JPH0549470A - 植物カルス細胞分化剤の製造法 - Google Patents
植物カルス細胞分化剤の製造法Info
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- JPH0549470A JPH0549470A JP3242621A JP24262191A JPH0549470A JP H0549470 A JPH0549470 A JP H0549470A JP 3242621 A JP3242621 A JP 3242621A JP 24262191 A JP24262191 A JP 24262191A JP H0549470 A JPH0549470 A JP H0549470A
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- plant callus
- callus cell
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 微生物を培養して植物カルス細胞分化剤を製
造する。 【構成】 エンターバクター属、バチルス属またはシュ
ードモナス属に属する微生物を、好ましくはアデニンま
たはトリプトファンの存在下において培養し、培養液中
の菌を死滅させて植物カルス細胞分化剤を採取する。こ
の細胞分化剤は、ワサビ、カーネーション、ダイズの各
カルス細胞の再分化に有効に作用する。
造する。 【構成】 エンターバクター属、バチルス属またはシュ
ードモナス属に属する微生物を、好ましくはアデニンま
たはトリプトファンの存在下において培養し、培養液中
の菌を死滅させて植物カルス細胞分化剤を採取する。こ
の細胞分化剤は、ワサビ、カーネーション、ダイズの各
カルス細胞の再分化に有効に作用する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、植物カルス細胞分化剤
の製造法に関する。更に詳しくは、微生物を培養して植
物カルス細胞分化剤を製造する方法に関する。
の製造法に関する。更に詳しくは、微生物を培養して植
物カルス細胞分化剤を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】分化した植物組織の一部(外植片)を適当
な培地に移して培養すると脱分化が起こり、細胞分裂を
くり返して無定形の組織塊である植物カルスを生ずる。
外植片からカルスを誘導し、増殖するには、一般に基本
培地に植物ホルモンであるサイトカイニン類(カイネチ
ンなど)またはオーキシン類(2,4-ジクロロフェノキシ酢
酸、インドール酢酸、インドール酪酸など)が添加され
て用いられる。
な培地に移して培養すると脱分化が起こり、細胞分裂を
くり返して無定形の組織塊である植物カルスを生ずる。
外植片からカルスを誘導し、増殖するには、一般に基本
培地に植物ホルモンであるサイトカイニン類(カイネチ
ンなど)またはオーキシン類(2,4-ジクロロフェノキシ酢
酸、インドール酢酸、インドール酪酸など)が添加され
て用いられる。
【０００３】このように、現在植物カルス細胞の再分化
には、種々の植物ホルモンが使用されているが、その際
厳密な濃度のコントロールが要求され、そのため多くの
実験例を必要とし、また培地の選択が難しいなどの難点
がある。
には、種々の植物ホルモンが使用されているが、その際
厳密な濃度のコントロールが要求され、そのため多くの
実験例を必要とし、また培地の選択が難しいなどの難点
がある。
【０００４】本発明者は先に、このような難点のみられ
ない植物カルス細胞分化剤の製造法として、微生物を培
養して植物カルス細胞分化剤を製造する方法を提案して
いる(特開昭63-207,379号公報)。
ない植物カルス細胞分化剤の製造法として、微生物を培
養して植物カルス細胞分化剤を製造する方法を提案して
いる(特開昭63-207,379号公報)。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】この提案された方法で
は、微生物としてエンターバクター属に属する Entero-
bacter sp No.11-5(FERM P-8884)が用いられ、その培養
は好ましくはトリプトファンの存在下において行われ、
得られた植物カルス細胞分化剤は、イネカルス細胞やレ
ッドキャベツカルス細胞の再分化に有効である。
は、微生物としてエンターバクター属に属する Entero-
bacter sp No.11-5(FERM P-8884)が用いられ、その培養
は好ましくはトリプトファンの存在下において行われ、
得られた植物カルス細胞分化剤は、イネカルス細胞やレ
ッドキャベツカルス細胞の再分化に有効である。
【０００６】本発明の目的は、エンターバクター属に属
する他の微生物を用い、その培養を好ましくはアデニン
の存在下で行い、ワサビカルス細胞、カーネーションカ
ルス細胞、ダイズカルス細胞などの再分化に有効な植物
カルス細胞分化剤の製造法を提供することにある。
する他の微生物を用い、その培養を好ましくはアデニン
の存在下で行い、ワサビカルス細胞、カーネーションカ
ルス細胞、ダイズカルス細胞などの再分化に有効な植物
カルス細胞分化剤の製造法を提供することにある。
【０００７】本発明の他の目的は、バチルス属またはシ
ュードモナス属に属する微生物を用い、同様の効果を有
する植物カルス細胞分化剤の製造法を提供することにあ
る。
ュードモナス属に属する微生物を用い、同様の効果を有
する植物カルス細胞分化剤の製造法を提供することにあ
る。
【０００８】
【課題を解決するための手段】かかる本発明の目的は、
下記の微生物を培養し、培養液中の菌を死滅させた後、
植物カルス細胞分化剤を採取する植物カルス細胞分化剤
の製造法によって達成される。
下記の微生物を培養し、培養液中の菌を死滅させた後、
植物カルス細胞分化剤を採取する植物カルス細胞分化剤
の製造法によって達成される。
【０００９】[微生物１] Enterobacter agglomerans No.305-05(FERM P-12404) 静岡県天城湯ヶ島町の温泉水中から採取 [微生物２] Enterobacter sp No.203-05(FERM P-12405) 長野県小谷村の温泉水中から採取 [微生物３] Enterobacter sp No.310-03(FERM P-12409) 石川県白峰村の温泉水中から採取 [微生物４] Enterobacter sp No.308-03(FERM P-12408) 石川県白峰村の温泉水中から採取 [微生物５] Enterobacter sp No.315-05(FERM P-12407) 石川県吉野谷村の温泉水中から採取 [微生物６] Enterobacter sp No.213-09(FERM P-12406) 長野県安曇村の温泉水中から採取 [微生物７] Bacillus sp No.203-01(FERM P-12414) 長野県小谷村の温泉水中から採取 [微生物８] Bacillus cereus No.311-10(FERM P-12413) 石川県白峰村の温泉水中から採取 [微生物９] Bacillus subtilius No.202-02(FERM P-12412) 長野県小谷村の温泉水中から採取 [微生物10] Pseudomonas syringae pathavars No.200-09(FERM P-12
411) 神奈川県藤沢市の土壌中から採取 [微生物11] Pseudomonas sp No.213-10(FERM P-12410) 長野県安曇村の温泉水中から採取
411) 神奈川県藤沢市の土壌中から採取 [微生物11] Pseudomonas sp No.213-10(FERM P-12410) 長野県安曇村の温泉水中から採取
【００１０】これらの温泉水または土壌からの各微生物
の分離は、L-ブイヨン(トリプトン1%、酵母エキス0.5
%、NaCl 0.5%、殺菌前のpH7.2)5mlを試験管に入れ、こ
れに温泉水１mlまたは土壌1gを添加して、40℃(微生物
３〜８、10、11)または37℃(微生物１、２、９)で24時
間振とう培養することにより行われた。
の分離は、L-ブイヨン(トリプトン1%、酵母エキス0.5
%、NaCl 0.5%、殺菌前のpH7.2)5mlを試験管に入れ、こ
れに温泉水１mlまたは土壌1gを添加して、40℃(微生物
３〜８、10、11)または37℃(微生物１、２、９)で24時
間振とう培養することにより行われた。
【００１１】これらの各微生物は、下記表１〜２に示さ
れるような菌学的性質を有し、このような菌学的性質に
基いて、Bergey's Mannual of Determinative Bacterio
logy第9版により検索した結果、エンターバクター属、
バチルス属またはシュードモナス属に属する菌であるこ
とが確認された。
れるような菌学的性質を有し、このような菌学的性質に
基いて、Bergey's Mannual of Determinative Bacterio
logy第9版により検索した結果、エンターバクター属、
バチルス属またはシュードモナス属に属する菌であるこ
とが確認された。
【００１２】
【表１】
【００１３】
【表２】
【００１４】なお、糖からの酸の生成では、次の培地
で、添加濃度1%で試験された。 ペプトン2g、NaCl 5g、K2HPO4 0.3g、炭水化物10g、ブ
ロムチモールブルー0.08g、寒天15g、蒸留水1000ml(pH
7.1)
で、添加濃度1%で試験された。 ペプトン2g、NaCl 5g、K2HPO4 0.3g、炭水化物10g、ブ
ロムチモールブルー0.08g、寒天15g、蒸留水1000ml(pH
7.1)
【００１５】各微生物の培養は、任意の培地を用い、振
とう条件下で40℃または37℃で約72〜90時間程度行われ
る。その際、培地１リットル当り約0.5〜5mg程度のアデ
ニン(各属の微生物)またはトリプトファン(バチルス属
またはシュードモナス属の微生物)を添加しておくと、
それから得られる植物カルス細胞分化剤の再分化作用は
一層高められる。培養後は、培養液に塩酸によって代表
される無機酸などを加えて菌を死滅させ、その上澄液を
細胞分化剤として採取する。
とう条件下で40℃または37℃で約72〜90時間程度行われ
る。その際、培地１リットル当り約0.5〜5mg程度のアデ
ニン(各属の微生物)またはトリプトファン(バチルス属
またはシュードモナス属の微生物)を添加しておくと、
それから得られる植物カルス細胞分化剤の再分化作用は
一層高められる。培養後は、培養液に塩酸によって代表
される無機酸などを加えて菌を死滅させ、その上澄液を
細胞分化剤として採取する。
【００１６】かかる植物カルス細胞分化剤を用いての植
物カルス細胞の再分化は Murashige& Skoog 培地(1962)
などを基本培地に用い、これに上記細胞分化剤を基本培
地１リットル当り約4〜16ml添加したものに、ワサビカ
ルス細胞、カーネーションカルス細胞、ダイズカルス細
胞などの植物カルス細胞をピンセットなどで移し、光の
照射下(約10〜16時間明条件下)に、25〜30℃で約1〜2ヶ
月間培養することにより行われる。
物カルス細胞の再分化は Murashige& Skoog 培地(1962)
などを基本培地に用い、これに上記細胞分化剤を基本培
地１リットル当り約4〜16ml添加したものに、ワサビカ
ルス細胞、カーネーションカルス細胞、ダイズカルス細
胞などの植物カルス細胞をピンセットなどで移し、光の
照射下(約10〜16時間明条件下)に、25〜30℃で約1〜2ヶ
月間培養することにより行われる。
【００１７】
【発明の効果】本発明により、上記の如き各種植物カル
ス細胞分化剤として有効な、植物ホルモン様の活性を有
する物質が、微生物の培養物から得られる。この細胞分
化剤は、その濃度のコントロールおよび培地の選択の点
において従来の植物ホルモンの場合程厳格さを要せず、
またその活性も大である。
ス細胞分化剤として有効な、植物ホルモン様の活性を有
する物質が、微生物の培養物から得られる。この細胞分
化剤は、その濃度のコントロールおよび培地の選択の点
において従来の植物ホルモンの場合程厳格さを要せず、
またその活性も大である。
【００１８】次に、実施例について本発明を説明する。
【００１９】実施例１〜11 前記微生物１〜11を、次の組成を有する L-ブイヨン培
地(10ml)を用いて、振とう回数120rpmで振とうさせなが
ら、40℃で70時間培養した。 トリプトン 10.0g 酵母エキス 5.0g NaCl 5.0g 蒸留水(pH7.0) 1000ml
地(10ml)を用いて、振とう回数120rpmで振とうさせなが
ら、40℃で70時間培養した。 トリプトン 10.0g 酵母エキス 5.0g NaCl 5.0g 蒸留水(pH7.0) 1000ml
【００２０】これらの培養液に、1N塩酸500μlを加えて
菌を死滅させ、遠心機(10000rpm、10分間、4℃)で集菌
し、上澄液を採取して、細胞分化剤Ｉ〜XIとした。
菌を死滅させ、遠心機(10000rpm、10分間、4℃)で集菌
し、上澄液を採取して、細胞分化剤Ｉ〜XIとした。
【００２１】実施例12 微生物２を用いた培養の際、最終濃度が0.5mg/mlになる
量のアデニンが培地成分として更に添加されて用いら
れ、細胞分化剤IIaを得た。
量のアデニンが培地成分として更に添加されて用いら
れ、細胞分化剤IIaを得た。
【００２２】実施例13 微生物４を用いた培養の際、最終濃度が0.5mg/mlになる
量のアデニンが培地成分として更に添加されて用いら
れ、細胞分化剤IVaを得た。
量のアデニンが培地成分として更に添加されて用いら
れ、細胞分化剤IVaを得た。
【００２３】実施例14 微生物７を用いた培養の際、最終濃度が0.5mg/mlになる
量のアデニンが培地成分として更に添加されて用いら
れ、細胞分化剤VIIaを得た。
量のアデニンが培地成分として更に添加されて用いら
れ、細胞分化剤VIIaを得た。
【００２４】実施例15 微生物８を用いた培養の際、最終濃度が3mg/mlになる量
のトリプトファンが培地成分として更に添加されて用い
られ、細胞分化剤VIIItを得た。
のトリプトファンが培地成分として更に添加されて用い
られ、細胞分化剤VIIItを得た。
【００２５】実施例16 微生物10を用いた培養の際、最終濃度が3mg/mlになる量
のトリプトファンが培地成分として更に添加されて用い
られ、細胞分化剤Xtを得た。
のトリプトファンが培地成分として更に添加されて用い
られ、細胞分化剤Xtを得た。
【００２６】実施例17 微生物11を用いた培養の際、最終濃度が0.5mg/mlになる
量のアデニンが培地成分として更に添加されて用いら
れ、細胞分化剤XIaを得た。
量のアデニンが培地成分として更に添加されて用いら
れ、細胞分化剤XIaを得た。
【００２７】以上の各実施例で得られた細胞分化剤を、
Murashige & Skoog 培地(培地１リットル当り meso-イ
ノシトール100mg、しょ糖30gおよびチアミン塩酸塩0.4m
gを添加；MS培地)１リットル当り4ml添加し、ワサビカ
ルス細胞、カーネーションカルス細胞またはダイズカル
ス細胞の再分化テストを行った。
Murashige & Skoog 培地(培地１リットル当り meso-イ
ノシトール100mg、しょ糖30gおよびチアミン塩酸塩0.4m
gを添加；MS培地)１リットル当り4ml添加し、ワサビカ
ルス細胞、カーネーションカルス細胞またはダイズカル
ス細胞の再分化テストを行った。
【００２８】再分化テストは、約100mgのカルス細胞を
用い、25℃、30日間、4000ルックスのライトを連続的に
照射しながら行い、４サンプル中何個のサンプルが分化
(根分化)したかを観察することによって行われ、次の表
３に示されるような結果を得た。
用い、25℃、30日間、4000ルックスのライトを連続的に
照射しながら行い、４サンプル中何個のサンプルが分化
(根分化)したかを観察することによって行われ、次の表
３に示されるような結果を得た。
【００２９】
【００３０】比較例 各実施例で用いられた細胞分化剤の代わりに、MS培地に
対してそれぞれ1ppmの(ア)2,4-ジクロロフェノキシ酢
酸、(イ)インドール酢酸、(ウ)ナフチル酢酸、(エ)6-ベ
ンジルアデニンまたは(オ)カイネチンである植物ホルモ
ンを用いて、上記３種の植物カルス細胞の再分化テスト
を行った。
対してそれぞれ1ppmの(ア)2,4-ジクロロフェノキシ酢
酸、(イ)インドール酢酸、(ウ)ナフチル酢酸、(エ)6-ベ
ンジルアデニンまたは(オ)カイネチンである植物ホルモ
ンを用いて、上記３種の植物カルス細胞の再分化テスト
を行った。
【００３１】ワサビカルス細胞に対しては、(ア)、(エ)
が０、(イ)、(オ)が１、(ウ)が２という分化サンプル数
が得られたが、カーネーションカルス細胞およびダイズ
カルス細胞に対しては、いずれも０であった。
が０、(イ)、(オ)が１、(ウ)が２という分化サンプル数
が得られたが、カーネーションカルス細胞およびダイズ
カルス細胞に対しては、いずれも０であった。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ａ０１Ｎ 63/02 Ｅ 7106−4Ｈ Ｆ 7106−4Ｈ (Ｃ１２Ｐ 1/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 1/00 Ｃ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｐ 1/00 Ｃ１２Ｒ 1:38）
Claims (8)
- 【請求項１】 エンターバクター属に属する微生物 Ent
erobacter agglo-merans No.305-05(FERM P-12404)、En
terobacter sp No.203-05(FERM P-12405)、Enterobacte
r sp No.310-03(FERM P-12409)、Enterobacter sp No.3
08-03(FERM P-12408)、Enterobacter sp No.315-05(FER
M P-12407) または Enterobactersp No.213-09(FERM P-
12406)を培養し、培養液中の菌を死滅させた後、植物カ
ルス細胞分化剤を採取することを特徴とする植物カルス
細胞分化剤の製造法。 - 【請求項２】 培養がアデニンの存在下で行われる請求
項１記載の植物カルス細胞分化剤の製造法。 - 【請求項３】 バチルス属に属する微生物 Bacillus sp
No.203-01(FERM P-12414)、Bacillus cereus No.311-1
0(FERM P-12413)または Bacillus subtiliusNo.202-02
(FERM P-12412)を培養し、培養液中の菌を死滅させた
後、植物カルス細胞分化剤を採取することを特徴とする
植物カルス細胞分化剤の製造法。 - 【請求項４】 培養がアデニンの存在下で行われる請求
項３記載の植物カルス細胞分化剤の製造法。 - 【請求項５】 培養がトリプトファンの存在下で行われ
る請求項３記載の植物カルス細胞分化剤の製造法。 - 【請求項６】 シュードモナス属に属する微生物 Pseud
omonas syringaepathavars No.200-09(FERM P-12411)
または Pseudomonas sp No.213-10(FERM P-12410)を培
養し、培養液中の菌を死滅させた後、植物カルス細胞分
化剤を採取することを特徴とする植物カルス細胞分化剤
の製造法。 - 【請求項７】 培養がアデニンの存在下で行われる請求
項６記載の植物カルス細胞分化剤の製造法。 - 【請求項８】 培養がトリプトファンの存在下で行われ
る請求項６記載の植物カルス細胞分化剤の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3242621A JP2789879B2 (ja) | 1991-08-28 | 1991-08-28 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3242621A JP2789879B2 (ja) | 1991-08-28 | 1991-08-28 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10051466A Division JP3013835B2 (ja) | 1998-02-17 | 1998-02-17 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
| JP10051465A Division JP2998736B2 (ja) | 1998-02-17 | 1998-02-17 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0549470A true JPH0549470A (ja) | 1993-03-02 |
| JP2789879B2 JP2789879B2 (ja) | 1998-08-27 |
Family
ID=17091783
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3242621A Expired - Lifetime JP2789879B2 (ja) | 1991-08-28 | 1991-08-28 | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2789879B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001302427A (ja) * | 2000-04-25 | 2001-10-31 | Nok Corp | 植物生長促進剤およびこれを用いた植物生長促進方法 |
| WO2001080638A1 (en) * | 2000-04-25 | 2001-11-01 | Okayama Prefecture | Cell- or organ-differentiation controllers and method of controlling morphogenesis by using the same |
| US9532519B2 (en) | 2006-12-11 | 2017-01-03 | Japan Science And Technology Agency | Plant growth regulator and use thereof |
| US9930887B2 (en) | 2011-12-12 | 2018-04-03 | Okayama Prefecture | Compound for increasing amino acid content in plant, and use thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63207379A (ja) * | 1987-02-20 | 1988-08-26 | Nok Corp | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
-
1991
- 1991-08-28 JP JP3242621A patent/JP2789879B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63207379A (ja) * | 1987-02-20 | 1988-08-26 | Nok Corp | 植物カルス細胞分化剤の製造法 |
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| JP2001302427A (ja) * | 2000-04-25 | 2001-10-31 | Nok Corp | 植物生長促進剤およびこれを用いた植物生長促進方法 |
| WO2001080638A1 (en) * | 2000-04-25 | 2001-11-01 | Okayama Prefecture | Cell- or organ-differentiation controllers and method of controlling morphogenesis by using the same |
| US7479267B2 (en) | 2000-04-25 | 2009-01-20 | Okayama Prefecture | Cell-or organ-differentiation controllers and method of controlling morphogenesis by using the same |
| US9532519B2 (en) | 2006-12-11 | 2017-01-03 | Japan Science And Technology Agency | Plant growth regulator and use thereof |
| US9930887B2 (en) | 2011-12-12 | 2018-04-03 | Okayama Prefecture | Compound for increasing amino acid content in plant, and use thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2789879B2 (ja) | 1998-08-27 |
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