JPH05506095A - 免疫学的検定を行うための装置と方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫学的検定を行うための装置と方法 本発明は水性試料における免疫反応性分析物の介在を検出する免疫学的検定法に 関し、特に内蔵型の、単段階の固相帯片形態の検定装置と方法とに関する。

従来の技術 特に免疫反応性物質の闇の反応に基く検定が、例えば臨床医学、法医学、環境検 査、食品品質検査、薬品試験および試料中の免疫反応分析物の介在を検出するた めのその他の関連領域のような分野において広く使用されて非放射性標準即ちア ーヤの開発により、実験室設備や診療所や、さらには使用者の家庭のような遠隔 場所での免疫学的検定による診断法の使用を促進してきた。診療所においては、 免疫学的方法は患者が診療所に居る闇に実行でき、そのため−回の診察の間遅滞 なく検診が出来かつ処置を施すことのできる迅速で、単純な検定を提供する上で 有用である。そのような簡単な検定法が無ければ、医師が初回の来院中に患者か ら試料を採集し、その試料を診療所の試験室で分析を行い、その結果が後刻試験 室から医師まで戻されるということか度々必要であった。一方患者の方は家へ戻 され、適当な処置および／または投薬を受けるよう医師のところへ２回目の再診 をする必要があった。そのような検定の遅れは非効率的で、かつ不適当であり、 ある場合には生命を脅かすことが明らかである。

家庭での検査は、患者が自分の家でのプライバシイの中で検査を促進する上で望 ましいものとなった。そのよＶ　うな検査の結果が、例えば、医師を訪問するこ との必要性の是否を指示することができる。「家庭」での有用な検査の市場の例 としては妊娠、排卵、連Ｍ球菌感染および、例えば尿、唾液、喉液、うみ、膣液 、血液あるいはその他の適当な試料を分析することにより検出可能のその他の感 染の検査を含む。

遠隔地での検査に対しては、達成しつる適当な感度と特異性とを想定すると、実 用的な検定手順に対して少なくとも３つの要件がある。これらの望ましい要素の １つは、短かければ短いほど良いのであるが、許容短時間で検定を実行せねばな らない速度である。検定要素か長時間にわたって冷凍したり、あるいは特別の処 理を要することなく安定すべきであるという点で安定性も望ましい特徴である。

最後に商業的観点からは、試験は使用に便利で、できる限り単純で、最小の器具 を要するか、あるいは器具が何ら不要で、不正確な結果をもたらすミスや劣悪な 性能を排除することが望ましい。

遠隔地での検査のための検査装置の開発において遭遇した困難の１つは、効率的 で、比較的安価で、間違えようのない検査方法を促進するための実用的な予めパ ッケージ化した使い捨て装置を提供することである。このことは、製作か安価に つき、当該装置の寿命に対して適した貯蔵寿命を有し、扱い中汚染から保護され ており、使用に適当なときが来ると簡単かつ便利に使用でき、たとえ不馴れの人 であっても便利、かつ安全に使用しつる装置を必要とすることは勿論である。

米国特許第４．８６８，１０８号に記載の装置はこれらの問題のあるものを指向 している。しかしながら、この装置は、基板の介在に左右され、かつ不安定であ ることが多く、貯蔵寿命に悪影響を与える酵素発色剤を利用する検査を組み入れ ている。前記特許第４，８６８．１０８号は本発明と共通に譲渡され、その開示 全体を参考のため本明細書に特に組み入れである。

別の公知の装置は英国特ＩＮＧ、Ｂ２２０４３９８Ａ号に開示されている。この 装置はコロイド状ゴールド即ち「ダイレクト」ラベルと称される着色粒体を使用 している。しかしながら、この装置においては、非襟識反応成分は観察ゾーンに おいて永久に固定されている。このことが分析物の検出メカニズムの効率に影響 する。

これらの従来技術による装置は貯蔵寿命特性か優れている単純で、安価で、効率 的で、間違えようがなく、予めパッケージ化され、一般式の装置に対する要請を 満足させないままとしている。

発明の要約 本発明は貯蔵寿命特性の良好な、簡素化され、安価で、効率的て、間違えようが なく、予めパッケージ化された一段式の装置を提供する。さらに、本発明によれ ば、検出反応は全ての成分を運動自在状態にしておいて液相において発生する。

このため、本発明の効率と迅速性とを向上させる。さらに本発明によれば、水性 試料における免疫学的反応性分析物の検出を行う方法か提供される。

本発明の一局面においては、第１の免疫学的反応性物質と検出可能種との結合生 成物からなる水分散性の標識成分を提供し、捕獲可能種と第２の免疫学的反応性 物質との結合生成物からなる水分散性の捕獲可能成分を提供し、多孔性の担体材 料において検出ゾーンで局在化され、捕獲可能の種を含むことにより検出ゾーン において生成物を捕獲し、かつ収集する反応生成物と相互作用しつる捕獲物質か らなる捕獲成分を提供し、標識および捕獲可能成分を、分析物が試料と前記成分 とを含有する液状反応混合物を形成するように分析すべき試料からなる水溶液と 接触させ、前記第１と第２の物質が同じか、あるいは相違し、前記分析物の介在 の機能として直接あるいは間接的に結合でき、そのため、捕獲可能生成物成分を 含有する分散した、拡散可能反応生成物を形成し、液状反応混合物を検出ゾーン において捕獲成分と接触させることにより捕獲可能成分を含有した反応生成物が 捕獲物質と相互作用することにより検出ゾーンにおいて収集され、前記ゾーンで 固定した反応生成物における検出可能の種の介在を評価することにより試料中で 分析物を検出する段階を含む。

本発明の特に好適な局面によれば、標識成分と捕獲可能要素とはそれぞれ初期は 乾燥しており、再構成可能の、水分散性で、かつ拡散性でよい。本発明のこの局 面によれば、前記成分は、同じ成分が分析物に対して分析すべき試料を含む水溶 液と接触すると再構成される。

本発明の別の特に好適な局面によれば、標識成分と捕獲可能成分とはそれぞれ多 孔性の担体材料に含量され、液体反応混合物が拡散し、多孔性担体材料を通して 移動し、検出ゾーンにおいて反応物を捕獲要素と接触させる。

本発明のさらに別の局面においては、標識成分と捕獲可能成分とがそれぞれ、多 孔性担体材料におけるあるゾーンに含まれ、液体反応混合物が拡散し、多孔性担 体材料を通して、検出ゾーンへ移動し反応物を検出ゾーンにおいて捕獲成分と接 触させる。

本発明のさらに別の局面においては、標識成分か多孔性担体材料の細長い帯片の 第１のゾーンに含まれ、捕獲可能成分が多孔性担体材料の帯片の第２のゾーンに 含まれる。検出ゾーンはまた、多孔性担体材料の帯片にもある。本発明の好適な 局面においては、第１と第２のゾーンは前記帯片の長手方向に離隔することかで きる。さらに、検出ゾーンは前記帯片の一方端から長手方向に離隔し、第１と第 ２のゾーンは帯片の端部と検出ゾーンとの間で配置することができる。本発明の 特に好適な形態によれば、混合物を捕獲成分と接触させる段階を、前記第１と第 ２のゾーンから検出ゾーンまで帯片に沿って混合物を拡散かつ移動させることに より達成することかできる。さらに、成分を再構成する段階が、液体試料を前記 帯片の一方端に供給することにより、前記試料が前記帯片に沿って、第１と第２ のゾーンへ拡散する段階を含みうる。

本発明はまた、水性試料における免疫学的反応分析物の測定および検出過程を実 行する装置を提供する。本発明の装置は、第１の免疫学的反応物質と検出可能種 との結合生成物からなる水分散性標識成分を含む。本装置はまた、捕獲可能種と 第２の免疫学的反応物質との結合生成物からなる水分散性の捕獲可能の成分を含 む。第１と第２の物質は同じか、あるいは異なるものであり、分析物の介在の機 能として直接あるいは間接的に結合でき、そのため捕獲可能成分を含む水分散性 、拡散性の反応物を形成するものでよい。前記装置はまた、多孔性担体材料の検 出ゾーンにおいて局在化された捕獲成分を含み、捕獲成分は捕獲可能種を含有す る反応物と相互作用でき、そのため検出ゾーンにおいて生成物を捕獲し、かつ集 めることのできる捕獲物質を含む。

本発明の好適形態においては、前記装置は多孔性担体材料の細長い帯片を含みつ る。本発明のこの形態においては、標識成分は多孔性担体材料の帯片の第１ゾー ンに含まれ、捕獲可能成分は多孔性担体材料の第２のゾーンに含まれる。検出ゾ ーンはまた多孔性担体材料の帯片にも位置する。本発明のこの形態においては、 第１と第２のゾーンは帯片の長手方向に離隔され、検出ゾーンは、第１と第２の ゾーンを帯片の端部と、帯片に対して長手方向に離隔関係にある検出ゾーンとの 間に配置させ、帯片の一方端から長手方向に離隔可能である。理想的には、本装 置は前記の一方端における要素と緊密に接触している芯部材を含めばよい。

図面の簡単な説明 第１図は本発明による検定装置の概略図、第２図は第１図の線２−２に沿って視 た拡大断面図。

発明の好適実施例の詳細説明 液状試料における免疫学的反応分析物を測定かつ検出し、本発明の原理と概念と を実施した装置ｌＯか第１図に示されている。本装置１０は多孔性の、好ましく は微小孔担体材料の基本要素Ｉ２を示す。第１図に示すように、基本要素１２は 多孔性担体材料の細長い帯片の形態である。帯片１２が形成されている多孔性担 体材料は約２５ミクロン以下の孔サイズを有するべきで、典型的には孔サイズは 約５と約１０ミクロンの間でよい。帯片１２は、例えばナイロンあるいはセルロ ーズ材料のような吸水性材料から形成すればよい。本発明による、特に有用な材 料はアールストローム（Ａｈｌｓｔｒｏｍ）　Ｎｏ、３４５ペーパとして知られ る市販の材料である。この材料は清らカテ、白色で、かつ１００％セルローズか ら構成されている。好適材料は約１５８　Ｈ／ｍ２の基本重量と、約０，７ミリ の厚さと、約８０ｍｍ／分の水溶液に対する毛細管上昇特性を有している。勿論 、特定検定手順の希望する特性に応じて種々の種類の材料を用いることができる 。例えばつオツトマン（Ｗｈａｔｍａｎ）　９０３およびウオットマン３ＬＥＴ ベーパとして知られる市販の材料が本発明によれば有用であることが判明した。

芯部材１４が第１図と第２図とから判るように帯片の一方端１６において該帯片 １６に取り付けられている。

芯Ｉ４は、繊維が整合しているか、あるいは整合していない（二軸配置の）形態 のいずれかで、アメリカン　フイルトローナ社（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｆｉｌｔｒ ｏｎａ）から市販されている結合したセルローズアセテート繊維材料から形成す ればよい。芯材料１４は、分離した長方形断片１４ａ、１４ｂに分割され、次い で要素１２の両面に対して緊密に押圧されることにより、芯部材１４と帯片１２ とが緊密で毛管現象により連通接触している材料の細長いブロックから形成すれ ばよい。この目的に対して、個々の断片１４ａと１４ｂとは、一対のバンド３４ および３６を用いて、相互に、かつ帯片１２の面に対して緊密に保持することが できる。これらのバンド３４．３６はＢＡＲＬＯＫケーブルタイ（デニソンーＤ ｅｎｎｉｓｏｎの部品番号０８４２９、軍用規格３３６７−４−９）として市販 されている装置でよい。

第１図と第２図とを参照すれば、各種の方法は必ずしも尺度通りになっていない ことを指摘すべきである。オ発明の作用な形態においては、帯片１２は長さか例 えＩＪ１５０ミリで、幅か例えば９．５ミリでよい。帯片１２の厚さは０．５か ら＋、０＝りの範囲であって、約０．７ミリであることが好ましい。しかしなが ら、帯片の特定の寸法は重要でなく、種々の寸法は確実な試験結果を表わすため の速度および／またはカラー強度についての望ましい結果を達成する必要に応じ て修正すればよい。

芯部材Ｉ４は初期は長さが約５１ミリで、輻（Ｗ）が約１０．５ミリで、厚さく ｔ）が約１２．５ミリでよい。細長い芯１４は好ましくは第１図に示すように要 素１２の長さにわたって延びるように位置することか好ましい。

装置１０は帯片１２に位置した一連のゾーン１８，２０および２２を含む。ゾー ン２０は、第１の免疫学的反応物質からなる、乾燥し、再構成可能で、水分散性 で拡散性の標識成分を含有する。ゾーン２ｏにおける標識成分は第１の免疫学的 反応物質と検出可能の種との結合生成物からなることが好ましい。ゾーン１８は 、第２の免疫学的反応物質からなる乾燥し、再構成可能の水分散性で拡散性の捕 獲成分を含む。捕獲成分は検出ゾーン２２において局在化され、捕獲可能成分と 相互作用し検出ゾーンにおいて捕獲可能成分を捕獲し、がっ収集することのでき る捕獲物質からなる。このように、Ｗ獲物質はまた、捕獲可能成分と、それに結 合されたものを捕獲し、し　かつ集めることができる。

本　第１図および第２図に示す本発明の有用形態においてよ　は、ゾーン１８お よび２０は帯片１２の長手方向に離隔０　されている。しかしなから、これらの ゾーンは重ねてもＣよいことを認めるべきである。さらに、ゾーン１８，２左　 Ｏの相対位置を反転してもよい。第１図を参照すれば、０　検出ゾーン２２も帯 片１２の端部１６から長手方向に離隔され、かつゾーン１８と２０とは帯片に対 して長手方向に離隔されて端部１６とゾーン２２との間に配置されべ １　芯部材１４は端部１６からゾーン１８．２０に向かっゝ　て要素１２に沿っ て延びるように配置されている。芯１４は図示のように、芯１４の端部１４ａを ゾーン１８から約２．５ミリのところに配置させその間に空ｗＲ２４を提供する ようにしてゾーン１８に対する離隔関係で終っている。さらに、空間２６がゾー ン１８と２０との間に設けられ、空間２８がゾーン２０と２２との間に設けられ ている。最後に、空間３０がゾーン２２から帯片１２の端部３２まで延びている 。要素１２の長さに沿って測定すると、芯１４は約５１ミリの好適寸法を有し、 ゾーン１８は約２０ミリの好適寸法を有し、空間２６は約２．５ミリの好適寸法 を有し、ゾーン２８は約２．５ミリの好適寸法を育し、ゾーン２２は約２．６ミ リの好適寸法を有し、空ｒＩ！１３０は約７１．９ミリの好適寸法を有する。

ゾーン２０における標識成分の免疫学的反応物質と、ゾーン１８に含まれた捕獲 可能成分の免疫学的反応物質は同しか、あるいは異なるものでよく、本発明の唯 一の要件は、液状試料における目標の免疫学的反応分析物の介在の機能として直 接あるいは間接的に結合して、捕獲可能成分と標識成分とを含む水分散性で拡散 性反応生成物を形成できねばならぬことである。

本発明の一好適形態によれば、免疫学的反応物質かそれぞれ分析物を結合してサ ンドイッチを形成することかできる。この点に関して、前記物質は各々、目標の 抗原分析物を免疫学的に結合することのできる単クローン性抗体でよい。代替的 に、適当な特異性の適当に純粋の多クローン性の抗体を採用することができる。

そのような抗体は抗体においてそれぞれの異なる部位を結合する。

本発明の別の形態においては、免疫学的反応物質は相互に結合しつる。即ち前記 物質の一方は抗原で、他方はそれに対する抗体でよい。標識成分の免疫学的反応 物質は抗原でよく、本発明のこの形態においては、検定手順は試料における未知 の抗原分析物を検出するための拮抗的阻害手順によって決めればよい。

前述のように、標識成分は免疫学的反応物質と検出可能の種との結合生成物から なる。検出可能の種は前述の°６１２の特許に詳細に記述され、かつ特別な引例 として本明細書に含めている種類の金属合作粒体でよい。このように約２５から 約１０００人の範囲の粒体サイズを有する金属コロイド粒体に抗体あるいは抗原 をコーティングして本発明によって使用すればよい。そのようなコーティングし た粒体は粒体サイズによって、オレンジ色、赤あるいは紫色を強力に彩色する。

しかしながら本発明は標識あるいは免疫学的反応物質の特定の性質即ち特性によ って左右されず、免疫学的反応物質に結合しうるいずれの種類の標識に関しても 広範囲に有用である。

ゾーンＩ８に含まれた捕獲可能成分も免疫学的反応物質からなる。さらに、捕獲 可能成分は捕獲可能種を含むことにより、捕獲可能成分は捕獲可能種と免疫学的 反応物質との結合生成物からなる。

検出ゾーン２２に局在化された捕獲成分は、捕獲可能成分と相互作用することに よって捕獲可能成分を含む反応生成物が検出ゾーンで捕獲され、かつ集めること ができるようにする捕獲物質からなることが好ましい。捕獲物質は、帯片１２が 形成されるセルローズ材に直接結合することかできる。しかしながら、本発明の 好適形態においては、捕獲物質は、検出ゾーンにおいて多孔性担体材料の孔に堆 積されることによって局在化しつる寸法と性質とを存する固相粒体に結合しつる 。本発明のこの形態においては、固相粒体は、例えば前述の°６１２の特許に開 示の種々の粒体のような多数の公知の水分散性の粒体のいずれかから構成すれば よい。本発明に関して作用な固相粒体は、例えば、例えばシリカ、アガローズ、 ガラス、ポリアクリルアミド、ポリメチルメタアクリラ−ト、カーボキシラート 修正ラテックスおよびセファローズのようなラテックスあるいはその他の支持材 料の粒体を含む。粒体はサイズか約０．２ミクロンから約１０ミクロンまで変動 する。本発明に関連して使用するための特に好適な材料は、１９８８年４月４日 に出願され、その全体の開示を参考のために特に本明細書に含めている、本発明 と共に譲渡され、出願中の米国特願第１７７．１１４号に記載の０．９９ミクロ ンのカーポオキシラート修正のラテックス粒子（ポリサイエンシス）からなる。

本発明の特に好適な形態においては、装置１０は妊娠を検出するために使用しつ る。この百的に対して、前記′６１２特許に記載の２Ｂ２抗体を用いることがで きる。

２Ｂ２抗体はビオチンに結合でき、後者は捕獲可能種として作用する。２Ｂ２抗 体をビオチニレートするために、５０ｍｇのビオチン−Ｘ−ＮＨ３がまず５ｍｌ のＤＭＳＯに分解される。抗体を含有する溶液は１３．３２ｍ１のＩＭＮａｚＣ Ｏｚと８０ｍ１の０．１５　Ｍ　ＮａＣ１とを混合し、次いで８３３．３５ｍｇ の透析した２Ｂ２抗体と２９．３　ｍｌのＤＭＳＯを前記混合物に添加すること により調整される。次いで、ビオチンとＤＭＳＯの初期溶液か抗体溶液に添加さ れ、出来た混合物は室温で約２時間反応するようにされる。

培養の後、２Ｂ２／ビオチンの、このようにして形成された複合体が４℃で４８ 時間０．１５　Ｍ　ＮａＣｌ１０．０５％ＮａＨｚ溶液に対して透析される。次 に、複合体が、■２．ＩＩｇ／ｌのトリスペース、１００ｇ／Ｉ　ＭＡＬＴＲＩ Ｎ３６５（グレインプロセシング社−Ｇｒａｉｎ　ＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＣｏｒ ｐ、）、３ｇ／Ｉ　ＥＤＴＡ二ナトリウム塩、０．３　ｍｌ／ＩＩＧＥＰＡＬ　 ＣＡ　７２０　（ＧＡ　Ｆカムパー１−−　ＧＡＦ　Ｃａｍｐａｎｙ）、０、１ 　ｇ／ｌチメロサールを含有する、ある量の緩衝液（ｐｈ８．０：０．０５）に 添加されることによって、タンパクの濃度が約０．５　ｇ／ｌとなる。その結果 出来た溶液を２μｍゾーン１８において帯片に散布して、乾燥させる。緩衝液の 種々成分の機能および成分特性を、その全体の開示を特別に引用するために本明 細書に含めた、本発明と共に譲渡され、出願中の特願第０７／３４４．５７５号 に詳細に説明しである。

本発明の好適形態においては、ゾーン２０における標識成分は第１の免疫学的反 応物質と検出可能の種との結合生成物からなることが理想的である。妊娠の検定 に対しては、好ましい免疫学的反応物質は前述の′６１２の特許に記載された２ Ｏ２抗体であり、好ましい検出可能・種は前記゛６１２特許にも記載の金コロイ ド粒体である。

抗体をコーティングした金コロイド粒体は基本的には前述゛６１２特許に記載の ように調製すればよく、金コロイド粒体は約３０ｎｍの直径を有することが好ま しい（ジー、フレシスのネーチ＋　−Ｇ、　Ｆｒｅｎｓ、　Ｎａｔｕｒｅ２４１ ．　２０−２２　（１９７３）を参照されたい）。抗体をコーティングした金コ ロイド粒体は前記゛６Ｉ２特許に記載のように処理し、本発明の好適形態におい て標識成分として使用しうる金コロイド標識探査子粒体からなる最終生成物を作 ることかできる。前記金コロイド標識探査子粒体は、３０ｎｍ金コロイド粒体の 各１０００　０Ｄ５３３ｒｍの単位に対して約１０．２　ｍｇの２０９抗体を含 む。

抗体をコーティングした金コロイド粒体は４５．４５ｇ／Ｉのウシ血清アルブミ ン（ＢＳＡ）と、０．６６７ｇ／Ｉのナトリウムアジ化物、リットル当り９．０ ９ｍ１のＴＲ［ＴＯＮＸ−１００と、８．６９　ｇ／ｌのトリスペースと、２５ ３．６４　ｇ／ｌのＭＡＬＴＲＩＮ　３６５と、０．２１５ｍ１のＩＧＥＰＡＬ 　ＣＡ７２０と、０．０７１８８／ｌのチメロサールと、金）Ｏイド粒体の７８ ５．４５　０Ｄ　５３３ｎｍ単位にコーティングした８ｍｇ／Ｉの２０９抗体と を含有する溶液に含まれる。次に５０μｍのこの溶液を供給して装ｆｔ１２のゾ ーン２０を覆い、溶液は空気乾燥される。ＴＲＭＴＯＮ　Ｘ−１００はローム　 アンド　ハース　カムパ：−（Ｒｏｈｍ　ａｎｄ　ｆ（ａａｓ　Ｃｏｍｐａｎｙ ）の商品である、オクチルフェノキシポリエソキシエタノール（ｏｃｔｙｌ　ｐ ｈｅｎｏｘｙ−ｐｏｌｙｅｔｈｏｘｙ　ｅｔｈａｎｏｌ）の非イオン界面剤テア ル。

ゾーン２２の捕獲成分は、例えば固体ラテックス粒体と複合化されたストレプト アビジンであるアビジン材料から構成すればよい。次に、ストレプトアビジン　 ラテックス粒体を堆積させ、ゾーン２２において帯片の多孔担体材料の孔内で局 在化すればよい。ストレプトアビジン　ラテックス粒体を調製するには、２８０ ｍｇのストレプトアビジンを５６０ａ＋Ｉの０．　ｌ　５　Ｍ　ＮａＣｌに溶解 させる。

個別の容器において、１０１０５Ｏの０．３６　Ｍ　ＮａＣ１が、１５．４７ｇ の０．９９μカーポキシラート修正ラテツクス（ポリサイエンシス−Ｐｏｌｙｓ ｃｉｅ口ｃｅｓ）を含有する８゜Ｏｍｌのラテックス懸濁液に添加される。懸濁 液を含有するラテックスの全体容積が約２リツトルとなるようにするに十分な量 の純水が添加される。ラテックスを活性化させるために、１０５ｍＩの水中のｌ 　０．５　ｇのカーポジイミド（ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ）がラテックス懸濁 液に添加され、後者は約ｌＯ分反応するようにされる。カーポジイミドにより活 性化されたラテックスは次に遠心分離機において集められ、約１５４０ｍ１のＯ ，ｌ　４　Ｍ　ＮａＣｌ溶液中で再懸濁される。前述のように調製されたストレ プトアビジン溶液は活性化されたラテックス溶液と混合され、その混合物は１０ から２０時間攪拌される。反応が完了した後、２１０ｍ１のＩＭグリソン溶液が ストレプトアビジン　ラテックス懸濁液に添加され、懸濁液は再び約１時間攪拌 される。混合物は遠心分離され、上澄みは吸出される。

その後ストレプトアビジン　ラテックス複合物は手頃な食塩水で洗滌され、再び 遠心分離される。生成物は、３００ｇ／ｆ！のＭＡＬＴＲＩＮ３６５と０．５ｇ ／Ｉ！のナトリウム、アジ化物とを含有する十分な量の水溶液で再び懸濁され、 リットル当り約７３５ｇのストレプトアビジン　ラテックスを含む最終の懸濁液 を提供する。次に、約１．４７ｍｇのストレプトアビジン　ラテックスを含有す る前記懸濁液２０μｍがゾーン２２に供給される。懸濁液がゾーン２２に供給さ れ、一方（１９インチ−４８２゜６ミリの水柱）の真空か帯片１２の反対側に付 与され、ストレプトアビジン　ラテックスがゾーンを越えて広がらないように阻 止し、かつラテックス粒体かゾーン２２において、帯片１２の孔を完全に浸透す るようにする。

帯片１２に芯要素１４を付与する前に、芯は、１２．１ｇ／Ｉ！のトリスペース と、１００　ｇ／ｌのＭＡＬＴＲｌＮ３６５と、３ｇ／Ｉ！のＥＤＴＡ二ナトリ ウム塩と、０、３　ｍｌ／　ｉのＩＣ；ＥＰＡＬＣＡ７２０と、ＯＡｇ／ｌのチ メロサールと、１０ｇ／Ｉ！のＢＳＡと、０．５　ｍｌ／　ｌのＴＲＩＴＯＮ　 Ｘ−１００とを含量する溶液で処理することが好ましい。前記の処理は芯１４を 溶液に浸透させ、溶液を乾燥させることを含む。そのような処理は非特定吸収を 阻止することが判明した。

使用時、試験溶液は単に装置１０の端部に供給すればよい。妊娠検査の場合、芯 Ｊ４を最初の日の朝の尿の流れに直接位置させることにより液体試料に露出させ ればよい。検査の主体が妊娠であるとすれば、そのような尿はある程度の人間の 毛膜性生殖刺激ホルモン（ｈＣＧ）、即ち免疫学的に反応し、２Ｂ２抗体に対し て特に免疫学的に反応性がある第１の部位と、２Ｏ２抗体に対して特に免疫学的 に反応性のある別の部位とを存するホルモン分析物を含む。

尿は芯部材１４の吸収作用により吸収され、芯部材が要素１２の表面と緊密に接 触しているので、要素１２の孔が尿を端部１６から端部３２に向かう方向に毛管 作用により帯片要素１２に沿って移動するようにさせる。要素１２の孔の毛管作 用により尿かゾーン１８と２０とを順次横行するにつれて、尿は乾燥した標識成 分と捕獲可能成分と接触するようになりこれらの成分を再構成して、尿と、その 中に拡散した成分とを含有する液体反応混合物を形成する。

ゾーン１８からの捕獲可能成分の２８２抗体はｈＣＧ分子の特定の部位に対して は免疫反応し、かつゾーン２０からの標識成分の２０９抗体はｈＣＧ分子の異な る特定部位に対して免疫反応するので、標識２Ｇ９成分と、ｈＣＧとビオチニラ ートした２Ｂ２成分とのサンドイッチからなる反応生成物が形成される。

反応生成物を形成する反応は、反応物が全て運動自在である液体系において行わ れることが顕著である。このように、反応は効率的であり、最小の量の反応物と 低レベルの分析物とで確実な結果を提供する。

反応生成物を拡散させている尿は、その混合物が、ゾーン２２で局在化されたラ テックス粒体に結合されるストレプトアビジンと出合うまで毛管作用により帯片 １２に沿って拡散し、移動し続ける。２Ｏ２抗体に結合された金コロイド標識を 含む反応生成物における、ラテックス粒体に結合されたストレプトアビジンと２ Ｂ２抗体に結合されたビオチンとの間の反応によりゾーン２２において反応生成 物を捕獲し、かつ収集する。このように、ゾーン２２における局在化された捕獲 成分は、捕獲可能の種としてビオチンからなる捕獲可能成分を含む反応生成物と 相互作用しつる捕獲物質としてアビジンを含む。

アビジンはビオチンと作用し、全標識か濃縮され可視検出しつるゾーンとなった ゾーン２２において反応生成物を捕獲し、かつ集める。金はゾーン２２で集めら れ、かつ濃縮されて、可視検出して確実な結果を指示しうる直ちに見える彩色を 提供する。

もし尿の試料かｈＣＧを含んでいないとすれば、全標識の２ＣＧ抗体は単にゾー ン２２を介して拡散し、空間３０に沿って広がり、そこで個々の金粒体は拡散し てはっきりした彩色は見ることができない。ビオチニラートの２Ｂ２抗体は常に ゾーン２２で集められ、かつ濃縮されるものの、ｈＣＧが介在しないとその個所 で全標識の２０９抗体を集める方法がない。

前述の特定の例においては、捕獲物質としてストレプトアビジンが採用され、捕 獲可能種としてビオチンが採用されてきた。これらの材料が選ばれた理由は、そ れらが迅速かつしっかりと相互作用して確実な捕獲および収集機能を提供するか らである。その他のアビジン材料も使用しつる。さらに、本発明はこれらの特定 の材料に限定されるのでなく、その他の代替的な相互作用材料も採用しつる。例 えば、抗体はフルオレセイン　チオシアネートに対して上げることができ、それ らの抗体とフルオレセイン　チオシアネートとの間の結合作用を用いて反応生成 物を捕獲し、集めることができる。このように２Ｂ２抗体をフルオレスセイン　 チオシアネートに結合して捕獲可能成分を提供することかでき、かつフルオレス セイン　チオシアネートに対する抗体を固相粒体に結合させ局在化可能捕獲成分 を提供することができる。その他の可能性のある材料が当該技術分野において公 知であるが、この点における唯一の制約は捕獲可能種を適当な免疫反応性物質に 結合可能で捕獲可能成分を提供する必要があること、および捕獲物質か適当な検 出ゾーンにおいて局在化されつる必要があることである。

ＦＩＧ、　／ ＦＩＧ、　２ 要　約　書 分析物抗原を含有する水溶液が毛管作用により帯片（１０）に沿って移動するよ うに前記水溶液を多数のゾーンに分けられた試験帯片装置（１０）の一端に付与 することを含む免疫学的検定方法である。前記ゾーンは水溶液が （ａ）まず、前記分析物抗原（２０）に対して特定の抗体に複合化された金コロ イドからなる乾燥し、分散性の標識成分と接触し、再構成し、次に （ｂ）分散性の、拡散したサンドイッチ反応生成物が形成されるように、前記分 析物抗原（１８）に対して特定の、乾燥し、分散性のビオチニレートした第２の 抗体と接触し、かつ再構成する。反応生成物は帯片（１０）に沿って水溶液と共 に、ラテックスとアビジンの複合体（２２）からなり、アビジンがそのビオチン 成分と反応することにより反応生成物を集める捕獲成分を含有するゾーンへ拡散 する。このように金粒体が集められ、可視測定のため検出ゾーン（２２）におい て濃縮される。

補正書の写しく翻訳文）提出書（特訂制８ｓ条）７＠１組団

Claims (61)

【特許請求の範囲】
1. １．水性試料における免疫学的に反応性の分析物を測定かつ検出する方法におい て、 第１の免疫反応性物質と検出可能種との結合生成物からなる水分散性標識成分を 提供し、 捕獲可能の種と第２の免疫反応性物質との結合生成物からなる水分散性の捕獲可 能成分を提供し、捕獲可能の種を含有する反応生成物と相互作用し、検出ゾーン において反応生成物を捕獲し、かつ集めることができ、多孔性担持材料の検出ゾ ーンにおいて局在化された捕獲成分を提供し、 分析物に対して分析すべき試料を含む水溶液と標識成分と捕獲可能成分とを接触 させることにより前記試料と前記成分とを含有する液状反応混合物を形成し、前 記第１と第２の物質は同じか、あるいは異なり、前記分析物の介在の機能として 直接あるいは間接的に結合でき、そのため捕獲可能の成分を含有する拡散反応生 成物を形成することができ、 前記液状反応混合物を前記検出ゾーンにおいて前記の捕獲成分と接触させること により前記捕獲可能成分を含有する反応生成物が、前記捕獲成分との相互作用に より前記ゾーンにおいて捕獲され、かつ集められ、前記ゾーンで捕獲され、かつ 集められた反応生成物における検出可能種の介在を評価することにより試料にお ける分析物を測定即ち検出する方法。
2. ２．前記検出可能種が金属を含有した粒体からなることを特徴とする請求の範囲 第１項に記載の方法。
3. ３．前記標識成分が第１の物質を直接金属含有粒体に結合することにより調製さ れることを特徴とする請求の範囲第２項に記載の方法。
4. ４．前記金属含有粒体が金属コロイド粒体であることを特徴とする請求の範囲第 ２項に記載の方法。
5. ５．前記金属コロイド粒体の粒体サイズが約２５から約１０００オングストロー ムの範囲であることを特徴とする請求の範囲第４項に記載の方法。
6. ６．前記粒体が金コロイド粒体であることを特徴とする請求の範囲第４項に記載 の方法。
7. ７．前記分析物がリガンドと抗リガンドとからなる群から選択された生物学的に 活性の物質であることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の方法。
8. ８．前記相互作用がビオチン・アビジン結合の形成からなることを特徴とする請 求の範囲第１項に記載の方法。
9. ９．前記捕獲可能種がビオチンからなり、前記捕獲物質がアビジンからなること を特徴とする請求の範囲第８項に記載の方法。
10. １０．前記捕獲成分が固相粒体と前記捕獲物質との結合生成物からなり、前記固 相粒体が捕獲され、前記検出ゾーンにおいて多孔性担体材料において局在化され るサイズと特性であることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の方法。
11. １１．前記捕獲可能の種がビオチンからなり、前記捕獲物質がアビジンからなり 、前記の相互作用がビオチンアビジンの結合物の形成からなることを特徴とする 請求の範囲第１０項に記載の方法。
12. １２．水性試料における免疫学的反応性分析物を測定し検出する方法において、 第１の免疫学的に反応性の物質と検出可能の種との結合生成物からなる、乾燥し 、再構成可能で水分散性の標識成分を提供し、 第２の免疫学的に反応性の物質からなり、多孔性担体材料に含有された乾燥し、 再構成可能で水分散性の捕獲可能成分を提供し、 捕獲可能成分を含有する反応生成物と相互作用でき検出ゾーンにおいて前記反応 生成物を捕獲し、かつ集めることのできる捕獲成分であって水性担持材料の検出 ゾーンにおいて局在化された捕獲成分を提供し、分析物に対して分析すべき試料 を含む水溶液に接触させることにより標識成分と捕獲可能成分を再構成して前記 試料と前記成分とを含有する液状反応性混合物を形成し、前記第１と第２の物質 とは同じでも、あるいは異なってよく前記分析物の介在の機能として直接あるい は間接的に結合可能で捕獲可能成分を含有した拡散反応生成物を形成し、 前記液状反応混合物を前記検出ゾーンにおいて前記捕獲成分と接触させることに より前記の捕獲可能成分を含有する反応生成物が、前記捕獲要素との相互作用に より前記ゾーンにおいて集められ、捕獲されて不働態化され、前記ゾーンにおい て捕獲され、かつ集められた反応生成物における検出可能の種の介在を評価する ことにより試料中の分析物を測定あるいは検出する段階を含むことを特徴とする 方法。
13. １３．水性試料中の免疫学的反応性分析物の測定および検出を行う方法において 、 第１の免疫学的反応性物質と検出可能の種との結合生成物からなり、多孔性担体 材料に含まれた乾燥し、再構成可能で、水分散性で拡散性の標識成分を提供し、 第２の免疫学的に反応性の物質からなり、乾燥し、再構成可能で、水分散性で拡 散性の捕獲可能成分を提供し、捕獲可能成分を含む反応生成物と相互作用し、検 出ゾーンにおいて前記生成物を集め、かつ捕獲することの可能な捕獲成分からな り、多孔性担体材料の検出ゾーンにおいて局在化された捕獲成分を提供し、標識 成分と捕獲可能成分とを含有する多孔性担体材料を、分析物に対して分析すべき 試料からなる水溶液と接触させることにより標識成分と捕獲可能成分とを再構成 させ、前記試料と前記成分とを含有する液体反応混合物を形成し、前記第１と第 ２の物質は同じかあるいは異なり、前記分析物の介在の機能として直接あるいは 間接的に結合して捕獲可能成分を含有する分散性で拡散した反応生成物を形成し 、 前記液体反応混合物を多孔性担体材料を介して拡散させ、反応生成物を検出ゾー ンにおいて前記捕獲成分と接触させることにより、前記捕獲可能成分を含有する 反応生成物が前記捕獲成分との相互作用により前記ゾーンにおいて捕獲され、か つ集められ、 前記ゾーンにおいて捕獲され、かつ集められた反応生成物における検出可能種の 介在を評価することにより試料における分析物を測定即ち検出する段階を含むこ とを特徴とする方法。
14. １４．液体試料における免疫学的に反応性の分析物を測定し、検出する方法にお いて、 第１の免疫学的に反応性の物質と検出可能の種との結合生成物からなり、乾燥し 、再構成可能で、水分散性で、拡散性の標識成分を提供し、 第２の免疫学的反応性の物質からなり、多孔性担体材料のあるゾーンに含まれた 乾燥し、再構成可能で、水分散性で、拡散性の捕獲可能成分を提供し、捕獲可能 成分を含有する反応生成物と相互作用可能で前記生成物を検出ゾーンにおいて捕 獲し、かつ集める捕獲物質からなり、多孔性担体材料の検出ゾーンに局在化され た捕獲成分を提供し、 標識成分と捕獲可能成分とを含有する多孔性担体材料のゾーンを分析物に対して 分析すべき試料からなる水溶液と接触させることにより標識成分と捕獲可能成分 とを再構成して前記試料と前記成分とを含有する液体反応混合物を形成し、前記 第１と第２の物質は同じあるいは異なり、前記分析物の介在の機能として直接あ るいは間接的に結合して、捕獲可能成分を含有する分散性で拡散した反応生成物 を形成し、 前記液体反応混合物を多孔性担体材料を通して前記検出ゾーンへ拡散させ、反応 生成物を前記検出ゾーンにおいて前記捕獲成分と接触させることにより前記捕獲 可能成分を含有する反応生成物が前記捕獲成分との相互作用により前記検出ゾー ンにおいて捕獲され、かつ集められ、前記検出ゾーンにおいて捕獲され、かつ集 められた反応生成物における検出可能の種の介在を評価することにより試料にお ける分析物を測定即ち検出する段階を含むことを特徴とする方法。
15. １５．水性試料における免疫学的に反応性の分析物を測定し、検出する方法にお いて、 第１の免疫学的物質と検出可能の種との結合生成物からなり、多孔性材料の細長 い帯片の第１のゾーンに含まれた、乾燥し、再構成可能で、水分散性で、拡散性 の標識成分を提供し、 第２の免疫学的反応性物質からなり、多孔性担体材料の前記帯片の第２のゾーン に含まれた、乾燥し、再構成可能で、水分散性で拡散可能の捕獲可能成分を提供 し、捕獲可能成分を含有する反応生成物と相互作用でき検出ゾーンにおいて前記 生成物を捕獲し、かつ集める捕獲物質からなり、多孔性担体材料の帯片のある検 出ゾーンにおいて局在化された捕獲成分を提供し、標識成分と捕獲可能成分とを 含有する多孔性担体材料の前記第１と第２のゾーンを分析物に対して分析すべき 試料からなる水溶液を接触させることにより標識成分と捕獲可能成分とを再構成 して前記試料と前記成分とを含有する液体反応混合物を形成し、前記第１と第２ の物質は同じか、あるいは異なり、前記分析物の介在の機能として直接あるいは 間接的に結合し、捕獲可能成分を含む分散性で拡散した反応生成物を形成するこ とができ、前記液体反応混合物を前記の検出ゾーンにおいて前記捕獲成分と接触 させることにより、前記の捕獲可能成分を含有する反応生成物が前記捕獲成分と の相互作用により前記検出ゾーンにおいて捕獲され、かつ集められ、前記検出ゾ ーンにおいて捕獲され、かつ集められた反応生成物における検出可能の種の介在 を評価することにより試料中の分析物を測定即ち検出する段階を含むことを特徴 とする方法。
16. １６．混合物を捕獲成分と接触させる前記の段階が前記混合物を帯片に沿って拡 散することにより達成されることを特徴とする請求の範囲第１５項に記載の方法 。
17. １７．前記第１と第２のゾーンが前記帯片の長手方向に離隔されていることを特 徴とする請求の範囲第１５項に記載の方法。
18. １８．前記検出ゾーンが前記帯片の一端から長手方向に離隔され、前記第１と第 ２のゾーンが前記帯片の前記一方端と前記検出ゾーンとの間で前記検出ゾーンに 対する長手方向の離隔関係で配置されていることを特徴とする請求の範囲第１５ 項に記載の方法。
19. １９．混合物を捕獲成分と接触させる前記の段階が、前記第１と第２のゾーンか ら前記検出ゾーンまで前記帯片に沿って前記混合物を拡散することにより達成さ れることを特徴とする請求の範囲第１８項に記載の方法。
20. ２０．前記の成分を再構成する段階が前記液体を前記帯片の前記一方端に付与す ることによって、前記試料が前記帯片に沿って、前記第１と第２のゾーンへ拡散 することを特徴とする請求の範囲第１８項に記載の方法。
21. ２１．前記の成分を再構成する段階が前記液体を前記帯片の前記一方端に付与す ることによって、前記試料が前記帯片に沿って、前記第１と第２のゾーンへ拡散 することを特徴とする請求の範囲第１９項に記載の方法。
22. ２２．前記捕獲可能成分が捕獲可能種と前記第２の免疫学的に反応性の物質との 結合生成物からなることを特徴とする請求の範囲第１５項に記載の方法。
23. ２３．前記検出可能の種が金属含有粒体からなることを特徴とする請求の範囲第 １５項に記載の方法。
24. ２４．前記標識成分が第１の物質を直接に金属含有粒体に結合することにより調 製されることを特徴とする請求の範囲第２３項に記載の方法。
25. ２５．前記金属含有粒体が金属コロイド粒体であることを特徴とする請求の範囲 第２３項に記載の方法。
26. ２６．前記金属コロイド粒体が約２５から約１０００オングストロームの範囲の 粒体サイズを有していることを特徴とする請求の範囲第２５項に記載の方法。
27. ２７．前記粒体が金コロイド粒体であることを特徴とする請求の範囲第２５項に 記載の方法。
28. ２８．前記分析物がリガンドと非リガンドからなる群から選択された生物学的に 活性の材料であることを特徴とする請求の範囲第１５項に記載の方法。
29. ２９．前記相互作用がビオチン・アビジン結合物の形成からなることを特徴とす る請求の範囲第２２項に記載の方法。
30. ３０．前記捕獲可能の種がビオチンからなり、前記捕獲物質がアビジンからなる ことを特徴とする請求の範囲第２９項に記載の方法。
31. ３１．前記捕獲成分が固相流体と前記捕獲物質との結合生成物からなり、前記固 相粒体が捕獲され、したがって前記検出ゾーンにおいて多孔性担体材料において 局在化されるサイズと特性であることを特徴とする請求の範囲第２２項に記載の 方法。
32. ３２．前記捕獲可能の種がビオチンからなり、前記捕獲物質がアビジンからなり 、前記相互作用がビオチン・アビジン結合物の形成からなることを特徴とする請 求の範囲第３１項に記載の方法。
33. ３３．前記第１と第２の物質はそれぞれ分析物のそれぞれの異なる部位を結合し サンドイッチを形成することを特徴とする請求の範囲第１５項に記載の方法。
34. ３４．前記第１と第２の物質がそれぞれ抗体であり、分析物が抗原であることを 特徴とする請求の範囲第３３項に記載の方法。
35. ３５．前記第１と第２の物質が相互に結合することを特徴とする請求の範囲第１ ５項に記載の方法。
36. ３６．前記物質の一方が抗体であり、他方が抗原であることを特徴とする請求の 範囲第３５項に記載の方法。
37. ３７．標識成分の第１の物質が抗体であることを特徴とする請求の範囲第３５項 に記載の方法。
38. ３８．水性試料における免疫学的反応性分析物を測定し、検出する方法を実行す る方法において、第１の免疫学的反応性物質と検出可能の種との結合生成物から なる水分散性の標識成分と、 捕獲可能種と第２の免疫学的反応性物質との結合生成物からなる水分散性の捕獲 可能成分とを含み、前記第１と第２の物質は同じ、あるいは異なり、かつ前記分 析物の介在の機能として直接あるいは間接的に結結合可能に捕獲可能成分を含有 する水分散性反応生成物を形成し、 捕獲可能種を含有する反応生成物と相互作用でき検出ゾーンにおいて前記生成物 を捕獲し、かつ集める捕獲物質からなり、多孔性担体材料において検出ゾーンで 局在化された捕獲成分をさらに含むことを特徴とする装置。
39. ３９．水性試料において免疫学的に反応性の分析物を測定し、検出する装置にお いて、 多孔性担持材料の基本要素と、 第１の免疫学的に反応性の物質と検出可能の種との結合生成物からなり、多孔性 担体材料の第１のゾーンに含まれた乾燥し、再構成可能で、水分散性で拡散性の 標識成分と、 第２の免疫学的反応性物質からなり、多孔性担体材料の前記要素の第２のゾーン において含まれた乾燥し、水分散性で、拡散性の捕獲可能の成分と、捕獲可能成 分を含有する反応生成物と相互作用でき前記生成物を検出ゾーンにおいて捕獲し 、かつ集める捕獲物質からなり、多孔性担持材料の前記要素の検出ゾーンにおい て局在化された捕獲成分とを含むことを特徴とする装置。
40. ４０．前記要素が細長い帯片であることを特徴とする請求の範囲第３９項に記載 の装置。
41. ４１．前記第１と第２のゾーンが前記帯片の長手方向に離隔していることを特徴 とする請求の範囲第４０項に記載の方法。
42. ４２．前記検出ゾーンが前記帯片の一方端から長手方向に離隔され、前記第１と 第２のゾーンが前記帯片の一方端と前記検出ゾーンとの間で前記検出ゾーンに対 して長手方向に離隔関係で配置されていることを特徴とする請求の範囲第４０項 に記載の装置。
43. ４３．前記検出ゾーンが前記帯片の一方端から長手方向に離隔され、前記第１と 第２のゾーンが前記帯片の前記一方端と前記検出ゾーンとの間で、検出ゾーンに 対して長手方向に離隔した関係で配置されていることを特徴とする請求の範囲第 ４１項に記載の装置。
44. ４４．前記捕獲可能成分が捕獲可能種と前記の免疫学的に反応性の物質との結合 生成物からなることを特徴とする請求の範囲第４３項に記載の装置。
45. ４５．前記検出可能の種が金属含有粒体からなることを特徴とする請求の範囲第 ４３項に記載の装置。
46. ４６．前記標識成分が第１の物質を直接に金属含有粒体に結合することにより調 製されることを特徴とする請求の範囲第４５項に記載の装置。
47. ４７．前記の金属含有粒体が金属コロイド粒体であることを特徴とする請求の範 囲第４５項に記載の装置。
48. ４８．前記金属コロイド粒体が約２５から約１０００オングストロームの範囲の 粒体サイズを有することを特徴とする請求の範囲第４７項に記載の装置。
49. ４９．前記粒体が金コロイド粒体であることを特徴とする請求の範囲第４７項に 記載の装置。
50. ５０．前記分析物がリガンドと抗リガンドとからなる群から選択された生物学的 に活性の物質であることを特徴とする請求の範囲第４３項に記載の装置。
51. ５１．前記相互作用がビオチン・アビジン結合物の形成からなることを特徴とす る請求の範囲第４４項に記載の装置。
52. ５２．前記捕獲可能の種がビオチンからなり、前記捕獲物質がアビジンからなる ことを特徴とする請求の範囲第５１項に記載の装置。
53. ５３．前記捕獲成分が固相粒体と前記捕獲物質との結合生成物からなり、前記固 相粒体が前記検出ゾーンにおいて多孔性担持材料において捕獲され、したがって 局在化されるサイズと特性であることを特徴とする請求の範囲第４４項に記載の 装置。
54. ５４．前記捕獲可能の種がビオチンからなり、前記捕獲物質がアビジンからなり 、前記相互作用がビオチンアビジン結合物からなることを特徴とする請求の範囲 第５３項に記載の装置。
55. ５５．前記第１と第２の物質が各々、分析物のそれぞれ異なる部位を結合してサ ンドイッチを形成することができることを特徴とする請求の範囲第４３項に記載 の装置。
56. ５６．前記第１と第２の物質がそれぞれ抗体であり、分析物が抗原であることを 特徴とする請求の範囲第５５項に記載の装置。
57. ５７．前記第１と第２の物質が相互に結合することを特徴とする請求の範囲第４ ３項に記載の装置。
58. ５８．前記物質の一方が抗体であり、他方が抗原であることを特徴とする請求の 範囲第５７項に記載の装置。
59. ５９．標識成分の第１の物質が抗体であることを特徴とする請求の範囲第５７項 に記載の装置。
60. ６０．前記一方端において前記要素と緊密に接触している芯部材を含むことを特 徴とする請求の範囲第４２項に記載の装置。
61. ６１．前記一方端において前記要素と緊密に接触している芯部材を含むことを特 徴とする請求の範囲第４３項に記載の装置。