JPH05504548A - インターロイキン―２とヒスタミン、その類似体又はｈ↓２―受容体アゴニストを含む抗腫瘍性製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 インターロイキン−２とヒスタミン、その類似体又はＨ２−受容体アゴニストを 含む抗腫瘍性製剤技術分野 本発明は抗腫瘍治療の分野に関し、さらに詳しくはインターロイキン−２（ＩＬ −２）による悪性腫瘍の治療に関する０本発明によって提供される改良はＩＬ− ２を例えばヒスタミン、Ｈ２−受容体活性を有するその類似体、内因性ヒスタミ ン放出製剤又はＨ２−受容体アゴニストのような作用剤と同時投与することであ る。免疫系の成分による腫瘍細胞の死滅及び腫瘍細胞の転移の予防と抑制におい て予想外に強化された効果が観察される。

背景技術 ヒスタミンが一イシ仁と」！す（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で多様な免疫エフェクター 機構を抑制することが判明している。ヒスタミンのこの性質はＨ２−受容体に関 係する。この効果は直接又は間接的に仲介される効果として文献に述べられてい る。直接効果は免疫担当細胞のＣＡＭＰ−仲介抑制によって及ぼされる０間接効 果はサプレッサーＴ細胞によるヒスタミン誘導抑制蛋白質の形成によって仲介さ れる［ビール、ディ、ジェイ９等、アドブ、イムツル、３５：２０９（１９８４ ）参照］。

ヒスタミンが免疫エフェクター機構に抑制シグナルを提供するという考えは他の 種類の研究の背景をもなしている。１例はシメチジン及び他のＨ３−受容体阻害 体の単独の又は他の抗新生物形成剤と組み合わせた可能な抗新生物形成効果の試 験である。しがし、薩歯頚及びヒトにおいて実施された膿瘍形成に対するこれら の作用剤の効果に関する試験結果は矛盾している。一方では、Ｈ７−阻害体の投 与はＭ歯頚及びヒト被験者における腫瘍発生を抑制すると報告されている［例え ば、オスバンド、エム、イー、等、ランセット１　（８２２１）：６３６　（１ ９８１）を参照のこと］、他方では、他の研究が同じ処置が腫瘍増殖を強化し、 腫瘍を誘発さえすることを報告している［例えば、パル九ビービー、等、オンコ ロジー４ｏ：４３　（１９８３）参照コ。

ヒスタミンは幾種類かの腫瘍の増殖と発生を強化するのではなく抑制することも 判明している［例えば、プルチン、シー等、カンサーレット、１２：１９５　（ １９８１）参照］、ヒスタミンの抗腫瘍効果の機構は未知であるが、Ｈ１受容体 活性に寄与している［例えば、レスビナクツ。ジー、等、プル、ジエイ、カンサ ー５０二５４５（１９８４）参照］、この場合にも、否定的データがこの領域に 同様に存在する０例えば、ヒスタミンは薔歯頚における腫瘍増殖を促進すること が報告されている［ノルドルンド、ジェイ、ジエイ。

等、ジエイ、インベスト、デルマトール８１：２８（１９８３）コ。

インターロイキン−２（ＩＬ−２）は抗原に反応したＴ細胞の膨張に重要な役割 を果たすとされているリンホカインである［スミス。

ケイ、二石、サイｚンス２４０：１１６９　（１９８８）］、ＩＬ−２は薩歯頚 に抗腫瘍効果を及ぼすことが判明している［例えば、ロッツェ、エム、ティ、等 、「インターロイキン２」ケイ、エイ、スミス編集、アカデミツク　プレス社カ ルフオニア州すンジエゴ、２３７頁（１９８８）；ローゼンベルグ、ニス１、ア ン、サージエリ−２０８：１２１　（１９８８）参照］、ＩＬ−２は種々の癌を 有する患者に確立された腫瘍の部分的な緩解をもたらすことも判明している［ロ ーゼンペルグ、ニス、エイ０、アン、サージエリ−２ｏ８：１２１　（１９８８ ）参照コ、ＩＬ−２の抗腫瘍効果は、ＩＬ−２と共にインビトロで培養し、続い て患者に再注入した外因性リンパ球と共に、この化合物を投与する場合には強化 される（リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）ＩＩ胞）「ローゼンベルグ、ニス 、エイ１、アン、サージエリ−２０８：１２１　（１９８８）参照コ、この効果 は１歯類とヒトの両方に見られる。ヒトの抗癌試験に用いる場合には、ＩＬ−２ は通常腫瘍を有するヒト被験者に非常に高い用量で投与され、腎ｇＩＩＩＩｌ害 、貧血、血小板数減少及び心肺効果を含む、重要な副作用を誘発することが報告 されている。これらの試験の幾つがでは、Ｈ２−受容体アンタゴニストのアンタ ゴニストがＩＬ−２誘導消化不良と吐き気を防止するために用いられている（ロ ーゼンペルグ、上記文献）。

新生物形成並びに転移に対する宿主の防御に、ＮＫ細胞が重要な役割を果すと考 えられる［ハンナ、エヌ９、サー、シント、パドル。

レス、２：６８　（１９８３）；ハンナ、エヌ３、エヌ、バイオチム。

バイオフイス。アクタ７８０：２１３　（１９８５）］、次に、ＮＫ細胞の活性 化が腫瘍細胞に対する宿主の抵抗力を高めることが公知である〔例えば、ロッツ エ、エム、ティ、等、上記文献参照］。

本発明の時点において公知であるヒトＮＫ細胞の調節に対するヒスタミン及び工 Ｌ−２の個々のヱ之上上旦（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）効果を次に述べる。

（１）ヒスタミンはＨ２−受容体を介したヒトＮＫ細胞の細胞毒性（ＮＫＣＣ） を増大させる。

ヒスタミンは、１０−〜１０−１Ｍの濃度において、ヒト単核細胞（ＭＮＣ）の に５６２白血病細胞に対するＮＫＣＣを強度に増大させることが判明している。

この効果は、用いるニフェクター細胞が非分割ＭＮＣ又は、バーコル（Ｐｅｒｃ ｏｌｌ）密度勾配遠心分離による人頭粒状リンパ球（ＬＧＬ）強化細胞である時 には、認められる。ヒスタミンに対するＮＫ増強反応は同様な効能及び効力を有 するＨ、−受容体アゴニスト　シマブリットによっても模倣される。

シマブリットの２種の構造類似体、ツルーシマブリットとＮ−メチル−シマブリ ットは、両者ともＨ８−受容体に対する活性を有さず、同じ試験条件下で無効で あることが実証されている。ヒスタミンとシマブリットのＮＫ増強効果はＨ８− 受容体　ラニチジンとシメチジンによって完全に拮抗されるべきであった。ヒス タミンのＮＫ増強効果は単球の存在を必要とすることが判明した。単球が不存在 である場合には、ヒスタミンは上記ヒスタミン濃度において効果を全く有さない か又は弱く抑制されたＮＫＣＣを有した［ヘルストランド、ケイ、等、ジェイ、 イムツール、１３７：６５６　（１９８６）］（２）ヒスタミンはＴ細胞を介し てＮＫ細胞活性を抑制する。

単球の存在下でヒスタミンによって誘導される上記ＮＫ細胞活性化とは対照的に 、ヒスタミンはＴリンパ球の存在下ではに５６２に対するＮＫＣＣを抑制すると も報告されている。従って、ヒスタミン（ｌ　Ｏ−’　〜１０−”Ｍ）によるヒ トＴ細胞のＺント玉旦（ｉ　ｎ　ｖ　１ｔｒｏ）処置は、可溶性因子、ＮＫ細胞 の細胞毒性を抑制するヒスタミン誘導可溶性サブッレサー因子（ＨＩ　Ｓ　Ｓ　 Ｆ）の産生を誘導する。ＮＫ細胞は単独ではＨＩＳＳＦを産生しない、ヒスタミ ンによって誘導されるＨＩＳＳＦの産生はシメチジンによって阻害されるが、Ｈ ２−受容体アンタゴニストによっては阻害されない、ＨＩＳＳＦによるＮＫ細胞 の細胞毒性の抑制は工Ｌ−２（６，４〜６４Ｕ／ｍｌ）又はインターフェロン− α（５０００／ｍｌ）の添加によって低下する［ナイアー、エム、ビー、エフ９ 等、ジェイ、イムツール。

１３６　：　２４５６　（１９８６）］　、　さらに、ＮＫ！１ｍ関連（ｌｌａ ｌ性に対するヒスタミンのＴ細胞仲介抑制効果はＩ　Ｌ−２の存在下でより顕著 である［ウェルト、ニス、等、ブロク、アンヌ、ミート。

アム、ツク、クリン、オンコル、７：Ａ６３２　（１９８８）コ。

（３）ＩＬ−２によるＮＫＩＩ胞の細胞毒性の強化。

ＩＬ−２は広い濃度範囲にわたって不ンど上２（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）において単 離ヒトＮＫ細胞の細胞毒性を強化する。この効果はＩＬ−２のナチェラル形又は 組換え体形の両方に関して述べられている［デムブセイ、アール、エイ、等、ジ エイ、イムツール、１２９：２５０４　（１９８２）；フィリップス、ジエイ、 エッチ、等、ジェイ、イクスブ、メト、１７０：２９１　（１９８９）、ＩＬ− ２のＮＫ強化効果は細胞のＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）、ヒトＮＫ細胞に表現 されるｐ７５　（ＩＬ−２Ｒα）に関係する［シーゲル、ジェイ、ビー１、サイ エンス、２３８ニア５　（１９８７）：フィリップス、ジェイ、エッチ、等、上 記文献］。マウスからのＮＫ細胞の消耗がＩＬ−２処置によって誘導される抗腫 瘍効果を除去すると報告されているので、ＮＫ細胞に対する工Ｌ−２の効果はこ の化合物によって誘導される抗腫瘍効果に関係する［ロッツエ、エム、ティ。

等、上記文献］。

ヒト集団における癌の高い発生率と既存の種々な療法によって現在得られている せいぜい部分的な成功とを考慮すると、ヒトにおける腫瘍治療方法をさらに改良 する必要性が佐然として存在する。

ｌ亜し！ｊ 本発明は、腫瘍増殖と悪性腫瘍細胞の転移形成とを抑制するための製剤と系であ って、Ｉ　Ｌ−２を含む第１組成物と、ヒスタミン、Ｈ２−受容体活性を有する その類似体、内因性ヒスタミン放出製剤及びＨ２−受容体アゴニストから成る群 から選択される作用剤を含む第２組成物とを含み、前記第１組成物と第２組成物 が、腫瘍と悪性腫瘍の転移との処１のために充分な量で、製剤中で混合されるか 又は別々の投与量で投与される製剤と系に関する。

下記の詳細な説明を添付図面に開運して考慮するならば本発明はより良く理解さ れるので、本発明と本発明に付随する多くの利点はより完全に容易に評価される であろう。

唯一つの図面は雄マウスの種々な処置によって発生したＢＩ３黒色腫細胞の肺転 移巣の数を示すヒストグラムである。処置はビヒクル（Ｃ１対照）、ヒスタミン ２５ｍｇ／ｋｇ　（ｈ）、ヒト組換え体ＩＬ−２６Ｘ１０３Ｕ／ｋｇ　（ＩＬ） 　、ヒスタミン２５　ｍ　ｇ　ｌ　ｋｇ＋ヒト組換え体ＩＬ−２６Ｘ１０３Ｕ／ ｋｇ　（ｈ＋ＩＬ）、ラニチジン２５ｍｇ　（ｒ）　、ヒト組換え体ＩＬ−２６ Ｘ１０３Ｕ／ｋｇ＋ラニチジン２５ｍｇ　（ｒ＋ＩＬ）によって実施した。組成 物を生後４〜６週間の雄スイス　アルピノ　マウスに注入し、２４時−間後に、 １．５Ｘ１０’Ｂ１６黒色腫細胞をそのマウスに静脈注射した。ビヒクル、ヒス タミン、ＩＬ−２、ラニチジン、ヒスタミン＋ＩＬ−２、及びラニチジン＋ＩＬ −２による処置を腫瘍接種の１週間後に繰り返した。２１時間後に動物を殺して 、肺転移巣（ＬＭＦ）を監視した９色抜きバーは１処置にっき１０動物から算出 した肺表面上のＬＭＦの平均数を表す、２種類の実験において同じような結果が 得られた。充実パーは各処置群の動物の肺重量を示す、肺重量はＬＭＦ数に相関 した０図中に見られるＡ、ヒスタミン＋ＩＬ−２で処置した動物の肺重量は正常 な、腫瘍を含まない肺の重量に等しかった。

本発明の他の目的、利益及び特徴は以下の考察がら当業者に明らかになると思わ れる。

い 本発明は、下記の予想外のヱン旦上ｆｉ（ｉｎ　ＶｉｔｒＯ）研究結果： （ｉ）ＩＬ−２は単球の存在下でＮＫＣＣを抑制することができる、及び （ｉｉ）ヒスタミンとＩＬ−２はＮＫＣＣ強化に関して相乗的に作用するから生 じたものである。

これらの研究結果が発明者を刺激して、マウス動物モデルにおける肺転移の形成 に対するヒスタミン／ＩＬ−２組合せ処置のエンビ！（ｉｎ　ｖｉｖｃ＋）効果 を分析させた。

ヒスタミン／ＩＬ−２組合せ処置は、予想外に、これらの化合物を腫瘍細胞接種 の２４時間前に及び１週間後に単回量として投与した場合に悪性腫瘍細胞の転移 を完全に予防した。同じ状況下でＩＬ−２単独もヒスタミン単独もこのような有 利な効果を有さながったので、これらの結果は予想外に良好な結果である。。動 物実験に用いるＩＬ−２投与量は癌治療に一般に用いられる量よりも実質的に低 かった。このことは、ヒスタミンによる同時処置によって生ずるＩ　Ｌ−２の抗 腫瘍効果の増強が癌治療に用いられるＩＬ−２の高用量の減少を可能にするので 、特に重要である。このような高用量工Ｌ−２処置は重要な副作用を付随する［ ローゼンベルグ、ニス、エイ０、上記文献］。

ここでは、悪性腫瘍細胞を有する患者における腫瘍増殖と悪性腫瘍細胞の転移形 成とを抑制するための製剤と系であって、ヒスタミン、Ｈ２−受容体活性を有す るその類似体、内因性ヒスタミン放出製剤及びＨ２−受容体アゴニストから成る 群がら選択される作用剤を含む第１組成物と、ＩＬ−２を含む第２組成物とを含 み、前記作用剤と前記工Ｌ−２が、腫瘍と悪性腫瘍細胞の転移との処置のために 充分な量で、製剤中で混合されるが又は別々の投与量で投与される製剤と系を提 供する。

本発明への使用に適したＨ２−受容体活性を有するヒスタミン類似体は技術上公 知であり、ここで述べる必要はない０例えば、これらの類似体はヒスタミンの化 学構造に類似するが、それらのヒスタミン様活性、特にＨｌ−受容体活性に不利 に干渉しない部分の添加によって修飾された化学構造を有しつる０本発明への使 用に適したＨ２−受容体アゴニストの例はシマブリットのような化合物であるが 、Ｎ−メチル−シマブリット又はツルーシマブリットではない。

ここでの使用に適した内因性ヒスタミン放出製剤は技術上公知である。内因性ヒ スタミンを放出しうる製剤の例は例えば工Ｌ〜３又はアレゲン（ａｌｌｅｇｅｎ ）のような他のリンホカインを含む製剤である。しかし、他の公知の製剤も適切 である。

ＩＬ−２と、例えばヒスタミン、その類似体、内因性ヒスタミン放出製剤及びＨ ２−受容体アゴニストのような化合物とは別々に、又は同一組成物として投与す ることができる。投与はこれらの化合物及び製剤に対して技術上公知である経路 によって実施される０例えば、これらは局部注射もしくは全身注射によって、又 は注入によって、技術上公知であるように投与することができる。しかし、他の 投与手段も適切である。

本発明の化合物は腹腔内経路及び他の非経口経路によっても投与することができ る。遊離酸又は薬剤学的に受容される塩としての活性化合物の溶液を例えばヒド ロキシプロピルセルロースのような界面活性剤を含むもしくは含まない水中の溶 液として投与することができる０例えばグリセロール、液体ポリエチレングリコ ール及びこれらの混合物並びに油を用いた分散液のような分散液も考えられる。

製剤に殺菌薬を加えることもできる。注射可能な製剤は、使用前に無菌環境で希 釈又は懸濁される無菌水溶液又は分散液及び粉末を含むことができる。Ｎえば水 、エタノール　ポリオール、植物油等を含む、溶媒又は分散液媒質のようなキャ リヤーをも加えることができる０組成物の適当な流動性を維持するために、例え ばレシチン及び界面活性剤のようなコーチングを用いることもできる０例えば砂 糖又は塩化ナトリウムのような等張化剤並びに、例えばモノステアリン酸アルミ ニウム及びゼラチンのような、活性化合物の吸収を遅らせるための製品も加える ことができる。無菌の注射可能な溶液は技術上公知であるように製造して、貯蔵 及び／又は投与の前に濾過する。無菌粉末類はこれらを含む溶液又は懸濁液から 真空乾燥又は凍結乾燥することができる。

薬剤学的組成物に加える物質は全て薬剤学的に受容されるものであるべきであり 、使用量において実質的に非毒性でなければならない、持続放出製剤と配合物も 本発明の範囲内に入る。

この特許に関連して用いられる薬剤学的に受容されるキャリヤーは、技術上公知 であるような、如何なる及び全ての溶媒、分散液媒質、コーチング、殺菌薬、等 張化剤、吸収遅延剤等を含む、全ての製剤は均一な薬用量及び容易な投与のため の薬用量単位形で製造される。各薬用量単位形は必要量の薬剤学的キャリヤーと 共に、好ましい治療効果を生ずるように算出された所定量の活性成分を含む。

典型的に、ヒスタミン、その類似体、内因性ヒスタミン放出製剤及びＨ７−受容 体アゴニストを含む作用剤は、約０．１〜１０ｍｇ／Ｂ、好ましくは約０．５〜 ８ｍｇ７日、より好ましくは約１〜５ｍｇ１日の量で投与される。しがし、開業 医によって調整されるような、他の量もＩＬ−２と共に投与することができる。

実施例中では化合物類を単回量として投与するが、抗１瘍療法のために化合物を 長期間投与しうることは理解される。典型的には、処置は約１週間までの期間施 されるが、１力月間より長く施されることさえある。場合によっては、抗腫瘍処 置の期間後に、処置を中断して、その後にもう１度再開することができる。

ＩＬ−２は約１，０００〜３００．０ＯＯＵ／ｋｇ／日、好ましくは約３，００ ０〜１００，０ＯＯＵ／ｋｇ／Ｂ、ヨリ好ましくは約５，０００〜２０，０ＯＯ Ｕ／ｋｇ／Ｂ（７）量で、又は技術上公知の他のやり方で投与される。

１日量は１回量として投与することができる、又は不利な効果が観察されるなら ば、数回量に分割することができる。

この方法の好ましい１実施態様では、ヒスタミン、Ｈ２−受容体活性を有するそ の類似体、内因性ヒスタミン放出製剤又はＨ２−受容体アゴニスト及びＩＬ−２ を同じ日に投与する０本発明の方法のさらにより好ましい実施態様は作用剤がヒ スタミンであり、ヒスタミンがＩ　Ｌ−２と同じ組成物として投与される実施態 様である。

本発明のもう一つの態様では、ＩＬ−２を含む第１組成物とヒスタミン、Ｈよ一 受容体活性を有するその類似体、内因性ヒスタミン放出製剤及びＨ７−受容体ア ゴニストから成る群がら選択される作用剤を含む第２組成物とを被験者に同時投 与することを含み、作用剤とＩＬ−２とが所望の効果を得るために有効な量と時 間で投与される、患者におけるＩＬ−２の抗腫瘍細胞効果を高める方法をここで は提供する。

先行技術方法の場合と同様に、作用剤とＩＬ−２を別々に投与することも、又は 単一組成物として投与することも可能である。典型的には、作用剤は約０．１〜 １０ｍｇ／日、好ましくは約０．５〜８ｍｇ／日、　より好ましくは約１〜５　 ｍ　ｇ　７日の量で、約１週間〜１カ月間、場合によっては２力月間より長い期 間投与される。ＩＬ　−２ハ約１，０００〜３００，０ＯＯＵ／ｋｇ／Ｅｌ、好 まシくハ約３，０００〜１００，０ＯＯＵ／ｋｇ／Ｂ、より好ましくは約５゜０ ００〜２０．０ＯＯＵ／ｋｇ／日の量で、約１週間〜１カ月間、場合によっては ２力月間より長い期間投与される。２化合物による処置をある期間、中断して、 その後上記のように再開することができる。他の処置法及び量も使用可能である 。

悪性腫瘍を有する患者を工Ｌ−２含有組成物によって治療する公知方法の改良で あって、ヒスタミン、Ｈｌ−受容体活性を有するその類似体、内因性ヒスタミン 放出製剤及びＨ２−受容体アゴニストから成る群から選択される作用剤を含む組 成物を患者に同時投与することを含み、作用剤とＩＬ−２とがＩＬ−２の転移防 止効果を強化するために有効な量と時間で投与されることがら成る改良をここで は提供する。

作用剤は上記のような量又は当業者が決定できるような量で投与される。同様に 、ＩＬ−２も技術上公知であるような量（ここで指示する量よりも多い量）、こ こに述べるような量又は特定の用途に対して適当であると当業者が決定するよう な量で投与される。同様に、ＩＬ−２は特定の種須の腫瘍に対して技術上公知で あるような期間、又は約１週間〜２カ月間、多くの場合にはさらに長い期間投与 される。

この方法の特に好ましい実施態様では、作用剤とＩＬ−２とを、それらの相互作 用を大きく強化するために、同じ日に投与する。

ここでは、悪性腫瘍細胞を有する患者における腫瘍増殖と悪性腫瘍細胞の転移と をＩ　Ｌ−２含有組成物によって抑制する方法の改良であって、ヒスタミン、Ｈ ２−受容体活性を有するその類似体、内因性ヒスタミン放出製剤及びＨ２−受容 体アゴニストから成る群から選択される作用剤を含む組成物を患者に同時投与す ることを含み、作用剤とＩＬ−２とがＩＬ−２の抗腫瘍効果を高め、細胞の転移 を防止するために有効な量と時間で投与されることがら成る改良を提供する。

典型的に、作用剤は約０．１〜１０ｍｇ／日、好ましくは約０゜５〜８ｍｇ／日 、より好ましくは約１〜５ｒｎｇ／日の量で投与される。ＩＬ−２は技術上公知 であるように又は約１．○ｏＯ〜３００゜０００　Ｕ／ｋ　ｇ／Ｅ、好ましくは 約３，０００〜１００，０ＯＯＵ／ｋｇ／日、より好ましくは約５，０００〜２ ０．０ＯＯＵ／ｋｇ／日の量で投与される。２化合物は別々に又は上記のように 同じ組成物として投与することができる。

好ましい１実施態様では、作用剤とＩ　Ｌ−２とを同じ日に、単一組成物として 投与する。この療法は約１週間までの期間、又は約４週間より長い期間にわたっ てさえも続けることができる。上記治療期間外の期間も適用可能である。

本発明の方法は単独で、又は開業医が適当と見なした場合には他の抗癌療法と組 み合わせて使用することもできる。

本発明を一般的に説明したが、以下に記載する特定の実施例を参照することによ って本発明がさらにより良く理解されると考えられる、これらの実施例は説明の ためのみのものであり、特に指示しないかぎり、本発明又はその実施例の限定を 意図するものではない。

！旅！ 実施例１：ＩＬ−２とヒスタミンによる４ン旦玉旦（ｉｎｖｉｔｒｏ）試験 この実施例は、ヒト単核細胞（ＭＭＣ）のＮＫ−細胞細胞毒性（ＮＫＣＣ）にお けるヒスタミン、ラニチジン及び組換え体ＩＬ−２（２５Ｕ／ｍｌ）の単独の又 は組合せの効果に間する試験を述べる。

ＭＮＣは健康な血液提供者の末梢静脈血から入手し、フィコール−ハイバグ（Ｆ 　ｉ　ｃｏ　１１−Ｈｙｐａｇ）遠心分離によって回収し、続いて既述したパー コール密度勾配分画を実施した［ヘルストランド、ケイ、等、ジェイ、イムツー ル、１３７：６５６（１９８６）コ。

実験に用いた低密度パーコール画分８は約３０％の単球を含み、大顆粒状リンパ 球（ＬＧＬ）を多く含有した。

標的細胞としてに５６２赤白血病細胞、ダウン（Ｄａｕｄｉ）Ｂ−リンパ芽球様 細胞、モルト（Ｍｏ　ｌ　ｔ）−４Ｔｉ［［Ｉ胞及びチャック（Ｃｈａｎｇ）肝 細胞（全て悪性細胞）を用いた”Ｃｒ放出ミクロ細胞毒性分析においてＮＫＣＣ が測定された。

１５：１又は３０：１のＭＮＣ：ＷＡ的細胞比での比”Ｃｒ放出として６通りに ＮＫＣＣを測定した。抗生物質と１０％ヒトＡＢ十血清とを含むイスコブ（Ｉｓ ｃｏｙｅ）媒質中で分析を実施した。ヒスタミン、Ｉ　Ｌ−２及びラニチジン又 はこれらの組合せ（下記表を参照）を４時間”Ｃｒ放出分析の開始時に加えた。

対照細胞にはビヒクルのみを加えた。

得られた結果は下記の通りであった。　ヒスタミン（１０−’〜１０−”Ｍ）は 全ての種類の腫瘍細胞に対するＮＫ細胞毒性を単球の存在下で増強した。この効 果は等モル濃度のラニチジンによって完全に阻害された。ラニチジン単独ではＮ ＫＣＣに影響を与えなかった。単球の不存在下で、すなわちベトリ皿上でのＭＮ Ｃの１時間インキュベーションによる又はカルボニル鉄処理によるＭＮＣの除去 後に、ヒスタミン、ラニチジン、又はヒスタミン＋ラニチジンは如何なる被験濃 度においても効果を示さなかった。

Ｉ　Ｌ−２（５〜５０Ｕ／ｍｌ）　嵐独は、単球の存在下で、予想外に無効であ り、ＮＫＣＣを抑制さえした。単球後に、ＩＬ−２は岡じ濃度範囲にわたってＮ ＫＣＣを用量佐存的に増強した。ヒスタミン、ラニチジン、又はヒスタミン＋ラ ニチジンは、単球減損ＭＮＣにおいてＮＫＣＣのＩＬ−２誘導強化に影響を与え なかった。しかし、ヒスタミン＋ＩＬ−２は単球の存在下で全ての被験腫瘍細胞 標的に対してＮＫＣＣの強い相乗的増強を示した。この相乗的効果はラニチジン の存在によって完全に阻害された。代表的な実験結果を下表に示す。

表：ヒスタミンとＩＬ−２による複合治療によるヒトＮＫＣＣの相乗的活性化の 実証 各腫瘍標的細胞に対するＮＫＣＣ（！！！胞溶解％±ｓｅｍ）置’　Ｋ５６２　 ダウン　チヤング　モルト−４媒質　２１．６±１．２　３．９土１．１　１７ ．４±１．１　１１．８±０．５Ｈｉｓｔ（１０−’Ｍ）　３５．９±０．９　 １２．８±１．０　３２．１±２．０　４３．２土１．５ＩＬ−２（２５Ｕ／鳳 １）　１２．０±０．７　１．４±０．５　９．８±０．８　５．２±０．４Ｒ ａｎ（１０−’Ｍ）　２０．８±１．９　４．３±０．８　１９．７±１．３　 １３．０±１．０Ｈｉｓｔ＋ＩＬ−２５５，４±１．０　４１．４±０．９　５ ９．７±０．６　６９．４±３．０）ｌｉｓｔ＋Ｒａｎ　２０．１±１．４　５ ．０±１．４　１９．４±１．０　１３．Ｏ＋１．ＩＲａｎ＋ＩＬ−２１１，３ ±１．３　１．９±０．３　１Ｑ、４±０．９　８．４±０．７）ｌｉｓｔ＋Ｒ ａｎ＋ＩＬ−２１３，４±２．０　２．Ｑ±０．７　１０．０±０．５　８．０ ±１．１１　エフェクターＭＮＣは末梢血からフィコール−ハイバーク及びパー コール密度勾配遠心分離によって回収した。単球２７％を含む低密度パーコール 画分最終エフェクタ一対標的細胞比１５：１（Ｋ５６２チャック、及びモルト− ４）又は３０：１　（ダウン）において用いた。

２　Ｈｉｓｔ＝ヒスタミン、ＩＬ−２＝インターロイキン−２Ｒａｎ＝ラニチジ ン 実施例２：マウス腫瘍動物モデルにおけるヒスタミン、Ｉ　Ｌ−２、ラニチジン 及びこれら化合物の組合せの抗腫瘍効果のヱン１Ｊｉ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）試験モ デルマウス腫瘍動物モデルにおけるヒスタミン又はＩＬ−２単独によって及びこ れらの化合物の組合わせによって、１２旦崖（ｉｎｖｉｖＯ）試験を実施した。

ヒスタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）、ラニチジン（２５ｍｇ／ｋｇ）及び［トＭＩＩ ｕ体ＩＬ−２（６，００００／ｋｇ）　を単回ｌとして、生後４〜６週間の雄ス イス　アルピノマウス（２０ｇ）に、Ｂ１６マウス黒色腫細胞の静脈内接種（１ ５０，０００細胞／マウス）の２４時間前及び１週間後に投与した。各処置群は １ｏ動物を含むものであった。処置の２４時間後に、ＮＫＭ胞感受性Ｂ１６マウ ス黒色腫細胞（１５０，０００細胞／マウス）を静脈内に接種した。対照試験は 各薬物のビヒクルによって処理した動物によって実施した。

肺表面の肺転移巣（ＬＭＦ）を２１日後に肉眼によって調べた。

ＬＭＦを１０倍拡大顕微鏡を用いて、偏らない観察者によって計数した。肺表面 の目視可能な全てのＬＭＦを計数した。

マウス殺害直後に計重量を測定したところ、計重量はＬＭＦ数に実際にＩ線内に 相関した。

実施例３：実施例２において実施した試験の結果実施例２に示した治療処置注下 で、ヒスタミン単独はＬＭＦをがなり効果的に減することが発見された。ヒスタ ミン２５ｍｇ／ｋｇは大体ＬＭＦの約５０％減少を生じたが、ヒスタミン２５０ ｍｇ／ｋｇはＬ〜ＩＦの約８ｏ〜９０％減少を生じた。

この効果は同じ効力を有するシマブリットによって模倣された。

ラニチジンはＬＭＦを約１００％増強した。

Ｉ　Ｌ−２単独はＬＭＦを約４０〜７０％減じた。

ヒスタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）＋工Ｌ−２による複合処置はＬＭＦを完全に防止 した（図を参照）、ヒスタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）＋ＩＬ−２（６Ｘ１０’Ｕ／ ｋｇ）によって処置した動物（ｎ＝１Ｏ）のいずれも目視可能な腫瘍を示さなか った。ヒスタミン（２５ｍｇ／ｋｇ）又はＩＬ−２（６Ｘ１０’Ｕ／ｋｇ）単独 によって処置した動物（ｎ＝１０）のいずれも目視可能な腫瘍を完全に有さなか った。Ｉ　Ｌ−２はラニチジンの存在下では実際に無効であった。

ヒスタミン＋ＩＬ−２を投与された動物の計重量は腫瘍細胞を接種されなかった マウスからの計重量に等しかった。ヒスタミン、ＩＬ−２又はヒスタミン＋ＩＬ −２は腫瘍細胞を接種されなかった動物の計重量に影響を与えないことが判明し た。

ＦＺＧ、二 国際調査報告 国際調査報告 ＰＣＴ／ＳＥ　９０１００５９９ ■ イ ■ □ □ １　′ Ｉ 漬 □ □

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．腫瘍殖及び悪性腫瘍細胞の転移を抑制する薬剤学的製剤及び系であって、ヒ スタミン、Ｈ２−受容体活性を有するその類似体、内因性ヒスタミン放出製剤及 びＨ２−受容体アゴニストから成る群から選択される作用剤を含む第１組成物と 、ＩＬ−２を含む第２組成物とを含み、前記第１組成物と前記第２組成物とが、 腫瘍と悪性腫瘍細胞の転移との処置のために充分な量で、製剤中で混合されるか 又は別々の投与量で投与されることを特徴とする薬剤学的製剤及び系。
2. ２．前記作用剤の１日量か０．１〜１０ｍｇの範囲内、好ましくは０．５〜８ｍ ｇの範囲内、より好ましくは１〜５ｍｇの範囲内であることを特徴とする請求項 １記載の薬剤学的製剤及び系。
3. ３．ＩＬ−２の１日量が１，０００〜３００，０００Ｕ／ｋｇの範囲内、好まし くは３，０００〜１００，０００Ｕ／ｋｇの範囲内、より好ましくは５，０００ 〜２０，０００Ｕ／ｋｇの範囲内であることを特徴とする請求項１又は２に記載 の薬剤学的製剤及び系。
4. ４．作用剤がヒスタミンであることを特徴とする請求項１又は２に記載の薬剤学 的製剤及び系。
5. ５．例えば溶媒、分散液媒質、コーチング、殺菌薬、等張化剤、吸収遅延剤等の ような薬剤学的に受容されるキャリヤーの１種以上を含むことを特徴とする請求 項１〜４のいずれかに記載の薬剤学的製剤及び系。
6. ６．ヒスタミン、Ｈ２−受容体活性を有するその類似体、内因性ヒスタミン放出 製剤及びＨ２−受容体アゴニストから成る群から選択される作用剤を含む第１組 成物及びＩＬ−２を含む第２組成物であって、腫瘍と悪性腫瘍細胞の転移との処 置のために充分な量で、製剤中で混合されるか又は別々の投与量で投与される第 １組成物及び第２組成物の腫瘍増殖及び悪性腫瘍細胞の転移を抑制する薬剤学的 製剤及び系の製造への使用。
7. ７．前記作用剤の１日量か０．１〜１０ｍｇの範囲内、好ましくは０．５〜８ｍ ｇの範囲内、より好ましくは１〜５ｍｇの範囲内であることを特徴とする請求項 ６記載の使用。
8. ８．ＩＬ−２の１日量か１，０００〜３００，０００Ｕ／ｋｇの範囲内、好まし くは３，０００〜１００，０００Ｕ／ｋｇの範囲内、より好ましくは５，０００ 〜２０，０００Ｕ／ｋｇの範囲内であることを特徴とする請求項６又は７に記載 の使用。
9. ９．作用剤かヒスタミンであることを特徴とする請求項１記載の使用。
10. １０．例えば溶媒、分散液媒質、コーチング、殺菌薬、等張化剤、吸収遅延剤等 のような薬剤学的に受容されるキャリヤーの１種以上を含むことを特徴とする請 求項６〜９のいずれかに記載の使用。