JPH05194263A - 寒冷沈降物を用いて製造した改良組織グルー - Google Patents
寒冷沈降物を用いて製造した改良組織グルーInfo
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- JPH05194263A JPH05194263A JP4281125A JP28112592A JPH05194263A JP H05194263 A JPH05194263 A JP H05194263A JP 4281125 A JP4281125 A JP 4281125A JP 28112592 A JP28112592 A JP 28112592A JP H05194263 A JPH05194263 A JP H05194263A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 重い血液凝固疾患を患っている患者にも好適
な組織グルーを提供する。 【構成】 全血の寒冷沈降物と、３０００〜５０００Ｋ
ＩＵ／ｍｌ単位のアプロチニンに相当する多量のプロテ
アーゼ阻害因子とからなるＡ成分、およびＡ成分中に存
在するフィブリノーゲンを特異的に切断してフィブリン
ポリマーの形成を起こしうるタンパク分解酵素からなる
Ｂ成分、から構成される組織グルーについて記載する。
別の態様では、全血の寒冷沈降物からなるＡ成分、およ
びＡ成分中に存在するフィブリノーゲンを特異的に切断
してフィブリンポリマーの形成を起こしうる酵素であ
る、ヘビ毒から得られるタンパク分解酵素からなるＢ成
分、から構成される改良組織グルーについて記載する。
な組織グルーを提供する。 【構成】 全血の寒冷沈降物と、３０００〜５０００Ｋ
ＩＵ／ｍｌ単位のアプロチニンに相当する多量のプロテ
アーゼ阻害因子とからなるＡ成分、およびＡ成分中に存
在するフィブリノーゲンを特異的に切断してフィブリン
ポリマーの形成を起こしうるタンパク分解酵素からなる
Ｂ成分、から構成される組織グルーについて記載する。
別の態様では、全血の寒冷沈降物からなるＡ成分、およ
びＡ成分中に存在するフィブリノーゲンを特異的に切断
してフィブリンポリマーの形成を起こしうる酵素であ
る、ヘビ毒から得られるタンパク分解酵素からなるＢ成
分、から構成される改良組織グルーについて記載する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、二つの成分ＡおよびＢ
から構成される組織グルー、組織グルーの製造法、組織
グルーを製造するための多量のアプロチニンの使用およ
びヘビ毒のタンパク分解酵素の使用に関する。
から構成される組織グルー、組織グルーの製造法、組織
グルーを製造するための多量のアプロチニンの使用およ
びヘビ毒のタンパク分解酵素の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】血漿タンパクの適用による外科手術の創
傷部位における局所止血の改良は、よく知られた概念で
ある。よって、大脳手術では止血にヘブリンパッチが使
用されている。血漿およびトロンビンは手術創上にヘブ
リンフィルムを作るために使用されていた。過去２０年
間には、殆どの外科手術の訓練のための、『フィブリン
グルー』または『フィブリン接着剤』または『フィブリ
ン密封剤』の適用を論じる刊行物が多数ある。過去１０
年間、『グルー』の市販製品はヨーロッパで広く使用さ
れている。『グルー』は二つの成分からなるが、これら
成分の混合物は凝塊を生じる。第一の成分はフィブリノ
ーゲン濃縮物である。この濃縮物もまた、凝塊の安定性
および強度に重要なフィブロネクチンと第XIII因子を含
有する。第二の成分は、通常の凝固システムの最後の成
分、フィブリノーゲンをフィブリン凝塊に変える活性酵
素、トロンビンである。この方法は、通常の凝固工程の
殆どを飛び越してその最終段階に似せるものである。何
人かの製造者は、しばらくして凝塊溶解を誘発する酵素
であるプラスミノゲンを加えるが、他の者は凝塊溶解を
防ぐためにプロテアーゼの阻害因子であるアプロチニン
を加える。
傷部位における局所止血の改良は、よく知られた概念で
ある。よって、大脳手術では止血にヘブリンパッチが使
用されている。血漿およびトロンビンは手術創上にヘブ
リンフィルムを作るために使用されていた。過去２０年
間には、殆どの外科手術の訓練のための、『フィブリン
グルー』または『フィブリン接着剤』または『フィブリ
ン密封剤』の適用を論じる刊行物が多数ある。過去１０
年間、『グルー』の市販製品はヨーロッパで広く使用さ
れている。『グルー』は二つの成分からなるが、これら
成分の混合物は凝塊を生じる。第一の成分はフィブリノ
ーゲン濃縮物である。この濃縮物もまた、凝塊の安定性
および強度に重要なフィブロネクチンと第XIII因子を含
有する。第二の成分は、通常の凝固システムの最後の成
分、フィブリノーゲンをフィブリン凝塊に変える活性酵
素、トロンビンである。この方法は、通常の凝固工程の
殆どを飛び越してその最終段階に似せるものである。何
人かの製造者は、しばらくして凝塊溶解を誘発する酵素
であるプラスミノゲンを加えるが、他の者は凝塊溶解を
防ぐためにプロテアーゼの阻害因子であるアプロチニン
を加える。
【０００３】しかしながら、これらの製品は軽い出血障
害を伴なうものの患者に満足できる結果をもたらすが、
血友病ＡまたはＢのような重い出血疾患を患っている患
者はまだなお、術後の出血の極めて高い危険を有してい
る。時折、手術から平均的な日数の経過後に遅い出血合
併症が生じる。抗凝固因子を処置された患者もまた、先
行技術の組織グルーで処置することができない。市販の
濃縮物の別の重大な欠点は高い製造コストにある。
害を伴なうものの患者に満足できる結果をもたらすが、
血友病ＡまたはＢのような重い出血疾患を患っている患
者はまだなお、術後の出血の極めて高い危険を有してい
る。時折、手術から平均的な日数の経過後に遅い出血合
併症が生じる。抗凝固因子を処置された患者もまた、先
行技術の組織グルーで処置することができない。市販の
濃縮物の別の重大な欠点は高い製造コストにある。
【０００４】ＷＯ８６／０１８１４は、フィブリングル
ー生成の前駆体として有用なフィブリノーゲンと第VIII
因子を含む、寒冷沈降反応した懸濁液の調製法を開示し
ており、それには（ａ）血液伝染性疾患のために選別さ
れたヒトまたは他の動物などの単一提供者からの新鮮凍
結血漿を、約−８０℃で少なくとも約６時間凍結する；
（ｂ）凍結血漿の温度を例えば約０℃と室温の間にまで
上げて、それにより上澄みおよびフィブリノーゲンと第
VIII因子を含む寒冷沈降懸濁液を形成する；そして
（ｃ）寒冷沈降懸濁液を回収する、ことが含まれる。手
術操作上有益なフィブリングルーを生成する方法も開示
されており、それは（ａ）上述したように寒冷沈降懸濁
液を調製する；（ｂ）所望の部位に規定量の懸濁液をつ
ける；そして（ｃ）その部位に十分な量のトロンビンを
含む組成物をつけて、懸濁液中のフィブリノーゲンをフ
ィブリングルーに変化させ、次いでフィブリングルーが
凝固する、ことからなる。
ー生成の前駆体として有用なフィブリノーゲンと第VIII
因子を含む、寒冷沈降反応した懸濁液の調製法を開示し
ており、それには（ａ）血液伝染性疾患のために選別さ
れたヒトまたは他の動物などの単一提供者からの新鮮凍
結血漿を、約−８０℃で少なくとも約６時間凍結する；
（ｂ）凍結血漿の温度を例えば約０℃と室温の間にまで
上げて、それにより上澄みおよびフィブリノーゲンと第
VIII因子を含む寒冷沈降懸濁液を形成する；そして
（ｃ）寒冷沈降懸濁液を回収する、ことが含まれる。手
術操作上有益なフィブリングルーを生成する方法も開示
されており、それは（ａ）上述したように寒冷沈降懸濁
液を調製する；（ｂ）所望の部位に規定量の懸濁液をつ
ける；そして（ｃ）その部位に十分な量のトロンビンを
含む組成物をつけて、懸濁液中のフィブリノーゲンをフ
ィブリングルーに変化させ、次いでフィブリングルーが
凝固する、ことからなる。
【０００５】ＥＰ−Ａ−０３４１００７には、水性組成
物中で患者の自原性血漿、コラーゲン、トロンビン、お
よび任意の抗フィブリン溶解薬からなる手術接着剤が開
示されている。この接着剤は、フィブリノーゲンの濃縮
または単離のために何ら添加試薬を使用することなく、
患者の血漿から作られる。便宜上、接着剤は二液型組成
物として処方され、そしてそれは使用直前に一緒に混合
される。
物中で患者の自原性血漿、コラーゲン、トロンビン、お
よび任意の抗フィブリン溶解薬からなる手術接着剤が開
示されている。この接着剤は、フィブリノーゲンの濃縮
または単離のために何ら添加試薬を使用することなく、
患者の血漿から作られる。便宜上、接着剤は二液型組成
物として処方され、そしてそれは使用直前に一緒に混合
される。
【０００６】ＥＰ−Ａ−０２５３１９８には、フィブリ
ノーゲン、第VIII因子、トロンビン阻害因子、プロトロ
ンビン因子、カルシウムイオンおよび任意のプラスミン
阻害因子の水溶液を有する一成分組織グルーが開示され
ている。組織グルーは、水を加えることにより凍結乾燥
した試料から再構成することができる。組織グルーは、
肝炎やＨＴＬVIII転移を避けるために、全ての活性物質
を低温殺菌した形で含有していてもよい。
ノーゲン、第VIII因子、トロンビン阻害因子、プロトロ
ンビン因子、カルシウムイオンおよび任意のプラスミン
阻害因子の水溶液を有する一成分組織グルーが開示され
ている。組織グルーは、水を加えることにより凍結乾燥
した試料から再構成することができる。組織グルーは、
肝炎やＨＴＬVIII転移を避けるために、全ての活性物質
を低温殺菌した形で含有していてもよい。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、血友
病ＡやＢのような重い血液凝固疾患を伴なう患者にも好
適な組織グルーを提供することである。本発明の別の目
的は、Ｂ成分の活性因子であるウシのトロンビンに対す
る抗体が、既に発生している患者にも使用できる組織グ
ルーを提供することである。本発明の他の目的は、ヘパ
リンのような抗凝固因子を処置された患者のための組織
グルーを提供することである。組織グルーの成分に伴な
う伝染性のウイルス性疾患の危険のために、組織グルー
の分画はウイルス不活性化されていることが保証されな
ければならない。
病ＡやＢのような重い血液凝固疾患を伴なう患者にも好
適な組織グルーを提供することである。本発明の別の目
的は、Ｂ成分の活性因子であるウシのトロンビンに対す
る抗体が、既に発生している患者にも使用できる組織グ
ルーを提供することである。本発明の他の目的は、ヘパ
リンのような抗凝固因子を処置された患者のための組織
グルーを提供することである。組織グルーの成分に伴な
う伝染性のウイルス性疾患の危険のために、組織グルー
の分画はウイルス不活性化されていることが保証されな
ければならない。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明に係る組織グルー
は、全血の寒冷沈降物と、３０００〜５０００ＫＩＵ／
ｍｌ単位のアプロチニンに相当する多量のプロテアーゼ
阻害因子、好ましくはアプロチニン、とからなるＡ成
分、およびＡ成分中に存在するフィブリノーゲンを特異
的に切断して、フィブリンポリマーの形成を起こしうる
タンパク分解酵素からなるＢ成分、から構成されるもの
である。
は、全血の寒冷沈降物と、３０００〜５０００ＫＩＵ／
ｍｌ単位のアプロチニンに相当する多量のプロテアーゼ
阻害因子、好ましくはアプロチニン、とからなるＡ成
分、およびＡ成分中に存在するフィブリノーゲンを特異
的に切断して、フィブリンポリマーの形成を起こしうる
タンパク分解酵素からなるＢ成分、から構成されるもの
である。
【０００９】市販の寒冷沈降物は、本発明の組織グルー
の製造に用いることができる。しかしながら、この寒冷
沈降物は２〜５の間の倍率、好ましくは３の倍率で濃縮
することが有利であるといえる。３０００〜５０００Ｋ
ＩＵ／ｍｌ単位のアプロチニン量に相当する十分な濃度
のプロテアーゼ阻害因子を寒冷沈降物に加えることは、
本発明の組織グルーを重い出血疾患を患っている患者に
使用するのに好適にする。好ましいプロテアーゼ阻害因
子はアプロチニンであり、トラジロール(TrasylolR) ま
たはアンタゴザン(AntagosanR)の商標で市販されてい
る。
の製造に用いることができる。しかしながら、この寒冷
沈降物は２〜５の間の倍率、好ましくは３の倍率で濃縮
することが有利であるといえる。３０００〜５０００Ｋ
ＩＵ／ｍｌ単位のアプロチニン量に相当する十分な濃度
のプロテアーゼ阻害因子を寒冷沈降物に加えることは、
本発明の組織グルーを重い出血疾患を患っている患者に
使用するのに好適にする。好ましいプロテアーゼ阻害因
子はアプロチニンであり、トラジロール(TrasylolR) ま
たはアンタゴザン(AntagosanR)の商標で市販されてい
る。
【００１０】寒冷沈降物は、手術の前に自原性血液単位
を供与することにより患者自身から得ることができる。
この試みは血液派生物によるウイルス感染の伝染の危険
を防ぐ。しかしながら、適切な市販品を得るためには、
寒冷沈降物はウイルス不活性でなければならない。ウイ
ルス不活性化の手順は、ＰＣＴ／ＥＰ９１／００５０３
に記載されている。基本原理は、寒冷沈降物の特別な洗
浄剤での処理および後ほど寒冷沈降物からの洗浄剤の除
去である。
を供与することにより患者自身から得ることができる。
この試みは血液派生物によるウイルス感染の伝染の危険
を防ぐ。しかしながら、適切な市販品を得るためには、
寒冷沈降物はウイルス不活性でなければならない。ウイ
ルス不活性化の手順は、ＰＣＴ／ＥＰ９１／００５０３
に記載されている。基本原理は、寒冷沈降物の特別な洗
浄剤での処理および後ほど寒冷沈降物からの洗浄剤の除
去である。
【００１１】本発明の組織グルーの第二成分であるＢ成
分は、フィブリノーゲンを特異的に切断しうるタンパク
分解酵素の溶液により調製する。通常、ヒトまたはウシ
などのほ乳動物の血漿から単離されたトロンビンを使用
している。このトロンビンは低温殺菌した形で供給する
ことができる。トロンビンの再構成は塩化カルシウムの
４０ｍmol 溶液で生じる。トロンビンの好ましい濃度は
５０〜２００ｕ／ｍｌである。
分は、フィブリノーゲンを特異的に切断しうるタンパク
分解酵素の溶液により調製する。通常、ヒトまたはウシ
などのほ乳動物の血漿から単離されたトロンビンを使用
している。このトロンビンは低温殺菌した形で供給する
ことができる。トロンビンの再構成は塩化カルシウムの
４０ｍmol 溶液で生じる。トロンビンの好ましい濃度は
５０〜２００ｕ／ｍｌである。
【００１２】速い組織グルーを製造するためには、塩化
カルシウムのおおよそ１００ｕ／ｍｌのトロンビン溶液
を調製する。例えば空隙、すなわち抜歯の充填あるいは
経蝶形骨の下垂体切除の腔の密封により遅いグルーを製
造するためには、トロンビンを適当な塩化カルシウム溶
液で２５ｕ／ｍｌの濃度まで更に溶解する。
カルシウムのおおよそ１００ｕ／ｍｌのトロンビン溶液
を調製する。例えば空隙、すなわち抜歯の充填あるいは
経蝶形骨の下垂体切除の腔の密封により遅いグルーを製
造するためには、トロンビンを適当な塩化カルシウム溶
液で２５ｕ／ｍｌの濃度まで更に溶解する。
【００１３】本発明の改良された組織グルーの別の態様
は、Ｂ成分としてヘビ毒から単離されたタンパク分解酵
素からなる。この態様は、トロンビンに対する抗体が発
生している患者にも処置できるので有利である。さら
に、ヘパリンはヘビ毒酵素の反応に影響を与えないか
ら、ヘパリンで予備処置された患者を本発明に係る組織
グルーで処置することができる。本発明の非常に好まし
い態様では、南アメリカの毒蛇、ボスルポス・モウジェ
ニ(Bothrpos Moujeni)から単離できるヘビ毒酵素バトロ
キソビン(batroxobin)を使用する。好ましくは、Ｂ成分
は０．５〜１０ｕ／ｍｌのヘビ毒の各タンパク分解酵素
を含有する。
は、Ｂ成分としてヘビ毒から単離されたタンパク分解酵
素からなる。この態様は、トロンビンに対する抗体が発
生している患者にも処置できるので有利である。さら
に、ヘパリンはヘビ毒酵素の反応に影響を与えないか
ら、ヘパリンで予備処置された患者を本発明に係る組織
グルーで処置することができる。本発明の非常に好まし
い態様では、南アメリカの毒蛇、ボスルポス・モウジェ
ニ(Bothrpos Moujeni)から単離できるヘビ毒酵素バトロ
キソビン(batroxobin)を使用する。好ましくは、Ｂ成分
は０．５〜１０ｕ／ｍｌのヘビ毒の各タンパク分解酵素
を含有する。
【００１４】化学的にはバトロキソビンは、分子量約３
６，０００の単鎖グリコペプチドである。デフィブラー
ゼ(DefibraseR)は、フィブリノーゲン中で結合している
α１６Ａｒｇ／１７Ｇｌｙの切断を生じさせて、フィブ
リノペプチドＡの遊離および単量体のフィブリンＩの形
成を起こさせる。
６，０００の単鎖グリコペプチドである。デフィブラー
ゼ(DefibraseR)は、フィブリノーゲン中で結合している
α１６Ａｒｇ／１７Ｇｌｙの切断を生じさせて、フィブ
リノペプチドＡの遊離および単量体のフィブリンＩの形
成を起こさせる。
【００１５】アプロチニンを本発明の量で使用するなら
ば、精製したフィブリノーゲン、フィブロネクチンおよ
び第XIII因子からなる組織グルーもＡ成分として用いる
ことができる。後出血の危険がそれにより著しく減少す
る。ヘビ毒からのタンパク分解プロテアーゼをＢ成分の
調製に使用するならば、フィブリノーゲン、フィブロネ
クチンおよび第XIII因子を有する『従来の』Ａ成分も用
いることができる。本発明に係る多量のアプロチニンの
使用は好ましいものである。非常に好ましい態様は、多
量のアプロチニンを伴なうまたは伴なわない、寒冷沈降
物から得られる本発明のＡ成分と、ヘビ毒から単離され
たタンパク分解酵素を有する本発明のＢ成分との組合せ
である。
ば、精製したフィブリノーゲン、フィブロネクチンおよ
び第XIII因子からなる組織グルーもＡ成分として用いる
ことができる。後出血の危険がそれにより著しく減少す
る。ヘビ毒からのタンパク分解プロテアーゼをＢ成分の
調製に使用するならば、フィブリノーゲン、フィブロネ
クチンおよび第XIII因子を有する『従来の』Ａ成分も用
いることができる。本発明に係る多量のアプロチニンの
使用は好ましいものである。非常に好ましい態様は、多
量のアプロチニンを伴なうまたは伴なわない、寒冷沈降
物から得られる本発明のＡ成分と、ヘビ毒から単離され
たタンパク分解酵素を有する本発明のＢ成分との組合せ
である。
【００１６】本発明のフィブリングルーの製造法は、寒
冷沈降物から寒冷溶液を調製する工程からなるＡ成分の
製造、 −ウイルスの不活性化、 −殺ウイルス薬の除去、 −プロテアーゼ阻害因子の添加、および −好適なプロテアーゼ溶液の調製、 の工程から構成される。
冷沈降物から寒冷溶液を調製する工程からなるＡ成分の
製造、 −ウイルスの不活性化、 −殺ウイルス薬の除去、 −プロテアーゼ阻害因子の添加、および −好適なプロテアーゼ溶液の調製、 の工程から構成される。
【００１７】好ましくは、寒冷パスタを４〜１０℃で一
晩予備解凍する。その寒冷パスタを塩化ナトリウム、ク
エン酸三ナトリウムおよびグリシンを含みかつｐＨ７．
０〜７．２である緩衝液に溶解した後、３０〜３５℃に
加熱する。寒冷パスタは手早く溶解すべきである。さも
ないと調製に適さなくなる。解凍後寒冷パスタを小片に
分けることにより溶解を早めることができる。溶液をほ
ぼ室温まで冷却してｐＨを７．０〜７．２の値に調節し
た後、水酸化アルミニウムを撹拌しながら加える。沈殿
物を遠心分離して捨てる。任意に濾過工程を行なう。次
いで、塩化カルシウムを加えて塩化カルシウムを所望の
最終濃度にする。
晩予備解凍する。その寒冷パスタを塩化ナトリウム、ク
エン酸三ナトリウムおよびグリシンを含みかつｐＨ７．
０〜７．２である緩衝液に溶解した後、３０〜３５℃に
加熱する。寒冷パスタは手早く溶解すべきである。さも
ないと調製に適さなくなる。解凍後寒冷パスタを小片に
分けることにより溶解を早めることができる。溶液をほ
ぼ室温まで冷却してｐＨを７．０〜７．２の値に調節し
た後、水酸化アルミニウムを撹拌しながら加える。沈殿
物を遠心分離して捨てる。任意に濾過工程を行なう。次
いで、塩化カルシウムを加えて塩化カルシウムを所望の
最終濃度にする。
【００１８】ウイルスの不活性化のためには、溶液を３
０℃まで加熱する。次に、洗浄剤を加える。しばらく撹
拌した後、溶液をウイルスの存在しない容器に移し、若
干高い温度で数時間撹拌しないで放置する。
０℃まで加熱する。次に、洗浄剤を加える。しばらく撹
拌した後、溶液をウイルスの存在しない容器に移し、若
干高い温度で数時間撹拌しないで放置する。
【００１９】ある量のリシン油を加えて数分間緩やかに
撹拌することにより、殺ウイルス薬を取り除く。油／水
相が分離したならば溶液を室温まで冷却する。水層をウ
イルス無害な容器に取り出して油層を捨てる。水層を濾
過により透明にする。ｐＨが７．０〜７．２になるよう
にチェックしなければならない。次に、タンパク溶液を
室温でポンプにより逆相カラムに通す。タンパク含量
（１０〜６０ｍｇ／ｍｌの範囲）を測定した後、溶離液
をダイアフィルトレーションにより６０〜１００ｍｇ／
ｍｌのタンパク含量まで濃縮し、上記緩衝液と同じであ
るが更に相当高濃度の塩化カルシウムを含む緩衝液で透
析する。次いで、プロテアーゼ阻害因子を加える。減菌
濾過を行ない、そして試料を適当な容器に入れて深冷凍
結する。
撹拌することにより、殺ウイルス薬を取り除く。油／水
相が分離したならば溶液を室温まで冷却する。水層をウ
イルス無害な容器に取り出して油層を捨てる。水層を濾
過により透明にする。ｐＨが７．０〜７．２になるよう
にチェックしなければならない。次に、タンパク溶液を
室温でポンプにより逆相カラムに通す。タンパク含量
（１０〜６０ｍｇ／ｍｌの範囲）を測定した後、溶離液
をダイアフィルトレーションにより６０〜１００ｍｇ／
ｍｌのタンパク含量まで濃縮し、上記緩衝液と同じであ
るが更に相当高濃度の塩化カルシウムを含む緩衝液で透
析する。次いで、プロテアーゼ阻害因子を加える。減菌
濾過を行ない、そして試料を適当な容器に入れて深冷凍
結する。
【００２０】Ｂ成分は、好ましくは凍結乾燥したプロテ
アーゼである。特に好ましいのは凍結乾燥したトロンビ
ン、または南アメリカの毒蛇、ボスルポス・モウジェニ
の凍結乾燥した分画である。そのタンパク分解酵素はレ
プチラーゼ(Reptilase) の商品名で知られており、酵素
バトロキソビンである。タンパク分解酵素を塩化カルシ
ウム緩衝液に溶解する。
アーゼである。特に好ましいのは凍結乾燥したトロンビ
ン、または南アメリカの毒蛇、ボスルポス・モウジェニ
の凍結乾燥した分画である。そのタンパク分解酵素はレ
プチラーゼ(Reptilase) の商品名で知られており、酵素
バトロキソビンである。タンパク分解酵素を塩化カルシ
ウム緩衝液に溶解する。
【００２１】二つの成分ＡおよびＢの適用は、二重注射
器法を用いて例えばプラスチック連結子を介して行な
う。二つの成分を混ぜ合わせると、凝塊が形成される。
適用はカニューレにより生じることもできるし、あるい
は三管腔カテーテルに噴霧してもよい。二成分の各々を
別個の管腔に注入し、そして混合物を噴霧するために数
気圧の範囲の圧縮空気源を三つ目の管腔に接続する。
器法を用いて例えばプラスチック連結子を介して行な
う。二つの成分を混ぜ合わせると、凝塊が形成される。
適用はカニューレにより生じることもできるし、あるい
は三管腔カテーテルに噴霧してもよい。二成分の各々を
別個の管腔に注入し、そして混合物を噴霧するために数
気圧の範囲の圧縮空気源を三つ目の管腔に接続する。
【００２２】本発明の組織グルーは、重い血液凝固疾患
にかかっている患者に使用することができ、また公知の
組織グルーよりももっと安価であるので、都合がよい。
重い血友病の患者はこれ以後、例えば第VIII因子濃縮物
の予防的輸液なしに８０％以上の成功率で抜歯をするこ
とができる。このことは、患者の約五分の一しか抜歯後
の出血のために輸液を必要としないことを意味する。さ
らに、ヘパリンで予備処置されたそのような患者は、本
発明の組織グルーで処置することができる。別の利点
は、組織グルーの第二成分のトロンビンに対する抗体が
生じた人々が本発明に係る組織グルーで処置できること
であり、その際トロンビンの代りにヘビ毒からのプロテ
アーゼ、特に南アメリカの毒蛇、ボスルポス・モウジェ
ニの毒から単離されたセリンプロテアーゼのバトロキソ
ビンであるデフィブラーゼが用いられる。
にかかっている患者に使用することができ、また公知の
組織グルーよりももっと安価であるので、都合がよい。
重い血友病の患者はこれ以後、例えば第VIII因子濃縮物
の予防的輸液なしに８０％以上の成功率で抜歯をするこ
とができる。このことは、患者の約五分の一しか抜歯後
の出血のために輸液を必要としないことを意味する。さ
らに、ヘパリンで予備処置されたそのような患者は、本
発明の組織グルーで処置することができる。別の利点
は、組織グルーの第二成分のトロンビンに対する抗体が
生じた人々が本発明に係る組織グルーで処置できること
であり、その際トロンビンの代りにヘビ毒からのプロテ
アーゼ、特に南アメリカの毒蛇、ボスルポス・モウジェ
ニの毒から単離されたセリンプロテアーゼのバトロキソ
ビンであるデフィブラーゼが用いられる。
【００２３】本発明をさらに、限定しない以下の実施例
で明らかにする。ヒトフィブリノーゲン（グレードＬ）
はカビ(Kabi)（ストックホルム）のもので、ウシトロン
ビンはメルツ−ダーデ(Merz-Dade) のものであった。色
素原基質Ｎ−ａ−ベンゾイル−ＤＬ−アルギニン−ｐ−
ニトロアニリド（ＢＡＰＮＡ）および分析用試薬は、シ
グマ(Sigma) （セントルイス、ＭＯ）のものであった。
試薬および塩を０．０１５Ｍのトリス、０．１５ＭのＮ
ａＣｌで希釈してｐＨ７．４とした。フィブリノーゲン
をトリス緩衝液で、Ｅ1%２８０＝１５の変換係数を用い
てＡｂｓ280 から決定した濃度で透析した。
で明らかにする。ヒトフィブリノーゲン（グレードＬ）
はカビ(Kabi)（ストックホルム）のもので、ウシトロン
ビンはメルツ−ダーデ(Merz-Dade) のものであった。色
素原基質Ｎ−ａ−ベンゾイル−ＤＬ−アルギニン−ｐ−
ニトロアニリド（ＢＡＰＮＡ）および分析用試薬は、シ
グマ(Sigma) （セントルイス、ＭＯ）のものであった。
試薬および塩を０．０１５Ｍのトリス、０．１５ＭのＮ
ａＣｌで希釈してｐＨ７．４とした。フィブリノーゲン
をトリス緩衝液で、Ｅ1%２８０＝１５の変換係数を用い
てＡｂｓ280 から決定した濃度で透析した。
【００２４】ウシトロンビンは市販筋（メルツ−ダーデ
またはパルケ・デービス(Parke Davis))のもので、製造
者による評価活性度を有していた。ＦＰＡのみを遊離す
るヘビ毒であるレプチラーゼ(ReptilaseR)は、ペンタフ
ァーム(Pentapharm)（バーゼル）のものであった。レプ
チラーゼのタンパク分解活性度を、３７℃、トリス／サ
リン中、ｐＨ８．０で、４０５ｎｍで１５分間モニター
した非特異性色素原基質ＢＡＰＮＡ（０．２５ｍＭ）の
各タンパク分解速度を比較することにより、トロンビン
のそれに規格化した。エステル化分解活性度に基づい
て、レプチラーゼの単位活性度をトロンビンのそれに規
格化した。
またはパルケ・デービス(Parke Davis))のもので、製造
者による評価活性度を有していた。ＦＰＡのみを遊離す
るヘビ毒であるレプチラーゼ(ReptilaseR)は、ペンタフ
ァーム(Pentapharm)（バーゼル）のものであった。レプ
チラーゼのタンパク分解活性度を、３７℃、トリス／サ
リン中、ｐＨ８．０で、４０５ｎｍで１５分間モニター
した非特異性色素原基質ＢＡＰＮＡ（０．２５ｍＭ）の
各タンパク分解速度を比較することにより、トロンビン
のそれに規格化した。エステル化分解活性度に基づい
て、レプチラーゼの単位活性度をトロンビンのそれに規
格化した。
【００２５】フィブリングルーは基本的に、二重注射器
法により一つの注射器に純粋のまたは寒冷沈降物のフィ
ブリノーゲン基質を、もう一つにレプチラーゼ（２０Ｕ
／ｍｌ）またはトロンビンをＣａＣｌ2 （２０ｍＭ）と
一緒に入れて発生させた。
法により一つの注射器に純粋のまたは寒冷沈降物のフィ
ブリノーゲン基質を、もう一つにレプチラーゼ（２０Ｕ
／ｍｌ）またはトロンビンをＣａＣｌ2 （２０ｍＭ）と
一緒に入れて発生させた。
【００２６】凝塊時間（ＣＴ）は、リサーチモデル３０
０−ＲＡＣＬ凝固分析器（ＩＬ、ミラノ）を用いて決定
した。粘弾性（ＴＥＧ）は、３７℃で３チャンネルのヘ
イリガー・トロンボエラストグラフで決定した。グルー
（数グラム）の破壊強度（ＢＳ）は、二片の荒織の合成
繊維（０．５×１ｃｍ）の間でグルー成分を混合して、
この二片の荒いメッシュの間にすっかり織り込まれたゲ
ルを形成させ、そして２時間後２４℃でメッシュ−グル
ー−メッシュのアンサンブルを、アキュフォース・カデ
ット張力計（ＡＭＡＴＥＫ、マンスフィールド・アンド
・グリーン、米国）を用いて引き剥すことにより決定し
た。
０−ＲＡＣＬ凝固分析器（ＩＬ、ミラノ）を用いて決定
した。粘弾性（ＴＥＧ）は、３７℃で３チャンネルのヘ
イリガー・トロンボエラストグラフで決定した。グルー
（数グラム）の破壊強度（ＢＳ）は、二片の荒織の合成
繊維（０．５×１ｃｍ）の間でグルー成分を混合して、
この二片の荒いメッシュの間にすっかり織り込まれたゲ
ルを形成させ、そして２時間後２４℃でメッシュ−グル
ー−メッシュのアンサンブルを、アキュフォース・カデ
ット張力計（ＡＭＡＴＥＫ、マンスフィールド・アンド
・グリーン、米国）を用いて引き剥すことにより決定し
た。
【００２７】無菌寒冷沈降物（ｃｒｙｏ）は、ヒトの凍
結血漿（−３０℃）から、４℃で溶かして上澄み血漿を
取り除いて調製した。５個のそのような単位体をタンパ
クを決定するために貯留し、フィブリノーゲンの濃度を
ビレット法により２Ｕ／ｍＬのトロンビンを用いて、寒
冷沈降物（１：５に希釈）を凝塊させる前後で決定し
た。第XIII因子は、試料を４Ｕ／ｍｌのウシトロンビン
で１０分間、２２℃で活性化した後、ジメチル化カゼイ
ンへの［ 3Ｈ］−プトレシンの取り込みを測定すること
により決定した。
結血漿（−３０℃）から、４℃で溶かして上澄み血漿を
取り除いて調製した。５個のそのような単位体をタンパ
クを決定するために貯留し、フィブリノーゲンの濃度を
ビレット法により２Ｕ／ｍＬのトロンビンを用いて、寒
冷沈降物（１：５に希釈）を凝塊させる前後で決定し
た。第XIII因子は、試料を４Ｕ／ｍｌのウシトロンビン
で１０分間、２２℃で活性化した後、ジメチル化カゼイ
ンへの［ 3Ｈ］−プトレシンの取り込みを測定すること
により決定した。
【００２８】ＣＴ−フィブリノーゲン曲線の注目すべき
特徴は、固定レベルのトロンビンまたはレプチラーゼ
（すなわち１Ｕ／ｍｌ）について、曲線が二段階的であ
り、１〜８ｍＭのフィブリノーゲン範囲で最小に達する
ことである。このことは、２０〜４０ｍＭのフィブリノ
ーゲン範囲でピークとなる最大混濁度（１０分後）と幾
分異なっている。反対実験は、ＣＴがトロンビンレベル
にもレプチラーゼレベルにも依存することを示してい
る。この曲線は、低い酵素レベル（２Ｕ／ｍＬ未満）で
ゲル化速度のほぼ直線的逆依存性を示し、より高いレベ
ルでは上部でプラトーになる。
特徴は、固定レベルのトロンビンまたはレプチラーゼ
（すなわち１Ｕ／ｍｌ）について、曲線が二段階的であ
り、１〜８ｍＭのフィブリノーゲン範囲で最小に達する
ことである。このことは、２０〜４０ｍＭのフィブリノ
ーゲン範囲でピークとなる最大混濁度（１０分後）と幾
分異なっている。反対実験は、ＣＴがトロンビンレベル
にもレプチラーゼレベルにも依存することを示してい
る。この曲線は、低い酵素レベル（２Ｕ／ｍＬ未満）で
ゲル化速度のほぼ直線的逆依存性を示し、より高いレベ
ルでは上部でプラトーになる。
【００２９】純粋なフィブリンの粘弾性の発達は、その
混濁度より若干遅い。Ｃａ（II）は、第XIIIａ因子に誘
発されたタンパク鎖の共有結合による連結によるゲル強
化において主要な補因子である。そのようなゲル架橋
は、ゲルの機械的強度の主原因であり、２０分後にプラ
トーになる。第XIIIａ因子の活性を誘発するレプチラー
ゼの能力に関する覚え書は、適切であるようにみえる。
混濁度より若干遅い。Ｃａ（II）は、第XIIIａ因子に誘
発されたタンパク鎖の共有結合による連結によるゲル強
化において主要な補因子である。そのようなゲル架橋
は、ゲルの機械的強度の主原因であり、２０分後にプラ
トーになる。第XIIIａ因子の活性を誘発するレプチラー
ゼの能力に関する覚え書は、適切であるようにみえる。
【００３０】貯留した寒冷沈降物のタンパクレベル：５
個の単位体から調製した貯留寒冷沈降物は、次のような
平均値を示した： タンパク： ７５ｍｇ／ｍＬ フィブリノーゲン： ３６ｍｇ／ｍＬ 第XIIIａ因子： ４．１０Ｕ／ｍＬ
個の単位体から調製した貯留寒冷沈降物は、次のような
平均値を示した： タンパク： ７５ｍｇ／ｍＬ フィブリノーゲン： ３６ｍｇ／ｍＬ 第XIIIａ因子： ４．１０Ｕ／ｍＬ
【００３１】凝固速度：寒冷沈降物の凝塊時間（ＣＴ）
は、トロンビンまたはレプチラーゼのレベルに直線的に
依存する。しかしながら、３Ｕ／ｍＬより上では酵素レ
ベルの増加はＣＴに少ししか影響を与えない。固定レベ
ルの酵素では、寒冷沈降物の連続的希釈は、純粋なフィ
ブリン系で注目されるフィブリノーゲン依存性と同等の
二段階的ＣＴ曲線を示す。
は、トロンビンまたはレプチラーゼのレベルに直線的に
依存する。しかしながら、３Ｕ／ｍＬより上では酵素レ
ベルの増加はＣＴに少ししか影響を与えない。固定レベ
ルの酵素では、寒冷沈降物の連続的希釈は、純粋なフィ
ブリン系で注目されるフィブリノーゲン依存性と同等の
二段階的ＣＴ曲線を示す。
【００３２】寒冷沈降物グルーの粘弾性（ＴＥＧ）およ
び破壊強度（ＢＳ）。 寒冷沈降物グルーの粘弾性の発達は、トロンビンとレプ
チラーゼのどちらでも研究した。このパラメータは発達
するのに混濁度よりずっと長くかかる。しかしながら、
過剰のＣａＣｌ2 とトロンビンかレプチラーゼのどちら
かを用いて生成した寒冷沈降物グルーは、おおよそ同時
間枠で同等のＴＥＧ値を達成する。ゲル化の初期の始ま
り後、第XIIIａ因子に誘発された架橋がゲル繊維構造を
元気づけるために、両方のグルーのＴＥＧ値は１時間以
内に収束するようにみえる。過剰のＣａＣｌ2 を用いて
形成した両寒冷沈降物グルーの最終ＢＳでも同様であ
る。両寒冷沈降物グルーは５０〜６０ｇで壊れる。これ
らの実験は、グルー内のゲル繊維が第XIIIａ因子に誘発
された共有結合による架橋により、強化されるようにな
ることを示している。
び破壊強度（ＢＳ）。 寒冷沈降物グルーの粘弾性の発達は、トロンビンとレプ
チラーゼのどちらでも研究した。このパラメータは発達
するのに混濁度よりずっと長くかかる。しかしながら、
過剰のＣａＣｌ2 とトロンビンかレプチラーゼのどちら
かを用いて生成した寒冷沈降物グルーは、おおよそ同時
間枠で同等のＴＥＧ値を達成する。ゲル化の初期の始ま
り後、第XIIIａ因子に誘発された架橋がゲル繊維構造を
元気づけるために、両方のグルーのＴＥＧ値は１時間以
内に収束するようにみえる。過剰のＣａＣｌ2 を用いて
形成した両寒冷沈降物グルーの最終ＢＳでも同様であ
る。両寒冷沈降物グルーは５０〜６０ｇで壊れる。これ
らの実験は、グルー内のゲル繊維が第XIIIａ因子に誘発
された共有結合による架橋により、強化されるようにな
ることを示している。
【００３３】寒冷溶液の調製。市販の寒冷パスタを４〜
１０℃で一晩予備解凍する。１キロの寒冷沈降物を、２
リットルの緩衝液Ａ（１２０ｍＭ／ｌのＮａＣｌ、１０
ｍＭ／ｌのクエン酸三ナトリウム、１２０ｍＭ／ｌのグ
リシン、そしてｐＨ７．０〜７．２）に溶解し、３０〜
３５℃に予備加熱する。寒冷パスタは速やかに溶解すべ
きである。さもないと調製に適さなくなる。溶解を早め
るために、解凍後寒冷パスタを小片に切り分ける。次
に、溶液を２０℃〜２２℃に冷却してｐＨをチェックす
る。任意に、希水酸化ナトリウムまたは酸を加えてｐＨ
７．０〜７．２に調節しなければならない。１００ｍｌ
の水酸化アルミニウムを加えてもう３０分間撹拌する。
沈殿物を遠心分離して捨てる。上澄みを１μｍのフィル
ターを用いて濾過する。０．１Ｍ／ｌのＣａＣｌ2 を加
えてＣａ2+の最終濃度を１ｍＭ／ｌにする。再度ｐＨを
チェックしなければならない。
１０℃で一晩予備解凍する。１キロの寒冷沈降物を、２
リットルの緩衝液Ａ（１２０ｍＭ／ｌのＮａＣｌ、１０
ｍＭ／ｌのクエン酸三ナトリウム、１２０ｍＭ／ｌのグ
リシン、そしてｐＨ７．０〜７．２）に溶解し、３０〜
３５℃に予備加熱する。寒冷パスタは速やかに溶解すべ
きである。さもないと調製に適さなくなる。溶解を早め
るために、解凍後寒冷パスタを小片に切り分ける。次
に、溶液を２０℃〜２２℃に冷却してｐＨをチェックす
る。任意に、希水酸化ナトリウムまたは酸を加えてｐＨ
７．０〜７．２に調節しなければならない。１００ｍｌ
の水酸化アルミニウムを加えてもう３０分間撹拌する。
沈殿物を遠心分離して捨てる。上澄みを１μｍのフィル
ターを用いて濾過する。０．１Ｍ／ｌのＣａＣｌ2 を加
えてＣａ2+の最終濃度を１ｍＭ／ｌにする。再度ｐＨを
チェックしなければならない。
【００３４】ウイルスの不活性化。 この溶液を３０℃まで加熱する。１％ｗ／ｖのＴＮＢＰ
と１％ｗ／ｖのトリトンＸ１００を加える。混合物を
０．５時間緩やかに撹拌する。溶液を次いでウイルスの
存在しない容器に移して、３０℃で３．５時間撹拌しな
いで放置する。
と１％ｗ／ｖのトリトンＸ１００を加える。混合物を
０．５時間緩やかに撹拌する。溶液を次いでウイルスの
存在しない容器に移して、３０℃で３．５時間撹拌しな
いで放置する。
【００３５】殺ウイルス薬の除去。 上記のように調製した混合物に１５０ｍｌのリシン油を
加えて３０分間緩やかに撹拌する。油／水分離を待つ間
（３０〜４５分）、溶液を２０℃に冷却する。水層をウ
イルス無害の容器に取り出し、一方では油層を捨てる。
水層を１μｍ／０．４５μｍのフィルターカスケードで
濾過して透明にする。次に、タンパク溶液をポンプによ
り逆相カラム（Ｃ−１８−カラム）に、３リットル／時
の速度で室温で通す。通過物をＵＶでモニターして、吸
光度が５０％に回復するまで集める。分画はタンパク分
析で測定しておおよそ４０ｍｇ／ｍｌ含有する。
加えて３０分間緩やかに撹拌する。油／水分離を待つ間
（３０〜４５分）、溶液を２０℃に冷却する。水層をウ
イルス無害の容器に取り出し、一方では油層を捨てる。
水層を１μｍ／０．４５μｍのフィルターカスケードで
濾過して透明にする。次に、タンパク溶液をポンプによ
り逆相カラム（Ｃ−１８−カラム）に、３リットル／時
の速度で室温で通す。通過物をＵＶでモニターして、吸
光度が５０％に回復するまで集める。分画はタンパク分
析で測定しておおよそ４０ｍｇ／ｍｌ含有する。
【００３６】溶離液を、ダイアフィルトレーションによ
り７０〜８０ｍｇ／ｍｌのタンパク含量まで濃縮し、十
分な量の緩衝液Ｂ（緩衝液Ａと同じ成分であるが、追加
の１ｍＭ／ｌの塩化カルシウム）で透析する。次に、溶
液リットル当たり４×１０6ＫＩＵのアプロチニンを加
える。その後、０．４５μｍ＋０．２μｍのカスケード
を用いて減菌濾過を行なう。溶液を次いでプラスチック
の袋に入れて深冷凍結し、任意に凍結乾燥する。
り７０〜８０ｍｇ／ｍｌのタンパク含量まで濃縮し、十
分な量の緩衝液Ｂ（緩衝液Ａと同じ成分であるが、追加
の１ｍＭ／ｌの塩化カルシウム）で透析する。次に、溶
液リットル当たり４×１０6ＫＩＵのアプロチニンを加
える。その後、０．４５μｍ＋０．２μｍのカスケード
を用いて減菌濾過を行なう。溶液を次いでプラスチック
の袋に入れて深冷凍結し、任意に凍結乾燥する。
【００３７】トロンビン溶液の調製。 凍結乾燥したトロンビンを４０ｍＭ／ｌの塩化カルシウ
ム溶液に溶解する。トロンビンの量をグルー中１００Ｕ
／ｍｌにする。例えば創傷部分へのグルーの噴霧のため
の作用の速いグルーでは、塩化カルシウムの１００Ｕ／
ｍｌのトロンビン溶液で十分であろう。たとえば抜歯に
よる空隙の充填あるいは経蝶形骨の下垂体切除の腔の密
封のための遅いグルーでは、多量のＣａＣｌ2 を加える
ことにより、トロンビンを更に２５Ｕ／ｍｌの最終濃度
まで溶解することになる。レプチラーゼの調製もトロン
ビンのそれと同様である。ただし、レプチラーゼの量は
おおよそ２Ｕ／ｍｌである。
ム溶液に溶解する。トロンビンの量をグルー中１００Ｕ
／ｍｌにする。例えば創傷部分へのグルーの噴霧のため
の作用の速いグルーでは、塩化カルシウムの１００Ｕ／
ｍｌのトロンビン溶液で十分であろう。たとえば抜歯に
よる空隙の充填あるいは経蝶形骨の下垂体切除の腔の密
封のための遅いグルーでは、多量のＣａＣｌ2 を加える
ことにより、トロンビンを更に２５Ｕ／ｍｌの最終濃度
まで溶解することになる。レプチラーゼの調製もトロン
ビンのそれと同様である。ただし、レプチラーゼの量は
おおよそ２Ｕ／ｍｌである。
【００３８】臨床例の報告 ２１歳の患者、ＭＹ（２１歳の男性）は、トロンビンに
対する後天性の阻害因子のために重い出血素質で悩んで
いた。背景となる疾患（すなわち、腫瘍または自己免疫
疾患）は、何もこの問題を説明できなかった。二つの外
部研究所により確認された実験室試験は、ＭＹが高レベ
ルの抗トロンビンＩｇＧ抗体を有することを示した。昨
年、彼は左の腎臓骨盤にある大きな結石のために、腎せ
ん痛の繰り返しの発作に苦しんだ。超音波による選択的
砕石術が計画された。ＩｇＧがタンパクＡのアフィニテ
ィカラムに結合するとの方法に基づいて、患者を体外の
免疫吸着と組み合わせた免疫抑制療法にかけた。８回の
治療後、それにより６０Ｌの患者の血漿がタンパクＡカ
ラムを通過して処理されたのであるが、阻害因子価は９
８％に減少した。これは、正常な貯留された血漿のトロ
ンビン時間（ＴＴ）を、アフィニティの前後に精製した
ＭＪ血漿とともに測定することにより決定した。それに
もかかわらず、ＰＴやＡＰＴＴと同様にＴＴも延びた。
この時点で、腎結石は尿道に移動して、水腎症によって
なされた腎臓の完全な遮断を引き起こした。患者は、も
う１０回の免疫吸着療法（おおよそ８０リットルの血
漿）を受けた後、徹底的な血漿しゃ血（おおよそ５０リ
ットル）および多量の免疫グロブリン注入（２ｇ／ｋ
ｇ）を受けた。この時点で、トロンビン阻害因子のレベ
ルは０．５％まで減少した。ＰＴＴは４７”（治療前８
５〜９０”に対して）に、ＴＴは３５”（治療前９０”
および正常な対照２７”に対して）に減少した。寒冷沈
降物と高レベル（２００Ｕ／ｍＬ）のトロンビンから作
った生物学的接着剤（寒冷沈降物グルー）を用いて、外
科手術により結石を取り除くことを決断した。この混合
物では、寒冷沈降物は噴霧すると直ちにゲル化した。し
かしながら、この患者ではゲル化は起こらず、局所止血
は縫合により達成された。手術の終わりに、創傷は『乾
燥している』ように見えた。それにもかかわらず、６時
間後、患者は手術のドレーンから出血していた。１０リ
ットルの血漿の免疫吸着を行なったが、現に増加してい
る出血には効果がなかった。
対する後天性の阻害因子のために重い出血素質で悩んで
いた。背景となる疾患（すなわち、腫瘍または自己免疫
疾患）は、何もこの問題を説明できなかった。二つの外
部研究所により確認された実験室試験は、ＭＹが高レベ
ルの抗トロンビンＩｇＧ抗体を有することを示した。昨
年、彼は左の腎臓骨盤にある大きな結石のために、腎せ
ん痛の繰り返しの発作に苦しんだ。超音波による選択的
砕石術が計画された。ＩｇＧがタンパクＡのアフィニテ
ィカラムに結合するとの方法に基づいて、患者を体外の
免疫吸着と組み合わせた免疫抑制療法にかけた。８回の
治療後、それにより６０Ｌの患者の血漿がタンパクＡカ
ラムを通過して処理されたのであるが、阻害因子価は９
８％に減少した。これは、正常な貯留された血漿のトロ
ンビン時間（ＴＴ）を、アフィニティの前後に精製した
ＭＪ血漿とともに測定することにより決定した。それに
もかかわらず、ＰＴやＡＰＴＴと同様にＴＴも延びた。
この時点で、腎結石は尿道に移動して、水腎症によって
なされた腎臓の完全な遮断を引き起こした。患者は、も
う１０回の免疫吸着療法（おおよそ８０リットルの血
漿）を受けた後、徹底的な血漿しゃ血（おおよそ５０リ
ットル）および多量の免疫グロブリン注入（２ｇ／ｋ
ｇ）を受けた。この時点で、トロンビン阻害因子のレベ
ルは０．５％まで減少した。ＰＴＴは４７”（治療前８
５〜９０”に対して）に、ＴＴは３５”（治療前９０”
および正常な対照２７”に対して）に減少した。寒冷沈
降物と高レベル（２００Ｕ／ｍＬ）のトロンビンから作
った生物学的接着剤（寒冷沈降物グルー）を用いて、外
科手術により結石を取り除くことを決断した。この混合
物では、寒冷沈降物は噴霧すると直ちにゲル化した。し
かしながら、この患者ではゲル化は起こらず、局所止血
は縫合により達成された。手術の終わりに、創傷は『乾
燥している』ように見えた。それにもかかわらず、６時
間後、患者は手術のドレーンから出血していた。１０リ
ットルの血漿の免疫吸着を行なったが、現に増加してい
る出血には効果がなかった。
【００３９】患者に再手術をして出血の原因を見つけ
た。けれども手術的出血は見つからなかった。広汎性の
出血が創傷表面域全体から観察された。この時、寒冷沈
降物とレプチラーゼ（２Ｕ／ｍＬ；デフィブラーゼ）の
混合物を創傷上に噴霧した。噴霧は直ちに凝塊して、創
傷表面は混濁したようにみえ、そして出血が止まった。
患者はもう５日間、毎日免疫吸着療法を受け続けた。出
血はなかった。このことは、本発明の組織グルーのＢ成
分としてヘビプロテアーゼを使用することの利点を証明
するものである。
た。けれども手術的出血は見つからなかった。広汎性の
出血が創傷表面域全体から観察された。この時、寒冷沈
降物とレプチラーゼ（２Ｕ／ｍＬ；デフィブラーゼ）の
混合物を創傷上に噴霧した。噴霧は直ちに凝塊して、創
傷表面は混濁したようにみえ、そして出血が止まった。
患者はもう５日間、毎日免疫吸着療法を受け続けた。出
血はなかった。このことは、本発明の組織グルーのＢ成
分としてヘビプロテアーゼを使用することの利点を証明
するものである。
【００４０】
【発明の効果】本発明の組織グルーは、重い血液凝固疾
患にかかっている患者に使用することができ、また公知
の組織グルーよりももっと安価であるので、都合がよ
い。重い血友病の患者はこれ以後、たとえば第VIII因子
濃縮物の予防的輸液なしに８０％以上の成功率で抜歯を
することができる。このことは、患者の約五分の一しか
抜歯後の出血のために輸液を必要としないことを意味す
る。さらに、ヘパリンで予備処置されたそのような患者
は、本発明の組織グルーで処置することができる。別の
利点は、組織グルーの第二成分のトロンビンに対する抗
体が生じた人々が本発明に係る組織グルーで処置できる
ことであり、その際、トロンビンの代りにヘビ毒からの
プロテアーゼ、特に南アメリカの毒蛇、ボスルポス・モ
ウジェニの毒から単離されたセリンプロテアーゼのバト
ロキソビンであるデフィブラーゼを用いる。
患にかかっている患者に使用することができ、また公知
の組織グルーよりももっと安価であるので、都合がよ
い。重い血友病の患者はこれ以後、たとえば第VIII因子
濃縮物の予防的輸液なしに８０％以上の成功率で抜歯を
することができる。このことは、患者の約五分の一しか
抜歯後の出血のために輸液を必要としないことを意味す
る。さらに、ヘパリンで予備処置されたそのような患者
は、本発明の組織グルーで処置することができる。別の
利点は、組織グルーの第二成分のトロンビンに対する抗
体が生じた人々が本発明に係る組織グルーで処置できる
ことであり、その際、トロンビンの代りにヘビ毒からの
プロテアーゼ、特に南アメリカの毒蛇、ボスルポス・モ
ウジェニの毒から単離されたセリンプロテアーゼのバト
ロキソビンであるデフィブラーゼを用いる。
Claims (15)
- 【請求項１】 全血の寒冷沈降物と、３０００〜５００
０ＫＩＵ／ｍｌ単位のアプロチニンに相当する多量のプ
ロテアーゼ阻害因子とからなるＡ成分、及びＡ成分中に
存在するフィブリノーゲンを特異的に切断してフィブリ
ンポリマーの形成を起こしうるタンパク分解酵素からな
るＢ成分、 から構成される組織グルー。 - 【請求項２】 Ａ成分の寒冷沈降物が濃縮されているこ
とを特徴とする請求項１記載の組織グルー。 - 【請求項３】 プロテアーゼ阻害因子が３０００〜５０
００ＫＩＵ／ｍｌ単位の量のアプロチニンであることを
特徴とする請求項１記載の組織グルー。 - 【請求項４】 タンパク分解酵素が、ほ乳動物もしくは
ヒトから得られたトロンビンであることを特徴とする請
求項１乃至３のいずれかの項記載の組織グルー。 - 【請求項５】 全血の寒冷沈降物からなるＡ成分、およ
びＡ成分中に存在するフィブリノーゲンを特異的に切断
してフィブリンポリマーの形成を起こしうる酵素であ
る、ヘビ毒から得られるタンパク分解酵素からなるＢ成
分、 から構成される組織グルー。 - 【請求項６】 ヘビ毒酵素が、南アメリカの毒蛇、ボス
ルポス・モウジェニの毒から単離されたバトロキソビン
であることを特徴とする請求項５記載の組織グルー。 - 【請求項７】 ３０００〜５０００ＫＩＵ／ｍｌ単位の
アプロチニンに相当する多量のプロテアーゼ阻害因子、
好ましくはアプロチニンを有する請求項５もしくは６記
載の組織グルー。 - 【請求項８】 寒冷沈降物がウイルス不活性化されてい
ることを特徴とする請求項１乃至７のいずれかの項記載
の組織グルー。 - 【請求項９】 −寒冷沈降物から寒冷溶液を調製する工
程からなるＡ成分の製造、 −ウイルスの不活性化、 −殺ウイルス薬の除去、 −プロテアーゼ阻害因子の添加、およびＢ成分として適
当なプロテアーゼの好適な溶液の調製、 の工程を有する請求項１乃至８のいずれかの項に従うフ
ィブリングルーの製造法。 - 【請求項１０】 Ａ成分として、フィブリノーゲン、フ
ィブロネクチンおよび第XIII因子、および３０００〜５
０００ＫＩＵ／ｍｌのアプロチニン量に相当するプロテ
アーゼ阻害因子から構成される組織グルー。 - 【請求項１１】 Ｂ成分が請求項５および／または６に
従うタンパク分解酵素もしくはトロンビンであることを
特徴とする請求項１０記載の組織グルー。 - 【請求項１２】 Ａ成分としてフィブリノーゲン、フィ
ブロネクチンおよび第XIII因子からなり、かつＢ成分が
請求項５および／または６に従うタンパク分解酵素であ
る組織グルー。 - 【請求項１３】 組織グルーを製造するための、寒冷沈
降物との組合せでもしくはフィブリノーゲン、フィブロ
ネクチンおよび第XIII因子との組合せでの、３０００〜
５０００ＫＩＵ／ｍｌの多量のアプロチニンの使用方
法。 - 【請求項１４】 組織グルー製造のためのヘビ毒プロテ
アーゼの使用方法。 - 【請求項１５】 組織グルー製造のためのボスルポス・
モウジェニから単離されたバトロキソビンの使用方法。
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