JPH05331192A - 新規ペプチド及びそれを製造する方法 - Google Patents
新規ペプチド及びそれを製造する方法Info
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- JPH05331192A JPH05331192A JP4163534A JP16353492A JPH05331192A JP H05331192 A JPH05331192 A JP H05331192A JP 4163534 A JP4163534 A JP 4163534A JP 16353492 A JP16353492 A JP 16353492A JP H05331192 A JPH05331192 A JP H05331192A
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- angiotensin
- trp
- protein
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、動脈弛緩作用やアンギオテンシン
変換酵素阻害作用をもち血圧降下剤として有用な新規ペ
プチド及びその製造方法に関する。 【構成】 Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ａｌ
ａ−ＯＨで示される新規ペプチドであり、該ペプチドは
蛋白質をサ−モライシンで加水分解することによって製
造される。
変換酵素阻害作用をもち血圧降下剤として有用な新規ペ
プチド及びその製造方法に関する。 【構成】 Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ａｌ
ａ−ＯＨで示される新規ペプチドであり、該ペプチドは
蛋白質をサ−モライシンで加水分解することによって製
造される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、動脈弛緩作用やアンギ
オテンシン変換酵素阻害作用をもち血圧降下剤として有
用な新規ペプチド及びその製造方法に関する。
オテンシン変換酵素阻害作用をもち血圧降下剤として有
用な新規ペプチド及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】食品中に含まれる蛋白質は栄養効果ばか
りでなく種々の生理活性を有することが知られている。
例えば血圧を降下する活性を示すものとしていくつかの
ペプチドがある。かかる作用は主として血管を弛緩させ
たりアンギオテンシン変換酵素を阻害させることによっ
て生起される。前者の血管弛緩作用をもつペプチドとし
ては例えば牛血清アルブミン由来のペプチドが公知であ
る（特開平４−９９７９８号公報）。
りでなく種々の生理活性を有することが知られている。
例えば血圧を降下する活性を示すものとしていくつかの
ペプチドがある。かかる作用は主として血管を弛緩させ
たりアンギオテンシン変換酵素を阻害させることによっ
て生起される。前者の血管弛緩作用をもつペプチドとし
ては例えば牛血清アルブミン由来のペプチドが公知であ
る（特開平４−９９７９８号公報）。
【０００３】一方、アンギオテンシン変換酵素は、主と
して肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギ
オテンシンＩ（Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌ
ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用
して、アンギオテンシンＩのＣ末端よりジペプチド（Ｈ
ｉｓ9−Ｌｅｕ10）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用を
有するアンギオテンシンＩＩを生成させる酵素である。
また、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを
破壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与し
ている。
して肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギ
オテンシンＩ（Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌ
ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用
して、アンギオテンシンＩのＣ末端よりジペプチド（Ｈ
ｉｓ9−Ｌｅｕ10）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用を
有するアンギオテンシンＩＩを生成させる酵素である。
また、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを
破壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与し
ている。
【０００４】従来より、アンギオテンシン変換酵素の活
性を阻害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予
防、治療に有効であると考えられている。最近ではプロ
リン誘導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が
確認されて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害
物質の合成研究が盛んであり、又、天然物からの取得も
試みられているところである。従って、動脈弛緩作用や
アンギオテンシン変換酵素阻害作用をもつペプチドで食
品あるいは食品原料から得られる天然物由来のものは、
低毒性で安全性の高い降圧剤となることが期待される。
性を阻害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予
防、治療に有効であると考えられている。最近ではプロ
リン誘導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が
確認されて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害
物質の合成研究が盛んであり、又、天然物からの取得も
試みられているところである。従って、動脈弛緩作用や
アンギオテンシン変換酵素阻害作用をもつペプチドで食
品あるいは食品原料から得られる天然物由来のものは、
低毒性で安全性の高い降圧剤となることが期待される。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、かかる
活性をもつペプチドが天然物中に見出されることは極め
てまれで、アンギオテンシン変換酵素阻害剤としては僅
かにブラジル産や日本産蛇毒より得られたテプロタイド
（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等や、ストレプトミ
セス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ８３（特開昭５８
−１７７９２０号公報）が知られているに過ぎない。
活性をもつペプチドが天然物中に見出されることは極め
てまれで、アンギオテンシン変換酵素阻害剤としては僅
かにブラジル産や日本産蛇毒より得られたテプロタイド
（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等や、ストレプトミ
セス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ８３（特開昭５８
−１７７９２０号公報）が知られているに過ぎない。
【０００６】また、天然物を酵素処理して得られたアン
ギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイン
をトリプトシンにより分解して得たペプチド類等が知ら
れているが（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４
４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２
６号、同６１−３６２２７号）新規な阻害物質の開発が
望まれているところである。
ギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイン
をトリプトシンにより分解して得たペプチド類等が知ら
れているが（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４
４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２
６号、同６１−３６２２７号）新規な阻害物質の開発が
望まれているところである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者等は、かかる課
題を解決すべく天然物質で副作用の少ない動脈弛緩作用
及びアンギオテンシン変換酵素阻害作用をもつ物質を鋭
意探索した結果、蛋白質特に魚肉、カツオ節を特定の酵
素で加水分解した組成物中にかかる活性を有する物質の
存在をつきとめ、該物質がＨ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ
−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ＯＨである構造のペプチドであるこ
とを見出し本発明を完成した。
題を解決すべく天然物質で副作用の少ない動脈弛緩作用
及びアンギオテンシン変換酵素阻害作用をもつ物質を鋭
意探索した結果、蛋白質特に魚肉、カツオ節を特定の酵
素で加水分解した組成物中にかかる活性を有する物質の
存在をつきとめ、該物質がＨ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ
−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ＯＨである構造のペプチドであるこ
とを見出し本発明を完成した。
【０００８】本発明のペプチドは文献未載の新規なペプ
チドであり、カツオ節をサ−モライシンによって加水分
解することによって製造され、実用にあたっては組成物
をそのまま用いても良く、あるいは必要に応じて精製し
て使用される。更にはペプチド合成の常套手段を適用し
て合成することによって製造することもできる。上記で
いうＴｙｒはチロシン、Ｔｈｒはトレオニン、Ｓｅｒは
セリン、Ｔｒｐはトリプトファン、Ａｌａはアラニンを
意味し、かかるアミノ酸はいずれもＬ−体である。
チドであり、カツオ節をサ−モライシンによって加水分
解することによって製造され、実用にあたっては組成物
をそのまま用いても良く、あるいは必要に応じて精製し
て使用される。更にはペプチド合成の常套手段を適用し
て合成することによって製造することもできる。上記で
いうＴｙｒはチロシン、Ｔｈｒはトレオニン、Ｓｅｒは
セリン、Ｔｒｐはトリプトファン、Ａｌａはアラニンを
意味し、かかるアミノ酸はいずれもＬ−体である。
【０００９】本発明のペプチドは蛋白質をサ−モライシ
ンで加水分解することによっても、ペプチド合成法でも
取得できる。蛋白質をサ−モライシンで加水分解するに
は、蛋白質の性状により処法が異なるが、難溶性の場合
には熱水に蛋白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズ
し、所定量のサ−モライシンを加え温度１０〜８５℃程
度で０．１〜４８時間反応を行う。
ンで加水分解することによっても、ペプチド合成法でも
取得できる。蛋白質をサ−モライシンで加水分解するに
は、蛋白質の性状により処法が異なるが、難溶性の場合
には熱水に蛋白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズ
し、所定量のサ−モライシンを加え温度１０〜８５℃程
度で０．１〜４８時間反応を行う。
【００１０】蛋白質としては、動物由来や微生物由来の
もの等が任意に用いられ、特に有用なものは魚肉であ
り、カツオ節、イワシ等の魚類が安価で有用である。単
離する場合は加水分解液を遠心分離等の公知の操作で濾
過する。その後抽出、濃縮、乾固などを適用した後、あ
るいはせずしてそのまま、種々の吸着剤に対する吸着親
和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あるいは溶解度の
差、２種の混ざり合わない液相間における分配の差、分
子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液からの析出性あ
るいは析出速度の差などを利用する手段を適用して目的
物を単離するのが好ましい。これらの方法は必要に応じ
て単独に用いられ、あるいは任意の順序に組合せ、また
反復して適用される。
もの等が任意に用いられ、特に有用なものは魚肉であ
り、カツオ節、イワシ等の魚類が安価で有用である。単
離する場合は加水分解液を遠心分離等の公知の操作で濾
過する。その後抽出、濃縮、乾固などを適用した後、あ
るいはせずしてそのまま、種々の吸着剤に対する吸着親
和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あるいは溶解度の
差、２種の混ざり合わない液相間における分配の差、分
子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液からの析出性あ
るいは析出速度の差などを利用する手段を適用して目的
物を単離するのが好ましい。これらの方法は必要に応じ
て単独に用いられ、あるいは任意の順序に組合せ、また
反復して適用される。
【００１１】本発明のペプチドはペプチド合成に通常用
いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合
の任意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料と
をカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を除去させることによっても製造し得る。
いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合
の任意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料と
をカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を除去させることによっても製造し得る。
【００１２】この反応工程において反応に関与すべきで
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−
ブチルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニルイソプロピロ
オキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成
し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカ
ルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存
在下にあるいはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたはペ
プチド活性エステルを用いて実施する。
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−
ブチルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニルイソプロピロ
オキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成
し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカ
ルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存
在下にあるいはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたはペ
プチド活性エステルを用いて実施する。
【００１３】縮合反応終了後、保護基は除去されるが、
固相法の場合は更にペプチドのＣ末端と樹脂との結合を
切断する。更に、本発明のペプチドは通常の方法に従い
精製される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆
相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー等が挙げられる。
固相法の場合は更にペプチドのＣ末端と樹脂との結合を
切断する。更に、本発明のペプチドは通常の方法に従い
精製される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆
相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグ
ラフィー等が挙げられる。
【００１４】本発明で使用するペプチドの投与経路とし
ては、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれでも
よいが、経口投与が好ましい。本発明のペプチドの投与
量は化合物の種類、投与方法、患者の症状・年令等によ
り異なるが、通常１回０．００１〜１０００ｍｇ、好ま
しくは０．０１〜１０ｍｇを１日当たり１〜３回であ
る。本発明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調
製した製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製
剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応
しない物質が用いられる。
ては、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれでも
よいが、経口投与が好ましい。本発明のペプチドの投与
量は化合物の種類、投与方法、患者の症状・年令等によ
り異なるが、通常１回０．００１〜１０００ｍｇ、好ま
しくは０．０１〜１０ｍｇを１日当たり１〜３回であ
る。本発明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調
製した製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製
剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応
しない物質が用いられる。
【００１５】具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マン
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
【００１６】これらの製剤は常法に従って調製される。
尚、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な媒体
に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒
剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場
合には、本発明のペプチドを水に溶解させて調製される
が、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶
解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよ
い。これらの製剤は、本発明のペプチドを０．０１％以
上、好ましくは０．５〜７０％の割合で含有することが
できる。これらの製剤はまた、治療上価値ある他の成分
を含有していてもよい。
尚、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な媒体
に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒
剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場
合には、本発明のペプチドを水に溶解させて調製される
が、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶
解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよ
い。これらの製剤は、本発明のペプチドを０．０１％以
上、好ましくは０．５〜７０％の割合で含有することが
できる。これらの製剤はまた、治療上価値ある他の成分
を含有していてもよい。
【００１７】
【作 用】本発明のペプチドは、新規なペプチドであ
り優れた動脈弛緩作用及びアンギオテンシン変換酵素阻
害作用を有し、血圧降下活性、ブラジキニン不活化抑制
活性を示し、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧
などの高血圧症の予防、治療剤、これらの疾患の診断剤
や各種の病態において用いられる血圧降下剤、狭心症や
心筋梗塞の治療薬、うっ血性心不全における病態の改善
剤として有用である。
り優れた動脈弛緩作用及びアンギオテンシン変換酵素阻
害作用を有し、血圧降下活性、ブラジキニン不活化抑制
活性を示し、本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧
などの高血圧症の予防、治療剤、これらの疾患の診断剤
や各種の病態において用いられる血圧降下剤、狭心症や
心筋梗塞の治療薬、うっ血性心不全における病態の改善
剤として有用である。
【００１８】
【実施例】次に実例を挙げて本発明を更に具体的に説明
する。 実施例１ 〔ペプチドの抽出〕カツオ節５ｇに水４０ｍｌを加え十
分ホモジナイズし、１００℃で１０分間煮沸後放置し
た。サ−モライシンを２０ｍｇ加え、３７℃、ＰＨ７で
３時間加水分解反応を行った。冷却後遠心分離して濃縮
し、高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ−，Ｐｈ−及
びＣＮ−カラム）により精製し、ペプチドを得た。本品
を気相プロテインシーケンサー（アプライド バイオシ
ステムズ社製４７７ Ａ型）を用いる自動エドマン分解
法を適用して、アミノ酸配列を分析し下記の構造を得
た。
する。 実施例１ 〔ペプチドの抽出〕カツオ節５ｇに水４０ｍｌを加え十
分ホモジナイズし、１００℃で１０分間煮沸後放置し
た。サ−モライシンを２０ｍｇ加え、３７℃、ＰＨ７で
３時間加水分解反応を行った。冷却後遠心分離して濃縮
し、高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ−，Ｐｈ−及
びＣＮ−カラム）により精製し、ペプチドを得た。本品
を気相プロテインシーケンサー（アプライド バイオシ
ステムズ社製４７７ Ａ型）を用いる自動エドマン分解
法を適用して、アミノ酸配列を分析し下記の構造を得
た。
【００１９】Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ａ
ｌａ−ＯＨ 該ペプチドの物性値はつぎのとうりである。 ＴＬＣ［ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝１５：
３：１０：２］ （シリカゲルプレート，ニンヒドリン発色） Ｒｆ：０．５６７ ｍ．ｐ：１８０℃で分解 元素分析 Ｃ30Ｈ38Ｎ6Ｏ9・０．７Ｈ2Ｏとして
ｌａ−ＯＨ 該ペプチドの物性値はつぎのとうりである。 ＴＬＣ［ｎ−ブタノール：酢酸：ピリジン：水＝１５：
３：１０：２］ （シリカゲルプレート，ニンヒドリン発色） Ｒｆ：０．５６７ ｍ．ｐ：１８０℃で分解 元素分析 Ｃ30Ｈ38Ｎ6Ｏ9・０．７Ｈ2Ｏとして
【００２０】〔ペプチドの合成〕市販のＢｏｃ（ブトキ
シカルボニル）−Ａｌａ（クロロベンジルオキシカルボ
ニルで保護）−Ｏ−Ｒｅｓｉｎ〔ベンジル樹脂（置換率
０．５５ｍｅｑ／ｇ）〕０．５５ｇをバイオサーチ社の
ペプチド合成装置ＳＡＭ２の反応槽に分取し、以下のよ
うに合成を行った。４５％トリフルオロ酢酸、２．５％
アニソールを含む塩化メチレン中、２５分間の反応によ
り、Ｂｏｃ基を除去したのち、塩化メチレンによる洗
浄、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む塩化メチ
レンによる中和、及び塩化メチレンによる洗浄を行っ
た。これと５ｍｌの０．４Ｍ Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ｏＢｚ
（ベンジルエステル）のジメチルホルムアミド溶液、５
ｍｌの０．４Ｍジイソプロピルカルボジイミドの塩化メ
チレン溶液とを混合した後、反応槽に加え、室温にて２
時間撹拌反応させた。
シカルボニル）−Ａｌａ（クロロベンジルオキシカルボ
ニルで保護）−Ｏ−Ｒｅｓｉｎ〔ベンジル樹脂（置換率
０．５５ｍｅｑ／ｇ）〕０．５５ｇをバイオサーチ社の
ペプチド合成装置ＳＡＭ２の反応槽に分取し、以下のよ
うに合成を行った。４５％トリフルオロ酢酸、２．５％
アニソールを含む塩化メチレン中、２５分間の反応によ
り、Ｂｏｃ基を除去したのち、塩化メチレンによる洗
浄、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む塩化メチ
レンによる中和、及び塩化メチレンによる洗浄を行っ
た。これと５ｍｌの０．４Ｍ Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ｏＢｚ
（ベンジルエステル）のジメチルホルムアミド溶液、５
ｍｌの０．４Ｍジイソプロピルカルボジイミドの塩化メ
チレン溶液とを混合した後、反応槽に加え、室温にて２
時間撹拌反応させた。
【００２１】得られた樹脂をジメチルホルムアミド、塩
化メチレン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む
塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメ
チルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−Ｔｒｐ
（ｏＢｚｌ）−Ａｌａ−樹脂を得た。引き続き同様のＢ
ｏｃ基の除去、Ｂｏｃとアミノ酸のカップリングを繰り
返しＴｙｒ（ｏＢｚｌ）−Ｔｈｒ（ｏＢｚｌ）−Ｓｅｒ
（ｏＢｚｌ）−Ｔｒｐ−Ａｌａ（Ｃｌ−ｚ）−樹脂を得
た。該樹脂を２０ｍｌの１０％アニソールを含むフッ化
水素中で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹脂から遊離
させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３０％酢酸で
抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これをＯＤＳ
カラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ18）による逆相クロマ
トグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ＯＨを得た。本品を前記と同一の
プロテインシーケンサーにより分析した結果、上記の組
成であることが判明した。該ペプチドの物性値は上記と
同一であった。
化メチレン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む
塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメ
チルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−Ｔｒｐ
（ｏＢｚｌ）−Ａｌａ−樹脂を得た。引き続き同様のＢ
ｏｃ基の除去、Ｂｏｃとアミノ酸のカップリングを繰り
返しＴｙｒ（ｏＢｚｌ）−Ｔｈｒ（ｏＢｚｌ）−Ｓｅｒ
（ｏＢｚｌ）−Ｔｒｐ−Ａｌａ（Ｃｌ−ｚ）−樹脂を得
た。該樹脂を２０ｍｌの１０％アニソールを含むフッ化
水素中で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹脂から遊離
させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３０％酢酸で
抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これをＯＤＳ
カラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ18）による逆相クロマ
トグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ＯＨを得た。本品を前記と同一の
プロテインシーケンサーにより分析した結果、上記の組
成であることが判明した。該ペプチドの物性値は上記と
同一であった。
【００２２】（イヌ腸間膜動脈弛緩作用の測定）イヌよ
り摘出した腸間膜動脈のらせん条片を高木等の方法（高
木等編、薬物学実験、９４〜９９ペ−ジ、南山堂）に従
って処理し、標本をマグナス管中で等長性トランスジュ
−サ−に接続した。０．５μＭのプロスタグランジンＦ
2αによって収縮させた腸間膜動脈にたいして本ペプチ
ドは弛緩作用を示した。その際のＥＤ50（５０％弛緩）
は７００μＭであった。
り摘出した腸間膜動脈のらせん条片を高木等の方法（高
木等編、薬物学実験、９４〜９９ペ−ジ、南山堂）に従
って処理し、標本をマグナス管中で等長性トランスジュ
−サ−に接続した。０．５μＭのプロスタグランジンＦ
2αによって収縮させた腸間膜動脈にたいして本ペプチ
ドは弛緩作用を示した。その際のＥＤ50（５０％弛緩）
は７００μＭであった。
【００２３】（アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測
定）アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定は、Ｃｈ
ｅｕｎｇ Ｃｕｓｈｍａｎの方法［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７
(１９７１)〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ （８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製） （１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液） 上記の酵素基質を１００μｌ、酵素溶液を１２μｌ及び
上記で得た上澄液を所定濃度混合し、水で全体を２５０
μｌとした後、３７℃で３０分間反応を行った。
定）アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定は、Ｃｈ
ｅｕｎｇ Ｃｕｓｈｍａｎの方法［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７
(１９７１)〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ （８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製） （１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液） 上記の酵素基質を１００μｌ、酵素溶液を１２μｌ及び
上記で得た上澄液を所定濃度混合し、水で全体を２５０
μｌとした後、３７℃で３０分間反応を行った。
【００２４】反応は１Ｎ−塩酸２５０μｌを用いて終了
させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れＶｏ
ｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢酸エ
チル層から１．０ｍｌをとり出して、酢酸エチルを留去
し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出
された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ228）を
測定した。阻害率はペプチドなしで反応したときのＯＤ
228を１００％とし、反応時間０分のときのＯＤ228を０
％として求め阻害率５０％の時のペプチドの濃度ＩＣ50
で活性を表示したところ、１２０μＭであった。
させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れＶｏ
ｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢酸エ
チル層から１．０ｍｌをとり出して、酢酸エチルを留去
し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出
された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ228）を
測定した。阻害率はペプチドなしで反応したときのＯＤ
228を１００％とし、反応時間０分のときのＯＤ228を０
％として求め阻害率５０％の時のペプチドの濃度ＩＣ50
で活性を表示したところ、１２０μＭであった。
【００２５】（血圧変動の測定） 観血法 １５〜２０週令の自然発症性高血圧ラットを尾静脈より
麻酔した後、大腿部静脈にサンプル注入用カテ−テルを
挿入し、１０ｍｇ／ｋｇのサンプルを投与し圧トランス
ジュ−サ−により観血的に血圧を測定した。血圧の低下
は約１０ｍｍＨｇであった。 非観血（経口投与） 上記のラットに卵黄でエマルジョン化したサンプルを１
００ｍｇ／ｋｇの割合でゾンデ針を使用して強制経口投
与した。そして尾動脈部の血圧をｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法
にて経時的に測定し収縮期血圧における最大降圧値を測
定したところ、１０ｍｍＨｇであった。
麻酔した後、大腿部静脈にサンプル注入用カテ−テルを
挿入し、１０ｍｇ／ｋｇのサンプルを投与し圧トランス
ジュ−サ−により観血的に血圧を測定した。血圧の低下
は約１０ｍｍＨｇであった。 非観血（経口投与） 上記のラットに卵黄でエマルジョン化したサンプルを１
００ｍｇ／ｋｇの割合でゾンデ針を使用して強制経口投
与した。そして尾動脈部の血圧をｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法
にて経時的に測定し収縮期血圧における最大降圧値を測
定したところ、１０ｍｍＨｇであった。
【００２６】
【発明の効果】本発明は、カツオ節等の天然物を加水分
解することによって調製でき、殊に血圧降下剤又は血圧
降下食品として有用である新規ペプチドが製造できる。
解することによって調製でき、殊に血圧降下剤又は血圧
降下食品として有用である新規ペプチドが製造できる。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 99:00
Claims (4)
- 【請求項１】 Ｈ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−
Ａｌａ−ＯＨで示される新規ペプチド。 - 【請求項２】 蛋白質をサ−モライシンで加水分解する
ことを特徴とするＨ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ
−Ａｌａ−ＯＨで示される新規ペプチドを製造する方
法。 - 【請求項３】 蛋白質として魚肉を使用する請求項２記
載の製造法。 - 【請求項４】 蛋白質としてカツオ節を使用する請求項
２記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4163534A JPH05331192A (ja) | 1992-05-29 | 1992-05-29 | 新規ペプチド及びそれを製造する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4163534A JPH05331192A (ja) | 1992-05-29 | 1992-05-29 | 新規ペプチド及びそれを製造する方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05331192A true JPH05331192A (ja) | 1993-12-14 |
Family
ID=15775710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4163534A Pending JPH05331192A (ja) | 1992-05-29 | 1992-05-29 | 新規ペプチド及びそれを製造する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05331192A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6767990B1 (en) | 1999-12-01 | 2004-07-27 | Food Industry Research And Development Institute | Peptides used as angiotensin converting enzyme inhibitor and preparation process thereof |
| JP2005511577A (ja) * | 2001-11-05 | 2005-04-28 | ユニベルシダデ フェデラル デ ミナス ジェライス − ユーエフエムジー | シクロデキストリン、リポソーム及び生分解性ポリマー並びに／或いはそれらの混合物及び生成物を用いる、ペプチドアンギオテンシン−（１−７）並びにその類似体、作動薬及び拮抗薬の製剤の調製方法 |
| US8673862B1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-18 | Food Industry Research And Development Institute | Peptides and use thereof in the inhibition of angiotensin converting enzyme |
-
1992
- 1992-05-29 JP JP4163534A patent/JPH05331192A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6767990B1 (en) | 1999-12-01 | 2004-07-27 | Food Industry Research And Development Institute | Peptides used as angiotensin converting enzyme inhibitor and preparation process thereof |
| JP2005511577A (ja) * | 2001-11-05 | 2005-04-28 | ユニベルシダデ フェデラル デ ミナス ジェライス − ユーエフエムジー | シクロデキストリン、リポソーム及び生分解性ポリマー並びに／或いはそれらの混合物及び生成物を用いる、ペプチドアンギオテンシン−（１−７）並びにその類似体、作動薬及び拮抗薬の製剤の調製方法 |
| US8673862B1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-18 | Food Industry Research And Development Institute | Peptides and use thereof in the inhibition of angiotensin converting enzyme |
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