JPH0518807B2 - - Google Patents
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- JPH0518807B2 JPH0518807B2 JP58078747A JP7874783A JPH0518807B2 JP H0518807 B2 JPH0518807 B2 JP H0518807B2 JP 58078747 A JP58078747 A JP 58078747A JP 7874783 A JP7874783 A JP 7874783A JP H0518807 B2 JPH0518807 B2 JP H0518807B2
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- liposomes
- srbc
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
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- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Epidemiology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、機械的強度が高く生体内での安全性
の高い活性物質含有新規リポソームに関する。 リポソームはホスホリピドやコレステロール等
のリン脂質の２分子層よりなり、細胞膜と類似の
組成をもつことから安全性の高い人工細胞を作る
のに適しており、これを利用した人工血液の研究
がなされている。 しかし、従来のリポソームは不安定で壊れ易
く、例えばヘモグロビンのような蛋白質と結合さ
せ、その中に封入することが困難であつた。また
酸素運搬機能を有するヘモグロビンをリポソーム
に封入したとしてもその変形性等の流動特性（レ
オロジー）についてはほとんど報告がなされてお
らず、臨床的使用に耐えるか否か不明であつた。 本発明者等は上記問題に鑑みて鋭意研究を重ね
た結果、リポソームの壁膜を形成するリン脂質の
２分子層にカルボキシメチルキチン、キトサン等
のＤ−グルコサミンを主骨格成分とする多糖類を
混合又は結合させることにより機械的強度が高
く、ヒツジヘモグロビンやヒトヘモグロビン等の
ほ乳類動物の血液と同様の流動特性を示すリポソ
ームが得られることを見い出した。 即ち、本発明の特徴は、リン脂質の２分子層に
機械的強化剤としてＤ−グルコサミンを主骨格成
分とする多糖類を混合又は結合させてなることを
特徴とする活性物質含有リポソームにある。 本発明によれば、従来のリポソームに比べ機械
的強度が高いことから、生体内外での安全性が高
いのはもちろんカプセル化率が高く、更にカルボ
キシメチルで補強されたリポソームはそのカルボ
キシメチル基の存在により、化学反応性を有し、
細胞特異性をもたせるための化学修飾をすること
も可能である。 本発明の活性物質含有リポソームに使用するリ
ン脂質としては、従来リポソームの壁膜形成に用
いられている両親媒性脂質であれば特に限定され
ず、例えばレシチン、ケフアリン、プラスマロゲ
ン、α−グリセリルエーテル、イノシトールホス
ホリピツド、アミノアシルホスフアチジルグリセ
ロース、スフインゴミリエン等が挙げられ、これ
らを単独又は混合して、また必要に応じてコレス
テロールやエルゴステロール等のステロール類を
添加するようにしてもよい。 また、上記リン脂質に機械的強化剤として混合
又は結合させるＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
を主骨格成分とする多糖類には、例えばキチンの
誘導体であるカルボキシメチルキチン、カルボキ
シエチルキチン、それを加水分解して得られるキ
トサン、カルボキシメチルキトサン、Ｎ−アセチ
ル−Ｄ−グルコサミンとＤ−グルクロン酸とが交
互に結合したヒアルロン酸及びその誘導体等があ
り、これらは単独或いは二種以上を適宜組合せて
用いることができる。 上記機械的強化剤としての多糖類を用いてリポ
ソームを形成するに際しては、形成されるリポソ
ームの壁膜中に上記多糖類が0.01乃至0.2重量％、
好ましくは0.02乃至0.05重量％存在するようにす
る。上記壁膜中の多糖類の含量が0.2重量％を越
えると、合一体となり、また、0.01重量％より低
くなると機械的強度の優れた安定なリポソームを
得ることができない。 一方、本発明のリポソームに封入（包接）され
る活性物質としては、人工血液の主体であるヒツ
ジヘモグロビンやヒトヘモグロビン等のほ乳類動
物の赤血球、合成ヘモグロビン代替物をはじめと
して、インシユリン、オキシトシン、パソプレシ
ン、グルカゴン、コルチコトロピン等のヘプチド
ホルモン、黄体ホルモン、副腎ホンモン等のステ
ロイドホルモン、ペニシリン、ストレプトマイシ
ン、クロラムフエニコール、パイオマイシン等の
抗生物質、ウレアーゼ、ペプシン、トリプシン、
アルギナーゼ等の酵素、チアミン、ニコチン酸ア
ミド、アスコルビン酸等のビタミン類、その他５
−FU（５−フルオロウラシル）、マイトマイシン
等の医薬が挙げられる。 上記活性物質を包接した機械的強度の大なる本
発明のリポソームを調製するには、レシチン等の
リン脂質をジクロロメタン、クロロメタン、ベン
ゼン等の有機溶媒に溶解し、これを上記ヒツジへ
モグロビン等の活性物質の水溶液と共に混合して
激しく攪拌しＷ／Ｏ型のエマルジヨンとする。こ
の場合、有機溶媒とリン脂質との使用割合は、有
機溶媒100容量部に対してリン脂質1.0〜10.0重量
部とするのが適当である。また、活性物質の水溶
液の濃度は、5.0〜50.0％（Ｗ／Ｖ）が適当であ
る。 このエマルジヨンに上記機械的強化剤としての
多糖類を水性媒体に溶解又は分散させた液を加え
て激しく攪拌しＷ／Ｏ／Ｗ型のエマルジヨンとし
た後、これを更に攪拌を続けて上記有機溶媒を完
全に蒸発させる。この多糖類を溶解又は分散させ
る水性媒体としては、例えば、水、生理食塩水、
PH調整剤（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム）、
緩衝剤（例えば、トリスー塩酸水溶液、リン酸１
ナトリウム、リン酸２ナトリウム水溶液）があ
る。この場合、多糖類の水性媒体中における濃度
は、0.05〜0.5％（Ｗ／Ｖ）が適当であり、上記
Ｗ／Ｏ型のエマルジヨンへの添加に際しては、全
量を一度に添加しても或いはこれを数回に分けて
添加してもよい。なお、これらの一連の操作は、
室温で行い、特に活性物質がヒツジヘモグロビン
やヒトヘモグロビンのように生体から分離したも
のである場合には、窒素等の不活性雰囲気で行う
ことが好ましい。 かくして、活性物質を包接しかつ多糖類により
保護された安定なリポソームが分散したＷ／Ｏ／
Ｗ型のエマルジヨンが得られる。このリポソーム
は、粒子範囲が140〜420nmに集中し、平均径
310nmの球形であつて毛細血管を自由に通過する
ことが可能であり、2000〜12000ｇ、５〜30分で
遠心分離にかけ容易に分離することができる。従
つて、このエマルジヨンはこのまま使用すること
もできるが、上記遠心分離などによりリポソーム
に封入されなかつた活性物質を分離、除去したの
ち、例えばヘモグロビン包接リポソームの場合に
はそのまま或いは要すれば他の栄養剤と共に輸血
可能な人工血液として、その他所望の注射液、経
口剤、座薬等の医薬や化粧剤として利用すること
ができる。 次に、本発明を実施例により具体的に説明す
る。 実施例 １ カルボキシメチルキチン（ナンヨウ化成株製）
を水に溶解し、0.2％（Ｗ／Ｖ）の溶液とした。
デキストラン（Mw73300 シグマ、ケミカルカ
ンパニー セントルイス）をトリスー塩酸緩衝液
（PH7.4）に溶解し、６％（Ｗ／Ｖ）の溶液とし
た。卵黄レシチン（旭化成株製）を窒素気流中で
ジクロロメタンに溶解し、濃度50mg／mlの溶液を
調製した。ヒツジ赤血球溶血液を浸透圧溶血法で
調製した。 上記ヒツジ溶血液10mlにレシチン溶液10mlを加
えて、マグネツトスターラで１分間激しく攪拌し
Ｗ／Ｏ型のエマルジヨンを調製した。このエマル
ジヨンを313rpmで攪拌しながらすばやくカルボ
キシメチルキチン100mlに加えＷ／Ｏ／Ｗ型のエ
マルジヨンを得た。攪拌を続けながら10分後に、
更にカルボキシメチルキチン水溶液100mlを加え、
ジクロロメタンが完全に蒸発するまで攪拌を続行
し、ヒツジヘモグロビン包接リポソーム（以下、
単にARBCという）を得た。この操作中、温度
は室温に保つた。得られた水分散液を12000ｇで
１時間遠心分離にかけ、ARBCを捕集した。こ
のARBCを蒸留水で洗浄後、トリスー塩酸緩衝
液（PH7.4イオン強度＝0.154）に再分散させ、そ
れぞれ粒子濃度が10，20，30及び40％（Ｗ／Ｖ）
のARBC分散液を調製した。また、同様にして
ヒツジ赤血球（以下、単にSRBCという）分散液
（PH7.4）を調製した。 ARBCとSRBCの懸濁液の流動特性はコントロ
ール装置（レオマート30、コントレイプズインダ
ストリアル プロダクト Ltd.スイス）を備えた
集中円筒型回転粘度計（LS−100、同コントレイ
ブズ Ltd.）で測定した。測定に使用した懸濁液
量は１mlとし、温度は25±0.5℃一定とした。 得られたARBCを走査電子顕微鏡（×5000）
により観察した結果、ARBCは平均粒径310nmの
完全な球形であることがわかつた。従つて、これ
らの血球は毛細血管を自由に通過し得る。 第１図は、上記ARBC懸濁液の濃度を変えた
場合の流動特性を示す。また、第２図は、粒子濃
度を変数とするARBCとSRBC懸濁液（PH7.4）
の比粘度を示す。SRBC懸濁液の比粘度は粒子濃
度と共に著しく増大する。これい対して本発明の
ARBCは実験範囲では直線的に増加する。即ち、
SRBC懸濁液の比粘度と粒子濃度との関係はブリ
ンクマン（Brinkman）の式とよく一致するが、
ARBC懸濁液の比粘度は約2.3の傾きを有する
Einsteinの式にしたがう。 一方、血液と赤血球懸濁液の流動特性はカツソ
ン（Casson）プロツトに従うすることが知られ
ている。第３図は上記ARBC懸濁液のカツソン
プロツトを示し、ARBC懸濁液は直線性を示す
ことがわかる。 第４図は、６％（Ｗ／Ｏ）のデキストランを含
むトリスー塩酸緩衝溶液中におけるARBC懸濁
液の流動特性を示す。ここで、デキストランは代
用血しよう又は増粘剤として使用されている。第
４図と第１図を比較すると、デキストランを用い
たARBC懸濁液の流動抵抗はデキストランなし
のARBC懸濁液よりも低ずれ速度においてより
高くなることがわかる。また、第５図はデキスト
ラン濃度を変数としたときのARBC及びSRBCの
40％（Ｖ／Ｖ）懸濁液の比粘度を示す。ARBC
懸濁液の比粘度は、SRBC懸濁液の場合と同様
に、デキストラン濃度の増加と共に減少する。デ
キストラン濃度８％（Ｗ／Ｖ）では、比粘度がデ
キストランなしのものと比べて20％減少する。こ
のことはARBC及びSRBCの流動特性はデキスト
ランの存在によりかなり影響を受けることを示し
ている。 また、第６図は、ARBCとSRBCの混合懸濁液
の混合比と比粘度との関係を示す。この混合懸濁
液の総粒子濃度は40％一定とした。分散媒として
はデキストランを使用したものと使用しないもの
とがある。SRBCに対するARBCの混合比率を大
にすると、懸濁液の比粘度はデキストラン濃度に
関係なく減少する傾向を示す。ARBCの比率が
減少すると、比粘度はSRBC懸濁液（PH7.4）に
近づく。 このように、本発明によるARBCの懸濁液
（PH7.4）の流動特性は疑似塑性であり、SRBC懸
濁液と同じ挙動を示す。ARBCとSRBC懸濁液の
比粘度は何れも分散媒中の粒子濃度と共に増加す
る。しかしながら、ARBC懸濁液についての比
粘度と粒子濃度との関係はEinsteinの式によく一
致するのに対し、SRBC懸濁液ではBrinkmanの
式に適合した。これは、機械的強化剤として添加
したカルボキシメチルキチンがARBCの表面に
イオン結合により吸着されているためと考えられ
る。 一方、ARBCとSRBCの混合懸濁液（PH7.4）
の流動特性については、ARBCとSRBC間の相互
作用がARBCの混合比率を大にするにしたがつ
て弱まることがわかる。そして、分散媒中にデキ
ストランを添加しても、その流動特性について殆
ど影響を与えない。従つて、混合懸濁液中におけ
るARBCは、カルボキシメチルキチンの強い水
和力によつて粒子一粒子間の相互作用を減少させ
ると推論される。 実施例 ２ 20mlの20％ヒトヘモグロビン液へ20mlのレシチ
ンのクロロホルム溶液を加え、磁気的攪拌器で１
分間激しく攪拌し、Ｗ／Ｏ型のエマルジヨンを得
る。このエマルジヨンに0.3％キトサンの水溶液
100mlをすばやく加え400rpmで攪拌する。さら
に、10分後、200mlのカルボキシメチルキトサン
を加え、クロロホルムが蒸発するまで続ける。な
お、この一連の操作は室温で行う。得られたリポ
ソームは、ヒト赤血球と同じ酸素運搬機能を有す
る。 実施例 ３ 30mg／mlレシチンと少量のコレステロールを含
むジクロロメタン溶液１部と40U／mlのインシユ
リン水溶液１部とを乳化し、Ｗ／Ｏ型エマルジヨ
ンとする。次に、このエマルジヨンを攪拌系にあ
る0.02％（Ｗ／Ｖ）カルボキシメチルキチン水溶
液にすばやく加え、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジヨンと
する。その後、昇温してジクロロメタンを蒸散さ
せ、インシユリン封入のリポソームとする。 実施例 ４ 50mg／mlレシチンベンゼン溶液２部と50mg／ml
のアルブミン水溶液１部を機械的に乳化し、Ｗ／
Ｏ型エマルジヨンとする。このエマルジヨンを攪
拌系にある0.1％（Ｗ／Ｖ）キトサン水溶液に分
散し、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジヨンとし、その後系
の温度を上げてベンゼンを蒸散させ、アルブミン
封入のリポソームとした。 実施例 ５ ブドウ糖を含むカルボキシメチルキチン化した
リポソームの調製 まず、0.01から0.5％（Ｗ／Ｖ）までのカルボ
キシメチルキチン水溶液を用意する。 内封物のブドウ糖溶液１部と50mg／mlの卵黄レ
シチンジクロルメタン溶液１部を混合し、攪拌す
ることで、Ｗ／Ｏ型エマルジヨンとする。 このエマルジヨンを上記の各カルボキシメチル
キチン水溶液、200部中にすばやく加え、攪拌し
てＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジヨンとする。これまでの
操作はすべて室温で行なう。 次に、系の温度を40℃まで上昇させると、ジク
ロルメタンがエマルジヨン中から蒸散する。この
過程で、リポソームを構成しているレシチンと、
カルボキシメチルキチンとの静電的な結合が生じ
る。さらに、ジクロルメタンが完全に蒸散する
と、カルボキシメチル化したリポソームを得るこ
とができる。 上記の方法に従つてブドウ糖含入リポソームを
調製した場合の各カルボキシメチルキチン濃度に
対するブドウ糖のリポソームへの取込み率を下の
表に示す。 【表】
の高い活性物質含有新規リポソームに関する。 リポソームはホスホリピドやコレステロール等
のリン脂質の２分子層よりなり、細胞膜と類似の
組成をもつことから安全性の高い人工細胞を作る
のに適しており、これを利用した人工血液の研究
がなされている。 しかし、従来のリポソームは不安定で壊れ易
く、例えばヘモグロビンのような蛋白質と結合さ
せ、その中に封入することが困難であつた。また
酸素運搬機能を有するヘモグロビンをリポソーム
に封入したとしてもその変形性等の流動特性（レ
オロジー）についてはほとんど報告がなされてお
らず、臨床的使用に耐えるか否か不明であつた。 本発明者等は上記問題に鑑みて鋭意研究を重ね
た結果、リポソームの壁膜を形成するリン脂質の
２分子層にカルボキシメチルキチン、キトサン等
のＤ−グルコサミンを主骨格成分とする多糖類を
混合又は結合させることにより機械的強度が高
く、ヒツジヘモグロビンやヒトヘモグロビン等の
ほ乳類動物の血液と同様の流動特性を示すリポソ
ームが得られることを見い出した。 即ち、本発明の特徴は、リン脂質の２分子層に
機械的強化剤としてＤ−グルコサミンを主骨格成
分とする多糖類を混合又は結合させてなることを
特徴とする活性物質含有リポソームにある。 本発明によれば、従来のリポソームに比べ機械
的強度が高いことから、生体内外での安全性が高
いのはもちろんカプセル化率が高く、更にカルボ
キシメチルで補強されたリポソームはそのカルボ
キシメチル基の存在により、化学反応性を有し、
細胞特異性をもたせるための化学修飾をすること
も可能である。 本発明の活性物質含有リポソームに使用するリ
ン脂質としては、従来リポソームの壁膜形成に用
いられている両親媒性脂質であれば特に限定され
ず、例えばレシチン、ケフアリン、プラスマロゲ
ン、α−グリセリルエーテル、イノシトールホス
ホリピツド、アミノアシルホスフアチジルグリセ
ロース、スフインゴミリエン等が挙げられ、これ
らを単独又は混合して、また必要に応じてコレス
テロールやエルゴステロール等のステロール類を
添加するようにしてもよい。 また、上記リン脂質に機械的強化剤として混合
又は結合させるＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
を主骨格成分とする多糖類には、例えばキチンの
誘導体であるカルボキシメチルキチン、カルボキ
シエチルキチン、それを加水分解して得られるキ
トサン、カルボキシメチルキトサン、Ｎ−アセチ
ル−Ｄ−グルコサミンとＤ−グルクロン酸とが交
互に結合したヒアルロン酸及びその誘導体等があ
り、これらは単独或いは二種以上を適宜組合せて
用いることができる。 上記機械的強化剤としての多糖類を用いてリポ
ソームを形成するに際しては、形成されるリポソ
ームの壁膜中に上記多糖類が0.01乃至0.2重量％、
好ましくは0.02乃至0.05重量％存在するようにす
る。上記壁膜中の多糖類の含量が0.2重量％を越
えると、合一体となり、また、0.01重量％より低
くなると機械的強度の優れた安定なリポソームを
得ることができない。 一方、本発明のリポソームに封入（包接）され
る活性物質としては、人工血液の主体であるヒツ
ジヘモグロビンやヒトヘモグロビン等のほ乳類動
物の赤血球、合成ヘモグロビン代替物をはじめと
して、インシユリン、オキシトシン、パソプレシ
ン、グルカゴン、コルチコトロピン等のヘプチド
ホルモン、黄体ホルモン、副腎ホンモン等のステ
ロイドホルモン、ペニシリン、ストレプトマイシ
ン、クロラムフエニコール、パイオマイシン等の
抗生物質、ウレアーゼ、ペプシン、トリプシン、
アルギナーゼ等の酵素、チアミン、ニコチン酸ア
ミド、アスコルビン酸等のビタミン類、その他５
−FU（５−フルオロウラシル）、マイトマイシン
等の医薬が挙げられる。 上記活性物質を包接した機械的強度の大なる本
発明のリポソームを調製するには、レシチン等の
リン脂質をジクロロメタン、クロロメタン、ベン
ゼン等の有機溶媒に溶解し、これを上記ヒツジへ
モグロビン等の活性物質の水溶液と共に混合して
激しく攪拌しＷ／Ｏ型のエマルジヨンとする。こ
の場合、有機溶媒とリン脂質との使用割合は、有
機溶媒100容量部に対してリン脂質1.0〜10.0重量
部とするのが適当である。また、活性物質の水溶
液の濃度は、5.0〜50.0％（Ｗ／Ｖ）が適当であ
る。 このエマルジヨンに上記機械的強化剤としての
多糖類を水性媒体に溶解又は分散させた液を加え
て激しく攪拌しＷ／Ｏ／Ｗ型のエマルジヨンとし
た後、これを更に攪拌を続けて上記有機溶媒を完
全に蒸発させる。この多糖類を溶解又は分散させ
る水性媒体としては、例えば、水、生理食塩水、
PH調整剤（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム）、
緩衝剤（例えば、トリスー塩酸水溶液、リン酸１
ナトリウム、リン酸２ナトリウム水溶液）があ
る。この場合、多糖類の水性媒体中における濃度
は、0.05〜0.5％（Ｗ／Ｖ）が適当であり、上記
Ｗ／Ｏ型のエマルジヨンへの添加に際しては、全
量を一度に添加しても或いはこれを数回に分けて
添加してもよい。なお、これらの一連の操作は、
室温で行い、特に活性物質がヒツジヘモグロビン
やヒトヘモグロビンのように生体から分離したも
のである場合には、窒素等の不活性雰囲気で行う
ことが好ましい。 かくして、活性物質を包接しかつ多糖類により
保護された安定なリポソームが分散したＷ／Ｏ／
Ｗ型のエマルジヨンが得られる。このリポソーム
は、粒子範囲が140〜420nmに集中し、平均径
310nmの球形であつて毛細血管を自由に通過する
ことが可能であり、2000〜12000ｇ、５〜30分で
遠心分離にかけ容易に分離することができる。従
つて、このエマルジヨンはこのまま使用すること
もできるが、上記遠心分離などによりリポソーム
に封入されなかつた活性物質を分離、除去したの
ち、例えばヘモグロビン包接リポソームの場合に
はそのまま或いは要すれば他の栄養剤と共に輸血
可能な人工血液として、その他所望の注射液、経
口剤、座薬等の医薬や化粧剤として利用すること
ができる。 次に、本発明を実施例により具体的に説明す
る。 実施例 １ カルボキシメチルキチン（ナンヨウ化成株製）
を水に溶解し、0.2％（Ｗ／Ｖ）の溶液とした。
デキストラン（Mw73300 シグマ、ケミカルカ
ンパニー セントルイス）をトリスー塩酸緩衝液
（PH7.4）に溶解し、６％（Ｗ／Ｖ）の溶液とし
た。卵黄レシチン（旭化成株製）を窒素気流中で
ジクロロメタンに溶解し、濃度50mg／mlの溶液を
調製した。ヒツジ赤血球溶血液を浸透圧溶血法で
調製した。 上記ヒツジ溶血液10mlにレシチン溶液10mlを加
えて、マグネツトスターラで１分間激しく攪拌し
Ｗ／Ｏ型のエマルジヨンを調製した。このエマル
ジヨンを313rpmで攪拌しながらすばやくカルボ
キシメチルキチン100mlに加えＷ／Ｏ／Ｗ型のエ
マルジヨンを得た。攪拌を続けながら10分後に、
更にカルボキシメチルキチン水溶液100mlを加え、
ジクロロメタンが完全に蒸発するまで攪拌を続行
し、ヒツジヘモグロビン包接リポソーム（以下、
単にARBCという）を得た。この操作中、温度
は室温に保つた。得られた水分散液を12000ｇで
１時間遠心分離にかけ、ARBCを捕集した。こ
のARBCを蒸留水で洗浄後、トリスー塩酸緩衝
液（PH7.4イオン強度＝0.154）に再分散させ、そ
れぞれ粒子濃度が10，20，30及び40％（Ｗ／Ｖ）
のARBC分散液を調製した。また、同様にして
ヒツジ赤血球（以下、単にSRBCという）分散液
（PH7.4）を調製した。 ARBCとSRBCの懸濁液の流動特性はコントロ
ール装置（レオマート30、コントレイプズインダ
ストリアル プロダクト Ltd.スイス）を備えた
集中円筒型回転粘度計（LS−100、同コントレイ
ブズ Ltd.）で測定した。測定に使用した懸濁液
量は１mlとし、温度は25±0.5℃一定とした。 得られたARBCを走査電子顕微鏡（×5000）
により観察した結果、ARBCは平均粒径310nmの
完全な球形であることがわかつた。従つて、これ
らの血球は毛細血管を自由に通過し得る。 第１図は、上記ARBC懸濁液の濃度を変えた
場合の流動特性を示す。また、第２図は、粒子濃
度を変数とするARBCとSRBC懸濁液（PH7.4）
の比粘度を示す。SRBC懸濁液の比粘度は粒子濃
度と共に著しく増大する。これい対して本発明の
ARBCは実験範囲では直線的に増加する。即ち、
SRBC懸濁液の比粘度と粒子濃度との関係はブリ
ンクマン（Brinkman）の式とよく一致するが、
ARBC懸濁液の比粘度は約2.3の傾きを有する
Einsteinの式にしたがう。 一方、血液と赤血球懸濁液の流動特性はカツソ
ン（Casson）プロツトに従うすることが知られ
ている。第３図は上記ARBC懸濁液のカツソン
プロツトを示し、ARBC懸濁液は直線性を示す
ことがわかる。 第４図は、６％（Ｗ／Ｏ）のデキストランを含
むトリスー塩酸緩衝溶液中におけるARBC懸濁
液の流動特性を示す。ここで、デキストランは代
用血しよう又は増粘剤として使用されている。第
４図と第１図を比較すると、デキストランを用い
たARBC懸濁液の流動抵抗はデキストランなし
のARBC懸濁液よりも低ずれ速度においてより
高くなることがわかる。また、第５図はデキスト
ラン濃度を変数としたときのARBC及びSRBCの
40％（Ｖ／Ｖ）懸濁液の比粘度を示す。ARBC
懸濁液の比粘度は、SRBC懸濁液の場合と同様
に、デキストラン濃度の増加と共に減少する。デ
キストラン濃度８％（Ｗ／Ｖ）では、比粘度がデ
キストランなしのものと比べて20％減少する。こ
のことはARBC及びSRBCの流動特性はデキスト
ランの存在によりかなり影響を受けることを示し
ている。 また、第６図は、ARBCとSRBCの混合懸濁液
の混合比と比粘度との関係を示す。この混合懸濁
液の総粒子濃度は40％一定とした。分散媒として
はデキストランを使用したものと使用しないもの
とがある。SRBCに対するARBCの混合比率を大
にすると、懸濁液の比粘度はデキストラン濃度に
関係なく減少する傾向を示す。ARBCの比率が
減少すると、比粘度はSRBC懸濁液（PH7.4）に
近づく。 このように、本発明によるARBCの懸濁液
（PH7.4）の流動特性は疑似塑性であり、SRBC懸
濁液と同じ挙動を示す。ARBCとSRBC懸濁液の
比粘度は何れも分散媒中の粒子濃度と共に増加す
る。しかしながら、ARBC懸濁液についての比
粘度と粒子濃度との関係はEinsteinの式によく一
致するのに対し、SRBC懸濁液ではBrinkmanの
式に適合した。これは、機械的強化剤として添加
したカルボキシメチルキチンがARBCの表面に
イオン結合により吸着されているためと考えられ
る。 一方、ARBCとSRBCの混合懸濁液（PH7.4）
の流動特性については、ARBCとSRBC間の相互
作用がARBCの混合比率を大にするにしたがつ
て弱まることがわかる。そして、分散媒中にデキ
ストランを添加しても、その流動特性について殆
ど影響を与えない。従つて、混合懸濁液中におけ
るARBCは、カルボキシメチルキチンの強い水
和力によつて粒子一粒子間の相互作用を減少させ
ると推論される。 実施例 ２ 20mlの20％ヒトヘモグロビン液へ20mlのレシチ
ンのクロロホルム溶液を加え、磁気的攪拌器で１
分間激しく攪拌し、Ｗ／Ｏ型のエマルジヨンを得
る。このエマルジヨンに0.3％キトサンの水溶液
100mlをすばやく加え400rpmで攪拌する。さら
に、10分後、200mlのカルボキシメチルキトサン
を加え、クロロホルムが蒸発するまで続ける。な
お、この一連の操作は室温で行う。得られたリポ
ソームは、ヒト赤血球と同じ酸素運搬機能を有す
る。 実施例 ３ 30mg／mlレシチンと少量のコレステロールを含
むジクロロメタン溶液１部と40U／mlのインシユ
リン水溶液１部とを乳化し、Ｗ／Ｏ型エマルジヨ
ンとする。次に、このエマルジヨンを攪拌系にあ
る0.02％（Ｗ／Ｖ）カルボキシメチルキチン水溶
液にすばやく加え、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジヨンと
する。その後、昇温してジクロロメタンを蒸散さ
せ、インシユリン封入のリポソームとする。 実施例 ４ 50mg／mlレシチンベンゼン溶液２部と50mg／ml
のアルブミン水溶液１部を機械的に乳化し、Ｗ／
Ｏ型エマルジヨンとする。このエマルジヨンを攪
拌系にある0.1％（Ｗ／Ｖ）キトサン水溶液に分
散し、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジヨンとし、その後系
の温度を上げてベンゼンを蒸散させ、アルブミン
封入のリポソームとした。 実施例 ５ ブドウ糖を含むカルボキシメチルキチン化した
リポソームの調製 まず、0.01から0.5％（Ｗ／Ｖ）までのカルボ
キシメチルキチン水溶液を用意する。 内封物のブドウ糖溶液１部と50mg／mlの卵黄レ
シチンジクロルメタン溶液１部を混合し、攪拌す
ることで、Ｗ／Ｏ型エマルジヨンとする。 このエマルジヨンを上記の各カルボキシメチル
キチン水溶液、200部中にすばやく加え、攪拌し
てＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジヨンとする。これまでの
操作はすべて室温で行なう。 次に、系の温度を40℃まで上昇させると、ジク
ロルメタンがエマルジヨン中から蒸散する。この
過程で、リポソームを構成しているレシチンと、
カルボキシメチルキチンとの静電的な結合が生じ
る。さらに、ジクロルメタンが完全に蒸散する
と、カルボキシメチル化したリポソームを得るこ
とができる。 上記の方法に従つてブドウ糖含入リポソームを
調製した場合の各カルボキシメチルキチン濃度に
対するブドウ糖のリポソームへの取込み率を下の
表に示す。 【表】
図面は本発明の一実施例を示し、第１図は本発
明によるARBC懸濁液の濃度を変えた場合の流
動特性図、第２図は粒子濃度を変数とする上記
ARBCとSRBC懸濁液（PH7.4）の比粘度を示す
グラフ、第３図は上記ARBC懸濁液のカツソン
プロツトを示すグラフ、第４図は６％（Ｗ／
Ｏ）のデキストランを含むトリスー塩酸緩衝溶液
中におけるARBC懸濁液の流動特性図、第５図
はデキストラン濃度を変数としたときのARBC
及びSRBCの40％（Ｖ／Ｖ）懸濁液の比粘度を示
すグラフ、第６図はARBCとSRBCの混合懸濁液
の混合比と比粘度との関係を示すグラフである。
明によるARBC懸濁液の濃度を変えた場合の流
動特性図、第２図は粒子濃度を変数とする上記
ARBCとSRBC懸濁液（PH7.4）の比粘度を示す
グラフ、第３図は上記ARBC懸濁液のカツソン
プロツトを示すグラフ、第４図は６％（Ｗ／
Ｏ）のデキストランを含むトリスー塩酸緩衝溶液
中におけるARBC懸濁液の流動特性図、第５図
はデキストラン濃度を変数としたときのARBC
及びSRBCの40％（Ｖ／Ｖ）懸濁液の比粘度を示
すグラフ、第６図はARBCとSRBCの混合懸濁液
の混合比と比粘度との関係を示すグラフである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ リン脂質の２分子層に、Ｄ−グルコサミンを
主骨格成分とする多糖類を混合又は結合させてな
ることを特徴とする活性物質含有リポソーム。 ２ 多糖類が、カルボキシメチルキチン、カルボ
キシメチルキトサン、キトサンよりなる群から選
ばれた１又は２以上の混合物である特許請求の範
囲第１項記載の活性物質含有リポソーム。 ３ 多糖類が、ヒアルロン酸及び／又はその誘導
体である特許請求の範囲第１項記載の活性物質含
有リポソーム。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58078747A JPS59210013A (ja) | 1983-05-04 | 1983-05-04 | 活性物質含有リポソ−ム |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58078747A JPS59210013A (ja) | 1983-05-04 | 1983-05-04 | 活性物質含有リポソ−ム |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59210013A JPS59210013A (ja) | 1984-11-28 |
| JPH0518807B2 true JPH0518807B2 (ja) | 1993-03-15 |
Family
ID=13670478
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58078747A Granted JPS59210013A (ja) | 1983-05-04 | 1983-05-04 | 活性物質含有リポソ−ム |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59210013A (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59216894A (ja) * | 1983-05-23 | 1984-12-06 | Asai Gerumaniumu Kenkyusho:Kk | ゲルマニウム含有リポソ−ム |
| US5409704A (en) * | 1985-06-26 | 1995-04-25 | The Liposome Company, Inc. | Liposomes comprising aminoglycoside phosphates and methods of production and use |
| FR2667072B1 (fr) * | 1990-09-24 | 1993-08-13 | Bioetica Sa | Complexe ternaire de chitosane, d'ions calcium et de lipides, procede de preparation et leurs applications. |
| DK0525132T3 (da) * | 1991-02-14 | 1996-02-05 | Baxter Int | Binding af genkendende stoffer til liposomer |
| FR2761912B1 (fr) * | 1997-04-14 | 1999-07-02 | Capsulis | Procede destine a faire adherer un produit sur une surface |
| WO2002078445A1 (en) * | 2001-03-29 | 2002-10-10 | The Scripps Research Institute | Formulations comprising entrapped active ingredients and uses thereof |
| JP4669665B2 (ja) * | 2004-04-12 | 2011-04-13 | 正彦 阿部 | 細胞毒性のないポリカチオン修飾リポソームおよびその製造方法 |
-
1983
- 1983-05-04 JP JP58078747A patent/JPS59210013A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS59210013A (ja) | 1984-11-28 |
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