JPH051714B2 - - Google Patents

Info

Publication number
JPH051714B2
JPH051714B2 JP63047678A JP4767888A JPH051714B2 JP H051714 B2 JPH051714 B2 JP H051714B2 JP 63047678 A JP63047678 A JP 63047678A JP 4767888 A JP4767888 A JP 4767888A JP H051714 B2 JPH051714 B2 JP H051714B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
ligand
binder
support
solid
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP63047678A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS63294784A (ja
Inventor
Uiriamu Deruushe Iiberii Jon
Kenesu Kobosu Robaato
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
EIDP Inc
Original Assignee
EI Du Pont de Nemours and Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by EI Du Pont de Nemours and Co filed Critical EI Du Pont de Nemours and Co
Publication of JPS63294784A publication Critical patent/JPS63294784A/ja
Publication of JPH051714B2 publication Critical patent/JPH051714B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
    • G01N33/545—Synthetic resin
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/261—Synthetic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28014—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their form
    • B01J20/28033—Membrane, sheet, cloth, pad, lamellar or mat
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3092—Packing of a container, e.g. packing a cartridge or column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
    • B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
    • B01J20/321—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B01J20/3274—Proteins, nucleic acids, polysaccharides, antibodies or antigens
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/34—Regenerating or reactivating
    • B01J20/3425—Regenerating or reactivating of sorbents or filter aids comprising organic materials
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/001—Enzyme electrodes
    • C12Q1/002—Electrode membranes
    • C12Q1/003—Functionalisation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/40—Aspects relating to the composition of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/49—Materials comprising an indicator, e.g. colour indicator, pH-indicator
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/814—Enzyme separation or purification
    • Y10S435/815—Enzyme separation or purification by sorption
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/824—Immunological separation techniques
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】
技術分野 本発明は、アフイニテイ分離の実施、そしてよ
り詳細にはペルフルオロカーボンポリマー・ベー
スの固体支持体を利用した酵素固定およびバイオ
アフイニテイ分離の実施および特異的結合反応を
通しての分子捕獲における用途に関する。 背景技術 アフイニテイ分離とは、特定の物質間の特異的
結合性を利用することによつて達成されるあらゆ
る分離として定義できる。バイオアフイニテイ分
離とは、アフイニテイ反応に関与する成分のうち
の一つが生物活性があるかまたは生物学的に重要
であるアフイニテイ分離として定義される。バイ
オアフイニテイ分離には一般に少くとも一種の生
体高分子例えばタンパク質または核酸などが結合
対の成分のうちの一つとして関与する。かかるバ
イオアフイニテイ結合対としては例えば次のもの
が挙げられる：抗原−抗体、基質−酵素、エフエ
クター−酵素、阻害剤−酵素、補助的核酸鎖、結
合タンパク質−ビタミン、結合タンパク質−核
酸；反応性染料（色素）−タンパク質、反応性染
料（色素）−核酸、等々。特異的バイオアフイニ
テイ接合対の二成分を表わすためにリガンドおよ
びバインダーという用語が用いられることになろ
う。 アフイニテイ分離には、一般に、リガンドまた
はバインダーで誘導体化された（derivatized）
固体担体の使用が必要であるとされている。これ
らの分離は、バツチ法またはクロマトグラフイ法
として行うことができ、そして一般的に後者が好
ましい。アフイニテイ・クロマトグラフイは周知
であり、例えばC.R.Lowe著「An Introduction
to Affinity Chromatography」（North
Holland Publishing Company発行、アムステル
ダム、ニユーヨーク、1978年）でレビユーされて
いる。Loweはアフイニテイ分離に用いられるべ
き固体支持体に望まれる特性を記載している。
Loweによれば、固体支持体は大型分子の出入り
を均一にかつ障害なく可能とするために、またリ
ガンド固定のために大表面積を提供するために緩
く多孔質のネツトワークを形成するのがよく、ま
たそれは化学的に不活性で物理的および化学的に
安定であるのがよく、そして以後のリガンドの安
定な結合を可能にするために官能化ができるもの
でなければならない。加えて、それら粒子は良好
な流体流れ特性を保証するために、均質、球状お
よび剛性のものとするのがよい。 アフイニテイ・クロマトグラフイに適した支持
体材料のリストは大変なものであり、ここでレビ
ユーすることはしない（一部のリスオについては
Lowe、1978年参照）。所与の支持体が前述の目
的のすべてを達成することは一般的に可能でな
い。アフイニテイ支持体を任意の担体から調製す
る際に直面する要件の一つは、担体に対するリガ
ンドまたはバインダーの効率的かつ安定な結合で
ある。最も普通に採用される方法は、一般的に、
担体表面を反応性試剤（これは次いでリガンドま
たはバインダーに共有結合的に結合する）で変性
（修飾）することによる共有結合による結合であ
る。このアプローチの代表例はWeetal〔Methods
in Enzymology、Volume XLIV：Immobilized
Enzymes、Chapter10、134、Ed.K.Mosbach、
Academic、Press、ニユーヨーク（1976年）〕に
より示されている。このアプローチの主な不利な
点は次のとおりである：担体の表面特性が変性す
るために所望しないタンパク質の非特異的結合性
の増大がしばしば生じる：結合されているリガン
ドまたはバインダーの有意部分が失活してしま
う：結合が永久的なため、不足するあるいは高価
なリガンドまたはバインダーの回収が妨げられ
る。 一般的に用いられる結合方法のもう一つは、担
体に対するリガンドまたはバインダーの非特異的
吸着である。このアプローチは、Messing
〔Methods in Enzymology、Volume XLIV：
Immobilized Enzymes、Chapter11、149、Ed.
K.Mosbach、Academic Press、ニユーヨーク
（1976年）〕によりレビユーされている。このアプ
ローチの主な不利な点は次のとおりである：結合
が比較的弱く一般的に結合したリガンドまたはバ
インダーの一部または全部が使用中に放出されて
しまう：また担体に結合されているリガンドまた
はバインダーが部分的に失活してしまう。これら
の短所にかかわらず、このアプローチは簡素さと
いう利点を有するため今もなお広く用いられてい
る。 フルオロカーボンポリマーはリガンドが吸着に
より結合される担体として用いられている〔米国
特許第3843443号、1974年10月22日Fishmanに交
付；Rijskuniv Groningen出願のWO8603−840
−Ａ；およびSiergiej、Dissertation Abstracts、
Int.B.、Volume44、153（1983年）〕。リガンドと
担体の間の特異的相互作用を行わせるために前記
リガンドを変性させる試みは全くされなかつた。
Sakagani et al.〔EP第0011504号（1983年６月20
日公開〕は、フルオロポリマーイオン交換膜にリ
ガンドを結合させるために電着の使用を開示して
いる。この場合にもリガンドと担体との間に特異
的相互作用を行うためにリガンドを変性しようと
する試みは行われなかつた。 Busby et al.（米国特許第4317879号、1982年３
月２日交付）は、パラホルムアルデヒド連結を通
してのフルオロカーボン膜に対する酵素、グルコ
ースオキシダーゼの共有結合を開示している。 Hato et al.（米国特許第4619897号、1986年10
月23日交付）は、ペルフルオロアルキル界面活性
剤を所定の深さまで浸透させて片側を親水性にし
た弗素樹脂膜に酵素を固定する方法を開示してい
る。このようして得られた非対称官能性の膜を次
いで酵素および架橋剤例えばグルタルアルデヒド
で処理すると酵素固体が達せられる。この生成物
は酵素電極として利用することができた。 1986年５月15日出願に係る同時係属中の米国特
許出願第863607号はペルフルオロ置換リガンドま
たはバインダーを液体ペルフルオロカーボンの乳
液の小滴表面に分配すること（partitioning）に
より調製されるペルフルオロカーボン液ベースの
液体支持体を開示している。 アフイニテイ分離はしばしば他の方法の構成部
分となつている。それらを不均一イムノアツセイ
に用いるのはその一例である。この場合、アフイ
ニテイ分離は複雑な混合物例えば血清または血漿
から被分析物（analyte）を捕獲するのに用いら
れる。被分析物を捕獲後、夾雑物を洗い流しそし
てその被分析物を周知のアツセイ・プロトコルを
用いて検出する。 この分野で汎用される固体支持剤としてはプラ
スチツク球（ビーズ）、プラスチツク試験管内部、
微量力価測定板（マイクロタイタープレート）ウ
エル、磁性粒子、および多孔質ガラス粒子が挙げ
られる。これらの系の欠点は支持体に対するリガ
ンドまたはバインダーの結合が困難かつ非効率的
であるという点である。 一部の分離問題は、液−液抽出によつて伝統的
に取り扱われている。例えば精製核酸を必要とす
る核酸ハイブリダイゼーシヨン・アツセイでは、
検体からの核酸例えばDNAまたはRNAを固体支
持体に結合させる必要がある。その核酸をプロー
ブするには、まずそれを（細胞中にあるときは）
細胞から溶解（lysis）によつてまず放出させ、
次いでその溶解液から抽出する必要がある。最も
汎用されている抽出技術は、水性フエノール／ク
ロロホルム混合物を使用している（Maniatis et
al.、Molecular Cloning：Ａ Laboratory
Manual、pp.458〜９、Cold Spring Harbor
Laboratory、1982年）。溶解液の主成分であるタ
ンパク質はこの抽出を妨害する傾向がある。核酸
を抽出した後は、過剰フエノールをエーテルで抽
出しそしてそのエーテルを蒸発させなければなら
ない。その核酸含有液を次いで濃縮した後に固体
支持体上に沈着させている（例えばChurch et
al、Proc.Nat.Acad.Sci.USA、Volume81、1991
（1984）参照）。これは途中で材料損失をする機会
の多い煩雑で危険な方法である。 アフイニテイ分離は強力な技術であること、そ
して現在利用可能な支持体には様々な欠点がある
ことから、改良された支持体が必要とされてい
る。これらは次の諸性質を有するべきである：物
理的および化学的安定性；化学的不活性；各種生
物学的試料との相容性；バツチ法およびクロマト
グラフイ法への利用可能性；大表面積；クロマト
グラフイに用いたときに高流速を可能にする能
力；表面に対するリガンドまたはバインダーの容
易かつ安定な結合を提供する能力；および支持体
を簡単に効率的に再生できる能力。 本発明の開示 本発明のアフイニテイ支持体は、リガンドまた
はバインダーが安定的に（しつかりと）結合した
固体ペルフルオロカーボンポリマー担体に基づい
ている。本アフイニテイ支持体は化学的に不活性
であり、しかもリガンドおよびバインダーに対す
る非特異的結合性は低い。 本発明のバイオアフイニテイ分離の実施方法
は、次の諸工程、すなわち (1) 固体ペルフルオロカーボンポリマー担体の表
面にリガンドまたはバインダーを結合させて固
体アフイニテイ支持体を形成し；そして (2) 前記担体を結合されたリガンドまたはバイン
ダーに対し補助的な標的バインダーまたはリガ
ンドを前記アフイニテイ支持体を用いて混合物
から捕獲する 工程より成る。 前記リガンドまたはバインダーは、該リガンド
またはバインダーをペルフルオロ化された試剤で
変性させて表面に係合させるが、それによつてペ
ルフルオロカーボンポリマーに安定的に結合され
る。 本発明の説明 本発明のペルフルオロカーボンポリマーベース
の固体アフイニテイ支持体はバイオアフイニテイ
分離を行う際にこれまでにない長所をもたらす。
固体ペルフルオロカーボンポリマー・ベースのア
フイニテイ支持体を用いることの最大の長所、担
体の不活性および剛性に関係する。他の長所は不
足しているあるいは高価なリガンドまたはバイン
ダーを回収できること、活性の分つているリガン
ドまたはバインダーを結合できることである。本
発明の固体ペルフルオロカーボンポリマー・ベー
スの支持体は、更に水性環境中で安定であり、そ
して天然タンパク質、核酸またはその他の生物学
的試料の成分に対する非特異的結合性を低くする
ための処理にかけやすいなどといつた長所も提供
する。 本発明の支持体は固体ペルフルオロカーボンポ
リマー担体および安定的に結合したリガンドまた
はバインダーより成る。ペルフルオロカーボンと
はその構造中に可能な最高割合のあるいは比較的
高割合の弗素原子を含有する分子を意味する。ペ
ルフルオロカーボンポリマーは不活性であること
が知られている。本発明の固体アフイニテイ支持
体の形成に用いることのできるペルフルオロカー
ボンポリマーの数例：各種Teflon（商標名）フル
オロカーボンポリマー、ポリテトラフルオロエチ
レン、ポリビニルフルオライドおよびポリビニリ
デンジフルオライド（Teflon（商標名）は、E.I.
du Pont de Nemours and Company社の登録
商標である）。 リガンドとは、抗原、ハプテン、核酸、酵素基
質、ビタミン、色素またはその他の酵素基質、エ
フエクターおよび阻害剤を含む有機低分子を意味
し、またバインダーとは抗体、酵素、核酸、結合
タンパク質、結合タンパク質の合成類似物質例え
ばポリリジンおよびポリエチレンイミン類または
その他の特異的結合例えば酵素／基質相互作用可
能な生体高分子を意味する。 アフイニテイ支持体は担体に安定的に係合した
リガンドまたはバインダーを有しなければならな
い。安定的な結合とは、例えばバイオアフイニテ
イ分離等に本発明の固体支持体を用いる際に関与
する諸工程を耐え抜き得る結合を意味する。しか
しながら、この結合は、所望の場合に、例えば担
体を回収したい場合に、例えばカオトロピツク剤
（chaotropic agents）によるリガンドまたはバイ
ンダーの置換により可逆性とする必要があるもの
と期待される。リガンドまたはバインダーが精製
物を汚染することがないよう、また支持体の能力
損失を防ぐために安定的な結合が必要である。従
来の支持体を用いてこれは通常リガンドまたはバ
インダーを支持体に共有結合的に結合することに
より行われる。リガンドまたはバインダーをしつ
かりと結合することに加えて非特異的結合性を増
大させる可能性のある官能基を導入しないために
担体の一般的不活性さを変えないことが望まし
い。更に、様々なリガンドまたはバインダーに適
用できる一般的方法を開発することが望ましい。 ペルフルオロカーボンポリマー・ベースのアフ
イニテイ支持体の好ましい調製方法は分配法また
は吸着法と呼ぶこととする。この方法では、ペル
フルオロカーボン担体の表面に対する選択的で高
アフイニテイの（安定的な）結合が可能となるよ
うにリガンドまたはバインダーの変性が行われ
る。これを行うための一つの手段は、表面への結
合に先立ち、高度にまたペルフルオロカーボン置
換されたリガンドまたはバインダーを調製精製す
ることである。便宜上、リガンドまたはバインダ
ーに結合されたペルフルオロカーボン基をアンカ
ー（anchor）基と呼ぶこととする。高度に弗素
化された基を共有結合的にリガンドまたはバイン
ダーに結合するためにいくつかの周知の化学的手
法を用いることができる。考慮すべきフアクター
は使用弗素化化合物の反応性、反応媒質のPHおよ
び反応時間および反応温度である。 本発明の固体支持体の調製にあたつては、例え
ば、各種ペルフルオロカーボン酸の酸クロライ
ド、無水物およびイミダゾライド、例えばペルフ
ルオロオクタノイルクロライド、ペルフルオロオ
クチルアセチルおよびプロパノイルクロライドお
よびペルフルオロオクタノイルおよびペルフルオ
ロオクチルプロパノイルイミダゾライド等の化合
物が首尾よく用いられた。イミダゾライド誘導体
はその反応性が比較的低く、反応がコントロール
し易くなるので好ましい。一般に、反応は、リガ
ンドまたはバインダーの水性溶液を、水と混和し
得る有機溶媒、例えばテトラヒドロフランに溶解
された弗素化試剤とコントロールされた時間、温
度およびPH条件下に混合することにより行われ
る。誘導体化されたリガンドまたはバインダー
は、ゲル過または透析により反応副生物および
有機溶媒から分離される。誘導体化度は、任意の
既知の方法、例えばトリニトロベンゼンスルホネ
ート標識により測定することができる。その置換
されたリガンドまたはバインダーは、適宜の担体
と共にペルフルオロカーボンポリマー・ベースの
固体支持体を形成するのに用い得る状態となつて
いる。 アフイニテイ支持体は、ペルフルオロカーボン
ポリマー担体例えばTefron（商標名）Ｐ PFA粉
末コーテイングを担体の表面に分配する誘導体化
されたリガンドまたはバインダーの緩衝溶液と混
合することにより形成することができる。担体を
その緩衝溶液と接触させる前に有機溶媒例えばメ
タノールまたはｔ−ブタノールで処理するのが有
利である。この溶媒処理は担体の湿潤性を改善で
き、またより速くそしてより良い固定を可能にす
る。一般にバツチ法ではクロマトグラフイ法より
も結合レベルが高かつた。 担体表面への安定的な結合を実現するのに必要
な誘導体化（置換）度は、ペルフルオロ・アンカ
ー基、リガンド上のアンカー基の空間配置、リガ
ンドの大きさおよび性質および支持体の最終用途
に著しく依存して変わるものと予測される。一般
に、置換度が高い程結合は強固になる。しかしな
がら、これは立体的配慮、およびリガンドまたは
バインダーの生物活性を残す必要性によつて制約
され得る。典型的タンパク質の有効（利用可能）
アミノ基の約20％にアンカー基を付けるのが好ま
しいことが見出された。西洋ワサビペルオキシダ
ーゼおよびウレアーゼのアミノ基の20％を（ペル
フルオロオクチル）プロパノイルイミダゾライド
で標識した場合、その酵素の天然活性の12％しか
失われないことが分つた。また、緩衝液で洗つた
場合、それら酵素は、担体表面から洗い流される
ことに抵抗した。 前述のアプローチは、リガンドまたはバインダ
ーを担体表面に結合するための良好な一般的方法
を提供するが、特定のリガンドまたはバインダー
のための特定の手順を用いる必要が生じることも
ある。かかる手順の一つは、IgGクラス抗体のFc
部分を高度に弗素化された試剤で特異的に置換す
ることにより成り、これによつてその抗体を特定
の配向をもつてペルフルオロカーボン担体に結合
することができる。これによつてその特異結合部
分、すなわちＦ（ab）結合部位、を水性環境中に
配向させた形で抗体が結合されることとなろう。
かかる配向は、抗体のより効率的使用およびより
高い捕獲効率を提供するものと期待される。それ
はまた、混合物中に存在し得るリコーマチ因子に
よる非特異的結合干渉を、抗体のFc部分を水性
相に接近し得なくすることにより最小限に抑える
こともできよう。 前述の調製方法は多くの長所を提供する。例え
ば固体アフイニテイ支持体の個々の成分が調製さ
れより厳密な品質管理が可能となること；高価
な、または不足するリガンドまたはバインダーの
最適使用が促進されること；単一リガンド層が作
られ、支持体上の結合部位の立体的ブロツクが最
小限に抑えられること；そして各リガンドまたは
バインダー上に多数の結合部位が得られ、担体表
面に対するより強固な結合が促進されることなど
が挙げられる。 本発明のペルフルオロカーボンポリマーベース
の固体支持体が本発明の慣用の支持体に対しもつ
更なる長所は、支持体の形成に用いられる試剤を
滅菌できる点および汚染された支持体を再滅菌で
きる点である。後者は従来の支持体の場合は可能
でない。分配法によるリガンドまたはバインダー
の担体への結合方法は再滅菌に対して特にふさわ
しい。ペルフルオロ誘導体化されたリガンドまた
はバインダーはカオトロピツク剤を用いて支持体
から回収しそして限外過により滅菌した後に再
結合することができる。ペルフルオロカーボンア
フイニテイ支持体からリガンドを除去するのに有
効であることが見出されているカオトロピツク剤
は尿素およびアンモニウムチオシアネートであ
る。各種の水と混和し得る有機溶媒例えばメタノ
ールなどもリガンドの除去に有効である。 ペルフルオロカーボン類は不活性でありそして
比較的低い非特異的結合特性を示すが、ある程度
の非特異的結合は起きてしまう（例えばFishman
前掲文献）。これら担体の非特異的結合は、非イ
オンフルオロ界面活性剤例えばZonyl（商標名）
FSNフルオロ界面活性剤、ペルフルオロ−ポリ
オキシエチレン界面活性剤、で処理することによ
り更に低下させることができる。フルオロ界面活
性剤は担体の表面を被覆し他の物質の結合を妨げ
るように思われる。これらのフルオロ界面活性剤
はまた変性リガンドまたはバインダーの結合を妨
げ得るので、この処理は、アフイニテイ支持体の
形成後に行われなければならない。しかしなが
ら、フルオロ界面活性剤は特異的に変性されたリ
ガンドまたはバインダーの担体からの放出を起こ
すことはないであろう。 ペルフルオロカーボンポリマー・ベースの支持
体はオートクレーブ処理により滅菌することもで
きる。次いで同じ成分を用いて支持体を再形成す
るか、または新たなポリマーで置き換えることが
できる。これによつて価値あるリガンドまたはバ
インダーを回収し再使用ができる。リガンドまた
はバインダーが適宜の滅菌条件下に生物活性を残
すことができる場合には、一部の支持体は成分分
離を伴うことなく滅菌することもできる。これら
の配慮は、体外血液処理または人間用治療薬調製
などの応用に特に重要である。 体外放血療法にペルフルオロカーボンポリマ
ー・ベースの固体アフイニテイ支持体を用いるこ
とももう一つの独特の長所を提供する。未被覆・
未変性のペルフルオロカーボン・カラムまたはフ
イルターを放血・カラムの下流に置くことがで
き、それによつてなにがしかの微量のペルフルオ
ロ化されたリガンドまたはバインダーが放血カラ
ムから放出された場合それは未被覆ペルフルオロ
カーボンにより結合されることになる。 本発明の固体アフイニテイ支持体のもう一つの
応用は、それらを溶液からのDNA捕獲に用いる
ことである。支持体表面にヒストンタンパク質が
結合したペルフルオロカーボンポリマー・ベース
のアフイニテイ支持体を分配法によつて調製し
た。ヒストンは細胞中でDNAと相互作用してそ
のDNAをコンパクトな形に包み込む高度に正に
荷電したタンパク質である。驚くべきことに、変
性された仔牛胸線ヒストンおよび多孔質PTFE膜
またはその他の担体から調製されたペルフルオロ
カーボンポリマー・ベースのアフイニテイ支持体
は水性溶液からDNAを捕獲できることを見出し
た。記載の方法ではヒストンが用いられたが、そ
の他のリガンド例えばポリリジン、抗−DNA抗
体および相補的塩基配列のみを捕獲できる特異的
オリゴヌクレオチド配列を用いることもできる。 ペルフルオロカーボンポリマー・ベースのアフ
イニテイ支持体を使用することの長所を例示する
もう一つの応用はイムノアツセイであ。かかるア
ツセイの一例は定性的酵素連結免疫収着剤アツセ
イ（ELISA）であり、この場合、紙、多孔質
膜、プラスチツクへら（paddle）、またはその他
の固体表面上の色を視覚的に検出することができ
る。このアツセイは、定量的アツセイおよび色以
外のその他の検出可能な信号の使用にも容易に適
合させることができる。担体の部分のみ高度に弗
素化することによりガンドまたはバインダーが担
体の不連続部分にのみ結合し得るようにすれば本
発明のアフイニテイ支持体を特に有利に応用でき
るものと期待される。これは、炭化水素ポリマー
の部分をRiston（商標名）フオトポリマーレジス
ト材料で被覆し、リガンドを担体に結合させたく
ない領域を露光し、未露光レジスト材料を溶解
し、次いでむき出しの炭化水素域を弗素ガスに曝
すことによつて行い得る。次いでその高度に弗素
化された部分を前述の如く変性リガンドまたはバ
インダーを結合するよう機能させることができ
た。 もう一つの応用は、ペルフルオロカーボンポリ
マー・ベースの固体支持体上に酵素を固定するこ
とによる固体酵素系例えば酵素電極の構築および
使用である。この応用例においては、電気化学的
ガス・センサー（例えばO2およびNH3）のフル
オロカーボン膜に酵素を結合させることができ
る。この酵素は電気化学的にモニターできる共存
反応成分（coreactant）を消費しまたは生成物を
生成する反応を触媒できるように選択される。電
気化学的信号は被分析物濃度の尺度を与える。こ
の応用例では酵素はバインダーとして働き、標的
被分析物はリガンドとして働く。 酵素ウレアーゼをアンモニアガス・センサーの
Teflon（商標名）ペルフルオロカーボン膜に結合
することにより尿素感受性電極を構築することが
できる。そのウレアーゼは、分配法を用いて
Teflon（商標名）ペルフルオロカーボン膜に結合
させることができる。ウレアーゼの結合量を高め
るために微小多孔質膜を用いるのが有利である。
前述の長所に加えて、この応用例には酵素を結合
させるためにしばしば必要とされる第二支持体膜
を用いる必要がないという利点もある。 以下の実施例により本発明を更に例示する。 実施例 １ 固体フルオロカーボン表面に対するペルフルオ
ロアルキル置換タンパク質の吸着の実証 （ペルフルオロオクチル）プロパノイルイミダ
ゾライド、1H，1H，2H，2H−ペルフルオロウ
ンデカン酸イミダゾライドをペルフルオロオクチ
ルプロピオン酸から次のようにして製造した：
4.9ｇのペルフルオロオクチルプロピオン酸
（ICN Biomedicals、Inc.、社、Plainview、ニユ
ーヨーク）を15mlの乾燥テトラヒドロフランに溶
解し、そして室温で1.8ｇの１，1′−カルボニル
ジイミダゾール（Sigma Chemical.Co.社St.
Louis、ミズーリ州）の乾燥THF35ml中に撹拌溶
液に添加した。反応混合物を30分間撹拌したとこ
ろ、その間に生成物が結晶し始めた。その混合物
を氷水中で冷却し、そしてガラス・フリツトフイ
ルタ漏斗中で過した。結晶を氷冷、乾燥THF
で洗浄し、そして乾燥空気流で乾燥した。（ペル
フルオロオクチル）プロパノイルイミダゾライド
の収量は3.8ｇであり、理論収率の68％であつた。
生成物の融点は128℃であつた。 ２mlの0.1M燐酸水素二ナトリウム溶液に懸濁
された10mlのフルオレセインイソチオシアネート
（FITC）を5.0mlの0.2M燐酸水素二ナトリウム溶
液に溶解された80mgのヒトγ−グロブリン
（Sima Chemical.Co.社St.Louis、ミズーリ州に）
添加することにより螢光標識ヒトγ−グロブリン
（FITC−hIgG）を調製した。その撹拌混合物の
PHを0.1M燐酸三ナトリウム溶液の添加により9.5
に調節し、そして全量を0.145M塩化ナトリウム
溶液を添加することにより8.0mlまで増加させた。
その反応混合物を室温で30分間撹拌した。その反
応混合物をホスフエート緩衝食塩水で平衡させ
た。25×2.2cmカラムのBiO−Gel（商標名）P6
（Bio−Rad−Laboratories、Richmond、カリフ
オルニア州）にかけた。FITC−hIgGはカラムの
排除容量中に未反応および加水分解FITC不含の
状態で溶出された。このFITC−hIgGのスペクト
ログロフイ分析により接合度はγ−グロブリン１
モルに対しFITC3.34モルであることが示された。 前述の如く調製された氷冷0.1Mホスフエート
緩衝液（PH8.0）に溶解された6.75mgのFITC−
hIgGに、１mlあたりに20mg含有する（ペルフル
オロオクチル）プロパノイルイミダゾライドの
THF溶液0.5mlを添加した。その反応混合物を氷
浴中で２時間撹拌した。その反応混合物をホスフ
エート緩衝液（PH8.0）で平衡した３×26cmカラ
ムのBiO−Gel P6にかけた。ペルフルオロアル
キル化タンパク質は、カラムのボイド溶液量が溶
出した後、溶出し始め約21ml得られた。反応の度
合は次のようにして測定した。アリコート溶出タ
ンパク質画分をトリニトロベンゼンスルホン酸を
用いた標準的手順により残留アミノ基について分
析した。hIgGの置換量は、コントロール（イミ
ダゾライド処理を施してないもの）と前記調製物
の間に存在する有効（利用可能）アミノ基量の差
から算出した。有効アミノ基の反応率は30％であ
つた。 次の材料を0.5mlアルコートのペルフルオロア
ルキル化FITC−hIgG溶液に浸漬しそして約15秒
間混合した： ａ PTFE（ポリテトラフルオロエチレン）膜
（直径8.2mm、１ミクロン細孔、＃TE37、
Shleicher＆Schuell Inc.社、Keene、ニユーハ
ンプシヤー州） ｂ アンモニア多孔質PTFE膜、＃95−10−04
（Orion Research Inc.、Cambridege、マサチ
ユーセツツ州） ｃ Nensorb、325メツシユの5.0mgサンプル（E.
I.du Pont de Nemours and Company社、
Wilmington、デラウエア州） 処理後、それらの材料を３mlアリコートのホス
フエート緩衝液（PH８）中で３回洗浄し、そして
螢光顕微鏡で検査した。すべての検体は明るい螢
光を示し、これによつてペルフルオロアルキル化
FITC−hIgGがフルオロカーボン表面に強力に吸
着されたことが実証された。それら検体をフルオ
ロ界面活性剤（Zonyl（商標名）FS）の0.1％溶液
で処理しても螢光タンパクを脱着できなかつた。 実施例 ２ フルオロカーボン・マトリクス上での固体酵素
の調製 西洋ワサビペルオキシダーゼ（ドナー：過酸化
水素酸化還元酵素；EC1.11、1.7）を実施例１に
記載の方法によりペルフルオロアルキル化した。
Sigma Chemical Co.社（St.Louis、ミズーリ
州）から得た10mgの西洋ワサビペルオキシダーゼ
（HRP）をTHF中の20mgの（ペルフルオロオク
チル）プロパノイルイミダゾライドで処理し、そ
して前述の如くBio−Gel P6カラムで精製した。
発色原性基質としてテトラメチルベンジジンを用
いた標準的方法により測定したところ、生成物は
未処理酵素に比べ0.36mg／mlの相対活性を示し
た。 小型ガラスカラムを1.04ｇのNensord（E.I.du
Pont de Nemours and Company社、
Wilmington、デラウエア州）で乾式充填し、そ
してメタノール、メタノール／水（１：１）、お
よび48.6mlの0.1Mクエン酸と51.4mlの0.2M燐酸
水素二ナトリウムとから調製された緩衝液（Ｃ／
Ｐ緩衝液）を浸透させた。このカラムにＣ／Ｐ緩
衝液中のペルフルオロアルキル化HRP（PF−
HRP）の各種希釈液のアリコースを添加し、そ
して溶出液を標準的方法を用いてHRP活性につ
いてアツセイした。差により全部で970μｇのPF
−HRPがNensorbに吸着したことが分つた。吸
着後、そのカラムを10mlアリコートのＣ／Ｐ緩衝
液で10回洗浄した。最初の７回の洗浄液のアツセ
イから全部で154ｇ（結合量の0.016％）のペルオ
キシダーゼ活性がカラムから移つたことが分つ
た。そして最後の３回の洗浄液はペルオキシダー
ゼ活性を全く示さなかつた。標準的HRPアツセ
イの検出可能な下限は約0.1ｇ／mlに等しい。 そのカラムを今度は10mlアリコートの１％
Zonyl FSCフルオロ界面活性剤（E.I.du Pont
de Nemours and Company社）含有Ｃ／Ｐ緩衝
液で洗浄し、そして溶出液の酵素活性をアツセイ
した。第１アリコートは全部で212nｇ、第２ア
リコートは27nｇおよび第３アリコートは7nｇの
HRP活性を含んでいた。その後は、カラム溶出
液には測定可能なペルオキシダーゼ活性が全く含
まれていなかつたが、このことはすなわち、フル
オロ界面活性剤の共存下においてさえもフルオロ
カーボン・マトリツクスに対するPF−HRPの吸
着が極めて強固であることを実証している。最後
に支持体上の固定ペルオキシダーゼの存在は、ペ
ルオキシドと発色原性基質を適用し、暗青色が速
やかに現われたことにより鮮やかに証された。 実施例 ３ DNA抽出膜の調製 実施例１に記載の方法をやや改変した方法を用
いてペルフルオロアルキル化仔牛胸線ヒストンを
調製した。ホスフエート緩衝剤（PH８）中の仔牛
胸線ヒストン（Sigm Chemical Co.社、st.
Louis、ミズーリ州）の１mg／ml溶液10mlに、乾
燥THF0.2mlに溶解された４mgの（ペルフルオロ
オクチル）プロパノイルイミダゾライドを添加し
た。氷浴中で２時間撹拌後、反応混合物を前述の
如くBio−Gel（商標名）P6カラムで精製した。有
効アミノ基の置換度分析により反応率は約92％で
あることが示された。 PTFE多孔質膜（Type TF450、Gelman
Sciences Inc.社、Ann Arbor、ミシガン州）を
精製されたペルフルオロアルキル化ヒストンの溶
液に浸漬しそしてホスフエート緩衝液中で３回洗
浄した。次いでその膜をホスフエート緩衝液中の
菌株Ｂ大腸菌DNA（Sigma Chemical Co.社、St.
Louis、ミズーリ州）の10μｇ／ml溶液に浸漬し
そして３時間ゆるやかに揺動した。その膜を取り
出し、緩衝液中で３回洗浄し、そしてアクリジン
オレンジの10μｇ／ml中に浸漬して吸着された
DNAすべてを染色した。次にその膜を蒸留水流
中で洗浄し、そして螢光顕微鏡で観察した。処理
された膜には螢光が内視できるが、このことは吸
着されたDNAの存在を示している。未処理膜を
アクリジンオレンジ溶液と反応させても内視可能
な螢光はなかつた。 ペルフルオロアルキル化ヒストンを吸着させる
前に、10％tert.ブタノールおよび２％Tweem20
を含有する0.1Mホスフエート緩衝液（PH８）で
膜を前処理することにより、比較的高い螢光強度
により実証されるように、DNA吸着が著しく改
善された。 実施例 ４ イムノアフイニテイ・フルオロカーボン支持体
の調製と使用 ペルフルオロアルキル化ヒト免疫グロブリン
（PF−hIgG）を実施例１の記載と同様にして調
製した。それをBio−Gel（商標名）P6カラムで精
製しそして0.1Mホスフエート緩衝液（PH８）中
に集めた。同じ条件下に行われたそれまでの実験
結果から、ペルフルオロアルキル化度は有効アミ
ノ基の約20％と見込まれる。 PF−hIgGの304μｇ／ml緩衝溶液10mlを2.1ｇの
Teflon Ｐ粉末（E.I.du Pont de Nemours and
Company社、Wilmington、デラウエア州）と一
夜回転下に混合した。PF−hIgGの総吸着量は分
光法的に差によつて測定し、そして2.64mgである
ことが分かた。Spectra−Physics SP4100コンピ
ユーテイング・インテグレータにより与えられる
ピーク積分設備を有するPharmacia FPLCクロ
マトグラフイー・システムに取着された小型クロ
マトグラフイカラムにその抗原支持体を定量的に
移した。そのカラムをZonyl（商標名）FSN（E.I.
du Pont de Nemours and Company社）の0.2
％水性溶液で十分洗浄してフルオロカーボンベー
スの支持体マトリクスに対する非特異的結合を減
少させた。 カラムによる非特異的免疫グロブリンの結合量
をみるために0.0085M塩化ナトリウムおよび0.2
％Zonyl FSNを含有する0.1Mクエン酸ナトリウ
ム緩衝液（PH８）中のヤギIgGの421μｇ／ml溶液
の0.5ml試料をカラム上に注入した。等価のタン
パク質材料を（カラムを存在させないで）直接検
出系を通過させることにより得られるピーク面積
値と比較することにより、溶出されたヤギIgGの
回収率は100％であることが分つた。従つて非特
異的免疫グロブリンの吸着は無視できると考えら
れる。 ヤギ抗−ヒトIgG免疫グロブリン精製のための
一連のアフイニテイ分離を次のサイクルを繰り返
すことにより行つた： １ 0.0085M塩化ナトリウムおよび0.2％Zonyl
FSNを含有する0.1Mクエン酸ナトリウム（PH
８）中のヤギ抗−ヒトIgG免疫グロブリン
（Jackson ImmunoResearch Labs、
Avondale、ペンシルバニア州）の400μｇ／ml
溶液0.5mlを注入する。 ２ 0.0085M塩化ナトリウムおよび0.2％Zonyl
FSNを含有する0.1Mクエン酸ナトリウム（PH
８）を用いて、吸光度記録計の基線に到達する
までカラムを洗浄する（約５カラム容）。得ら
れるピークの積分値は、適用された試料の「未
吸着」画分を表わしている。 ３ そのカラムを0.1Mクエン酸ナトリウム（PH
３）を用いて基線がゼロに戻るまで洗浄する。
得られるピークの積分値は、適用された試料の
「脱着された」特異的抗体を表わしている。 ４ そのカラムを約10カラム容のPH８クエン酸塩
緩衝液で洗浄する。 このサイクルを41回繰り返して、次の所見を得
た。最初の９回の適用に対しては、試料の「未吸
着」画分のピーク積分値の平均値は91.7＋3μｇで
あつた。その後25回目に到るまで、その値は
120μｇの回収に到るまで漸増していつた。この
現像は、室温で連続貯蔵されることを起因して抗
体試料が所尾に劣化するためではないかと思われ
た。このことは、調製されたばかりの抗体溶液で
置き換えたところ残りの実験の間得られた値が１
回の適用あたり96＋10μｇの平均に戻つたことで
確認された。最初のサイクルを除き、「脱着され
た」特異的抗体の積分ピーク面積は、実験期間中
約30μｇから約20μｇ当量まで極めて徐々にでは
あるが低下した。これらの回収量は、カラムの詰
まり（よごれ）、または解離不能で高結合活性
（high avidity）の抗体の蓄積によつて同じく
徐々に回収量が失われることのある確立されたア
フイニテイ支持体を用いて得られた結果よりも極
めて優れている。しかしながらこの実験は、フル
オロカーボンベースのアフイニテイ支持体を調製
（分取）目的に用いることの有用性を決定的に実
証している。 実施例 ５ 尿素電極 PH8.0ホスフエート緩衝液１mlあたりに１mgの
タイプウレアーゼ（Sigma Chemical
Company社、St.Louis、ミズーリ州）を含有す
るウレアーゼ（E.C.3.5.1.5）溶液20mlに２mlのペ
ルフルオロオクチルプロパノイルイミダゾライド
（テトラヒドロフラン中20mg／ml）を添加するこ
とによりペルフルオロ置換ウレアーゼを調製し
た。その反応混合物を氷浴中で２時間撹拌し、次
いでPH8.0ホスフエート緩衝液で平衡した25×2.2
cmカラムのBio−Gel（商標名）Ｐ−６（Bio−Rad
Laboratories、Richmond、カリフオルニア州）
にかけた。ペルフルオロ置換ウレアーゼはカラム
の排除容量中に未反応イミダゾライド試剤不含の
状態で溶出された。そのペルフルオロ置換酵素溶
液を100000分子量カツトオフ膜を備えた
Amicon8050Concentrationシステム（Amicon
Corporation社、Lexington、マサチユーセツ州）
を用いて４倍濃縮した。 アンモニアガス感知電極の微小多孔質Teflon
膜（Orion Model92−10、Orion Research Inc.
社、Cambridge、マサチユーセツ州）をまず、
それを容量基準で10％ｔ−ブタノールおよび２％
Tweenを含有する水性溶液に浸漬することによ
り湿潤させて調製した。過剰の湿潤溶液を吸い取
つて除去し（blot off）、そしてその膜を前記濃
縮ペルフルオロ置換ウレアーゼ溶液中に５分間入
れた。その膜をデシケータ中で真空乾燥後、酵素
溶液への曝露を繰り返した。デシケータ中で再び
乾燥後、その膜をアンモニア電極本体中に入れそ
して製造元の指示どおりに電極を組み立てた。 尿素電極の反応は、１×10E−3M EDTAを含
有する25.00mlのPH8.5Tris緩衝液にそれを入れ、
そしてTris緩衝液中で調製された0.1M尿素の原
液を様々に添加することにより試験した。
Model130PH／ｍＶメータ（Corning Science
Products、Medfield、マサチユーセツ州）を用
いて、各添加後に定常状態電位の読みを測定し
た。代表的反応例を第１表に示す。比較のため
に、未変性ウレアーゼを用いて調製された尿素電
極を用いて得られた反応も含めてある。
【表】 本発明のペルフルオロ置換ウレアーゼを用いて
調製された尿素電極の反応勾配は典型的には45〜
50ｍＶ／10単位（decads）であつた。電極を室
温で緩衝液中で貯蔵した場合、この反応は少くと
も５日間安定に保たれた。 未変性ウレアーゼを用いて同じ手順を用いて調
製された電極は極めてわずかな反応（すなわち
16.8ｍＶ／10単位の反応勾配）しか示さなかつた
が、このことは吸着を最大にするには酵素のペル
フルオロ置換が必要であることを示している。 尿素電極が定常状態電位に達するための所要時
間は、１×10E−５から1.0×10E−4M尿素への
濃度変化の場合は４分、そして1.0×10E−４から
1.0×10E−3M尿素への濃度変化の場合は３分間
であつた。４日間浸漬後の緩衝溶液中に膜からの
ペルフルオロ置換ウレアーゼ酵素の浸出は全く検
出できなかつた。 以上、本発明を詳細に説明したが、本発明はさ
らに次の実施態様によつてこれを要約して示すこ
とができる。 (1)(A) リガンドまたはバインダーに対する非特異
的結合性が低い化学的に不活性で水と混和し
得ない固体担体と (B) 該担体の表面に安定的にしかし可逆的に結
合したリガンドまたはバインダー より本質的に成る固体支持体。 (2) 担体が固体ペルフルオロカーボンポリマーよ
り成る群から選択される前記(1)記載の支持体。 (3) 該リガンドが抗原、ハプテン、核酸、酵素、
基質、ビタミン、色素および酵素エフエクター
および酵素阻害剤より成る群から選択される前
記(1)記載の支持体。 (4) 該バインダーが抗体、酵素、核酸、結合性タ
ンパク質および結合性タンパク質の合成類似物
質より成る群から選択される前記(1)記載の支持
体。 (5)(A) リガンドまたはバインダーを固体担体の表
面に結合させることにより固体アフイニテイ
支持体を形成する工程、および (B) 該固体アフイニテイ支持体を用いて混合物
から担体に結合したリガンドまたはバインダ
ーに相補的な標的バインダーまたはリガンド
を捕獲する工程 より成るバイオアフイニテイ分離方法。 (6) 固体アフイニテイ支持体が (A) リガンドまたはバインダーに対する非特異
的結合性が低い化学的に不活性で水と混和し
得ない固体担体と (B) 該担体の表面に安定的にしかし可逆的に結
合したリガンドまたはバインダー より本質的に成る前記(5)記載の方法。 (7) 担体が固体ペルフルオロカーボンポリマーよ
り成る群から選択される前記(6)記載の支持体。 (8) 該リガンドが抗原、ハプテン、核酸、酵素、
基質、ビタミン、色素および酵素エフエクター
および酵素阻害剤より成る群から選択される前
記６記載の支持体。 (9) 該バインダーが抗体、酵素、核酸、結合性タ
ンパク質および結合性タンパク質の合成類似物
質より成る群から選択される前記(6)記載の支持
体。 (10)(A) リガンドまたはバインダーに対する非特異
的結合性が低い化学的に不活性で水と混和し
得ない固体担体と (B) 該担体の表面に安定的にしかし可逆的に結
合した酵素 より本質的に成る固定酵素系。 (11) 担体がペルフルオロカーボンポリマーである
前記(10)記載の系。 (12) 酵素がペルフルオロカーボン置換酵素である
前記(11)記載の系。 (13)(A) リガンドまたはバインダーに高度に弗素化
されたアンカー基を結合することにより該リ
ガンドまたはバインダーを変性し、そして (B) 固体ペルフルオロカーボンポリマーをその
アンカー変性リガンドまたはバインダーと接
触させる 工程より成る固体支持体の製造方法。 (14) リガンドが抗原、ハプテン、核酸、酵素基
質、ビタミン、色素および酵素エフエクターお
よび酵素阻害剤より成る群から選択される前記
(13)記載の方法。 (15) バインダーが抗体、酵素、核酸、結合タンパ
ク質および結合タンパク質の合成類似物質より
成る群から選択される前記(13)記載の方法。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ (A) リガンドまたはバインダーに対する非特
    異的結合性が低い化学的に不活性で水と混和し
    得ない固体ペルフルオロカーボンポリマー担体
    と (B) 該担体の表面に安定的にしかし可逆的に結合
    したペルフルオロカーボン置換されたリガンド
    またはバインダー より本質的に成る固体支持体。 ２ 該リガンドが抗原、ハプテン、核酸、酵素基
    質、ビタミン、色素および酵素エフエクターおよ
    び酵素阻害剤より成る群から選択される請求項１
    記載の支持体。 ３ 該バインダーが抗体、酵素、核酸、結合性タ
    ンパク質および結合性タンパク質の合成類似物質
    より成る群から選択される請求項１記載の支持
    体。 ４ ペルフルオロカーボン置換されたリガンドま
    たはバインダーを固体ペルフルオロカーボンポリ
    マー担体の表面に結合させてなる固体アフイニテ
    イ支持体を用いて混合物から担体に結合したリガ
    ンドまたはバインダーに相補的な標的リガンドま
    たはバインダーを捕獲することより成るバイオア
    フイニテイ分離方法。 ５ 該リガンドが抗原、ハプテン、核酸、酵素基
    質、ビタミン、色素および酵素エフエクターおよ
    び酵素阻害剤より成る群から選択される請求項４
    記載の分離方法。 ６ 該バインダーが抗体、酵素、核酸、結合性タ
    ンパク質および結合性タンパク質の合成類似物質
    より成る群から選択される請求項４記載の分離方
    法。 ７ (A) リガンドまたはバインダーに対する非特
    異的結合性が低い化学的に不活性で水と混和し
    得ない固体ペルフルオロカーボンポリマー担体
    と (B) 該担体の表面に安定的にしかし可逆的に結合
    したペルフルオロカーボン置換された酵素 より本質的に成る固定化酵素系。 ８ (A) リガンドまたはバインダーにペルフルオ
    ロカーボンアンカー基を結合させることにより
    リガンドまたはバインダーを修飾する工程、お
    よび (B) 固体ペルフルオロカーボンポリマーをペルフ
    ルオロカーボン置換されたリガンドまたはバイ
    ンダーと接触させる工程 より成る固体支持体の製造方法。
JP63047678A 1987-03-02 1988-03-02 ペルフルオロカーボンポリマー・ベースの支持体を用いた酵素固定およびバイオアフイニテイ分離 Granted JPS63294784A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US020,808 1987-03-02
US07/020,808 US4885250A (en) 1987-03-02 1987-03-02 Enzyme immobilization and bioaffinity separations with perfluorocarbon polymer-based supports

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS63294784A JPS63294784A (ja) 1988-12-01
JPH051714B2 true JPH051714B2 (ja) 1993-01-08

Family

ID=21800695

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63047678A Granted JPS63294784A (ja) 1987-03-02 1988-03-02 ペルフルオロカーボンポリマー・ベースの支持体を用いた酵素固定およびバイオアフイニテイ分離

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4885250A (ja)
EP (1) EP0281368B1 (ja)
JP (1) JPS63294784A (ja)
CA (1) CA1321768C (ja)
DE (1) DE3884016T2 (ja)
DK (1) DK170737B1 (ja)
IE (1) IE63200B1 (ja)

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5079155A (en) * 1987-03-02 1992-01-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fluorocarbon polymer support for chromatographic separations, diagnostic assays and enzyme immobilization
US6270961B1 (en) * 1987-04-01 2001-08-07 Hyseq, Inc. Methods and apparatus for DNA sequencing and DNA identification
JPH0257200A (ja) * 1988-08-22 1990-02-26 Konica Corp パーオキシダーゼ酵素反応を用いた特定成分の測定方法
US5158880A (en) * 1988-09-23 1992-10-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Process for preparing solid perfluorocarbon polymer supports having attached perfluorocarbon-substituted ligand or binder
CA2025475A1 (en) * 1989-09-27 1991-03-28 Donald I. Stimpson Hydrophilic laminated porous membranes and methods of preparing same
CA2025474A1 (en) * 1989-09-27 1991-03-28 Donald I. Stimpson Hydrophilic laminated porous membranes and methods of preparing same
US5270193A (en) * 1989-10-27 1993-12-14 E. I. Dupont De Nemours And Company Immobilization of biomolecules on perfluorocarbon surfaces
US5243037A (en) * 1990-09-21 1993-09-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Poly(fluoroalkyl) sugar reagents for surface modification of supports
EP0550479A1 (en) * 1990-09-21 1993-07-14 E.I. Du Pont De Nemours And Company Poly(fluoroalkyl) sugar reagents and their use for surface modification
US5403750A (en) * 1991-03-06 1995-04-04 W. R. Grace & Co.-Conn. Biocompatible, low protein adsorption affinity matrix
JP2871435B2 (ja) * 1993-04-22 1999-03-17 イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー 親水性ポリマー被覆パーフルオロカーボンポリマーベースのマトリックスの製造方法
US6017496A (en) * 1995-06-07 2000-01-25 Irori Matrices with memories and uses thereof
US6331273B1 (en) 1995-04-25 2001-12-18 Discovery Partners International Remotely programmable matrices with memories
US5741462A (en) * 1995-04-25 1998-04-21 Irori Remotely programmable matrices with memories
US5751629A (en) * 1995-04-25 1998-05-12 Irori Remotely programmable matrices with memories
US6329139B1 (en) 1995-04-25 2001-12-11 Discovery Partners International Automated sorting system for matrices with memory
US5874214A (en) * 1995-04-25 1999-02-23 Irori Remotely programmable matrices with memories
US6416714B1 (en) * 1995-04-25 2002-07-09 Discovery Partners International, Inc. Remotely programmable matrices with memories
US5702949A (en) * 1995-06-22 1997-12-30 University Of Utah Research Foundation Culture method for multilayer growth of anchorage-dependent cells
US5876995A (en) 1996-02-06 1999-03-02 Bryan; Bruce Bioluminescent novelty items
US6247995B1 (en) 1996-02-06 2001-06-19 Bruce Bryan Bioluminescent novelty items
US5914182A (en) * 1996-06-03 1999-06-22 Gore Hybrid Technologies, Inc. Materials and methods for the immobilization of bioactive species onto polymeric substrates
US5874165A (en) * 1996-06-03 1999-02-23 Gore Enterprise Holdings, Inc. Materials and method for the immobilization of bioactive species onto polymeric subtrates
US6416960B1 (en) 1996-08-08 2002-07-09 Prolume, Ltd. Detection and visualization of neoplastic tissues and other tissues
IL129767A0 (en) 1996-12-12 2000-02-29 Prolume Ltd Apparatus and method for detecting and identifying infectious agents
EP1925320A3 (en) 1998-03-27 2008-09-03 Prolume, Ltd. Luciferases, fluorescent proteins, nucleic acids encoding the luciferases and fluorescent proteins and the use thereof in diagnostics
US6723564B2 (en) 1998-05-07 2004-04-20 Sequenom, Inc. IR MALDI mass spectrometry of nucleic acids using liquid matrices
AU2001227679A1 (en) * 2000-02-25 2001-09-03 General Atomics Mutant nucleic binding enzymes and use thereof in diagnostic, detection and purification methods
US6610504B1 (en) 2000-04-10 2003-08-26 General Atomics Methods of determining SAM-dependent methyltransferase activity using a mutant SAH hydrolase
WO2001096556A1 (en) * 2000-06-12 2001-12-20 Prometic Biosciences, Inc. The use of polymer adsorbent particles in dna separation
WO2003045546A1 (en) * 2001-11-27 2003-06-05 Prometic Biosciences Ltd. The use of metal-chelating adsorbents
US6889468B2 (en) 2001-12-28 2005-05-10 3M Innovative Properties Company Modular systems and methods for using sample processing devices
WO2003062402A2 (en) * 2002-01-24 2003-07-31 Pointilliste, Inc. Use of collections of binding sites for sample profiling and other applications
US7407668B2 (en) * 2002-01-24 2008-08-05 Boston Scimed, Inc. Medical articles having enzymatic surfaces for localized therapy
DE10211741B4 (de) * 2002-03-14 2005-12-01 November Ag Verfahren zum elektrochemischen Detektieren eines Analyten
US7629016B2 (en) * 2002-06-10 2009-12-08 Council of Industrial and Scientific Research Process for photochemical activation of polymer surface and immobilization of biomolecules onto the activated surface
US20050130177A1 (en) 2003-12-12 2005-06-16 3M Innovative Properties Company Variable valve apparatus and methods
US7322254B2 (en) 2003-12-12 2008-01-29 3M Innovative Properties Company Variable valve apparatus and methods
US7727710B2 (en) * 2003-12-24 2010-06-01 3M Innovative Properties Company Materials, methods, and kits for reducing nonspecific binding of molecules to a surface
US7384760B2 (en) * 2004-04-30 2008-06-10 General Atomics Methods for assaying inhibitors of S-adenosylhomocysteine (SAH) hydrolase and S-adenosylmethionine (SAM)-dependent methyltransferase
US7763210B2 (en) 2005-07-05 2010-07-27 3M Innovative Properties Company Compliant microfluidic sample processing disks
US7754474B2 (en) 2005-07-05 2010-07-13 3M Innovative Properties Company Sample processing device compression systems and methods
US7323660B2 (en) 2005-07-05 2008-01-29 3M Innovative Properties Company Modular sample processing apparatus kits and modules
US8834792B2 (en) 2009-11-13 2014-09-16 3M Innovative Properties Company Systems for processing sample processing devices
USD638550S1 (en) 2009-11-13 2011-05-24 3M Innovative Properties Company Sample processing disk cover
USD667561S1 (en) 2009-11-13 2012-09-18 3M Innovative Properties Company Sample processing disk cover
USD638951S1 (en) 2009-11-13 2011-05-31 3M Innovative Properties Company Sample processing disk cover
US8889373B2 (en) 2010-08-12 2014-11-18 Eastman Chemical Company Enzyme catalyst immobilized on porous fluoropolymer support
JP2015517990A (ja) * 2012-03-26 2015-06-25 イー・エム・デイー・ミリポア・コーポレイシヨン 生体分子の精製のための方法における荷電フルオロカーボン組成物の使用
EP2841944B1 (en) 2012-04-25 2019-11-06 Ms² Array LLC Fluorous peptide microarray, detection process using a fluorous peptide microarray, and process of forming a fluorous peptide microarray
AU2014226126B2 (en) 2013-03-08 2019-02-14 Genzyme Corporation Continuous purification of therapeutic proteins
TWI709570B (zh) 2014-01-17 2020-11-11 美商健臻公司 無菌層析法及製法
TWI709569B (zh) 2014-01-17 2020-11-11 美商健臻公司 無菌層析樹脂及其用於製造方法的用途
US10443093B2 (en) 2014-10-14 2019-10-15 Ms² Array Llc Fluorous oligonucleotide microarray
AU2019332764B2 (en) 2018-08-31 2025-05-29 Genzyme Corporation Sterile chromatography resin and use thereof in manufacturing processes

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT317424B (de) * 1971-06-09 1974-08-26 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur Herstellung von trägergebundenen Proteinen
CA1023287A (en) * 1972-12-08 1977-12-27 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Process for the preparation of carrier-bound proteins
US3843443A (en) * 1973-03-30 1974-10-22 J Fishman Polypeptide materials bound to fluorocarbon polymers
GB1463513A (en) * 1974-08-13 1977-02-02 Beecham Group Ltd Enzymes
JPS5569298A (en) * 1978-11-17 1980-05-24 Kureha Chem Ind Co Ltd Electrodeposition method of protein
US4317879A (en) * 1979-05-07 1982-03-02 Airco, Inc. Glucose analyzer membrane containing immobilized glucose oxidase
JPS5968344A (ja) * 1982-10-12 1984-04-18 Agency Of Ind Science & Technol 非対称機能膜及びその製法
US4693985A (en) * 1984-08-21 1987-09-15 Pall Corporation Methods of concentrating ligands and active membranes used therefor
US4619904A (en) * 1984-10-29 1986-10-28 General Electric Company Agglutinating immunoassay using protein-coated liquid droplets
US4778767A (en) * 1984-12-17 1988-10-18 Akzo N.V. Solid phase immunoassay using immunoreagents immobilized on inert synthetic resin surfaces
US4722898A (en) * 1985-04-29 1988-02-02 Minnesota Mining And Manufacturing Company Immobilization of biological cells in polytetrafluoroethylene matrix

Also Published As

Publication number Publication date
IE63200B1 (en) 1995-04-05
EP0281368A3 (en) 1989-11-23
IE880560L (en) 1988-09-02
CA1321768C (en) 1993-08-31
DK170737B1 (da) 1996-01-02
US4885250A (en) 1989-12-05
JPS63294784A (ja) 1988-12-01
EP0281368A2 (en) 1988-09-07
DE3884016D1 (de) 1993-10-21
EP0281368B1 (en) 1993-09-15
DK108588D0 (da) 1988-03-01
DE3884016T2 (de) 1994-01-20
DK108588A (da) 1988-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH051714B2 (ja)
US4954444A (en) Enzyme immobilization and bioaffinity separations with perfluorocarbon polymer-based supports
Turkova Oriented immobilization of biologically active proteins as a tool for revealing protein interactions and function
US4822681A (en) Activated polymer solid bodies and processes for the production thereof
Mallik et al. High-performance affinity monolith chromatography: development and evaluation of human serum albumin columns
Wilchek Affinity chromatography
JP3456660B2 (ja) バイオセンサー
Křenková et al. Immobilized microfluidic enzymatic reactors
US5079155A (en) Fluorocarbon polymer support for chromatographic separations, diagnostic assays and enzyme immobilization
Nahar et al. Light-induced activation of an inert surface for covalent immobilization of a protein ligand
FR2476125A1 (fr) Supports pour l'immobilisation de substances biologiques actives et adsorbants selectifs, electrodes selectives et colonnes d'analyse utilisant lesdits supports
US5976527A (en) High surface area support having bound latex particles containing oxirane groups for immobilization of substances
JP2012122073A (ja) ポリマー粒子
JPH0243947A (ja) 免疫検定およびバイオアフイニテイ分離のための蛋白質固定化への疎水性基で誘導体化されたポリ（エチレンイミン）の応用
Kumar et al. Enzyme immobilization over polystyrene surface using cysteine functionalized copper nanoparticle as a linker molecule
US5270193A (en) Immobilization of biomolecules on perfluorocarbon surfaces
Odabaşı et al. Cibacron Blue F3GA‐attached magnetic poly (2‐hydroxyethyl methacrylate) beads for human serum albumin adsorption
US5276146A (en) Liquid perfluorocarbon supports useful as liquid affinity supports
US5158880A (en) Process for preparing solid perfluorocarbon polymer supports having attached perfluorocarbon-substituted ligand or binder
JP2708590B2 (ja) 生物学的に活性な分子が固定化された酵素膜，ｅｌｉｓａ膜，センサ膜
JPS6155415B2 (ja)
EP0246103B1 (en) Bioaffinity and ion exchange separations with liquid exchange supports
US5306615A (en) Immunoassays and nucleic acid assays with liquid exchange supports
US5268307A (en) Preparation of liquid affinity supports for bioaffinity an ion exchange separations
CN110982691A (zh) 一种金纳米棒功能化整体柱固定化酶反应器的制备方法