JPH05244936A - バクテリアの成長促進物質 - Google Patents
バクテリアの成長促進物質Info
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- JPH05244936A JPH05244936A JP4162974A JP16297492A JPH05244936A JP H05244936 A JPH05244936 A JP H05244936A JP 4162974 A JP4162974 A JP 4162974A JP 16297492 A JP16297492 A JP 16297492A JP H05244936 A JPH05244936 A JP H05244936A
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 バクテリアの成長を促進する物質を提供す
る。 【構成】 嫌気性菌と好気性菌の増殖を促進する培地添
加物を提供する。この添加物は凍結乾燥し、電離線に暴
露した微生物からなる。この様な微生物は増殖不能とな
るが、多くの代謝系、酵素、生物活性のある物質を保持
しており、これをバクテリアの培養に有用化できる。
る。 【構成】 嫌気性菌と好気性菌の増殖を促進する培地添
加物を提供する。この添加物は凍結乾燥し、電離線に暴
露した微生物からなる。この様な微生物は増殖不能とな
るが、多くの代謝系、酵素、生物活性のある物質を保持
しており、これをバクテリアの培養に有用化できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はバクテリアの成長を促進
する物質に関する。
する物質に関する。
【０００２】
【従来の技術】バクテリア及びその他の微生物の培養は
診断や生体医療の目的に於て重要な技術である。標準的
な培養法では、増殖に必要な栄養分を含む培地において
適当な条件下でバクテリアを培養する。
診断や生体医療の目的に於て重要な技術である。標準的
な培養法では、増殖に必要な栄養分を含む培地において
適当な条件下でバクテリアを培養する。
【０００３】しかし、この操作はしばしば長い時間がか
かり、退屈でもある。さらに、多くのバクテリアは簡単
に培養することができない。例えば、偏性嫌気性菌は酸
素に感受性であり、その存在下では増殖することができ
ない。一方、培養困難なバクテリアは多くの培地成分を
代謝することができず、増殖に必要な多くの栄養物を補
う必要がある。この様に培地は各々のバクテリアに合わ
せて前処理をし、そして／または栄養物を加えて強化し
てやらなければならない。
かり、退屈でもある。さらに、多くのバクテリアは簡単
に培養することができない。例えば、偏性嫌気性菌は酸
素に感受性であり、その存在下では増殖することができ
ない。一方、培養困難なバクテリアは多くの培地成分を
代謝することができず、増殖に必要な多くの栄養物を補
う必要がある。この様に培地は各々のバクテリアに合わ
せて前処理をし、そして／または栄養物を加えて強化し
てやらなければならない。
【０００４】特定の用途に合わせて添加物を加えること
で培地を改良することが研究者らにより試みられてき
た。例えばアドラー（Ａｄｌｅｒ）の米国特許第４，４
７６，２２４号では、滅菌したバクテリアの膜断片を培
地に加えることにより、培地中の溶在酸素を除去できる
（それにより嫌気培養における有用性を高める）ことを
開示している。この様な生成物は、オキシレース社（Ｏ
ｘｙｒａｓｅ，Ｉｎｃ）によりオキシレース酵素システ
ムの名で売られている。しかしながら、この添加物の有
用性は嫌気的な培養にのみ限られている。
で培地を改良することが研究者らにより試みられてき
た。例えばアドラー（Ａｄｌｅｒ）の米国特許第４，４
７６，２２４号では、滅菌したバクテリアの膜断片を培
地に加えることにより、培地中の溶在酸素を除去できる
（それにより嫌気培養における有用性を高める）ことを
開示している。この様な生成物は、オキシレース社（Ｏ
ｘｙｒａｓｅ，Ｉｎｃ）によりオキシレース酵素システ
ムの名で売られている。しかしながら、この添加物の有
用性は嫌気的な培養にのみ限られている。
【０００５】同様に、培地に添加する多種の栄養物がそ
の分野に於て知られている。しかしこれも又、それら特
殊の栄養物を要求する生物の培養に限られている。
の分野に於て知られている。しかしこれも又、それら特
殊の栄養物を要求する生物の培養に限られている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】現在、真に必要とされ
るのは、広範囲のバクテリア種の増殖を促進させ、種々
の異なる培地で用いることができる培地添加物である。
るのは、広範囲のバクテリア種の増殖を促進させ、種々
の異なる培地で用いることができる培地添加物である。
【０００７】したがって、嫌気性菌、通性嫌気性菌、お
よび好気性菌を含むあらゆるタイプのバクテリアの増殖
を促進し、種々の異なる培地に用いることのできる培地
添加物を提供することが本発明の目的である。本発明は
又、偏性嫌気性菌や又そうでないものを含む、培養困難
なバクテリアの増殖を促進する培地添加物を提供するこ
とも目的とする。
よび好気性菌を含むあらゆるタイプのバクテリアの増殖
を促進し、種々の異なる培地に用いることのできる培地
添加物を提供することが本発明の目的である。本発明は
又、偏性嫌気性菌や又そうでないものを含む、培養困難
なバクテリアの増殖を促進する培地添加物を提供するこ
とも目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】上述の目的またはそれに
類するものは本発明による培地により実現される。これ
らの培地は、電離線を照射した微生物の凍結乾燥品を添
加して修飾される。この添加物はバクテリア（ここで”
バクテリア”とはあらゆる微生物を指す）が利用できる
一連の栄養物や酵素を含んでいる。
類するものは本発明による培地により実現される。これ
らの培地は、電離線を照射した微生物の凍結乾燥品を添
加して修飾される。この添加物はバクテリア（ここで”
バクテリア”とはあらゆる微生物を指す）が利用できる
一連の栄養物や酵素を含んでいる。
【０００９】この添加物の調製で要となるのは電離線照
射である。このような処理は微生物を増殖不能にする
が、微生物がもつ多くの酵素および生物活性のある物質
を壊さずにすみ、これをバクテリアに利用させることが
できる。これらの物質の多くは熱に不安定なため、この
ような添加物は熱による滅菌では得られない。
射である。このような処理は微生物を増殖不能にする
が、微生物がもつ多くの酵素および生物活性のある物質
を壊さずにすみ、これをバクテリアに利用させることが
できる。これらの物質の多くは熱に不安定なため、この
ような添加物は熱による滅菌では得られない。
【００１０】この添加物は必要であれば、例えばアルギ
ン酸カルシウムに封入することにより、培地の濁りや染
色の問題を回避することもできる。
ン酸カルシウムに封入することにより、培地の濁りや染
色の問題を回避することもできる。
【００１１】本発明の、培地で用いられる添加物は、電
離線に暴露した微生物凍結乾燥品を用いることにより好
気性菌、通性嫌気性菌、および偏性嫌気性菌の増殖を促
進する。この様な組成物は活性を持つ酵素システムや熱
に不安定及び安定な増殖促進物質を多く含んでいる。こ
の添加物の調製に於て要となるのは電離線を用いること
であり、以下にこのシステムの利点を示す。
離線に暴露した微生物凍結乾燥品を用いることにより好
気性菌、通性嫌気性菌、および偏性嫌気性菌の増殖を促
進する。この様な組成物は活性を持つ酵素システムや熱
に不安定及び安定な増殖促進物質を多く含んでいる。こ
の添加物の調製に於て要となるのは電離線を用いること
であり、以下にこのシステムの利点を示す。
【００１２】１．生きた細胞の遺伝物質は通常、酵素系
に比べて放射線による損傷を受けやすい。そのため放射
線処理をした細胞は増殖能を失う（すなわち滅菌され
る）が、細胞が持っている代謝系を残している。この様
な代謝系はバクテリアと接触させることで、バクテリア
に利用させることができる。
に比べて放射線による損傷を受けやすい。そのため放射
線処理をした細胞は増殖能を失う（すなわち滅菌され
る）が、細胞が持っている代謝系を残している。この様
な代謝系はバクテリアと接触させることで、バクテリア
に利用させることができる。
【００１３】２．放射線照射は生成物の温度上昇を伴わ
ないで実行できるので、熱に対して不安定な物質の栄養
価を損なわない。
ないで実行できるので、熱に対して不安定な物質の栄養
価を損なわない。
【００１４】３．電離線は浸透率が高く、製品包装の最
終段階で処理を実行できる為、前に滅菌工程を含む場合
でも調製品は最終的に滅菌性が保証される。
終段階で処理を実行できる為、前に滅菌工程を含む場合
でも調製品は最終的に滅菌性が保証される。
【００１５】本発明の添加物は、活性を有する代謝酵素
系や熱に不安定な増殖促進物質に富む、放射線感受性微
生物から生産される。低い放射線量で望ましい効果が得
られるので、利用すべく代謝系や栄養物に対する電離線
の悪影響が最小となる。実質的にはどの様な微生物でも
用いることができるが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ ｃｏｌｉ）が好ましい。
系や熱に不安定な増殖促進物質に富む、放射線感受性微
生物から生産される。低い放射線量で望ましい効果が得
られるので、利用すべく代謝系や栄養物に対する電離線
の悪影響が最小となる。実質的にはどの様な微生物でも
用いることができるが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ ｃｏｌｉ）が好ましい。
【００１６】本発明の添加物は、第一に、放射線処理さ
れた細胞の代謝系が酸素を消費して培地に嫌気的な条件
を作り出すことにより、そして第二に、カタラーゼおよ
びスーパーオキシドジムスターゼのような、毒性物質の
中和を触媒する酵素により、嫌気性菌の増殖を改善す
る。培養困難なバクテリア及び好気性菌は、熱に不安定
な栄養物や活性を有する酵素系など、バクテリアの代謝
過程に利用できるものが存在するために増殖が促進され
る。この様な酵素系および栄養物は普通の培地には通常
含まれていない。事実、これらの酵素の存在は、代謝系
による酸素の消費による影響をやわらげ、このようにし
て好気性菌の増殖をも促進することが見いだされた。
れた細胞の代謝系が酸素を消費して培地に嫌気的な条件
を作り出すことにより、そして第二に、カタラーゼおよ
びスーパーオキシドジムスターゼのような、毒性物質の
中和を触媒する酵素により、嫌気性菌の増殖を改善す
る。培養困難なバクテリア及び好気性菌は、熱に不安定
な栄養物や活性を有する酵素系など、バクテリアの代謝
過程に利用できるものが存在するために増殖が促進され
る。この様な酵素系および栄養物は普通の培地には通常
含まれていない。事実、これらの酵素の存在は、代謝系
による酸素の消費による影響をやわらげ、このようにし
て好気性菌の増殖をも促進することが見いだされた。
【００１７】この添加物は裸（ｆｒｅｅ）の状態、ある
いは封入された形に調製することができ、幅広い用途に
適用できる。
いは封入された形に調製することができ、幅広い用途に
適用できる。
【００１８】裸（ｆｒｅｅ）の添加物を調製するには、
微生物を液体、あるいは個体培地で活発に増殖する条件
下で培養し、集菌して洗浄する（蒸留水かｐＨ７．３の
生理食塩緩衝液が好ましい）。次にこの微生物を凍結乾
燥し、滅菌に十分な線量の電離線に暴露させる（通常、
０．５−１．５Ｍｒａｄ）。
微生物を液体、あるいは個体培地で活発に増殖する条件
下で培養し、集菌して洗浄する（蒸留水かｐＨ７．３の
生理食塩緩衝液が好ましい）。次にこの微生物を凍結乾
燥し、滅菌に十分な線量の電離線に暴露させる（通常、
０．５−１．５Ｍｒａｄ）。
【００１９】封入された形の添加物を調製するには微生
物を上述のように増殖、集菌し、これを封入する。アル
ギン酸カルシウムに微生物を封入する調製法の代表的な
ものを以下に示す。
物を上述のように増殖、集菌し、これを封入する。アル
ギン酸カルシウムに微生物を封入する調製法の代表的な
ものを以下に示す。
【００２０】１．集金した微生物を、滅菌したアルギン
酸ナトリウム溶液と混合し、 ２．次にこの混合物を、滅菌した塩化ナトリウム水溶液
と混合することにより、微生物が封じ込まれたアルギン
酸カルシウムの沈澱物を形成し、 ３．封入体の沈澱物を蒸留水で洗浄して凍結乾燥し、そ
して ４．最終的に、電離線照射で滅菌する。
酸ナトリウム溶液と混合し、 ２．次にこの混合物を、滅菌した塩化ナトリウム水溶液
と混合することにより、微生物が封じ込まれたアルギン
酸カルシウムの沈澱物を形成し、 ３．封入体の沈澱物を蒸留水で洗浄して凍結乾燥し、そ
して ４．最終的に、電離線照射で滅菌する。
【００２１】どの様な方法を用いて調製しても、結果と
して得られる添加物は実質的にあらゆる培地に添加して
増殖促進培地を作成することができる。添加量は生菌数
にして１×１０7−１×１０13ＣＦＵ／ｍｌに相当する
濃度の凍結乾燥細胞が好ましい（注：この微生物は増殖
できないのでＣＦＵという言葉は直接適用できない；従
って相当する値を示した）。
して得られる添加物は実質的にあらゆる培地に添加して
増殖促進培地を作成することができる。添加量は生菌数
にして１×１０7−１×１０13ＣＦＵ／ｍｌに相当する
濃度の凍結乾燥細胞が好ましい（注：この微生物は増殖
できないのでＣＦＵという言葉は直接適用できない；従
って相当する値を示した）。
【００２２】
【実施例】以下の実施例は本発明のある好ましい態様を
例示したものであるが、全ての態様を例示するものでな
い。
例示したものであるが、全ての態様を例示するものでな
い。
【００２３】実施例１ 大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ
２５９２２をトリプチカーゼ ソイ ブラッド寒天培
地（ＢＢＬ）上で３５℃、１８時間培養した。この細胞
を普通の生理食塩水に、濁度ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準で
０．５となるように懸濁し、２００ｍｌのトリプチカー
ゼ ソイ ブラッド液体培地が入った７本の培養瓶に
０．１ｍｌずつ植菌した。植菌された培地を３７℃で１
０時間エアレーションをして培養し、遠心して細胞を回
収した。結果として得られた細胞を生理食塩緩衝液で懸
濁、遠心を繰り返して洗浄し、最終的に濃度が８．６×
１０10ＣＦＵ／ｍｌとなるように懸濁した。収量とし
て、１４００ｍｌの培養液から７０ｍｌの濃縮懸濁液を
得た。
２５９２２をトリプチカーゼ ソイ ブラッド寒天培
地（ＢＢＬ）上で３５℃、１８時間培養した。この細胞
を普通の生理食塩水に、濁度ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準で
０．５となるように懸濁し、２００ｍｌのトリプチカー
ゼ ソイ ブラッド液体培地が入った７本の培養瓶に
０．１ｍｌずつ植菌した。植菌された培地を３７℃で１
０時間エアレーションをして培養し、遠心して細胞を回
収した。結果として得られた細胞を生理食塩緩衝液で懸
濁、遠心を繰り返して洗浄し、最終的に濃度が８．６×
１０10ＣＦＵ／ｍｌとなるように懸濁した。収量とし
て、１４００ｍｌの培養液から７０ｍｌの濃縮懸濁液を
得た。
【００２４】濃縮懸濁液を１ｍｌずつ血清チューブに分
注し、約４０Ｍｉｌｌｉｔｏｒｒの真空下で凍結乾燥
し、栓をした。これに室温で１Ｍｒａｄまでの線量を照
射し、２−８℃で保存した。Ｄ10値（集団を１０1ＣＦ
Ｕ，１ ｌｏｇで減少させるのに必要な線量）は１４．
７Ｋｒａｄｓであった。１Ｍｒａｄで照射したものにつ
いて検査したところ滅菌性が確かめられた。
注し、約４０Ｍｉｌｌｉｔｏｒｒの真空下で凍結乾燥
し、栓をした。これに室温で１Ｍｒａｄまでの線量を照
射し、２−８℃で保存した。Ｄ10値（集団を１０1ＣＦ
Ｕ，１ ｌｏｇで減少させるのに必要な線量）は１４．
７Ｋｒａｄｓであった。１Ｍｒａｄで照射したものにつ
いて検査したところ滅菌性が確かめられた。
【００２５】実施例２ 大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ
１１３０３を用いて実施例１に示したように製品を調
製した。収量として、１８００ｍｌの培養液から４０ｍ
ｌの２．３×１０10ＣＦＵ／ｍｌの濃縮懸濁液を得た。
凍結乾燥製品のＤ10値は０．７６Ｍｒａｄであった。１
Ｍｒａｄで照射した製品は滅菌されていた。
１１３０３を用いて実施例１に示したように製品を調
製した。収量として、１８００ｍｌの培養液から４０ｍ
ｌの２．３×１０10ＣＦＵ／ｍｌの濃縮懸濁液を得た。
凍結乾燥製品のＤ10値は０．７６Ｍｒａｄであった。１
Ｍｒａｄで照射した製品は滅菌されていた。
【００２６】実施例３ 大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）２５９２
２の濃縮懸濁液を実施例１に示したように調製した（但
し、細胞の洗浄は蒸留水で行った）。１４００ｍｌの培
養液から２０ｍｌの２．７×１０11ＣＦＵ／ｍｌの細胞
を回収し、これを−６５℃で一昼夜保存した。細胞を融
解し、１：２の割合で２％のアルギン酸ナトリウム（Ａ
−２０３３ Ｓｉｇｍａ，ｍｅｄｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓ
ｉｔｙ）を加えた。１ｍｌを、５ｍｌの０．５％塩化カ
ルシウムの入った血清チューブに分注した。室温で１−
２時間、アルギン酸カルシウム中に封入された細胞のフ
ィラメントを硬化させた。塩化カルシウム溶液をデカン
トし、次にフィラメントを５ｍｌの蒸留水で洗浄し、４
０Ｍｉｌｌｉｔｏｒｒの真空で凍結乾燥した。これに１
Ｍｒａｄを照射し、２−８℃で保存した。
２の濃縮懸濁液を実施例１に示したように調製した（但
し、細胞の洗浄は蒸留水で行った）。１４００ｍｌの培
養液から２０ｍｌの２．７×１０11ＣＦＵ／ｍｌの細胞
を回収し、これを−６５℃で一昼夜保存した。細胞を融
解し、１：２の割合で２％のアルギン酸ナトリウム（Ａ
−２０３３ Ｓｉｇｍａ，ｍｅｄｉｕｍ ｖｉｓｃｏｓ
ｉｔｙ）を加えた。１ｍｌを、５ｍｌの０．５％塩化カ
ルシウムの入った血清チューブに分注した。室温で１−
２時間、アルギン酸カルシウム中に封入された細胞のフ
ィラメントを硬化させた。塩化カルシウム溶液をデカン
トし、次にフィラメントを５ｍｌの蒸留水で洗浄し、４
０Ｍｉｌｌｉｔｏｒｒの真空で凍結乾燥した。これに１
Ｍｒａｄを照射し、２−８℃で保存した。
【００２７】実施例４ 実施例１の調製品を蒸留水で懸濁し、８×１０10ＣＦＵ
／ｍｌ相当の濃度とした。直径０．５インチのペーパー
ディスク（Ｂｌａｎｋ ｐａｐｅｒ ｄｉｓｋ）（Ｔａ
ｘｏ３１１２１−ＢＢＬ）を０．１ｍｌの懸濁液で湿ら
せ、ストレプトコッカス ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ １９６１
５を植菌した５％のヒツジ血液（ＢＢＬ）を含むＧｒｏ
ｕｐＡｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｓｔｒｅｐ寒天培地（ｓｓ
Ａ）の上に置いた。このプレートを３５℃、気相で培養
した。４８時間後、ディスクの周りで増殖の促進及び透
明なベータ溶血が見られたが、対照のプレート上ではよ
り小さなコロニーしか見られず、溶血帯も見られなかっ
た。これらのディスクを用いた試験を、ヒツジ血液を含
むトリプチカーゼ ソイ プレート上で行ったところ、
ストレプトコッカス ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の増殖が促進され
るのが見いだされた。
／ｍｌ相当の濃度とした。直径０．５インチのペーパー
ディスク（Ｂｌａｎｋ ｐａｐｅｒ ｄｉｓｋ）（Ｔａ
ｘｏ３１１２１−ＢＢＬ）を０．１ｍｌの懸濁液で湿ら
せ、ストレプトコッカス ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ １９６１
５を植菌した５％のヒツジ血液（ＢＢＬ）を含むＧｒｏ
ｕｐＡｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｓｔｒｅｐ寒天培地（ｓｓ
Ａ）の上に置いた。このプレートを３５℃、気相で培養
した。４８時間後、ディスクの周りで増殖の促進及び透
明なベータ溶血が見られたが、対照のプレート上ではよ
り小さなコロニーしか見られず、溶血帯も見られなかっ
た。これらのディスクを用いた試験を、ヒツジ血液を含
むトリプチカーゼ ソイ プレート上で行ったところ、
ストレプトコッカス ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃ
ｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の増殖が促進され
るのが見いだされた。
【００２８】放射線滅菌した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ １１３０３（実施例２）
を、２．３×１０10相当の濃度を含む懸濁液０．１ｍｌ
で湿らせたディスクは、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）ＡＴＣＣ ６６３３（偏性好気性菌）の増殖を促進
することが見いだされた。
ｈｉａ ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ １１３０３（実施例２）
を、２．３×１０10相当の濃度を含む懸濁液０．１ｍｌ
で湿らせたディスクは、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ）ＡＴＣＣ ６６３３（偏性好気性菌）の増殖を促進
することが見いだされた。
【００２９】実施例５ ０．１Ｍ乳酸ナトリウムを含む生理食塩緩衝液（ｐＨ
７．３）で組成される合成培地に空気を飽和させた。こ
の培地１ｍｌに、実施例１のように放射線照射して調製
した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）２５
９９２細胞を６×１０9ＣＦＵ相当加えた。全酸素は２
３℃で５分間、３５℃で３分間以内にすべて消費され
た。放射線照射した細胞の同じ調製物をＣｏｌｕｍｂｉ
ａ 液体培地（ＢＢＬ）（空気で飽和させた）１ｍｌあ
たり１０10の濃度で加えたところ、２３℃，１０分間以
内に全ての酸素が除去された。この様に放射線処理した
細胞は、培地中の空気を消費することで培地を嫌気性菌
の培養に有用なものにする。
７．３）で組成される合成培地に空気を飽和させた。こ
の培地１ｍｌに、実施例１のように放射線照射して調製
した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）２５
９９２細胞を６×１０9ＣＦＵ相当加えた。全酸素は２
３℃で５分間、３５℃で３分間以内にすべて消費され
た。放射線照射した細胞の同じ調製物をＣｏｌｕｍｂｉ
ａ 液体培地（ＢＢＬ）（空気で飽和させた）１ｍｌあ
たり１０10の濃度で加えたところ、２３℃，１０分間以
内に全ての酸素が除去された。この様に放射線処理した
細胞は、培地中の空気を消費することで培地を嫌気性菌
の培養に有用なものにする。
【００３０】実施例６ １ｍｌの封入した大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃ
ｏｌｉ）２５９２２（実施例３）を５ｍｌのＣｏｌｕｍ
ｂｉａ 液体培地（５ｍｇ／ｌヘミン、０．５ｍｇ／ｌ
ビタミンＫおよび１ｇ／ｌ塩化カルシウムを補った）に
加え、空気を飽和させた。酸素は２３℃、１８分で初期
含量の０．５％に減少した。Ｅｈ（酸化還元電位）値は
５０分および１５０分後にそれぞれ−５０ｍＶおよび−
８８ｍＶに減少した。
ｏｌｉ）２５９２２（実施例３）を５ｍｌのＣｏｌｕｍ
ｂｉａ 液体培地（５ｍｇ／ｌヘミン、０．５ｍｇ／ｌ
ビタミンＫおよび１ｇ／ｌ塩化カルシウムを補った）に
加え、空気を飽和させた。酸素は２３℃、１８分で初期
含量の０．５％に減少した。Ｅｈ（酸化還元電位）値は
５０分および１５０分後にそれぞれ−５０ｍＶおよび−
８８ｍＶに減少した。
【００３１】実施例７ ５ｍｇ／ｌヘミン、０．５ｍｇ／ｌビタミンＫおよび１
ｇ／ｌ塩化カルシウムで増強したＣｏｌｕｍｂｉａ 液
体培地５ｍｌを、封入大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）２５９２
２ （実施例３）が入った血清バイアルに注入した。該
バイアルをウオーターバス中で３５℃でインキュベート
した。このうち２つにメチレンブルーを加えたところ、
３０分で色が青から無色となった（酸素がないことを示
す）。
ｇ／ｌ塩化カルシウムで増強したＣｏｌｕｍｂｉａ 液
体培地５ｍｌを、封入大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）２５９２
２ （実施例３）が入った血清バイアルに注入した。該
バイアルをウオーターバス中で３５℃でインキュベート
した。このうち２つにメチレンブルーを加えたところ、
３０分で色が青から無色となった（酸素がないことを示
す）。
【００３２】残りの封入微生物が入ったバイアル、封入
微生物が入っていない増強したＣｏｌｕｍｂｉａ 液体
培地５ｍｌが入った対照チューブ、そして増強したチオ
グリコレート培地が入ったバイアルに、各々１０3ＣＦ
Ｕのクロストリジウム ノービ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ ｎｏｖｙｉ）ＡＴＣＣ １９４０２，バクテロイデ
ス メラニノゲニカス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅ
ｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ １５９３０、
あるいはバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏ
ｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ ２５２８５を
それぞれ植菌した。
微生物が入っていない増強したＣｏｌｕｍｂｉａ 液体
培地５ｍｌが入った対照チューブ、そして増強したチオ
グリコレート培地が入ったバイアルに、各々１０3ＣＦ
Ｕのクロストリジウム ノービ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕ
ｍ ｎｏｖｙｉ）ＡＴＣＣ １９４０２，バクテロイデ
ス メラニノゲニカス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｍｅ
ｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ １５９３０、
あるいはバクテロイデス フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏ
ｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ ２５２８５を
それぞれ植菌した。
【００３３】封入した微生物との直接的な接触による効
果を確かめるため、上述３種の試験生物１０3ＣＦＵ
を、封入微生物のみが入ったチューブに加えた。数分間
接触させた後、５ｍｌの強化したＣｏｌｕｍｂｉａ液体
培地を加えた。これら全ての試料を３５℃で７日間培養
し、増殖及び染色性を観察した。
果を確かめるため、上述３種の試験生物１０3ＣＦＵ
を、封入微生物のみが入ったチューブに加えた。数分間
接触させた後、５ｍｌの強化したＣｏｌｕｍｂｉａ液体
培地を加えた。これら全ての試料を３５℃で７日間培養
し、増殖及び染色性を観察した。
【００３４】封入して放射線照射した大腸菌（Ｅ．ｃｏ
ｌｉ）を含む、増強したＣｏｌｕｍｂｉａ 液体培地が
入ったチューブでは、試験した３種の生物は全てよく増
殖した。しかしながら、増強したＣｏｌｕｍｂｉａ 液
体培地のみが入ったチューブではどれも増殖しなかっ
た。増強したチオグリコレート培地に封入微生物を含む
チューブではバクテロイデス メラニノゲニカスの増殖
は加速され、クロストリジウム ノービの増殖は４８時
間早く出現した。
ｌｉ）を含む、増強したＣｏｌｕｍｂｉａ 液体培地が
入ったチューブでは、試験した３種の生物は全てよく増
殖した。しかしながら、増強したＣｏｌｕｍｂｉａ 液
体培地のみが入ったチューブではどれも増殖しなかっ
た。増強したチオグリコレート培地に封入微生物を含む
チューブではバクテロイデス メラニノゲニカスの増殖
は加速され、クロストリジウム ノービの増殖は４８時
間早く出現した。
【００３５】さらに、封入大腸菌の存在は、これらのチ
ューブの試料のグラム染色に支障を与えなかった。
ューブの試料のグラム染色に支障を与えなかった。
【００３６】以上に示した様な、多数の修正法や派生法
が本発明の趣旨および範囲から離れることなく可能であ
ることは明らかである。ここに示した特定の態様は例と
して挙げたまでであり、本発明は請求の範囲の記載によ
ってのみ限定される。
が本発明の趣旨および範囲から離れることなく可能であ
ることは明らかである。ここに示した特定の態様は例と
して挙げたまでであり、本発明は請求の範囲の記載によ
ってのみ限定される。
フロントページの続き (72)発明者 ジョージ・エル・エヴァンス アメリカ合衆国メリーランド州21030，ク ッキーズヴィル，マルコム・サークル 10301−エル
Claims (8)
- 【請求項１】バクテリアの成長を促進するように、電離
線で滅菌した微生物の凍結乾燥品からなる添加物を有効
量含む、バクテリアの成長のために改良された培地。 - 【請求項２】微生物が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）である、請求項１記載の培地。 - 【請求項３】添加物を約１×１０7から約１×１０13Ｃ
ＦＵ／ｍｌに相当する濃度で含む、請求項１記載の培
地。 - 【請求項４】（ｉ）微生物を、活発に増殖する条件下で
培養し； （ii）微生物を回収し、そして洗浄し； （iii）微生物を凍結乾燥し；そして （iv）凍結乾燥した上記微生物を滅菌に十分な線量の電
離線に暴露する工程からなる、バクテリアの成長を促進
するための栄養培地添加物の調製法。 - 【請求項５】微生物が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）である、請求項４記載の調製法。 - 【請求項６】回収した微生物をｐＨ７．３の生理食塩緩
衝液で洗浄する、請求項５記載の調製法。 - 【請求項７】（ｉ）微生物を、活発に増殖する条件で培
養し； （ii）微生物を回収して洗浄し； （iii）微生物を、滅菌したアルギン酸ナトリウム溶液
に懸濁し； （iv）滅菌した塩化カルシウム溶液を、上記溶液に十分
量加えることにより、アルギン酸カルシウムに封じ込ま
れた微生物の沈澱物を形成させ； （ｖ）沈澱物を蒸留水で洗浄し； （vi）沈澱物を凍結乾燥し；そして （vii）凍結乾燥した沈澱物を十分な線量の電離線に暴
露して滅菌された製品を得る工程からなる、バクテリア
の成長を促進する培地栄養添加物の調製法。 - 【請求項８】微生物が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ）である、請求項７記載の調製法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/719,872 US6010896A (en) | 1991-06-24 | 1991-06-24 | Lyophilized ionizing radiation sterilized microorganisms as an additive for nutrient media for growing bacteria |
| US719872 | 1991-06-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05244936A true JPH05244936A (ja) | 1993-09-24 |
| JP2601600B2 JP2601600B2 (ja) | 1997-04-16 |
Family
ID=24891714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4162974A Expired - Fee Related JP2601600B2 (ja) | 1991-06-24 | 1992-06-22 | バクテリアの成長促進物質 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6010896A (ja) |
| EP (1) | EP0520757B1 (ja) |
| JP (1) | JP2601600B2 (ja) |
| AU (1) | AU659155B2 (ja) |
| CA (1) | CA2070974C (ja) |
| DE (1) | DE69218837T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021261423A1 (ja) * | 2020-06-22 | 2021-12-30 | 株式会社明治 | インターロイキン－１０の産生促進用組成物 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9721396D0 (en) * | 1997-07-11 | 1997-12-10 | Oxide Limited | Improvements in or relating to growth of microorganisms |
| US20030138874A1 (en) | 2001-11-09 | 2003-07-24 | Taintor Read Robert | Method and kit for rapid concurrent identification and antimicrobial susceptibility testing of microorganisms from broth culture |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5266678A (en) * | 1975-11-28 | 1977-06-02 | Ici Ltd | Fermenting method |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR903212A (fr) * | 1941-10-29 | 1945-09-27 | Biosyn Ges M B H | Procédé de conduite de culture massive de micro-organismes |
| DE1082371B (de) * | 1956-08-10 | 1960-05-25 | Benckiser Gmbh Joh A | Verfahren zur Reinigung und Isolierung von Wirkstoffkonzentraten |
| FR1355922A (fr) * | 1963-04-04 | 1964-03-20 | Ceskoslovenska Akademie Ved | Procédé de production d'une substance stimulant la production des acides du cycle de krebs, en particulier l'acide citrique, par les fungi et produits conformes à ceux obtenus par le présent procédé ou procédé similaire |
| US3592740A (en) * | 1968-03-28 | 1971-07-13 | Niles Lab Inc | Production of cell culture concentrates |
| IL44853A (en) * | 1974-05-17 | 1975-11-25 | Isorad Isotopes & Radiation | Process for the preparation of sterile culture media and culture medium thus obtained |
| US4082611A (en) * | 1976-11-30 | 1978-04-04 | Imperial Chemical Industries Limited | Continuous fermentation process |
| US4329431A (en) * | 1978-06-08 | 1982-05-11 | Youssef Kamal A | Instant culture media and method of sterilizing same |
| US4391909A (en) * | 1979-03-28 | 1983-07-05 | Damon Corporation | Microcapsules containing viable tissue cells |
| US4402986A (en) * | 1981-07-23 | 1983-09-06 | Stauffer Chemical Company | Bulk starter media |
| US4476224A (en) * | 1982-05-10 | 1984-10-09 | Adler Howard I | Material and method for promoting the growth of anaerobic bacteria |
| US4879239A (en) * | 1983-11-03 | 1989-11-07 | American Type Culture Collection | Method of culturing freeze-dried microorganisms and resultant preparation |
| US4672037A (en) * | 1983-11-03 | 1987-06-09 | American Type Culture Collection | Method of culturing freeze-dried microorganisms |
| AU1050388A (en) * | 1986-12-05 | 1988-06-30 | Oxyrase, Inc. | Material and method for promoting growth of anaerobic bacteria |
| SU1638156A1 (ru) * | 1988-12-06 | 1991-03-30 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Особо Чистых Биопрепаратов | Способ получени аутоактиватора роста дл культивировани ЕSснеRIснIа coLI |
-
1991
- 1991-06-24 US US07/719,872 patent/US6010896A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-06-02 AU AU17360/92A patent/AU659155B2/en not_active Ceased
- 1992-06-10 CA CA002070974A patent/CA2070974C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-06-22 JP JP4162974A patent/JP2601600B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-06-24 EP EP92305781A patent/EP0520757B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-06-24 DE DE69218837T patent/DE69218837T2/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5266678A (en) * | 1975-11-28 | 1977-06-02 | Ici Ltd | Fermenting method |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021261423A1 (ja) * | 2020-06-22 | 2021-12-30 | 株式会社明治 | インターロイキン－１０の産生促進用組成物 |
| JPWO2021261423A1 (ja) * | 2020-06-22 | 2021-12-30 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6010896A (en) | 2000-01-04 |
| CA2070974C (en) | 1997-08-19 |
| DE69218837T2 (de) | 1997-09-11 |
| JP2601600B2 (ja) | 1997-04-16 |
| EP0520757A3 (en) | 1993-11-10 |
| EP0520757A2 (en) | 1992-12-30 |
| AU659155B2 (en) | 1995-05-11 |
| CA2070974A1 (en) | 1992-12-25 |
| EP0520757B1 (en) | 1997-04-09 |
| DE69218837D1 (de) | 1997-05-15 |
| AU1736092A (en) | 1993-01-07 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |