JPH05207882A - 新規ｄｎａおよびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】ヒトＰＡＣＡＰ３８遺伝子発現のメカニズムと
その誘導の方法を解明する。 【構成】ヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡを、ヒトの
ＤＮＡライブラリーから単離し、その塩基配列を決定し
た。 【効果】ヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡの塩基配列
に基き遺伝子組換え技術を用いることによりヒトＰＡＣ
ＡＰ３８の誘導を可能とし、更に先にクローン化したヒ
トＰＡＣＡＰ３８のｃＤＮＡとの構造を比較することに
よって、イントロンとエクソンの関係を明らかにした。
遺伝子発現に必須のプロモーター領域を推定することが
可能と成った。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は精巣あるいは脳の視床下
部由来の、生理活性を有するペプチドであるヒトＰＡＣ
ＡＰ３８のゲノムＤＮＡ、該ペプチドをコードするＤＮ
Ａを含有するＤＮＡ、該ＤＮＡを保持する形質転換体お
よび該形質転換体を用いプロモーター活性を利用する成
熟ＰＡＣＡＰ３８蛋白質の製造方法に関するものであ
る。

【０００２】

【従来の技術】脳の視床下部、下垂体から分泌されるホ
ルモンには種々のものが知られている。甲状腺刺激ホル
モン放出ホルモン（Thyrotropin releasing hormone)や
黄体形成ホルモン放出ホルモン(Luteinizing hormone r
eleasing hormone)、ソマトスタチン(Somatostatin)、
副腎皮質刺激ホルモン（Adrenocorticotropic hormon
e)、成長ホルモン(Growth hormone)、プロラクチン(Pro
lactin)などがその例で、これらの作用についてはよく
研究されている。これ以外の新しい視床下部由来の生理
活性のある物質が、ヒツジ脳下垂体からアデニレート
サイクラーゼ アクティヴィティ(adenylate cyclase ac
tivity)を指標にして探求された結果、それまでには報
告されていない、３８個のアミノ酸残基からなるペプチ
ドが発見され、その構造も決定され、このものはＰＡＣ
ＡＰ３８と命名された（ヨーロッパ特許公開0 404 652
号）。また本発明者等はヒツジＰＡＣＡＰ３８のｃＤＮ
Ａの特許出願を先に行っており（特願平１−１５５７９
１号）、またヒトのＰＡＣＡＰ３８のｃＤＮＡを精巣の
ｃＤＮＡライブラリーからクローニングし、そのアミノ
酸配列を明らかにしている（特願平１−２５９９２
４）。ヒトのＰＡＣＡＰ３８に相当するアミノ酸配列は
ヒツジと同一であるが、その前駆体においてはアミノ酸
の置換がある。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】一般に、生理活性ペプ
チド等のアミノ酸配列が決定されｃＤＮＡがクローン化
されると、その発現機構を研究し、いかなる生理的条件
下で、当遺伝子の転写、翻訳が起きるのかを知り、その
遺伝子発現を誘導する薬剤の開発などに利用される。Ｐ
ＡＣＡＰ３８は、アデニレート−サイクラーゼ活性を上
昇させる３８個のアミノ酸から成り立つ新規なペプチド
であるが、この発現機構については未だ不明である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らはヒトＰＡＣ
ＡＰ３８遺伝子発現のメカニズムとその誘導の方法を開
発すべく種々研究の結果、ＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮ
Ａ(Genomic ＤＮＡ）を、ヒトのＤＮＡライブラリーか
ら単離し、その塩基配列を決定することに成功し、これ
に基き遺伝子組換え技術を用いることによりヒトＰＡＣ
ＡＰ３８の誘導を可能とし、本発明に到達したものであ
る。更に今回、本発明者らはヒトＰＡＣＡＰ３８の遺伝
子をクローニングし構造決定することにより、先にクロ
ーン化したヒトＰＡＣＡＰ３８のｃＤＮＡとの構造を比
較することによって、イントロンとエクソンの関係を明
らかにした。同時に遺伝子発現に必須のプロモーター領
域を推定することが可能と成った。即ち、本発明は(１)
ヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡ、(２)ヒトＰＡＣＡ
Ｐ３８をコードするＤＮＡを含有するＤＮＡ、(３)ＰＡ
ＣＡＰ３８をコードするＤＮＡを含有するＤＮＡを保持
する形質転換体、(４)上記(３)記載の形質転換体の培
養、培養物中への蛋白質の生成蓄積、採取を包含する成
熟ＰＡＣＡＰ３８の製造方法に関するものである。

【０００５】本発明方法におけるヒトＰＡＣＡＰ３８の
前駆体たんぱくまたは成熟ＰＡＣＡＰ３８をコードする
塩基配列を有するＤＮＡを含有する発現型ベクターは、
例えば、（ｉ）ヒト細胞ＤＮＡを抽出し、ＥｃｏＲＩ，
ＳａｌＩなどの制限酵素処理ＤＮＡをファージＤＮＡま
たはプラスミドに組み込み、（ii）得られた組み換えフ
ァージまたはプラスミドで宿主を形質転換し、（iii）
得られた形質転換体を培養後、形質転換体から適当な方
法、例えばＰＡＣＡＰ３８の一部をコードするＤＮＡプ
ローブとのハイブリダイゼーションにより、目的とする
ＤＮＡを含有するファージあるいはプラスミドを単離
し、（iv）その組み換えＤＮＡから目的とするクローン
化ＤＮＡを切り出し、（ｖ）該クローン化ＤＮＡまたは
その一部を発現ベクター中のプロモーターの下流に連結
する、ことにより製造することができる。

【０００６】ＤＮＡを組み込むプラスミドとしては、た
とえば大腸菌由来のpＢＲ322〔ジーン（gene),2,95(197
7)〕，pＢＲ325〔ジーン,4,121(1978)〕，pＵＣ12〔ジ
ーン,19,,259(1982)〕，pＵＣ13〔ジーン,19,259(198
2)〕、枯草菌由来のpＵＢ110〔バイオケミカル・バイオ
フィジカル・リサーチ・コミュニケーョン(Biochemical
and Biophysical Research Communication),112,678(1
983)〕などが挙げられるが、その他のものであっても、
宿主内で複製増殖されるものであれば、いずれをも用い
ることができる。またＤＮＡを組み込むファージベクタ
ーとしては、たとえばλgt11〔ヤング及びデーヴィス(Y
oung, R., and Davis, R.,)プロシーディングズ・オブ
・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス・オ
ブ・ザ・ユー・エス・エー(Proc. Natl. Acad. Sci.,U.
S.A.),80,1194(1983)〕や、ＥＭＢＬ３〔Prischaufら、
ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J．M
ol．Biol．）170,827(1983)〕などが挙げられるが、そ
の他のものであっても宿主内で増殖できるものであれば
用いることができる。プラスミドに組み込む方法として
は、たとえば、ティー・マニアティス(T.Maniatis)ら，
モレキュラー・クローニング(Molecular Cloning) コー
ルド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー（Cold Spr
ing Harbor Laboratory),第239頁(1982)に記載の方法な
どが挙げられる。またファージベクターにＤＮＡを組み
込む方法としては、たとえばヒューン（Hyunh,T.V.)ら
の方法〔ディー・エヌ・エー クローニング ア プラクテ
ィカル アプローチ(DNA Cloning, A Practical Approac
h)１，49(1985)〕などが挙げられる。

【０００７】このようにして得られたプラスミドは、適
当な宿主たとえばエシェリキア(Escherichia)属菌，バ
チルス(Bacillus)属菌などに導入する。上記エシェリキ
ア属菌の例としては、エシェリキア・コリ(Escherichia
coli)Ｋ12ＤＨ1〔プロシージング・オブ・ザ・ナショ
ナル・アカデミー・オブ・サイエンス(Proc. Natl. Aca
d. Sci. U.S.A.)60,160(1968)〕，Ｍ103〔ヌクレイック
・アシッズ・リサーチ,(Nucleic Acids Research),9,309
(1981)〕,ＪＡ221〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・
バイオロジー(Journal of Molecular Biology),120,517
(1978)〕，ＨＢ101〔ジャーナル・オブ・モレキュラー
・バイオロジー 41, 459(1969)〕,Ｃ600〔ジェネティッ
クス(Genetics),39,440(1954)〕などが挙げられる。

【０００８】上記バチルス属菌としては、たとえばバチ
ルス・サチリス(Bacillus subtilis)ＭＩ114〔ジー
ン，24,255(1983)〕，207−21〔ジャーナル・オブ・バ
イオケミストリー(Journal of Biochemistry)95,87(198
4)〕などが挙げられる。

【０００９】プラスミドで宿主を形質転換する方法とし
ては、たとえばティー・マニアティス(T．Maniatis)ら，
モレキュラー・クローニング(Molecular Cloning),コー
ルド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー(Cold Spri
ng Harbor Laboratory)，第249頁(1982)に記載のカルシ
ウムクロライド法あるいはカルシウムクロライド／ルビ
ジウムクロライド法などが挙げられる。

【００１０】またファージ・ベクターを用いる場合に
は、たとえば増殖させた大腸菌にインビトロパッケージ
ング法を用いて導入することができる。ヒトＤＮＡライ
ブラリーは上記の方法などで得ることが出来る。ヒトＤ
ＮＡライブラリーからＰＡＣＡＰ３８ＤＮＡをクローニ
ングする方法としては、例えばファージベクターλgt11
やＥＭＢＬ３とＰＡＣＡＰ３８のアミノ酸配列に基づい
て化学合成したオリゴヌクレオチドあるいはＰＡＣＡＰ
３８のｃＤＮＡをプローブとして用いたプラークハイブ
リダイゼーション法〔ティー・マニアティス(T.Maniati
s)ら，モレキュラー・クローニング(Molecular Clonin
g)コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー（Co
ld Spring Harbor Laboratory),(1982)〕などが挙げら
れる。このようにしてクローン化されたＰＡＣＡＰ３８
ＤＮＡは必要があればプラスミド、例えばｐＢＲ322,
ｐＵＣ12, ｐＵＣ13, ｐＵＣ18, ｐＵＣ19, ｐＵＣ11
8，ｐＵＣ119などにサブクローニングしてヒトＰＡＣＡ
Ｐ３８ ＤＮＡを得ることができる。

【００１１】このようにして得られたＤＮＡの塩基配列
を、たとえばマキサム・ギルバート(Maxam-Gilbert)法
〔Maxam, A. M. and Gilbert, w.,プロシーディングズ
・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
ス・オブ・ザ・ユー・エス・エー(Proc. Natl. Acad. S
ci.,U.S.A.),74,560(1977)〕あるいはジデオキシ法〔Me
ssing, J. ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ(Nuc
leic Acids Research)9,309(1981)〕によって決定し、
既知のアミノ酸配列との比較からヒトＰＡＣＡＰ３８
ＤＮＡの存在を確認する。以上のようにして、ヒトＰＡ
ＣＡＰ３８の前駆体たんぱくをコードするＤＮＡを含有
するＤＮＡ（図２）（配列番号：1）が得られる。

【００１２】後述の実施例１で得られたヒトＰＡＣＡＰ
３８の前駆体たんぱくをコードするＤＮＡを含有するＤ
ＮＡの制限酵素断片地図を図１に示す。またジデオキシ
法で決定したｃＤＮＡの塩基配列と、その塩基配列から
判明したアミノ酸配列を図２に示す。上記のようにして
クローン化されたヒトＰＡＣＡＰ３８の前駆体たんぱく
をコードするＤＮＡは目的によりそのまま、または所望
により制限酵素で消化して使用することが出来る。クロ
ーン化されたＤＮＡから発現させたい領域を切り出し、
発現に適したビークル（ベクター）中のプロモーターの
下流に連結して発現型ベクターを得ることができる。該
ＤＮＡはその５’末端に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧ
を有し、また３’末端には翻訳終止コドンとしてのＴＡ
Ａ，ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。さらにこ
の５’末端のＡＴＧの上流にはサイクリックＡＭＰに反
応するconsensus配列などがみとめられる。これらの翻
訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡア
ダプターを用いて付加することもできる。

【００１３】ベクターとしては、上記の大腸菌由来のプ
ラスミド（例、pＢＲ322，pＢＲ325，pＵＣ12，pＵＣ1
3)，枯草菌由来プラスミド(例、pＵＢ110，pＴＰ５，p
Ｃ194)，酵母由来プラスミド(例、pＳＨ19，pＳＨ15)，
あるいはλファージなどのバクテリオファージおよびレ
トロウィルス、ワクシニアウィルスなどの動物ウィルス
などが挙げられる。宿主が動物細胞である場合には、Ｓ
Ｖ４０由来のプロモーター、レトロウィルスのプロモー
ター、メタロチオネインプロモーター、ヒートショック
プロモーターなどがそれぞれ利用できる。なお、発現に
エンハンサーの利用も効果的である。

【００１４】このようにして構築されたヒトＰＡＣＡＰ
３８の前駆体たんぱくや成熟ペプチドＰＡＣＡＰ３８を
コードするＤＮＡを含有するベクターを用いて、形質転
換体を製造する。

【００１５】動物細胞としては、たとえばサル細胞ＣＯ
Ｓ−７,Ｖｅｒｏ,チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ，
マウスＬ細胞，ヒトＦＬ細胞などが挙げられる。上記エ
シェリキア属菌を形質転換するには、たとえばプロシー
ジング・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンス（Proc.Natｌ.Acad.Sci.USA),69,2110(1972)や
ジーン,17,107(1982)などに記載の方法に従って行なわ
れる。動物細胞を形質転換するには、たとえばヴィロロ
ジー(Virology)52,456(1973)に記載の方法に従って行な
われる。このようにして、ヒトＰＡＣＡＰ３８の前駆体
たんぱくや成熟ペプチド（ＰＡＣＡＰ３８）をコードす
るＤＮＡを含有する発現ベクターで形質転換された形質
転換体が得られる。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、培地と
しては、たとえば約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥ
Ｍ培地〔サイエンス（Science)122,501(1952)〕，ＤＭ
ＥＭ培地〔ヴィロロジー(Viro-logy),8,396(1959)〕，
ＲＰＭＩ１６４０培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリ
カン・メディカル・アソシエーション（The Jounal of
the American Medical Association) 199,519(1967)〕,
１９９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサイエティ・
フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン（Pro-ceedin
g of the Society for the Biological Medicine)73, 1
(1950)〕などが挙げられる。ｐＨは約６〜８であるの
が好ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約１５〜６
０時間行い、必要に応じて通気や撹拌を加える。

【００１６】

【作用】本発明のＤＮＡで形質転換した動物細胞では、
ＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡの５’領域（プロモータ
ー領域）の断片を動物細胞発現ベクターに組み込み、Ｐ
ＡＣＡＰの誘導の如何を見ることができ、それによって
ＰＡＣＡＰのプロモーター活性を調べることができる。
例えばＣＲＥ，ＴＰＡの認識配列がそのゲノムＤＮＡの
配列中に存在するとサイクリックＡＭＰあるいはこれに
類似の化合物、またＴＰＡなどを細胞に加えるとゲノム
ＤＮＡから特異的にｍＲＮＡの合成が開始され、蛋白合
成が起きるのである。またＰＡＣＡＰ遺伝子の誘導物質
（化学物質）を使用して、例えばサンドイッチＥＩＡ法
を用いてＰＡＣＡＰの産生量を知ることができる。また
この実験系を使用することにより、ＰＡＣＡＰの産生に
必要な化学物質（薬剤）の検索が可能である。これを実
験動物で使用することにより、その作用、特に脳の機能
に関する研究、特にホルモン類による脳機能の理解に応
用し、さらにこれらの知見はヒトの脳機能の解明に役立
つ知見をもたらすものである。そして、ヒトＰＡＣＡＰ
３８は、ＰＡＣＡＰ２７を含めてｃＡＭＰの上昇活性が
あることから、ヒト脳神経の成長、維持等に関して、治
療薬として利用することができる。以上、ヒトＰＡＣＡ
Ｐ３８をコードするＤＮＡのクローニング、プロモータ
ー活性発現ベクターの作製と、それらによる形質転換体
の製造、該形質転換体を用いたヒトＰＡＣＡＰ３８の一
部および成熟ペプチドの製造及びその有用性等について
詳細に述べた。

【００１７】本発明明細書および図面において、塩基や
アミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵ
Ｂ Commision on Biochemical Nomenclature による略
号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであ
り、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体
があり得る場合は、特に明示しなければＬ−体を示すも
のとする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム ＢＨＡ ：ベンツヒドリルアミン Ｃｌ−Ｚ：２-クロロ-ベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ：２-ブロモ-ベンジルオキシカルボニル Ｂｚｌ ：ベンジル ＯＢｚｌ：ベンジルエステル ＨＯＢｔ：１−ベンゾトリアゾール ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’ジシクロヘキシルカルボジイミド ＧｌｙまたはＧ ：グリシン ＡｌａまたはＡ ：アラニン ＶａｌまたはＶ ：バリン ＬｅｕまたはＬ ：ロイシン ＩｌｅまたはＩ ：イソロイシン ＳｅｒまたはＳ ：セリン ＴｈｒまたはＴ ：スレオニン ＣｙｓまたはＣ ：システイン ＭｅｔまたはＭ ：メチオニン ＧｌｕまたはＥ ：グルタミン酸 ＡｓｐまたはＤ ：アスパラギン酸 ＬｙｓまたはＫ ：リジン ＡｒｇまたはＲ ：アルギニン ＨｉｓまたはＨ ：ヒスチジン ＰｈｅまたはＦ ：フェニールアラニン ＴｙｒまたはＹ ：チロシン ＴｒｐまたはＷ ：トリプトファン ＰｒｏまたはＰ ：プロリン ＡｓｎまたはＮ ：アスパラギン ＧｌｎまたはＱ ：グルタミン なお、本発明のヒト・ＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋白や成熟
ペプチドにおいては、そのアミノ酸配列の一部が修飾
（付加、除去、その他のアミノ酸への置換など）されて
いてもよい。

【００１８】

【実施例】以下の参考例および実施例により本発明をよ
り具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるも
のではない。後述の実施例２で得られた形質転換体エシ
ェリキア コリ（Escherichia coli)ＭＶ１１８４／ｐ
ＨＧＰ２３１２およびＭＶ１１８４／ｐＨＧＰ２３０６
は、平成２年８月１０日に通商産業省工業技術院微生物
工業技術研究所（ＦＲＩ）に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−
３０５４、および平成２年７月３０日にＦＥＲＭ ＢＰ
−３０３３として各々寄託され、また該微生物は平成２
年７月２４日から財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に受託
番号ＩＦＯ １５０６８および１５０６７として各々寄
託されている。

【００１９】

【参考例１】ヒトとヒツジのＰＡＣＡＰ３８のアミノ酸
配列は同一であるが、ヒツジ視床下部から精製したＰＡ
ＣＡＰ３８(Nat.38p)と合成ＰＡＣＡＰ３８(Syn.38p)を
ラット下垂体細胞にin vitro で作用させるとAdenylate
cyclase activity の上昇が認められる。有効最少量は
１０~¹²Ｍで濃度が高くなるにつれて、その活性を高ま
ることが示された。また合成の２７−ＮＨ₂（図２のア
ミノ酸132〜158番目、次表のＳyn．27p-NH₂）にも同様
な活性を認められた。それに反して合成ブタＶＩＰ(vas
oactive intestinal polypeptide)にはそれ相当の活性
は認められなかった。結果を表１に示す。

【００２０】表１ ラット脳下垂体細胞培養におけるAdenylate cyclase 刺
激試験 cAMP pモル/ml(M±SEM) 実験１ Syn.pVIP 10~¹² M 1.35±0.05 pVIP 10~¹¹ M 1.40±0.00 pVIP 10~¹⁰ M 1.45±0.15 pVIP 10~⁹ M 1.75±0.05 pVIP 10~⁸ M 2.55±0.25 pVIP 10~⁷ M 3.30±0.20対照（ブランク） 1.55±０．１５ 実験２ Ｓｙｎ．２７ｐ−ＮＨ_２ １０￣^１２ Ｍ
2.05±0.15 27p-NH₂ 10~¹¹ M 2.55±0.15 27p-NH₂ 10~¹⁰ M 4.00±0.20 27p-NH₂ 10~⁹ M 7.90±0.30 27p-NH₂ 10~⁸ M 9.20±0.00 27p-NH₂ 10~⁷ M 9.20±0.20 Syn.38p 10~¹² M 2.15±0.05 38p 10~¹¹ M 3.05±0.35 38p 10~¹⁰ M 4.60±0.20 38p 10~⁹ M 6.20±0.10 38p 10~⁸ M 8.60±0.20 38p 10~⁷ M 8.70±0.20 Nat.38p 10~¹² M 1.50±0.10 38p 10~¹¹ M 1.75±0.05 38p 10~¹⁰ M 2.60±0.10 38p 10~⁹ M 4.60±0.00 38p 10~⁸ M 8.05±0.35対照（ブランク） 1.35±0.05 。

【００２１】

【参考例２】参考例１で用いた物質をラット下垂体細胞
に同様に作用させたところ、そこでのプロラクチン（Ｐ
ＲＬ）、ＡＣＴＨ、ＧＨの放出活性も確認された。

【００２２】

【実施例１】 ヒトＰＡＣＡＰ３８のｃＤＮＡプローブ
の作製 クローン化したヒトＰＡＣＡＰ３８のｃＤＮＡを³²Ｐ−
ｄＣＴＰを用いたランダムプライム法でラベルし、ヒト
ゲノムＤＮＡライブラリのスクリーニングに用いた。

【００２３】

【実施例２】ヒト・ＰＡＣＡＰゲノムＤＮＡの単離とそ
の塩基配列の決定 大腸菌ＬＥ３９２にヒト白血球由来ＤＮＡライブラリー
(Clontech Laboratories, Inc. 製 カタログ No.ＨＬ10
06ｄ)を感染させてプレーティングし、ファージプラー
クを出現せしめた。ベントンとデイビス(Benton, W., D
avis, R.)の報告〔サイエンス(Science) 196, 180-182
(1977)〕に従ってプラークＤＮＡの一部をニトロセルロ
ース膜にうつしとり、³²Ｐで標識した前項のｃＤＮＡプ
ローブとプラークハイブリダイゼーションを行なった。
ハイブリダイゼーションは、ホルムアミド非存在下、60
℃で行なった。ハイブリダイゼーション陽性のクローン
を単離し、そのうちのひとつであるλＨＧＰ２３のｃＤ
ＮＡ部分をＳａｌＩで切り出してプラスミドｐＵＣ 18
のＳａｌＩ部位にリクローニングし、プラスミドｐＨＧ
Ｐ２３１２，ｐＨＧＰ２３０６を作製した。このプラス
ミドで大腸菌ＭＶ１１８４を形質転換し、形質転換体エ
シェリキア・コリＭＶ１１８４／ｐＨＧＰ２３１２とｐ
ＨＧＰ２３０６を得た。このプラスミドに含まれるＤＮ
Ａ部分は１１．１Ｋbpと６Ｋbpであり、その簡単な制限
酵素地図を図１に示した。図１中、黒く塗られた部分は
ヒトＰＡＣＡＰ３８成熟体コード域である。このＤＮＡ
部分の塩基配列をサンガー（Sanger）の方法〔プロシー
ジング オブ ザ ナショナル アカデミー オブ サイエン
ス（ Proc.Nat.Acad.Sci.USA）74,5463-5467（1977）〕
によって決定した。この塩基配列を図２に示した。アミ
ノ酸番号１３２から１６９の領域が、ヒトＰＡＣＡＰ３
８成熟ペプチド部である。

【００２４】図２中、7539〜7649塩基までが第１エクソ
ンで下段のアミノ酸Ｍ（１）〜Ｒ（37）までをコードす
る。（ ）はアミノ酸Ｎｏを示す。9813〜9944までが第
２エクソンでアミノ酸Ｐ(38)〜Ｒ(81)までをコードす
る。10420〜10518までが第３エクソンでアミノ酸Ｄ(82)
〜Ｇ(114)までをコードする。11601〜11787までが第４
エクソンでアミノ酸Ｇ(115)〜Ｌ(176)までをコードす
る。ヒトＰＡＣＡＰ３８の前駆体は１７６個のアミノ酸
から成ることがゲノムＤＮＡの解析から明らかにされ
た。

【００２５】

【実施例３】ＰＡＣＡＰ−３８ ＮＨ₂の合成 市販のｐ−メチルＢＨＡ樹脂（アプライド バイオシス
テムズ社製）1.04g(0.5m mole)を用い、ペプチド合成機
（アプライド バイオシステムズ社製モデル４３０Ａ）
を使用し、合成した。最初のアミノ酸、Boc-Lys(Cl・Z)
をＨＯＢｔ／ＤＣＣで活性化し、樹脂に縮合した後、樹
脂上のＢｏｃ基を５０％トリフルオロ酢酸／塩化メチレ
ンで処理し、アミノ基を遊離させ、このアミノ基に、Ｂ
ｏｃ−Ａｓｎ，Ｂｏｃ−Ｌｙｓ(Ｃｌ・Ｚ)，Ｂｏｃ−Ｖ
ａｌ，Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ），Ｂｏｃ−Ｇｌｎ，Ｂ
ｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｒ・Ｚ），Ｂｏｃ−Ｇｌｙ，Ｂｏｃ−
Ｌｅｕ，Ｂｏｃ−Ａｌａ，Ｂｏｃ−Ｍｅｔ，Ｂｏｃ−Ｓ
ｅｒ（Ｂｚｌ），Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ），Ｂｏｃ
−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ），Ｂｏｃ−Ｐｈｅ，Ｂｏｃ−Ｉｌ
ｅ，Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）をＰＡＣＡＰ−３８のア
ミノ酸配列通り順にＨＯＢｔ／ＤＣＣで活性化し縮合し
た。各反応終了後、残存するアミノ基は無水酢酸でアセ
チル化し、保護ＰＡＣＡＰ−３８ ＮＨ₂樹脂2.42gを得
た。この保護ＰＡＣＡＰ−３８ ＮＨ₂樹脂0.51gをｐ−
クレゾール0.6g共存下フッ化水素５ｍｌで０℃，60分間
処理した後、フッ化水素を減圧留去し、残渣をエチルエ
ーテル５ｍｌで２回洗浄した後、残査を50％−酢酸水６
ｍｌで抽出した。不溶物をろ去し、50％酢酸水５ｍｌで
洗浄した。ろ液，洗液を合し２〜３ｍｌに減圧濃縮し、
セファデックスＬＨ−20（２×90ｃｍ）のカラムに付
し、50％−酢酸で溶出した。主要画分を集め減圧留去の
のち、残留物を、0.1％トリフルオロ酢酸水100ｍｌに溶
解し、ＹＭＣ-ＯＤＳ ＡＭ120 Ｓ-50樹脂カラム（2.6×
７ｃｍ）につけ、0.1％トリフルオロ酢酸水と50％アセ
トニトリル（0.1％トリフルオロ酢酸含有）の間での直
線型濃度勾配で溶出した。主要画分を合し、凍結乾燥し
60ｍｇの白色粉末を得た。これを0.05Ｍ−酢酸アンモニ
ア水20ｍｌに溶解し、ＣＭ−セルロファインの樹脂カラ
ム（１×６ｃｍ）につけ、0.05Ｍから１Ｍ−酢酸アンモ
ニアの直線型濃度勾配で溶出した。主要画分を合し、再
度ＹＭＣ−ＯＤＳカラム（2.6×７ｃｍ）につけ、０〜4
0％までのアセトニトリル水溶液（0.1％トリフルオロ酢
酸含有）の直線型濃度勾配溶出を行ない、アセトニトリ
ル28〜30％の区分を集め凍結乾燥し、白色粉末21.6ｍｇ
得た。

【００２６】アミノ酸分析値 Asp 2.90(3), Thr 0.84(1), Ser 2.10(3), Glu 2.21
(2), Gly 2.00(2),Ala 3.29(3), Val 3.19(3), Met 1.0
1(1), Ile 0.87(1), Leu 2.19(2),Tyr 3.93(4), Phe 0.
92(1), Lys 7.18(7), His 0.96(1), Arg 4.19(4) 質量分析（ＳＩＭＳ)による（Ｍ＋Ｈ)+ ４５３０ ＨＰＬＣ 溶出時間 19.6分 カラム条件 カラム ：ＹＭＣ−ＯＤＳ（AM-301,S-5 120A) 溶離液 ：Ａ液（0.1％-トリフルオロ酢酸水） Ｂ液（0.1％-トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル） を用いＡ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出(50分) 流速 ：1.0ｍｌ／分。

【００２７】

【実施例４】 ＰＡＣＡＰ−２７ ＮＨ₂の合成 市販のｐ−メチルＢＨＡ樹脂（アプライド バイオシス
テムズ社製）1.04g(0.5m mole)を用い、ペプチド合成機
（アプライド バイオシステムズ社製モデル４３０Ａ）
を使用し、合成した。最初のアミノ酸、Boc-LeuをＨＯ
Ｂｔ／ＤＣＣで活性化し、樹脂に縮合した後、樹脂上の
Ｂｏｃ基を50％トリフルオロ酢酸／塩化メチレンで処理
し、アミノ基を遊離させこのアミノ基に、Boc-Val, Boc
-Ala, Boc-Leu, Boc-Tyr(Br-Z), Boc-Lys(Cl-Z), Boc-M
et, Boc-Gln, Boc-Arg(Tos), Boc-Ser(Bzl), Boc-Asp(O
Bzl),Boc-Thr(Bzl), Boc-Phe, Boc-Ile, Boc-His(Tos)
をＰＡＣＡＰ−３８（１−27）のアミノ酸配列通り順に
ＨＯＢｔ／ＤＣＣで活性化し縮合した。各反応終了後、
残存するアミノ基は無水酢酸でアセチル化し、保護ＰＡ
ＣＡＰ−２７ ＮＨ₂樹脂2.31gを得た。この保護ＰＡＣ
ＡＰ−２７ ＮＨ₂樹脂0.50gをｐ−クレゾール0.6g共存
下フッ化水素５ｍｌで０℃，60分間処理した後、フッ化
水素を減圧留去し、残査をエチルエーテル５ｍｌで２回
洗浄した後、残査を50％−酢酸水６ｍｌで抽出した。不
溶物をろ去し、50％酢酸水５ｍｌで洗浄した。ろ液，洗
液を合し２〜３ｍｌに減圧濃縮し、セファデックスＬＨ
−20（２×90ｃｍ）のカラムに付し、50％−酢酸で溶出
した。主要画分を集め、凍結乾燥し白色粉末１２９ｍｇ
を得た。これを、0.1％-トリフルオロ酢酸水５ｍｌに溶
解し、ＴＳＫ−ＧＥＬ（ＯＤＳ−120Ｔ）のカラム（21.
5×300mm)に付し、0.1％-トリフルオロ酢酸含有する27
％−アセトニトリルで溶出した。主要画分を集め、凍結
乾燥し白色粉末17.2ｍｇを得た。

【００２８】アミノ酸分析値 Asp 1.99(2), Thr 0.98(1), Ser 2.76(3), Glu 1.25
(1), Gly 1.05(1), Ala 3.0 (3), Val 1.56(2), Met 0.
78(1), Ile 0.72(1), Leu 1.88(2), Tyr 2.22(3),Phe
0.75(1), Lys 2.73(3), His 1.51(1), Arg 1.94(2) 質量分析（ＳＩＭＳ)による(Ｍ＋Ｈ)+ ３１４５ ＨＰＬＣ 溶出時間 21.2分 カラム条件 カラム ：ＹＭＣ−ＯＤＳ（AM-301,S-5 120A) 溶離液 ：Ａ液（0.1％-トリフルオロ酢酸水） Ｂ液（0.1％-トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル） を用いＡ液からＢ液へ直線型濃度勾配溶出（50分) 流速 ：1.0ｍｌ／分

【００２９】

【実施例５】体重350ｇの雄性ウイスター(Wistar)系ラ
ットを用い、ネンブタール麻酔下に測定した血圧降下活
性を表２に示す。

【００３０】 表２ 投与量 (n mole/kg) 化合物 0.3 1.0 3.0 PACAP-38 NH₂ 3.2±1.9(n=6) 17.4±2.4(n=6) 29.8±3.6(n=6)PACAP-27 NH₂ 14.5±3.1(n=5) 51.9±9.6(n=5) 4.1(n=1) (単位 mmHg)

【００３１】

【配列表】配列番号：1 配列の長さ：17041 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源：生物名：ヒト白血球 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：7539・・7649 特徴を決定した方法：E 特徴を表す記号：CDS 存在位置：9813・・9944 特徴を決定した方法：E 特徴を表す記号：CDS 存在位置：10420・・10518 特徴を決定した方法：E 特徴を表す記号：CDS 存在位置：11601・・11787 特徴を決定した方法：E 特徴を表す記号：mature peptide 存在位置：11653・・11766 特徴を決定した方法：S GATCACGAGG TCACGAGATC GAGACCATCC TGGCCAACAT GGTGAAACCC CATCTCTACT 60 AAAAATACAA AAAATAGCTG GGCATGGTGG CCCATGCCTG TAGTCCCAGC TACTCGGGAG 120 GCTGAGGCAG GAGAATTGCT TAAACCCGGG AAGCGGAGGT TGCAGTGAGC CAAGATCGCA 180 CCACTGCCTC CCAGCCTGGT GATGGAGTGA GACTCCATCT CAAAAAAAAA AAAAAAAAAT 240 TCCTAGAGAA AATAAATATG CCAGTATAAC ATATTATAGT CATTAAGACT GTCTGGAGTC 300 ATTGAGACTT GAATCTGAAG TTCAGCATTA CAATGTAGCA GCTGTGTAAC TTTGGATAAG 360 GTACCTGAGC TCTTTTAGTC CCGATTTCTT GTCTGTAAAA TGGAGGTAAT AACAGTGCCT 420 ACAAAGAAGT TTGTTGTGAG GGAAAGGAAA TAAGTAGTCA AGCACTTAGC CCAGGAAGTG 480 TTCATTAAAC AGTTGTTGCT GTTGCTGTTA TTCACTGGTG AATAACAAAA CCATACAGTC 540 CCTTTGGAAG GAAGGATTTA AAATAATTTA AACAAATAAT CACTAAAAAT TTCAACCAGT 600 ACATTTATGA CAAATGTAAT AGTATTCCAA GCAGATGATA GTTTTTAAAA ATTTATGCCT 660 GTGTATATTT GGGTAGAGAC AAAGGATTAT TTAAAAAGTA TTTTCAGGTT GGGCACACTG 720 GCTCATCCTT GCAACCCCTG CACTTTGGGA GGCTTGAGTC CAGGAGTTTG TGACCAGCCT 780 GGGCAACACA GGGAGACCTT GTCTCTGCAA AGTAATAATA ATAACAATAA TAATAAATAA 840 AATTAGCCAG GCATGGTGGT GGCATGTGCC TGTAGTCCCA GGTATTCAAG AGGTTGAGGC 900 AGGAGTCTCA CTTAAGCCCA AGAGTTTGAG GTTGCTGTGA GCTATGAATG CACTACTGCA 960 CTCCAGCCTG GGTGACCGAG GAAGACTCAG TAAAAACAAA ACAAAACAAA CAAACAAACA 1020 AAAACTGCAA AGCCGTGATT ACCATACAGT GCTAGTAATA ATGATAATAA AAACAAAGGC 1080 TCCAAAATTA TTACATGTAA ACCTATATTC ACAGGTAGAT AATGCCAAGC CTGAGCCCAA 1140 AGGGAAGAGG GATGCTAGGG GCTCACAGAG GAAGACCTTC TTTTGATTTT ACACACAAAA 1200 ACCTTGTTTT ATTTTGCATA TAGATTCCCC TTCCAACATT TTCTGAAGTG GTCTCAAAAG 1260 CTTATTTAGG ATATTGGTTT TCCTGGATCC TGTCCAAGCT TTTCCTTCTG CATTTAAGCC 1320 TTATGTCAGC AGAGGATTTA GACTAAGTAG AGAGAAGACT TTCTTCTCCT TGGCTTTTTA 1380 GAGGAGGTGC TCTGGAATTT GGAAGATGCT ACACAGTGAA GTCTGGGATA TACATTTTTG 1440 GTACCCAGTA AACTCATGTT CAGAGAATAA GGCCTTAGTA GAGCCATATA TGTGAGATAT 1500 TTGGAATCAT CCAAACCTGT AGCAAAGGTT AGATCCTGGT TTTTGTTTCT CAGATGTCTG 1560 CTTTATATCT CAAAACAACA AGCAAAATTT CTTGGCTCTG TGAATATGCA ATTCTGTTCT 1620 TAGATTAGAG AGAAGCTTTA CTCATGTGGT TTGGAAGGCT TCCTTTCCTA GTTGTTTTCA 1680 GTGTGTGAGA AGCACTACAT TTTGAAGGTC AGAGAAGTCA TGACACATTA TAGGTAAGCT 1740 CATCAGCTTC TTACTTCACA GTGAGTTCTG AAAGGCATGA TGCATGCAGT CCAGTAAGTG 1800 ATGGTCATGA TGTTCTGGTT CAGAACATTT GGGTTTCCCT ACAGGTGTAA TCGGTATGAA 1860 GTGAGTCATT AGTCATTGCA TTTTCTGGAA AAGTCGGTAG AGAAAAGTTT AAGTGAAATG 1920 TAATACAGTG TTATAATTCA CTTTTGTCAC TCACAGGAGA GGATGATGTT TTGCATCAGG 1980 CTTGTTTACT GAAAAAGCTT ATTATAGCCT GGTTCTTATG CTAAGTACTG GCTAAAAAAG 2040 AATAGAATGT GCCAGGCACG GTGGCTCACG CCTGTAATCC CATTACTTTG AAAGGCTGAG 2100 GCAGGTGGAT CACAAGGTCA GGAGTTCGAG ACCAGCCTGG CGAACACGGT GAAACTCTGT 2160 CTGTACTAAA AATACAAAAA TTAGCAGGGT GTGGTGGTGG GTGCCTGTAG TCCCAGCTGC 2220 TTGGGAGGCT GAGACAGGAG AATCACTTGA ACCTGGGAGG CGGAGGTGGC AGTGAGCCGA 2280 GATTGTGCCA CTGCACTCCA GCCTGGGGGA CAGAGCGAGA CTTCATCTCA AAAAAAAAAA 2340 AAAAAAATGC ACAACTTTTC CAATCTTGAT TTAGATTATT TATACTAGGA ATGTGTGAGG 2400 ATGCCTTGAA CAAACATGTC CTTTTATATG GTTAAGAAAA TCAAATGTTG TAGGATATAG 2460 AGATAGTGGT AGTAAAAGGT AATGGTGTAG AGATATGTAC CTAAGGAAAG AGAATGTCAT 2520 GGAGAAACCC TGGGTACTAT GGGTGACTGA GCCAAAAAGA AAGTAGTGGA AATCTTATCT 2580 AAGTGACCAG AAGCCGCACT TCACTGGGCT GCTTAAAGGC AAAAATACTT TTAGCTCACC 2640 ACTGATTTGC AATATGGGGA TGGAGGGGAG CAGTGTTTAA AAGATGCTGA AGATTCCCAT 2700 GCAATATAGG GAAAGCCAAT TTCCCAAGTG GTGATGGTCC AAAGGCAGGA ACCTGGCACA 2760 GACACAACAG TACAAACACT ATAGTATTTG CTAATGTTGT GAAGCCATCT GCAATTCAAA 2820 CTCCCAGTAT ATATACTAGA CATATTCCTC CTGTTTGAAT ACAAAAACCC ACTTCCTCAA 2880 AGGCTAGAGT TCTTTAAATT GAATGTTAAT TCAAGGTTCA AGGATTAACC CTTCAACAAA 2940 GGCGGATGTG TTAGCCACCA GGAAAAACAA TTCGGGGAAG GGTTAGTTTG ACTTTTAGCT 3000 ATTATTTATC ATTTCTTACC CAAACTTGTT TTCACATCTG AAGGACCAAC AGGATAAAAG 3060 TTGATACATT AGGGACTTGA AGTTCAGAGT ATTATTAAAT CATTTCCAAC AAATATATAT 3120 AAACAGCGTC TTCCGGGCAG GTCAGGGCTT AGCTCAAGTC ACTTTCAGTT GCTGTGCCTC 3180 AGGGAGGATG CTGGTTAGAC CTCCCACTGA AAGATTTCCA TTGTTCTTCT AACTTTTCTA 3240 GCCAAACATG ATTCCAGTTA ATGTAACAAT CTCATAGCCT GGAAAGAAAC TGCCAGCCTG 3300 GGAAATCTAC TTTTCTGGCC TGGGAAGTAT TCTGGTGAGC ACTGAGGGAA GGGAGTAGGG 3360 GTGTTGGAAA GAAGACTTGA AATTCCTTTG TGTTATCTGT AAATAGAACG TTCTAACTCT 3420 TTGGTCTCTT CTTCCTCCTC TCCCCCAACC CCCTCTTTCA TCATTTTCAA TTATATATAG 3480 GAGGTTGGAA AGTTTCTCTT GAGCTCTTAA CCCCAGTCAC CTAAATACCC TTTGTGAGGG 3540 AAACTGGGTA AGAACAATTA AAGTGGAAGG CTCTCCTACC CTGGTCTTGC TCTTCCCCAA 3600 TTCTCCTCTA GCTCCTCCTC CCTTTATCTC TCTCTCTTCT CATAAAAGTG CTTTAGTTGA 3660 GGCTTCCTAG GATTCACCCT CCAGCTCCTA TCTGCACTTG AAGCCAGGCT GGGGTCTGCA 3720 CTTGCAATTA GTATGTCTGT TGGACTGGGC CACGGTATCC CACCTGGCCA CTGCCGCATG 3780 CCTCCTCAGT GCATGCCGGG GCTCCTGGTC TCTCTAGCCT GGGGCTTTGG GCTGACAAGT 3840 CCCCTCTTCC TTGCAGCTCC CTCAAAGTCC CAGACACAAA GGCCTCCAGG ATGCTCTGTT 3900 AATGCTTGAC TGGAGCCTTC CAAGATTAGA ATCAAAGGGG CATTTGGGGG TAGTTTTGGT 3960 CTTTGAGACT TCAGTCATCC CATATTCCCT CTACCCAATA GAAAGCAGAA GGGGCCTATA 4020 CTCTCATCTA GCAGCTTCTA GTTCCTCCTA TTTATTGGCC TTTTCCCTTG GCCCAGGGCC 4080 AAGGCCAGAT TTTCATGAAT AGGAAAGCTC TCCTGCAGAG AGATGTCAAA CATGCCCAGC 4140 TAGACAATGG CCATGAGCAA CAAAAGATCT GTGGGTGATC CTGTAGGAGT TTGATTCCCC 4200 CAGGCTGCTG TGGGCAGGGC TGTGTGGGTC TTTAGATTGT GTTGAGCAAT TGGTGGGTCT 4260 AGGAAGCTTG ATTTTCTGGA GTTCAGTGAC CTTGAATCTC AAGTTCTCTG TTTAGTCTTT 4320 CACTCTCGTG AATGGGTTCA GGTCTGAAGG CCTGTAATTT TTGGGTGCTG AGCCCCGAGT 4380 TCTGAGCTGA GAGTATCTAA GCTGAGAAGA GCACGGGGTC ACAGCCTTGG TAAGTCAGAG 4440 GCACAGTTCA GCCTCTGTTG GCCCTTGGAG CCAGCAGTTA GTTGTCCTCC CCAGATAGTT 4500 AATCGTGTTT GTGGTTTTCC CCCTTTAATG GGCCGTGAAG TCAGCAAACT CCCCACATGG 4560 TGGCTCCCTT TACTAAAGTT GAGTAGTGAA TTGTACAAGG AGTCTTGGAA ATTTTCAAAT 4620 ATTTCTCCAG ATTGAACTCA ACTCAGAATT CGTGTGGGAG GAAAGAGTAA GGATTTTAAT 4680 GGGGTTCACC TTTGACGTGA AGCAAGGCGG AAGACAGGAA AGCCACAGTG GGGAATAGCT 4740 TTGGGCGCTT TAGTAAGAAA GACATCTCTG CTTGATTATC TGGTAGTGTT CACCGCAGGC 4800 TCTTTGTGTG CGAGCTTGCT GCAGAGGCAG AGCTGAACAC GGAAAACACG CATGTAAACA 4860 GTCCAACATA AATCAGTGAG CATATGTATC AGAGAAAAAG AGACATATTC CCATGTAGAT 4920 GTGGTTTGAA GCTTTATTGA AGGCAGACAA TCTGAAGCAC GGCCAGGAAT AAACTAAGAG 4980 GAAGCAGACA GTTTTCGGTC ATTCATGGCC AGGAATAAAC AAAACTTAGT TTTTTTTTTA 5040 AGAAGGAGGA AGTATTAAAT CTCAAATAAG AGCAGGAACA GCATTTAGAA GGAGAAATAT 5100 AATATCTTGG AAAAAGCAAG CAGAACTAAT ATAGCTTATT TAAATGTGAG ATCCAAATCG 5160 TAGTAACAGG AAACCCTCCC ACTAAACTGG AATTTCCCCT AATTTTTGTG TAAGATCCAA 5220 ATAATTAAAA TGCACTCTAA TGGTTATTGA TGGCTCTATT TTCTTTCTTT CTTTCTTCTT 5280 CTTCTTTTTT TTTTTTTTAA AGAAATAGAC CTGAGTTCTC TTACTGGAGT AGAAATATAT 5340 GAACCTTCTT CAATTACCCA GGAAATTGGA AGCCTCTGGG TGGATATGGT CTTCCCTTAT 5400 TGCTTTCCTC TTCCCACATC ATTTTCAGTT AAAAAAATTA ACTGTTTCCA GCAGAGGGAT 5460 TCCTGTTAGA AACCTTCATC AGGTGAACTT GTACTGGGAA CCCTCATGCT TTCCCAGTCT 5520 GTCTGTGTCT CCCAAACAGA GCTGAAGTTG TAAACAAAGT GGAAAAACAT ATTTCTCACC 5580 CCAAAATTCT TAAAATTTCA CTTCTTGTGG AAAACACAAT TTCACAACAT CAATTTTTAA 5640 AATCTGTAAG AGCCACAGAA GGTGTGAAAG TAGCCAAACA GCCGGTCTAG AAATCCAAAA 5700 GCCAGGACTA ACGGGGGACA GAATGCTTTT TCCTCAAATC CAGGCAGGGA TGGGGAGCAT 5760 TCTCAGCATT AGGGCATTTA TGGACGCTAC AAGGGGAAAG GATGTATCTG AACGGTGGGG 5820 GTGATTTAGC GATGAATCGC CACGTTAATA GCACTACTGC CAAATCTTCA AATTTAGAGG 5880 CTCTGGTGAA AAATTAAACC GGTGGCAATT TTCAACGTTT GTAGCATCTG TTACCCTACA 5940 CTTCAGCACC CGGAGTCTGG ACAGCTCCGC AGGCCGCGCT CCGGAGGCAG CATGAGCTCT 6000 CATCAATCTA CTCATAGCCC TACTGTCAAC GGCAGCCAGA CTCAGGAGAG ATTTACTGAA 6060 AATCCTCCAA GACTTCCCTT TAAAAACAAA ACGACTTCCA CATTTAATGG TCTATCTGAA 6120 AGAACATACG CAAGAAATTA GGAGATCTAA ATTAAATTTA TTAATAGGAG AGCTTGATGA 6180 TGCTTAATTC CAGAGACCAG AGCTCCGATT GGTGAGGCTT GATGAAAAAG TAAAGAGAAA 6240 TCGTAATTGT ATAGTTAAAA ACATAACTTT TGTCATCCTC AAAATTCTAA AAATTCTTTA 6300 CCTGTCCTTG GGAAATGGGT GAAATTGAAA ACCATCAAAA CAATTGGACT TCTTAAAAAT 6360 TGGATTGTAT GAGTGAAAGG TGTTTATGAG AAGTCGATGA CTCCGGATCT TATCATCCAA 6420 GAGGACAGCA CAGAATAGTT AATATGTTCC TTGAGGGACT AGGATGCTGA CGTCTTTTTC 6480 TGATACCCGA TCATTACGTG ACTGAGAAAA AAAAAAAGGA AGTCATTTCA TGAATAAAAA 6540 TCGGAGCGCA ACAGTGCAAC AAAATATTCT GTACTTAAAG GCAACAGGCA GGCAGATGTT 6600 GACAAAGAGG GCTCTCCAAA AACCATGTTC GGATAGATTT TTGCGAACTG CACAGATAAA 6660 TAGGAGCAGA AGGCCGGTCA CCTCTGTAAC CAGCGGTAGC AGCAGCAGAA GCCGCAGCTT 6720 CAGAGGCAGC CGGAGAGACC TCGGAGCAGA GAAGGCGCCG CCGACCCTCG CGGCTGCCTG 6780 GCCCGCGGCT CCTACAAAGG CGGGCTAGCC GCCCGCCCTC TCCCTTGCCT TCCTCCCCTT 6840 CTTTTCTGAC TTTCCCTCTT TCCCTTAATC GCCTGCTTCT TCCTCCGGGT GGACTTACGG 6900 CCACCTTGCT CCTCCGCGCT TCACCTCATC GCCCCCTCTT TCTTTCTTCT GCCTCTCTCT 6960 CTGCGCCCCC TTCTCTCCGT GTCACGCTCC CTCCTGGTTC TGCGCGTCTA CAAACTTTTG 7020 AGCAGAACAC GAGCCTCGGC AAACGAGTCC CGCAGCTCCT CCTGCTGCTC CCGCTGGTTC 7080 CTGCGGCTTC TGCTCAGACA CCAACGCCAG ACGGCGATGC CTCTCGGGTG GTGACTCCAG 7140 CGCAGGAACT TGAAGAAGCG CTTTGCCCGC CGTCCTACCT GGCAGCTCTC CTGGCAGCGG 7200 GAGGAGTTGA AGGGTAAGGG AGGGAAAATC TTACCAAAGC GACCGGCTCA CTCGACTGCT 7260 GATTCTTTCG CTTGGCGTCG CGTCAGGGGA GTTAGCTTTC CTTCAGCCGG GTCTGGCTAG 7320 TTATTGGGCG CCGGGTAGAT GCATATATAT ATATTTTTTT CTAACTATAG CAAGCAAGAA 7380 GTGGCAGGGC GCGCACCGGC TGTCGCCAAG TGCTGTTCAA CTCAGGGAGC CGGGGCTTCG 7440 CTCCGTCCCT CCCCCGGCTT CCAGAGCTTT TTGGGGTTGG AGGGTGGGAG GCCAGGGGCG 7500 TTCTCACAGC TGTGTGTCCT CTTTCCCATC CTGCGCAGA ATG ACC ATG TGT AGC 7554 Met Thr Met Cys Ser 1 5 GGA GCG AGG CTG GCC CTG CTG GTC TAT GGG ATA ATC ATG CAC AGC AGC 7602 Gly Ala Arg Leu Ala Leu Leu Val Tyr Gly Ile Ile Met His Ser Ser 10 15 20 GTC TAC AGC TCA CCT GCC GCC GCC GGA CTC CGG TTC CCC GGG ATC AGG 7650 Val Tyr Ser Ser Pro Ala Ala Ala Gly Leu Arg Phe Pro Gly Ile Arg 25 30 35 TAGGTGCTGG CTGCCTGGCC CAAGCAGGAG CTGGGGCTCC CCAGGCACAG ACGCTTCCTC 7710 ACGGTCTCCT TCCTGCAGTC CTTTGGGTCC AGACTACTAG CATCGCCCTC TGCGCCCCCG 7770 GTGCGCCTCC GCCAGCCTCG GCTGGACAGC GGGTCCCCAT TCTAGCCGAG GGTCTGGCAG 7830 GCTCCGCGAC TGCTCGGACG CCTCCCCCAG CCCTAGGCAG CTCAGGGTCC CGGGTAGAGC 7890 CAGTGAGCTT CTGGCCGCTG GAGAACCCCC CCTCCCCCAA CCCGGCCCAC AGGATGGGGG 7950 CAGGGCACGG CCCCTAGCTT GGTTTCTTTT ACCTATTCTT GGGACGAGTT AGGAGAACTT 8010 CAGCTCTGGA GCCTGGCCGG GGGTTGAGCG TGAAGCTCCC TCGGACTTTG CTTTGTTACT 8070 GCTTGTTCTG GACTATCCGG GTGGGGTCTC TCTCTCTCCT CCACCCTTTC TTTTCATTTC 8130 ATTCCAATTC TTTCCCCTGA AGAGCTTTCT TTCAAGTGAT CCGTGTTCCA ACTGCATTTT 8190 GAATCCCAGG CTGTCTTGGG GGGCGTGCGG TGGGGAGGGT GTTGGCCCGG TGTGATTGAG 8250 GAAAAGCGAC TTAAGAGAGG GAAGAACAAG GACGAGACTG CGAAGGAGGG GGAAAAACAG 8310 GCGCAAAGGA GGAGGAAGGG AAAGCCAGCA GGCAGGCAGG ACCGGGAGAG CAGCCCTGCC 8370 TGGCCCGGGA TGGAGGAACC TTGGCTTTTT TCTTAACCCC GGGTTTCTAA CCCGCAGGCG 8430 CGGCCCAGGT TCCCGGAGGC AGCCCCAGAG TCGCGGGCCG ATGTGCCAGG CTGTGGATGA 8490 GCCCCGGGTA GGGGAGGGTT CGTACCAGCG GCGCCTGGGG CAGCGAGGAG CGCGCGTTCT 8550 GCCTGCGAAG CTGCCTTCTC CGAGCCCCGC CCAGGAACAT TAGCTCTGGG GGGCCGCTGA 8610 TCATTGATTT GGACGGAGAG ATGGGTTCTG GGTTCTGTAT TAGGATTCCA GCATCTGGGC 8670 TCGAGGCAGG GCAATATCCA GAAAGACCCC AGGGTTCGGG GTACCCGGGC CAGGGCTGAG 8730 GCGCATCGCC GAGCAAAGGC TGGGTGCGAG GCGTGCGGAA TGATGCGCTT GCCTTGCCCG 8790 GGCCTCTCCA AGGATGGAGA AAAGGCGAGT GAAGTAGCGA AGTACGACTC CAACCCCGCC 8850 CAGAGAGTGC TACTAGCGCT GGCTGCACGC CAAGTCTCTC CAGGGGTCCA AAGCGAGAGG 8910 GATTTGTTTT AACCCATCTC TACCCGTCCT GTGTCAAGAA CGGAGGCTGT AGAGGGCGAC 8970 TGCGAAGTCG CCAGGCACTC GCTGGATCTC GGTCCCCCTC CTCGTGCTCT GGGGTTGAGA 9030 TGGGGCACCG CCATCGATAA CAGATCAGCG CGAACTATTC GTTTAGTGGC CTTAAAACAC 9090 CCTGGTTTCA CCCTCAGCTA TTTTCAAGTT CCCGTGTGCC TGGCACTTTC TCCGTGCGAG 9150 AAGCACCGGA GGGTGCGGAC GCGCCACAGT CTGAGCCGCC GCCGAACTGG CTAAGTTTAG 9210 GGGCATTTAT TATTCATGTT CCTGCCAGAT CCTCGCCTGC CCAAAATAGA AACCGAGGTT 9270 CTCCGTGACC TACATCTGCT CGGGGAAGGG CTCCCCTGGG CTCGGAGGCT GGGGTGGGGG 9330 TGGCTGAGGA GTTGGCCCCC GCACGCCCCA CGCATCCTCT CCTTTGCTTT CTGGGCCTCC 9390 CCATTCGGGT CTTCGCGTGG GTCAGCGCCC GGTCTCCCAG GGCCTTTCTC GTCCCCGCCC 9450 GTTGCTGCTT TGGGGAGGCT CGGGAGCCAG GCGGGGAGGG GGGCGGTCCT TTTCCGTAGA 9510 CAGGTGTGCG CGATCGGCGG AGACGCCTCG GTTTCCCAGC GCTTGTTGAG GCCGTGGCCC 9570 GCAGGACGAC CCTTTACCCG CGAAGGGGGG GTGGGCGGGA CCGCCCGGCG GGGTAGGAGT 9630 GGTTGGGTGT CGTTGCCTCC TCCTTACCTC TGCTCCCACC CCCAGTCCTG GGAGAAGAGA 9690 CAATTCTCAG CGGAGGACTT TTATCACCTG TGAAAATCCG CGCGAGCCCC TTACTTTGGA 9750 TCCTCGCCGA GCTGGGGAGG AACTTGCACT GACCACACCT TCTGTCCCCG GCCACCCCGC 9810 AGG CCA GAG GAA GAG GCG TAC GGC GAG GAC GGA AAC CCG CTG CCA GAC 9858 Pro Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Pro Leu Pro Asp 40 45 50 TTC GGT GGC TCG GAG CCG CCG GGC GCA GGG AGC CCC GCC TCC GCG CCG 9906 Phe Gly Gly Ser Glu Pro Pro Gly Ala Gly Ser Pro Ala Ser Ala Pro 55 60 65 CGC GCC GCC GCC GCC TGG TAC CGC CCG GCC GGG AGA AGG TGAGATTCGC 9955 Arg Ala Ala Ala Ala Trp Tyr Arg Pro Ala Gly Arg Arg 70 75 80 GCGGCCTCGC GCACACCCGC GGCTGGGAGC TCGGGACTGC GGTGACGGGA GGGGCAGTGT 10015 GGTGACCCAC CCAGGATTTT TTTTTTTTTT CCCGTGAAAG TCCTCAAGCC TGTCCTCTCC 10075 CTGGCCCGAT CCTATTGCAG CGACAGAAAA TCAGCAGCGG GCGGGTCTGT GTGGACCTGA 10135 GGGCCGCGTG GGGACCGAGG GGGGCTGTGG CCCAAAGAGT GGCAGTGAGT GGCGTCAAGG 10195 AACCCACACT CCGCATCTGC CACTCCTAGA GCCGGGACTA GCTCCCGATC CTAGCAGTTG 10255 CTCTCGAGAT CATCCCGGGA GTTATTGGCG AGTTCTGGGC CTCTGGAGGT TTCCCTGTCA 10315 GCCTCCCCGG CCGCCGAGGG GGCGCGCGCC CAACAAGGGG GTCTCTAGCG GCCACCTGGG 10375 GACAGAAACA GTGACCCTGG GCGCGCACTT TGCCTCCCCG TTAGA GAT GTC GCC CAC 10432 Asp Val Ala His 85 GGG ATC CTT AAC GAG GCC TAC CGC AAA GTG CTG GAC CAG CTG TCC GCC 10480 Gly Ile Leu Asn Glu Ala Tyr Arg Lys Val Leu Asp Gln Leu Ser Ala 90 95 100 GGG AAG CAC CTG CAG TCG CTC GTG GCC CGG GGC GTG GGG TAAGAGTTTG 10529 Gly Lys His Leu Gln Ser Leu Val Ala Arg Gly Val Gly 105 110 TGGAAGGATT AACCTGCGCG CGCCGGGGTG GGTGCCTGTG CGGGGCGCGC GGGGCGGGCG 10589 GCGGTGGGTG CCCGTGGGGG CCAGGGTGAG TCTGCGCCCC TGGGTCTGGG GTGGGCATCC 10649 GCCACGGGTC GCAGTTGGAG ATTTTGAAGT GGCACTTTAA ATTTGCCCAG AGAGCTCTGG 10709 AAGAGGCAAA AAGGGAACGC GAGCCAGGGA GTTTGATCCG TTTTGAATGA AAAGAAAGAG 10769 AAACCAAACC AAACCTCTCA GTCATCCAAA ACCTTCAGGC TTCCAGGGAG GTTTTGCTAT 10829 AATTTTCTCT AAGCATGACT GTTTCTGGGG GAGGGGAAAG GGGTGGTTGT ATTTACTGAA 10889 AATTCAAATC GAAATAATAA ATGGCCAAAT GTGGACACTT ATGGACCCAA ACAGTTTTGC 10949 TCACGCCAGA GAAACTGAGA GCACAGGGCT TGCGTGAAGC CTATCTCGGC AGAAGGCAAC 11009 ATTCTAATAA AGCCCGTGGG AAAACAGATT ACATTTTCGC CATGAATAAG TCATGCAGTG 11069 AAAAATATTG CCTACAGCCT GTCGACTTAT ATTATTATCA CGTTTTTCAA CTCGGCGTGA 11129 GGAGGGAGAG GAGTGTTCAT ATTTGACTAG GAATTGCAGG ATCGATGCAA ACTCCAGGGC 11189 AGCAGCCAGA CTGGCATATG TAGGGCTCTC CGGTTACTTT CTCTGTATGT CGCGGGTGAG 11249 AGGAACAGCG AGGACAATTT AGCGCAAACA CACGAAGGGT CGGATCTCAA GGGGGCAGCG 11309 CTGGGAGAAA GGTTAGGCTT GAAGCGCGCG TCGCCTGCCC GGATCTTATC CCGGGCCCCC 11369 TCCGCAGGGT TTGGTGCCAG GAGATCCTGC GTGGGGAGGG GGGCATCGAG GGGCTGCCGT 11429 CTCGGCCCTC CCCACGGCTG CTTCCAGGCA GAGGCGGGCG ACGCGGTGGG CAGTGCGAGC 11489 CCCGGGCCCT CCCCGAAGGC TCCCGCGTGG GGTGGGGCCC GCCTGCTCCC CGCGGCGATT 11549 GAACCTGTGT CTCCCGCCCC GCCACCCTCT TCCCGACCCC TTTGCTTGCA GT GGG AGC 11607 Gly Ser 115 CTC GGC GGC GGC GCG GGG GAC GAC GCG GAG CCG CTC TCC AAG CGC CAC 11655 Leu Gly Gly Gly Ala Gly Asp Asp Ala Glu Pro Leu Ser Lys Arg His 120 125 130 TCG GAC GGG ATC TTC ACG GAC AGC TAC AGC CGC TAC CGG AAA CAA ATG 11703 Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln Met 135 140 145 GCT GTC AAG AAA TAC TTG GCG GCC GTC CTA GGG AAG AGG TAT AAA CAA 11751 Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Ler Gly Lys Arg Tyr Lys Gln 150 155 160 AGG GTT AAA AAC AAA GGA CGC CGA ATA GCT TAT TTG TAGCGATGGG 11797 Arg Val Lys Asn Lys Gly Arg Arg Ile Ala Tyr Leu* 165 170 175 TTACCAGCTA CCCTGTGTAT ACAGCCCTGA CGCAATGAAA AGTCGTTTTC CAAACTGACT 11857 CAACAGTCAT CGCTCGTGTG TTCTATCCAA ACATGTATTT ATGTAATGAA GTAAAGCCAT 11917 TAAATGAATA TTTTGATAAT AATATTGTTT TTCTTTCTAC AAAGCACTAG AGAATGCACA 11977 GATATACTTT GTGGACCAAT TATTGATATA TATTATAAAT ATATATAAAG AATATATATA 12037 TATATATATA TATAAAGTAT AGAGAGAAGT TCATACAAAG CGTGCACAAG GATTGAAAAT 12097 TCGCCCGAGC TGTTTATGTT TTTATAAAAA TAAATAGAAA AGTAGACAAT CATTGTTTTG 12157 AATATTACTC CTATTTTTGT AAACTGGAAT TAAAAGGATA GTATTTTTAT CCATGACAGG 12217 CCTGAAGATA TTACTACTTA CCATTTGCTA CTGTACATAA ACAATGATGC CCTGCTCCAG 12277 GGAGATTTTG AGGTAAAGAT ATGGAGAATT GCTGAAGGGC ATTCTTTCCC AGTGAGTCTC 12337 TGGGGCAGGC TGCTTCAATC CCAGCCTAAC TCAACTGGGC TCTGTCCCCC TGGTTGGGTG 12397 GCAATTCCAA TATTTCTGCT TTCTTTGATT CTCCTTTTAT GTGTAGTTGT CTCTCTTCAG 12457 ACTCTCAGCC CAGAAGAAAA TTCTCCTGAT AAAACAACAG CTCGATCCAA ATTGTGCTTC 12517 TCCCCAGAAT TCACGCCTCT CCCTAGGAGA AGAGTTGAGG AACTGTACAG AAAAGGGCGG 12577 CTTCGTTAGA CCGCTCTCTT TTCTGTACTT CCTGAGTGGC CAGGGAATCT AATATCCCCA 12637 AATTAGGGCA ATTGGAACAA AGTGAAGGAC ATAGAGGTAT ATTGGAAGAG GCAGAGCCTG 12697 AGGTGGTAGG AGGACGACCC TGGAAATGGA CTGGTTTGAG ATTGCCCCAG GTCTGGGAAG 12757 CTGAGGGCAA ATCCAGTCCC AGTGGTCCTG ACTTTGGGCG CTGGGTATTG GAAATGGATG 12817 CAAAGTACAA TGTGTTTTTC TCCAGTGCTG TCCATGCTTC TCATCTTGTG AAATGGCCAG 12877 GATCCTCTCC TTTGAAACCT GCTCTGTAGG AGCTACCCTT TTCCTTTGTG GTTTTATGGA 12937 GACCTCTCCT TCCTACCCTC CTGCACTGTT TAAGTACTGT TTACCATTTT TCATTCACTT 12997 CTCTTAAACT TGTGAATGCT TCTCACTTTT TTTTTTGTTT GATGCAGGCA CTTATTGTAA 13057 ATTTTAGAAA CCCCTCTGTA GCCACTAGTA AGTAATTATG CACTAAATAT GAACCCTTTG 13117 TTTCTTGTTT ATTGAGTTTG TAGGTAAAAT GTATTTTTCT ACATTATTGC TTATTGCTTA 13177 GTAAAATTTA TTTCATAAAA CCAACCTTTG TCATATTAGA ATGTGTAGTG TTCACATGTT 13237 GCTCAGTTTT GCTAACTGAT AAATCATTTA ATCCTCTTCT TCATATGTAT GAGTACTATC 13297 TTATATCTGT GGTCAAGAGT GAGGTAAGCA AGCTCCAACA GACCCTGAGA ACCTACGCTT 13357 GTATCCTTTC TTTGGCTAAA GAAAGCATGT CTGTTTCCTG TCAATTCTTT GAACATACAG 13417 AGTAATCTTT ATAAACAAAA GAACCTTCAC CCAGCAATCA GATCGAGCAG CAACAGACAA 13477 ACCAGCCAGC CAATCTCCCA AATTTCAGGC ACAAGTTTAT TTTTTTTTTT TTTATGTTTT 13537 GAAAAAAGAA GATGAAGAAG AAGAAAAAAA AAAGAACAAG GAAAGATTAA ACGTTAGCTT 13597 GTAAAGTTTA AAGGACCTTT CCTTTTCCTT TACGGATTTG ATCAGTATGA AGTCATAAAT 13657 CAAAGAAAAC AGAATTGGAT TTGCATTCCC AGGCGGGATG GATGCTGCCA GGAGATCACA 13717 TTGCAAATAG TGAAAACAGA GGCATTCGGT CTATGCCTGA GTCCTGTGTA TAGGATCAAT 13777 CTTCCTTTAA TTCCGCAGTC TCCTCAGGCA ATGTGACACG GGATGCAGTT TGCAGCTTTA 13837 GTGCCTTTCT TCGCCTTTTA AATTGCCACG AATCACAGAT GGCTATTTAG TGGCCCTACA 13897 ATGCTGCAAC ACATCAGCTT GCATTTTAGT CTTAATTATT TGTTTCTTGG ATAATGGGCA 13957 GAGTTTTCTG TATTTGTATC GACTGTTAGT GGTGAAATAG GGCTCTAGTT AACCTTTTAT 14017 TTATGAAGTC TAATTTAGTG TTCCCGTGGC TAGTTGCAAG CATTTTACAG TGATCACCCA 14077 GTTTAATCTT TTGTATACTT TTTAGAAATG CCAAGAGCCT TACTAAACTG AAGCAGATTT 14137 ATGATATAGT GATAATTTAG GTAGATGTTA GTCTTGAAGC TCTTATTTTG TGTGCAACTG 14197 ATTATAAAAA CACCTTAACC AAGTATTATT ACACACATGA TATCTATAAC TAGGACTTTG 14257 ATAACTGTTA TATAAAGTGT GTAAAATTTG TATGAATAAA TTTTTGTAAA CAATGCAACT 14317 TGGTCTAATG TTTGGGAAAA AAGACATTCA GGAAATAATT ACTTTAAAAT CTCTTAAAGT 14377 ATTATATTTC TTTAGCAACC ATAAGATTTT TTTACGTCTG GAATATATAT CTATCTAAGC 14437 ACCCTTGTAT TTTCATGAAC TGCACTTTAA TAATTGATGG GCAACTGGAT TCTGCTAAAA 14497 ATTTAAAGTA GCTACTCAGA TGGAGATGCC TAAGAAGGTT TTAAGCTCAT AAACAGGCAT 14557 GATGTTGCAA CATTATAAGA CACACAATTT AGATTAATTT CCATCCCCTA GTGTGTATAT 14617 ACTTTGCTCA ATATTCAGAA AGTTACTAGG TAGTAGTGGG AGACAATGCT GGAGCATTAG 14677 TTACACATCT AAAATAGCAA TCTAACATTG TTCTTTTATT TTTTATTTTA GTGGCCAGGT 14737 CTCACTATGT TGCCCAGGCT GGTCTTGCTC AAGCGATCCT CCCACCTCAG CCTCCCAAAG 14797 TGCTGGGATT ACAGGCGTGA GCCACCACAC CCAGCCTAAA ATAGGGATCT AACATTGTTC 14857 TTATACAAGT AACTCTGCAG ACTAAACTTG TCTTGATAAA ATTTTGTATA AAATGATCTA 14917 AATAATCAGT TTTTGGAGGT TTTAAAATGT ATTTAGAGAC ATACAAACTA CTGTCTCTGA 14977 TTAAAATGCT TTAGGTAGAA GGAACGTGAA CATGAGTAAG TAAAGAGTTA ATTAGATGCC 15037 TTTAAAAGAA AATGTACTTT GAAGTCCAGG AAGAAACACA AGAAGTCATT TGTGGATTGT 15097 ATGCTTTCTT AGTTCATATT TACAAACTTT AGGGCAAAGC TTTCATACGA AATTCCTTCA 15157 AATTCCGTAG TGGTGTGTGT TTTGGCACCT TTGACTATTT CTGGCTTAGA AAATGTATAG 15217 AAAGTCACAC AATAATTGAC ATACCATTTA ATTTAAAATG CCAGGGTTTC ATCCTAAAAA 15277 TTAATGGTCT CAATTAGTAA ATCAATAAAT ATGTTACGAT AGAATTAAAG GATGAGTGAG 15337 GATTCTAAAA TTATCTTCAG AATTTAGCTC AGTATTTAAG GCCTAGAATC AAATAGGGAG 15397 GAGCCCACAG TCTAGAAATC CCGTTTGTAG TCAATGAAAA AATGAATCCA GTACAGTTCA 15457 TATTTGCATT TGATTTTATT GGATAAGGAA TTTTTCTTCT CCATCTTTAA CTGCCCCTCT 15517 TTGTCCTTGA AGACATAGTG TGGTAGATGA AAAAATGAAG AAGACTTTAT TCGGTTGGGG 15577 CTAGGCTAAT GACTTGTCAA GAACATAAAG ATAAACCCCA GACTTGGCTG ACTTCAAGTG 15637 AATTTCATGT ATTTAGCAAC TTGCCATATT ATCTTCGGTG ATAACTCAAA TTACATCTTT 15697 TTAAAGGCAG ACTTGATACA TATGGGTATT CAAGAAGCTG TAATAGGTGC CTTAATGCTG 15757 TTAGGGCGGA GAACACACTT ATTCAATACA ATGCACACTT ATTGAACACA TGAAATGGGC 15817 CACCGCACTG GTCGAGAGAG CTTGACTAAC ACCTGGGAGC TCAGGTAGTA TTTTTTTCAG 15877 AATGTTTTTC TGAAATGTGA TCATCTTTGG GGCGGGGGGA GCTTAAAAAT GCAAAATTGT 15937 AGGGCTCTGC CAGATCCAGT GAATCTGCAT TTTAAATAAA AACCCTAGAT TACTGTGCAC 15997 TAAAATTTGA GACTGCCTAG ATTTAGAATT GGTGACATAT GTAGGCATAC ATATGTGCTG 16057 GTCTGAATGT TTTTTTCATA TGAAATAAGC AAAAGGTCAT GTTACCTGCA TACAGTAATA 16117 AATACATAAC TGTGCCATAT TCTTCCAAGA TATCTGGTCA TTAAGCTCTT TGACAATTTC 16177 AGTATTTCCT TTAGGTCACT AAAACTACTA GTTAGCATTA TTTTACTTGT ACAGTCTGGT 16237 TGGACCTCTC CTACAGGAGC TTGTGGAAGG AGAGTGATCC TCTAAGTTGG GTCCAAAATA 16297 TTCAATCACA GGACTAAGAG ATTATGGCTA TAATGAGGAG AACTTGTGCA GCTAGCTAGC 16357 CATAATTCTG GGGATCCAGA AGTCAACTTC CAGTTGCATT ATATCCCAAT TTGGTTTGAA 16417 TGTATTTACT GCTCCCCAAC TGTTTACATG ATGGTTTCTC TTGGATGGCT CACTATGACC 16477 TTCAACCCAA CCCTACTGTT CACATGATCA CAAGATTGGA AGCCAAGATC AAGTCATCCC 16537 TCTTCTCTTT TGTTGCCACT CTTTTTTGTA GAAGGGAGAT GCCAGCTGCC CCTGCTGCTG 16597 CAGATTGCAT CACTGCTGGA TTCTTACATT GGTTTGTAGT TGGTCATCCT GGTCACTTCC 16657 CCTGCAACCA CATAGTTTTA GCTCCATCTT AGTATCATGT CCCTCTGATC AGATGTTCCA 16717 GAGTAGCTTC CATTGTCAAA GGGTTAAAGG GTTTAAGGTA ATCAGTAGTC AATTTTACCT 16777 CTCTGTTCTT CAACACGATC CTTCCTCTTT TTTTTGTTTT GAGAAAGGGT CTTACTCTGT 16837 TGCCCAGGCT GGAGTGCAGT GGCACGATCT CGGCTCACTG CAACCTCTGC CTCCCGGGTT 16897 TAAGCGATTC TCCTGTCTCA ACCTCCCGAG TAGCTGGGAT TACAGGTGCA TGCCAACGCG 16957 CCCGGCTAAT TTTTGTATTT TTAGTAGAGA CGGGGTTTCA CTGTGTTGGC CAGGCTGGTC 17017 TTGGACTCTT GTCCCCAAAT GATC 17041

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒトＰＡＣＡＰ３８ゲノムＤＮＡの簡単な制限
酵素地図である。

【図２】ヒトＰＡＣＡＰ３８ゲノムＤＮＡの塩基配列お
よびそれより推定されるヒトＰＡＣＡＰ３８前駆体や成
熟ペプチドのアミノ酸配列を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 8214−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:125）

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】単離されたヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤ
   ＮＡ。
2. 【請求項２】ヒトＰＡＣＡＰ３８をコードする塩基配列
   を持つＤＮＡを含有する請求項１記載のヒトＰＡＣＡＰ
   ３８のゲノムＤＮＡ。
3. 【請求項３】図２記載の塩基を有するものである請求項
   １記載のヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡ。
4. 【請求項４】図２記載の１７６個のアミノ酸から成るＰ
   ＡＣＡＰ３８の前駆体蛋白をコードする４個のエクソン
   を有する請求項１記載のヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤ
   ＮＡ。
5. 【請求項５】５’領域にプロモーター領域を有する請求
   項１記載のヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡ。
6. 【請求項６】プロモーター領域内に認識配列を有する請
   求項１記載のヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡ。
7. 【請求項７】認識配列がサイクリックＡＭＰレスポンス
   エレメント（ＣＲＥ）もしくは12-Ｏ-テトラデカノイル
   ホルボール13-アセテート（ＴＰＡ）のものである請求
   項６記載のヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡ。
8. 【請求項８】単離されたヒトＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋白
   質。
9. 【請求項９】図２で示される１７６個までのアミノ酸残
   基を含有するアミノ酸配列を有する請求項８記載のヒト
   ＰＡＣＡＰ３８前駆体蛋白質。
10. 【請求項１０】ヒトＰＡＣＡＰ３８のゲノムＤＮＡを保
    持する形質転換体。
11. 【請求項１１】ヒトＰＡＣＡＰ３８をコードするＤＮＡ
    を保持する形質転換体。
12. 【請求項１２】宿主が動物細胞である請求項10もしくは
    請求項11記載の形質転換体。
13. 【請求項１３】請求項１０もしくは１１記載の形質転換
    体を培養し、培養物中に成熟ＰＡＣＡＰ３８を生成蓄積
    せしめ、これを採取することを特徴とする成熟ＰＡＣＡ
    Ｐ３８蛋白質の製造方法。
14. 【請求項１４】請求項８もしくは９記載のヒトＰＡＣＡ
    Ｐ３８前駆体蛋白質を含有する医薬組成物。