JPH05304986A - ｇｐ１３０蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体 - Google Patents
ｇｐ１３０蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体Info
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- JPH05304986A JPH05304986A JP4134329A JP13432992A JPH05304986A JP H05304986 A JPH05304986 A JP H05304986A JP 4134329 A JP4134329 A JP 4134329A JP 13432992 A JP13432992 A JP 13432992A JP H05304986 A JPH05304986 A JP H05304986A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】ｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識し、該蛋白質
と結合することでヒトインタ−ロイキン−６の生理作用
を阻害するモノクロ−ナル抗体、これを産生するハイブ
リド−マ、このハイブリド−マを使用する前記モノクロ
−ナル抗体の製造方法、更にこのモノクロ−ナル抗体を
使用するＩＬ−６生理作用阻害剤の提供。 【構成】インタ−ロイキン−６のシグナル伝達蛋白質で
あるｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識し、該蛋白質と結
合することでインタ−ロイキン−６の生理作用を阻害し
得るモノクロ−ナル抗体等。
と結合することでヒトインタ−ロイキン−６の生理作用
を阻害するモノクロ−ナル抗体、これを産生するハイブ
リド−マ、このハイブリド−マを使用する前記モノクロ
−ナル抗体の製造方法、更にこのモノクロ−ナル抗体を
使用するＩＬ−６生理作用阻害剤の提供。 【構成】インタ−ロイキン−６のシグナル伝達蛋白質で
あるｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識し、該蛋白質と結
合することでインタ−ロイキン−６の生理作用を阻害し
得るモノクロ−ナル抗体等。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、インタ−ロイキン−６
（以下ＩＬ−６と記載する）のシグナル伝達に関与する
ｇｐ１３０蛋白質、特にヒトｇｐ１３０蛋白質を認識す
る抗体に関する。
（以下ＩＬ−６と記載する）のシグナル伝達に関与する
ｇｐ１３０蛋白質、特にヒトｇｐ１３０蛋白質を認識す
る抗体に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＩＬ−６は、まず標的細胞上のＩＬ−６
レセプタ−（特開平２−２８８８９８号）と結合して複
合体を形成する。このＩＬ−６とＩＬ−６レセプタ−の
複合体は、更に標的細胞上の膜蛋白質であるｇｐ１３０
蛋白質（特開平４−２９９９７号）と結合することで、
該標的細胞にＩＬ−６の種々の生理活性（田賀ら、Cell
58 巻、p573、1989年）を伝達する（田賀ら、Cell 58
巻、p573、1989年）。
レセプタ−（特開平２−２８８８９８号）と結合して複
合体を形成する。このＩＬ−６とＩＬ−６レセプタ−の
複合体は、更に標的細胞上の膜蛋白質であるｇｐ１３０
蛋白質（特開平４−２９９９７号）と結合することで、
該標的細胞にＩＬ−６の種々の生理活性（田賀ら、Cell
58 巻、p573、1989年）を伝達する（田賀ら、Cell 58
巻、p573、1989年）。
【０００３】ＩＬ−６の生理作用として血小板増多作用
（石橋ら、Blood 74巻、p1241 、1989年）等の有用な作
用が報告され、新しい薬剤として注目されている一方
で、ＩＬ−６の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因
子であることも報告され、その生理活性を阻害する薬剤
もまた注目されている（平野ら、Immunology today、11
巻、p443、1990年）。このようなＩＬ−６阻害剤とし
て、ＩＬ−６に対する抗体の投与が末期ミエロ−マの患
者に治療効果を与えたという報告がある（B.Kleinら、E
ur.Cytokine Net. 1 巻、p193、1990年）。
（石橋ら、Blood 74巻、p1241 、1989年）等の有用な作
用が報告され、新しい薬剤として注目されている一方
で、ＩＬ−６の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因
子であることも報告され、その生理活性を阻害する薬剤
もまた注目されている（平野ら、Immunology today、11
巻、p443、1990年）。このようなＩＬ−６阻害剤とし
て、ＩＬ−６に対する抗体の投与が末期ミエロ−マの患
者に治療効果を与えたという報告がある（B.Kleinら、E
ur.Cytokine Net. 1 巻、p193、1990年）。
【０００４】このようなＩＬ−６阻害剤として前記ＩＬ
−６に対する抗体の他、前述の如くＩＬ−６のシグナ
ル、即ち生理作用を伝達する蛋白質であるｇｐ１３０蛋
白質に対する抗体が期待されている。またｇｐ１３０蛋
白質はＩＬ−６以外の生理活性物質、例えばある種のガ
ン細胞増殖因子であるオンコスタチンＭや、また例えば
ある種の白血病増殖阻害因子であるＬＩＦ（リュ−ケミ
アインヒビトリ−ファクタ−）のシグナル伝達蛋白であ
るとの報告があり（Gearing ら、SCIENCE 、255巻、p14
34 、1992年）、本発明の抗ｇｐ１３０蛋白質抗体がそ
れら生理活性物質の阻害剤として期待できる。
−６に対する抗体の他、前述の如くＩＬ−６のシグナ
ル、即ち生理作用を伝達する蛋白質であるｇｐ１３０蛋
白質に対する抗体が期待されている。またｇｐ１３０蛋
白質はＩＬ−６以外の生理活性物質、例えばある種のガ
ン細胞増殖因子であるオンコスタチンＭや、また例えば
ある種の白血病増殖阻害因子であるＬＩＦ（リュ−ケミ
アインヒビトリ−ファクタ−）のシグナル伝達蛋白であ
るとの報告があり（Gearing ら、SCIENCE 、255巻、p14
34 、1992年）、本発明の抗ｇｐ１３０蛋白質抗体がそ
れら生理活性物質の阻害剤として期待できる。
【０００５】ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体としては、
例えば特開平３−２１９８９４号に記載された、ｇｐ１
３０蛋白質をマウスに免疫して得られたＡＭ６４やＡＭ
２７７抗体がある。
例えば特開平３−２１９８９４号に記載された、ｇｐ１
３０蛋白質をマウスに免疫して得られたＡＭ６４やＡＭ
２７７抗体がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】従来知られたＡＭ６４
抗体等は、ＩＬ−６の生理作用を阻害する（日比ら、Ce
ll、63巻、p1149 、1990年）ものの、その阻害活性は十
分なものではない。
抗体等は、ＩＬ−６の生理作用を阻害する（日比ら、Ce
ll、63巻、p1149 、1990年）ものの、その阻害活性は十
分なものではない。
【０００７】
【課題を解決するための手段】以上のような状況に鑑み
て本発明者らは、リコンビナントｇｐ１３０蛋白質をマ
ウスに免疫し、ｇｐ１３０蛋白質を認識する多数のハイ
ブリド−マを樹立し、ｇｐ１３０蛋白質を認識するモノ
クロ−ナル抗体をスクリ−ニングした結果、ＩＬ−６の
生理作用を強く阻害する３種のモノクロ−ナル抗体とこ
れらを産生するハイブリド−マを発明するに至った。
て本発明者らは、リコンビナントｇｐ１３０蛋白質をマ
ウスに免疫し、ｇｐ１３０蛋白質を認識する多数のハイ
ブリド−マを樹立し、ｇｐ１３０蛋白質を認識するモノ
クロ−ナル抗体をスクリ−ニングした結果、ＩＬ−６の
生理作用を強く阻害する３種のモノクロ−ナル抗体とこ
れらを産生するハイブリド−マを発明するに至った。
【０００８】即ち本発明は、ＩＬ−６のシグナル伝達蛋
白質であるｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識し、該蛋白
質と結合することでインタ−ロイキン−６の生理作用を
阻害し得るモノクロ−ナル抗体であり、特にＩＬ−６と
ヒトｇｐ１３０間のシグナル伝達を阻害し得るものであ
る。例えば本発明のモノクロ−ナル抗体は、ＧＰＺ３５
抗体、ＧＰＸ ７抗体又はＧＰＸ ２２抗体である。
白質であるｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識し、該蛋白
質と結合することでインタ−ロイキン−６の生理作用を
阻害し得るモノクロ−ナル抗体であり、特にＩＬ−６と
ヒトｇｐ１３０間のシグナル伝達を阻害し得るものであ
る。例えば本発明のモノクロ−ナル抗体は、ＧＰＺ３５
抗体、ＧＰＸ ７抗体又はＧＰＸ ２２抗体である。
【０００９】また本発明は、これらモノクロ−ナル抗体
を産生するハイブリド−マである。例えば本発明のハイ
ブリド−マは、ハイブリド−マＧＰＺ ３５（微工研菌
寄第１２９４０号）、ハイブリド−マＧＰＸ ７（微工
研菌寄第１２９３８号）又はハイブリド−マＧＰＸ ２
２（微工研菌寄第１２９３９号）である。
を産生するハイブリド−マである。例えば本発明のハイ
ブリド−マは、ハイブリド−マＧＰＺ ３５（微工研菌
寄第１２９４０号）、ハイブリド−マＧＰＸ ７（微工
研菌寄第１２９３８号）又はハイブリド−マＧＰＸ ２
２（微工研菌寄第１２９３９号）である。
【００１０】更に本発明は、前記ハイブリド−マを培養
することを特徴とする前記モノクロ−ナル抗体の製造方
法に関するものである。例えば本発明は、ハイブリド−
マＧＰＺ ３５（微工研菌寄第１２９４０号）、ハイブ
リド−マＧＰＸ ７（微工研菌寄第１２９３８号）又は
ハイブリド−マＧＰＸ ２２（微工研菌寄第１２９３９
号）から選ばれるハイブリド−マを培養することを特徴
とする、ｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識し、該蛋白質
と結合することでＩＬ−６の生理作用を阻害することを
特徴とする前記モノクロ−ナル抗体の製造である。
することを特徴とする前記モノクロ−ナル抗体の製造方
法に関するものである。例えば本発明は、ハイブリド−
マＧＰＺ ３５（微工研菌寄第１２９４０号）、ハイブ
リド−マＧＰＸ ７（微工研菌寄第１２９３８号）又は
ハイブリド−マＧＰＸ ２２（微工研菌寄第１２９３９
号）から選ばれるハイブリド−マを培養することを特徴
とする、ｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識し、該蛋白質
と結合することでＩＬ−６の生理作用を阻害することを
特徴とする前記モノクロ−ナル抗体の製造である。
【００１１】そして本発明は、ｇｐ１３０蛋白質を特異
的に認識し、該蛋白質と結合することでヒトインタ−ロ
イキン−６の生理作用を阻害する、これらモノクロ−ナ
ル抗体の１種以上を有効成分として含む、ＩＬ−６の生
理作用阻害剤である。以下、本発明を詳細に説明する。
的に認識し、該蛋白質と結合することでヒトインタ−ロ
イキン−６の生理作用を阻害する、これらモノクロ−ナ
ル抗体の１種以上を有効成分として含む、ＩＬ−６の生
理作用阻害剤である。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１２】本発明のモノクロ−ナル抗体は、ＩＬ−６
のシグナルを伝達するｇｐ１３０蛋白質を抗原として製
造されたものである。ｇｐ１３０蛋白質は、ＩＬ−６の
存在下でＩＬ−６レセプタ−と結合するが、ＩＬ−６非
存在下ではＩＬ−６レセプタ−と結合しない、ＳＤＳ−
ポリアクリルアミド電気泳動で１３０ｋＤａの見かけ上
の分子量を示す糖蛋白である、等の特徴を有する。
のシグナルを伝達するｇｐ１３０蛋白質を抗原として製
造されたものである。ｇｐ１３０蛋白質は、ＩＬ−６の
存在下でＩＬ−６レセプタ−と結合するが、ＩＬ−６非
存在下ではＩＬ−６レセプタ−と結合しない、ＳＤＳ−
ポリアクリルアミド電気泳動で１３０ｋＤａの見かけ上
の分子量を示す糖蛋白である、等の特徴を有する。
【００１３】本発明のモノクロ−ナル抗体は、１９９１
年度日本免疫学会総会・学術集会記録21巻、p108（斎藤
ら）に記載された方法に従い、遺伝子工学的に製造され
たリコンビナントｇｐ１３０蛋白質（可溶型）をマウス
に免疫し、脾臓細胞を取得しこれを樹立されたミエロ−
マ細胞（ＳＰ２／０株等）と融合させて取得したハイブ
リド−マにより生産される。例えばハイブリド−マＧＰ
Ｚ ３５（微工研菌寄１２９４０号）、ＧＰＸ ７（微
工研菌寄１２９３８号）又はＧＰＸ ２２（微工研菌寄
１２９３９号）により産生される、モノクロ−ナルＧＰ
Ｚ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体が例示でき
る。
年度日本免疫学会総会・学術集会記録21巻、p108（斎藤
ら）に記載された方法に従い、遺伝子工学的に製造され
たリコンビナントｇｐ１３０蛋白質（可溶型）をマウス
に免疫し、脾臓細胞を取得しこれを樹立されたミエロ−
マ細胞（ＳＰ２／０株等）と融合させて取得したハイブ
リド−マにより生産される。例えばハイブリド−マＧＰ
Ｚ ３５（微工研菌寄１２９４０号）、ＧＰＸ ７（微
工研菌寄１２９３８号）又はＧＰＸ ２２（微工研菌寄
１２９３９号）により産生される、モノクロ−ナルＧＰ
Ｚ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体が例示でき
る。
【００１４】本発明のモノクロ−ナル抗体、例えばモノ
クロ−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ７又はＧＰＸ ２２抗
体がｇｐ１３０蛋白質のいかなる部分を認識するのかは
定かではないが、少なくともこれらモノクロ−ナル抗体
は、ｇｐ１３０蛋白質と結合することにより、先に知ら
れたＡＭ６４抗体やＡＭ２７７抗体に比べ、強くＩＬ−
６の生理作用を阻害する。またこれらモノクロ−ナル抗
体は、抗原に用いたリコンビナントｇｐ１３０蛋白質以
外にも、細胞膜、血清又は尿から精製した天然ｇｐ１３
０蛋白質とも反応性を有する。
クロ−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ７又はＧＰＸ ２２抗
体がｇｐ１３０蛋白質のいかなる部分を認識するのかは
定かではないが、少なくともこれらモノクロ−ナル抗体
は、ｇｐ１３０蛋白質と結合することにより、先に知ら
れたＡＭ６４抗体やＡＭ２７７抗体に比べ、強くＩＬ−
６の生理作用を阻害する。またこれらモノクロ−ナル抗
体は、抗原に用いたリコンビナントｇｐ１３０蛋白質以
外にも、細胞膜、血清又は尿から精製した天然ｇｐ１３
０蛋白質とも反応性を有する。
【００１５】本発明のモノクロ−ナル抗体は、前記した
ハイブリド−マ、例えばＧＰＺ ３５（微工研菌寄１２
９４０号）、ＧＰＸ ７（微工研菌寄１２９３８号）又
はＧＰＸ ２２（微工研菌寄１２９３９号）を培養する
こと等により製造することができる。培養は通常の方法
で行えば良い。また、これらハイブリド−マの２種以上
を同時に培養すれば、２種以上の本発明のモノクロ−ナ
ル抗体の混合液を得ることもできる。
ハイブリド−マ、例えばＧＰＺ ３５（微工研菌寄１２
９４０号）、ＧＰＸ ７（微工研菌寄１２９３８号）又
はＧＰＸ ２２（微工研菌寄１２９３９号）を培養する
こと等により製造することができる。培養は通常の方法
で行えば良い。また、これらハイブリド−マの２種以上
を同時に培養すれば、２種以上の本発明のモノクロ−ナ
ル抗体の混合液を得ることもできる。
【００１６】培養液中に産生された本発明のモノクロ−
ナルの精製は、例えば硫安塩析、ｇｐ１３０蛋白質固定
化ゲルを使用したアフィニティ−クロマトグラフを使用
すれば良い。なお、本発明では、例えばマウスの腹腔に
ハイブリド−マを接種し、該マウスを飼育してその腹水
中にモノクロ−ナル抗体を産生させても良い。
ナルの精製は、例えば硫安塩析、ｇｐ１３０蛋白質固定
化ゲルを使用したアフィニティ−クロマトグラフを使用
すれば良い。なお、本発明では、例えばマウスの腹腔に
ハイブリド−マを接種し、該マウスを飼育してその腹水
中にモノクロ−ナル抗体を産生させても良い。
【００１７】本発明のモノクロ−ナル抗体は、前記した
ようにｇｐ１３０蛋白質と結合することによりＩＬ−６
の生理作用を阻害する。従って、これら抗体を有効成分
とすることで、ＩＬ−６の生理作用阻害剤が提供でき
る。ｇｐ１３０蛋白質はＩＬ−６のシグナル伝達を阻害
する蛋白質として知見されたものであるが、その生理作
用の詳細は完全には解明されておらず、他の、例えばあ
る種の癌細胞増殖因子であるオンコスタチンＭやある種
の白血病増殖阻害因子であるＬＩＦ等は勿論、ｇｐ１３
０蛋白質がそのシグナル伝達に関与する生理活性物質に
対する阻害剤としても使用できる。
ようにｇｐ１３０蛋白質と結合することによりＩＬ−６
の生理作用を阻害する。従って、これら抗体を有効成分
とすることで、ＩＬ−６の生理作用阻害剤が提供でき
る。ｇｐ１３０蛋白質はＩＬ−６のシグナル伝達を阻害
する蛋白質として知見されたものであるが、その生理作
用の詳細は完全には解明されておらず、他の、例えばあ
る種の癌細胞増殖因子であるオンコスタチンＭやある種
の白血病増殖阻害因子であるＬＩＦ等は勿論、ｇｐ１３
０蛋白質がそのシグナル伝達に関与する生理活性物質に
対する阻害剤としても使用できる。
【００１８】
【実施例】以下に本発明を更に詳細に説明するために実
施例を記載するが、本発明はこれら実施例に限定される
ものではない。
施例を記載するが、本発明はこれら実施例に限定される
ものではない。
【００１９】実施例１モノクロ−ナル抗体ＧＰＺ ３
５、ＧＰＸ ７、ＧＰＸ ２２の製造ＣＨＯ細胞由来の
リコンビナントｇｐ１３０蛋白質（可溶型、斎藤ら、１
９９１年度日本免疫学会総会・学術集会記録、21巻、p1
08）を使用し、これを１０日に１回、合計４回に渡り５
０μg ずつＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔に免疫した。
５、ＧＰＸ ７、ＧＰＸ ２２の製造ＣＨＯ細胞由来の
リコンビナントｇｐ１３０蛋白質（可溶型、斎藤ら、１
９９１年度日本免疫学会総会・学術集会記録、21巻、p1
08）を使用し、これを１０日に１回、合計４回に渡り５
０μg ずつＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔に免疫した。
【００２０】マウスから脾臓細胞を取得し、ミエロ−マ
細胞（ＳＰ２／０株）とポリエチレングリコ−ルを用い
て融合させた。
細胞（ＳＰ２／０株）とポリエチレングリコ−ルを用い
て融合させた。
【００２１】融合細胞をＤＭＥＭ，ＨＡＴ培地で培養
し、培養液中にモノクロ−ナル抗体を産生させ、スクリ
−ニングを行った。即ち、免疫原として使用したリコン
ビナントｇｐ１３０蛋白質（可溶型）を９６穴のプレ−
トに固相化し、ハイブリド−マの培養上清及びアルカリ
フォスファタ−ゼを結合させた抗マウスイムノグロブリ
ン抗体を加えｇｐ１３０蛋白質を認識するモノクロ−ナ
ル抗体の存在を調べた。このようにして、ｇｐ１３０蛋
白質を認識するモノクロ−ナル抗体の存在が確認された
培養液については、細胞を限界希釈法を用いてクロ−ニ
ングした。このようにして、最終的にｇｐ１３０蛋白質
を認識するモノクロ−ナル抗体を産生する６６クロ−ン
のハイブリド−マを樹立した。
し、培養液中にモノクロ−ナル抗体を産生させ、スクリ
−ニングを行った。即ち、免疫原として使用したリコン
ビナントｇｐ１３０蛋白質（可溶型）を９６穴のプレ−
トに固相化し、ハイブリド−マの培養上清及びアルカリ
フォスファタ−ゼを結合させた抗マウスイムノグロブリ
ン抗体を加えｇｐ１３０蛋白質を認識するモノクロ−ナ
ル抗体の存在を調べた。このようにして、ｇｐ１３０蛋
白質を認識するモノクロ−ナル抗体の存在が確認された
培養液については、細胞を限界希釈法を用いてクロ−ニ
ングした。このようにして、最終的にｇｐ１３０蛋白質
を認識するモノクロ−ナル抗体を産生する６６クロ−ン
のハイブリド−マを樹立した。
【００２２】前記６６クロ−ンのハイブリド−マについ
て、以下の操作を行った。まず９６穴プレ−トにマウス
由来の抗ヒトｇｐ１３０蛋白質モノクロ−ナルＡＭ６４
抗体（特開平３−２１９８９４号）を固定化した。次に
ＣＨＯ細胞由来のｇｐ１３０蛋白質（可溶型、前記参
照）を加えて前記抗体と反応させ、結合させた。
て、以下の操作を行った。まず９６穴プレ−トにマウス
由来の抗ヒトｇｐ１３０蛋白質モノクロ−ナルＡＭ６４
抗体（特開平３−２１９８９４号）を固定化した。次に
ＣＨＯ細胞由来のｇｐ１３０蛋白質（可溶型、前記参
照）を加えて前記抗体と反応させ、結合させた。
【００２３】各穴に、大腸菌を使用して製造したリコン
ビナントＩＬ−６（Yasukawaら、Biotech.Lett. 12巻、
p419、1990年）とＣＨＯ細胞を使用して製造したリコン
ビナントＩＬ−６レセプタ−（Yasukawaら、J.Biochem.
108巻、p673、1990年）の混合物、及び各ハイブリド−
マの培養液上清を同時に添加した。
ビナントＩＬ−６（Yasukawaら、Biotech.Lett. 12巻、
p419、1990年）とＣＨＯ細胞を使用して製造したリコン
ビナントＩＬ−６レセプタ−（Yasukawaら、J.Biochem.
108巻、p673、1990年）の混合物、及び各ハイブリド−
マの培養液上清を同時に添加した。
【００２４】次に、この条件下でＡＭ６４抗体及びｇｐ
１３０蛋白質を介して固定化されたＩＬ−６レセプタ−
を、モノルモットにＩＬ−６レセプタ−を免疫して製造
した抗ＩＬ−６レセプタ−ポリクロ−ナル抗体及びアル
カリフォスファタ−ゼで標識した抗モルモットイムノグ
ロブリン抗体を添加し、穴を洗浄し、アルカリフォスフ
ァタ−ゼ基質を添加することにより、添加したｇｐ１３
０蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体のＩＬ−６の生理
作用阻害効果を測定した。
１３０蛋白質を介して固定化されたＩＬ−６レセプタ−
を、モノルモットにＩＬ−６レセプタ−を免疫して製造
した抗ＩＬ−６レセプタ−ポリクロ−ナル抗体及びアル
カリフォスファタ−ゼで標識した抗モルモットイムノグ
ロブリン抗体を添加し、穴を洗浄し、アルカリフォスフ
ァタ−ゼ基質を添加することにより、添加したｇｐ１３
０蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体のＩＬ−６の生理
作用阻害効果を測定した。
【００２５】その結果、前記６６クロ−ンのうち、３つ
のクロ−ン（ＧＰＺ ３５：微工研菌寄第１２９４０
号、ＧＰＸ ７：微工研菌寄第１２９３８号、ＧＰＸ
２２：微工研菌寄第１２９３９号）が産生したモノクロ
−ナル抗体にＩＬ−６の生理作用阻害効果が認められ
た。
のクロ−ン（ＧＰＺ ３５：微工研菌寄第１２９４０
号、ＧＰＸ ７：微工研菌寄第１２９３８号、ＧＰＸ
２２：微工研菌寄第１２９３９号）が産生したモノクロ
−ナル抗体にＩＬ−６の生理作用阻害効果が認められ
た。
【００２６】実施例２ ｇｐ１３０蛋白質に対するモノ
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６のヒトＢ細胞株ＣＬ
４の抗体産生誘導作用の阻害効果 実施例１で調製された２つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５及びＧＰＸ ２２抗体を精製した。
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６のヒトＢ細胞株ＣＬ
４の抗体産生誘導作用の阻害効果 実施例１で調製された２つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５及びＧＰＸ ２２抗体を精製した。
【００２７】ＣＬ４細胞（ T.Hirano ら、Proc.Natl.Ac
ad.Sci.U.S.A. 82巻、p5490 、1985年）は、ＩＬ−６の
生理作用により抗体産生細胞に分化する。このＣＬ４細
胞懸濁液を、細胞数が１×１０4 細胞／０．２ml／穴の
条件となるように９６穴のプレ−トに添加し、種々濃度
となるように調製した前記２種類のモノクロ−ナル抗体
又は対照（マウスイムノグロブリン）を添加し、３日
間、ＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。培養終了後、培
養液中のイムノグロブリン量を酵素免疫測定法（ＥＬＩ
ＳＡ）により測定した。なお各穴には、１０Ｕ／mlのＩ
Ｌ−６を添加した。
ad.Sci.U.S.A. 82巻、p5490 、1985年）は、ＩＬ−６の
生理作用により抗体産生細胞に分化する。このＣＬ４細
胞懸濁液を、細胞数が１×１０4 細胞／０．２ml／穴の
条件となるように９６穴のプレ−トに添加し、種々濃度
となるように調製した前記２種類のモノクロ−ナル抗体
又は対照（マウスイムノグロブリン）を添加し、３日
間、ＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。培養終了後、培
養液中のイムノグロブリン量を酵素免疫測定法（ＥＬＩ
ＳＡ）により測定した。なお各穴には、１０Ｕ／mlのＩ
Ｌ−６を添加した。
【００２８】その結果、モノクロ−ナルＧＰＺ ３５又
はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には添加濃度に依存
したＣＬ４細胞の抗体産生の阻害が認められたが、対照
であるマウスイムノグロブリンを添加した場合には阻害
は認められなかった。このことは、本発明のモノクロ−
ナル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識し、かつ、ＩＬ−６
の生理作用（ＣＬ４細胞の抗体産生誘導作用）を阻害す
ることを示している。結果を図１に示す。
はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には添加濃度に依存
したＣＬ４細胞の抗体産生の阻害が認められたが、対照
であるマウスイムノグロブリンを添加した場合には阻害
は認められなかった。このことは、本発明のモノクロ−
ナル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識し、かつ、ＩＬ−６
の生理作用（ＣＬ４細胞の抗体産生誘導作用）を阻害す
ることを示している。結果を図１に示す。
【００２９】実施例３ ｇｐ１３０蛋白質に対するモノ
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６のヒトＴ細胞ＫＴ３
の増殖誘導作用の阻害効果 実施例１で調製された３つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２抗体を
精製した。
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６のヒトＴ細胞ＫＴ３
の増殖誘導作用の阻害効果 実施例１で調製された３つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２抗体を
精製した。
【００３０】Ｔ細胞ＫＴ３株（Y.Hirataら、J.Immuno
l.、143 巻、p2900 、1989年）は、ＩＬ−６の生理作用
により増殖する。このＴ細胞ＫＴ３株懸濁液を細胞数が
２×１０4 細胞／０．２ml／穴の条件となるように９６
穴のプレ−トに添加し、種々濃度となるように調製した
前記３種類のモノクロ−ナル抗体又は対照（マウスイム
ノグロブリン）を添加し、３日間、ＲＰＭＩ１６４０培
地で培養した。培養終了後細胞数を市販のキット（Chem
icon社製）を用いてＭＴＴ法で測定した。なおＩＬ−６
は、０．２５Ｕ／mlとなるように添加した。
l.、143 巻、p2900 、1989年）は、ＩＬ−６の生理作用
により増殖する。このＴ細胞ＫＴ３株懸濁液を細胞数が
２×１０4 細胞／０．２ml／穴の条件となるように９６
穴のプレ−トに添加し、種々濃度となるように調製した
前記３種類のモノクロ−ナル抗体又は対照（マウスイム
ノグロブリン）を添加し、３日間、ＲＰＭＩ１６４０培
地で培養した。培養終了後細胞数を市販のキット（Chem
icon社製）を用いてＭＴＴ法で測定した。なおＩＬ−６
は、０．２５Ｕ／mlとなるように添加した。
【００３１】その結果、モノクロ−ナルＧＰＺ ３５、
ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には、
添加濃度に依存した分化細胞数の減少が認められたが、
対照であるマウスイムノグロブリンを添加した場合には
減少は認められなかった。このことは、本発明のモノク
ロ−ナル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識し、かつ、ＩＬ
−６の生理作用（Ｔ細胞ＴＫ３株の増殖誘導作用）を阻
害することを示している。結果を図２に示す。
ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には、
添加濃度に依存した分化細胞数の減少が認められたが、
対照であるマウスイムノグロブリンを添加した場合には
減少は認められなかった。このことは、本発明のモノク
ロ−ナル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識し、かつ、ＩＬ
−６の生理作用（Ｔ細胞ＴＫ３株の増殖誘導作用）を阻
害することを示している。結果を図２に示す。
【００３２】実施例４ ｇｐ１３０蛋白質に対するモノ
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６及びＩＬ−６レセプ
タ−複合体の、ｇｐ１３０蛋白質への結合阻害効果 実施例１で調製された３つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２抗体を
精製した。
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６及びＩＬ−６レセプ
タ−複合体の、ｇｐ１３０蛋白質への結合阻害効果 実施例１で調製された３つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２抗体を
精製した。
【００３３】９６穴のプレ−トにマウスを用いて製造し
た抗ヒトｇｐ１３０蛋白質モノクロ−ナルＡＭ６４抗体
を固定化し、ＣＨＯ細胞を用いて製造したリコンビナン
トｇｐ１３０蛋白質を添加して結合させた。次に大腸菌
を用いて製造したリコンビナントＩＬ−６及びＣＨＯ細
胞を用いて製造したリコンビナントＩＬ−６レセプタ−
（可溶型）の混合物と、種々の濃度の前記３種のモノク
ロ−ナル抗体又は対照としてマウスイムノグロブリンを
同時に添加した。なお、ＩＬ−６とＩＬ−６レセプタ−
はそれぞれ５μg ／mlとなるように添加した。
た抗ヒトｇｐ１３０蛋白質モノクロ−ナルＡＭ６４抗体
を固定化し、ＣＨＯ細胞を用いて製造したリコンビナン
トｇｐ１３０蛋白質を添加して結合させた。次に大腸菌
を用いて製造したリコンビナントＩＬ−６及びＣＨＯ細
胞を用いて製造したリコンビナントＩＬ−６レセプタ−
（可溶型）の混合物と、種々の濃度の前記３種のモノク
ロ−ナル抗体又は対照としてマウスイムノグロブリンを
同時に添加した。なお、ＩＬ−６とＩＬ−６レセプタ−
はそれぞれ５μg ／mlとなるように添加した。
【００３４】次に、この条件下でＡＭ６４抗体及びｇｐ
１３０蛋白質を介して固定化されたＩＬ−６レセプタ−
を、モルモットにＩＬ−６レセプタ−を免疫して製造し
た抗ＩＬ−６レセプタ−ポリクロ−ナル抗体及びアルカ
リフォスファタ−ゼで標識した抗モルモットイムノグロ
ブリン抗体を添加し、穴を洗浄し、アルカリフォスファ
タ−ゼ基質を添加することにより、添加したｇｐ１３０
蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体の効果を測定した。
１３０蛋白質を介して固定化されたＩＬ−６レセプタ−
を、モルモットにＩＬ−６レセプタ−を免疫して製造し
た抗ＩＬ−６レセプタ−ポリクロ−ナル抗体及びアルカ
リフォスファタ−ゼで標識した抗モルモットイムノグロ
ブリン抗体を添加し、穴を洗浄し、アルカリフォスファ
タ−ゼ基質を添加することにより、添加したｇｐ１３０
蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体の効果を測定した。
【００３５】その結果、モノクロ−ナルＧＰＺ ３５、
ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には、
添加濃度に依存して測定されたシグナル、即ちｇｐ１３
０蛋白質と結合したＩＬ−６レセプタ−、は減少した
が、マウスイムノグロブリンを添加した場合には減少は
認められなかった。このことは、本発明のモノクロ−ナ
ル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識し、かつ、ＩＬ−６及
びＩＬ−６レセプタ−の複合体がｇｐ１３０蛋白質と結
合するのを阻害することを示している。結果を図３に示
す。
ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には、
添加濃度に依存して測定されたシグナル、即ちｇｐ１３
０蛋白質と結合したＩＬ−６レセプタ−、は減少した
が、マウスイムノグロブリンを添加した場合には減少は
認められなかった。このことは、本発明のモノクロ−ナ
ル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識し、かつ、ＩＬ−６及
びＩＬ−６レセプタ−の複合体がｇｐ１３０蛋白質と結
合するのを阻害することを示している。結果を図３に示
す。
【００３６】実施例５ ｇｐ１３０蛋白質に対するモノ
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６のヒトミエロ−マ増
殖促進作用の阻害効果 実施例１で調製された３つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２抗体を
精製した。
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６のヒトミエロ−マ増
殖促進作用の阻害効果 実施例１で調製された３つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２抗体を
精製した。
【００３７】ＩＬ−６が存在することでオ−トクライン
的に増殖するヒトミエロ−マＳ６Ｂ４５細胞の懸濁液
を、２４穴のプレ−トに５×１０4 細胞／０．５ml／穴
となるように添加し、種々の濃度の前記３種のモノクロ
−ナル抗体又は対照としてマウスイムノグロブリンを加
えてＲＰＭＩ１６４０培地で培養し、３日後のミエロ−
マ細胞の細胞数を市販のキット（Chemicon社製）を用い
てＭＴＴ法で測定した。
的に増殖するヒトミエロ−マＳ６Ｂ４５細胞の懸濁液
を、２４穴のプレ−トに５×１０4 細胞／０．５ml／穴
となるように添加し、種々の濃度の前記３種のモノクロ
−ナル抗体又は対照としてマウスイムノグロブリンを加
えてＲＰＭＩ１６４０培地で培養し、３日後のミエロ−
マ細胞の細胞数を市販のキット（Chemicon社製）を用い
てＭＴＴ法で測定した。
【００３８】その結果、モノクロ−ナルＧＰＺ ３５、
ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には、
添加濃度に依存してミエロ−マのオ−トクライン的増殖
の阻害が認められたが、マウスイムノグロブリンを添加
した場合には阻害は認められなかった。このことは、本
発明のモノクロ−ナル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識
し、かつ、ＩＬ−６の生理作用（ミエロ−マのオ−トク
ライン的増殖）を阻害することを示している。結果を図
４に示す。
ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には、
添加濃度に依存してミエロ−マのオ−トクライン的増殖
の阻害が認められたが、マウスイムノグロブリンを添加
した場合には阻害は認められなかった。このことは、本
発明のモノクロ−ナル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識
し、かつ、ＩＬ−６の生理作用（ミエロ−マのオ−トク
ライン的増殖）を阻害することを示している。結果を図
４に示す。
【００３９】実施例６ ｇｐ１３０蛋白質に対するモノ
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６及びＩＬ−６レセプ
タ−存在下でのマウス細胞ＢＡＦ１３０の増殖誘導作用
の阻害効果 実施例１で調製された３つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２抗体を
精製した。
クロ−ナル抗体を用いた、ＩＬ−６及びＩＬ−６レセプ
タ−存在下でのマウス細胞ＢＡＦ１３０の増殖誘導作用
の阻害効果 実施例１で調製された３つのハイブリド−マをＢＡＬＢ
／ｃマウスの腹腔に移植し、腹水からそれぞれモノクロ
−ナルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２抗体を
精製した。
【００４０】マウスＢＡＦ１３０は、本来ヒトｇｐ１３
０蛋白質を発現していないマウス細胞ＢＡＦ（Hatakeya
maら、Cell、63巻、p154、1989年）にヒトｇｐ１３０蛋
白質をコ−ドする遺伝子を導入して形質転換させ、当該
蛋白質を発現させた細胞である。この細胞の懸濁液を、
９６穴のプレ−トに８×１０4 細胞／０．２ml／穴とな
るように添加し、それぞれ２５０ng／mlのＩＬ−６及び
ＩＬ−６レセプタ−を添加した。この条件下で種々の濃
度の前記３種のモノクロ−ナル抗体又は対照としてマウ
スイムノグロブリンを加えてＲＰＭＩ１６４０培地で２
日間培養した。
０蛋白質を発現していないマウス細胞ＢＡＦ（Hatakeya
maら、Cell、63巻、p154、1989年）にヒトｇｐ１３０蛋
白質をコ−ドする遺伝子を導入して形質転換させ、当該
蛋白質を発現させた細胞である。この細胞の懸濁液を、
９６穴のプレ−トに８×１０4 細胞／０．２ml／穴とな
るように添加し、それぞれ２５０ng／mlのＩＬ−６及び
ＩＬ−６レセプタ−を添加した。この条件下で種々の濃
度の前記３種のモノクロ−ナル抗体又は対照としてマウ
スイムノグロブリンを加えてＲＰＭＩ１６４０培地で２
日間培養した。
【００４１】培養後、各穴に７５０nCi の 3Ｈチミジン
を加え、６時間後に取り込まれた3 Ｈチミジン量をシン
チレ−ションカウンタ−で測定した。
を加え、６時間後に取り込まれた3 Ｈチミジン量をシン
チレ−ションカウンタ−で測定した。
【００４２】その結果、モノクロ−ナルＧＰＺ ３５、
ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には、
添加濃度に依存して3 Ｈチミジンの取り込みの減少、即
ちマウス細胞ＢＡＦ１３０の増殖の阻害、が認められた
が、マウスイムノグロブリンを添加した場合には阻害は
認められなかった。このことは、本発明のモノクロ−ナ
ル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識し、かつ、ＩＬ−６の
生理作用（マウス細胞ＢＡＦ１３０の増殖作用）を阻害
することを示している。結果を図５に示す。
ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を添加した場合には、
添加濃度に依存して3 Ｈチミジンの取り込みの減少、即
ちマウス細胞ＢＡＦ１３０の増殖の阻害、が認められた
が、マウスイムノグロブリンを添加した場合には阻害は
認められなかった。このことは、本発明のモノクロ−ナ
ル抗体がｇｐ１３０蛋白質を認識し、かつ、ＩＬ−６の
生理作用（マウス細胞ＢＡＦ１３０の増殖作用）を阻害
することを示している。結果を図５に示す。
【００４３】
【発明の効果】本発明が提供する、ヒトｇｐ１３０蛋白
質を認識するモノクロ−ナル抗体、例えばＧＰＺ ３
５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体は、ヒトｇｐ１３
０蛋白質を認識し、かつ該蛋白質と結合することでヒト
インタ−ロイキン−６の生理作用を強く阻害する特徴を
有するものであり、ＩＬ−６の生理作用を阻害するＩＬ
−６阻害剤の開発が可能となる。このことは、これまで
知られていたｇｐ１３０蛋白質を認識するＡＭ６４抗体
やＡＭ２７７抗体では困難であり、例えば自己免疫疾患
やミエロ−マ等の、ＩＬ−６が引き起こし、又は関与し
ていると思われる各種疾患の治療剤として使用可能なモ
ノクロ−ナル抗体を初めて提供するものである。また更
には、ｇｐ１３０がシグナル伝達に関与していると思わ
れる、例えばある種の癌細胞増殖因子であるオンコスタ
チンＭやある種の白血病増殖阻害因子であるＬＩＦ等の
生理活性物質の阻害剤としても期待できる。
質を認識するモノクロ−ナル抗体、例えばＧＰＺ ３
５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体は、ヒトｇｐ１３
０蛋白質を認識し、かつ該蛋白質と結合することでヒト
インタ−ロイキン−６の生理作用を強く阻害する特徴を
有するものであり、ＩＬ−６の生理作用を阻害するＩＬ
−６阻害剤の開発が可能となる。このことは、これまで
知られていたｇｐ１３０蛋白質を認識するＡＭ６４抗体
やＡＭ２７７抗体では困難であり、例えば自己免疫疾患
やミエロ−マ等の、ＩＬ−６が引き起こし、又は関与し
ていると思われる各種疾患の治療剤として使用可能なモ
ノクロ−ナル抗体を初めて提供するものである。また更
には、ｇｐ１３０がシグナル伝達に関与していると思わ
れる、例えばある種の癌細胞増殖因子であるオンコスタ
チンＭやある種の白血病増殖阻害因子であるＬＩＦ等の
生理活性物質の阻害剤としても期待できる。
【００４４】本発明のモノクロ−ナル抗体は、ｇｐ１３
０蛋白質と結合することでＩＬ−６の生理作用を阻害す
るものである。ＩＬ−６と結合することによりその生理
活性を阻害する抗体ではＩＬ−６が存在する部位にこれ
を投与か又は局所的にこの抗体が止まるような工夫なし
にはＩＬ−６阻害剤として使用し難いのに対し、本発明
のモノクロ−ナル抗体は標的細胞が存在する部位に局所
的に投与することでＩＬ−６阻害剤として機能し得るも
のである。
０蛋白質と結合することでＩＬ−６の生理作用を阻害す
るものである。ＩＬ−６と結合することによりその生理
活性を阻害する抗体ではＩＬ−６が存在する部位にこれ
を投与か又は局所的にこの抗体が止まるような工夫なし
にはＩＬ−６阻害剤として使用し難いのに対し、本発明
のモノクロ−ナル抗体は標的細胞が存在する部位に局所
的に投与することでＩＬ−６阻害剤として機能し得るも
のである。
【００４５】また本発明によれば、ハイブリド−マＧＰ
Ｚ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２等を培養し又はマ
ウス等の腹腔に移植することで、前記したモノクロ−ナ
ルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を容
易に製造することが可能である。
Ｚ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ２２等を培養し又はマ
ウス等の腹腔に移植することで、前記したモノクロ−ナ
ルＧＰＺ ３５、ＧＰＸ ７又はＧＰＸ ２２抗体を容
易に製造することが可能である。
【図１】図１は、実施例２の結果を示すものである。横
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（４０５nmの吸光度）を示している。なお、図中の
破線は、抗体を添加せずに１０Ｕ／ml又は０Ｕ／mlとな
るようにＩＬ−６を添加した場合の結果を示している。
図中、黒丸、黒三角又は白三角は、それぞれＧＰＸ ２
２抗体、ＧＰＺ ３５抗体又はマウスイムノグロブリン
を添加した場合の結果を示している。
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（４０５nmの吸光度）を示している。なお、図中の
破線は、抗体を添加せずに１０Ｕ／ml又は０Ｕ／mlとな
るようにＩＬ−６を添加した場合の結果を示している。
図中、黒丸、黒三角又は白三角は、それぞれＧＰＸ ２
２抗体、ＧＰＺ ３５抗体又はマウスイムノグロブリン
を添加した場合の結果を示している。
【図２】図２は、実施例３の結果を示すものである。横
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（５７０−６３０nmの吸光度）を示している。なお
図中の破線は、抗体を添加せずに０．２５Ｕ／ml又は０
Ｕ／mlとなるようにＩＬ−６を添加した場合の結果を示
している。図中、黒丸、黒四角、黒三角又は白三角は、
それぞれＧＰＸ ２２抗体、ＧＰＸ ７抗体、ＧＰＺ
３５抗体又はマウスイムノグロブリンを添加した場合の
結果を示している。
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（５７０−６３０nmの吸光度）を示している。なお
図中の破線は、抗体を添加せずに０．２５Ｕ／ml又は０
Ｕ／mlとなるようにＩＬ−６を添加した場合の結果を示
している。図中、黒丸、黒四角、黒三角又は白三角は、
それぞれＧＰＸ ２２抗体、ＧＰＸ ７抗体、ＧＰＺ
３５抗体又はマウスイムノグロブリンを添加した場合の
結果を示している。
【図３】図３は、実施例４の結果を示すものである。横
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（４０５nmの吸光度）を示している。なお、図中の
破線は、抗体を添加しなかった場合の結果及びバックグ
ラウンドを示している。図中、黒丸、黒四角、黒三角又
は白三角は、それぞれＧＰＸ ２２抗体、ＧＰＸ ７抗
体、ＧＰＺ ３５抗体又はマウスイムノグロブリンを添
加した場合の結果を示している。
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（４０５nmの吸光度）を示している。なお、図中の
破線は、抗体を添加しなかった場合の結果及びバックグ
ラウンドを示している。図中、黒丸、黒四角、黒三角又
は白三角は、それぞれＧＰＸ ２２抗体、ＧＰＸ ７抗
体、ＧＰＺ ３５抗体又はマウスイムノグロブリンを添
加した場合の結果を示している。
【図４】図４は、実施例５の結果を示すものである。横
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（５７０−６３０nmの吸光度）を示している。なお
図中の破線は、抗体を添加しなかった場合の結果を示し
ている。図中、黒丸、黒四角、黒三角又は白三角は、そ
れぞれＧＰＸ ２２抗体、ＧＰＸ ７抗体、ＧＰＺ ３
５抗体又はマウスイムノグロブリンを添加した場合の結
果を示している。
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（５７０−６３０nmの吸光度）を示している。なお
図中の破線は、抗体を添加しなかった場合の結果を示し
ている。図中、黒丸、黒四角、黒三角又は白三角は、そ
れぞれＧＰＸ ２２抗体、ＧＰＸ ７抗体、ＧＰＺ ３
５抗体又はマウスイムノグロブリンを添加した場合の結
果を示している。
【図５】図５は、実施例６の結果を示すものである。横
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（取り込まれた3 Ｈチミジンの量、cpm ）を示して
いる。なお、図中の破線は、抗体を添加せずに、ＩＬ−
６及びＩＬ−６レセプタ−を添加した場合の結果又はＩ
Ｌ−６及びＩＬ−６レセプタ−を添加しなかった場合の
結果を示している。図中、黒丸、黒四角、黒三角又は白
三角は、それぞれＧＰＸ ２２抗体、ＧＰＸ ７抗体、
ＧＰＺ ３５抗体又はマウスイムノグロブリンを添加し
た場合の結果を示している。
軸は添加した抗体の量（μg ／ml）を示し、縦軸は測定
結果（取り込まれた3 Ｈチミジンの量、cpm ）を示して
いる。なお、図中の破線は、抗体を添加せずに、ＩＬ−
６及びＩＬ−６レセプタ−を添加した場合の結果又はＩ
Ｌ−６及びＩＬ−６レセプタ−を添加しなかった場合の
結果を示している。図中、黒丸、黒四角、黒三角又は白
三角は、それぞれＧＰＸ ２２抗体、ＧＰＸ ７抗体、
ＧＰＺ ３５抗体又はマウスイムノグロブリンを添加し
た場合の結果を示している。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ // Ｃ１２Ｎ 15/06 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 保川 清 神奈川県相模原市相模大野７−37−17− 401 (72)発明者 鈴木 浩 神奈川県海老名市柏ケ谷967−１−711
Claims (15)
- 【請求項１】インタ−ロイキン−６のシグナル伝達蛋白
質であるｇｐ１３０蛋白質を特異的に認識し、該蛋白質
と結合することでインタ−ロイキン−６の生理作用を阻
害し得るモノクロ−ナル抗体。 - 【請求項２】ｇｐ１３０蛋白質がヒトのものである請求
項１に記載のモノクロ−ナル抗体。 - 【請求項３】ＧＰＺ ３５抗体である請求項１のモノク
ロ−ナル抗体。 - 【請求項４】ＧＰＸ ７抗体である請求項１のモノクロ
−ナル抗体。 - 【請求項５】ＧＰＸ ２２抗体である請求項１のモノク
ロ−ナル抗体。 - 【請求項６】請求項１又は２に記載のモノクロ−ナル抗
体を産生するハイブリド−マ。 - 【請求項７】ＧＰＺ ３５抗体を産生するハイブリド−
マＧＰＺ ３５。 - 【請求項８】ＧＰＸ ７抗体を産生するハイブリド−マ
ＧＰＸ ７。 - 【請求項９】ＧＰＸ ２２抗体を産生するハイブリド−
マＧＰＸ ２２。 - 【請求項１０】請求項６に記載のハイブリド−マを培養
することを特徴とする請求項１又は２に記載のモノクロ
−ナル抗体の製造方法。 - 【請求項１１】請求項７に記載のハイブリド−マを培養
することを特徴とするＧＰＺ ３５抗体の製造方法。 - 【請求項１２】請求項８に記載のハイブリド−マを培養
することを特徴とするＧＰＸ ７抗体の製造方法。 - 【請求項１３】請求項９に記載のハイブリド−マを培養
することを特徴とするＧＰＸ ２２抗体の製造方法。 - 【請求項１４】請求項１又は２に記載のモノクロ−ナル
抗体を有効成分として含むインタ−ロイキン−６の生理
作用阻害剤。 - 【請求項１５】請求項３〜５に記載のモノクロ−ナル抗
体の１種以上を有効成分として含むインタ−ロイキン６
の生理作用阻害剤。
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