JPH05322897A - フィルターを用いる細菌の酵素免疫測定法 - Google Patents
フィルターを用いる細菌の酵素免疫測定法Info
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- JPH05322897A JPH05322897A JP12850492A JP12850492A JPH05322897A JP H05322897 A JPH05322897 A JP H05322897A JP 12850492 A JP12850492 A JP 12850492A JP 12850492 A JP12850492 A JP 12850492A JP H05322897 A JPH05322897 A JP H05322897A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 迅速性、簡易性及び定量性を併せもつ細菌検
出法の開発。 【構成】 フィルター上に細菌を捕捉し、該細菌に対す
る一次抗体及び酵素標識二次抗体もしくは抗体様物質を
フィルター上に加えて免疫反応を行わせ、フィルター上
の未反応抗体を洗浄後、抗原抗体反応複合物に発色基質
を酵素反応させ、フィルター上の発色強度を検出して、
細菌量を検出する細菌の酵素免疫測定法である。 【効果】 フィルター上に菌を濃縮することで、検出感
度を高めることができ、また、培養による菌の増殖が不
必要なので、数時間で判定が可能である。さらに、特定
の器具、技術及び施設等は必要としない。
出法の開発。 【構成】 フィルター上に細菌を捕捉し、該細菌に対す
る一次抗体及び酵素標識二次抗体もしくは抗体様物質を
フィルター上に加えて免疫反応を行わせ、フィルター上
の未反応抗体を洗浄後、抗原抗体反応複合物に発色基質
を酵素反応させ、フィルター上の発色強度を検出して、
細菌量を検出する細菌の酵素免疫測定法である。 【効果】 フィルター上に菌を濃縮することで、検出感
度を高めることができ、また、培養による菌の増殖が不
必要なので、数時間で判定が可能である。さらに、特定
の器具、技術及び施設等は必要としない。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】在郷軍人病（Legionnaires'disea
se）は、細菌性呼吸器感染症として確立されているが、
その原因菌はレジオネラ・ニューモフィラ（Legionella
pneumophila）（以下、レジオネラと称す）である。
se）は、細菌性呼吸器感染症として確立されているが、
その原因菌はレジオネラ・ニューモフィラ（Legionella
pneumophila）（以下、レジオネラと称す）である。
【０００２】本症の発症形式には、散発例と院内感染等
の集団発生例があるが、共にその感染経路は土壌、河川
水、空調装置又はビル内循環水等を介した空気感染と考
えられている。特に、集団発生の際には、空調用冷却塔
は代表的な感染源として重視されている。
の集団発生例があるが、共にその感染経路は土壌、河川
水、空調装置又はビル内循環水等を介した空気感染と考
えられている。特に、集団発生の際には、空調用冷却塔
は代表的な感染源として重視されている。
【０００３】空調用冷却塔でのレジオネラ保有率は一般
的にかなり高頻度（４０％以上）であり（中浜力、感染
症誌、57:643-655(1983)，伊藤直美、感染症誌、57:682
-694(1983)，斉藤厚ら、感染症誌、55:439-446(198
1)）、そのすべてを消毒することは困難と考えられる。
しかし、定期的な清掃や、要すれば消毒も必要である。
的にかなり高頻度（４０％以上）であり（中浜力、感染
症誌、57:643-655(1983)，伊藤直美、感染症誌、57:682
-694(1983)，斉藤厚ら、感染症誌、55:439-446(198
1)）、そのすべてを消毒することは困難と考えられる。
しかし、定期的な清掃や、要すれば消毒も必要である。
【０００４】レジオネラの汚染度のチェックを迅速に行
える検査法があれば、清掃や消毒の必要な時期を、的確
に把握することが可能となる。本発明を応用したレジオ
ネラ検査は、特定の器具、技術及び施設等を必要とせ
ず、迅速にレジオネラを検出することができる。
える検査法があれば、清掃や消毒の必要な時期を、的確
に把握することが可能となる。本発明を応用したレジオ
ネラ検査は、特定の器具、技術及び施設等を必要とせ
ず、迅速にレジオネラを検出することができる。
【０００５】
【従来の技術】現行のレジオネラの検出方法としては、
培養法（Bueschig,W.J. ら,J.Clin.Microbiol.,17,1153
(1983)）、直接蛍光抗体法（Cherry,W.B. 及びMckinne
y,R.M.,U.S.Department of Health,Education,and Well
fare,C.D.C Georgia,U.S.A.,92-103(1979) ）、ＤＮＡ
プローブハイブリダイゼーション法（Edelstein,P.H.,
J.Clin.Microbiol.,23(3),481(1986)）等が知られてい
る。
培養法（Bueschig,W.J. ら,J.Clin.Microbiol.,17,1153
(1983)）、直接蛍光抗体法（Cherry,W.B. 及びMckinne
y,R.M.,U.S.Department of Health,Education,and Well
fare,C.D.C Georgia,U.S.A.,92-103(1979) ）、ＤＮＡ
プローブハイブリダイゼーション法（Edelstein,P.H.,
J.Clin.Microbiol.,23(3),481(1986)）等が知られてい
る。
【０００６】培養法は、検体を培地に接種し、混在菌の
発育を抑制して、５〜７日間培養した後、集落を確認培
地に植え継ぎ、発育の確認をし、発育があれば抗レジオ
ネラ抗体とのスライド凝集反応を行い同定する方法であ
る。しかしながら、感度を増加させるための培養の際
の、混在菌の抑制条件の設定が難しい。抑制が弱いと混
在菌の発育が進み、レジオネラの釣菌は不可能であり、
強い抑制では混在菌の発育のみならず、レジオネラの発
育まで抑制されてしまう。また、判定に１週間〜２週間
もの日数が必要である。
発育を抑制して、５〜７日間培養した後、集落を確認培
地に植え継ぎ、発育の確認をし、発育があれば抗レジオ
ネラ抗体とのスライド凝集反応を行い同定する方法であ
る。しかしながら、感度を増加させるための培養の際
の、混在菌の抑制条件の設定が難しい。抑制が弱いと混
在菌の発育が進み、レジオネラの釣菌は不可能であり、
強い抑制では混在菌の発育のみならず、レジオネラの発
育まで抑制されてしまう。また、判定に１週間〜２週間
もの日数が必要である。
【０００７】直接蛍光抗体法は、迅速診断法として用い
られている。検体を無蛍光スライド上に塗抹乾燥し、固
定する。一次抗体として抗レジオネラ抗体を３０分間反
応させ、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩液）で洗浄した後、Ｆ
ＩＴＣ（fluorescein isothiocyanate) 等の蛍光物質を
標識した二次抗体を３０分間反応させる。最終的に蒸留
水で洗浄後、グリセロールで封入して蛍光顕微鏡で観察
する。蛍光の強さ及び菌の形態で陽性菌を判定する。本
法の特異性は９９％と高いが、感度が低く、全視野中に
陽性菌が１０個以下のことも多く、注意深い観察が必要
である。
られている。検体を無蛍光スライド上に塗抹乾燥し、固
定する。一次抗体として抗レジオネラ抗体を３０分間反
応させ、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩液）で洗浄した後、Ｆ
ＩＴＣ（fluorescein isothiocyanate) 等の蛍光物質を
標識した二次抗体を３０分間反応させる。最終的に蒸留
水で洗浄後、グリセロールで封入して蛍光顕微鏡で観察
する。蛍光の強さ及び菌の形態で陽性菌を判定する。本
法の特異性は９９％と高いが、感度が低く、全視野中に
陽性菌が１０個以下のことも多く、注意深い観察が必要
である。
【０００８】ＤＮＡプローブハイブリダイゼーション法
は、被検体から抽出した染色体ＤＮＡをフォトビオチン
で標識し、固相に吸着させたレジオネラの染色体ＤＮＡ
とハイブリダイズさせ、さらにペルオキシダーゼ標識ス
トレプトアビジン、（ＴＢＺ）、Ｈ2 Ｏ2 にて発色させ
る。特異性、感度ともに高いが、特殊な器具と技術が必
要である。
は、被検体から抽出した染色体ＤＮＡをフォトビオチン
で標識し、固相に吸着させたレジオネラの染色体ＤＮＡ
とハイブリダイズさせ、さらにペルオキシダーゼ標識ス
トレプトアビジン、（ＴＢＺ）、Ｈ2 Ｏ2 にて発色させ
る。特異性、感度ともに高いが、特殊な器具と技術が必
要である。
【０００９】これらの方法はすべて、特定の器具、技術
及び施設が必要である。実際の冷却塔におけるレジオネ
ラの汚染は高頻度であり、そのすべてを消毒することは
困難である。また、消毒剤の効果がなくなれば、早けれ
ば２〜３週間で再び自然増殖する。したがって、定期的
に迅速検査を行う必要性があるが、現行の方法では不可
能である。
及び施設が必要である。実際の冷却塔におけるレジオネ
ラの汚染は高頻度であり、そのすべてを消毒することは
困難である。また、消毒剤の効果がなくなれば、早けれ
ば２〜３週間で再び自然増殖する。したがって、定期的
に迅速検査を行う必要性があるが、現行の方法では不可
能である。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】従来実施されている細
菌検出法は、一定水準の感度と特異性を維持するため
に、判定に数週間かかるものが多く、また、特定の器
具、技術及び施設が必要である。レジオネラのように急
速に病状が悪化する感染症の場合、迅速性、簡易性及び
定量性を併せ持つ菌検出法が必要である。
菌検出法は、一定水準の感度と特異性を維持するため
に、判定に数週間かかるものが多く、また、特定の器
具、技術及び施設が必要である。レジオネラのように急
速に病状が悪化する感染症の場合、迅速性、簡易性及び
定量性を併せ持つ菌検出法が必要である。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明は、（１）フィル
ター上に細菌を捕捉し、（２）該細菌に対する一次抗
体、及び該抗体に対する酵素で標識された二次抗体もし
くは抗体様物質を、フィルター上に順次加えて抗原抗体
反応を行わせ、（３）フィルター上の未反応の一次抗体
及び二次抗体又は抗体様物質を洗浄し、（４）ニ次抗体
もしくは抗体様物質の標識酵素と反応して発色する基質
をフィルター上に加えて発色させ、（５）その発色強度
を検出することを特徴とする細菌の酵素免疫測定法であ
る。さらに本発明は、該細菌がレジオネラ属細菌である
酵素免疫測定法である。
ター上に細菌を捕捉し、（２）該細菌に対する一次抗
体、及び該抗体に対する酵素で標識された二次抗体もし
くは抗体様物質を、フィルター上に順次加えて抗原抗体
反応を行わせ、（３）フィルター上の未反応の一次抗体
及び二次抗体又は抗体様物質を洗浄し、（４）ニ次抗体
もしくは抗体様物質の標識酵素と反応して発色する基質
をフィルター上に加えて発色させ、（５）その発色強度
を検出することを特徴とする細菌の酵素免疫測定法であ
る。さらに本発明は、該細菌がレジオネラ属細菌である
酵素免疫測定法である。
【００１２】本発明は、フィルターを用いることによる
菌の濃縮、固定、酵素免疫測定法との組合せから、菌量
を色調の強さで捉えようとしたものである。すなわち、
フィルターを反応の支持体として用い、フィルター上に
菌を集め、直接、抗原抗体反応及び酵素反応を行わせ、
菌量を測定する方法である。本方法では、フィルター上
に菌を集め、濃縮することにより感度を高めることがで
きる。したがって、培養を必要とせず、数時間で判定が
可能であり、さらに測定に必要な特定の器具、技術及び
施設等がいらないので、迅速、簡易に菌の検出を行うこ
とができる。また、直接蛍光抗体法と基本原理は同じな
ので特異性は高い。
菌の濃縮、固定、酵素免疫測定法との組合せから、菌量
を色調の強さで捉えようとしたものである。すなわち、
フィルターを反応の支持体として用い、フィルター上に
菌を集め、直接、抗原抗体反応及び酵素反応を行わせ、
菌量を測定する方法である。本方法では、フィルター上
に菌を集め、濃縮することにより感度を高めることがで
きる。したがって、培養を必要とせず、数時間で判定が
可能であり、さらに測定に必要な特定の器具、技術及び
施設等がいらないので、迅速、簡易に菌の検出を行うこ
とができる。また、直接蛍光抗体法と基本原理は同じな
ので特異性は高い。
【００１３】本発明を応用したレジオネラの検出法を例
にとり説明する。まず、材料中に含まれる夾雑物は、プ
レフィルターにより除去する必要がある。プレフィルタ
ーは微細な粒子の保持能があるものを用いるが、保持能
の微妙な違いでその後の操作に支障をきたす。例えば、
保持能が弱いと微細な夾雑物が通り抜け、反応用フィル
ターへの濾過の際に目詰まりをおこす可能性が強い。逆
に保持能が強いと、微細な夾雑物のみならず、目的とす
る細菌までも捉えてしまい、反応用フィルターへは細菌
が集まらない。レジオネラの検出に用いるプレフィルタ
ーは、粒子保持能が１．２〜１．６μm 、材質はガラス
繊維性のものが好ましい。
にとり説明する。まず、材料中に含まれる夾雑物は、プ
レフィルターにより除去する必要がある。プレフィルタ
ーは微細な粒子の保持能があるものを用いるが、保持能
の微妙な違いでその後の操作に支障をきたす。例えば、
保持能が弱いと微細な夾雑物が通り抜け、反応用フィル
ターへの濾過の際に目詰まりをおこす可能性が強い。逆
に保持能が強いと、微細な夾雑物のみならず、目的とす
る細菌までも捉えてしまい、反応用フィルターへは細菌
が集まらない。レジオネラの検出に用いるプレフィルタ
ーは、粒子保持能が１．２〜１．６μm 、材質はガラス
繊維性のものが好ましい。
【００１４】プレフィルトレーション後の試料に含まれ
る細菌を集めるために、反応用フィルターを用いて濾過
し、フィルター上に細菌を収集する。ここで用いるフィ
ルターは、測定対象となる細菌が収集可能な特定の孔径
及び酵素免疫反応に適合する材質が必要とされる。本測
定では０．４５μm の孔径のものを用いる。これよりも
孔径の小さいものでは試料の通過速度が遅くなり、最終
的に目詰まりを起こす。また、酵素免疫反応をフィルタ
ー上で行ううえで、未反応の抗体を洗浄するためには、
蛋白質の吸着ができるだけ少ない材質のものが好まし
く、セルロースアセテート、ポリビニリデンジフルオリ
ド（ＰＶＤＦ）製のものが好ましい。
る細菌を集めるために、反応用フィルターを用いて濾過
し、フィルター上に細菌を収集する。ここで用いるフィ
ルターは、測定対象となる細菌が収集可能な特定の孔径
及び酵素免疫反応に適合する材質が必要とされる。本測
定では０．４５μm の孔径のものを用いる。これよりも
孔径の小さいものでは試料の通過速度が遅くなり、最終
的に目詰まりを起こす。また、酵素免疫反応をフィルタ
ー上で行ううえで、未反応の抗体を洗浄するためには、
蛋白質の吸着ができるだけ少ない材質のものが好まし
く、セルロースアセテート、ポリビニリデンジフルオリ
ド（ＰＶＤＦ）製のものが好ましい。
【００１５】次に反応用フィルターに残ったレジオネラ
を、抗体との反応のために緩衝液でpH７．０付近に調整
する。pH調整には、リン酸緩衝生理食塩液（１０mMＰＢ
Ｓ，pH７．２）、トリス緩衝生理食塩液（１０mMＴＢ
Ｓ，pH７．２）が使用できる。レジオネラと特異的に反
応する抗レジオネラ抗体は、非特異的反応を防ぐために
モノクローナル抗体が好ましく、例えばＭＡＢ−８３０
（ケミコン社製）、６９−９５５（ＩＣＮ社製）等が使
用できる。酵素標識二次抗体としては、通常使用されう
るものであれば、本方法に適用可能である。また、酵素
標識抗体様物質には、非特異的反応性の少ないものを選
ぶ必要があり、ペルオキシダーゼ標識プロテイン−Ｇが
用いられる。
を、抗体との反応のために緩衝液でpH７．０付近に調整
する。pH調整には、リン酸緩衝生理食塩液（１０mMＰＢ
Ｓ，pH７．２）、トリス緩衝生理食塩液（１０mMＴＢ
Ｓ，pH７．２）が使用できる。レジオネラと特異的に反
応する抗レジオネラ抗体は、非特異的反応を防ぐために
モノクローナル抗体が好ましく、例えばＭＡＢ−８３０
（ケミコン社製）、６９−９５５（ＩＣＮ社製）等が使
用できる。酵素標識二次抗体としては、通常使用されう
るものであれば、本方法に適用可能である。また、酵素
標識抗体様物質には、非特異的反応性の少ないものを選
ぶ必要があり、ペルオキシダーゼ標識プロテイン−Ｇが
用いられる。
【００１６】フィルター上の未反応の一次抗体、酵素標
識二次抗体又は抗体様物質の非特異的吸着物を除去する
ために、フィルターを特定の洗浄液により洗浄する。こ
のためには非イオン性界面活性剤であるトライトンＸ−
１００を含んだ緩衝液、例えば、ＰＢＳ／５％トライト
ンＸ−１００等が使用できる。抗体蛋白、酵素標識抗体
様物質のフィルターへの吸着は強固であるため、ここで
用いる界面活性剤トライトンＸ−１００は高濃度にする
必要がある。また、５％濃度のトライトンＸ−１００は
酵素反応を抑制するので、例えばＰＢＳ／５％トライト
ンＸ−１００で洗浄後はＰＢＳで置換する必要がある。
識二次抗体又は抗体様物質の非特異的吸着物を除去する
ために、フィルターを特定の洗浄液により洗浄する。こ
のためには非イオン性界面活性剤であるトライトンＸ−
１００を含んだ緩衝液、例えば、ＰＢＳ／５％トライト
ンＸ−１００等が使用できる。抗体蛋白、酵素標識抗体
様物質のフィルターへの吸着は強固であるため、ここで
用いる界面活性剤トライトンＸ−１００は高濃度にする
必要がある。また、５％濃度のトライトンＸ−１００は
酵素反応を抑制するので、例えばＰＢＳ／５％トライト
ンＸ−１００で洗浄後はＰＢＳで置換する必要がある。
【００１７】発色基質は、吸収極大波長を可視領域に持
ち、高感度で、判別しやすく、経時的安定性の高いもの
が好ましい。その条件を満たすためにはペルオキシダー
ゼ系の発色基質が好ましく、例えば、テトラメチルベン
ジジン（ＴＭＢＺ）、オルトフェニレンジアミン（ＯＰ
Ｄ）等が使用可能である。
ち、高感度で、判別しやすく、経時的安定性の高いもの
が好ましい。その条件を満たすためにはペルオキシダー
ゼ系の発色基質が好ましく、例えば、テトラメチルベン
ジジン（ＴＭＢＺ）、オルトフェニレンジアミン（ＯＰ
Ｄ）等が使用可能である。
【００１８】フィルター上に発色した色素の色調の度合
いから菌量を判定する。陰性では、フィルター上の発色
はほとんどみられない。
いから菌量を判定する。陰性では、フィルター上の発色
はほとんどみられない。
【００１９】
【発明の効果】以上のように、本発明による細菌の測定
法は、フィルター上に集めた細菌を直接、フィルター上
で酵素免疫測定法により検出する方法である。フィルタ
ー上に細菌を濃縮することが可能なため、検出感度を高
めることができ、培養が不要なので２〜３時間で判定す
る迅速性を併せ持つ。
法は、フィルター上に集めた細菌を直接、フィルター上
で酵素免疫測定法により検出する方法である。フィルタ
ー上に細菌を濃縮することが可能なため、検出感度を高
めることができ、培養が不要なので２〜３時間で判定す
る迅速性を併せ持つ。
【００２０】目的の細菌に特異的に反応する抗体で検出
する方法であり、非特異的吸着物は洗浄で除去されるた
め、目的の細菌に対する特異性が高い。
する方法であり、非特異的吸着物は洗浄で除去されるた
め、目的の細菌に対する特異性が高い。
【００２１】特定の器具、技術及び施設等を必要としな
いので、当事者が直接、細菌汚染の程度の判定を行うこ
とができる簡単な検査キットとして適用することができ
る。この発明の応用により、水媒介性の細菌、例えば大
腸菌、腸炎ビブリオ、赤痢菌、チフス、サルモネラ及び
コレラ等の検出に対しても応用することができる。
いので、当事者が直接、細菌汚染の程度の判定を行うこ
とができる簡単な検査キットとして適用することができ
る。この発明の応用により、水媒介性の細菌、例えば大
腸菌、腸炎ビブリオ、赤痢菌、チフス、サルモネラ及び
コレラ等の検出に対しても応用することができる。
【００２２】
【実施例】図１は、本発明を応用したレジオネラの検出
法のフローチャートを示したものである。試料として、
空調用冷却塔の冷却水を２１施設から採取した。２０ml
用ディスポーザブルシリンジに試料水を採り、プレフィ
ルター（ガラス繊維，ポアサイズ１．２μm ）を先端に
接続して濾過した。試料水は１試料につき１００mlずつ
用いた。
法のフローチャートを示したものである。試料として、
空調用冷却塔の冷却水を２１施設から採取した。２０ml
用ディスポーザブルシリンジに試料水を採り、プレフィ
ルター（ガラス繊維，ポアサイズ１．２μm ）を先端に
接続して濾過した。試料水は１試料につき１００mlずつ
用いた。
【００２３】１０ml用ディスポーザブルシリンジに濾過
水を採り、反応フィルター（セルロースアセテート，ポ
アサイズ０．４５μm ）を先端に接続して濾過した。標
準として、ホルマリン殺菌固定した１×１０6 ＣＦＵ／
ml、１×１０5 ＣＦＵ／ml、１×１０4 ＣＦＵ／mlのレ
ジオネラ標準菌株（Legionella pneumophila，ＡＴＣＣ
３３１５２）懸濁液、陰性対照として、滅菌蒸留水を
それぞれ１ml用ディスポーザブルシリンジに１mlを採
り、別々の反応フィルターで濾過した。
水を採り、反応フィルター（セルロースアセテート，ポ
アサイズ０．４５μm ）を先端に接続して濾過した。標
準として、ホルマリン殺菌固定した１×１０6 ＣＦＵ／
ml、１×１０5 ＣＦＵ／ml、１×１０4 ＣＦＵ／mlのレ
ジオネラ標準菌株（Legionella pneumophila，ＡＴＣＣ
３３１５２）懸濁液、陰性対照として、滅菌蒸留水を
それぞれ１ml用ディスポーザブルシリンジに１mlを採
り、別々の反応フィルターで濾過した。
【００２４】２．５ml用ディスポーザブルシリンジにＰ
ＢＳを満たし、試料、陽性対照、陰性対照の各反応フィ
ルターを２回洗浄した。抗レジオネラ抗体（×５００希
釈）及びペルオキシダーゼ標識プロテイン−Ｇ（×４０
００希釈）の混合液を１ml用ディスポーザブルシリンジ
に採り、約０．５mlずつ各反応フィルターに注入し、室
温で１時間反応させた。
ＢＳを満たし、試料、陽性対照、陰性対照の各反応フィ
ルターを２回洗浄した。抗レジオネラ抗体（×５００希
釈）及びペルオキシダーゼ標識プロテイン−Ｇ（×４０
００希釈）の混合液を１ml用ディスポーザブルシリンジ
に採り、約０．５mlずつ各反応フィルターに注入し、室
温で１時間反応させた。
【００２５】ＰＢＳ／５％トライトンＸ−１００溶液を
２．５ml用ディスポーザブルシリンジに採り、各反応フ
ィルターを５回洗浄し、さらにＰＢＳで２回洗浄した。
発色基質（ＴＭＢＺ溶液）を２．５ml用ディスポーザブ
ルシリンジに採り、約０．５mlずつ各反応フィルターに
注入し、室温で３０分反応させた。
２．５ml用ディスポーザブルシリンジに採り、各反応フ
ィルターを５回洗浄し、さらにＰＢＳで２回洗浄した。
発色基質（ＴＭＢＺ溶液）を２．５ml用ディスポーザブ
ルシリンジに採り、約０．５mlずつ各反応フィルターに
注入し、室温で３０分反応させた。
【００２６】陰性対照と比較して判定したところ、標準
のうち、１×１０6 ＣＦＵ、１×１０5 ＣＦＵは明らか
に差がみられたが、１×１０4 ＣＦＵでは差がみられな
かった。このことから反応系の最低検出感度は１×１０
5 ＣＦＵと推定された。試料は２１例中９例が陰性対照
と比較して差が見られ、試料水１００ml中に最低１×１
０5 ＣＦＵ以上の菌量があることを示した。
のうち、１×１０6 ＣＦＵ、１×１０5 ＣＦＵは明らか
に差がみられたが、１×１０4 ＣＦＵでは差がみられな
かった。このことから反応系の最低検出感度は１×１０
5 ＣＦＵと推定された。試料は２１例中９例が陰性対照
と比較して差が見られ、試料水１００ml中に最低１×１
０5 ＣＦＵ以上の菌量があることを示した。
【図１】本発明を応用した、レジオネラの検出法のフロ
ーチャートである。
ーチャートである。
Claims (2)
- 【請求項１】 （１）フィルター上に細菌を捕捉し、
（２）該細菌に対する一次抗体、及び該抗体に対する酵
素で標識された二次抗体もしくは抗体様物質を、フィル
ター上に順次加えて抗原抗体反応を行わせ、（３）フィ
ルター上の未反応の一次抗体及び二次抗体又は抗体様物
質を洗浄し、（４）ニ次抗体もしくは抗体様物質の標識
酵素と反応して発色する基質をフィルター上に加えて発
色させ、（５）その発色強度を検出することを特徴とす
る細菌の酵素免疫測定法。 - 【請求項２】 細菌がレジオネラ属細菌である請求項１
記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12850492A JPH05322897A (ja) | 1992-05-21 | 1992-05-21 | フィルターを用いる細菌の酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12850492A JPH05322897A (ja) | 1992-05-21 | 1992-05-21 | フィルターを用いる細菌の酵素免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05322897A true JPH05322897A (ja) | 1993-12-07 |
Family
ID=14986382
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12850492A Pending JPH05322897A (ja) | 1992-05-21 | 1992-05-21 | フィルターを用いる細菌の酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05322897A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002048712A1 (en) * | 2000-12-13 | 2002-06-20 | The Additional Director (Ipr), Defence Research & Development Organisation | A method of detection of e-coli, other coliforms and pathogenic organisms in water |
| JP2012505648A (ja) * | 2008-10-17 | 2012-03-08 | ビオメリュー | レジオネラ属バクテリアを検出および／または同定するための反応培地 |
| CN102879565A (zh) * | 2012-09-26 | 2013-01-16 | 四川大学 | 微生物样品快速检测方法及其实施检测装置 |
| CN111007242A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-04-14 | 苏州和迈精密仪器有限公司 | 基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法、装置及应用 |
-
1992
- 1992-05-21 JP JP12850492A patent/JPH05322897A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002048712A1 (en) * | 2000-12-13 | 2002-06-20 | The Additional Director (Ipr), Defence Research & Development Organisation | A method of detection of e-coli, other coliforms and pathogenic organisms in water |
| JP2012505648A (ja) * | 2008-10-17 | 2012-03-08 | ビオメリュー | レジオネラ属バクテリアを検出および／または同定するための反応培地 |
| CN102879565A (zh) * | 2012-09-26 | 2013-01-16 | 四川大学 | 微生物样品快速检测方法及其实施检测装置 |
| CN102879565B (zh) * | 2012-09-26 | 2014-12-03 | 四川大学 | 微生物样品快速检测方法及其实施检测装置 |
| CN111007242A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-04-14 | 苏州和迈精密仪器有限公司 | 基于多层高分子多孔膜的荧光免疫检测方法、装置及应用 |
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