）によ
れば、VLBからビンクリスチンへの変換過程で、
VLBは、この酸化条件下で（−60℃においてさ
えも）Ｃ−5′位でアセトンと反応して、5′−アセ
トニルビンクリスチンおよび関連生成物を生じる
ことが知られている。同様にしてこの酸化系にお
いてリユーロシンまたは4′−デオキシリユーロジ
シンを酸化すると5′−置換生成物が得られる。アセトン中で硫酸VLBをクロム酸酸化すると
副生する上記の所望でない5′−VCR誘導体は、
VLBからビンクリスチンを製造するのに用いる
際に明らかに障害となる。勿論、5′−アセトニル
化合物はクロマトグラフイーによりビンクリスチ
ンと分離できるが、その結果、所望の生成物であ
るビンクリスチンの損失が生じてしまう。その上
この酸化過程の間に、ビンクリスチンの収率を最
大にするためには再びホルミル化しなければなら
ないＮ−デスホルミル・ビンクリスチンが実質量
生じる。酸化処理によつて酸化と同時に脱ホルミ
ル化が起こる場合には、再度のホルミル化は余分
でかつ高価な過程となる。特にビンクリスチンに関しては、常法では、ビ
ンクリスチンとVLBをVRAから共に単離し、
VLBをビンクリスチンに酸化して再びその反応
系からビンクリスチンを単離するのに対して、本
発明の変法では、酸化過程の後にただ１度のアル
カロイド分離工程を要するだけである。通常の再
ホルミル化工程は、VRA由来のもの、酸化工程
で形成されるものまたはその両方にあるデスホル
ミル同属体をその対応するＮ−ホルミル同属体に
変換するのにも望ましい。粗製のアルカロイド混
合物を基質として利用するこの変法の酸化工程
は、通常の酸化工程よりも処理が簡便で葉から抽
出して生成物に至る時間が短い等の利点を有す
る。 THF中で約−60℃にてクロム酸塩−硫酸混合
液で酸化する本発明の新規方法は、公知技術より
も処理、試験のためのサンプリングおよび移送が
少なく、しかも、操作が簡単で短時間で行なえる
という利点を有しており、粗製二量体アルカロイ
ド混合物（VRA）を酸化して実質量のビンクリ
スチンおよびホルミルリユーロシンを得るのに特
に有用である。上記の利点は、CrO₃−アセトン
−酢酸を用いてVLBをビンクリスチンに変換す
る工程に比較した場合の操作過程上得られたもの
である。（）式において、 VLBは、Ｒ＝アセトキシ、R′＝OH、R²＝
C₂H₅、Ｒ＝Ｈ、R⁴＝CH₃であり、ビンクリスチ
ンは、Ｒ＝アセトキシ、R′＝OH、R²＝C₂H₅、
R³＝Ｈ、R⁴＝CHOである。従つて、VLBは酸化されるとビンクリスチン
となる。本発明の新規方法は、以下の酸化も包含する。ニユーロシジンから１−ホルミル−１−デスメ
チルリユーロシジンへの酸化Ｒ＝アセトキシ、R′＝C₂H₅、R²＝OH、 R³＝Ｈ、R⁴はCH₃からCHOへ酸化 4′−デオキシVLBから4′−デオキシビンクリス
チンへの酸化Ｒ＝アセトキシ、R′＝R³＝Ｈ、R²＝C₂H₅、 R⁴はCH₃からCHOへ酸化 4′−デオキシリユーロシジンから１−ホルミル
−4′−デオキシ−１−デスメチルリユーロシジン
への酸化Ｒ＝アセトキシ、R′＝C₂H₅、R²＝R³＝Ｈ、 R⁴はCH₃からCHOへ酸化リユーロシンからホルミルリユーロシンへの酸
化Ｒ＝アセトキシ、R′＝C₂H₅、R²とR³は架橋酸
素原子と一緒になつてα−エポキサイドを形成す
る。R⁴はCH₃からCHOへ酸化４−デスアセチルVLBから４−デスアセチル
ビンクリスチンへの酸化Ｒ＝R′＝OH、R²＝C₂H₅、R³＝Ｈ、 R⁴はCH₃からCHOへ酸化今後、他に呼称名がない１−ホルミル化合物を
命名する際は、理解され得るので「１−デスメチ
ル」という用語は省略する。即ち、ホルミル基が
１位のＮに存在する場合は、メチル基は１位には
存在しない。上記の方法には、K₂Cr₂O₇、K₂CrO₄、
Na₂CrO₄、CrO₃などの重クロム酸およびクロム
酸を用い得るが、重クロム酸ナトリウム、二水和
物が好ましい。ここで用いた「クロム酸」という
用語は、上記のクロム酸類の全てを包含する。重
クロム酸ナトリウム・二水和物と無水状態のアル
カロイドとの比は1.5〜2.0：１（Ｗ／Ｗ）の範囲
内でなければならない。通常用いられるテトラヒ
ドロフラン（THF）の量は、無水状態でのVLB
もしくはリユーロシンもしくは他のアルカロイド
またはアルカロイド混合物の量のおよそ100〜200
倍（ｖ／ｗ）であるが、およそ150：１（ｖ／ｗ）
の比率が好ましい。反応温度は、およそ−80℃
（ドライアイス／アセトン）からおよそ−50℃ま
で変えられる。しかしながら、およそ−70℃以下
の温度に維持されるようにアセトン／ドライアイ
ス浴（−77℃）を用いると、最良の結果が得られ
る。およそ−50℃以下の温度でも、至適温度では
ないが、充分に反応する。当業者には理解できる
とおり、反応温度の下限は、反応液が固化し始め
る温度、即ちおよそ−80℃であり、厳密には
THF中に存在する浴質によつて定まる。反応は１〜３時間の範囲内で充分に実施し得る
がおよそ２時間が至適時間である。反応が実質的
に完了したのち、酸化反応混合物質を硫酸第二
鉄、メタ重亜硫酸ナトリウムのような還元剤で洗
浄することは、過酸化物または残留酸化体を除去
する上で好都合である。酸化剤に加える酸として
は、過塩素酸のようなある種の強酸を用い得る
が、硫酸が特に好ましい。 −60℃でのクロム酸によるVLBからビンクリ
スチンへの酸化反応の溶媒としては、アセトン−
酢酸よりもTHFの方が適しているが、EPOパブ
リケーシヨン0037290に開示されたTHFとクロム
酸またはアセトンと重クロム酸の組み合わせのい
ずれを用いるよりも、THFと重クロム酸ナトリ
ウム−硫酸の組み合わせの方が適していることが
判明している。実施例１ VRA（アメリカ合衆国特許3932417の方法を用
いてヴインカ・ロビアの葉から抽出した粗製アル
カロイド混合物）の試料（10ｇ）４本を以下の様
にして処理した。 (A) アルミナのHPLCでVLB分画を得、シリカ
のHPLCで精製（98＋％）VLBを得、硫酸
VLBに変換。 (B) 以下の過程で再ホルミル化ののち(A)を実施。 VRA（10ｇ）を無水酢酸（60ml）およびギ酸
（60ml）加え、室温で１時間撹拌したのち、真
空乾燥した。乾燥した残渣を、1000mlの水に
14Nの水酸化アンモニウム水溶液（150ml）を
加えた溶液で中和し、アルカリ性溶液を塩化メ
チレンで３度（毎1000mlづつ）抽出した。抽出
物を合し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、過
して、溶媒を真空で蒸発させて除去した。 (C) 以下の過程で酸化。 VRA（10ｇ）をTHF（1200ml）に溶解し、氷
酢酸（37.5ml）を加えて、陽圧にした窒素雰囲
気中でクロロホルム／ドライアイス浴を用いた
方法により、約−65℃まで冷却した。ここに、
１〜２分間を要して、温度を約−65℃に保ちな
がら、撹拌下にゆつくりと酸化剤溶液（水75ml
に重クロム酸ナトリウム125ｇを溶解し、次い
で18M硫酸8.5mlを加えて調製）を加え、次い
で水（1000ml）に14M水酸化アンモニウム
（165ml）を加えた溶液に注加した。得られた溶
液を塩化メチレンで３度（毎度1000mlづつ）抽
出して、抽出物を合し、50mlにつき2.5ｇの割
合により、５％メタ重亜硫酸ナトリウム水溶液
で洗浄した。アルミナのHPLCでビンクリスチ
ン分画を取出し、シリカのHPLCで精製したビ
ンクリスチンを取出し、硫酸ビンクリスチンに
変換した。 (D) 酸化とアルミナのHPLCの間にホルミル加工
程が入る以外は(C)と同じ。下記第１表は上述の４処理の結果をまとめたも
のである。第１カラムは硫酸VLBの収率を表わ
し、第２カラムは存在する１−デスホルミルビン
クリスチン（DFVCR）の量から予想される硫酸
ビンクリスチンの収率および第３カラムは硫酸ビ
ンクリスチン（VCR）の収率を表わし、全て
VRAの遊離塩基に対するパーセントで表わす。
単離しても実質上次の精製に用いるのには商量す
ぎるアルカロイドについては、同じタイプの物質
で更に大量用いて行なつた過去の実施に基いて最
終収率を推定した。

【表】実験室の規模で得た平均値からの推定。
精製したアルカロイドの最終収量は、処理、精
製の過程での損出や他の分画にあつて回収できな
いことなどから必らずより少なくなる。VRA中
に存在するリユーロシンの酸化により生成するホ
ルミルリユーロシン（粗製混合物の分析によれば
VLB40〜45％に比較して25〜40％）はHPLCカ
ラムからビンクリスチンの前分画として得られ、
この分画を再度HPLCにかけて更に精製する。上記を数字は、本発明の新規酸化方法により、
少なくとも常法と同量のビンクリスチンの収率が
得られることを示すものである。例えば、本方法
によるVLBの酸化から得られると予想される
VCRの収率はＡにおいて約27.7％（収率80％）
であり、デスホルミルビンクリスチンおよびビン
クリスチンを合わせると33.4％となる。実際の収
率は33.1％である。粗製アルカロイド混合液の酸化について更に調
べるために、もう１つの処理(E)を行なつた。即
ち、(D)の処理法に従つて４倍の規模（VRA40ｇ）
で行なつた。この処理の結果を第２表に示す。カ
ラム名は第１表と同じである。

【表】 ※＝過去の実施の結果に基いた予想収量
ND＝検出不能
ここで、VCRの算出全収率は、VLBの80％が
VCRに変換するとして、31％×0.8（＝24.8％、
VLB）＋25％（DFVCR）＋3.5％（VCR）＝30.8％
となる。実際の収率は43.0％であり、算出収率よ
りもかなり高かつた。このような高収率が得られ
た原因としては、以下のようなことが考えられ
る。まず、VRAにおいては、癌治療の面からみ
て好ましいアルカロイドであるポルミルリユーロ
シンおよびビンクリスチンが、VLB、リユーロ
シンおよびいくつかのその他のＮ−メチルアルカ
ロイドと複雑に混在しているのに対して、被酸化
混合物では主成分が上記の２種の好ましいアルカ
ロイドであるので、Ｎ−メチル・ヴインガ二量体
の対応するＮ−ホルミル化合物への酸化は、アル
カロイド混合物を単純化するということが挙げら
れる。即ち、HPLCで精製した混合物はVRA出
発物質よりもはるかに単純である。次に、クロマ
トグラフイーでVLBを精製すると、VLBの一部
は、クロマトグラフイーの隣接分画に不純物とし
て含まれることになるので、精製VLBを基質と
する酸化には利用できないことが挙げられる。し
かし、かくして失われたVLBの多くは、隣接ク
ロマトグラフイー分画、硫酸VLB形成母液など
を合併し、そこからVLBを単離することにより
回収できる。そのVLBは80％の収率でビンクリ
スチンに酸化し得る。かくして、ビンクリスチン
の収量の増加は、実際は主工程の収量が増加した
のであつて全収量（total yield）は必らずしも増
加していない。この主工程の収量の増加は、母液、隣接クロマ
トグラフイー分画などからVLBを採取しVLBを
ビンクリスチンに変換するためのビンクリスチン
１ｇ当りの費用が、主工程物質１ｇ当りの費用よ
りもはるかに高いという点において特に有利であ
る。

Claims

【特許請求の範囲】１ヴインカ・ロゼアの葉から抽出により得られ
る未分離のインドール−ジヒドロインドール二量
体アルカロイドのテトラヒドロフラン（THF）
溶液を、−80℃から−50℃の範囲内の温度で、最
初に存在した全ての１−メチル同属体が実質的に
１−ルミル同属体に変換するまで、水性クロム酸
塩−硫酸溶液と接触させ、必要に応じて、存在す
る１−デスホルミル同属体をホルミル化し、１種
以上の１−ホルミル同属体を取得することから成
る類縁性インドール−ジヒドロインドール二量体
の１種以上の１−ホルミル同属体を製造する方
法。２ヴインカ・ロゼアから抽出した未分離のイン
ドール−ジヒドロインドール二量体アルカロイド
からビンクリスチンおよびホルミルリユーロシン
を取得することを含む特許請求の範囲第１項に記
載の方法。３ヴインカ・ロゼアから抽出した未分離のイン
ドール−ジヒドロインドール二量体アルカロイド
からビンクリスチンを取得することを含む特許請
求の範囲第１項に記載の方法。４ヴインカ・ロゼアから抽出した未分離のイン
ドール−ジヒドロインドール二量体アルカロイド
からホルミルリユーロシンを取得することを含む
特許請求の範囲第１項に記載の方法。５物質取得の最終工程をクロマトグラフイーを
用いて行う特許請求の範囲第１項〜第４項のいず
れかに記載の方法。