JPH0541410Y2 - - Google Patents

Description

【考案の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本考案は、アミノ酸配列分析装置、特に、試料
のアミノ酸配列をトリメチルアミン雰囲気下でエ
ドマン反応により分析するアミノ酸配列分析装置
に関する。

〔従来の技術〕

タンパク質やペプチドアミノ酸配列を自動的に
決定するためのアミノ酸配列分析装置として、エ
ドマン反応によつて試料のＮ末端アミノ酸を順次
切断し、得られた３−フエニル−２−チオヒダン
トインアミノ酸を高速液体クロマトグラフにより
分析・同定するものが知られている。

このようなアミノ酸配列分析装置では、試料を
保持するリアクシヨンチヤンバー内でエドマン反
応の一部を行つている。エドマン反応では、まず
試料の末端アミノ基にフエニルイソチオアミネー
トを反応させ、フエニルチオカルバミルタンパク
質を作成する。このようなフエニルチオカルバミ
ルタンパク質の作成は、塩基性物質の雰囲気中で
行われるが、このような塩基性物質としてトリメ
チルアミンが用いられている。このため、従来の
アミノ酸配列分析装置は、リアクシヨンチヤンバ
ーにトリメチルアミンを供給するためのトリメチ
ルアミン供給装置を備えている。トリメチルアミ
ン供給装置は、トリメチルアミン水溶液を貯留す
るための試薬ボトルを有しており、トリメチルア
ミン水溶液の液面に窒素などの不活性ガスを供給
することにより生じるトリメチルアミンの蒸気を
リアクシヨンチヤンバーに供給できるように構成
されている。

〔考案が解決しようとする課題〕

前記従来のアミノ酸配列分析装置では、トリメ
チルアミン供給装置からリアクシヨンチヤンバー
に供給されるトリメチルアミン中に水蒸気が含ま
れている。この水蒸気は、エドマン反応に用いら
れる試薬であるフエニルイソチオシアネートと反
応し、多量の副生成物であるジフエニルチオ尿素
を生成する。このようなジフエニルチオ尿素は、
分析の対象となる３−フエニル−２−チオヒダン
トインアミノ酸の分析を妨害する。即ち、アミノ
酸配列分析装置では、エドマン反応により得られ
た３−フエニル−２−チオヒダントインアミノ酸
を高速液体クロマトグラフにより分析するが、ジ
フエニルチオ尿素のピークがそのクロマトグラム
上に現れてくる。このジフエニルチオ尿素による
ピークは、たとえばグロビンのアミノ酸配列の分
析を行つた場合には、微量のアミノ酸であるトリ
プトフアンに由来する３−フエニル−２−チオヒ
ダントイントリプトフアンのピークと重なり、分
析の障害となる。

本考案の目的は、リアクシヨンチヤンバーに供
給されるトリメチルアミン中の水分を除去するこ
とにより、分析の障害となるジフエニルチオ尿素
の生成を抑制することができるアミノ酸配列分析
装置を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本考案のアミノ酸配列分析装置は、試料のアミ
ノ酸配列をトリメチルアミン雰囲気下でエドマン
反応により分析するものである。このアミノ酸配
列分析装置は、試料に対してエドマン反応を適用
するためのリアクシヨンチヤンバーと、リアクシ
ヨンチヤンバーにトリメチルアミンを供給するた
めのトリメチルアミン供給装置と、トリメチルア
ミン供給装置からのトリメチルアミンを乾燥させ
るための乾燥装置とを備えている。そして、乾燥
装置は、リアクシヨンチヤンバーとトリメチルア
ミン供給装置との間に配置されている。

〔作用〕

本考案では、トリメチルアミン供給装置からリ
アクシヨンチヤンバーにトリメチルアミンが供給
される。そして、リアクシヨンチヤンバーでは、
トリメチルアミン雰囲気下でエドマン反応が行わ
れる。リアクシヨンチヤンバーに供給されるトリ
メチルアミンは、乾燥装置により乾燥されている
ため、水分量が抑制されている。これにより、リ
アクシヨンチヤンバーでは、分析の障害となるジ
フエニルチオ尿素の生成が抑制される。

〔実施例〕

第１図は、本考案の一実施例に係るアミノ酸配
列分析装置の概略構成図である。アミノ酸配列分
析装置は、主に、第１試薬供給装置１と、リアク
シヨンチヤンバー２と、コンバージヨンフラスコ
３と、第２試薬供給装置４と、アミノ酸分析装置
５とを備えている。

第１試薬供給装置１は、酢酸エチルの試薬ボト
ル１１と、ｎ−ヘプタンの試薬ボトル１２と、ト
リメチルアミン水溶液の試薬ボトル１３と、フエ
ニルイソチオシアネートのｎ−ヘプタン溶液の試
薬ボトル１４と、塩化ｎ−ブチルの試薬ボトル１
５と、トリフルオロ酢酸の試薬ボトル１６とを備
えている。各試薬ボトル１１，１２，１３，１
４，１５，１６の上部には、電磁弁１７を有する
ガス供給路１８の一端が接続されている。各ガス
供給路１８の他端は、図示しない窒素やアルゴン
などの不活性ガス供給装置に接続されている。ま
た、各試薬ボトル１１，１２，１３，１４，１
５，１６の上部には、電磁弁１９ａを有するガス
排気路１９の一端が接続されている。さらに、各
試薬ボトル１１，１２，１３，１４，１５，１６
には、その底部に試薬供給路２０の一端が配置さ
れている。各試薬供給路２０の他端は、それぞれ
電磁弁２２に接続されている。各電磁弁２２は、
一列状態で相互に接続されている。そして、その
一端（第１図では上端）に位置する電磁弁２２に
は、図示しない不活性ガス供給装置からのガス供
給路２４の一端が電磁弁２３を介して接続されて
いる。一方、電磁弁群の他端（第１図では下端）
に位置する電磁弁２２には、リアクシヨンチヤン
バー２に試薬を導入するための試薬導入路６２の
一端が接続されている。この試薬導入路６２は、
途中に液体検知センサ６１を有している。

試薬ボトル１３の試薬供給路２０は、水蒸気ト
ラツプ２５を有している。水蒸気トラツプ２５の
詳細を第２図に示す。水蒸気トラツプ２５は、試
薬供給路２０に着脱可能に取り付けられている。
水蒸気トラツプ２５は、筒状の部材であり、その
両端にコネクター２５ａ，２５ａを有している。
そして、水蒸気トラツプ２５は、コネクター２５
ａ，２５ａにより試薬供給路２０に接続されてい
る。水蒸気トラツプ２５の内部には、分子ふるい
Ｍが充填されている。分子ふるいＭとしては、例
えばモレキユラーシーブ（商品名）が用いられ
る。モレキユラーシーブには３Ａ，４Ａ，９Ａな
どがあるが、このうち脱水用のモレキユラーシー
ブである４Ａを用いるのが望ましい。なお、分子
ふるいＭは、水蒸気トラツプ２５を試薬供給路２
０から取り外すことにより、交換することができ
る。

リアクシヨンチヤンバー２は、第３図に示すよ
うに、上部材２ａと下部材２ｂとから構成された
分割可能な断面十字状の部材である。上部材２ａ
と下部材２ｂとの間には、テフロンシート２６が
配置されている。リアクシヨンチヤンバー２の中
心部には、概ね菱形状に形成されたチヤンバー２
７が設けられている。チヤンバー２７の内部にお
いて、テフロンシート２６の上面には、試料を保
持するためのポリブレン処理されたガラスフイル
タ２８が載置されている。チヤンバー２７の上端
には、試薬導入路６２の他端が着脱可能に接続さ
れる導入孔２７ａが形成されている。また、チヤ
ンバー２７の下端には、リアクシヨンチヤンバー
２での反応生成物をコンバージヨンフラスコ３に
移し替えるための試料移動管６３の一端が着脱可
能に連結される排出孔２７ｂが設けられている。

試料移動管６３は、液体検知センサ６４と流路
切替えバルブ６５とを備えている。流路切替えバ
ルブ６５には、リアクシヨンチヤンバー２からの
試料や洗浄液を排出するためのドレン流路６５ａ
が接続されている。

コンバージヨンフラスコ３の上部には、試料移
動管６３の他端が連結されている。また、コンバ
ージヨンフラスコ３の上部には、第２試薬供給装
置４からの試薬を導入するための試薬導入路６６
の一端と、電磁弁６９を有するガス排気管６８の
一端とがそれぞれ連結されている。試薬導入路６
６は、１組の液体検知センサ６７，６７を有して
いる。コンバージヨンフラスコ３の下端には、ア
ミノ酸分析装置５へ試料を導出するための試料導
出路７０の一端が接続されている。

試薬導入路７０は、流路切替えバルブ７１と液
体検知センサ７２とを有している。流路切替えバ
ルブ７１には、コンバージヨンフラスコ３からの
試料や洗浄液を排出するためのドレン流路７１ａ
と、試料導出路７０内に図示しない不活性ガス供
給装置からの不活性ガスを供給するための電磁弁
７１ｃを有するガス供給路７１ｂとがそれぞれ接
続されている。

第２試薬供給装置４は、アセトニトリルの試薬
ボトル４１と、トリフロロ酢酸溶液の試薬ボトル
４２とを有している。各試薬ボトル４１，４２の
上部には、電磁弁４４を有するガス供給路４３の
一端が接続されている。各ガス供給路４３の他端
は、図示しない不活性ガス供給装置に接続されて
いる。また、各試薬ボトル４１，４２の上部に
は、電磁弁４５ａを有するガス排気路４５が接続
されている。さらに、各試薬ボトル４１，４２に
は、その底部に試薬供給路４６の一端が配置され
ている。そして、各試薬供給路４６の他端は、電
磁弁４７に接続されている。各電磁弁４７，４７
は、互いに接続されている。そして、片側（第１
図下側）の電磁弁４７には、試料導入路６６の他
端が接続されている。他方の電磁弁４７には、図
示しない不活性ガス供給装置からの圧力制御され
たガスを供給するためのガス供給路４８ａが電磁
弁４８を介して接続されている。また、電磁弁４
８には、同じく図示しない不活性ガス供給装置か
ら流量制御されたガスを供給するためのガス供給
路４９ａが電磁弁４９を介して接続されている。

アミノ酸分析装置５は、六方バルブ５１を有し
ている。六方バルブ５１には、試料導出路７０の
他端が接続されている。また、六法バルブ５１に
は、高速液体クロマトグラフのカラム５４に試料
を注入するための注入路５２と、カラム５４で分
離された試料を排出するための排出路５３とが隣
接して接続されている。排出路５３には、試料の
検出装置５５が配置されている。この検出装置５
５はデータ処理装置５６に接続されている。さら
に、六方バルブ５１には、フラクシヨンコレクタ
ー５９のサンプルチユーブ５９ａに分離された試
料を回収するための回収路５７が接続されてい
る。なお、回収路５７は、液体検知センサ５８を
有している。

なお、このようなアミノ酸配列分析装置は、図
示しない制御部により、電磁弁や流路切替えバル
ブ等が自動制御されるように構成されている。

次に、前記実施例の動作について説明する。

リアクシヨンチヤンバー２を分割してガラスフ
イルター２８にタンパク質又はペプチドの試料を
添加する。そして、この試料から、エドマン反応
により３−フエニル−２−チオヒダントインアミ
ノ酸を誘導する。

まず、リアクシヨンチヤンバー２に第１試薬供
給装置１の試薬ボトル１４からフエニルイソチオ
シアネート（PITC）を供給する。試薬ボトル１
４は、ガス供給路１８からの不活性ガスにより内
圧が上昇し、この圧力により試薬供給路２０に
PITCを送り出す。リアクシヨンチヤンバー２に
供給されたPITCは、試料と反応してフエニルチ
オカルバミルタンパク質（PTC−タンパク質）
を生成する。

このような反応は、トリメチルアミン
（TMA）雰囲気中で行われる。このTMAは、試
薬ボトル１３から供給される。試薬ボトル１３か
らのTMAは、リアクシヨンチヤンバー２に供給
される前に水蒸気トラツプ２５により脱水され
る。水蒸気トラツプ２５では、分子ふるいＭが
TMA中の水分を選択的に吸着することができる
ため、TMAは効率よく脱水される。これによ
り、リアクシヨンチヤンバー２に供給される
TMA中の水分量が抑制され、副生成物の生成が
抑制される。即ち、TMA中の水分とPITCとの
反応によるジフエニルチオ尿素の生成が抑制され
る。

なお、前記PTC−タンパク質生成反応での過
剰試薬や副生成物は、試薬ボトル１１，１２から
それぞれ供給される酢酸エチル及びｎ−ヘプタン
により洗浄される。

洗浄後、リアクシヨンチヤンバー２には、試薬
ボトル１６からトリフルオロ酢酸（TFA）が供
給される。このTFAは、生成したPTC−タンパ
ク質のＮ末端ペプチド結合を切断し、２−アニリ
ノ−５−チアゾリノンアミノ酸（ATZ−アミノ
酸）を生成する。生成したATZ−アミノ酸は、
試薬ボトル１５からの塩化ｎ−ブチルにより抽出
される。この抽出液は、試料移動管６３を通つて
コンバージヨンフラスコ３内に導入される。コン
バージヨンフラスコ３内のATZ−アミノ酸抽出
液には、第２試薬供給装置４の試薬ボトル４２か
らTFA溶液が供給される。このようなTFA溶液
により、TFA−アミノ酸は、安定な３−フエニ
ル−２−チオヒダントインアミノ酸（PTH−ア
ミノ酸）に転換される。これにより、エドマン反
応は完結する。

コンバージヨンフラスコ３中のPTH−アミノ
酸は、試薬ボトル１４からのアセトニトリルによ
り溶解される。そして、このアセトニトリル溶液
は、試料導出路７０を通つてアミノ酸分析装置５
に導出される。アミノ酸分析装置５では、アセト
ニトリル溶液は、六方バルブ５１に導入される。
そして、このアセトニトリル溶液は、六方バルブ
５１を切り換えることにより、高速液体クロマト
グラフのカラム５４に注入される。そして、カラ
ム５４で分離されたPTHアミノ酸は、検出装置
５５によつて検出され、そのデータはデータ処理
装置５６によつて処理される。これにより、
PTH−アミノ酸は固定され、試料のアミノ酸配
列が決定される。

このようなアミノ酸分析装置５による一連の分
析では、コンバージヨンフラスコ３からのアセト
ニトリル溶液中のジフエニルチオ尿素含有量が抑
制されている。このため、微量のPTH−アミノ
酸の分析でも、ジフエニルチオ尿素による妨害を
受けにくくなる。

〔他の実施例〕

前記実施例では水蒸気トラツプ２５内に分子ふ
るいＭを充填したが、これに代えて他の周知の塩
基性の乾燥剤（例えば粒状ソーダ石灰や棒状水酸
化ナトリウム等）が用いられていてもよい。ただ
し、乾燥剤としては、トリメチルアミンと反応し
ない物を用いる必要がある。

〔考案の効果〕

本考案では、リアクシヨンチヤンバーとトリメ
チルアミン供給装置との間にトリメチルアミンを
乾燥させるための乾燥装置を設けている。これに
より、本考案では、分析の障害となるジフエニル
チオ尿素の生成を抑制することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本考案の一実施例に係るアミノ酸配列
分析装置の概略構成図、第２図は前記実施例に用
いられる水蒸気トラツプの一部断面概略図、第３
図は前記実施例に用いられるリアクシヨンチヤン
バーの縦断面概略図である。 ２……リアクシヨンチヤンバー、１３……トリ
メチルアミンの試薬ボトル、２０……試薬供給
路、２５……水蒸気トラツプ。

Claims (1)

1. 【実用新案登録請求の範囲】 試料のアミノ酸配列を、トリメチルアミン雰囲
   気下でエドマン反応により分析するアミノ酸配列
   分析装置であつて、 前記試料に対してエドマン反応を適用するため
   のリアクシヨンチヤンバーと、 前記リアクシヨンチヤンバーに前記トリメチル
   アミンを供給するためのトリメチルアミン供給装
   置と、 前記リアクシヨンチヤンバーと前記トリメチル
   アミン供給装置との間に配置された、前記トリメ
   チルアミン供給装置からのトリメチルアミンを乾
   燥させるための乾燥装置と、 を備えたアミノ酸配列分析装置。