JPH05192191A - 溶存酸素濃度の測定法 - Google Patents
溶存酸素濃度の測定法Info
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- JPH05192191A JPH05192191A JP4432692A JP4432692A JPH05192191A JP H05192191 A JPH05192191 A JP H05192191A JP 4432692 A JP4432692 A JP 4432692A JP 4432692 A JP4432692 A JP 4432692A JP H05192191 A JPH05192191 A JP H05192191A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 新規な溶存酸素濃度測定法を提供する。
【構成】 試料中の溶存酸素を酸化酵素（例えばコリオ
ーラス・ベルシカラーＩＦＯ９７９１由来のラッカー
ゼ）の存在下、２−（４−ヒドロキシフェニル）グリシ
ンまたは４−ヒドロキシマンデル酸と反応させ、生成す
る４−ヒドロキシベンズアルデヒドを定量することによ
り、溶存酸素濃度を測定する。本発明の方法は、試料の
液量が１００〜２００μｌであっても溶存酸素濃度を測
定できる。
ーラス・ベルシカラーＩＦＯ９７９１由来のラッカー
ゼ）の存在下、２−（４−ヒドロキシフェニル）グリシ
ンまたは４−ヒドロキシマンデル酸と反応させ、生成す
る４−ヒドロキシベンズアルデヒドを定量することによ
り、溶存酸素濃度を測定する。本発明の方法は、試料の
液量が１００〜２００μｌであっても溶存酸素濃度を測
定できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ある種のフェノール化
合物と酸化酵素を用いた新規な溶存酸素濃度の測定法に
関する。
合物と酸化酵素を用いた新規な溶存酸素濃度の測定法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】水中に溶解している分子状酸素の存在
は、魚介類や好気的微生物等の生育にとって必須であ
り、この溶存酸素が減少すれば、魚介類は死滅し、好気
的微生物はその増殖や生理作用が停止する。このため、
これらの生物の養殖や培養においては、溶存酸素濃度の
管理が非常に重要となっている。現在知られている溶存
酸素濃度の測定法は、化学的方法と電気化学的方法に大
きく分けられる。化学的方法としては、ウインクラー
法、ミラー法およびそれらの変法があり、特にミラー法
は測定値に影響を与える妨害物質が少なく優れた方法で
ある。一方、電気化学的方法には、ポーラログラフ法と
ガルバニ電池法があり、優れた安定性を持つことから広
く普及している。
は、魚介類や好気的微生物等の生育にとって必須であ
り、この溶存酸素が減少すれば、魚介類は死滅し、好気
的微生物はその増殖や生理作用が停止する。このため、
これらの生物の養殖や培養においては、溶存酸素濃度の
管理が非常に重要となっている。現在知られている溶存
酸素濃度の測定法は、化学的方法と電気化学的方法に大
きく分けられる。化学的方法としては、ウインクラー
法、ミラー法およびそれらの変法があり、特にミラー法
は測定値に影響を与える妨害物質が少なく優れた方法で
ある。一方、電気化学的方法には、ポーラログラフ法と
ガルバニ電池法があり、優れた安定性を持つことから広
く普及している。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】前述のように、溶存酸
素濃度の測定には、多くの方法が提案され、広く利用さ
れているものが多い。しかし、これらの方法では、いず
れも溶存酸素濃度を測定するためにかなり多量の試料を
必要とするので、特に野外で試料を採取する場合、一度
に多くの種類の試料を採取することは困難であった。そ
のため、より少量の試料で測定できる溶存酸素の測定法
が望まれている。
素濃度の測定には、多くの方法が提案され、広く利用さ
れているものが多い。しかし、これらの方法では、いず
れも溶存酸素濃度を測定するためにかなり多量の試料を
必要とするので、特に野外で試料を採取する場合、一度
に多くの種類の試料を採取することは困難であった。そ
のため、より少量の試料で測定できる溶存酸素の測定法
が望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前述した
課題を解決すべく研究を重ねた結果、試料中の溶存酸素
を酸化酵素の存在下、ある種のフェノール化合物と反応
させ生成する４−ヒドロキシベンズアルデヒドを定量す
ることにより、少量の試料であっても試料中の溶存酸素
濃度を正確に測定できることを見出し本発明を完成し
た。
課題を解決すべく研究を重ねた結果、試料中の溶存酸素
を酸化酵素の存在下、ある種のフェノール化合物と反応
させ生成する４−ヒドロキシベンズアルデヒドを定量す
ることにより、少量の試料であっても試料中の溶存酸素
濃度を正確に測定できることを見出し本発明を完成し
た。
【０００５】本発明により提供される溶存酸素濃度の測
定法は、下記の反応式に示すとおり、試料溶液に酸化酵
素およびフェノール化合物を添加し、酸化酵素が触媒す
る酸化的脱炭酸反応により試料溶液中の溶存酸素量に比
例する量の４−ヒドロキシベンズアルデヒドを生成さ
せ、生成した４−ヒドロキシベンズアルデヒドを既知の
方法によって定量するものである。
定法は、下記の反応式に示すとおり、試料溶液に酸化酵
素およびフェノール化合物を添加し、酸化酵素が触媒す
る酸化的脱炭酸反応により試料溶液中の溶存酸素量に比
例する量の４−ヒドロキシベンズアルデヒドを生成さ
せ、生成した４−ヒドロキシベンズアルデヒドを既知の
方法によって定量するものである。
【化２】 通常、酸化酵素およびフェノール化合物を各々一定濃度
となるよう緩衝液に溶解して酸化酵素溶液およびフェノ
ール化合物溶液を調製し、これを一定量の試料溶液に添
加、混合し、一定時間反応させた後、生成した４−ヒド
ロキシベンズアルデヒドを定量する。
となるよう緩衝液に溶解して酸化酵素溶液およびフェノ
ール化合物溶液を調製し、これを一定量の試料溶液に添
加、混合し、一定時間反応させた後、生成した４−ヒド
ロキシベンズアルデヒドを定量する。
【０００６】本発明の方法に用いる酸化酵素は、上記の
反応を触媒するものであれば、その種類や起源を問わず
いずれのものでも使用できるが、一般にポリフェノール
オキシダーゼと総称されるラッカーゼ、チロシナーゼ、
ビリルビンオキシダーゼ、パーオキシダーゼ、アスコル
ビン酸オキシダーゼまたはセルロプラスミン等が使用で
きる。その中で特に好適な酸化酵素として、コリオーラ
ス・ベルシカラー（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ ｖｅｒｓｉｃｏ
ｌｏｒ）、漆等から得られるラッカーゼがあり、その一
例としてコリオーラス・ベルシカラー ＩＦＯ９７９１
（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ ＩＦＯ９
７９１）由来のラッカーゼを挙げることができる。この
菌株は、財団法人発酵研究所発行のリスト・オブ・カル
チャーズ（ＬＩＳＴ ＯＦ ＣＵＬＴＵＲＥＳ）第８
版、Ｖｏｌ．１（１９８８）に記載されている公知株で
あり、容易に入手することができる。
反応を触媒するものであれば、その種類や起源を問わず
いずれのものでも使用できるが、一般にポリフェノール
オキシダーゼと総称されるラッカーゼ、チロシナーゼ、
ビリルビンオキシダーゼ、パーオキシダーゼ、アスコル
ビン酸オキシダーゼまたはセルロプラスミン等が使用で
きる。その中で特に好適な酸化酵素として、コリオーラ
ス・ベルシカラー（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ ｖｅｒｓｉｃｏ
ｌｏｒ）、漆等から得られるラッカーゼがあり、その一
例としてコリオーラス・ベルシカラー ＩＦＯ９７９１
（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ ＩＦＯ９
７９１）由来のラッカーゼを挙げることができる。この
菌株は、財団法人発酵研究所発行のリスト・オブ・カル
チャーズ（ＬＩＳＴ ＯＦ ＣＵＬＴＵＲＥＳ）第８
版、Ｖｏｌ．１（１９８８）に記載されている公知株で
あり、容易に入手することができる。
【０００７】酸化酵素の添加量は、特に限定はない。所
定の時間内に反応が終了するように適宜選択すればよ
い。例えば、１時間で反応を終了させる場合、約５０〜
２００Ｕ／ｍｌの濃度範囲となるよう添加すればよい。
なお、酵素単位の定義は、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
６．０）中、３０℃で１分間に１μｍｏｌのシリンガル
ダジンを酸化する酵素量を１Ｕ（ｕｎｉｔ）とした（Ｅ
ｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ． Ｔｅｃｈｎｏｌ．，１９
８１，Ｖｏｌ．３，ｐ５５〜５８）。本発明の方法に用
いることのできるフェノール化合物は、２−（４−ヒド
ロキシフェニル）グリシンまたは４−ヒドロキシマンデ
ル酸であり、いずれも好適に使用できる。これらの化合
物の添加量は、試料中の溶存酸素量と比較して過剰量で
あればよく、通常１０〜１００ｍＭ、好ましくは４０〜
８０ｍＭとなるよう添加すればよい。
定の時間内に反応が終了するように適宜選択すればよ
い。例えば、１時間で反応を終了させる場合、約５０〜
２００Ｕ／ｍｌの濃度範囲となるよう添加すればよい。
なお、酵素単位の定義は、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
６．０）中、３０℃で１分間に１μｍｏｌのシリンガル
ダジンを酸化する酵素量を１Ｕ（ｕｎｉｔ）とした（Ｅ
ｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ． Ｔｅｃｈｎｏｌ．，１９
８１，Ｖｏｌ．３，ｐ５５〜５８）。本発明の方法に用
いることのできるフェノール化合物は、２−（４−ヒド
ロキシフェニル）グリシンまたは４−ヒドロキシマンデ
ル酸であり、いずれも好適に使用できる。これらの化合
物の添加量は、試料中の溶存酸素量と比較して過剰量で
あればよく、通常１０〜１００ｍＭ、好ましくは４０〜
８０ｍＭとなるよう添加すればよい。
【０００８】反応温度は、酸化酵素が触媒する酸化的脱
炭酸反応が進行する温度であればいずれの温度でもよ
く、例えば、２０〜６０℃とすることができるが、酸化
酵素の安定性等を考慮すると２５〜３５℃とすることが
好適である。また反応溶液のｐＨについても、上記反応
が進行するｐＨであればいずれのｐＨでもよく、例え
ば、ｐＨ５〜７とすることができるが、酸化酵素の活性
等を考慮するとｐＨ５．５〜６．５とすることが好適で
ある。反応時間については、酸化酵素が触媒する酸化的
脱炭酸反応が十分進行し、溶存酸素量に対応する４−ヒ
ドロキシベンズアルデヒドが定量的に生成するために十
分な時間、反応させればよい。例えば、後述する実施例
１に示すように試料の液量、酵素量、ｐＨなど、他の条
件をあらかじめ決めた上で生成する４−ヒドロキシベン
ズアルデヒド量の経時変化を測定し、該アルデヒドが定
量的に生成する時間を設定すればよい。
炭酸反応が進行する温度であればいずれの温度でもよ
く、例えば、２０〜６０℃とすることができるが、酸化
酵素の安定性等を考慮すると２５〜３５℃とすることが
好適である。また反応溶液のｐＨについても、上記反応
が進行するｐＨであればいずれのｐＨでもよく、例え
ば、ｐＨ５〜７とすることができるが、酸化酵素の活性
等を考慮するとｐＨ５．５〜６．５とすることが好適で
ある。反応時間については、酸化酵素が触媒する酸化的
脱炭酸反応が十分進行し、溶存酸素量に対応する４−ヒ
ドロキシベンズアルデヒドが定量的に生成するために十
分な時間、反応させればよい。例えば、後述する実施例
１に示すように試料の液量、酵素量、ｐＨなど、他の条
件をあらかじめ決めた上で生成する４−ヒドロキシベン
ズアルデヒド量の経時変化を測定し、該アルデヒドが定
量的に生成する時間を設定すればよい。
【０００９】本発明における４−ヒドロキシベンズアル
デヒドの定量法は、１μＭ以上の検出感度であればいず
れの方法でも使用でき、高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）法、化学発色法が好適に使用できる。例え
ば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法では、
担体としてオクタデシルシラン化シリカゲル（ＯＤ
Ｓ）、移動相として必要により緩衝液を加えた含水メタ
ノールもしくは含水アセトニトリルを用いた系を挙げる
ことができる。分離された４−ヒドロキシベンズアルデ
ヒドは、波長２６０〜３００ｎｍ、好適には２８０〜２
８５ｎｍでの吸収により検出し、インテグレータを用い
て定量することができる。
デヒドの定量法は、１μＭ以上の検出感度であればいず
れの方法でも使用でき、高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）法、化学発色法が好適に使用できる。例え
ば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法では、
担体としてオクタデシルシラン化シリカゲル（ＯＤ
Ｓ）、移動相として必要により緩衝液を加えた含水メタ
ノールもしくは含水アセトニトリルを用いた系を挙げる
ことができる。分離された４−ヒドロキシベンズアルデ
ヒドは、波長２６０〜３００ｎｍ、好適には２８０〜２
８５ｎｍでの吸収により検出し、インテグレータを用い
て定量することができる。
【００１０】化学発色法では、例えば２，４−ジニトロ
フェニルヒドラジンとアルデヒドとの呈色反応を利用す
る方法を挙げることができる。すなわち、生成した４−
ヒドロキシベンズアルデヒドと２，４−ジニトロフェニ
ルヒドラジンを酸性条件下で縮合させヒドラゾンとし、
さらにこれをアルカリ条件下にすることにより、赤色を
呈するキノイド構造体に変換し、５００ｎｍ付近での吸
光度を測定するものである。この方法は、生成するキノ
イド構造体の５００ｎｍにおけるモル吸光係数が約３２
０００と大きく、非常に感度よく４−ヒドロキシベンズ
アルデヒドを定量できる。
フェニルヒドラジンとアルデヒドとの呈色反応を利用す
る方法を挙げることができる。すなわち、生成した４−
ヒドロキシベンズアルデヒドと２，４−ジニトロフェニ
ルヒドラジンを酸性条件下で縮合させヒドラゾンとし、
さらにこれをアルカリ条件下にすることにより、赤色を
呈するキノイド構造体に変換し、５００ｎｍ付近での吸
光度を測定するものである。この方法は、生成するキノ
イド構造体の５００ｎｍにおけるモル吸光係数が約３２
０００と大きく、非常に感度よく４−ヒドロキシベンズ
アルデヒドを定量できる。
【００１１】本発明の方法の大きな特徴は、試料の量が
少ないときであっても溶存酸素濃度を正確に測定できる
ことである。試料として１００〜２００μｌの液量があ
れば、十分測定可能であるため、野外等で多数の試料を
採取することができる利点がある。また本発明の方法で
得られた値は従来法で得られた値とよく一致するため、
従来法を本方法に代替することが容易である。
少ないときであっても溶存酸素濃度を正確に測定できる
ことである。試料として１００〜２００μｌの液量があ
れば、十分測定可能であるため、野外等で多数の試料を
採取することができる利点がある。また本発明の方法で
得られた値は従来法で得られた値とよく一致するため、
従来法を本方法に代替することが容易である。
【００１２】以下、実施例を示し、本発明を更に詳細に
説明する。
説明する。
実施例１ ５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に２−
（４−ヒドロキシフェニル）グリシンを５０ｍＭになる
ように溶解し基質溶液を調製した。この基質溶液１．２
ｍｌにラッカーゼ（コリオーラス・ベルシカラー ＩＦ
Ｏ９７９１由来、比活性４．８×１０３Ｕ／ｍｇ、蛋白
質濃度２．３ｍｇ／ｍｌ）６μ１を添加、撹拌し、反応
液を調製した。これをレオダイン・インジェクター用の
針を付けたガラス製シリンジ（１．０ｍｌ容）にシリン
ジ内に空気が入らないように約１ｍｌを吸引した。この
シリンジを室温（２８℃）で放置し、１０分毎に直接、
レオダイン・インジェクターから高速液体クロマトグラ
フィーに注入し、下記の条件下で、保持時間５．７分に
溶出してくる４−ヒドロキシベンズアルデヒドを標準試
料による絶対検量線法によりインテギュレータを用い、
自動定量を行った。
（４−ヒドロキシフェニル）グリシンを５０ｍＭになる
ように溶解し基質溶液を調製した。この基質溶液１．２
ｍｌにラッカーゼ（コリオーラス・ベルシカラー ＩＦ
Ｏ９７９１由来、比活性４．８×１０３Ｕ／ｍｇ、蛋白
質濃度２．３ｍｇ／ｍｌ）６μ１を添加、撹拌し、反応
液を調製した。これをレオダイン・インジェクター用の
針を付けたガラス製シリンジ（１．０ｍｌ容）にシリン
ジ内に空気が入らないように約１ｍｌを吸引した。この
シリンジを室温（２８℃）で放置し、１０分毎に直接、
レオダイン・インジェクターから高速液体クロマトグラ
フィーに注入し、下記の条件下で、保持時間５．７分に
溶出してくる４−ヒドロキシベンズアルデヒドを標準試
料による絶対検量線法によりインテギュレータを用い、
自動定量を行った。
【００１３】カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ａ−３０２Ｓ
−５ １２０Ａ ＯＤＳ（４．６×１５０ｍｍ） 移動相：４０％（Ｖ／Ｖ）メタノール／０．０２Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ６．８） 流速：０．５ｍｌ／分 検出：ＵＶ２８０ｎｍ 分析試料容量：１０μｌ
−５ １２０Ａ ＯＤＳ（４．６×１５０ｍｍ） 移動相：４０％（Ｖ／Ｖ）メタノール／０．０２Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ６．８） 流速：０．５ｍｌ／分 検出：ＵＶ２８０ｎｍ 分析試料容量：１０μｌ
【００１４】結果を第１表に示す。
【表１】 第１表に示したとおり、６０分まで４−ヒドロキシベン
ズアルデヒドの生成量は増加したが、それ以降はほぼ一
定値（０．６２６μｍｏｌ／ｍｌ）を示した。このこと
はシリンジ内の反応液の溶存酸素が全て消費されたため
ラッカーゼの酸化的脱炭酸反応が停止した状態であるこ
とを示している。したがって、この条件下で試料中の溶
存酸素量を測定するためには、反応時間を６０分以上と
ればよいことになる。
ズアルデヒドの生成量は増加したが、それ以降はほぼ一
定値（０．６２６μｍｏｌ／ｍｌ）を示した。このこと
はシリンジ内の反応液の溶存酸素が全て消費されたため
ラッカーゼの酸化的脱炭酸反応が停止した状態であるこ
とを示している。したがって、この条件下で試料中の溶
存酸素量を測定するためには、反応時間を６０分以上と
ればよいことになる。
【００１５】実施例２ 実施例１と同様に調製した反応液０．５ｍｌをレオダイ
ン・インジェクター用の針を付けたガラス製シリンジ
（１．０ｍｌ容）にシリンジ内に空気が入らないよう吸
引し、さらに溶存酸素濃度を測定しようとする試料０．
１ｍｌを吸引した。これを室温（２８℃）で６０分間放
置し、実施例１と同じ条件で４−ヒドロキシベンズアル
デヒドの濃度を定量したところ０．５８７μｍｏｌ／ｍ
ｌであった。この結果から次の計算式により試料中の溶
存酸素濃度をもとめたところ酸素原子換算で０．３９２
μｍｏｌＯ／ｍｌであった。 （０．５８７μｍｏｌ／ｍｌ×０．６ｍｌ−０．６２６μｍｏｌ／ｍｌ×０．５ ｍｌ）×１０＝０．３９２μｍｏｌＯ／ｍｌ 一方、同じ試料を酸素電極を用いて溶存酸素濃度を測定
した結果は、０．４１μｍｏｌＯ／ｍｌであり、ほぼ同
じ値であった。
ン・インジェクター用の針を付けたガラス製シリンジ
（１．０ｍｌ容）にシリンジ内に空気が入らないよう吸
引し、さらに溶存酸素濃度を測定しようとする試料０．
１ｍｌを吸引した。これを室温（２８℃）で６０分間放
置し、実施例１と同じ条件で４−ヒドロキシベンズアル
デヒドの濃度を定量したところ０．５８７μｍｏｌ／ｍ
ｌであった。この結果から次の計算式により試料中の溶
存酸素濃度をもとめたところ酸素原子換算で０．３９２
μｍｏｌＯ／ｍｌであった。 （０．５８７μｍｏｌ／ｍｌ×０．６ｍｌ−０．６２６μｍｏｌ／ｍｌ×０．５ ｍｌ）×１０＝０．３９２μｍｏｌＯ／ｍｌ 一方、同じ試料を酸素電極を用いて溶存酸素濃度を測定
した結果は、０．４１μｍｏｌＯ／ｍｌであり、ほぼ同
じ値であった。
【００１６】実施例３ ５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に４−
ヒドロキシマンデル酸を５０ｍＭになるように溶解し基
質溶液とした。この基質溶液４００μｌを寸法８×５０
ｍｍのサンプルチューブ（矢沢化学製）に分注した。こ
のサンプルチューブ３本にそれぞれ０、１、２と番号を
付け、それぞれにラッカーゼ（コリオーラス・ベルシカ
ラー ＩＦＯ９７９１由来、比活性４．８×１０３Ｕ／
ｍｇ、蛋白質濃度２．３ｍｇ／ｍｌ）４μｌ、５μｌ、
６μｌ添加し、次いで溶存酸素濃度を測定しようとする
水（測定試料）をサンプルチューブ１、２にそれぞれ１
００μｌ、２００μｌ加えた後、これら３本のサンプル
チューブにふたをして、ゆっくり数回逆さにすることに
より良く混合させた。室温に３０分放置することによっ
て酵素反応をさせた後、それぞれのサンプルチューブに
０．０１Ｎ塩酸４００μｌを加えて良く撹拌することに
よって酵素反応を止めた。
ヒドロキシマンデル酸を５０ｍＭになるように溶解し基
質溶液とした。この基質溶液４００μｌを寸法８×５０
ｍｍのサンプルチューブ（矢沢化学製）に分注した。こ
のサンプルチューブ３本にそれぞれ０、１、２と番号を
付け、それぞれにラッカーゼ（コリオーラス・ベルシカ
ラー ＩＦＯ９７９１由来、比活性４．８×１０３Ｕ／
ｍｇ、蛋白質濃度２．３ｍｇ／ｍｌ）４μｌ、５μｌ、
６μｌ添加し、次いで溶存酸素濃度を測定しようとする
水（測定試料）をサンプルチューブ１、２にそれぞれ１
００μｌ、２００μｌ加えた後、これら３本のサンプル
チューブにふたをして、ゆっくり数回逆さにすることに
より良く混合させた。室温に３０分放置することによっ
て酵素反応をさせた後、それぞれのサンプルチューブに
０．０１Ｎ塩酸４００μｌを加えて良く撹拌することに
よって酵素反応を止めた。
【００１７】次に溶存酸素を消費する基質の定量的な酸
化反応によって生じた４−ヒドロキシベンズアルデヒド
の定量を行った。即ちサンプルチューブ０、１、２から
それぞれ反応液３００μｌをとり、０．０１Ｎ塩酸２．
４ｍｌで希釈した後、それぞれに２，４−ジニトロフェ
ニルヒドラジンの１Ｎ塩酸飽和溶液２００μｌを添加し
て、６〜８分放置してから、５Ｎ水酸化ナトリウム１０
０μｌを加えて発色させ、５００ｎｍの吸光度を測定し
て、既知濃度の４−ヒドロキシベンズアルデヒドから同
様にして求めた検量線によりそれぞれの反応液中の４−
ヒドロキシベンズアルデヒドの濃度を求め、更に各反応
液の容量からサンプルチューブ０、１、２中に生じた４
−ヒドロキシベンズアルデヒドの量（μｍｏｌ単位）を
求めた。
化反応によって生じた４−ヒドロキシベンズアルデヒド
の定量を行った。即ちサンプルチューブ０、１、２から
それぞれ反応液３００μｌをとり、０．０１Ｎ塩酸２．
４ｍｌで希釈した後、それぞれに２，４−ジニトロフェ
ニルヒドラジンの１Ｎ塩酸飽和溶液２００μｌを添加し
て、６〜８分放置してから、５Ｎ水酸化ナトリウム１０
０μｌを加えて発色させ、５００ｎｍの吸光度を測定し
て、既知濃度の４−ヒドロキシベンズアルデヒドから同
様にして求めた検量線によりそれぞれの反応液中の４−
ヒドロキシベンズアルデヒドの濃度を求め、更に各反応
液の容量からサンプルチューブ０、１、２中に生じた４
−ヒドロキシベンズアルデヒドの量（μｍｏｌ単位）を
求めた。
【００１８】こうして得られた４−ヒドロキシベンズア
ルデヒドの量（モル数）を、測定試料の容積０μｌ、１
００μｌ、２００μｌに対してグラフ上にプロットする
と３点は、直線上に乗り、その傾きから溶存酸素濃度
（酸素原子換算、μｍｏｌＯ／ｍｌ）を計算した。
ルデヒドの量（モル数）を、測定試料の容積０μｌ、１
００μｌ、２００μｌに対してグラフ上にプロットする
と３点は、直線上に乗り、その傾きから溶存酸素濃度
（酸素原子換算、μｍｏｌＯ／ｍｌ）を計算した。
【００１９】測定試料は、大気圧下で３０℃、４０℃、
５０℃、６０℃の各温度において空気の吹込みによって
溶存酸素濃度を飽和させた蒸留水を用いた。また、窒素
ガスを吹込んで溶存酸素を窒素で置換させた蒸留水をも
測定試料とした。上記の測定法によって得られた溶存酸
素濃度と文献値（日本化学会編、化学便覧・基礎編（改
訂３版）ＩＩ，ｐ１５８）から求めた値を第２表に示
す。
５０℃、６０℃の各温度において空気の吹込みによって
溶存酸素濃度を飽和させた蒸留水を用いた。また、窒素
ガスを吹込んで溶存酸素を窒素で置換させた蒸留水をも
測定試料とした。上記の測定法によって得られた溶存酸
素濃度と文献値（日本化学会編、化学便覧・基礎編（改
訂３版）ＩＩ，ｐ１５８）から求めた値を第２表に示
す。
【表２】 第２表に示したとおり、本発明の方法による溶存酸素濃
度測定値は文献記載の測定値とよく対応する値を示し
た。
度測定値は文献記載の測定値とよく対応する値を示し
た。
Claims (1)
- 【請求項１】 試料中の溶存酸素を酸化酵素の存在下、
一般式 【化１】 で示されるフェノール化合物と反応させ、生成する４−
ヒドロキシベンズアルデヒドを定量することを特徴とす
る溶存酸素濃度の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4432692A JPH05192191A (ja) | 1992-01-17 | 1992-01-17 | 溶存酸素濃度の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4432692A JPH05192191A (ja) | 1992-01-17 | 1992-01-17 | 溶存酸素濃度の測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05192191A true JPH05192191A (ja) | 1993-08-03 |
Family
ID=12688382
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4432692A Pending JPH05192191A (ja) | 1992-01-17 | 1992-01-17 | 溶存酸素濃度の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05192191A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3040007A1 (de) * | 1979-10-23 | 1981-05-07 | Fujitsu Ltd., Kawasaki, Kanagawa | Automatisches frequenzabgleichverfahren fuer mechanische resonatoren |
-
1992
- 1992-01-17 JP JP4432692A patent/JPH05192191A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3040007A1 (de) * | 1979-10-23 | 1981-05-07 | Fujitsu Ltd., Kawasaki, Kanagawa | Automatisches frequenzabgleichverfahren fuer mechanische resonatoren |
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