JPH05320185A

JPH05320185A - ６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその塩およびその製造法並びにその用途

Info

Publication number: JPH05320185A
Application number: JP4155857A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Hashimoto; 博之橋本; Masaru Goto; 後藤　　勝; Chie Katayama; 千栄片山; Satoshi Kawanaka; 聡川中; Munehiko Donpou; 宗彦鈍宝; Hiroshi Nakajima; 中島　　宏
Original assignee: Honen Corp; Unitika Ltd
Current assignee: Honen Corp; Unitika Ltd
Priority date: 1992-05-22
Filing date: 1992-05-22
Publication date: 1993-12-03
Anticipated expiration: 2015-08-28
Also published as: JP3082058B2

Abstract

(57)【要約】【構成】下記の式で表される６−Ｏ−α−Ｄ−ガラク
トピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその塩および
その製造法並びにその用途。【化１】上記アスコルビン酸誘導体は、Ｌ−アスコルビン酸また
はその塩と、α−ガラクトシル基を含む化合物とを含有
する溶液にα−ガラクトシダーゼを作用させることによ
って得られる。【効果】安定性に優れていることから、ビタミンＣと
して飲食品、医薬品、化粧品等の用途に使用できるほ
か、安定剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤等として使用でき
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は安定性に優れたＬ−アス
コルビン酸糖誘導体すなわち、６−Ｏ−α−Ｄ−ガラク
トピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその塩および
その製造法並びにその用途に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】Ｌ−アスコルビン酸（ビタミンＣ）はホ
乳動物では肝臓でＬ−グロノラクトンから合成される
が、ヒト、サル、モルモットでは合成酵素が欠損してい
るため必須ビタミンとして外部から取り入れる必要があ
る。Ｌ−アスコルビン酸は、生体内では、生体結合組織
の主成分であるコラーゲンの合成に必要なプロリンとリ
シンのヒドロキシル化に関与していたり、チトクローム
ＣのＦｅ³⁺を還元してＦｅ²⁺にするなどの酸化還元反応
に関与したり、さらには、ラジカルによる障害防止作
用、白血球増加による免疫増強作用、コレステロール生
成抑制による抗動脈硬化、抗ヒスタミン作用による抗ア
レルギー作用などが知られており、生体の健康維持、増
進に重要な役割をなしている。壊血病は、Ｌ−アスコル
ビン酸の欠乏症として古くから知られ、皮膚の虚弱化、
点状出血、班状出血、歯肉や骨髄下出血などを呈する。
これを予防するためには、日本人成人男子で５０ｍｇ／
日のＬ−アスコルビン酸の摂取が必要と考えられてい
る。上述のように、Ｌ−アスコルビン酸の用途は、必須
栄養素供給剤としてのビタミンＣ強化剤だけでなく、そ
の化学構造、生理活性作用から、例えば、酸味剤、還元
剤、酸化防止剤、漂白剤、安定剤などとして各種化学反
応基剤、飲食物などに、また、ウィルス性疾患、細菌性
疾患、悪性腫瘍、糖尿病などの感受性疾患の予防剤、治
療剤すなわち抗感受性疾患剤に、さらには紫外線吸収
剤、メラニン生成抑制作用による美肌剤、色白剤などと
して化粧品にまでおよび、その用途範囲は極めて広い。
しかし、このＬ−アスコルビン酸は、非常に不安定な物
質であり、熱、光、酸素、金属イオンなどによって容易
に分解や変性を受けることが知られている。このように
不安定なＬ−アスコルビン酸を安定化する試みは数多く
なされており、いくつかの誘導体が開発されている。た
とえばアスコルビン酸リン酸エステル（特開昭５７−１
４０７８９号）、グリコシルアスコルビン酸（特公昭５
８−５９２０号）、アスコルビン酸脂肪酸エステル（特
開昭６２−８４０７２号）、Ｌ−アスコルビン酸誘導体
及びその製造法（特開平２−３１１４９０号）などを具
体例としてあげることができる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】前記したように、各種
のアスコルビン酸誘導体が開発されているが、これらの
うちで糖誘導体は安定性に優れており実用化が期待され
てはいるものの、酵素反応時の収率が低く解決すべき課
題が残されていた。本発明は安全で、保存安定性に優
れ、かつ生体内でＬ−アスコルビン酸の生理活性を十分
発揮することができるＬ−アスコルビン酸糖誘導体また
はその塩、およびその収率よい製造法を提供することを
目的とするものであり、さらにそのＬ−アスコルビン酸
糖誘導体を有効成分として含有する飲食物、抗感受性疾
患剤、化粧品を提供することを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者等は、前記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、Ｌ−アスコ
ルビン酸またはその塩とガラクトース供与体との混合物
に、α−ガラクトシダーゼを温和な条件で作用させ、α
−ガラクトシダーゼの糖転移反応を利用することによ
り、収率良く目的のＬ−アスコルビン酸糖誘導体を合成
することができることを見い出し、本発明を完成するに
至った。

【０００５】すなわち、本発明は下記の式で表される６
−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビン
酸またはその塩、およびＬ−アスコルビン酸またはその
塩とα−ガラクトシル基を含む化合物との溶液にα−ガ
ラクトシダーゼを作用させることを特徴とする６−Ｏ−
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸また
はその塩の製造法、並びに６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその塩を有効成分
としてなることを特徴とする飲食物、抗感受性疾患剤、
および化粧品を要旨とするものである。

【０００６】

【化２】

【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸は上記の式化２で示される構造を持ち、医薬品、食
品、化粧品などに用いられる成分であるＬ−アスコルビ
ン酸とガラクトースから構成されており、本発明の飲食
物、抗感受性疾患剤、化粧品の有効成分として用いる
際、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩な
どの塩であってもよい。

【０００８】本発明に用いられるα−ガラクトシダーゼ
は、ガラクトシル基を含む化合物とＬ−アスコルビン酸
を含む溶液に作用させた場合、糖転移反応によって６−
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸
を合成するものであればよく、起源、種類は限定されな
い。たとえば、ピクノポラスシナバリヌス（Pycnopor
us cinnabarinus ）、ストレプトコッカスボビス（St
reptococcus bovis ）、ディプロコッカスニューモニ
ア（Diplococcus pneumoniae）、モルティエレラビナ
セ（Mortierella vinacea ）、アスペルギルスニガー
（Aspergillusnigar ）、エシェリヒアコリ（Escheri
chia coli）、シュ−ドモナスフルオレッセンス（Pse
udomonas fluorescens ）、キャンディダギリエルモ
ンディー（Candida guilliermondii）などの微生物やビ
シアサティバ（Visia sativa）、緑色コーヒー豆（Gr
een coffee bean ）などの植物が生産するα−ガラクト
シダーゼが使用できるが、収率の観点からキャンディダ
ギリエルモンディー（Candida guilliermondii）の生
産するα−ガラクトシダーゼが好ましい。

【０００９】本発明に用いられるCandida guilliermond
iiとしてはＡＴＣＣ６２６０、ＡＴＣＣ９０５８、ＡＴ
ＣＣ９３９０、ＡＴＣＣ１４２４２、ＡＴＣＣ２２０１
７、ＡＴＣＣ２２９４８、ＡＴＣＣ２２９４９、ＡＴＣ
Ｃ２２９９５、ＡＴＣＣ２６８６０、ＡＴＣＣ２８８７
３、ＡＴＣＣ３２５４２、ＡＴＣＣ３４１３４、ＡＴＣ
Ｃ３８２９０、ＡＴＣＣ４２０５０、ＡＴＣＣ５６８２
２、ＩＦＯ０４３７、ＩＦＯ０４５４、ＩＦＯ０６７
９、ＩＦＯ０８３７、ＩＦＯ０８３８、ＩＦＯ１９１
３、ＩＦＯ１９７２、Ｈ−４０４（微工研菌寄第ＦＥＲ
ＭＰ−１１０２６号）を挙げることができるが、反応
収率の点においてCandida guilliermondiiＨ−４０４
（微工研菌寄第ＦＥＲＭＰ−１１０２６号）が優れて
いる。

【００１０】これらの微生物からα−ガラクトシダーゼ
を生産する方法は、通常液体培養もしくは固体培養が用
いられる。液体培養の場合はその培養上清液を、固体培
養の場合はその抽出液をそのまま酵素剤として利用でき
る。また、場合によっては菌体をそのまま酵素剤として
利用することも可能である。また、必要に応じて公知の
方法で生成した酵素も利用できる。これらの酵素あるい
は酵素を生産する菌体は固定化して連続式で、あるいは
バッチ式で繰り返し反応に利用することも可能である。
また、必要ならばα−ガラクトシル基の転移反応能を有
する微生物の増殖中に、Ｌ−アスコルビン酸とα−ガラ
クトシル基を含む化合物とを共存させて、６−Ｏ−α−
Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を生成さ
せることもできる。

【００１１】本発明においてＬ−アスコルビン酸には、
遊離のＬ−アスコルビン酸だけでなく、そのアルカリ金
属塩もしくはアルカリ土類金属塩などのＬ−アスコルビ
ン酸金属塩、または、それらの混合物が含まれる。ま
た、α−ガラクトシダーゼの基質として用いるα−ガラ
クトシル基を含む化合物はその起源を問わず、天然物あ
るいは有機合成や酵素反応生成物でもよい。天然物とし
ては、メリビオース、マンニノトリオース、ラフィノー
ス、スタキオース、ベルバスコース、グアガムやローカ
ストビーンガムなどのガラクトマンナンやこれらの混合
物、有機合成物としては、フェニル−α−ガラクトシ
ド、パラニトロフェニル−α−ガラクトシド、オルトニ
トロフェニル−α−ガラクトシド、メタニトロフェニル
−α−ガラクトシドなどが、酵素反応生成物としてはメ
リビオース、グアガムやローカストビーンガムなどのガ
ラクトマンナンの酵素分解物、あるいは、高濃度のガラ
クトース、乳糖加水分解物にα−ガラクトシダーゼを作
用させ生成したα−ガラクトオリゴ糖組成物が用いられ
る。

【００１２】本発明において、反応時のＬ−アスコルビ
ン酸の濃度としては、１〜６０％（Ｗ／Ｖ）が適当であ
り、５〜４０％（Ｗ／Ｖ）が好ましく、１０〜３０％
（Ｗ／Ｖ）がさらに好ましい。メリビオースの濃度とし
ては１〜８０％（Ｗ／Ｖ）が適当であり、５〜６０％
（Ｗ／Ｖ）が好ましく、１０〜４０％（Ｗ／Ｖ）がさら
に好ましい。乳糖の濃度としては、１〜８０％（Ｗ／
Ｖ）が適当であり、５〜６０％（Ｗ／Ｖ）が好ましく、
１０〜４０％（Ｗ／Ｖ）がさらに好ましい。

【００１３】また、反応時のｐＨは３．５〜８．０が適
当であるが、使用する酵素に応じてｐＨを選択すれば良
い。

【００１４】次に反応温度は１０〜９０℃の範囲が適当
であり、３０〜８０℃の範囲が好ましく、４０〜７０℃
の範囲がさらに好ましい。

【００１５】反応時間は特に限定されないが、Ｌ−アス
コルビン酸糖誘導体の生成量が最大になるような時間を
選べばよい。

【００１６】このような方法により生成するＬ−アスコ
ルビン酸糖誘導体は、膜分離、イオン交換カラムクロマ
トグラフィー、活性炭カラムクロマトグラフィー、液体
クロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー等、通常の分離手段で分離することができる。この
際に、分離される未反応のＬ−アスコルビン酸、α−ガ
ラクトシル基を含む化合物を、再度、糖転移反応の原料
として利用することも可能である。

【００１７】本発明の飲食物、抗感受性疾患剤、化粧品
の有効成分である６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸は安定性、安全性の高いビタミン
Ｃ強化剤としてだけでなく、呈味改善剤、酸味剤、安定
剤、品質改良剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤などとして、
飲食物、嗜好物、飼料、感受性疾患の予防剤、治療剤さ
らに美肌剤、色白剤などの化粧品などに、その目的に応
じて０．００１重量％以上配合して、有利に利用でき
る。

【００１８】また６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル
−Ｌ−アスコルビン酸は、酸味、塩辛味、渋味、うま
味、苦味などの呈味を有する各種物質ともよく調和し、
耐酸性、耐熱性も大きいので、普通一般の飲食物、嗜好
物、例えば、合成酒、果実酒、洋酒、チューハイなどの
酒類、紅茶、ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲
料、スポーツドリンクなどの清涼飲料水、即席ジュー
ス、即席紅茶、即席スープなどの即席飲食品、醤油、粉
末醤油、味噌、粉末味噌、諸味、ソース、ケチャップ、
マヨネーズ、ドレッシング、レモン果汁、食酢、三杯
酢、すし酢、粉末すし酢、みりん、みりん風調味料、天
ぷらのつゆ、麺つゆ、中華の素、餃子のタレ、焼き肉の
タレ、カレールウ、シチュールウ、スープの素、ダシの
素、複合調味料などの各種調味料、サラダオイル、マー
ガリンなどの油脂食品、果実のシロップ漬け、氷蜜など
のシロップ類、バタークリーム、カスタードクリーム、
ピーナッツペースト、フラワーペースト、フルーツペー
ストなどのスプレッドペースト類、ジャム、マーマレー
ド、シロップ漬け、糖果などの果実、野菜の加工食品、
煎餅、あられ、おこし、饅頭、ういろう、餅類、あん
類、ようかん、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓
子、パン、クッキー、クラッカー、パイ、ビスケット、
プリン、ケーキ、シュークリーム、ワッフル、ドーナ
ツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、キャ
ンディー、スナック菓子などの各種洋菓子、アイスクリ
ーム、シャーベットなどの氷菓子、パン類、米飯類など
の穀類加工食品、漬物類、畜肉製品類、魚肉製品類、佃
煮類、惣菜食品類、乳飲料、乳製品、畜肉、魚肉、果
実、野菜などの瓶詰め類、缶詰め類などにビタミンＣ強
化剤、呈味改善剤、酸味剤、品質改良剤、安定剤、抗酸
化剤などの目的で有利に利用することができる。また、
家畜、家禽、蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のための飼
料、餌料などにもビタミンＣ強化剤、呈味改善剤、品質
改良剤、安定剤、抗酸化剤、嗜好性改善などの目的で配
合することができる。

【００１９】その他、トローチ、肝油ドロップ、複合ビ
タミン剤、経管栄養剤、内服薬、注射剤、練歯みがきペ
ースト、口中清涼剤、うがい薬、口紅、アイシャドウ、
ローション、ファウンデーション、乳液、ハンドクリー
ム、日焼け止めクリーム、洗顔石鹸、シャンプー、リン
ス、整髪料などの各種固形、ペースト状、液状の嗜好
物、美肌剤、白色剤などの化粧品などに配合して有利に
実施できる。さらには、紫外線吸収剤、劣化防止剤など
としてプラスチック製品などに配合して利用することも
できる。

【００２０】６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸によって予防または治療される疾患
を、本発明では感受性疾患とし、例えば、ウィルス性疾
患、細菌性疾患、外傷性疾患、免疫疾患、アレルギー疾
患、糖尿病、白内障、悪性腫瘍、動脈硬化などであって
もよい。６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸感受性疾患の予防剤または治療剤は、その
目的に応じてその形状を自由に選択できる。例えば、噴
霧剤、点眼剤、点鼻剤、うがい剤、注射剤などの液剤、
軟膏、発布剤、ペースト剤、粉剤、顆粒、カプセル剤、
錠剤、座剤などの固形剤などである。製剤にあたっては
必要に応じて、他の成分、例えば、治療剤、生理活性物
質、抗生物質、補助剤、増量剤、安定剤、着色剤、着香
剤、賦形剤などの１種または２種以上と併用することも
可能である。

【００２１】６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸の投与量は、含量、投与経路、投与頻
度などによって適宜調製することができる。成人１日当
たり０．０００５〜１００ｇがよく、好ましくは０．０
０５〜５０ｇ、さらに好ましくは０．０１〜１０ｇの範
囲が適当である。

【００２２】６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸を含有させる方法としては、それらの
製品が完成するまでの工程で、例えば、混和、溶解、浸
漬、散布、塗布、噴霧、注入など公知の方法が適宜選択
できる。また、６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−
Ｌ−アスコルビン酸が遊離の酸の場合には、必要によ
り、これを水酸化金属、炭酸金属などの水溶液と反応さ
せて、６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸の塩にして、ｐＨの調製を行うとともにビタ
ミンＣ作用とミネラルとを併せもつ物質を調製し、これ
を栄養強化剤、化学薬品などとして利用することもでき
る。

【００２３】

【実施例】次に、本発明を実施例により具体的に説明す
る。実施例１Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム（石津製薬特級試薬）１
０ｇおよびメリビオース（シグマ社製）２０ｇを蒸留水
に溶解し１００ｍｌとしたのちｐＨを４．５に調製し
た。これにCandida guilliermondiiＨ−４０４（微工研
菌寄第ＦＥＲＭＰ−１１０２６号）由来の溶液型α−ガ
ラクトシダーゼを１９００ユニット加えて、５０℃で
５．５時間反応した。溶液型α−ガラクトシダーゼはCa
ndida guilliermondiiＨ−４０４（微工研菌寄第ＦＥＲ
ＭＰ−１１０２６号）を１％メリビオース、３％ポリ
ペプトン、０．５％酵母エキス、０．０５％Ｋ₂ ＨＰＯ
₄ 、０．０１％ＭｇＳＯ₄ ・７Ｈ₂ Ｏ、０．０１％ＫＣ
ｌを含む滅菌液体培地（ｐＨ７．０）６０ｍｌを５００
ｍｌ坂口フラスコで３０℃で４日間振盪培養することに
より、その上清中に０．８ユニット／ｍｌ、湿菌体中に
３５ユニット／ｇ得ることができた。なお、活性の測定
は１０ｍＭパラニトロフェニル−α−ガラクトシド０．
２ｍｌと４０ｍＭ緩衝液（ｐＨは酵素の至適ｐＨに準ず
る）０．２ｍｌにα−ガラクトシダーゼ溶液０．０５ｍ
ｌを加えて４０℃で１０分間反応させ、０．２ＭＮａ
₂ ＣＯ₃ ０．５ｍｌを加えて反応を停止させ、遊離した
パラニトロフェノールの量を４００ｎｍの吸光度を測定
することにより測定した。１ユニットは１分間に１μｍ
ｏｌｅのパラニトロフェノールを生成する酵素量と定義
した。

【００２４】得られた反応物をバイオラッド（BIO-RAD
）社製高速液体カラムクロマトグラフィー用カラムア
ミネックスイオンエクスクルージョン（AMINEX ION EXC
LUSION）ＨＰＸ−８７Ｈを用いて分析した。このとき、
溶出液として０．０１ＮのＨ₂ＳＯ₄ を用い、流速０．
６ｍｌ／ｍｉｎで反応物を溶出させた。また、そのとき
の検出をＵＶ₂₄₅ で行った。その結果、６．１ｇのＬ−
アスコルビン酸糖誘導体が生成していた。このときの反
応収率は３０．５％であった。

【００２５】次に上記の反応物５０ｍｌを４５０ｍｌの
活性炭カラム（和光純薬製クロマトグラフィー用）にか
け、１０ｍｌ／ｍｉｎで水溶出させた。このとき、Ｌ−
アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸糖誘導体の順に溶
出してくるので、この溶出したＬ−アスコルビン酸糖誘
導体のみを集め濃縮した。濃縮液を５ｍｌの陰イオン交
換樹脂ダウエツクス（Dowex ）２×８カラム（Ｃｌ^-
型）にかけ、流速１ｍｌ／ｍｉｎで１００ｍｌの蒸留水
を通液させたのち、１００ｍｌの０．０４Ｍ−ＮａＣｌ
を通液し、目的のＬ−アスコルビン酸糖誘導体を溶出さ
せた。この画分を電気透析器（旭化成社製、マイクロア
シライザー）により脱塩し、凍結乾燥して２．１ｇのＬ
−アスコルビン酸糖誘導体を得た。このときの精製収率
は６８．８％であった。

【００２６】得られたＬ−アスコルビン酸糖誘導体につ
いて¹³Ｃ−ＮＭＲ分析を行ったところ、次のような結果
が得られた。 ¹³Ｃ−ＮＭＲ（σ値ｐｐｍ）ガラクトースのＣ−１１０１．５ガラクトースのＣ−２７１．２ガラクトースのＣ−３７１．３ガラクトースのＣ−４７２．１ガラクトースのＣ−５７２．３ガラクトースのＣ−６６４．０Ｌ−アスコルビン酸のＣ−１１１６．３Ｌ−アスコルビン酸のＣ−２１８０．１Ｌ−アスコルビン酸のＣ−３１７６．９Ｌ−アスコルビン酸のＣ−４８１．１Ｌ−アスコルビン酸のＣ−５７３．９Ｌ−アスコルビン酸のＣ−６７０．６

【００２７】また、得られたＬ−アスコルビン酸糖誘導
体をアスペルギルスニガー(Aspergillus niger) 由来
のα−ガラクトシダーゼで加水分解することにより、Ｌ
−アスコルビン酸とガラクトースが生成した。

【００２８】以上の結果から、上記で得られたＬ−アス
コルビン酸糖誘導体の構造は６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸であることが判明し
た。

【００２９】実施例２乳糖（石津製薬特級試薬）２０ｇを蒸留水に溶解し、ｐ
Ｈ６に調整した後８０ｍｌとした。この溶液にアスペル
ギルスオリーゼ（Aspergillus oryzae）由来のβ−ガ
ラクトシダーゼ（シグマ社製）を８００ユニット添加
し、４０℃で１０時間反応させた。反応終了後煮沸によ
り酵素を失活させ、乳糖加水分解物を得た。これにCand
ida guilliermondiiＨ−４０４（微工研菌寄第ＦＥＲＭ
Ｐ−１１０２６号）由来のα−ガラクトシダーゼを１
８９０ユニット加え、５０℃で１６時間反応させ、α−
ガラクトオリゴ糖組成物を合成した。その後、Ｌ−アス
コルビン酸ナトリウム（石津製薬特級試薬）を１５ｇ添
加し、溶解させて１００ｍｌとし、５０℃で５．５時間
反応した。

【００３０】実施例１と同様にして高速液体クロマトグ
ラフィーで分析したところ、９．７ｇのＬ−アスコルビ
ン酸糖誘導体が生成していた。この時の反応収率は３
２．３％であった。

【００３１】次に、実施例１と同様にしてＬ−アスコル
ビン酸誘導体の精製を行い、６．７ｇのＬ−アスコルビ
ン酸糖誘導体を得た。この時の精製収率は６９．０％で
あった。

【００３２】実施例３ラフィノース５水和物１．７ｇとＬ−アスコルビン酸１
ｇに市販のモルティエレラビナセ由来のα−ガラクト
シダーゼ（生化学工業）９０ユニットを含むｐＨ５．５
の溶液１０ｍｌを調製し、５０℃で８時間反応させた。
反応液を実施例１の方法に準じて精製し、濃縮、粉末化
して、粉末状の製品を０．１３ｇ得た。次に実施例１と
同様にして構造を解析したところ、６−Ｏ−α−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸であった。

【００３３】実施例４６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸の安定性試験以下の成分を用い、常法に従ってグレープフルーツ果汁
入り清涼飲料水を得た。成分重量％グレープフルーツ果汁２０．０砂糖１２．０クエン酸１．０実施例１で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル −Ｌ−アスコルビン酸０．１水１００％に調製

【００３４】得られた清涼飲料水を４０℃にて１２０日
間保存し、安定性試験を行った。すなわち、清涼飲料水
中に残存するビタミンＣを高速液体クロマトグラフィー
（島津製作所製ＬＣ−２、カラム：バイオラッドＡＭＩ
ＮＥＸＨＰＸ−８７Ｈ、流速：０．６ｍｌ／分、溶媒
液：０．０１ＭＨ₂ ＳＯ₄ 、検出波長：２４５ｎｍ）
にて定量した。その結果を表１に示した。なお、表１の
数字はビタミンＣの残存率を示す。

【００３５】

【表１】

【００３６】次に、実施例４で得られた清涼飲料水のビ
タミンＣ活性試験を行った。すなわち、脱脂粉乳、脱脂
大豆にビタミンＣ以外の各種ビタミンを添加した基礎飼
料を用い、ハートレー系雄モルモット（体重約２５０
ｇ、１０尾）を２０日間飼育しながら、得られた清涼飲
料水（６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸濃度：１．７ｍｇ／ｍｌ）を、毎日１ｍｌず
つ経口投与し、体重変化を測定した。対照群として、蒸
留水を毎日１ｍｌずつ経口投与した。その試験結果を表
２に示した。なお、表２中の数字はモルモットの平均体
重の変化を示す。

【００３７】

【表２】

【００３８】比較例１６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸の代わりに２−Ｏ−グリコシル−Ｌ−アスコルビン
酸を使用する他は実施例４と同様に行って清涼飲料水を
得、実施例４と同様に安定性試験を行った。その安定性
試験の結果を表３に示した。

【００３９】比較例２６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸の代わりに６−Ｏ−ステアリル−Ｌ−アスコルビン
酸を使用する他は実施例４と同様に行って清涼飲料水を
得、実施例４と同様に安定性試験を行った。その安定性
試験の結果を表３に示した。

【００４０】比較例３６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸の代わりにＬ−アスコルビン酸を使用する他は実施
例４と同様に行って清涼飲料水を得、実施例４と同様に
安定性試験を行った。その安定性試験の結果を表３に示
した。

【００４１】

【表３】

【００４２】表３から明らかなごとく、Ｌ−アスコルビ
ン酸（比較例３）および６−Ｏ−ステアリル−Ｌ−アス
コルビン酸を成分として含む清涼飲料水（比較例２）は
非常に不安定であり、添加ビタミンＣ量は経日とともに
減少した。また、２−Ｏ−グリコシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸を成分として含む清涼飲料水（比較例１）は比較的
安定であるが、本発明の清涼飲料水に比べて安定性はそ
れほど優れたものではなかった。これに対して本発明の
６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸を成分として含む清涼飲料水（実施例４）は４０℃
においても長期にわたって非常に安定であった。

【００４３】

【表４】

【００４４】表４から明らかなごとく、対照群は、基礎
飼料は与えられるがビタミンＣが欠乏するため７日目以
降体重増加がほとんど見られず、１４日目以降に１０尾
中３尾が死亡した。これに対し、６−Ｏ−α−Ｄ−ガラ
クトピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を成分として含む
清涼飲料水（実施例４）を投与した群は、Ｌ−アスコル
ビン酸を成分として含む清涼飲料水（比較例３）を投与
した群と同様に１日平均４〜５ｇの体重増加を示し、投
与期間中異常は認められなかった。すなわち、本発明の
６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸を成分として含む清涼飲料水（実施例４）は生体内
においてＬ−アスコルビン酸と同様のビタミンＣ活性を
示すものであった。

【００４５】実施例５６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラ
ノシル−Ｌ−アスコルビン酸の抗酸化能試験実施例１で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸１ｇを蒸留水１０ｍｌに溶解
し、その全量をフライ豆１００ｇに噴霧し乾燥して豆菓
子を得た。

【００４６】得られた豆菓子を４０℃で保存し、経時的
に５ｇを秤り取り、溶剤（クロロホルム：氷酢酸＝２：
３）で抽出した後ヨウ化カリウムを加え、遊離したヨウ
素を滴定し、その過酸化物価の上昇を測定することによ
り抗酸化能試験を行った。対照群として未噴霧の豆菓子
を得、同様に抗酸化能試験を行った。その試験結果を表
５に示した。なお、表５中の数字は過酸化物価を示す。

【００４７】比較例４６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸の代わりに、２−Ｏ−グルコシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸を使用する他は実施例５と同様に行って豆菓子を
得、実施例５と同様に抗酸化能試験を行った。その抗酸
化能試験の結果を表５に示した。

【００４８】比較例５６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸の代わりに、ＢＨＡ（ブチルヒドロキシアニソー
ル）を使用する他は実施例５と同様に行って豆菓子を
得、実施例５と同様に抗酸化能試験を行った。その抗酸
化能試験の結果を表５に示した。

【００４９】

【表５】

【００５０】表５から明らかなごとく、抗酸化活性中心
と考えられるＬ−アスコルビン酸の２位のヒドロキシル
基をグルコシル化した２−Ｏ−グルコシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸を噴霧した豆菓子（比較例４）の過酸化物価
は、対照群とほぼ同様の上昇を示した。これに対して本
発明の６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アス
コルビン酸を噴霧した豆菓子（実施例５）では、過酸化
物価の上昇は対照群の約６割に抑えられ、抗酸化物とし
て知られるＢＨＡを噴霧した場合（比較例５）と比較す
ると、約３割の増加にとどまっており、高い抗酸化活性
を示した。すなわち、本発明の６−Ｏ−α−Ｄ−ガラク
トピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸を噴霧した豆菓子
（実施例４）は高い抗酸化活性を示すものである。ま
た、実施例５で得られた豆菓子は、実施例４と同程度の
安定性、生体内ビタミンＣ活性を有していた。

【００５１】実施例６グレープフルーツ果汁入り清涼
飲料の製法これらの成分を用い、常法に従ってグレープフルーツ果
汁入り清涼飲料を得た。

【００５２】実施例７チューインガムの製法これらの成分を用い、常法に従ってチューインガムを得
た。

【００５３】実施例８菓子パンの製法これらの成分を用い、常法に従って菓子パンを得た。

【００５４】実施例９マヨネーズの製法これらの成分を用い、常法に従ってマヨネーズを得た。

【００５５】実施例１０点眼剤の製法と眼刺激性試験実施例１で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸を用い、下記の処方により、常
法に従って点眼剤を調製した。次に、５０名のパネルで上記の処方の点眼剤の眼刺激性
を評価した。その結果、ほとんどの者が刺激性を訴えな
かった。

【００５６】実施例１１練歯磨の製法と保存着色性試
験

【００５７】比較例６６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビ
ン酸（実施例１１）のかわりに、Ｌ−アスコルビン酸を
同量配合した練歯磨及びこれらを添加しない対照練歯磨
を調製した。実施例１１と比較例６の練歯磨を各々３０
℃にて６ケ月、４０℃にて３ケ月、５０℃にて３ケ月保
存し、着色度を以下の基準に従って判定した。 −；無着色＋；軽度の着色＋＋；重度の着色

【００５８】その結果を表６に示す。

【００５９】

【表６】

【００６０】表６から明らかなように、Ｌ−アスコルビ
ン酸を添加した練歯磨（比較例６）は著しく着色した
が、６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸を添加した練歯磨（実施例１１）は全く着色を
示さなかった。

【００６１】次に実施例１１と比較例６の練歯磨を歯槽
膿漏第１度の患者３０名に６ケ月間使用させ、歯肉の発
赤、腫膿の消失、盲嚢改善、歯牙の動揺改善および歯肉
の改善を指標にその有効性を判定した。試験中、患者に
は該歯磨により朝夕２回歯磨を実施させた。判定は２ケ
月毎に以下の基準に従って行った。５点：前記指標中の５項目が改善された。４点：前記指標中の４項目が改善された。３点：前記指標中の３項目が改善された。２点：前記指標中の２項目が改善された。１点：前記指標中の１項目が改善された。０点：改善なしまたは悪化した。各判定日における各歯磨使用群の総点数を患者数で除し
たものを表７に示した。

【００６２】

【表７】

【００６３】６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ
−アスコルビン酸配合練歯磨（実施例１０）の使用によ
り悪化した例はなく、またその使用による口腔内異常、
違和感も認められなかった。

【００６４】実施例１３口腔用パスタの製法実施例１で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸を用いて下記の処方により、常
法に従って口腔用パスタを得た。成分重量ｇエタノール１０．０スクワレン２０．０沈降性シリカ５．０ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０．１ラウリル硫酸ナトリウム０．２ＥＤＴＡカルシウム０．１香料０．６ソルビタンモノオレイン酸エステル１．０グリチルリチン酸０．１サッカリンナトリウム０．６６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル −Ｌ−アスコルビン酸０．５実施例１３で得られた口腔用パスタは実施例１１と同程
度の安定性、改善効果を示した。

【００６５】実施例１４口腔用トローチの製法実施例１で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸を用いて下記の処方により、常
法に従って、よく混和し、直接打錠により口腔用トロー
チを得た。成分重量ｇラクトース９７．０ポリオキシエチレンモノステアレート０．２ラウリル硫酸ナトリウム０．０５クロルヘキシジングルコン酸塩０．０２ステビア抽出物０．２香料０．１ヒドロキシエチルセルロース１．９３６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル −Ｌ−アスコルビン酸０．５実施例１４で得られた口腔用トローチは実施例１１と同
程度の安定性、改善効果を示した。

【００６６】実施例１５マウスウオッシュの製法実施例１で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−Ｌ−アスコルビン酸を用いて下記の処方により、常
法に従ってよく混和し、マウスウオッシュを得た。成分重量ｇソルビット１０．０エタノール５．０ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０．１ショ糖モノパルミテート０．２ラウリル硫酸ナトリウム０．０５サッカリンナトリウム０．２炭酸水素ナトリウム０．０５ＥＤＴＡカルシウム０．０５香料０．６蒸留水８３．６５６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル −Ｌ−アスコルビン酸０．１実施例１５で得られたマウスウオッシュは実施例１１と
同程度の安定性、改善効果を示した。

【００６７】実施例１６クリーム状化粧料の製法下記の処方の成分を用い、常法に従ってクリーム状化粧
料を得た。成分重量ｇスクワラン２５．０ワックス５．０オリーブ油３．０キサンタンガム１．０グリチルリチン酸モノアンモニウム０．３メチルパラベン０．２蒸留水６１．５香料適量６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル −Ｌ−アスコルビン酸４．０

【００６８】色黒、しみ、そばかすに悩む被験者（女
子）２０名のパネラーの顔面に上記のクリームを１日２
回、２カ月間連続塗布してもらい、パネラー本人がその
効果を有効、やや有効、無効の３段階で評価した。ま
た、６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸の代わりにＬ−アスコルビン酸を同量配合し、
クリーム状の化粧料を得、同様に試験し、結果を表８に
示した。

【００６９】

【表８】

【００７０】また、上記のクリームを４０℃、６カ月間
保存し外観状の変化および変臭の有無を調べ、表９に実
験結果を示した。

【００７１】

【表９】

【００７２】表８、９から明らかなように本発明の皮膚
化粧料は保存安定性、美白効果、荒れ肌改善効果におい
て有効性が認められた。

【００７３】

【発明の効果】本発明のＬ−アスコルビン酸糖誘導体で
ある６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−アスコ
ルビン酸またはその塩は、収率良く安価に製造すること
ができ、安定性に優れ、生体内で容易に加水分解される
ために無毒であり、しかも生体内で十分なビタミンＣ活
性を示し、安定剤、品質改良剤、抗酸化剤、生理活性
剤、紫外線吸収剤等として、飲料、加工食品、調味料、
嗜好物など飲食物、感受性疾患の予防剤、治療剤、さら
には美肌剤、色白剤などの化粧品などに含有させて有利
に利用できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 7/48 9051−4Ｃ 31/70 ＡＢＡＡＤＫ 8314−4ＣＣ０９Ｋ 15/06 Ｃ１２Ｎ 9/40 7823−4ＢＣ１２Ｐ 19/58 7432−4Ｂ (72)発明者川中聡京都府宇治市宇治小桜24 (72)発明者鈍宝宗彦京都府宇治市宇治小桜24 (72)発明者中島宏京都府宇治市宇治小桜24

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の式で表される６−Ｏ−α−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその塩。【化１】
【請求項２】Ｌ−アスコルビン酸またはその塩と、α
−ガラクトシル基を含む化合物とを含有する溶液にα−
ガラクトシダーゼを作用させることを特徴とする請求項
１記載の６−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｌ−ア
スコルビン酸またはその塩の製造法。
【請求項３】請求項１記載の６−Ｏ−α−Ｄ−ガラク
トピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその塩を有効
成分として含有することを特徴とする飲食物。
【請求項４】請求項１記載の６−Ｏ−α−Ｄ−ガラク
トピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその塩を有効
成分として含有することを特徴とする抗感受性疾患剤。
【請求項５】請求項１記載の６−Ｏ−α−Ｄ−ガラク
トピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸またはその塩を有効
成分として含有することを特徴とする化粧品。