JPH05506582A - オキサレートオキシダーゼをコードする遺伝子の産生物による、スクレロチニア属ｓｃｌｅｒｏｔｉｒｕｍによる攻撃に対し耐性である植物の産生 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 キサレート　キシダーゼをコード　る遺−の産−による　スクレロ　ニア　ＳＣ ＬＥＲＯＴＩＲＵＭに　る　に、しで　る　の 本発明は、オキサレートオキシダーゼをコードする遺伝子、この遺伝子によりコ ードされた蛋白質、この遺伝子からなるキメラ遺伝子及び真菌性の病気に対して 耐性を与えるなめに形質転換するためのこれらの使用に関する。

５ｃｌｅｒｏｔｉｎｉｏｓｅは、多くの双子葉Ｍ１物に作用する主要な真菌性の 病気である。原因となる因子、即ち５ｃｌｅｒｏｔｉｎｉａこの真菌は、茎のレ ベルでも葉のレベルでも植物を直接攻撃し、次いで茎または顆状花序（ｆｌｏｒ ａｌ　ｅａｐｉｔｕｌｍ）のレベルに広がり得る。Ａ初の２つの場合、植物は滋 養分の供給が途絶してしまうので衰えてしまう、３つめの場合、花は弱り、作物 は損傷してしまう。

この真菌は、感染した植物の細胞壁を分解し且つ植物での成長を促進する溶菌酵 素を産生ずる。これらの酵素は、病原性に於いて重要な役割を果たすが、十分に は現れない。

この真菌は、蓚酸も産生ずる（Ｇｏｄｏｖら、１９９０）、この蓚酸は、感染し た組織内の０１１分下げ、溶菌酵素による細胞壁の加水分解を促進する。蓚酸の 産生と減少させるか若しくはこの蓚酸を分解することにより、真菌の発生を遅ら せるかまたは阻害しなければならない。

“ｎｏｓ”耐性植物を開発するためには、蓚酸の解毒法を試用し得る。この酸を 分解すると、攻撃された植物組織の細胞内のｐｔ＋が下がるのを制限するため、 溶菌酵素は本来に活性で且つ有効な最適ｐＨとはかけ離れた値で作用することに なる。このため、真菌の病原性が減少する。

本目的を達成するために以下の反応： を触媒するオキサレートオキシダーゼを使用し得る。

オキサレートオキシダーゼは種々の植物、通常単子葉植物から単離される（Ｐｉ ｅｔａら、１９８２）。例えば、蛋白質は、慣用のクロマトグラフ法（Ｓｅｐｈ ａｄｅｘ　Ｇ−７５濾過ゲル及びＭｏｎｏＱイオン交換ゲル、　Ｐｈａｒｍａｃ ｉａ製）を使用して、以下の比色法（Ｏｂｚａｎｓｋｙ及びＲｉｃｈａｒｄｓｏ ｎ、１９８３）がら酵素活性をモニターすることによりかろうじて精製し得る。

Ｈ２０□＋ＭＢＴＩＩ　＋　ＤＭＡ　−一こ−−５インダミン　＋ｌＩ２０＋ベ ルオキシダーセ ＭＢＴＨ＝３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾンＤＭＡ＝Ｎ、Ｎ−ジ メチルアリニン これにより、変性条件下アクリルアミドゲル上で、分子量２６，０００ダルトン を有する蛋白質を精製することができる。

精製オキサレートオキシダーゼの一部を使用して、ウサギ抗−オキサレートオキ シダーゼ抗体を得た。残りの蛋白質を使用して、天然蛋白質（Ｎ−末端）のシー フェンシングまたは、臭化シアン分解後、特定の内部ペプチドのシーフェンシン グを実施する。得られた結果は以下の通りである：Ｎ−末端：　ＩＤＰＤＰＬＱ ＤＦ−ＶＡＤＬＤＧＫＡＶＳＶＮＧＨＳ内部ペプチドＮｏ、２　：　ＨＦＱＦＮ Ｖ（１；ＫＴＥＡＹｅＤＮ＾ 上記記載のペプチド配列と蛋白質ライブラリー５ｗ１ｓｓ−Ｐｒｏｔに含まれる データとを比較することにより、Ｇｅｒｍｉｎｅと呼称され且つ１９８９年にＤ ｒａｔｅｗｋａ−ｋｏｓらにより記載されたコムギ蛋白質を識別することができ た。実験から、本出願人が記載したｃＤＮＡは、オキサレートオキシダーゼ活性 を示す２０１アミノ酸の蛋白質分コードすることが確定できた。

本明細言に示した残りの実施例の記載に関しては、本出願人の文献（Ｊ　、Ｂ　 ｉｏ　Ｉ　、Ｃｈｅｍ　、　、　２６４　、４８９６−４９００）の図２のヌク レオチド番号を使用する。

このｃＤＮＡの配列は、８５残基の未翻訳５′、６７２ヌクレオチドの読み取り 枠（位！８６〜７５７）及び３１８残基の未翻訳３゛を有する長さの１０７５ヌ クレオチドである。

ｃＤＮ＾ＤＭＡら得られた蛋白質配列と、天然蛋白質をシーフェンシングするこ とにより得られた配列とを比較すると、ｃＤＮＡは成熟オキサレートオキシダー ゼだけでなく、Ｎ−末端部分の２３アミノ酸のシグナルペプチドもコードするこ とが知見された。従って、オキサレートオキシダーゼは、シグナルペプチドを除 去して成熟活性酵素を放出させることにより成熟させるプレプロティン（シグナ ルペプチド＋成熟ペプチド）の状態で合成される。

以下、本出願人は、プレプロティンをコードする部分（ヌクレオチド８６〜７５ ７）または成熟蛋白質をコードする部分（位置１５５〜７５７）だけを使用する 。後者の場合には、（メチオニンをコードする）＾ＵＧコドンは、（トレオニン 、成熟蛋白質の最初のアミノ酸をコードする）へ〇Ｃコドンの前に配置されねば ならない。

植物に於ける５ｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ　ｓｃｌｅｒｏｔｏｉｒｕｍの攻撃は、本 質的に茎または植物に達するが、クロロフィルを含んだ組織中［この場合、Ｈｅ １ｉａｎｔｈｕｓ　ａｎｎｕｕｓのリブロース１．５−ジホスフェートカルボキ シラーゼの小さなサブユニットのプロモーター（ＳＳＵＨａ　Ｊａｋｓ＋ａａｎ ら、　１９８７）を使用し得る］、または植物の種々の組織中［この場合、複製 され且つ“二重ＣａＭＶ”と呼称されるカリフラワーモザイクウィルス（ＣａＭ Ｖ　３５Ｓ＞部分の３５Ｓ　ＲＮへの偏在プロモーターを使用する］でオキサレ ートオキシダーゼを発現し得ると都合が良い。

本発明によるキメラ遺伝子は、例えば以下の要素から構築されていてもよい。

Ａ、二重ＣａＭＶプロモーター、プレプロティン（シグナルペプチド＋成熟ペプ チド）をコードするオキサレートオキシダーゼｃＤＮＡの一部及びｐＴｉ３７ノ パリンシンターゼ遺伝子ＣＢｅｖａｎら、１９８３）から得られたターミネータ −”ｎｏｓ”。

Ｂ、二重ＣａＭＶアロモーター、成熟蛋白質だけをコードするオキサレートオキ シダーゼｃＤＮ＾の一部、ターミネータ−”ｎｏｓ’。

Ｃ″Ａ”と同一であるが、二重ＣａＭＶの代わりにヒマフリリブロース１，５− ジホスフエートカルボキシラーゼ（ＳＳＵＨａ）の小さなサブユニットのプロモ ーターを有する遺伝子。

Ｄ、“Ｂ”と同一であるが、二重ＣａＭＶの代わりに５ＳＵＨａのプロモーター を有する遺伝子。

各キメラ遺伝子を、＾ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ＋＊ｉ用いる系または植物細胞を 形質転換する任意の公知の系を使用して植物細胞に導入する。植物をこれらの形 質転換した細胞から再生する。これらは、５ｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ　Ｓｃｌｅｒ ｏｔｉｏｒｕｍに対し強い耐性を示す。

１．２つのコーーイング　の・。Ｉ Ａ、プレタンパク質：　上記ｃＤＮＡをＨｉｎｄｌｒＩ（６６位）で消化するこ とにより得た。得られた付着末端をクレノーポリメラーゼで処理することにより 平滑にした。

このＤＮＡをその後、Ｎｈｅ　Ｉ　（８１１位）で消化した。

同時にプラスミドｐＵｃ１９　（Ｙａｎｉｓｃｈ−Ｐｅｒｒｏｎ　ｅｔ　ａｌ、 、　１９８５＞をＳａｃ　Ｉで消化した。

得られた付着末端をクレノーポリメラーゼで処理することにより平滑にした。次 にプラスミドをＸｂａ［（ＮｈｅＩに適合可能）で消化した。

上記のように調製したｃＤＮＡフラグメント及びプラスミドを連結した。こうし て得られた新規プラスミドをｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０１と命名し、その遺伝子地図 を図１に示す。

Ｂ、成熟タンパク質、　上記ｃＤＮＡをＢｓｔＮＩ　（１７３位）で消化後に得 た。得られたフラグメントと配列：５゛３′ ＾ＴＧＡＣＣＧＡＣＣＣＡＧＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＡＣＴＧＧＣＴＧＧＧＴＣＴ ＣＣ：ＧＡＧＡＧＧＴ３°　５′ のリンカ−を連結した。こうして成熟タンパク質のＮ末端配列をＴＤＰＤＰＬＱ からＭＴＤＰ［１ＰＬＱに修飾した。

このｃＤＮＡフラグメントを次にＮｈｅＩ（８１１位）で消化し、前項に記載し たように調製したプラスミドｐＵＣ１９と連結させた。こうして形成された新規 プラスミドをｐＲＰＡ−ｏｘ−０２と命名し、その遺伝子地図を図１に示す。

２：　メラ　子の；　ｆ ａ、プロモーター及びターミネータ−ｎｏｓを陰むベクターの調製。

一二重Ｃａ　Ｍ　Ｖの例：このベクターは次のようにして得られたプラスミドｐ ＲＰＡ−ＢＬ−４１０から得た。

「トウモロコシＲｕＢ１５Ｃ○のＳＳＵのトランジットペブ　ド／　Ａ　ｒ　ｏ 　Ａ遺（云子　ＷＡ：トウモロコシＲｕＢ１５ＣＯ遺伝子のＳＳＵのトランジッ トペプチドを１９２ｂｐのＥｃｏＲＩ−３ｐｈＩフラグメントから誘導した。こ れは、翻訳開始コドンにまたがるＮｃｏＩ部位とトランジットペプチドの開裂部 位に対応するｓｐｈ　Ｉ部位とを有するＬｅｂｒｕｎ　ｅｔ　ａｌ　（１９８７ ）に記載のトウモロコシＲｕＢ１５ＣＯ遺伝子のＳＳＵ遺伝子に対応するｃＤＮ Ａから得た。

５ＰｈＩ末端をバクテリオファージＴ４ポリメラーゼで処理し、ＥｃｏＲＩで再 切断したｐＲＰＡ−ＢＬ　１０４のＡｒｏＡ遺伝子のクレノーポリメラーゼ処理 Ｎｃｏｌ末端に連結することにより、トウモロコシトランジットペプチドと細菌 ＥＰＳＰＳ遺伝子との間の翻訳融合を得た。

トウモロコシＲｕＢ１５Ｃ○のＳＳＵのトランジットペブド　トウモロコシＲｕ Ｂ１５ＣＯの　軌　の２２アミノ酸の　’　Ａ　ｒ　ｏ　Ａ遺「−融４゜同様に 、１〜ウモロコシＲｕＢ１５ＣＯ遺伝子のＳＳＵのｃＤＮＡの２２８ｂｐのＥｃ ｏＲＩ−ＨｉｎｄＩ　Ｉフラグメントを、Ｅ’ｃ　ｏ　ＲＩで再切断したｐＲＰ Ａ−ＢＬ　１０４のＡｒｏＡ遺伝子のクレノーポリメラーゼ処理ＮｃｏＩ末端に 連結しな。トウモロコシＲｕＢ１５ＣＯのＳＳＵのトランジットペプチド、トウ モロコシＲｕＢ１５Ｃ○のＳＳＵの成熟部分の２２アミノ酸及び細菌ＥＰＳＰＳ 遺伝子の間で翻訳融合を得た。

ヒマワ’　ＲｕＢ　ｉ　ｓｃｏのＳＳＵのトランジットペプ　ドＷａｋｓｍａｎ 　ａｎｄ　Ｆｒｅｙｓｓｉｎｅｔ（１９８７）により単離されたｃＤＮＡからフ ラグメントを得た。

Ｚｏｌｌｅｒ　ａｎｄ　５ｒｒＩｉｔｈ　（１９８４）の方法に従って、トラン ジットペプチドの開裂部位にＳｐｈ　ｒ部位を形成した。こうして得られたヒマ ワリＲｕＢ１５Ｃ○のＳＳＵのトランジットペプチドは１７１ｂｐのＥｃｏＲｒ −ｓｐｈＩフラグメントである。

ヒマワリＲｕＢ　ｉ　ｓｃｏのＳＳＵのトランジットペプチドトウモロコシＲｕ Ｂ１５Ｃ○のＳＳＵの　郭　の２２アミン　の　Δ　′６へｒｏ、へ遣口−６′ 。

トウモロコシＲｕＢ１５ＣＯのＳＳＵのトランジットペプチド／トウモロコシ遺 伝子融合の成熟部分のトウモロコシＲｕＢ　ｉ　ｓＣ○のＳＳＵの２２アミノ酸 の配列を含む構築物を前記ヒマフリＲｕＢ１５ＣＯ遺伝子のＳＳＵのトランジッ トペプチドに対応する１７１ｂｐのＥｃｏＲＩ−ＳｐｈＩで切断した。形成され た構築物はＥｃｏＲＩ−ＳｐｈＩフラグメントの置換を示し、「ヒマワリＲｕＢ １５ＣＯのＳＳＵのトランジットペプチド／トウモロコシＲｕＢ１５Ｃ○のＳＳ Ｕの成熟部分の２２アミノ酸の配列／　Ａ　ｒＯＡ遺伝子」の翻訳融合物である 。

ＥｃｏＲＩ−３ａｌ　Ｉフラグメントを、３’　ｎｏｓ配列及びＴ−ＤＮＡの右 末端を含む５ａｌｒ−３ｓｔＩフラグメントに連結した。形成された「ヒマワリ ＲｕＢ１５Ｃ○のＳＳＵのトランジットペプチド／トウモロコシＲｕＢ１５ＣＯ のＳＳＵの成熟部分の２２アミノ酸配列／　Ａ　ｒ　ｏ　Ａ遺伝子／３’　ｎｏ ｓ／Ｔ−ＤＮＡ右末端」を含むＥｃｏＲＩ−５ｓｔＩフラグメントを、二重Ｃａ ＭＶプロモーターを含むプラスミド１５０Ａα２のＴ−ＤＮＡの右末端を含むＥ ｃｏＲＩ−５ｓｔＩフラグメントに置換した。ベクタ１５０Ａα２における「二 重ＣａＭＶ／ヒマワリＲｕＢ１５ｃｏのＳＳＵのトランジットペプチド／トウモ ロコシＲｕＢ１５Ｃ○の成熟部分の２２アミノ酸の配列／　Ａ　ｒ　。

Ａ遺伝子／３°ｎ０３ｊ転写融合物をｐＲＰＡ−ＢＬ２９４と命名した。

［ヒマワリＲｕＢ１５ＣＯのＳＳＵのトランジットベプド　トウモロコシＲｕＢ １５Ｃ○のＳＳＵの２２ア≧）の　トウモロコシＲｕＢ　ｉ　ｓｃｏのＳＳＵの トランジットペプ　ド　ＡｒｏＡ　Δ： 上記構築物をＮｃｏｌ−ＨｉｎｄＩ　Ｉ　Ｉで切断し、Ａｒ０Ａ遺伝子を放出さ せた１次に、「トウモロコシＲｕＢ１５Ｃ○のＳＳＵのトランジットペプチド／ 　Ａ　ｒ　ｏ　Ａ遺伝子」融合を含む１．５ｋｂｐ　ＮｃｏＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ フラグメントと連結した。得られた構築物は、ＮｃｏＩ−ＨｉｎｄＩＩＩフラグ メントの置換を示し、「ヒマワリＲｕＢ１　ｓｃｏのＳＳＵのトランジットペプ チド／トウモロコシ遺伝子の成熟部分のＲｕＢ　ｉ　ｓｃｏのＳＳＵの２２アミ ノ酸配列／トウモロコシＲｕＢ１５Ｃ○のＳＳＵのトランジットペプチド／　Ａ 　ｒ　ｏ　Ａ遺伝子」翻訳融合物である。

３°ｎｏｓ配列及びＴ−ＤＮＡの右末端を含む５ａｌＩ−Ｓｓ　ｔ　Ｉフラグメ ントにＥｃｏＲＩ−３ａｌ　Ｉフラグメント３連結した。得られた「ヒマワリＲ ｕＢ１５Ｃ○のＳＳＯのトランジットペプチド／トウモロコシ遺伝子の成熟部分 のＲｕＢ１５ＣＯのＳＳＵの２２アミノ酸配列／′トウモロコシＲｕＢ　ｉ　ｓ ｃｏのＳＳＵのトランジットペプチド／ＡｒｏＡｉｔ伝子／３’　ｎｏｓ／Ｔ− ＤＮＡ右末端」を含むＥｃｏＲＩ−Ｓｓ　ｔ　Ｉフラグメントを、二重ＣａＭＶ プロモーターを含むプラスミド１５０Ａα２のＴ−ＤＮＡの右末端を含むＥｃｏ ＲＩ−３ｓｔｌフラグメントに置換した。ベクター１５０Ａα２における「二重 ＣａＭＶ／ヒマワリＲｕＢ１５ＣＯのＳＳＵのトランジットペプチド／トウモロ コシ遺伝子の成熟部分のＲｕＢ１５ＣＯのＳＳＵの２２アミノ酸の配列／トウモ ロコシＲｕＢ１５ＣＯのＳＳＵのトランジットペプチド／　Ａ　ｒ　ｏ　Ａ遺伝 子／３’ｎｏｓ」転写融合物をｐＲＰＡ−ＢＬ　４１０と命名した。このプラス ミドをＥｃｏＲＩ及び５ａｌＩで消化し、構造遺伝子「最適化トランジットペプ チド−成熟ＥＰＳＰＳコーディング領域」を除去し、ｐＲＰＡ−ＢＬ−４１０欠 失株を得たく図１）。

一５ＳＵＨａの例：このベクターは、（ヨーロッパ特許出願第０３３７８９９号 に記載の）プラスミドｐＲＰＡ−Ｉ３Ｌ−２０７ＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ で消化し、ニトリラーゼコーディング領域を除去することによりｐＲＰＡ−ＢＬ −２０７欠失株とすることにより得た（図１）。

ｂ、キメラ遺伝子の構築： ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０３：　ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０１をＥｃｏＲＩ及び５ａｌＩ で消化することにより得た。プレタンパク質をコードする得られたフラグメント をその後、夫々二重ＣａＭＶの下流及びターミネータ−ｎｏｓの上流のＥｃｏＲ Ｉ及び５ａｉｌ部位の間に挿入した。

ｐＲＰＡ−ＯＸＯ−０４：　ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０２をＥｃｏＲＩ及び５ａｉｌ で消化することにより得た。成熟タンパク質をコードする得られたフラグメント をその後、夫々二重ＣａＭＶの下流及びターミネータ−ｎｏｓの上流のＥｃｏＲ Ｉ及び５ａｉｌ部位の間に挿入した。

ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０５：　ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０１をＥｃｏＲ４及びＨｉｎｄ ＩＩＩで消化することにより得た。

その後、得られたプレタンパク質をコードするフラグメントを夫々二重５ＳＵＨ ａの下流及びターミネータ−ｎｏｓの上流のＥｃｏＲｒ及びＨｉｎｄＩＩｒ部位 の開に挿入しｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０６：　ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０２！ＥｃｏＲＩ 及びＨｉｎｄＩＩＩで消化することにより得た。

成熟タンパク質をコードする得られたフラグメントをその後、夫々５ＳＵＨａプ ロモーターの下流及びターミネータ−ｎ　ｏ　ｓの上流のＥｃｏＲＩ及びＨｉｎ ｄＩＩＩの間に挿入した。

表１：４種のキメラ遺伝子の要約 ３・７黙赤　セイヨウアブーナの　゛告；ａ：形質転換 前述した如き各ベクターを、コスミドｐＴＶＫ　２９１　（Ｋｏｍａｒｉ等、１ ９８６　）を有する非腫瘍原性アグロバクテリウム腫脹株ＥＦＩ＾１０１　（Ｈ ｏｏｄ等、１９８７　）内に導入する。

Ｗｅｓｔａｒ品種のセイヨウアブラナの形質転換方法は本質的に、２　、５　ｘ 　１０　’　１モルの細菌濃度（ＯＤ６０００ｍ・１）を使用するＢｏｕｔｔｅ ｒ等が記載した方法に基づいている。

ｂコ再生 再生方法は本質的に、Ｂｏｕｌｔｅｒ等が記載した方法（１９９０）に基づいて いる。植物をＤｅ　Ｂｌｏｃｋ等の培地に根付がせる（　１’９８９　）。次い でこれらの植物を温室内で開花段曙まで生−葉のチラコイド（ｄｉｓｃｓ）　： ホルモンを含み、ＩＩＩＭの蓚酸を加えたＭｕｒａｓｈｉｇｅ　ａｎｄ　Ｓｋｏ ｏｇ　（ＭＳ）培地で１１日間生長させた後の３つの葉のチラコイドの質量を計 量して、耐性を測定する。

このような条件下では、キメラ遺伝子ｐＲＰ＾−ｏｘｏ−０３、ｐＲＰＡ−ｏｘ ｏ−０４，ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０５，ｐＲＰＡ−０ＸＯ−０６の−っを使用して 一時変異させたセイヨウアブラナから得られた葉のチラコイドの質量は実質的に 増加したが、一時変異させていないセイヨウアブラナから得られた葉のチラコイ ドの場合には質量は変わらないか又は減少することが観察される。

−根の伸長、更には、５Ｊの蓚酸を加えた水で２日間生長させた後に根の伸長を 測定して、耐性をｉｎ　ｖｉｔｒｏ測定する。この場合、キメラ遺伝子ｐＲＰ＾ −ｏｘｏ−０３，ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０４の一方で一時変異させたセイヨウアブ ラナの根は生長して、長くなり得るが、一時変異させていないセイヨウアブラナ の根はこのような条件下では生長を示さないことが観察さ最初の花が咲くとすぐ に、再生から得られたセイヨウアブラナを汚染した後に温室内でｉｎ　ｖｉｖｏ 耐性を測定する。

汚染方法は、Ｓ、　５ｅｌｅｒｏｔｉｏｒｕｓ胞子を花弁に付着させて摘花中に 葉の感染を自然発生させるか又は菌糸体若しくは菌糸体を浸み込ませた花弁を直 接葉に付着させることからなる。キメラ遺伝子ｐＲＰ＾−ｏｘｏ−０３、ｐＲＰ Ａ−ｏｘｏ−０４、ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０５゜ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０６のいずれ かで一時変異させた植物では真菌は発生せず、また５ｃｌｅｒｏｔｉｎｉｏｓｅ の腐敗特性の兆候を示さないが、一時変異させていない植物は５ｃｌｅｒｏｔｉ ｎｉａ７面のタイトル： 暗号付は遣（云子ｐＲＰΔ−ｏｘｏ−０１、ｐＲＰＡ−ｏｘｏ−０２からの４つ のキメラ遺伝子の製造方法。Ｈｊｌｉｎｇ　ＩＩＩ；Ｂ、　ＢｓｔＮ；　Ｎ。

Ｎｈｅ　Ｉ；Ｅ、Ｅｃｏ　Ｒ１；Ｓｃ　Ｓａｃ　Ｉ；　Ｓ、Ｓａｔ　Ｉ；Ｘ、Ｘ ｂａ　ｒ。

シュウ酸オキシダーゼのｃＤＮＡ 」扛 １）オキサレートオキシダーゼをコードするＤＮＡ配列。

２）この蛋白質を、スフレロチニア種により発生する病気に対する耐性を植物に 与えるために使用し得る。この蛋白質はコード配列を含むベクター及びキメラ遺 伝子により提供され得る。

３）この蛋白質をスフレロチニア種により生じる病気に対し強い耐性を植物に与 えるために使用し得る。

ｒ＠静１査報告 ＋１１ｍ１７ａｓｎｍｍｋ　ＰＣＴ／ＦＲ９２１００１９５

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．オキサレートオキシダーゼをコードするＤＮＡ配列。
2. ２．スクレロチニア種により発生した病気に対する耐性を植物に与えるために使 用し得る蛋白質、即ちオキサレートオキシダーゼ。
3. ３．コーディング配列として請求項１に記載のＤＮＡを含むキメラ遺伝子。
4. ４．請求項３に記載のキメラ遺伝子を含む植物を形質転換するためのベクター。
5. ５．請求項４に記載のベクターを含む形質転換した植物細胞。
6. ６．請求項５に記載の細胞から得られた形質転換した植物。
7. ７．双子葉植物である請求項６に記載の植物。
8. ８．セイヨウアブラナである請求項７に記載の植物。