JPH05504355A - レトロウイルスによるウイルス感染にたいする薬剤としてのｓ―アデノシルメチオニンの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 レトロウィルスによるウィルス感染にたいする薬剤としてのＳ−アデノシルメチ オニンの使用本発明は、レトロウィルス、特にＨＩ（ヒト免疫不全）ウィルスに よるウィルス感染もしくはＡＩＤＳ感染にたいする薬剤としてのＳ−アデノシル メチオニンの使用に関する。

Ｓ−アデノシルメチオニン は生物系で広く分布しており、かっｃｌ−代謝でメチル化剤として、即ちメチル 基の運搬体として生じるスルホニウム塩である０例えば、Ｆ、ヒラメ及びＪ、Ａ ｘｅ　ｌ　ｒｏｄによる文献、標題“ホスホリピド・メチレイシコン・エンド・ バイオロジカル・シグナル・トランスミッション”［Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ 　Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｉｇｎａｌ　Ｔ ｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ：５ｃｉｅｎｃｅ、２０９．１０８２〜１０９０頁、１ ９８０コから、Ｓ−アデノシルメチオニンが細胞膜中でリン上質のメチル化を惹 起し、その際にホスファチジルエタノールアミンが２つのメチルトランスフェラ ーゼの共同作用下に２つのメチル化工程でホスファチジルコリンに変換され、こ れにより例えば赤血球の細胞膜の流動性も変化することが公知である。

更に、Ｒ，Ｈｏ１ｌｉｄａｙによる文献、榎Ｍ″ア・ディフェレント・カインド ・オン・インへりタンス“［Ａ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｋｉｎｄ　ｏｆ　Ｉｎｈ ｅｒｉｔａｎｃｅ；５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ａｍｅｒｉｃａｎ、４０〜４８頁、 １９８９　６月］がら、Ｓ−アデノシルメチオニンによりＤＮＡ（デオキシリボ 核酸）中に含有されているシトシン基が５−メチルシトシン基に変換されること が知られており、このことはＤＮＡ中の遺伝子の失活化をもたらしつる。

最後に、そのままだと溶液中で不安定であるＳ−アデノシルメチオニンはトシレ ート−ビス−サルフェートとして安定な形で溶解しており、かつ経口形で関節疾 患の治療剤として使用することができる。

腸管外投与はドイツ国では認可されている。静派内投与の場合は範囲１００〜５ ００ｍｇ　（１，５〜７゜５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇ　）の投与量が認容性である ［文献Ｇｉｕ特表千５−５０４３５５　（２） １ｉｄｏｒｉ　及びその他″Ｐ　ｈ　ａ　ｒ　ｍ　ａ　ｃ　ｏ　ｋ　ｉ　ｎｅｔ ｉｃｓ　ｏｆ　Ｓ−Ａｄｅｎｏｓｉｌ−１−ｍｅｔｉｏｎｉｎｅ　ｉｎ　Ｈｅａ ｌｔｈｙ　Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ　″　、ｉｎ：Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、２７，１１９〜２２１頁（１９８４）参照コ。

ところで、試験管内実験で、Ｓ−アデノシルメチオニンが安定形で濃度範囲１０ ０〜２００　ＩＬｇ／ｍ　ｌで極めて多種多様の代謝成分にたいして高い反応性 を有しているにもかかわらず、レトロウィルス、特にＨＩＶ又はＡＩＤＳウィル スによるウィルス感染にたいして有効作用を示すことが認められ、驚異的であっ た。

このことは以下に記載の実験により明らかである。

実施例 新生児のさい帯からのリンパ球培養液（Ｈ，Ｒｕｅｂｓａｍｅｎ−Ｗａｉｇｍａ ｎｎ及びその他、“ｌ５ｏ１ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖａｒｉａｎｔｓ　ｏｆ　Ｌｙ ｍｐｈｏｃｙｔｏｐａｔｈｌｃ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ 　ＰｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｏｏｄ　ａｎｄ　ＣｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌＦｌ ｕｉｄ　ｏｆ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈＡＲＣｏｒ　ＡＩＤＳ”、Ｊ、Ｍｅ ｄｉｃａｌＶｉｒｏｌｏｇｙ、１９，３３５〜３４４頁、１９８６）にＡＩＤＳ 患者の血液から採取したウィルスを接種した。このためにリンパ球培養液（細胞 １・１０６個／ｍｌ）５ｍｌ＋、：伝染性粒子１０″〜１０Ｉ／ｍｌを含有する ＨＩＶ！！！濁液０．５ｍ＋を加える。培地に異なる量のＳ−アデノシル−し− メチオニントシレート−ビス−サルフェートを加える。それぞれの培地の三分の −ないし半分を１ないし２日後に同じ組成の新しい培地に替える。

レトロウィルスは、核酸としてもっばらリボ核酸（ＲＮＡ）を含有し、かつ宿主 中で感染後にウィルスＲＮＡから宿主のＤＮＡ中に組み込み可能なウィルスＤＮ Ａを形成する特別なポリメラーゼ、つまり逆転写酵素を必要とすることを特徴と する（Ｈ，Ｒｕｅｂｓａｍｅｎ、”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ　ｄｅｒ　Ｔｕｍ。

ｒｖｉｒｅｎ″、Ｃｈｅｍｉｅ　ｉｎ　ｕｎｓｅｒｅｒ　Ｚｅｉｔ　１７，１６ ９〜１８０頁、１９８３参照）、このことから、レトロウィルスに典型的な逆転 写酵素及びこれによりＤＮＡ中に組み込まれるトリチウム標識したチミジンをベ ースとするレトロウィルスの検出法が明らかである（Ｈ，Ｒｕｅｂｓａｍｅｎ及 びその他、前記文献参照）。

顕徽鋺試験による陽性の感染検出に相応して、３〜５日後にそれぞれ上澄培養液 ５ｍｌを遠心分離（１００００ｇで１０分）により澄明にする。この様にして澄 明にした試料を１０００００　ｇ　／　５０分で遠心分離し、かつ残渣をトリス １ｌＩＩＴｒ液６０μｌ中に溶解する［１０ｍＭトリス、０．２％トリトン（Ｔ ｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００，１ｍＭ　ＥＤＴＡ、５ｍＭジチオトレイトール、６０ ｍＭ　ＫＣｌ、ｐＨ７，３］。

リゼイト各３０μｍを鋳ｑ　［５ｍ　Ｍ　Ｍ　ｇ　ＣＩ　、、２．４ｍＭジチオ トレイトール、６０ｍＭ　ＫＣＩ及び０．００３４ｍＭメチル−［３Ｈ］チミジ ン−５７−トリホスフエート（４８Ｃｉ／ｍＭ、Ａｍｅ　ｒ　ｓ　ｈａｍ、Ｂｕ ｃｋｓ、英国）中の０．０１ｍｇ／ｍｌポリ（ｒＡ）・オリゴ（ｄ　Ｔ　）　（ Ｐ　ｈ　ａ　ｒ　ｍ　ａ　ｃ　１ａ　＋Ｕｐｐｓａｌａ、　Ｓｃｈｗｅｄｅｎ） ］　３０μｍと共に３７℃で９０分間恒温保持する。反応は、１０％ラウリルサ ルコシンをその最終濃度１．４％まで添加することにより終結させる。ラウリル サルコシンを加えたインキュベート１０μｍの遊離のかっＲＮＡ／ＤＮＡに組み 込まれた放射能を常法でＤＥＡＥフィルターを用いて分離し、そのフィルターを 洗浄しかつ乾燥した後でシンチレイション液体中に装入する。その後、放射能を シンチレイションカウンターで測定する。

組み込まれた放射能（５ｍｌあたりの崩壊７分）が盲検値の抽出後に、上澄の培 養液中に含まれている逆転写酵素に関する、従って培地中に含まれているレトロ ウィルスに関する尺度である。

実験結果は次の表に、また図表として表す、それらから、レトロウィルスの数が 培地中のＳ−アデノシル−し−メチオニントシレート−ビス−サルフェートの量 の増加にともなって減少することが明らかである。

レトロウィルス濃度が半分に低下する半減濃度は範囲１００〜２００ＡＬｇ／ｍ ｌである。

皇 アデノシルメチオニン濃　の間数としてのリンパ球培養物中のＨＩＶ数（放射性 逆転写酵素として測定）アデノシルメチオニン　逆転写酵素 （／ｌ１ｎｌ）（数７分・５ｍ１） Ｓ−アデノシルメチオニンの前記の作用は様々な要因を持ちうる。例えば、リン パ球の膜がメチル化により変化し、それによりウィルス結合のレセプターが作用 されることが可能である。しかしまた、ウィルスＲＮＡ及び／又はそれからリン パ球中で形成されるウィルスＤ　Ｎ　Ａのメチル化が起き、それ故複製もしくは ウィルス合成が阻害される可能性があり、この場合にはＳ−アデノシルメチオニ ンは完全な分子としてウィルス膜及び／又はリンパ球膜を通過するはずである。

この可能な作用機構は、ホスホリル化後にチミジンの逆転写酵素への結合を競合 的に阻害する公知のエイズ刑ＡＺＴ　（３’　−アジド−２’　、３’　−ジデ ソキシチミジン）と比較することはできない。

要　約　書 試験管内試験でリンパ球培養液中でトシレート−ビス−サルフェートとして安定 化されているＳ−アデノシル−し−メチオニンはＡＩＤＳウィルスに対して範囲 １００〜２００μｇ　／　ｍ　ｌの半減濃度で作用する。

国際調査報告

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．レトロウイルスによるウイルス感染にたいする薬剤としてのＳ−アデノシル メチオニンの使用。
2. ２．ＨＩＶ感染にたいする薬剤としてのＳ−アデノシルメチオニンの使用。
3. ３．Ｓ−アデノシルメチオニンが安定化されていることを特徴とする請求項１又 は２によるＳ−アデノシルメチオニンの使用。
4. ４．Ｓ−アデノシルメチオニンがビス−サルフェートの形でトシレートとして安 定化されていることを特徴とする請求項３によるＳ−アデノシルメチオニンの使 用。