JPH05227990A - フェノールエーテル誘導体の酵素的製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 １−［４−［２−（シクロプロピルメトキ
シ）エトキシ］フェノキシ］−３−［（１−メチルエチ
ル）アミノ］プロパン−２−オールの光学的に純粋な
（Ｒ)(＋）異性体および（Ｓ)(−）異性体の、酵素を用
いる製造法の提供。 【構成】 ４−［２−（シクロプロピルメトキシ）エト
キシ］フェノールをエピクロロヒドリンと縮合させた
後、そのエポキシ官能基を濃塩酸中で開裂させて、１−
クロロ−３−［４−［２−（シクロプロピルメトキシ）
エトキシ］フェノキシ］プロパン−２−オール（２）に
変換し、この中間体（２）をアシル化した後立体特異的
なリパーゼ触媒エステル分解反応に付すか、もしくは直
接立体特異的なリパーゼ触媒エステル化に付し、その生
成物を分離し、光学活性中間体（２）およびその酢酸エ
ステル（３）を得て、光学活性中間体（２）、並びに、
次の反応系中で酢酸エステル（３）から生成する光学活
性中間体（２）を、対応するエポキシドに変換し、イソ
プロピルアミンと反応させて光学的に純粋な目的物質を
得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明はフェノールエーテル誘導体の酵素
的な製造方法に関する。

【０００２】特願平３−９６９５１（平成３年４月２６
日出願）において本出願人は、式:

【化１】 で表される１−［４−［２−（シクロプロピルメトキ
シ）エトキシ］フェノキシ］−３−［（メチルエチル）
アミノ］プロパン−２−オールまたはシクロプロロール
（cicloprolol）の（Ｒ)(＋）および（Ｓ)(−）鏡像異
性体、それらの医薬的に許容され得る塩、それらの製
造、並びに、それらの治療への適用について記述した。

【０００３】本発明は、シクロプロロールの鏡像異性体
を、酵素による立体特異的な合成によって製造する方法
を提供するものである。

【０００４】本発明の酵素的立体特異的合成法は、１−
クロロ−３−［４−［２−（シクロプロピルメトキシ）
エトキシ］フェノキシ］プロパン−２−オールおよびそ
のＯ−酢酸エステルの分割に依存する。この分割は、例
えばキャンディダ・シリンドリカエ（Candida cylindri
cae）、ムコウ・ヤバニカス（Mucor javanicus）、ムコ
ウ・ミエヘイ（Mucor miehei）、あるいはシュードモナ
ス・フルオレセンス（Pseudomonas fluorescens）など
由来のリパーゼによって触媒される。最後の酵素はキラ
ルなシクロプロロールを高光学純度（＞９６％）で与え
るので、特に重要である。

【０００５】これらのリパーゼを担体上に固定化するこ
ともできる。

【０００６】次に示す第１工程：

【化２】 では、４−［２−（シクロプロピルメトキシ）エトキ
シ］フェノールを、塩基性媒質中でエピクロロヒドリン
と縮合させることにより、［［４−［２−（シクロプロ
ピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］メチル］オキシ
ラン（１）および１−クロロ−３−［４−［２−（シク
ロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］プロパン
−２−オール（２）の混合物を得る。この混合物を濃塩
酸で処理すると化合物（２）のみが得られる。

【０００７】第２工程では、 １．次の反応式：

【化３】 に示すように、化合物（２）を従来の方法でアシル化す
ることにより、１−クロロ−３−［４−［２−（シクロ
プロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］プロパン−
２−イル・アセテート（３）を得る。次いで、次の反応
式：

【化４】 で示されるように、シュードモナス・フルオレセンス由
来のリパーゼを用いてリパーゼ触媒脱アシル化を実行す
る。この加水分解反応を、ジイソプロピルエーテル、ｔ
−ブチルエーテル、トルエンなどの有機溶媒中、あるい
は、ジクロロメタンやクロロホルムなどの塩素化溶媒中
で行う。これにより（Ｓ）−１−クロロ−３−［４−
［２−（シクロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキ
シ］プロパン−２−オール（２（Ｓ)）および（Ｒ）−
１−クロロ−３−［４−［２−（シクロプロピルメトキ
シ）エトキシ］フェノキシ］プロパン−２−イル・アセ
テート（３（Ｒ)）が得られ、これらはシリカゲルカラ
ムでのクロマトグラフィーによって、もしくは反応式：

【化５】 に示すように、トリエチルアミンの存在下、無水コハク
酸で処理することによって、分離することができる。も
しくは、 ２．次の反応式：

【化６】 に示すように、シュードモナス・フルオレセンス由来の
リパーゼを用いて化合物（２）のアシル化を実行する。
このアシル化を、ジイソプロピルエーテル、ｔ−ブチル
エーテル、トルエンなどの有機溶媒中、あるいは、ジク
ロロメタンやクロロホルムなどの塩素化溶媒中で、酢酸
ビニル、酢酸イソプロペニル、酢酸エチル、あるいは無
水酢酸などのアシル化試薬の存在下で行う。（Ｒ）−１
−クロロ−３−［４−［２−（シクロプロピルメトキ
シ）エトキシ］フェノキシ］プロパン−２−オール（２
（Ｒ)）および（Ｓ）−１−クロロ−３−［４−［２−
（シクロプロピルメトキシエトキシ］フェノキシ］プロ
パン−２−イル・アセテート（３（Ｓ)）を、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーによって分離する。

【０００８】第３工程で、化合物（２（Ｒ)）を、次の
反応式：

【化７】 に従って、（Ｓ）−シクロプロロールに変換する。化合
物（２（Ｒ)）を、まず塩基性媒質中で対応するエポキ
シドに変換する。エポキシドをイソプロピルアミンで処
理すると（Ｓ）−シクロプロロールが得られる。

【０００９】これと同じ反応によって化合物（２
（Ｓ)）から（Ｒ）−シクロプロロールが得られる。酢
酸エステル（３（Ｒ)）および（３（Ｓ)）については、
上記のエポキシド生成の前に、系内での（in situ）加
水分解を実行する。

【００１０】以下の実施例は本発明の化合物の製造を例
示するものである。複数の分析によりその構造が確認さ
れている。

【００１１】実施例１：（Ｒ）−１−［４−［２−（シ
クロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］−３−
［（メチルエチル）アミノ］プロパン−２−オールまた
は（Ｒ）−シクロプロロール １．１ １−クロロ−３−［４−［２−（シクロプロピ
ルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］プロパン−２−オ
ール 水５００ｍｌ中に懸濁した４−［２−（シクロプロピル
メトキシ）エトキシ］フェノール１０４ｇ（０．５ｍｏ
ｌ）に、水酸化ナトリウム２１ｇ（０．５２５ｍｏｌ）
の水（２５０ｍｌ）溶液を加えた。この混合物を２５℃
で１．５時間撹拌した。クロロメチルオキシラン（エピ
クロロヒドリン）１４１ｍｌ（１．８ｍｏｌ）を導入
し、撹拌を終夜続けた。エピクロロヒドリン５０ｍｌ
（０．６４ｍｏｌ）を加えた後、その混合物を５０℃に
４時間加熱した。この反応の終了時にその混合物をデカ
ントし、その下層をジクロロメタンで希釈した。これを
５％水酸化ナトリウム溶液で洗浄し、次いで飽和食塩溶
液で洗浄した。これを硫酸マグネシウムで乾燥して、減
圧下で溶媒を留去することにより、化合物（１）および
（２）の混合物である黒色油状物１８７ｇを得た。

【００１２】この粗混合物を３７％塩酸３５０ｍｌ中に
懸濁し、２５℃で１時間撹拌し、これをジクロロメタン
で繰り返し抽出した。その有機層を合わせて、中性にな
るまで水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下
で溶媒を留去することにより、油状の化合物（２）１９
４ｇを得た。

【００１３】化合物（２）の一部をシリカゲルクロマト
グラフィーにかけて、ジクロロメタン／メタノール（９
５／５）混合液で溶出させることにより、白色粉末の化
合物（２）を得た。 融点：３５℃。

【００１４】１．２ １−クロロ−３−［４−［２−
（シクロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］プ
ロパン−２−イル・アセテート 化合物（２）１．５ｇ（５ｍｍｏｌ）、無水酢酸１．０
８７ｍｌ、およびトリエチルアミン１．２８４ｍｌのジ
クロロメタン（１２ｍｌ）溶液を２５℃で２０時間撹拌
した。この反応の終了時に、これを冷状態で加水分解
し、ジクロロメタンで抽出した。その水層を捨て、有機
層を順次、１０％塩酸溶液、炭酸水素ナトリウム溶液、
飽和食塩溶液で洗浄した。これを硫酸マグネシウムで乾
燥し、減圧下で溶媒を留去することにより、無色油状の
化合物（３）１．８８ｇを得た（定量的収率）。

【００１５】１．３ （Ｓ）−１−クロロ−３−［４−
［２−（シクロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキ
シ］プロパン−２−オール 化合物（３）０．６８４ｇ（２ｍｍｏｌ）を、０．０１
Ｍ ＫＨ₂ＰＯ₄緩衝液（ｐＨ７．３）４ｍｌおよびジイ
ソプロピリックエーテル４ｍｌの混合液に溶解した。シ
ュードモナス・フルオレセンス由来のリパーゼ０．０４
ｇを加え、その反応を定ｐＨ装置（ｐＨスタット装置）
で追跡した。１Ｍ水酸化ナトリウム溶液をゆっくり添加
することによってｐＨを維持した。７時間後、０．５当
量の水酸化ナトリウムが消費され、その混合物をジエチ
リックエーテルで抽出した。その有機層を飽和食塩溶液
で洗浄した。これを硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下
で溶媒を留去することにより、化合物（２（Ｓ)）およ
び（３（Ｒ)）の混合物０．６ｇを得た。

【００１６】上記の２つの化合物を、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーにかけてシクロヘキサン／酢酸エチ
ル（３／１）混合液で溶出させることによって分離し
た。これにより、無色油状の化合物（２（Ｓ)）０．２
７０ｇおよび無色油状の化合物（３（Ｒ)）０．２８８
ｇが得られた。それぞれのエナンチオマー過剰率は９
６．６％および９９．７％であった。 化合物（２（Ｓ)）：［α］²⁰ _D＝＋０．４２°（ｃ＝
５；クロロホルム） 化合物（３（Ｒ)）：［α］²⁰ _D＝−２３．２°（ｃ＝
１；クロロホルム）

【００１７】１．４ （Ｒ）−１−［４−［２−（シク
ロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］−３−
［（１−メチルエチル）アミノ］プロパン−２−オール
または（Ｒ）−シクロプロロール 化合物（２（Ｓ)）０．０８４ｇをジクロロメタン２ｍ
ｌの溶解した。３０％水酸化ナトリウム２ｍｌを加え、
その混合物を２０℃で終夜撹拌した。これをジクロロメ
タンで抽出し、乾燥し、減圧下で溶媒を留去することに
より、対応するエポキシド０．０７６ｇを得て、これを
無水エタノール０．５ｍｌに溶解した。無水エタノール
１ｍｌ中のイソプロピルアミン０．１２ｍｌを加えて、
その混合物を８０℃で８０時間撹拌した。これを蒸発乾
固することにより、油状塩基である（Ｒ）−シクロプロ
ロール０．０８ｇを得た。この物質のエナンチオマー過
剰率は９４％であった。

【００１８】実施例２：（Ｒ）−１−クロロ−３−［４
−［２−（シクロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノ
キシ］プロパン−２−オール（２（Ｒ)）および（Ｓ）
−１−クロロ−３−［４−［２−（シクロプロピルメト
キシ）エトキシ］フェノキシ］プロパン−２−イル・ア
セテート（３（Ｓ)） 精製した化合物（２）０．６ｇ（２ｍｍｏｌ）をジイソ
プロピリックエーテル２４ｍｌに溶解して、シュードモ
ナス・フルオレセンス由来のリパーゼ０．０８ｇおよび
酢酸イソプロペニル０．４４ｍｌ（５ｍｍｏｌ）と共に
２０℃で６日間撹拌した。目的の変換が達成されたとき
に、濾過によって酵素を除去し、減圧下で溶媒を留去し
た。化合物（２（Ｒ)）および（３（Ｓ)）の混合物０．
７１ｇが得られ、これをシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーによって分離した。これにより、無色油状の化合
物（２（Ｒ)）０．２７９ｇおよび無色油状の化合物
（３（Ｓ)）０．３５０ｇが得られた。それぞれのエナ
ンチオマー過剰率は９９．７％および９２．３％であっ
た。 化合物（２（Ｒ)）：［α］²⁰ _D＝−０．４２°（ｃ＝
５；クロロホルム） 化合物（３（Ｓ)）：［α］²⁰ _D＝＋２０．５４°(ｃ＝
１.４８；クロロホルム)

【００１９】実施例３：（Ｓ）−１−［４−［２−（シ
クロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］−３−
［（１−メチルエチル）アミノ］プロパン−２−オール
または（Ｓ）−シクロプロロール ３．１ 化合物（２（Ｒ)）および（３（Ｓ)）の分離 ジクロロメタン２５ｍｌに溶解した化合物（２（Ｒ)）
および（３（Ｓ)）の混合物１ｇに、無水コハク酸０．
４５ｇ（４．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン０．
２２ｍｌを加えた。この混合物を、３Åモレキュラーシ
ーブの存在下、２０℃で９６時間撹拌した。溶媒を留去
し、その残渣をジエチリックエーテル２５ｍｌおよび水
１０ｍｌ中に入れた。４Ｍ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ
を９に調節し、その混合物を撹拌してデカントした。そ
の有機層を水１０ｍｌで洗浄した後、飽和食塩溶液で洗
浄した。これを硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で溶
媒を留去することにより、化合物（３（Ｒ)）０．４１
３ｍｇを得た。

【００２０】３．２ （Ｓ）−１−［４−［２−（シク
ロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］−３−
［（１−メチルエチル）アミノ］プロパン−２−オール
または（Ｓ）−シクロプロロール ヘキサン１０ｍｌおよび水５ｍｌの混合液に溶解した化
合物（３（Ｒ)）０．２１ｇに、３０％水酸化ナトリウ
ム水溶液０．５ｍｌを加えた。この混合物を２０℃で終
夜撹拌し、これをジエチリックエーテルで抽出した。そ
の有機層を飽和食塩水で洗浄した。これを硫酸マグネシ
ウムで乾燥して減圧下で溶媒を留去することにより、対
応するエポキシド０．１６１ｇ（収率９９％）を得た。

【００２１】このエポキシドを無水エタノール１．３ｍ
ｌに溶解し、無水エタノール２．４ｍｌ中のイソプロピ
ルアミン０．２８５ｍｌを加えた。この混合物をアルゴ
ン雰囲気下、４０℃で８時間撹拌した。溶媒を留去した
後、その残渣をエーテル中に入れた。１０％塩酸溶液で
抽出することにより、シクロプロロールが塩として得ら
れた。その水層を３０％水酸化ナトリウム溶液でアルカ
リ性にし、ジクロロメタンで抽出した。その有機層を硫
酸マグネシウムで乾燥して溶媒を留去することにより、
塩基である（Ｓ）−シクロプロロール１４１ｍｇを得
た。

【００２２】対応する塩酸塩を以下のようにして得た：
上記の塩基をイソプロパノール中の１Ｎ塩酸溶液４．３
８ｍｌに溶解した。溶媒を留去した後、生成物をジエチ
リックエーテル中で結晶化させることにより、（Ｓ）−
シクロプロロール塩酸塩０．１２７ｇを得た。この物質
のエナンチオマー過剰率は９５％であった。 融点：７４〜７５℃。 ［α］²⁰ _D＝−１３．５℃（ｃ＝１；水）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ギ・ロシー フランス78960ボワザン・ル・ブルトノー、 リュ・ポール・ヴェルレーヌ10番

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ４−［２−（シクロプロピルメトキシ）
   エトキシ］フェノールをエピクロロヒドリンと塩基性媒
   質中で縮合させることによって得られる混合物を濃塩酸
   で処理することにより１−クロロ−３−［４−［２−
   （シクロプロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］プ
   ロパン−２−オールを得、 ａ）この化合物を従来の方法でアシル化して１−クロロ
   −３−［４−［２−（シクロプロピルメトキシ）エトキ
   シ］フェノキシ］プロパン−２−イル・アセテートに変
   換し、これをリパーゼの存在下で加水分解することによ
   って、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、あ
   るいはトリエチルアミンの存在下無水コハク酸で処理す
   ることにより分離することができる（Ｓ）−１−クロロ
   −３−［４−［２−（シクロプロピルメトキシ）エトキ
   シ］フェノキシ］プロパン−２−オール（２（Ｓ)）お
   よび（Ｒ）−１−クロロ−３−［４−［２−（シクロプ
   ロピルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］プロパン−２
   −イル・アセテート（３（Ｒ)）の混合物を得るか；も
   しくは、 ｂ）この化合物をアシル化試薬の存在下でリパーゼを用
   いてアシル化することにより、（Ｒ）−１−クロロ−３
   −［４−［２−（シクロプロピルメトキシ）エトキシ］
   フェノキシ］プロパン−２−オール（２（Ｒ)）および
   （Ｓ）−１−クロロ−３−［４−［２−（シクロプロピ
   ルメトキシ）エトキシ］フェノキシ］プロパン−２−イ
   ル・アセテート（３（Ｓ)）に変換し、これをシリカゲ
   ルクロマトグラフィーによって分離した後；塩基性媒質
   中で、化合物（２（Ｒ)）および化合物（２（Ｓ)）の対
   応するエポキシドを製造し、これらをイソプロピルアミ
   ンと反応させることにより、それぞれを（Ｓ）−シクロ
   プロロールおよび（Ｒ）−シクロプロロールに変換する
   と共に、化合物（３（Ｒ)）および化合物（３（Ｓ)）を
   加水分解した後、塩基性媒質中で対応するエポキシドを
   製造し、これらをイソプロピルアミンと反応させること
   により、それぞれを（Ｓ）−シクロプロロールおよび
   （Ｒ）−シクロプロロールに変換することからなる、
   （Ｓ）−（−）−１−［４−［２−（シクロプロピルメ
   トキシ）エトキシ］フェノキシ］−３−［（１−メチル
   エチル）アミノ］プロパン−２−オールおよび（Ｒ）−
   （＋）−１−［４−［２−（シクロプロピルメトキシ）
   エトキシ］フェノキシ］−３−［（１−メチルエチル）
   アミノ］プロパン−２−オールの酵素的製造方法。
2. 【請求項２】 該リパーゼがPseudomonas fluorescens
   由来のリパーゼであることを特徴とする請求項１の方
   法。