JPH05331187A - トリペプチド、その製造方法及びエンドセリン拮抗剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ＥＴ−１により引き起こされる血管の収縮反
応を抑制し、高血圧症、気管支喘息の治療剤として有用
である新規なトリペプチド、及びその製造方法、並びに
それを含有するエンドセリン拮抗剤を提供する。 【構成】 代表例として、ロイシル−トリプトフィル−
トリプトファン（又はヒスチジン）で構成されるトリペ
プチドのロイシン側に含窒素複素環カルボニルが結合し
てなる、エンドセリン拮抗作用を有するトリペプチドを
含むトリペプチド。ペプチド合成によるその製造方法。
このトリペプチドを有効成分として含有するエンドセリ
ン拮抗剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、エンドセリン受容体の
拮抗剤として有用な新規なトリペプチド、このトリペプ
チドの製造方法、及びこのトリペプチドを有効成分とし
て含有するエンドセリン拮抗剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】１９８０年の内皮依存性血管拡張反応の
発見以来、血管緊張の調節機構に於ける血管内皮の役割
が重要視されており、１９８２年頃からは種々の刺激に
対する内皮依存性収縮反応或は収縮増強も報告されてい
る。最近、ブタ大動脈内皮細胞の培養上清中に遊離され
る強力なペプチド性血管収縮因子の単離、精製並びに構
造決定がなされ、これは２１個のアミノ酸からなるペプ
チドでありエンドセリン（ＥＴ）と呼ばれている［M.Ya
nagisawa et al.,Nature,332,411-415(1988)] 。その
後、ヒトのエンドセリンも同じアミノ酸配列であること
がわかっている［Y.Itoh et al.,FEBS lett.,231,440-4
44(1988)］。

【０００３】エンドセリンとしては、ＥＴ−１、ＥＴ−
２及びＥＴ−３の三種が見出されており、その受容体も
各ＥＴに対する結合親和性の違いから、ＥＴ−１に選択
的なＥＴ_A 受容体、ＥＴ−１及びＥＴ−３に非選択的な
ＥＴ_B 受容体の二種が見出されている。血管平滑筋細胞
上に偏在するＥＴ_A 受容体にエンドセリンが作用すると
血管を強力に収縮させる。

【０００４】ＥＴ−１により引き起こされる血管の収縮
反応を抑制する物質として、幾つかの化合物が知られて
いる。例えば、本特許出願人はＮ−ペンタノイルトリプ
トファンについて特許出願しており（特開平３−２５１
５６２号公報参照）、また、New Current ３（９）１９
９２年４月１０日号４〜５頁には、（Ｒ）２−［（Ｒ）
−２−［（Ｓ）−２−［［１−（ヘキサヒドロ−１Ｈ−
アゼピニル）］カルボニル］アミノ−４−メチルペンタ
ノイル］アミノ−３−［３−（１−メチル−１Ｈ−イン
ドリル）］プロピオニル］アミノ−３−（２−ピリジ
ル）プロピオン酸がＥＴ_A 受容体の拮抗剤であることが
記載されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ＥＴ
−１により引き起こされる血管の収縮反応を抑制し、高
血圧症、気管支喘息、腎不全、くも膜下出血後の脳卒中
発作等の治療剤として有用である新規なトリペプチド、
及びその製造方法、並びにそれを含有するエンドセリン
拮抗剤を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、一般式
（Ｉ）：

【０００７】

【化９】

【０００８】［式中、Ａは、下記式（ａ）：

【０００９】

【化１０】

【００１０】（式中、ｍは４〜７の整数であり、メチレ
ン基の１〜３個が、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹ −（但
し、Ｒ¹ は水素原子、−ＣＨＯ基又は炭素数１〜６のア
ルキル基を表す）又は−ＣＯ−で示される基で置換され
ていてもよく、又はエチレン基がベンゼン環と縮合して
いてもよい）で示される基を表し、Ｂは、−ＣＯ−、−
ＣＳ−又は−ＳＯ₂ −で示される基を表し、Ｄは、−Ｎ
Ｒ² −（但し、Ｒ² は水素原子又は炭素数１〜６のアル
キル基を表す）で示される基を表し、又は、Ａ−Ｂ−Ｄ
−でフタルイミド基を表し、Ｅは、−ＣＨＲ³ −（但
し、Ｒ³ は、アリール基又は芳香族複素環基で置換され
ていてもよい炭素数１〜５のアルキル基、又は硫黄原子
含有複素環基を表す）で示される基を表し、Ｆは、下記
式：

【００１１】

【化１１】

【００１２】（式中、Ｒ⁴ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭
素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基
を有するフェニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁵
（式中、Ｒ⁵ は炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数
１〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基を表
す）で表される基である）で示される基を表し、Ｇは、
下記式：

【００１３】

【化１２】

【００１４】（式中、Ｒ⁶ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭
素数１〜６のアルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基
を有するフェニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁸
（式中、Ｒ⁸ は炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数
１〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基を表
す）で表される基であり、Ｒ⁷ は水素原子、炭素数１〜
６のアルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有し且
つ１〜３個のフェニル基を有するアラルキル基、炭素数
２〜６のアルコキシアルキル基又は式−（ＣＨ₂ )_qＯ−
Ｒ⁹ （式中、ｑは１〜３の整数であり、Ｒ⁹ は炭素数１
〜４のアルキレン基を有するフェニルアルキル基であ
る）で示される基を表し、Ｑは水素原子、アルカリ金属
原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４の
アルキレン基を有するフェニルアルキル基を表す］で表
されるトリペプチドである。

【００１５】他の本発明は、上記一般式（Ｉ）で表され
るトリペプチドを製造する方法であって、それぞれ保護
基を有していてもよいフラグメントであるＡ−Ｂ−Ｚ
（但し、Ｚはヒドロキシル基又はハロゲン原子であ
る）、Ｈ−Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨ、Ｈ−Ｆ−ＯＨ及びＨ−Ｇ
−ＯＱ（これらのフラグメントはその反応性誘導体であ
ってもよい）を、一般式（Ｉ）で表されるトリペプチド
になるように任意の順序で縮合させるか、或は上記の四
種のフラグメントの二種又は三種を任意の組み合わせで
予め縮合して得た化合物と、残りのフラグメントの二種
（予め縮合しておいてもよい）又は一種とを縮合させ、
所望により保護基を脱離させることからなる製造方法で
ある。

【００１６】更に他の本発明は、上記一般式（Ｉ）で表
されるトリペプチドを有効成分として含有することを特
徴とするエンドセリン拮抗剤である。

【００１７】本発明の好適な態様は下記の通りである。 （１）一般式（Ｉ）に於いて、Ａが下記式：

【００１８】

【化１３】

【００１９】（式中、Ｒ¹ は水素原子、−ＣＨＯ基、又
は炭素数１〜４のアルキル基である）で示される基を表
し、Ｂが−ＣＯ−で示される基を表し、Ｄが−ＮＨ−で
示される基を表し、Ｅが−ＣＨＲ³ −（但し、Ｒ³ は、
炭素数１〜５のアルキル基を表す）で示される基を表
し、Ｆ、Ｇ及びＱが一般式（Ｉ）に於いて定義した通り
であることを特徴とする、上記の一般式（Ｉ）で表され
るトリペプチド。

【００２０】本発明の前記一般式（Ｉ）で表される化合
物は、一般式（Ｉ）から明らかなようにＤ−Ｅ−ＣＯで
示されるα−アミノ酸単位、Ｆで示されるα−アミノ酸
単位及びＧで示されるα−アミノ酸単位からなるトリペ
プチドであり、一般式（Ｉ）に於けるＧで示されるα−
アミノ酸単位の構造が、前記New Current ３（９）１９
９２年４月１０日号４〜５頁に記載されている化合物と
は全く異なるトリペプチドである。

【００２１】一般式（Ｉ）に於いて、Ａは、下記式

【００２２】

【化１４】

【００２３】（式中、Ｒ¹ は水素原子、−ＣＨＯ基、又
は炭素数１〜４のアルキル基（例えば、メチル、エチ
ル、プロピル、ブチル等）である）で示される基である
ことが好ましい。

【００２４】一般式（Ｉ）に於いて、Ｂは−ＣＯ−で示
される基であることが好ましく、Ｄは−ＮＨ−で示され
る基であることが好ましい。

【００２５】一般式（Ｉ）に於いて、Ｅは下記式

【００２６】

【化１５】

【００２７】で示される基であることが好ましく、特
に、下記式

【００２８】

【化１６】

【００２９】で示される基であることが好ましい。

【００３０】一般式（Ｉ）に於いて、Ｆで示される基の
うち、Ｒ⁴ が水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜４のア
ルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル
等）、ベンジル基等の基である前記（ｆ−１）又は（ｆ
−２）で示される基が好ましい。

【００３１】一般式（Ｉ）に於いて、Ｇで示される基の
うち、Ｒ⁶ が水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜４のア
ルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル
等）、ベンジル等の基である前記（ｇ−１）又は（ｇ−
２）で示される基、及びＲ⁷が水素原子、ベンジルオキ
シメチル基、ベンズヒドリル基、トリチル基等の基であ
る（ｇ−３）で示される基が好ましい。

【００３２】本発明のトリペプチドは、一般式（Ｉ）に
於いてＤ−Ｅ−ＣＯで示されるα−アミノ酸単位がＬ型
であり、Ｆで示されるアミノ酸単位及びＧで示されるア
ミノ酸単位が共にＤ型であるトリペプチドであることが
好ましい。

【００３３】本明細書に於いて、アミノ酸、ペプチド、
保護基、溶媒等は当該技術分野で慣用されている略号、
或いは、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの命名委員会で採用された
略号を使用している。例えば下記の略号が使用される。
また、アミノ酸の表記に於いて特記しない場合アミノ酸
はＬ型を意味するものとする。

【００３４】EDTA：エチレンジアミンテトラ酢酸 EGTA：エチレングリコールビス（２−アミノエチルエー
テル）テトラ酢酸 PMSF：フェニルメチルスルホニルフルオリド Leu ：Ｌ−ロイシン Trp ：Ｌ−トリプトファン D-Trp ：Ｄ−トリプトファン His ：Ｌ−ヒスチジン D-His ：Ｄ−ヒスチジン Bzl ：ベンジル DMAP：４−ジメチルアミノピリジン WSC・HCl ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロ
ピル）カルボジイミド塩酸塩 HOBt：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール TsOH：パラトルエンスルホン酸 Pd-C：パラジウム−炭素 THF ：テトラヒドロフラン

【００３５】本発明のトリペプチドは、他の本発明の製
造方法により製造することができる。本発明の製造方法
に於いて、原料として使用するＡ−Ｂ−Ｚ（但し、Ｚは
ヒドロキシル基又はハロゲン原子、好ましくは、塩素で
ある）、Ｈ−Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨ、Ｈ−Ｆ−ＯＨ及びＨ−
Ｇ−ＯＱの各フラグメントは、そのままでもよく、必要
に応じて反応に関与しないカルボキシル基、アミノ基等
に保護基を有するものであってもよい。この保護基とし
ては下記の基を例示することができる。

【００３６】カルボキシル基の保護基としては、例え
ば、メチル、エチル、ベンジル、ｐ−ニトロベンジル、
ｔ−ブチル、シクロヘキシル等のエステルを挙げること
ができる。

【００３７】アミノ基の保護基としては、例えば、ベン
ジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、
イソボルニルオキシカルボニル基、９−フルオレニルメ
チルオキシカルボニル基等を挙げることができる。

【００３８】インドール基の保護基としては、例えば、
ホルミル基、ベンジルオキシカルボニル基、２，４−ジ
クロロベンジルオキシカルボニル基、２，２，２−トリ
クロロエトキシカルボニル基、４−メトキシ−２，３，
６−トリメチルベンゼンスルホニル基、２，４，６−ト
リメトキシベンゼンスルホニル基、メシチレン−２−ス
ルホニル基等を挙げることができる。

【００３９】イミダゾール基の保護基としては、ベンジ
ル基、２−ニトロベンジル基、フェナシル基、ベンジル
オキシメチル基、ベンズヒドリル基、２，２，２−トリ
フルオロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチル
基、２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブトキシカル
ボニルアミノエチル基、２，４−ジニトロフェニル基、
２，４，６−トリニトロフェニル基、トリチル基、（４
−ピリジル）ジフェニルメチル基、ピペリジノカルボニ
ル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカル
ボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基、４−トル
エンスルホニル基、４−メトキシベンゼンスルホニル
基、９−フルオレニルメトキシカルボニル基、ｔ−ブト
キシメチル基等を挙げることができる。

【００４０】本発明の製造方法に於いて、ペプチド結合
を形成するための縮合方法として、アジド法、酸クロラ
イド法、酸無水物法、混合酸無水物法、Ｎ，Ｎ′−ジシ
クロヘキシルカルボジイミド法、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘ
キシルカルボジイミド−アディティブ法、活性エステル
法、カルボニルジイミダゾール法、酸化還元法、ウッド
ワード試薬Ｋを用いる方法等が挙げられる。

【００４１】また、縮合反応を行なう前に、それ自体公
知の手段により、反応に関与するカルボキシル基、アミ
ノ基等をその反応性誘導体とし活性化してもよい。

【００４２】カルボキシル基の反応性誘導体としては、
例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エステル［ア
ルコール（例、ペンタクロロフェノール、２，４−ジニ
トロフェノール、シアノメチルアルコール、ｐ−ニトロ
フェノール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，
３−ジカルボキシイミド、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミ
ド、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール）とのエステル］等が挙げられる。アミ
ノ基の反応性誘導体としては、例えば、対応する燐酸ア
ミドが挙げられる。

【００４３】反応は、液相法によっても固相法によって
も行うことができるが、通常溶媒中で液相で行うことが
好ましく、例えば、クロロホルム、ジクロルメタン、酢
酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルス
ルホキシド、ピリジン、ジオキサン、テトラヒドロフラ
ン、水、メタノール等の溶媒、又は、これらの混合物中
で行なうことができる。

【００４４】反応温度は、一般に使用される約−３０℃
〜約５０℃の範囲で行なうことができる。

【００４５】本発明の製造方法に於いて保護基を脱離さ
せる場合には、使用する保護基の種類によって異なる
が、ペプチド結合に影響を与えず、保護基が除かれるよ
うにすることが必要である。

【００４６】保護基の脱離方法としては、例えば、ギ
酸、塩化水素、臭化水素、無水フッ化水素、メタンスル
ホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ
酢酸、又は、これらの混合物等による酸処理が挙げられ
るが、この他に、液体アンモニア中ナトリウム、パラジ
ウム炭素による還元等も挙げられる。上記酸処理による
脱保護基反応に於いては、アニソール、フェノール、チ
オアニソールの如きカチオン捕捉剤の添加が有効であ
る。

【００４７】このようにして製造された本発明のトリペ
プチドは、反応終了後、それ自体公知のペプチドの分離
手段、例えば、抽出、分配、再沈殿、再結晶、カラムク
ロマトグラフィー等によって収得することができる。

【００４８】また、本発明のトリペプチドは、それ自体
公知の方法により、カルボン酸エステル又は、それらの
薬理学的に許容され得る塩にすることができる。

【００４９】本発明の製造方法に於いて、原料として使
用する各フラグメントは、市販品として入手することが
できるか、又はそれ自体公知の合成方法により若しくは
公知の合成方法を参考にして当業者が容易に合成するこ
とができる。また二種又は三種のフラグメントの縮合物
も前記のようにして容易に製造することができる。

【００５０】例えば、前記のＡ−Ｂ−Ｚのフラグメント
とＨ−Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨのフラグメントとの縮合物の一
つである、下記式（Ｘ−１）：

【００５１】

【化１７】

【００５２】（式中、ｍは４〜７の整数である）で表さ
れる化合物は、反応に関与しない溶媒の存在下で、下記
式：

【００５３】

【化１８】

【００５４】（式中、ｍは４〜７の整数である）で表さ
れる環状アミンに、トリクロロメチルクロロホルメート
又はホスゲンを作用させて、下記式：

【００５５】

【化１９】

【００５６】で表される塩化カルバミルを合成し、これ
を反応に関与しない溶媒中で、カルボキシル基を保護し
たロイシンと反応させた後、カルボキシル基の保護基を
脱離させることにより合成することができる。また、上
記の式（Ｘ−１）で表される化合物は、上記の塩化カル
バミルとロイシンとを用いて、公知のショッテン−バウ
マン反応により合成することもできる。

【００５７】また、前記のＡ−Ｂ−Ｚのフラグメントと
Ｈ−Ｄ−Ｅ−ＣＯＯＨのフラグメントとの縮合物の一つ
である、下記式（Ｘ−２）：

【００５８】

【化２０】

【００５９】（式中、ｍは４〜７の整数である）で表さ
れる化合物は、反応に関与しない溶媒の存在下で、下記
式：

【００６０】

【化２１】

【００６１】（式中、ｍは４〜７の整数である）で表さ
れるスルホクロリドを、カルボキシル基を保護したロイ
シンと反応させた後、カルボキシル基の保護基を脱離さ
せることにより合成することができる。

【００６２】本発明のトリペプチドは、下記の試験結果
から明らかなように、エンドセリン受容体へのエンドセ
リンの結合に対して優れた阻害作用を有しており、ま
た、エンドセリンの血管収縮反応を抑制する作用が大き
いことから、優れたエンドセリン受容体拮抗剤である。

【００６３】［エンドセリン受容体へのエンドセリン結
合阻害試験］新鮮なブタ大動脈から以下の方法により膜
画分を調製した。脂肪組織を除去し細切した血管組織
を、液体窒素中で凍結しワーリングブレンダーを用いて
粉末化した。ついで緩衝液［２５ｍＭヘペス、ｐＨ７．
４、０．２５Ｍ蔗糖、５ｍＭＥＤＴＡ・Ｎａ₂ 、１ｍＭ
ＥＧＴＡ、０．４ｍＭフェニルメチルスルホニルフル
オリド（ＰＭＳＦ）］中で、ホモジナイザー（YAMATO U
ltra-Dispercer）を用いて均一化した。ホモジネート
は、１，４７５×ｇおよび２，７００×ｇで各々１０分
間遠心分離し、その上清をさらに１０，５００×ｇで６
０分間遠心分離した。得られたペレットを緩衝液（２５
ｍＭヘペス、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ・Ｎａ₂ 、０．４ｍＭ ＰＭＳＦ、５μｇ
／ｍｌアプロチニン）にて１回洗浄し、０．２５ｍｇ／
ｍｌバシトラシンを加えた同緩衝液に再懸濁して−８０
℃で保存した。

【００６４】膜標品（４０μｇ蛋白／assay ）は、［
¹²⁵Ｉ］エンドセリン（１×１０^-11Ｍ）（Amersham、比
活性７４ＴＢｑ／ミリモル）及び１×１０^-7Ｍの被験物
質と共に、最終用量２５０μｌの緩衝液（５０ｍＭヘペ
ス、ｐＨ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭ ＭｇＣ
ｌ₂ 、０．５ｍｇ／ｍｌバシトラシン、１ｍｇ／ｍｌウ
シ血清アルブミン）中で２５℃で９０分間インキュベー
トした。反応後、セルハーベスタ（Brandel M-48R ）を
用いて０．３％ポリエチレンイミンで処理したWhatmann
ＧＦ／Ｂフィルターにて吸引濾過した。フィルターは
３ｍｌの洗浄用緩衝液（２５ｍＭトリス・塩酸、ｐＨ
７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂ ）で
３回洗浄し、フィルター上に捕捉した放射活性をガンマ
カウンター（アロカ ＡＲＣ−３０１Ｂ）にて測定し
た。

【００６５】被験物質の阻害率（Ａ）を次式により算出
した。 Ａ（％）＝１００−（Ｂ−Ｃ）／（Ｄ−Ｃ）×１００ 但し、Ｂ：被験物質１×１０^-7Ｍ存在下の放射活性 Ｃ：１×１０^-7Ｍのエンドセリン存在下の放射活性 Ｄ：１×１０^-11 Ｍの［ ¹²⁵Ｉ］エンドセリン単独によ
る放射活性

【００６６】被験物質として下記の実施例で得られた化
合物を使用したときの阻害率を表１に示す。

【００６７】

【表１】 表１ 阻害率 ────────────────────── 化合物 １×１０^-7Ｍ（％） ────────────────────── 実施例１ ８８ 実施例２ ５９ 実施例３ ３５ 実施例４ ６８ 実施例５ ４６ ──────────────────────

【００６８】［エンドセリンによる血管収縮への拮抗試
験］ウィスター系雄性ラットの肺動脈を摘出し、内皮細
胞を除去してリング標本を作成した。標本を混合ガス
（９５％Ｏ₂ ＋５％ＣＯ₂ ）を通気し、クレブス−リン
ゲル(Krebs-Ringer)液を満たした。オーガン−バス(org
an-bath)（３７℃）中に、０．５ｇの静止張力のもとに
懸垂させた。収縮反応は、force-displacementピックア
ップを用いて等尺性に記録した。本発明のトリペプチド
（被験物質）を予め適用しておき、その後エンドセリン
−１（２×１０^-9Ｍ）を適用したときの収縮に対する作
用を測定した。

【００６９】被験物質の収縮抑制率（Ｅ）は次式により
算出した。 Ｅ（％）＝（１−Ｆ／Ｇ）×１００ Ｆ：被験物質処置後のエンドセリン−１収縮率 Ｇ：エンドセリン−１の収縮率

【００７０】被験物質として下記の実施例で得られた化
合物を使用したときのエンドセリン収縮抑制率を表２に
示す。

【００７１】

【表２】 表２ エンドセリン収縮抑制率 ────────────────────────────── 化合物 抑制率 （濃度） ────────────────────────────── 実施例１ ４３％ （１０^-7Ｍ） 実施例４ ２１％ （３×１０^-6Ｍ） ──────────────────────────────

【００７２】上記の結果から明らかなように、本発明の
トリペプチドは優れたエンドセリン拮抗作用を有してい
るので、例えば、高血圧症、狭心症、心筋症、動脈硬
化、心筋梗塞、レイノー病、脳動脈痙攣、脳虚血、くも
膜下出血後の晩期脳痙攣などの脳卒中発作、気管支収縮
などの喘息、急性腎不全などの腎不全などの治療剤とし
て使用できる。

【００７３】本発明のトリペプチドは、公知の固体又は
液体賦形剤と混合して、非経口投与、経口投与及び外部
投与に適した医薬配合の形態で使用できる。投与形態と
しては、注射剤、吸入剤、シロップ剤、乳剤、散剤、カ
プセル剤、顆粒剤、錠剤、軟膏、坐剤などいずれの形態
であってもよい。この医薬配合には、使用形態に応じた
薬剤を調製するのに通常使用される、佐剤、安定剤、湿
潤剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、増量剤、結合
剤、崩壊剤、滑沢剤等が含まれていてもよい。添加剤と
して、注射剤用の蒸留水、生理食塩水、リンゲル液、グ
ルコース、糖シロップ、ゼラチン、植物油、カカオバタ
ー、エチレングリコール、ヒドロキシプロピルセルロー
ス、ラクトース、蔗糖、コーンスターチ、ステアリン酸
マグネシウム、タルク等を使用できる。

【００７４】本発明のトリペプチドのエンドセリン拮抗
剤としての投与量は、投与方法、患者の症状の程度、患
者の年令、体重等によって異なるが、通常は、本発明の
トリペプチドの大人に対し経口投与する場合の１日投与
量は約０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、非経口投
与する場合の１日投与量は約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ
体重である。

【００７５】

【実施例】次に、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。

【００７６】［実施例１］ Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（１−ヘキサメチレンイミノカルボニ
ル）−Ｌ−ロイシル］−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプト
フィル］−Ｄ−トリプトファン ナトリウム塩の合成

【００７７】（１） Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ
−トリプトファン ベンジルエステルの合成 Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−トリプトファン３．
０４ｇ（１０．０ミリモル）を乾燥塩化メチレン４０ｍ
ｌに溶解し、これに４−ジメチルアミノピリジン（以
下、ＤＭＡＰと略記する）１２２ｍｇ（１．０ミリモ
ル）及びベンジルアルコール１．１９ｇ（１１．０ミリ
モル）を加えた。この溶液に、氷冷下、１−エチル−３
−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸
塩（以下、ＷＳＣ・ＨＣｌと略記する）２．１０ｇ（１
１．０ミリモル）を加え、室温で一晩撹拌した。反応液
を水洗後濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解し、この溶液
を１０％クエン酸、水、飽和重曹水、水、飽和食塩水の
順に洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥し
た後、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーで精製（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）するこ
とにより、標題化合物を白色結晶性粉末として定量的に
得た。

【００７８】（２） Ｄ−トリプトファン ベンジルエ
ステル塩酸塩の合成 上記（１）で得られたＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ
−トリプトファン ベンジルエステル（理論量:1０ミリ
モル）を９０％ギ酸６０ｍｌに溶解し、氷浴から室温に
戻しながら６時間撹拌した。ギ酸を減圧下留去し、残渣
に１Ｎ−塩酸／ジオキサン１０ｍｌを加え、室温で１５
分間撹拌した後、エーテルを加えて結晶化した。結晶を
濾取し、エーテルで洗浄し減圧乾燥することにより、標
題化合物を白色結晶性粉末として２．６８ｇ（収率：８
１．２％）得た。

【００７９】（３） Ｎ−（ヘキサメチレンイミノカル
ボニル）−Ｌ−ロイシン ベンジルエステルの合成 Ｌ−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ・ＴｓＯＨ６．７６ｇ（１７．２
ミリモル）を乾燥塩化メチレン５０ｍｌに溶解し、トリ
エチルアミン９．６ｍｌを加え、更にヘキサメチレンイ
ミノカルボニルクロライド２．７８ｇ（１７．２ミリモ
ル）を加え、３日間加熱還流した。反応液を濃縮し、残
渣に酢酸エチルを加え、不溶物を濾過により除き濾液を
濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
で精製することにより、標題化合物５．２９ｇ（収率：
８８．９％）を白色結晶性粉末として得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ） δ；0.9-1.0(6H,m), 1.
5-1.8(11H,m), 3.3-3.5(4H,m), 4.5-5.2(4H,m),7.3-7.4
(5H,m)

【００８０】（４） Ｎ−（ヘキサメチレンイミノカル
ボニル）−Ｌ−ロイシンの合成 （３）で得られた化合物５．２９ｇ（１５．３ミリモ
ル）をＴＨＦ５０ｍｌに溶解し、１０％Ｐｄ−Ｃ３５ｍ
ｇを加え、水素雰囲気下で一夜攪拌した。反応液を濾過
し、濾液を濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、飽和
重曹水で抽出した。水層を分取し、これに１Ｎ−ＨＣｌ
を加えて酸性にし、酢酸エチルで再抽出した。有機層を
濃縮することにより、標題化合物５．２９ｇ（定量的収
率）を白色アモルファスとして得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ） δ；0.94-0.98(6H,m),
1.57-1.81(11H,m), 3.36-3.45(4H,m),4.33-4.38(1H,m),
4.74-4.76(1H,m)

【００８１】（５） Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ
ⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファ
ン ベンジルエステルの合成 上記（２）で得られたＤ−トリプトファン ベンジルエ
ステル塩酸塩１９８ｍｇ（０．６ミリモル）を乾燥塩化
メチレン５ｍｌに溶解し、これにＮ−ｔ−ブトキシカル
ボニル−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトファン１９９ｍ
ｇ（０．６ミリモル）、トリエチルアミン０．０８ｍｌ
（０．６ミリモル）、および１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾール（以下、ＨＯＢｔと略記する）一水和物９２ｍ
ｇ（０．７ミリモル）を加え、氷浴上で撹拌した。更
に、ＷＳＣ・ＨＣｌ １２６ｍｇ（０．７ミリモル）を
加え、室温で一晩撹拌した。反応液を上記（１）の場合
と同様に処理することにより、標題化合物３６０ｍｇを
定量的に得た。

【００８２】（６） Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフ
ィル−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステルの合成 上記（５）で得られたＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ
ⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファ
ン ベンジルエステル（理論量：０．３ミリモル）を９
０％ギ酸６ｍｌに溶解し、室温で３時間撹拌した。反応
液を減圧下濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解し、飽和重
曹水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た後濃縮し、得られた残渣をそのまま次の反応に用い
た。

【００８３】（７） Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（１−ヘキサメ
チレンイミノカルボニル）−Ｌ−ロイシル］−Ｎⁱⁿ−ホ
ルミル−Ｄ−トリプトフィル］−Ｄ−トリプトファン
ベンジルエステルの合成 上記（４）で得られたＮ−ヘキサメチレンイミノカルボ
ニル−Ｌ−ロイシン１１０ｍｇ（０．４３ミリモル）及
び上記（６）で得られたＮⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプト
フィル−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステル２２０
ｍｇ（０．４３ミリモル）を乾燥塩化メチレン１０ｍｌ
に溶解し、氷浴上で撹拌した。そこに、ＷＳＣ・ＨＣｌ
９０ｍｇ（０．４７ミリモル）を加え、室温で一晩撹
拌した。溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチルに溶解
し、水、１０％クエン酸、水、飽和重曹水、水、飽和食
塩水を用いて順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。溶媒を減圧濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィー（クロロホルム）で精製し、標題化合物を淡黄色
結晶として１６５ｍｇ（収率：５１．６％) 得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ） δ；0.78-0.82(6H,m),
1.2-1.7(11H,m), 2.9-3.4(8H,m), 4.6-4.9(3H,m),5.09
(2H,s), 6.4-8.7(20H,m) FAB MS(m/z);747(M+1)

【００８４】（８） Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（１−ヘキサメ
チレンイミノカルボニル）−Ｌ−ロイシル］−Ｎⁱⁿ−ホ
ルミル−Ｄ−トリプトフィル］−Ｄ−トリプトファン
ナトリウム塩の合成 上記（７）で得られたＮ−［Ｎ−［Ｎ−（１−ヘキサメ
チレンイミノカルボニル）−Ｌ−ロイシル］−Ｎⁱⁿ−ホ
ルミル−Ｄ−トリプトフィル］−Ｄ−トリプトファン
ベンジルエステル１００ｍｇ（０．１３ミリモル）にメ
タノール８ｍｌと水４ｍｌを加え懸濁状態で撹拌した。
これに、１０％Ｐｄ−Ｃ１１ｍｇと重曹１１ｍｇを加
え、水素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。反応液を濾過
して触媒を濾去し、メタノールと水の混合液で洗浄し
た。濾液と洗浄液を合わせて減圧濃縮し、残渣を凍結乾
燥することにより、標題化合物を白色アモルファスとし
て８８ｍｇ（定量的）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ；0.77-0.81(6H,m), 1.3-
1.7(11H,m), 3.2-3.4(8H,m), 4.6-4.8(3H,m),6.9-9.0(1
1H,m) FAB MS(m/z);679(M+1)

【００８５】［実施例２］ Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（１−ヘキサメチレンイミノカルボニ
ル）−Ｌ−ロイシル］−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプト
フィル］−Ｎ^im−ベンジルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジ
ンの合成

【００８６】（１） Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）
−Ｎ^im−ベンジルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジン ベン
ジルエステルの合成 Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^im−ベンジルオキ
シメチル−Ｄ−ヒスチジン・０．８Ｈ₂ Ｏの１．９６ｇ
（５．０ミリモル）を塩化メチレン２１ｍｌに溶解し、
氷冷下、これに、ベンジルアルコール０．５４ｇ（５．
０ミリモル）、ＤＭＡＰ０．０５７ｇ（０．５ミリモ
ル）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ １．０４ｇを加えて一日撹
拌した。溶媒を留去し、残渣を酢酸エチルに溶解し、
水、１０％クエン酸、水、飽和重曹水、水、飽和食塩水
の順で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。
溶媒を減圧留去し、標題化合物を飴状物として１．６５
ｇ（収率：７１％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）δ;1.40(9H,S), 3.0-3.3(2
H,m), 4.35(1H,d,J=12Hz), 4.39(1H,d,J=12Hz) 4.5-4.7(1H,m), 5.1-5.4(5H,m), 6.8-7.6(12H,m)

【００８７】（２） Ｎ^im−ベンジルオキシメチル−Ｄ
−ヒスチジン ベンジルエステルの合成 上記（１）で得られたＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）
−Ｎ^im−ベンジルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジン ベン
ジルエステル１．６５ｇ（３．５ミリモル）を９０％ギ
酸３５ｍｌに溶解し、室温で一日撹拌した。溶媒を減圧
留去し、残渣をクロロホルム１００ｍｌに溶解し、飽和
重曹水、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、標題化合物を
飴状物として１．２０ｇ（収率：９４％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）δ；1.69(2H,s), 2.9-3.2
(2H,m), 3.7-3.9(1H,m), 4.35(1H,d,J=12Hz),4.39(1H,
d,J=12Hz), 5.0-5.4(4H,m), 6.8-7.6(12H,m)

【００８８】（３） Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）
−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｎ^im−ベンジ
ルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジン ベンジルエステルの
合成 上記（２）で得られたＮ^im−ベンジルオキシメチル−Ｄ
−ヒスチジン ベンジルエステル１．２０ｇ（３．３ミ
リモル）を塩化メチレン４０ｍｌに溶解し、これに、氷
冷撹拌下、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎⁱⁿ−ホルミ
ル−Ｄ−トリプトファン１．０９ｇ（３．３ミリモ
ル）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ０．６９ｇ（３．６ミリモ
ル）を加え、室温で一日撹拌した。反応液を１０％クエ
ン酸、水、飽和重曹水、水で順次洗浄した後、無水硫酸
ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去した後、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノ
ール＝１００／１）で精製し、標題化合物１．８３ｇ
（収率：８２％）を得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ) δ；1.40(9H,S), 3.0-3.2
(4H,m), 4.28(1H,d,J=12Hz),4.32(1H,d,J=12Hz),4.4-4.
6(1H,m), 4.86(1H,q,J=6Hz), 5.0〜5.2(4H,m), 5.24(1
H,s),6.6-9.0(19H,m) FAB MS(m/z);680(M+1)

【００８９】（４） Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフ
ィル−Ｎ^im−ベンジルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジン
ベンジルエステルの合成 上記（３）で得られたＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）
−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｎ^im−ベンジ
ルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジン ベンジルエステル
１．７０ｇ（２．５ミリモル）を９０％ギ酸２５ｍｌに
溶解し、室温で一日撹拌した後、溶媒を減圧留去した。
残渣にクロロホルム１００ｍｌを加えて溶解し、飽和重
曹水、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナト
リウムにて乾燥した。溶媒を留去し、標題化合物をアモ
ルファスとして１．３６ｇ（収率：９３．８％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）δ；1.62(2H,s), 2.7-3.3(4
H,m), 3.6-5.3(6H,m),6.6〜9.4(19H,m) FAB MS(m/z);580(M+1)

【００９０】（５） Ｎ−ヘキサメチレンイミノカルボ
ニル−Ｌ−ロイシル−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフ
ィル−Ｎ^im−ベンゾイルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジン
ベンジルエステルの合成 上記（４）で得られたＮⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフ
ィル−Ｎ^im−ベンジルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジン
ベンゾイルエステル２０３ｍｇ（０．３５ミリモル）を
塩化メチレン５ｍｌに溶解し、氷冷撹拌下、これに、Ｎ
−ヘキサメチレンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシン９１
ｍｇ（０．３５ミリモル）、及びＷＳＣ・ＨＣｌ ６５
ｍｇ（０．３４ミリモル）を加え、室温で一晩撹拌し
た。反応溶液を水、１０％クエン酸、水、飽和重曹水、
水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００
／１）で精製し、標題化合物１０４ｍｇ（収率：３６．
４％) を得た 。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）δ；0.7-0.9(6H,m), 1.2-1.
8(11H,m),3.0-3.5(8H,m), 4.0-4.1(1H,m),4.34(2H,s),
4.8-5.0(3H,m), 5.10(2H,s), 5.18(2H,s),6.6-9.0(20H,
m) FAB MS(m/z);818(M+1)

【００９１】（６） Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（１−ヘキサメ
チレンイミノカルボニル）−Ｌ−ロイシル］−Ｎⁱⁿ−ホ
ルミル−Ｄ−トリプトフィル］−Ｎ^im−ベンジルオキシ
メチル−Ｄ−ヒスチジンの合成 上記（５）で得られたＮ−ヘキサメチレンイミノカルボ
ニル−Ｌ−ロイシル−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフ
ィル−Ｎ^im−ベンジルオキシメチル−Ｄ−ヒスチジン
ベンジルエステル２０４ｍｇ（０．２５ミリモル）をメ
タノール５ｍｌに溶解し、これに、１０％Ｐｄ−Ｃ１３
ｍｇを加え、水素雰囲気下室温で一晩撹拌した。触媒を
濾過しメタノールで洗浄後、濾液と洗液を合わせて溶媒
を減圧留去した。残渣をエタノール／酢酸エチル＝１／
９の混合溶媒に溶解し、２．５％重曹水、水、１０％ク
エン酸、水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥した。溶媒を留去し、粗結晶５０ｍｇ得た。これをエ
タノール−エーテルより再結晶し、淡褐色結晶３０ｍｇ
（収率：１６．５％）を得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤ₃ ＯＤ）δ；0.7-1.0(6H,m),1.2-
1.8(11H,m), 2.7-3.6(8H,m), 4.0-5.7(7H,m),7.7-9.6(1
3H,m) FAB MS(m/z);728(M+1)

【００９２】［実施例３］ Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−フタロイル−Ｌ−ロイシル）−Ｎⁱⁿ−
ホルミル−Ｄ−トリプトフィル］−Ｄ−トリプトファン
ナトリウム塩の合成

【００９３】（１） Ｎ−フタロイル−Ｌ−ロイシンの
合成 無水フタル酸７．４１ｇ（５０ミリモル）、Ｌ−ロイシ
ン６．５６ｇ（５０ミリモル）、トルエン１００ｍｌ及
びトリエチルアミン０．７ｍｌの混合物を２時間加熱還
流した。溶媒を減圧留去し、残渣に水１００ｍｌと濃塩
酸２ｍｌを加えた。水層をエーテルで抽出し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去することによ
り、標題化合物を白色結晶として１２．７１ｇ（収率：
９７．３％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ）δ；0.93(6H,d,J=7Hz),
1.3-2.6(3H,m), 4.9-5.1(1H,m), 7.6-7.9(4H,m),9.98(1
H,br s)

【００９４】（２） Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−フタロイル−Ｌ
−ロイシル）−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル］
−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステルの合成 前記実施例１の（６）と同様にして得られたＮⁱⁿ−ホル
ミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファン ベン
ジルエステル４１６ｍｇ（０．８２ミリモル）と上記
（１）で得られたＮ−フタロイル−Ｌ−ロイシン２１４
ｍｇ（０．８２ミリモル) を乾燥塩化メチレン２０ｍｌ
に溶解し氷冷した。そこにＷＳＣ・ＨＣｌ１７３ｍｇ
（０．９０ミリモル）を加え、室温で一晩撹拌した。溶
媒を減圧留去し、酢酸エチルに溶解した。これを水、１
０％クエン酸、水、飽和重曹水、水、飽和食塩水で順次
洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減
圧留去し、標題化合物を黄色結晶として５８０ｍｇ（収
率：９４．３％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃) δ；0.7-0.8(6H,m), 1.2-
2.1(3H,m), 2.9-3.3(4H,m), 4.6-4.7(3H,m),4.9-5.1(2
H,m), 7,0-8.5(22H,m), 10.86(1H,s) FAB MS(m/z);752(M+1)

【００９５】（３） Ｎ−［Ｎ−（Ｎ−フタロイル−Ｌ
−ロイシル）−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル］
−Ｄ−トリプトファン ナトリウム塩の合成 上記（２）で得られたＮ−［Ｎ−（Ｎ−フタロイル−Ｌ
−ロイシル）−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル］
−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステル１００ｍｇ
（０．１３ミリモル）に、メタノール７ｍｌと水３．５
ｍｌを加え、懸濁状態で撹拌した。そこに、１０％Ｐｄ
−Ｃ１ ２ｍｇと重曹１１ｍｇを加え、水素雰囲気下で
一晩撹拌した。反応溶液を濾過し、メタノールと水の混
合液で洗浄した。濾液と洗浄液を合わせて濃縮し、更に
凍結乾燥することにより、標題化合物を淡黄色アモルフ
ァスとして９１ｍｇ（定量的）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤ₃ ＯＤ）δ；0.8-0.9(6H,m), 1.2-
2.2(3H,m), 2.9-3.3(4H,m), 4.5-4.8(3H,m),6.9-9.1(18
H,m) FAB MS(m/z);684(M+1)

【００９６】［実施例４］ Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（モルホリノカルボニル）−Ｌ−ロイ
シル］−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフィル］−Ｄ−
トリプトファン ナトリウム塩の合成

【００９７】（１） Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（モルホリノカ
ルボニル）−Ｌ−ロイシル］−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−ト
リプトフィル］−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステ
ルの合成 モルホリノカルボニル ロイシン１２２ｍｇ（０．５ミ
リモル）及び前記実施例１の（６）で得られたＮⁱⁿ−ホ
ルミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファン ベ
ンジルエステル２５４ｍｇ（０．５ミリモル）を乾燥塩
化メチレン１０ｍｌに溶解し、氷浴上で撹拌した。そこ
にＷＳＣ・ＨＣｌ１０６ｍｇ（０．５５ミリモル）を加
え、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧留去し、残渣を酢
酸エチルに溶解した。これを水、１０％クエン酸、水、
飽和重曹水、水、飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去した後、シリ
カゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム）で精
製し、標題化合物を淡黄色結晶として２６５ｍｇ（収
率：７２．２％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−_d6）δ；0.6-0.7(6H,m), 1.1-
1.2(3H,m), 2.8-3.3(4H,m), 3.1-3.3(4H,m),3.4-3.5(4
H,m), 3.9-4.7(3H,m), 4.9-5.0(2H,m), 6.4-8.5(15H,
m),10.85(1H,s) FAB MS(m/z);735(M+1)

【００９８】（２） Ｎ−［Ｎ−［Ｎ−（モルホリノカ
ルボニル）−Ｌ−ロシシル］−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−ト
リプトフィル］−Ｄ−トリプトファン ナトリウム塩の
合成 上記（１）で得られたＮ−［Ｎ−［Ｎ−（モルホリノカ
ルボニル）−Ｌ−ロイシル］−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−ト
リプトフィル］−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステ
ル１５０ｍｇ（０．２０ミリモル）にメタノール１０ｍ
ｌと水５ｍｌを加え懸濁状態で撹拌した。これに、１０
％Ｐｄ−Ｃ１７ｍｇとＮａＨＣＯ₃ １７ｍｇを加え、水
素雰囲気下室温で一晩撹拌した。触媒を濾去し、メタノ
ールと水の混合液で洗浄した。濾液と洗浄液を合わせて
減圧留去し、残渣を凍結乾燥することにより、標題化合
物を淡黄色アモルファスとして１３３ｍｇ（定量的）得
た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ） δ；0.7-0.8(6H,m), 0.9-
1.3(3H,m), 2.8-3.3(4H,m), 3.3-3.6(8H,m),4.1-4.8(3
H,m), 6.9-9.0(11H,m) FAB MS(m/z);667(M+1)

【００９９】［実施例５］ ４−エチル−２，３−ジオキソピペラジン−１−カルボ
ニル−Ｌ−ロイシル−Ｎⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−トリプトフ
ィル−Ｄ−トリプトファンの合成

【０１００】（１） ４−エチル−２，３−ジオキソピ
ペラジン−１−カルボニル−Ｌ−ロイシン ベンジルエ
ステルの合成 Ｌ−ロイシン ベンジルエステル・ｐ−トルエンスルホ
ン酸１．５７４ｇ（４．０ミリモル）を乾燥塩化メチレ
ン２０ｍｌに溶解し、これにトリエチルアミン１．１２
ｍｌ、及び４−エチル−２，３−ジオキソピペラジンカ
ルボニルクロライド０．９５６ｇ（純度８０％、４．０
ミリモル）を加えた。室温で２時間撹拌した後、有機層
を１０％クエン酸、水、飽和重曹水、水、飽和食塩水で
洗浄した。次いで、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後溶
媒を留去し、標題化合物を黄色油状物として、１．６４
６ｇ（定量的）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃) δ；0.9-1.0(6H,m), 1.22
(3H,t,J=7Hz), 1.6-1.8(3H,m), 3.5-3.7(4H,m),4.0-4.2
(2H,m), 4.5-4.6(1H,m), 5.18(2H,s), 7.35(5H,s),9.25
(1H,d,J=7Hz)

【０１０１】（２） ４−エチル−２，３−ジオキソピ
ペラジン−１−カルボニル−Ｌ−ロイシンの合成 上記（１）で得られた４−エチル−２，３−ジオキソピ
ペラジン−１−カルボニル−Ｌ−ロイシン ベンジルエ
ステル１．５３ｇ（３．９ミリモル）をエタノール２０
ｍｌ及び水１０ｍｌに溶解し、これに１０％Ｐｄ−Ｃ１
６０ｍｇを加えた。水素雰囲気下、室温で３時間半撹拌
した後、触媒を濾過、溶媒を留去することにより、標題
化合物を白色粉末として１．２０８ｇ（定量的）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ） δ；0.9-1.0(6H,m), 1.23
(3H,t,J=7Hz), 1.6-1.8(3H,m), 3.5-3.7(4H,m),4.0-4.2
(2H,m), 4.5-4.6(1H,m), 9.23(1H,d,J=7Hz)

【０１０２】（３） ４−エチル−２，３−ジオキソピ
ペラジン−１−カルボニル−Ｌ−ロイシル−Ｎⁱⁿ−ホル
ミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファン ベン
ジルエステルの合成 前記実施例１の（６）で得られたＮⁱⁿ−ホルミル−Ｄ−
トリプトフィル−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステ
ル２５８ｍｇ（０．５１ミリモル）を塩化メチレン８ｍ
ｌに溶解し、これに上記（２）で得られた４−エチル−
２，３−ジオキソピペラジン−１−カルボニル−Ｌ−ロ
イシン１５２ｍｇ（０．５１ミリモル）、及びＷＳＣ・
ＨＣｌ１０７ｍｇ（０．５６ミリモル）を加え、室温で
一晩撹拌した。有機層を１０％クエン酸、水、飽和重曹
水、水、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーで精製し、標題化合物を白色アモルフ
ァスとして１７０ｍｇ（収率：４２．４％) 得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−_d6）δ；0.6-0.7(6H,m), 1.
0-1.2(6H,m), 3.0-3.8(10H,m), 4.5-4.8(3H,m),4.9-5.1
(2H,m), 7.0-9.1(18H,m), 10.86(1H,s)

【０１０３】（４） ４−エチル−２，３−ジオキソピ
ペラジン−１−カルボニル−Ｌ−ロイシル−Ｎⁱⁿ−ホル
ミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファンの合成 上記（３）で得られた４−エチル−２，３−ジオキソピ
ペラジン−１−カルボニル−Ｌ−ロイシル−Ｎⁱⁿ−ホル
ミル−Ｄ−トリプトフィル−Ｄ−トリプトファン ベン
ジルエステル４８ｍｇ（０．０６ミリモル）をテトラヒ
ドロフラン３ｍｌに溶解し、これに１０％Ｐｄ−Ｃ５ｍ
ｇを加え、水素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。触媒を
濾過、溶媒を留去することにより、標題化合物を白色結
晶性粉末として３９ｍｇ（収率：９１．７％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ＋ＣＤ₃ ＯＤ） δ；0.7-
0.8(6H,m), 1.1-1.2(3H,m), 1.4-1.7(3H,m), 3.0-3.8(1
0H,m),4.1-4.2(1H,m), 4.7-4.9(2H,m), 6.7-7.7(13H,
m), 8.8-9.3(2H,m)

【０１０４】［実施例６］ Ｎ−［（３Ｒ）−２−（Ｎ−ヘキサメチレンイミノカル
ボニル−Ｌ−ロイシル）−１，２，３，４−テトラヒド
ロ−β−カルボリン−３−カルボニル］−Ｄ−トリプト
ファン ナトリウム塩の合成

【０１０５】（１） （３Ｒ）−１，２，３，４−テト
ラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸 ベンジル
エステル塩酸塩の合成 Ｄ−トリプトファン ベンジルエステル塩酸塩１３２２
ｍｇ（４．０ミリモル）をエタノール１５ｍｌに溶解
し、３５％ホルマリン３７８ｍｇ（４．０ミリモル）を
加え、室温で一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、エ
タノールで洗浄した後、減圧下、乾燥することにより、
標題化合物を白色結晶性粉末として、１．１１７ｇ（収
率：８１．５％）得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−_d6 ) δ；3.0-3.1(2H,m),
4.41(2H,s), 4.69-4.73(1H,m), 7.0-7.5(9H,m),10.2(2
H,br s), 11.15(1H,s)

【０１０６】（２） （３Ｒ）−２−（Ｎ−ヘキサメチ
レンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシル）−１，２，３，
４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸
ベンジルエステルの合成 上記（１）で得られた（３Ｒ）−１，２，３，４−テト
ラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸 ベンジル
エステル塩酸塩２０６ｍｇ（０．６ミリモル）を乾燥塩
化メチレン２０ｍｌに溶解し、これに、Ｎ−ヘキサメチ
レンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシン１５４ｍｇ（０．
６ミリモル）、トリエチルアミン０．３４ｍｌ、及びＨ
ＯＢｔ一水和物３６８ｍｇを加え、氷浴上で１５分間攪
拌した。この溶液に、更にＷＳＣ・ＨＣｌ５０４ｍｇを
加え、室温で一晩攪拌した。溶液を水洗、濃縮後、酢酸
エチルに溶解した。有機層を１０％クエン酸、水、飽和
重曹水、水で順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを加
えて乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝５０
／１）で精製することにより、標題化合物を白色アモル
ファスとして２６６ｍｇ（収率：８１．４％) 得た。¹ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ） δ；0.8-1.0(6H,m), 1.4-
1.6(11H,m), 3.0-3.5(6H,m), 4.5-5.8(6H,m),7.0-9.3(1
1H,m) FAB MS(m/z);545(M+1)

【０１０７】（３） （３Ｒ）−２−（Ｎ−ヘキサメチ
レンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシル）−１，２，３，
４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸の
合成上記（２）で得られた（３Ｒ）−２−（Ｎ−ヘキサ
メチレンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシル）−１，２，
３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン
酸 ベンジルエステル２６６ｍｇ（０．４９ミリモル）
をメタノール１０ｍｌに溶解し、これに、１０％Ｐｄ−
Ｃ２０ｍｇを加え、水素雰囲気下、室温で３時間撹拌し
た。触媒を除去し、濾液を減圧留去することにより、標
題化合物２１５ｍｇ（収率：９６．６％) 得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ）δ；0.8-1.0(6H,m), 1.2-
1.7(11H,m), 2.9-3.5(6H,m), 4.4-4.6(2H,m),5.0-5.8(5
H,m), 7.0-9.1(5H,m)

【０１０８】（４） Ｎ−［（３Ｒ）−２−（Ｎ−ヘキ
サメチレンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシル）−１，
２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カル
ボニル］−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステルの合
成 上記（３）で得られた（３Ｒ）−２−（Ｎ−ヘキサメチ
レンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシル）−１，２，３，
４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カルボン酸２
１５ｍｇ（０．４７ミリモル）を乾燥塩化メチレン２０
ｍｌに溶解し、これに、Ｄ−トリプトファン ベンジル
エステル・塩酸塩１５５ｍｇ（０．４７ミリモル）、ト
リエチルアミン０．２７ｍｌ、及びＨＯＢｔ一水和物２
８８ｍｇ（０．５２ミリモル）を加え、氷浴上で１５分
間攪拌した。この溶液に、更にＷＳＣ・ＨＣｌ３９５ｍ
ｇ（０．５２ミリモル）を加え、室温で一晩攪拌した。
溶液を水洗、濃縮後、残渣を酢酸エチルに溶解した。有
機層を１０％クエン酸、水、飽和重曹水、水で順次洗浄
した後、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。溶媒を
留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（クロロホルム／メタノール＝５０／１）で精製するこ
とにより、標題化合物を２２７ｍｇ（収率：６６．２
％) 得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ₃ ） δ；0.9-1.0(6H,m), 1.
4-1.7(11H,m), 2.7-2.8(1H,m), 3.2-3.3(6H,m),3.64(1
H,d,J=15Hz), 4.16(1H,d,J=5Hz), 4.34(1H,d,J=5Hz),4.
6-4.8(2H,m), 5.0-5.2(3H,m), 5.82(1H,d,J=4Hz), 6.38
(1H,s),6.9-7.6(14H,m), 7.69(1H,d,J=8Hz), 8.65(1H,
s),

【０１０９】（５） Ｎ−［（３Ｒ）−２−（Ｎ−ヘキ
サメチレンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシル）−１，
２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カル
ボニル］−Ｄ−トリプトファン ナトリウム塩の合成 上記（４）で得られたＮ−［（３Ｒ）−２−（Ｎ−ヘキ
サメチレンイミノカルボニル−Ｌ−ロイシル）−１，
２，３，４−テトラヒドロ−β−カルボリン−３−カル
ボニル］−Ｄ−トリプトファン ベンジルエステル７３
ｍｇ（０．１ミリモル）をメタノール２０ｍｌに溶解
し、これに、水４ｍｌ、重曹８．４ｍｇ（０．１ミリモ
ル）、及び１０％Ｐｄ−Ｃ１０ｍｇを加え、水素雰囲気
下室温で４時間攪拌した。触媒を除去し、濾液を減圧留
去することにより、標題化合物を白色結晶性粉末として
６４ｍｇ（収率：９９％) 得た。¹ Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−_d6）δ；0.7-0.9(6H,m), 1.
3-1.7(11H,m), 2.5-3.4(8H,m), 4.1-5.6(5H,m),6.51(1
H,d,J=6Hz), 6.8-7.5(9H,m), 7.93(1H,d,J=6Hz),10.7-1
0.9(2H,m) FAB MS(m/z);663(M+1),685(M+Na)

【０１１０】

【発明の効果】本発明のトリペプチドは、新規なトリペ
プチドであって優れたエンドセリン拮抗作用を有する物
質である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＵ Ｃ０７Ｋ 1/02 1/06

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ）： 【化１】 ［式中、Ａは、下記式（ａ）： 【化２】 （式中、ｍは４〜７の整数であり、メチレン基の１〜３
   個が、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹ −（但し、Ｒ¹ は水素
   原子、−ＣＨＯ基又は炭素数１〜６のアルキル基を表
   す）又は−ＣＯ−で示される基で置換されていてもよ
   く、又はエチレン基がベンゼン環と縮合していてもよ
   い）で示される基を表し、Ｂは、−ＣＯ−、−ＣＳ−又
   は−ＳＯ₂ −で示される基を表し、Ｄは、−ＮＲ² −
   （但し、Ｒ² は水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基
   を表す）で示される基を表し、又は、Ａ−Ｂ−Ｄ−でフ
   タルイミド基を表し、Ｅは、−ＣＨＲ³ −（但し、Ｒ³
   は、アリール基又は芳香族複素環基で置換されていても
   よい炭素数１〜５のアルキル基、又は硫黄原子含有複素
   環基を表す）で示される基を表し、Ｆは、下記式： 【化３】 （式中、Ｒ⁴ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜６の
   アルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有するフェ
   ニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁵ （式中、Ｒ⁵ は
   炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基を表す）で表される
   基である）で示される基を表し、Ｇは、下記式： 【化４】 （式中、Ｒ⁶ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜６の
   アルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有するフェ
   ニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁸ （式中、Ｒ⁸ は
   炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基を表す）で表される
   基であり、Ｒ⁷ は水素原子、炭素数１〜６のアルキル
   基、炭素数１〜４のアルキレン基を有し且つ１〜３個の
   フェニル基を有するアラルキル基、炭素数２〜６のアル
   コキシアルキル基又は式−（ＣＨ₂ )_qＯ−Ｒ⁹ （式中、
   ｑは１〜３の整数であり、Ｒ⁹ は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基である）で示される
   基を表し、Ｑは水素原子、アルカリ金属原子、炭素数１
   〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキレン基を
   有するフェニルアルキル基を表す］で表されるトリペプ
   チド。
2. 【請求項２】 一般式（Ｉ）： 【化５】 ［式中、Ａは、下記式（ａ）： 【化６】 （式中、ｍは４〜７の整数であり、メチレン基の１〜３
   個が、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ¹ −（但し、Ｒ¹ は水素
   原子、−ＣＨＯ基又は炭素数１〜６のアルキル基を表
   す）又は−ＣＯ−で示される基で置換されていてもよ
   く、又はエチレン基がベンゼン環と縮合していてもよ
   い）で示される基を表し、Ｂは、−ＣＯ−、−ＣＳ−又
   は−ＳＯ₂ −で示される基を表し、Ｄは、−ＮＲ² −
   （但し、Ｒ² は水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基
   を表す）で示される基を表し、又は、Ａ−Ｂ−Ｄ−でフ
   タルイミド基を表し、Ｅは、−ＣＨＲ³ −（但し、Ｒ³
   は、アリール基又は芳香族複素環基で置換されていても
   よい炭素数１〜５のアルキル基、又は硫黄原子含有複素
   環基を表す）で示される基を表し、Ｆは、下記式： 【化７】 （式中、Ｒ⁴ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜６の
   アルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有するフェ
   ニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁵ （式中、Ｒ⁵ は
   炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基を表す）で表される
   基である）で示される基を表し、Ｇは、下記式： 【化８】 （式中、Ｒ⁶ は水素原子、−ＣＨＯ基、炭素数１〜６の
   アルキル基、炭素数１〜４のアルキレン基を有するフェ
   ニルアルキル基、又は、式−ＣＯＯＲ⁸ （式中、Ｒ⁸ は
   炭素数１〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基を表す）で表される
   基であり、Ｒ⁷ は水素原子、炭素数１〜６のアルキル
   基、炭素数１〜４のアルキレン基を有し且つ１〜３個の
   フェニル基を有するアラルキル基、炭素数２〜６のアル
   コキシアルキル基又は式−（ＣＨ₂ )_qＯ−Ｒ⁹ （式中、
   ｑは１〜３の整数であり、Ｒ⁹ は炭素数１〜４のアルキ
   レン基を有するフェニルアルキル基である）で示される
   基を表し、Ｑは水素原子、アルカリ金属原子、炭素数１
   〜６のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルキレン基を
   有するフェニルアルキル基を表す］で表されるトリペプ
   チドを製造する方法であって、それぞれ保護基を有して
   いてもよいフラグメントであるＡ−Ｂ−Ｚ（但し、Ｚは
   ヒドロキシル基又はハロゲン原子である）、Ｈ−Ｄ−Ｅ
   −ＣＯＯＨ、Ｈ−Ｆ−ＯＨ及びＨ−Ｇ−ＯＱ（これらの
   フラグメントはその反応性誘導体であってもよい）を、
   一般式（Ｉ）で表されるトリペプチドになるように任意
   の順序で縮合させるか、或は上記の四種のフラグメント
   の二種又は三種を任意の組み合わせで予め縮合して得た
   化合物と、残りのフラグメントの二種（予め縮合してお
   いてもよい）又は一種とを縮合させ、所望により保護基
   を脱離させることからなる製造方法。
3. 【請求項３】 請求項１に記載のトリペプチドを有効成
   分として含有することを特徴とするエンドセリン拮抗
   剤。