JPH0524455B2 - - Google Patents
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- JPH0524455B2 JPH0524455B2 JP58250168A JP25016883A JPH0524455B2 JP H0524455 B2 JPH0524455 B2 JP H0524455B2 JP 58250168 A JP58250168 A JP 58250168A JP 25016883 A JP25016883 A JP 25016883A JP H0524455 B2 JPH0524455 B2 JP H0524455B2
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Description
(イ) 産業上の利用分野
この発明は等速電気泳動分析法に関し、特にタ
ーミナル液の利用技術の改良に関する。 (ロ) 従来技術 等速電気泳動分析法は、泳動細管内のリーデイ
ング液とターミナル液との間に試料成分を注入
し、定電流下で泳動させると、試料成分が、それ
ぞれの成分に対応する移動度の順にならんで分離
されるることを利用する分析法であるが、この等
速電気泳動分析法におけるリーデイング液とター
ミナル液との組み合せに最適条件である。例え
ば、試料成分が陰イオンの場合の分析では、リー
デイング液とターミナル液との最適の組み合せと
して第１表のものがよく用いられている。この表
において、リーデイング液のPHが3.6のとき、タ
ーミナル液にモルホリノエタンスルホン酸
（MES）を使用すると、ターミナル液の移動度が
小さくなり、通電性が悪く、分析操作上好ましく
ない。このため、リーデイング液のPHを変更する
か、ターミナル液を変更する必要がある。
ーミナル液の利用技術の改良に関する。 (ロ) 従来技術 等速電気泳動分析法は、泳動細管内のリーデイ
ング液とターミナル液との間に試料成分を注入
し、定電流下で泳動させると、試料成分が、それ
ぞれの成分に対応する移動度の順にならんで分離
されるることを利用する分析法であるが、この等
速電気泳動分析法におけるリーデイング液とター
ミナル液との組み合せに最適条件である。例え
ば、試料成分が陰イオンの場合の分析では、リー
デイング液とターミナル液との最適の組み合せと
して第１表のものがよく用いられている。この表
において、リーデイング液のPHが3.6のとき、タ
ーミナル液にモルホリノエタンスルホン酸
（MES）を使用すると、ターミナル液の移動度が
小さくなり、通電性が悪く、分析操作上好ましく
ない。このため、リーデイング液のPHを変更する
か、ターミナル液を変更する必要がある。
【表】
【表】
しかしこのような分析条件の変更は分析操作上
煩雑である。 (ハ) 目的 この発明はこれらの事情に鑑みなされたもの
で、その主要な目的の一つは、リーデイング液の
PHや組成が変つても、もとのターミナル液を変え
ないで、操作性よく両液の最適条件で分析できる
方法を提供することにある。 (ニ) 構成 この発明は等速電気泳動分析法において、移動
度がリーデイングイオンとターミナルイオンの間
で、しかも試料成分よりも低い移動度のイオンを
含む電解液を、第２ターミナル液として、リーデ
イング液とターミナル液との間にターミナル液を
押しのけて導入し、リーデイング液と第２ターミ
ナル液との間に試料成分溶液を注入して等速電気
泳動させることを特徴とする等速電気泳動分析法
である。 この発明において、第２ターミナル液は、移動
度がリーデイングイオンとターミナルイオンの間
で、しかも試料成分よりも低いイオンを含む電解
液であり、具体例としては移動度が第１表に示す
ターミナル液中のターミナルイオンより大きく、
試料成分イオンよりも小さいイオンを含む電解液
である。そしてこの第２ターミナル液はリーデイ
ング液とターミナル液との間にターミナル液をタ
ーミナル電極槽側へ押しのけて導入される。導入
される第２ターミナル液の量はもとのターミナル
液が細い泳動管内とは比較にならない程大容量の
ターミナル電極槽へ押しやられ泳動管に残らない
程度が好ましい（例えば50μ、なお、ターミナ
ル液全量変更するには20〜50ml必要）。 このように第２ターミナル液の導入によつて、
もとのターミナル液（第１ターミナル液）には不
純物が含まれていて通常ターミナル液としては使
用しにくいものも使用できるということになる。
一般には移動度の小さいターミナル液が第１ター
ミナル液として好適である。等速電気泳動法によ
れば、各成分イオンが移動度の大きさの順に並ん
で泳動管を泳動する。 一方、小さい移動度のターミナル液は大きい移
動度のものに比して電気抵抗が大きい。 従つて移動度の（最も）小さいターミナルイオ
ンは、泳動管に泳動されないことになるので、泳
動管内の電気抵抗の上昇が少なく、泳動管内に高
電圧が印加された場合、通電性が良好で、温度上
昇が少ない。その結果、気泡の発生やその発熱と
気泡発生にともなう検出器における分極が防止で
き、最適電解液条件での分析が可能になる。 (ホ) 実施例 (i) まずこの発明に係る等速電気泳動分析法を実
施するための装置例を第１図に基づいて説明す
る。 等速電気泳動分析装置１は、リーデイング電
極槽２と、ターミナル電極槽３と、両電極槽を
結び、試料注入口４、検出器５及び第２ターミ
ナル液導入口６を具備した泳動細管７と、両電
極槽の泳動電源８とから主として構成されてい
る。 (ii) ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、
カプロン酸の６種の脂肪酸を分析するために
は、リーデイング液として10ｍＭ塩酸＋Ｌヒス
チジン（PH6.2）・0.1％トリトンＸ−100〔登録
商標、和光純薬工業(株)製ポリオキシエチレン〕
と、ターミナル液として10ｍＭ−MES＋トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（PH7.0）
とが最適条件であり、第２ターミナル液の導入
は不要である（第２図参照）。 (iii) 次にマレイン酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ
酸、乳酸、コハク酸、酢酸の７種の有機酸を分
析する場合に、第２ターミナル液を導入すれ
ば、(ii)のターミナル液を変更することなくその
まま残して最適条件で分析できる。 すなわち、上記有機酸の最適分析条件は、リ
ーデイング液として５ｍＭ塩酸＋β−アラニン
（PH3.0）・0.1％トリトンＸ−100と、第２ター
ミナル液として10ｍＭプロピオン酸ナトリウム
である。そこでリーデイング液を(ii)のものから
上記５ｍＭ塩酸＋β−アラニン（PH3.0）・0.1
％トリトンＸ−100に変更し、次いで第２ター
ミナル液導入口６から、その変更後のリーデイ
ング液と元の(ii)のターミナル液〔10ｍＭ−
MES＋トリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン（PH7.0）〕との間に、ターミナル液を押し
のけて上記10ｍＭプロピオン酸ナトリウムを第
２ターミナル液として導入する。その後リーデ
イング液と第２ターミナル液との間に試料成分
（上記有機酸）を注入して泳動を行い、プロピ
オン酸イオンが検出されたところで分析を終了
する。かくして有機酸が最適電解液条件で分析
できる。第２ターミナル液の導入は、ターミナ
ル液との交換に比較して操作が簡単であり、更
に交換後の洗浄においては洗浄個所の大半は不
純物についてきびしい条件が付かないターミナ
ル液のためのターミナル電極槽なので、ほとん
ど残留イオンを無視できるという効果がある。 (iv) このような(iii)の電解液条件で、分析後、(ii)
の
電解液条件に変更する場合、プロピオン酸ナト
リウムが残存すると低級脂肪酸の分析上支障
が、生じるが第２ターミナル液としてそのプロ
ピオン酸ナトリウムを少量使用したのみである
ので、簡単な洗浄で除去できる。なお、リーデ
イング液は変更してもリーデイングイオンの塩
素は変らないので、ターミナル液の交換ほど注
意はいらない。 (v) リーデイングの電位勾配（PGL）に対する試
料のそれ（PGS）の比（RE値）を予め求めて
おけば、そのRE値でリーデイングイオンの移
動度を割ると試料の移動度が求められる。 RE値＝PGS／PGL （第４図参照） 例えばリーデイングイオンとして塩素を用い
た場合、塩素の移動度は76.35×10-5cm2
V-1sec-1（25℃）である。リーデイング液のPH
が3.0の場合は、MESのRE値は51.09であるか
ら、 76.35/51.09＝1.49（×10-5cm2V-1sec-1） 更に、リーデイング液のPHが6.2の場合は、
MESのRE値が3.80であるから、移動度は 76.35/3.80＝20.09（×10-5cm2V-1sec-1） 更にリーデイング液のPHが3.0の場合はプロ
ピオン酸のRE値は11.19であるからこのときの
移動度は、 76.35/11.19＝6.82（×10-5cm2V-1sec-1） ここでRE値が13以上では通電性が悪く分析
上不適当であるとされている。 (ヘ) 効果 この発明は、もとのターミナル液をそのままに
して、別のターミナル液をリーデイング液ともと
のターミナル液との間に導入することによつて、
操作性よく最適電解液条件で分析が可能になる。
煩雑である。 (ハ) 目的 この発明はこれらの事情に鑑みなされたもの
で、その主要な目的の一つは、リーデイング液の
PHや組成が変つても、もとのターミナル液を変え
ないで、操作性よく両液の最適条件で分析できる
方法を提供することにある。 (ニ) 構成 この発明は等速電気泳動分析法において、移動
度がリーデイングイオンとターミナルイオンの間
で、しかも試料成分よりも低い移動度のイオンを
含む電解液を、第２ターミナル液として、リーデ
イング液とターミナル液との間にターミナル液を
押しのけて導入し、リーデイング液と第２ターミ
ナル液との間に試料成分溶液を注入して等速電気
泳動させることを特徴とする等速電気泳動分析法
である。 この発明において、第２ターミナル液は、移動
度がリーデイングイオンとターミナルイオンの間
で、しかも試料成分よりも低いイオンを含む電解
液であり、具体例としては移動度が第１表に示す
ターミナル液中のターミナルイオンより大きく、
試料成分イオンよりも小さいイオンを含む電解液
である。そしてこの第２ターミナル液はリーデイ
ング液とターミナル液との間にターミナル液をタ
ーミナル電極槽側へ押しのけて導入される。導入
される第２ターミナル液の量はもとのターミナル
液が細い泳動管内とは比較にならない程大容量の
ターミナル電極槽へ押しやられ泳動管に残らない
程度が好ましい（例えば50μ、なお、ターミナ
ル液全量変更するには20〜50ml必要）。 このように第２ターミナル液の導入によつて、
もとのターミナル液（第１ターミナル液）には不
純物が含まれていて通常ターミナル液としては使
用しにくいものも使用できるということになる。
一般には移動度の小さいターミナル液が第１ター
ミナル液として好適である。等速電気泳動法によ
れば、各成分イオンが移動度の大きさの順に並ん
で泳動管を泳動する。 一方、小さい移動度のターミナル液は大きい移
動度のものに比して電気抵抗が大きい。 従つて移動度の（最も）小さいターミナルイオ
ンは、泳動管に泳動されないことになるので、泳
動管内の電気抵抗の上昇が少なく、泳動管内に高
電圧が印加された場合、通電性が良好で、温度上
昇が少ない。その結果、気泡の発生やその発熱と
気泡発生にともなう検出器における分極が防止で
き、最適電解液条件での分析が可能になる。 (ホ) 実施例 (i) まずこの発明に係る等速電気泳動分析法を実
施するための装置例を第１図に基づいて説明す
る。 等速電気泳動分析装置１は、リーデイング電
極槽２と、ターミナル電極槽３と、両電極槽を
結び、試料注入口４、検出器５及び第２ターミ
ナル液導入口６を具備した泳動細管７と、両電
極槽の泳動電源８とから主として構成されてい
る。 (ii) ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、
カプロン酸の６種の脂肪酸を分析するために
は、リーデイング液として10ｍＭ塩酸＋Ｌヒス
チジン（PH6.2）・0.1％トリトンＸ−100〔登録
商標、和光純薬工業(株)製ポリオキシエチレン〕
と、ターミナル液として10ｍＭ−MES＋トリ
ス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（PH7.0）
とが最適条件であり、第２ターミナル液の導入
は不要である（第２図参照）。 (iii) 次にマレイン酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ
酸、乳酸、コハク酸、酢酸の７種の有機酸を分
析する場合に、第２ターミナル液を導入すれ
ば、(ii)のターミナル液を変更することなくその
まま残して最適条件で分析できる。 すなわち、上記有機酸の最適分析条件は、リ
ーデイング液として５ｍＭ塩酸＋β−アラニン
（PH3.0）・0.1％トリトンＸ−100と、第２ター
ミナル液として10ｍＭプロピオン酸ナトリウム
である。そこでリーデイング液を(ii)のものから
上記５ｍＭ塩酸＋β−アラニン（PH3.0）・0.1
％トリトンＸ−100に変更し、次いで第２ター
ミナル液導入口６から、その変更後のリーデイ
ング液と元の(ii)のターミナル液〔10ｍＭ−
MES＋トリス（ヒドロキシメチル）アミノメ
タン（PH7.0）〕との間に、ターミナル液を押し
のけて上記10ｍＭプロピオン酸ナトリウムを第
２ターミナル液として導入する。その後リーデ
イング液と第２ターミナル液との間に試料成分
（上記有機酸）を注入して泳動を行い、プロピ
オン酸イオンが検出されたところで分析を終了
する。かくして有機酸が最適電解液条件で分析
できる。第２ターミナル液の導入は、ターミナ
ル液との交換に比較して操作が簡単であり、更
に交換後の洗浄においては洗浄個所の大半は不
純物についてきびしい条件が付かないターミナ
ル液のためのターミナル電極槽なので、ほとん
ど残留イオンを無視できるという効果がある。 (iv) このような(iii)の電解液条件で、分析後、(ii)
の
電解液条件に変更する場合、プロピオン酸ナト
リウムが残存すると低級脂肪酸の分析上支障
が、生じるが第２ターミナル液としてそのプロ
ピオン酸ナトリウムを少量使用したのみである
ので、簡単な洗浄で除去できる。なお、リーデ
イング液は変更してもリーデイングイオンの塩
素は変らないので、ターミナル液の交換ほど注
意はいらない。 (v) リーデイングの電位勾配（PGL）に対する試
料のそれ（PGS）の比（RE値）を予め求めて
おけば、そのRE値でリーデイングイオンの移
動度を割ると試料の移動度が求められる。 RE値＝PGS／PGL （第４図参照） 例えばリーデイングイオンとして塩素を用い
た場合、塩素の移動度は76.35×10-5cm2
V-1sec-1（25℃）である。リーデイング液のPH
が3.0の場合は、MESのRE値は51.09であるか
ら、 76.35/51.09＝1.49（×10-5cm2V-1sec-1） 更に、リーデイング液のPHが6.2の場合は、
MESのRE値が3.80であるから、移動度は 76.35/3.80＝20.09（×10-5cm2V-1sec-1） 更にリーデイング液のPHが3.0の場合はプロ
ピオン酸のRE値は11.19であるからこのときの
移動度は、 76.35/11.19＝6.82（×10-5cm2V-1sec-1） ここでRE値が13以上では通電性が悪く分析
上不適当であるとされている。 (ヘ) 効果 この発明は、もとのターミナル液をそのままに
して、別のターミナル液をリーデイング液ともと
のターミナル液との間に導入することによつて、
操作性よく最適電解液条件で分析が可能になる。
第１図は、この発明に係る等速電気泳動分析法
を実施するための装置例の説明図、第２図は脂肪
酸の分析例を示すイソタコフエログラム、第３図
は有機酸の分析例を示すイソタコフエログラム
（第２ターミナル液導入）、第４図はRE値の定義
を説明するためのイソタコフエログラムである。
を実施するための装置例の説明図、第２図は脂肪
酸の分析例を示すイソタコフエログラム、第３図
は有機酸の分析例を示すイソタコフエログラム
（第２ターミナル液導入）、第４図はRE値の定義
を説明するためのイソタコフエログラムである。
Claims (1)
- １ 等速電気泳動分析法において、移動度がリー
デイングイオンとターミナルイオンの間で、しか
も試料成分よりも低い移動度のイオンを含む電解
液を、第２ターミナル液として、リーデイング液
とターミナル液との間にターミナル液を押しのけ
て導入し、リーデイング液と第２ターミナル液と
の間に試料成分溶液を注入して等速電気泳動させ
ることを特徴とする等速電気泳動分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58250168A JPS60142243A (ja) | 1983-12-28 | 1983-12-28 | 等速電気泳動分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58250168A JPS60142243A (ja) | 1983-12-28 | 1983-12-28 | 等速電気泳動分析法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60142243A JPS60142243A (ja) | 1985-07-27 |
| JPH0524455B2 true JPH0524455B2 (ja) | 1993-04-07 |
Family
ID=17203826
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58250168A Granted JPS60142243A (ja) | 1983-12-28 | 1983-12-28 | 等速電気泳動分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60142243A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61194363A (ja) * | 1985-02-25 | 1986-08-28 | Hitachi Ltd | 核酸断片検出装置 |
| US20100294663A1 (en) * | 2006-11-01 | 2010-11-25 | Becton, Dickinson And Company | Methods and devices for isotachophoresis applications |
| US8580097B2 (en) * | 2009-04-27 | 2013-11-12 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Isotachophoresis of blood-derived samples |
| CN114624323B (zh) * | 2020-12-11 | 2026-03-10 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种用于大曲和酒醅中乙酸和乳酸的检测装置和方法 |
-
1983
- 1983-12-28 JP JP58250168A patent/JPS60142243A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60142243A (ja) | 1985-07-27 |
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