JPH05509105A

JPH05509105A - 成長ホルモン放出活性を有するポリペプチド化合物

Info

Publication number: JPH05509105A
Application number: JP3514270A
Authority: JP
Inventors: ボワーズ，シリル　ワイ．; ハッブス，ジョン　シー．; フォスター，チャールズ　エイチ．; コディ，ウェイン　エル．; モマニー，フランク　エー．
Original assignee: ポリゲン　ホールディング　コーポレイション
Priority date: 1990-07-24
Filing date: 1991-07-23
Publication date: 1993-12-16
Also published as: FI930261A7; GR3014916T3; EP0540676B1; HUT62605A; PL167804B1; NO930203D0; BR9106676A; CN1061606A; AU8425991A; HU210611A9; HU9300192D0; FI930261L; NZ239079A; CZ401392A3; ATE114157T1; DE69105207T2; CA2086928A1; DK0540676T3; NO930203L; MX9100341A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】成長ホルモン放出活性を有するポリペプチド化合物本発明は、動物に投与された場合に成長ホルモンの放出を促進せしめる新規なるポリペプチド化合物に関する。他の見地において、本発明は動物への特定の成長ホルモン放出ポリペプチド化合物の投与によって、その動物における成長ホルモンの放出を促進せしめ且つその値を高めるための方法に関する。

発明の背景成長ホルモン（ＧＨ）放出化合物の投与による哺乳動物におけるＧＨ値の高揚は、十分なるＧＨＯ値の高揚がこの投与によりて生じているならば、体重の増加及び乳汁の産生の増大をもたらしうる。更に、哺乳動物における成長ホルモン値の高揚は既知の成長ホルモン放出剤、例えば天然の成長ホルモン放出ホルモンによって達成されうることか知られている。

哺乳動物における成長ホルモン値の高揚は成長ホルモン放出ペプチドの利用によっても達成でき、このうちのいくつかは例えばＵ、Ｓ。

（米国）第４，２２３，０１４号、Ｕ、Ｓ、第４，２２３，０２０号、Ｕ、Ｓ、第４，２２３，０２１号、ｔｌ、ｓ、第４，２２４，３１６号、Ｕ、Ｓ、第４，２２６，８５７号、Ｕ、Ｓ、第４．２２８．１５５号、υ、Ｓ、第４，２２８，１５６号、Ｕ、Ｓ、第４，２２８．１５７号、Ｕ、Ｓ、第４．２２８．１５８号、Ｕ、Ｓ、第４，４１０，５１２号、Ｕ、Ｓ、第４．４１０，５１３号、Ｕ、Ｓ、第４，４１１，８９０号及びＵ、Ｓ、第４，８３９．３４４号に既に詳載されている。

内因性成長ホルモン放出阻害剤ソマトスタチン（ＳＲＩＦ）に対する抗体もＧＨ値を高めるために利用されている。この場合、成長ホルモン値は、この内因性ＧＨ放出阻害剤（ＳＲＩＦ）がＧＨの放出を阻害する場所である下垂体に到達する前にこれを排除することによって高められている。

成長ホルモン値の高揚を促進するこれらの方法それぞれは、合成する及び／又は標的動物への投与のための十分なる純度において単離するのに費用がかかる物質を包含している。成長ホルモンの放出を促進するような効力を有する短鎖の比較的単純なポリペプチドが所望され、その理由はこれらは容易且つ安価に調製でき、容易に化学的及び／又は物理学的に改質でき、並びに容易に精製及び製剤化できうるから；更にはこれらは優れた輸送特性を有するからである。

動物の血液中の成長ホルモンの放出を促進し且つその値を高揚させる短鎖ポリペプチドを獲得することが所望されうる。動物の血液中の成長ホルモンの放出を促進し且つその値を高揚させるようなポリペプチドを利用することができることも有用である。

発明の概要我々は、動物において成長ホルモンの放出を促進する複数種の新規なるポリペプチド化合物をこの度発見した。これらのポリペプチドはＡｔ−Ａｔ−Ａｓ−Ｔｒｐ−ＡＳ−Ａｉ−Ｚの化学式（式中、Ａ１は旧３＋　３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ。

Ａ、−旧ｓ、　Ａａ−３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ、　Ａｌａ、　Ｔｙｒ又は旧５−Ａｌａであり、ここでＡｏは任意の天然のし一アミノ酸、Ｍｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ、　Ａｂｕ又は式Ｌ−＾。のペプチドであり、ここでＬはＨ，ＤＯＰＡ、　Ｌｙｓ、　Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　Ｃｙｓ、　Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、　Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ又はＴｙｒ−ＯＡＩａ−Ｐｈｅ−Ｓａｒであり、好ましくはＡｏは任意の天然アミノ酸であり、より好ましくはＡ、はＡｌａ、　Ｌｙｓ又はＧｌｕである；Ａ２はＤβ Ｎａｌ又はＤＰｈｅである；Ａ、はＡｌａ、　Ｇｌｙ又はＳｅｒであるｉＡｓはＤＰｈｅ、　Ｄルβ（Ｍｅ）Ｐｈｅ又は（ＮＭｅ）　ＤＰｈｅである；Ａ６はＢ −Ｇ又はＧであり、ここでＢは任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド又はＨｘＮ−（ＣＬ）　−−ＣＯｔＨ（式中、ｎは２−１２である）であり、そしてＧはＡｒｇ、　１Ｌｙｓ又はＯｒｎである；２はＣ末端基−ＣＯＮ！？’Ｒ”、　−ＣＯＯＩＩＩ’又は−ＣＨアＯＲ’（式中、Ｒ’　はＨ２１〜約６個の炭素原子を有するアルキル基、３〜約８個の炭素原子ををするシクロアルキル基、２〜約８個の炭素原子を有するアルケニル基、又は６〜約１２個の炭素原子を有するアリール基であり、そしてＲ８はＲ１として定義したものと同じであり、そしてこれらは同一であっても異なっていてもよい）、−Ｇｌｙ−Ｚ’　、　−Ｎｅｔ−Ｚ’　、　−Ｌｙｓ−Ｚ’　、　−Ｃｙｓ−Ｚ’　、−Ｇｌｙ− Ｔｙｒ−Ｚ’又は−Ａｌａ−Ｔｙ−Ｚ　’であり、ここでＺ′は−ＣＯＮＲ’Ｒ ”、−ＣＯＯｉｌ＋又は−〇０ＬＯＲ’である（式中Ｒ１及びＲｚは前記に定義した通りである））で表わせるもの、及びその有機又は無機的な薬学的に許容されている塩である。

好ましくは、このペプチドは次式％式％＾１ａ−Ａｚ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｎｌ１１で表わされる。更により好ましくは、Ａ：はＤβＮａｌである。このようなペプチドは有効量のこのペプチドを投与することによる、動物、好適には人間における血液成長ホルモンの放出の促進及びその値の高揚のために用いることができる。

発明の詳細な説明本発明は動物の血液中の成長ホルモンの放出を促進し且つその値を高揚させる複数種の短鎖ポリペプチドの発見に基づく０本発明の範囲に属すると考えられているポリペプチドは以下の一般構造：Ａ＋−Ａｔ−Ａｓ−Ｔｒｉ）−Ａｓ−Ａｈ− Ｚ（式中、Ａｔ　、Ａｘ　、Ａｄ　、Ａｓ　、Ａｈ及びＺは以下に定義の通りである）により定義される。Ａ、は旧ｓ、　３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ　（即ち、ここでイミダゾール環が３−位にてメチル化されている）、旧５−Ａ１ａ＋＾。−Ｈｉｓ、　Ａｌａ、　Ｔｙｒ又はＡｏ−３（ＮＭｅ）Ｈｉｓであり、ここでＡｏは任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ、Ａｂｕ又は式Ｌ−ＡＯのペプチドであり、ここでＬはＨ，ＤＯＰＡ、　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　Ｃｙｓ、　Ｔｙｒ−ＤＡＩａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、　Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ又はＴｙｒ−ＤＡＩａ−Ｐｈｅ−３ａｒである。好ましくは、Ａ、はＨｉｓ、　Ａｌａ、　Ｈ４５−Ａｌａ、＾、−Ｈ１ｓ又はＡｌａである。より好ましくは、Ａ、は旧Ｓ又は１１０−Ｈｉｓであるｅ　ＡＯは好ましくは任意の天然し一アミノ酸であり、より好ましくはＡｏばＡｌａ、　Ｌｙｓ又はＧｌｕである。更により好ましくは、Ａ、はＡｌａである。

ＡｔはＤβＮａｌ又はＰｈｅである。Ａ２は好ましくはＤβＮａｌである。Ａ、はＡｌａ、　Ｇｌｙ又はＳｅｔである。Ａ３は好ましくはＡｌａである。

ＡｓはＤＰｈｅ、　Ｄルβ（Ｍｅ）Ｐｈｅ又は（ＮＭｅ）　ＤＰｈｅである。ＡＳは好ましくはＤＰｈｅである。

Ａ、はＢ−Ｇ又はＧであり、ここでＢは任意の天然アミノ酸、任意の天然Ｌ−アミノ酸のジペプチド（例えばＡｌａ−Ｌｙｓ、＾１ａ−Ａｌａ、　Ａｌａ−Ｌｅｕ）又はＨＪ（ＣＨｚ）、ＩＣ０Ｊ　（式中、ｎは２〜１２である）であり、そしてＧはＡｕｇ、　１Ｌｙｓ、　Ｌｙｓ又はＯｒｎである。より好ましくは、Ｂは任意の天然し一アミノ酸又はＨＪ（ＣＨｚ）−ＣＯＪ　（式中、ｎは４〜８である）である、更により好ましくは、Ａ、はＧ、　Ａｌａ−Ｌｙｓ又はＡｌａ− ＾１ａ−Ｌｙｓである。更により好ましくは、Ａ、はＧである。最も好ましくは、Ａ、はＬｙｓである。

ＺはこのポリペプチドのＣ末端基であるか又は末端基を伴うＣ末端アミノ酸を表わし、ここでＺは−ＣＯＮＲ’Ｒ”、　−ＣＯＯＲ’又は−Ｃｌ！ＯＲ’　であり、ここでＲ１はＨ，１〜約６個の炭素原子を有するアルキル基、３〜約８個の炭素原子を有するシクロアルキル基、２〜約８個の炭素原子を有するアルケニル基、又は６〜約１２個の炭素原子を有するアリール基である。Ｒ１はＲ１として定義したものと同じであり、そしてこれらは同一でも異なっていてもよい、好ましくはＲ１はＨ又は１〜約６個の炭素原子ををするアルキル基である。Ｚは−ｃｔｙ−’ｚ’−Ｍｅｔ−Ｚ’　、　−Ｌｙｓ−Ｚ’　、　−Ｃｙｓ−Ｚ’　、− Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｚ’又は〜＾１ａ−Ｔｙｒ−Ｚ’であることもでき、ここでＺ ′は−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’又は−〇〇！ＯＲ’であり、ここでＲ１及びＲ２は前記の定義した通りである。好ましくはＺは−ＣＯＮＲ’Ｒ”、　−ＧＯＯＲ’又は−〇ＨｚＯＲ’　である。

更には任意の前記ポリペプチドの薬学的に許容されている有機又は無機付加塩である。

用いているアミノ酸残基略称は標準のペプチド名称に従う、即ち＝１１ｅ　−Ｌ −イソロイシンＧｌｕ　＝Ｌ−グルタミン酸Ｔｈｒ　冨し−スレオニンＰｈｅ　＝Ｌ−フェニルアラニンＡｓｐ　＝Ｌ−アスパラギン酸Ｇｉｎ　＝Ｌ−グルタミンＰｒｏ　−Ｌ−プロリンＬｅｕ　＝Ｌ−ロイシンｉｅｔ　鱈し−メチオニンＳｅｒ　＝Ｌ−セリンＡｓｎ　＝Ｌ−アスパラギンＨｉｓ　−Ｌ−ヒスチジン丁ｒｐ　−Ｌ−トリプトファンＶａｌ　＝Ｌ−バリンＤＯＰＡ　−３，４−−ジヒドロキシフェニルアラニンＭｅ　ｔｏ　−メチオニンスルホキシドＡｂｕ　−α−アミノ酪酸１Ｌｙｓ　＝Ｎｔ　−イソプロピル−Ｌ−リジン４−Ａｂｕ＝４−アミノ酪酸Ｏｒｎ　＝Ｌ−オルニチン０ｃｔＮａｌ　−α−ナフチル−Ｄ−アラニンＤβＮａｌ　＝β−ナフチルーＤ −アラニンＳａｒ　−サルコシン「ＤＪが前に置かれた全ての３文字アミノ酸略称はＤ型アミノ酸残基を示し、そしてｒＤ／ＬＪが前に置かれた略称はＤ−及び型の表示アミノ酸の混合物を示している０本明細書の目的のため、グリシンは「天然Ｌ−アミノ酸」の語に含まれているものと考慮される。

アミノ酸Ａ＋　、Ａｓ　、Ａｓ及びＡ、に関して用いることのできる塩基性、中性又は酸性アミノ酸残基は所望のペプチドの物理化学的特性の大いなる制御を提供する。このような柔軟性は所望のペプチドの製剤化及びある一定の種へのその搬送に関して重要な利点を提供する。更なる柔軟性はＲ及びＺ成分の選択によっても同しように高められ、従って所望の化合物の物理化学的特性の更なる制御が提供される。

本発明の実施において利用される好ましい成長ホルモン放出化合物は：Ａ＋−Ａｘ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａｓ−Ｚ　、例えばＡｏ−Ｈｉｓ−Ａｌ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａｓ−Ｚ　。

Ｈ４５−Ａｌａ−Ａｘ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａ、−Ｚ。

Ａｌａ−Ａｘ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａｉ−Ｚ及びＨ４５−Ａｚ−Ａｌａ −Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａｉ−Ｚ、並びにその有機又は無機付加塩である。好ましくはＡ２はＤβＮａｌである。

更により好ましくは、Ａｏ−Ｈｉｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２（特に、Ａｌａ−Ｈｉｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｚ）　、及びＨｉｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｚ、並びに任意の前記ポリペプチドの有機又は無機付加塩である。

これらの化合物は一般に合成し易く、血清成長ホルモン値の上昇を促進する効能を有し、そして商業スケール生産及び利用にとって所望される。更に、これらの化合物１；広範囲にわたる種類の動物へのこのようなポリペプチド化合物の効率的な搬送にとって所望されている物理化学的特性を有することにおいて有利であることがあり、その理由はこれらのポリペプチド化合物のＮ−末端、Ｃ−末端及び中心部分の極性、中性又は非極性的性質が所望の搬送方法に適合するように選ぶことによる、このポリペプチド化合物の真人な数の位宜での種々の置換によって可能となるその柔軟性による。

これらのペプチドは一般に、血清成長ホルモン値の上昇を促進することにおいて、Ａ２位に別の種類のアミノ酸残基を有しているほとんどの種類の当量のペプチドよりも高いレベルの薬効を示す。

ＤＢＮａｌペプチドが、その高いレベルの薬効のために最も好ましい。

）１ｉｓ−Ｄ　１３　Ｎａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｎｌ（ｚ及びＡｏ−旧ｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｚペプチド（例えばＡｌａ−Ｈｉｓ−［１βＮａ　ｌ　−Ａ　ｌａ　−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ −Ｌｙｓ　−ＮＨｚ）、Ａｏ−旧５−ＤＰｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｚペプチド例えばＡｌａ−Ｈｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｎ）Ｉｔ並びにその有機又は無機付加塩が現状最も好ましい。これらの化合物は血清成長ホルモン値の上昇の促進にて高いレベルの薬効を有すことが示されている。

本発明の化合物は、動物における血液のＧ）ｌ値を高めるため；牛における乳汁産生を高めるため；動物、例えば哺乳動物（例えば人間、羊、牛及び豚）更には魚類、鳥類、その他のを椎動物及び甲殻類動物における成長を高めるため；並びに哺乳動物におけるむ（毛（ウール）及び／又は毛皮の産生を高めるために利用されうる。身体の成長の度合いは動物種の性別及び年令、投与する成長ホルモン放出化合物の量及び性質、投与の経路等に依存する。

本発明の新規のポリペプチド化合物は通常の溶液及び固相ペプチド化学方法に従って、又は当業界に知られる伝統的な方法により合成されうる。固和合或はペプチドのＣ−末端より開始される。適当な出発材料を、例えば必要な保護化アルファーアミノ酸をクロロメチル化樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂又はパラ−メチル−ベンジルヒドリルアミン（ｐ−Ｍｅ−ＢＩＩＡ）樹脂に結合させることによって準備する。このようなりロロメチル樹脂の一種はバイオ　ラフト　ラボラドリース、リッチモンド、カリフォルニア州により商標名ＢＩＯＢＥＡＤＳ　Ｓχ−１で販売されている。ヒドロキシメチル樹脂の調製はＢｏｄａｎｓｋｙら著、Ｃｈｅ＋ｍ、Ｉｎｄ、（ロンドン）３３゜１５９７　（１９６６）に詳細されている。ＢＨＡ樹脂はＰｉｅｔｔａとＭａｒｓｈａｌ＋のＣｈｅ＋ｗ、Ｃｏ＋＊１１．６５０（１９７０）に詳細されており、そしてこれはベニンスララボラトリース社、ベルモント、カリフォルニア州より商業的に入手できる。

最初の結合の後、有機溶媒中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又は塩酸（）ＩｃＩ）溶液を含む選ばれた酸性試薬により室温にて、このアルファーアミノ保護基は除去されうる。アルファーアミノ保護基を除去した後に残っている保護化アミノ酸は所望の順序において逐次カップル化されうる。各保護化アミノ酸は一般に、塩化メチレン（ＣＨ，ＣＩり又はジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）及びそれらの混合物のような溶液の中の適当なカルボキシル基活性化剤、例えばジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又はジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）を利用して約３倍過剰量において反応させることができる。

所望のアミノ酸配列が完成された後、所望のペプチドは、このペプチドを樹脂から切断せしめるだけでなく、一般に利用されるほとんどの側鎖保ｒ！ｌ基をも切断せしめるような試薬、例えばフッ化水素（ＨＦ）による処理によって樹脂支持体から切断させることができる。

上記の固相手順は当業界によく知られ、そしてＳｔｅｗａｒｔとＹｏｕｎｇ（７）Ｓ（■ｉｄ　ＰＩすｓｅ力沫１ｕ！」ヱ１１邦土と一第２版（ピアース　ケミカル社、ロックフォード、　ＩＬ　１９８４年）に詳細されている。

本発明のペプチド成分を合成するのに用いることのできるいくつかの溶液方法は、Ｂｏｄａｎｓｋｙら著、Ｐｅ　ｔｉｄｅ　Ｓ　ｎｔｈｅｓｉｓ−第２版、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ＋　−−ｚ−ヨーク、　Ｎ、Ｙ、１９７６年に記載されている。

該ペプチドは少なくとも２種類のペプチドフラグメントの縮合反応を包括する溶液相方法によってより好適に合成されるものであろうと考えられている。

この方法はペプチドフラグメントＸ−ＡＩ−ＹとペプチドフラグメントＵ−Ｖ− 一の縮合を含んで成り、ここでＡ１に関してを除く全てのアミノ酸の側鎖は中性であるか又は保護されており、そしてここでＸはＰｒｏｔ、又はＰｒｏｔ、−Ａ０であり、ここでＰｒｏｔ、はＮ−末端保護基を表わし；ＹはＡｌ−Ｑ、　Ａｌａ−Ａｔ−Ｑ＋　Ａｘ−Ａｓ−Ｑ、　Ａｌａ−Ａｔ−Ａｓ−Ｑ＋　Ａｘ−＾３− Ａ４−Ｑ。

＾１ａ−Ａｚ−Ａ！−Ａａ−Ｑ、　Ａｌａ−Ｑ又は−Ｑであり、ここでＹがＱのとき、ＵはＪ−Ａｔ−Ａ３−Ａ４又はＪ−Ａｌａ−Ａｘ−Ａｓ−Ａｍである。ＹがＡｌａ−Ｑのとき、ＵはＪ−Ａｔ−Ａｓ−Ａ４である。ＹがＡ、−Ｑ又はＡｌａ−Ａｔ−Ｑのとき、ＵはＪ−Ａ３−Ａ４である。ＹがＡｘ−Ａ３−Ｑ又はＡｌａ−Ａ、−Ａ３−Ｑのとき、ＵはＪ−Ａ４である。ＹがＡｘ−Ａ３−Ａ４−Ｑ又はＡｌａ−Ａｚ−Ａｓ−Ａ４−Ｑのとき、Ｕはｊである。■はＡ。

又はＺである。■がＡ、のと（、ＷはＡ４−Ｚ又はＺである。■がＺのとき、Ｗは存在しない、　ＡＩ＋　Ａｓ、　Ａ４及びＺは本明細書に定義した通りである。この状況において、Ａ２はＤβＮａｌ又はＤＰｈｅであり、そしてＡ、はＴｒｐである。

Ｑはペプチドフラグメントのカルボキシ末端であり、そしてこれは〜ＯＲ’又は −Ｍであり、ここでＭは窒素含有求核試薬によって交換されることのできる成分であり、そしてＲ３はＨ５１〜約１０個の炭素原子を含むアルキル基、６〜約１２個の炭素原子を有するアリール基、又は７〜約１２個の炭素原子を有するアリールアルキル基であり；Ｊは表示のフラグメントのアミン末端を表わし、そしてこれはＨであるか、又はカンプリング反応を妨げることのない保護基、例えばベンジルである。

次に保護基を除去する。他方、このようにして生成した保護ペプチドを、より大きなペプチドを作る更なる縮合に利用することもできる。

好ましい方法は、本明細書に参考として組入れた、Ｊｏｈｎ　Ｃ，ＨｕｂｂｓとＳ、Ｗ、　Ｐａｒｋｅｒによる１９９０年７月２４日出願された米国特許出願第一一、表題’Ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｉｎｇ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」により完全に詳細されている。

本発明の他の態様に従い、動物の血液における成長ホルモンの放出の促進及び／又はその値の高揚のための方法を提供する。この方法は、有効投与量の少なくとも一種類の上記ポリペプチドを動物に投与することを含んで成る。

本発明の化合物は経口、非経口（筋肉内（ｉ、ｍ、）　、腹膜腔内（ｉ、ｐ、）、静脈内（ｉ、ｖ、）又は皮下（ｓ、ｃ、）注射）、経鼻、経腸、経直腸又は乱丁的投与経路によって投与でき、そして各投与経路に適する投与形態において製剤化されうる。非経口投与が好ましい。

経口投与のための固形投与形態にはカプセル、錠剤、ピル、粉末及び顆粒が含まれる。このような固形投与形態において、該活性化合物は少なくとも一種類の不活性担体、例えばスクロース、ラクトース又はデンプンと混合されている。このような投与形態は、不活性希釈剤以外の実用上通常である更なる物質、例えば潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも含んで成りうる。カプセル、錠剤及びピルの場合、この投与形態は緩衝剤も含んで成りうる０錠剤及びピルは更に経腸被贋物が施されていることができる。

経口投与のための液状投与形態には、当業界に一般的に利用されている不活性希釈剤、例えば水を含む乳濁物、溶液、懸濁物、シロップ、エリフサ−が含まれる。このような不活性希釈剤の他に、この組成物は補助剤、例えば湿潤剤、乳化及び懸濁助剤、並びに甘味料、風味料及び芳香剤も含みうる。

非経口投与のための本発明に従う製剤は無菌の水性又は非水性溶液、懸濁物又は乳濁物を含む、非水性溶媒又は媒体の例はポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油及びコーン油、ゼラチン、並びに注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。これらの投与形態は補助剤、例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤も含みうる。これらは、例えば細菌が残留するフィルターで濾過することにより、除菌剤をこの組成物の中に含ませることにより、この組成物を照射せしめることにより、又はこの組成物を熱することにより除菌されうる。これらは使用直前に無面水の媒体、又はその他のいく種かの無菌注射可能媒体の中において作製することもできうる。

本発明の新規化合物は、成長ホルモン放出ホルモン（即ち、天然の成長ホルモン放出ホルモン、類似体及びその機能的な同等物）と組合せて投与する場合、並びに成長ホルモンの放出を促進するその他の種類の化合物、例えば成長ホルモン放出ペプチド（本明細書に参考として組入れた米国特許第４．８８０，７７８号を参照のこと）と組合せて投与する場合にもを用である。このような組合せは本発明の成長ホルモン放出ペプチドを投与する特に好ましい手段を表わし、なぜならこのような組合せは、この組合せの各成分に関するそれぞれの応答の合計により予測されるものよりもより多くの成長ホルモンの放出を促進するから、即ち、この組合せは個々の成分についての相乗的応答を提供するからである。成長ホルモン放出ペプチドの組合せの投与についての更なる詳細は上記の特許の中に詳細されている。このような相乗的化合物は、成長ホルモン放出ホルモンレセプタ〜での拮抗薬として５．又はソマトスフチンの作用を阻害するものとして働くことが好ましい。この相乗作用は二元的である、即ち本発明と相乗化合物のうちの一種より成るものであるか、又は複数の相乗化合物を含む。

投与すべき本発明のポリペブチＦ又はポリペプチドの組合せの量は数多くの要因、例えば処置すべき特定の動物、その年令及び性別、所望する治療的効果、投与経路４．並びにどのポリペプチド又はポリペプチドの組合せを利用するかに依存して変わりうる。しかしながら、全ての場合におい−でも、受容動物の血液における成長ホルモンの放出を促進する及びその値を高揚するのに有効な投与量が利用される０通常、この投与値は体重ｋｇ当り約０．１μｇ〜１０ｍｇの総ポリペプチドの範囲に属する。好ましい量は本明細書に基づいて、熟練された当業者によって容易に経験的に決定されうる。

例えば人間においてその投与方法がｉ、ｖ、であるとき、好ましい投与量は体重ｋｇ当り約０．１μｇ−ｔｏμｇの総ポリペプチドの範囲内、より好ましくは体重ｋｇ当り約０．５μｇ〜５μｇの総ポリペプチドの範囲内、更により好ましくは体重ｋｇ当り約０．７μｇ〜約３．０μｇの範囲内にある。成長ホルモン放出ペプチドの組合せを利用する場合、より少ない量の当該ペプチドが利用されうる。例えば、当該ペプチドを、例えば米国特許第４，８８０，７７８号のグループ ■に属する相乗化合物、例えばＧ）Ｉｌｌ）ｌと組合せると、その好ましい範囲は、体重ｋｇ当り当該化合物（例えば、＾１ａ４ｉｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａｈ−Ｚ、　Ａｌａ−）１ｉｓ−ＤＰｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ− ＤＰｈｅ−Ａｍ−７、又はＨｉｓ−Ｄβ１ｌａｌ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ− Ａ、−Ｚ）約０．１μｇ〜約５μｇ、及び相乗化合物（例えばＧＨＲＨ）約０．５μｇ〜約１５．０μｇにあり、そしてより好ましくは、体重ｋｇ当り本化合物的０．１μｇ〜約３μｇ及び相乗的合物約１．０μｇ〜約３．０μｇである。

投与方法が経口的である場合、より多くの量が一般に必要とされる。例えば人間における経口投与に関して、その投与値は典型的には体重ｋｇ当り約３０μｇ〜約６００μｇの該ポリペプチド、より好ましくは体重ｋｇ当り約７０μｇ〜約５００μｇの該ポリペプチド、更により好ましくは体重ｋｇ当り約１００μｇ〜約３５０μｇの総該ポリペプチドである。牛は人間とほぼ同程度の投与値を必要とするが、ラットは一、Ｍにより高い投与値を必要とする。この正確な値は本明細書に基づいて容易に経験的に決定されうる。

前記した通り一般に、成長ホルモン放出ペプチドの組合せ投与は、この組合せの相乗作用に起因して、個々の成長ホルモン放出化合物に関して必要とされる投与値と比べて、同等の応答を得るのにより少ない投与量の個々の成長ホルモン放出化合物の利用を可能とする。

活性成分として上記のポリペプチドの有機及び無機付加塩及びその組合せを、任意的に担体、希釈剤、遅延放出マトリックス又は被覆物と一緒に含んで成る組成物も本発明の範囲に属する。

本発明の範囲に属すると考えられる該成長ホルモン放出化合物の有機又は無機付加塩及びその組合せ物には、有機成分、例えば酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、トシレート、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフタレートのような塩類；無機成分、例えば族■　（即ち、アルカリ金属塩）、族■（即ち、アルカリ土類金属塩）アンモニウム及びプロタミン塩類、亜鉛、鉄等と対イオン、例えば塩化物、臭化物、硫酸塩、リン酸塩及び上記の有機成分との塩が含まれる。

人間対象体への投与が考慮されるときは薬学的に許容されている塩が好ましい、このような塩には薬学産業に一般に利用されている無毒なアルカリ金属、アルカリ土類金属及びアンモニラ塩、例えば、当業界によく知られている方法によって調製されたナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、バリウム、アンモニウム及びプロタミン塩が含まれる。これは、本発明の化合物を適当な有機又は無機酸と反応させることにより一般的に調製される無毒な酸付加塩も含んでいる０代表的な塩には、塩酸塩、臭酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、ラウリン酸塩、硼酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシレート、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチレート等が含まれる。

以下の限定でない実施例により、本発明を更に説明する。

実ＩＬＬ戒３ＪゴＩ／％７放隅−ベブ３Ｈｙ＜御創成バラメチルベンズヒドリルアミン塩酸塩（ｐＭｅ−ＢＯＡ−ＢＣＩ）ｍ脂ｆ：、商業的に入手できる自動化ペプチド合成装置の反応容器に入れる。

この樹脂に、約５ミリモル／グラムの装填量となるまで遊離アミンを置換する。

該化合物は、適当な活性剤、例えばＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いて、ペプチド配列のカルボキシ末端から出発して個々のアミノ酸をカップリングすることによって調製する０個々のアミノ酸のアルファーアミンは例えば、Ｌ−プチロキンカルポニル誘導体（ｔ−Ｂｏｅ）として保護し、そしてその反応性側鎖官能基は表に記載の通りに保護した。

表−土ペプチド人　のための当な　鍍久覆ｌアルギニン　：Ｎｇ−トシルアスパラギン酸二〇−ベンジルシスティン　：Ｓ−パラ−メチルベンジルグルタミン酸　二〇−ベンジルヒスチジン　、Ｎｉ″’−１シルリジン　：Ｎ”−２，４−ジクロロペンジルオキシカルポニメチオニン　フＳ− スルホキシドセリン　：０−ベンジルスレオニン　二〇−ベンジルトリプトファン：Ｎ”−ホルミルチロシン第一アミノ酸の一体化の前に、この樹脂をジクロロメタン（Ｃ［ＩｔＣｌ．：約１０ｓ＋１／樹脂−ｇ）を伴って三面撹拌しくそれぞれ約１分間）、ジクロロメタン中のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）　（９０　：１０；約１０■ｌ／樹脂−ｇ）を伴って三面撹拌しくそれぞれ約２分間）、次いでジクロロメタン（約１０ｍｌ／樹脂膳ｇ）を伴って三面撹拌（それぞれ約１分間）した。この第−及びそれに続く名アミノ酸を、予め生成した対称性無水物を用い、この樹脂の総結合容量の約３．０倍の適切に保護されたアミノ酸及び適当量のジクロロメタン中のこの樹脂の総結合容量の約１．５倍のＤＣＣを用いて、この樹脂に結合させた。

低ジクロロメタン溶解性を有するアミノ酸に関しては、均質な溶液を得るためにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（　ＤＭＦ）を加えた．一般に、この対称性無水物はこの反応容器に導入する３０分前に室温以下で調製する．対称性無水物の調製に基づいて生成されるジシクロへキシルウレアは、反応容器の中へのこの溶液の重力濾過を介して除く．アミノ酸の樹脂へのカンプリングの進行は、ニンヒドリンのような試薬（これは第−及び第二アミンと反応する）を用いる比色試験を介して一般にモニターする．保護アミノ酸の樹脂への完全なカップリングが終了したら（〉９９％）、アルファーアミン保護基を酸性試薬による処理によって除去する．一般に利用される試薬はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、アニソール及びジクロロメタン（４５　：　２　：　５３）の？８ＨＬより成る．個々のアミノ酸残基それぞれの樹脂上への一体化に関する完全なる手順は表２に記載した。

ｔ＝ｌｊ −　への　々のアミノ　の− 試Ｊ　■　！皿Ｚ這且１、ジクロロメタン　３　１分２、ＴＦＡ，アニソール、ジクロロメタン　１　２分（４５　：　２　：　５３）３、ＴＦＡ、アニソール、ジクロロメタン　１　２０分（４５　：　２　：　５３）４、ジクロロメタン　３　１分５、　ＤＩＥＡ、ジクロロメタン　３　２分（１０　：　９０）６、ジクロロメタン　３　１分７、予備生成対称性無水物　１　１５−１２０分１８、ジクロロメタン　３　１分９、イソ−プロパツール　３　１分１０、ジクロロメタン　３　１分１１、カップリング反応００の進行のモニター１２、個々のアミノ酸それぞれに関して段階１−１２を繰り返す＊　カップリング時間は個々のアミノ酸に依存する。

車重　カップリングの程度は比色試験により一般的にモニターされうる．もしカップリングが不完全なら、同一種類のアミノ酸を、段階７−１１を繰り返すことによって再カップル化させることができる。

カップリングが完全なものとなったら、次のアミノ酸をカップルさせることができる。

このペプチド合成方法を利用することにより、新規の樹脂結合化ポリペプチド、例えばＡ、−ＤβＮａ１−ＡＨ−Ｔｒｐ−Ａ５−Ａｉ−Ｒ及びＡＩ−ＤＩ’１ｅ−Ａｓ −Ｔｒｐ−Ａｓ−Ａｓ−Ｒが得られる（ここで、ＡＩ、Ａ３　、Ａｓ及びＡ、は上記に定義の通りであり、そしてＲはポリマー樹脂であり、そして構成アミノ酸の官能基は必要ならば適当な保護基によって保護されている）、ｔＢｉ製した特定の配列（適切な保護形態にする）には、旧ｓ−ＤβＮａ１−＾１ａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒ。

Ａｌａ−Ｈｉｓ−ＤβＮａ１−＾１ａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒ。

Ａｌａ−Ｈｉｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒ。

Ｈｉｓ−Ａｌａ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒ。

Ｈｉｓ−Ｄ　αＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒ。

Ｈｉｓ−ＤＡｓｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒ。

）１ｉｓ−ＤＣｙｓ（ＳＭｅ）−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒ。

Ｈ４５−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａｌａ−１，ｙｓ−Ｒ。

）１ｉｓ−Ｄ　／３　Ｎａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｒ。

Ａｌａ、Ｈｉｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｒ。

Ｔｒｙ−ＤＡｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｒ。

Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｄｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＲＡｌａ−Ｈｉｓ−Ｄ）Ｉｉｓ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒ及びＡｌａ−旧５− ＤＰｒｏ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｒが含まれる。

ｎＪＰＬ乙ラットに１主！！ｉ」αＬ体潜則ｌ欣直チャールス　リバー　ラボラトリーズ（ウィルミングトン、ＭＡ）より、未熟雌スプラグードーリ−（Ｓｐｒａｇｕｅ− Ｄａｗｌｅｙ）ラットを入手した。到着した後、それらを２５°Ｃにて、１４　：　１０の時間での明：暗周期にて飼育した。水及びブリナ（Ｐｕｒｉｎａ）ラット食品を任意に与えた。子供は生後２１日までその母親と一緒にした。

生後２６日口のラット（処置グループ当り６匹のラット）を、ペプチドでｉ、ｖ、処置する２０分前に５０ｍｇ／ｋｇのベンドパルビタールにより腹膜腔量的に麻酔した。０．１％のゼラチンを含む正常食塩水を、このペプチドの静脈内注射（ｉ、ｖ、　）のための媒体とした。麻酔した体重５５−６５ｇのラットに、表３．４及び５に示す一定量の成長ホルモン放出化合物をｉ、ｖ、注射した。注射は０．２ｍｌの溶液を頚動脈にすることによる。

全ての動物を、最終試験注射（表３及び４を参照のこと）の１０分後にギロチンによって殺した。血液ＧＨ値の測定のための大動脈血を斬首後に集めた。血液を凝血させた後、これを遠心にかけ、そしてその血清をこの凝血から分離させた。

関節炎、糖尿病並びに消化系及び腎臓病の国家学会（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、　Ｄｉａｂｅｔｅｓａｎｄ　Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ　ａｎｄ　Ｋｉｄｎｅｙ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ（ＮＩＡＤＤＫ））により開発された、以下の手順に従う成長ホルモン値のラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）測定のサンプリングの日まで血清を凍結保存した。試薬は一般的に、（ａ）緩衝液、（ｂ）「コールド」　（即ち、非放射性）標準品又は分析する未知の血清サンプル、（ｃ）放射性ヨード化成長ホルモン抗原、及び（ｄ）成長ホルモン抗血清、の順で低温（約４°Ｃ）にて一度にＲＩＡ分析チューブに加える。

試薬添加は一般に、約１　：　３０，０００　（抗血清対総液体容量；容ｉｌ：容量）の最終１？ＩＡチユーブ希釈が達せられるように行う。

次に一般に、複合成長ホルモン抗血清に結合し且つそれを沈殿せしめる第二抗体（例えばヤギ又はウサギ抗−サル　ガンマ−グロブリン血清）の添加の前に、この混合試薬を室温で約２４時間インキュベートする。　ＲＩＡチューブの沈殿内容物を次に、ガンマーシンチレーシ！ンカウンターにおいて、特定の時間におけるカウント数について分析した。放射活性カウント数対成長ホルモン（ＧＨ）　（ｉをプロットすることによって標準曲線を作成した。未知試料のＧＷ（ｉを次に標準曲線と照らし合わせて決定した。

血清ＧＨは、ナシぢナルホルモン及びビテ二イタリープログラムにより提供された試薬を伴ってＲＩＡにより測定した、表３．４．５及び６は、０．６１国際ユニット／ｗ１ｇ　［１１／菖ｇ）のラットＧＨＩ準品より換真してｎｇ／ｍｌにおいて記録した。データーは平均（ａｉ平均値標準誤差（ＳＥｌ’ｌ）として記録した。統計的分析はスチューデントの１−検査により行った。ＮＳは、相違が統計学的有意差を有さないことを意味する０表３．４．５及び６においては、６匹のラット・による試験の平均値を示している。

表＝１（最終注射の１０分後に動物を殺している）表−」ユベンドパルビタール麻酔ラットにおける、成長ホルモン放出化合によ　准　れた　ＧＨｎ　ｍｌ（最終注射の１０分後にラットを殺している）Ａ１ａＨｉｓ肛狂Ａ１ａＴｒｐＤＰｈｅＬｙｓＮＨｚ　１１１±２５　．３　９０１±２１表−１表３．４．５及び６は、本発明の化合物が、このような化合物の投与されたラットの血液のおける成長ホルモンの放出を促進し、そしてその値を高揚せしめることを示す０本発明のペプチドは活性を示すが、Ａｔ位にて置換（例えばＤＡｓｐ、　ＣＤｙｓ（ＳＭｅ）、　ＤＨｉｓ及びＤＰｒ。

により）されている当量の化合物はこのような活性を示さない。これらの表は、Ｈｉｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｌが、Ａ２位にＤＴｒｐ。

ＤαＮａ１．　ＤＡｓｐ及びＤＣｙｓ　（ＳＭｅ）を有する化合物よりも活性であることも示す、同様に、Ａｌａ−Ｈｉｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２は当量のＤＴｒｐ化合物よりもより活性である。

２施ＩＧＨ−人物の組ムせ　の１実施例２の手順を繰り返したが、ただしラットは麻酔もペンドパルビクールによる処置もせず、そしてペプチドの組合せ物をラットに投与した。投与化合物、投与値及びその結果を表６に記載する。

麦−ｌベンドパルビタール麻酔ラットにおける、成長ホルモン八　によ　１゛　れた　ＧＨｌ（最終注射の１０分後に動物を殺している）表−二一本発明の化合物とグループ１及び／又はグループ３北名上辺非産箆土ス」止　ｌＣ’　１０　２０４±５０ＧＩＩＲＨｃ３　１３１＋５０ＴＰ’　１０　７９±２９ ★グループ１と３の化合物は米国特許第４，８８０．７７８号に詳細されている。

ａ　−１７５−１＝Ｈｉｓ−Ｄ　５Ｎａｌ−Ａｌａ−丁ｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ −ＮＯｘ　（本発明に属する化合物）ｂ　−Ｃ−Ｈｌｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｚ（比較化合物）ｄ　−ＴＰ＝Ｔｙｒ−ＤＡｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＮＨｌ　（グループ３化合物）表７は、本発明の化合物が、代表的なグループ１及び／又はグループ３化合物と一緒に投与されたときに相乗応答を表わすことを示している６表７における結果は更に、本発明の化合物が、相乗応答を有することが既に示されている比較化合物（Ｃ）より得られるものよりも高い相乗応答を有していることを示している。

ｚ隻班互ペプチド　るためのペプチドフラグメントの　ム　・−カ土星トーマス　ツーバー　キャピラリー融点装置を用いて融点を決定することができる。赤外線（ＩＲ）スペクトルはパーキン−エルマーモデル１３７又はニコレット　モデル５０Ｘ光度計上で記録でき、且つ波数（ｃ−’　）において記録される。質量スペクトル（？ＩＳ）はＶＧアナ’Ｊ　ｆイカルＬ＋ｄ、モデルＺＡＢ −ＩＰマススペクトル計を用いて、ＥＴ（電子面ｌり、ＦＤ（′Ｍｉ界吸収）又はＦＡＢ（高速原子衝撃）法において得られる。　ＧＣＭＳは、ヘリウム担体ガスを利用する３０ｍの［１８５キヤピラリーカラム（Ｊ＆Ｗサイエンティフィック）の付いているフィニガン４０２３ＧＣＭＳを用いて得られうる。旋光性は、ルドルフ　リサーチにより製造されたオートボール■ボラリメーターを用いて測定できる。

’ＨＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚで作動させたＪＥＯＬ　ＧＸ−４００ＮＭＲ装！又は２７０ＭＨｚで作動させたＪＥＯＬ　ＧＸ−２７０１１ＭＲ装置により得られうる。

これらの装置は０．７１１２以下の日常デジタル分解が可能である。化学シフトは内部３−（トリメチルシリル）−テトラシュウテロプロピオン酸ナトリウム（ＴＳＰ）に対する百分率において表わされる。

高性能液体クロマトグラフィーは、Ｌ−５０００勾配コントローラー及びバイダック（Ｖｙｄａｃ）　２０１　ＴＰＩＯＩＯ又は２１８　ＴＰＩＯＩＯ半製品カラムに接続された６５５Ａポンプより成る日立システムを用いて行うことができる。０．２％のトリフルオロ酢酸を含む水とメタノールの組合せが溶出溶媒として利用できる。一般に、対象の化合物は、１分間当り約１〜２％の割合で上昇する有機成分の勾配を伴って、１分間当り６ｍｌの速流で溶出されうる０次にこの化合物をＬＫＢ　２１４０ダイオード　アレーＵ、Ｖ、検出器を用いて適当な波長で検出する０次に積分はネルジン　アナリティカル　ソフトウェア−（バージョン３．６）を用いて行われうる。

反応は何らかの記載がない限り、窒素又はアルゴンの不活性雰囲気下で行われうる。無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ　、　Ｕ、Ｖ、級）及びジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）はバーブインク　アンド　ジッンソンより購入し、そしてビンから直接利用した。

Ａ、トリブペチドフラグメントー、ＨＮ−丁ｒ　−ＤＰｈｅ−Ｌ　５（Ｂｏｃ） −ＮＨｚの量Ｎα−ベンジルオキシカルボニル−（Ｎ’　−ｔ−ブトキシカルボニびドライ　テトラヒドロフラン（ＴＨＦ　、　１５００■ｌ）の１０℃の溶液に、Ｎα−ベンジルオキシカルボニル−（Ｎ”　−ｔ−ブトキシカルボニル）リジン（１，１８０ｇ、０．４７４モル）をゆっくり加えた。この添加の際に気体の発生が観察された　Ｎ６−ベンジルオキジカルボ二を調製した（無水物；　ＮＯ，気体をＴＨＦに５−１０℃で通している）。

中間体重の生成が完全となったと判断された後（気体発生が終了したり、及びその後更に４５分間にわたってアンモニアガスの連続流を維持した。ｉを含む溶液の２回に分けた添加に基づき、白色沈殿物が生成された０反応は室温にまで温め、そして１５時間撹拌することで行った。真空でスラリーから溶媒を排除した。

残留物を水の中でスラリー状にし、そして得られる固形物を吸引濾過によって回収した。

Ｎ６−ｔ−ブ　キシカルボニル−ｉジン−アミド　５メタノール（Ｍｅａｎ、　１００ｍ１）中のりジンアミド４　（１８１，４８ｇ、０．４７９モル）の溶液を、アルゴンの雰囲気下でメタノール（２５０ｓｌ）中の５％のｐｄ／Ｃ（５ｇ）の触媒スラリーに加えた。この反応混合物に水素を吹き込み（約１５分間）、次いでこの反応を、ＩＩＰＬｃ分析がこの反応を終了していることを示すまで水素の雰囲気下で撹拌した（３６時間）０次に水素雰囲気をアルゴンに置き換えた。この反応溶液をＣｅ１ｉｔｅ　（商標）バッドに通して清浄にし、そして溶媒を吸引除去して固形物を得た。

Ｎα−ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−フェニルアラニン（６゜１２６．３９　ｇ、０．４２３モル）をＴＩＩＦ　（５００■１）中のＣＤＩ（２，６６，０３ｇ、０．４０９モル）の１０℃の溶液にゆっくりと加えた。添加の際に気体の発生が観察された。気体発生が終了したら、リジンアミド５　（１１０，７５ｇ、０．４５２モル）をＴＨＦ　（５００ｓｌ）中の溶液として加えた。約４８時間後、固形物を除くためにこの混合物を濾過した。この溶液を真空で濃縮した。

得られた残渣を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、　５００ｍ１）に取り込ませ、次いで分液ろう斗の中で以下の通りに洗った：１　、　ａｑＨｃｌ　（ＩＮ、３　Ｘ５００ｍ１）　：洗浄物ｌのｐＨ１約８；洗浄後のｐＨ，１，２、水　（５００ｓｌ）、３　、　ａｑＮａｚｃＯｓ　（１／　２飽和化、２　Ｘ５００−１）、これを濾過して生成結晶固形物（ｉ）を集める、４、　水　（３Ｘ５００ｓ＋１）。

有機層をＭｇ５Ｏａで乾燥させた。清浄化後、この溶媒を真空で除去した。得られる残渣を高温ＥｔＯＡｃより再結晶化させ、主の第２サンプルを得た。

旦ニフェニ火ヱラ三恐ヨ二けげ−ｔ−１トキシカルボニル　リジン−アミド、９アミド８　（１２０，５３ｇ、０．２２９モル）のメタノール性溶液（１５００閣ｌ）をＭｅｎｕ　（２００ｓｌ）中の５％のＰｄ／Ｃ（５０ｇ）の触媒スラリーに加えた。

アルゴン雰囲気を水素に置き換えた０反応が終了したことをＨＰＬＣ分析が示したら（約４時間）、水素雰囲気をアルゴンに１き換えた。

次にこの反応溶液をＣｅ１ｉｔｅ　（商標）バッドに通して清浄化し、そしてこの濾液を真空で残渣にした。このジペプチド産物はトリペプチドＪ１の調製に直接利用できる。

Ｎα−ベンジ少ｊキシ力ルポニノＬ＝−）リプトフィルーＤ−フェニルアラニル −ひ４二」〜ブトキシカルボニル　リジン−アミド、１２Ｎα−ペンジルオキシ力ルポニルートリプトファン（１０，６７，６０ｇ、０．２００モル）　、ＴＨＦ（５００ｓｌ）及びＣＤＩ（２，３３，０５ｇ、０．２０４モル）の１０工の溶液を、気体の発生が終了するまで撹拌し続けた０次のこの反応混合物に、ＴＨＦ　（約２００ｍ１）中の９　（４０，８ｇ、０．１０３モル）の溶液を加えた。この溶液を室温に温めて１５時間反応させた。次に生成された固形物を吸引濾過により集めた。この濾液を真空での濃縮により残留物にした。得られる残留物と固形物を再び合わせ、そして若干温めたＥｔＯＡｃ（４，０００ｇ＋１）に取り込ませた。この溶液を室温に冷やすことで、固形物が生成した。この固形物を吸引濾過により集めた。

この固形物を高温ＭｅＯＨより再結晶化させ、精製トリペプチド１を得た。このＲｔＯＡｃ濾液（第一結晶化に由来）を分液ろう斗の中で以下の通りに洗った：１、　ａｑＨｃｌ　（ＩＮ、２　Ｘ５００ｍ１）、２、水（ＩＸ５００■１）、３　、　ａｑＮａｔｃＯｓ　（１／　２飽和、２　Ｘ５００ｓ＋１）、４　、ａｑＮａｃｌ　（Ｉ　Ｘ５００ｍ１）。

この有機層をＭｇ５Ｏａで乾燥させ、そして吸引濾過によって清浄化した。この濾液の溶媒を真空で除去した。得られる残渣を再びＥｔＯＡｃに取り込ませ、乾燥固形物を得た。この固形物は高温ＭｅＯＨ再結晶化にかけて、白色固形物として耳の第２産物を得ることができる。

トＩプトフ　ルーＤ−フェニルアーニルーー仁さテ！二重１」二１±水旦之カルボニル　！ジンーアミ′ トリペプチド１ｆｉ（６４，５９ｇ、０．０９１モル）のメタノール性溶液（１５００閣ｌ）を、アルゴン雰囲気下で５％のＰｄ／Ｃ（５ｇ）及びＭｅＯＨ（２５０ｓｌ）の触媒スラリーに加えた。更なる容量のＭｅＱｌ（（２２５０＠ｌ）を加えた。アルゴン雰囲気を水素に置き換えて反応を行った（約２４時間）０反応が終了したら、水素雰囲気をアルゴンに置き換えた。この溶液をＣｅ１ｔｔｅ　（商標）バンドに通して清浄化し、そしてその濾液を真空で濃縮して白色固形物としてのトリペプチド■を得た。

ＥｔＯＡｃ（４００ｓｌ）とＤ−ベーターナフチルアラニンメチルエステル塩酸塩（谷、０．６２モル）の溶液を飽和炭酸ナトリウム（４０抛ｌ）と０．８Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（約５００■ｌ）で洗った。得られる水性相を除去しくｐＨ８，５）、そして有機層を半飽和水性ＮａｚＣＯｓ（１５０ｓｌ）　、次いで水（５０ｓ＋１）で順に洗った。遊離塩基形態の互を、真空での酢酸エチル層の濃縮によって単離した。

ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，約９５ｇ、０．４６モル）を、Ｎα −ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジン（１９，１４３，５ｇ　。

０．５０モル）、Ｎ−ヒドロキシスクシニミドＣＩ（ＯＮＳｕ、２３．０．６２モル）及び新たに調製したＤ？ｌＦ　（約３Ｌ）中の遊離塩基形態のＵ（約０．５２モル）の−５°Ｃ（氷−エタノール浴槽）の溶液に加えた。得られる反応溶液を室温に温めながら、２４時間撹拌した。この反応が終了しているかどうかを調べるためにＨＰ　Ｌ　Ｃ分析を利用するべきである。もし終了していなかったら、この反応溶液を約−５℃に冷やし、そしてこの反応物に更にジシクロへキシルカルボジイミド（約０．１７モル）を加える９次にこの反応混合物を室温にまで温めながら更に２４時間撹拌する０次にこの混合物を濾過してジシクロへキシルウレア（ＤＣＵ）を除去した。この濾液に水（ＩＬ）を加え、そして得られる溶液を真空でｆＡ縮した。得られる残渣を水性のＩＮのｌｌＣｌに取り込ませた（約ＩＴ、；この水性相のｐＨがｐＨ１となるまで）０次にこの水性相を酢酸エチルで２回に分けて抽出した（各ＩＬ）、酢酸エチルの層を廃棄した０次にこの水性相のｐ）Ｉを２Ｎの冷水酸化ナトリウム（５０（１ｗｌ）及び水酸化ナト・リウムペレノトの添加によってｔｌｌ整した。この中和の際、この溶液は低温酢酸エチル（ＩＬ）の添加によって低温に保った。この水性相のｐＨが約７に到達したとき、大量の固形物又は油状物が通常得られる。この沈漬を吸引濾過又はデカンチーシランにより集め、そして半飽和炭酸ナトリウム（２Ｘ　１５００閣ｌ）　、水（６×１５００ｍｌ）及び酢酸エチル（３Ｘ　１０００ｍｌ）で順に洗った。得られる物質を一定の重量となるまで高真空のもとで乾かした。この物質は更に精製することなく直接加水分解にかけることができる。

ＤＰｈｅペプチドは、Ｄ−ベーターナフチルアラニンメチルエステル塩酸塩の代わりに、化合ＩＦ１２２としてＤ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩を用いて調製することができる。

水酸化ナトリウム水溶液（１９２■１．０．０８ｇ／ｍｌの溶液、０．３８モル）をジペプチド益（約０．３８モル）、水（３６０ｓｌ）及びＭｅＯＨ（約６Ｌ）の溶液に加えた。加水分解が完全となるまで（約２４時間）、この溶液を室温で撹拌した。出発ペプチドの消失はＨＰＬＣ分析によって確認した。この溶液を真空で濃縮して残渣とし、これを水（約ＩＬ）に溶かした０次にこの水性層（ｐＨ約１０）を分液ろう斗の中でＥｔＯＡｃ（２Ｘ５００ｓ＋１）で抽出した。酢酸エチル層を廃棄した。得られる水性相を濃ＨＣＩで約５のｐＨに調整し、この時点で白色固形物又は油状物の沈殿物が通常得られる。この生成物を集め、そして真空で乾かした。

アルゴンの雰囲気下のもとで、ジペプチドＮα−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジル−Ｄ−ベーターナフチル　アラニン（２６゜０．２５３モル）をＤＭＦ　（８０１）＋１）中のｌｌ０ＮＳｕ（２３，０，５０５モル）の溶液に加えた。この溶液に、アラニンのメチルエステル塩酸塩（川、０゜３０３モル）、Ｎ− メチルモルホリンＱｆｉ、０．３０３モル）及びＤＭＦ　（２００ｓｌ　）を加えた。得られる溶液を１０°Ｃに冷やし、この時点で塩化メチレン（２７３ｓ＋１　）中のジシクロへキシルカルボジイミド（２４，０，２６５モル）を加えた０反応が終了するまでこの反応温度を１０℃に保ちながら、反応をＨＰＬＣによりモニターした。数日（約４日）経過後にこの反応が完了するまで進行しなかったら、２４　（０，０８０モル）を更に添加し、そしてこの反応混合物を１０℃ で更に一日撹拌させる０反応はここでも完了するまで（典型的には約５日）　ＨＰＬＣ分析によってモニターすに、°コの濾液を真空で残渣となるまで濃縮した。得られる残渣を酢酸エチルに叡の込ませ、そＬ７て半飽和水性ＮむＣＯｓ　（２Ｘ　５００■ｌ）で抽出１７た、酢酸１丁チル相をＭｇ５Ｏ，で乾かした。得られる溶液を清浄化し、そし２て真空で残渣となるまでｉａｍした。

孟ｌｊ」へＪη アルゴンの雰囲気下のもとで、炭素上のパラジウム５％（３ｇ）を、メタノール（５００＠１）中のＮａ−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジル−Ｄ−ベーターナフチル　アラニル−アラニンメチルエステル硯（７１ミリモル）に慎重に加えた。１５分間アルゴンをこの反応混合物に吹き込み、次いで酢酸（１５ｍｌ、０．２６モル）に加えた。ここで得られる混合物に１５分にわたって水素を吹き込み（水面下に）、次いで反応を水素負荷（ｌａｔｅ）のもとで室温にて撹拌した。あるとすればどれぐらい出発材料が残っているかをモニターするためにＨＰＬＣ分析を用いた。残っているなら、この反応混合に慎重にアルゴンを一回吹き込み（水面下に３０分間にわたって）、そして炭素上のパラジウム５％（２，５ｇ）を更に加える０次に水素を再導入する。再びアルゴンをこの反応混合物に吹き込み、そして得られる溶液を珪藻土のパッドで濾過して清浄化した。ここで得られる溶液を真空でａ縮して産物を得た。この産物の一部を水（５００ｍ　ｌ　）の中で溶解又はスラリー状にした。この物質に酢酸エチル及び飽和水性炭酸ナトリウムを加えた。得られる酢酸エチル層又は固形物の単離は、酢酸を含まない物質（皿）を提供する。

Ｂｏｃ−アラニンＮ−ヒドキシスクシニミドエスール　３１ジシクロへキシルカルボジイミド（４３ミリモル）を、塩化メチレン（２５０■ｌ）　中のＢｏａ− アラニン（４３ミリモル）とＮ−ヒドロキシスクシニミド（４８ミリモル）の室温の溶液に加えた。この溶液を一夜撹拌した０次にこの反応混合物を濾過してジシクロへキシルウレアを除去し、そしてこの清浄な溶液を真空のもとで濃縮して産物を獲得し、これを使用するまでアルゴンの雰囲気のもとで一２０℃に保存した。

ｂε遅ｌ工■」Ｌハ１−ＡＩδ〜Ｏｉす上記のアラニンエステル（２３，９ミリモル）を、無水ジメチルホルムアミドＣＤＭＰ、　２００ｍ１）中のＨｉｓ−Ｄ βＮａｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ（３０）　（２０，１ミリモル）の溶液に加えた。得られる均質な溶液を室温で週末の間撹拌し、次いでモニターにかけたやごの反応混合物の中にトリブベチドが事実正金つく残っていないことをＨＰＬＣ分析が示したなら（例えば約３日で）、この反応物に水（５０ｍｌ）を加え、そして得られる混合物を互に一日撹拌した０次にこの溶液を真空で濃縮した。得られる残渣を酢酸エチルの中に溶かし、次いで半飽和水性炭酸ナトリウム（２Ｘ　３００ｍ＋１）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ４及びＮａ２ＳＯ２で乾かし、そして真空で濃縮してテトラペプチドを得た。この物質を互に精製することなく、Ｂｏｃ− Ａｌａ−Ｈｉｓ−０７９Ｎａ１−Ａｌａ−０■の調製に用いた。

Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｄ　Ｎａ１−Ａｌａ−ＯＨ，３３２Ｎの水性水酸化ナトリウム溶液（７，５ｍｌ、１５ミリモル）をメタノール（５０抛り及びＢｏｃ −Ａｌａ−Ｈｉｓ−ＤβＮａｌ−Ａｌａ−ＯＭｅ　（Ｉ３．７ミリモル）を含む、水溶液（２００■ｌ）に加えた。この反応物を室温で一夜撹拌させた後、ＨＰＬＣは残っている出発材料の量を表示する。これが本質的に完全となっていたら（およそ−夜）、この溶液を真空で約２００ｍ１の容量となるまで濃縮した。水（１００＋１　）を加え、そしてｐＨを２Ｎの水酸化ナトリウム（１ｍｌ）の添加によって約１２に調整したや得られる溶液を酢酸エチル（２ｘ　５００ｇ＋１　）で抽出した。酢酸エチルの層を廃棄した。水性相のｐＨを水性ＨＣ［、の添加により、産物の沈殿を通常もたらすｐＨ約５に調整した。この沈殿を促進するためには水性相の容量を小さくすることが重要である。この産物から水性相をデカント除去し、そしてこの産物を水（２Ｘ５０■１）ですすいだ、単離した産物を真空で一定重量となるまで乾かした。

Ｄ、ヘプ　ペプチドＢｏＣ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｄ　Ｎａ１−＾１ａ−Ｔｒ　−Ｄ −Ｐｈｅ−Ｌ　５（Ｂｏｃ）−ＮＩＩ３４　るためのペプチドフーグメントの　ム二種類のペプチド、Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｄ−βＮａ１−Ａｌａ−ＯＲ（３３，２，６ミリモル）及びＴｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｚ　（１３，２，８ミリモル）を無水ＤＭＦに溶かし、そして得られる溶液を真空で濃縮した。この予備的な濃縮は、存在しうる全ての微量のメタノールを除去するために行った。

得られるペプチド混合物をＤＭＦに再溶解し、次いでＮ−ヒドロキシスクシニミド（５，１ミリモル）加えた０次にここで得られる溶液を、＝２゛Ｃの溶液温度となるように冷やし、次に塩化メチレン（３，５ｍ１）中の溶液としてのジシクロへキシルカルボジイミド（３，４ミリモル）を加えた。得られる反応混合物を一２°Ｃの溶液温度にて３日間撹拌した０反応が本質的に完了しているかどうかを調べるためにＨＰＬＣ分析を利用した。この期間の経過後にこれが終了していなかったら、更にジシクロへキシルカルボジイミドを加え、次いで得られる反応混合物を−２”Ｃで更に一日撹拌させることができる。その翌日（全部で４日間）に）ＩＰＬＣ分析が再び不完全な反応を示したら、反応混合物の冷却をやめるべきである。この反応物の溶液温度を室温まで数時間（約８）かけて室温（２５ °Ｃ）にまでゆっくりと上昇させることができる。この反応混合物を室温で一夜撹拌する０反応が完了するまでこの手順を繰り返す０次に水を加え、そしてこの混合物を互に一日撹拌した。この反応溶液を次に濾過してジシクロへキシルウレアを除き、そしてこの濾液を粘性油となるまで真空で濃縮した。この残渣に酢酸エチル及び半飽和水性炭酸ナトリウム（２００細ｌ）を加えた。この二相混合物をロータリーエバポレーター上で約１時間強く回転させた。焼結ガラスろう斗での濾過によって生成された固形物全てを集め、産物を得た。有機相を水で洗い、次いで真空のもとて一定重量となるまで乾かして産物を得た。

Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｄ　Ｎａ１−Ａｌａ−Ｔｒ　−ＤＰｈｅ−Ｌ　５−ＮＨＪｌ：ヘプタペプチドＢｏｃ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−ＤβＮａ１−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−（Ｂｏｃ）　−ＮＨｚ　（３４，１，０２ミリモル）を、塩化メチレン（１５ｍｌ）中のトリフルオロ酢酸（３０＋１）　、ジメチルスルフィド（１４■ｌ）、１．２エタンジチオール（７ｍｌ）及びアニソール（２，２Ｉｌｌ）の室温の溶液に加えた。

この均質反応混合物を１５分間撹拌した。この時間が経過した後、粗製生物学的活性ペプチド生成物用の沈殿を生じせしめるために無水エーテル（４５０■ｌ　）を加えた。この生成物は焼結ガラスろう斗で濾過、又はデカンテーションによって単離した。得られる生成物を水に溶かし、そして凍結乾燥した。この凍結乾燥生成物は、Ｌｉｅｈｒｏｐｒｅｐ（商標）ＲＰ−１８カラムバツキング材料（Ｃ１８，２５〜４０ｎａ、不規則メツシュ）を含む２６Ｘ　４６０■ｌのガラスカラムでの中圧クロマトグラフィーによって更に精製できる。水における溶液としてのペプチドの注入後、５〜２０時間にわたる０〜２５％のメタノールのゆるやかな勾配、その後の約４８時間にわたる２５〜５５％のメタノール勾配を伴う一分間当り９ｍｌの流速においてこのカラムを溶出させた０次にこの勾配のメタノール濃度を１時間当り２％の割合で上昇させた。溶出の際、この溶媒組成物の残りを、０．２％のトリフルオロ酢酸を含む水にした。生成物（顕）をＨＰＬＣにより同定し、そしてこれを適切な溶出容量の濃縮により単離した。

本発明を好ましい！！様の特定なる参考によって詳細に説明した。

しかしながら、本明細書の熟慮に基づいて本発明の範囲を逸脱することなく改良がなされることを当業者は認識しうるであろう。

要約書動物に投与したときに成長ホルモンの放出を促進せしめる新規なるポリペプチドを詳細する。このようなポリペプチドは式Ａｓ−ＤβＮａ１−Ａ５−Ｔｒｐ−Ａｓ−＾、−２又はＡＷＩＱ−ＤＰｈｅ−Ａｓ−丁ｒｐ−Ａｓ−Ａｈ−Ｚを有する。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成５年１月２２日

Claims

【特許請求の範囲】

１．次式のペプチド：【配列があります】（式中、Ａ１、はＨｉｓ，３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ，Ｈｉｓ−Ａｌａ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ａｏ−Ｈｉｓ又はＡｏ−３（ＮＭｅ）Ｈｉｓであり、ここでＡｏは任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（Ｏ），ＤＯＰＡ，Ａｂｕ又は式Ｌ−Ａｏのペプチドであり、ここでＬはＨ，ＤＯＰＡ，ＬｙＳ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｃｌｙ−Ｐｈｅ，Ｔｙｒ−Ａｌａ −Ｇｌｙ−Ｔｈｒ又はＴｙｒ−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｓａｒであり；Ａ２はＤβＮａｌ又はＤＰｈｅであり；Ａ３はＡｌａ，Ｇｌｙ又はＳｅｒであり；Ａ５はＤＰｈｅ，Ｄ／Ｌβ（Ｍｅ）Ｐｈｅ又は（ＮＭｅ）ＤＰｈｃであり；Ａ６はＢ−Ｇ又はＧであり、ここでＢは任意の天然Ｌ−アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、又はＨ２Ｎ（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈであり、ここでｎ＝２〜１２であり、そしてＧはＡｒｇ，ｉＬｙｓ，Ｌｙｓ又はＯｒｎであり；ＺはポリペプチドのＣ末端基であるか又はＣ末端アミノ酸と末端基であり、そしてＺは−ＣＯＮＲ１Ｒ２，−ＣＯＯＲ１，−ＣＨ２ＯＲ１，−Ｇｌｙ−Ｚ′，−Ｍｅｔ−Ｚ′，−Ｌｙｓ −Ｚ′，−Ｃｙｓ−Ｚ′，−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｚ′又は−Ａｌａ−　−Ｔｙｒ− Ｚ′であり、ここでＺ′は−ＣＯＮＲ１Ｒ２，−ＣＯＯＲ１又は−ＣＨ２ＯＲ１であり、ここでＲ１はＨ、１〜約６個の炭素原子を有するアルキル基、３〜約８個の炭素原子を有するシクロアルキル基、２〜約８個の炭素原子を有するアルケルニ基、又は６〜約１２個の炭素原子を有するアリール基であり；Ｒ２はＲ１として定義したものと同じであり、そして同一であっても異なっていてもよい）及びその有機又は無機的な薬学的に許容されている塩。
２．Ａ１がＨｉｓ，Ａｌａ，Ｈｉｓ−Ａｌａ又はＡｏ−Ｈｉｓである、請求の範囲１に記載のペプチド。
３．Ａ３がＡｌａである、請求の範囲１に記載のペプチド。
４．ＡｏがＡｌａ，Ｌｙｓ又はＧｌｕであり；Ａ３がＡｌａであり；Ａ６がＬｙｓ，ｉＬｙｓ，Ａｌａ−Ｌｙｓ，Ａｌａ−ａｌａ−Ｌｙｓ又はＨ２Ｎ（ＣＨ２）ｎＣＯ−Ｌｙｓ（ここでｎは４−８である）である、請求の範囲２に記載のペプチド。
５．Ａ２がＤβＮａｌである、請求の範囲１に記載のペプチド。
６．次式、【配列があります】で表わされる、請求の範囲１に記載のペプチド。
７．Ａ２がＤＰｈｅである、請求の範囲１に記載のペプチド。
８．次式、【配列があります】で表わされる、請求の範囲６に記載のペプチド。
９．次式、【配列があります】又は【配列があります】で表わされる、請求の範囲１に記載のペプチド。
１０．ＡｏがＡｌａである、請求の範囲９に記載のペプチド。
１１．Ｚが−ＣＯＮＨ２である、請求の範囲６，９，１８又は２０に記載のペプチド。
１２．次式、【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】又は【配列があります】で表わせる、請求の範囲１２に記載のペプチド。
１３．Ａ６がＧである、請求の範囲２，６，９，１８又は２０に記載のペプチド。
１４．次式、【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】又は【配列があります】で表わせる、請求の範囲８に記載のペプチド。
１５．次式、【配列があります】で表わせる、請求の範囲１に記載のペプチド。
１６．Ｚが−ＣＯＮＨ２である請求の範囲１５に記載のペプチド。
１７．次式、【配列があります】で表わせる、請求の範囲１６に記載のペプチド。
１８．次式、【配列があります】で表わせる、請求の範囲１に記載のペプチド。
１９．次式、【配列があります】で表わせる、請求の範囲１８に記載のペプチド。
２０．次式、【配列があります】又は【配列があります】で表わせる、請求の範囲１に記載のペプチド。
２１．次式、【配列があります】又は【配列があります】で表わせる、請求の範囲２０に記載のペプチド。
２２．動物における成長ホルモンの放出レベルを促進する方法であって、この動物に有効量を請求の範囲１，４，５，７，９，１２，１４又は１５に記載のペプチドのうちの少なくとも一種を投与することを含んで成る方法。
２３．動物が哺乳動物である、請求の範囲２１に記載の方法。
２４．動物が人間である、請求の範囲２１に記載の方法。
２５．請求の範囲１，４，５，７，９，１２，１４又は１５に記載のペプチドのうちの少なくとも一種及び薬学的に許容されている担体又は希釈剤を含んで成る、動物における成長ホルモンの放出のレベルを促進せしめるための薬学的組成物。
２６．Ａｏが任意の天然アミノ酸である、請求の範囲２に記載のペプチド。
２７．請求の範囲１に記載のペプチドを、第二化合物と相乗的な量において投与することによって血液成長ホルモンの放出を促進し且つその値を高揚せしめる方法であって、前記第二化合物が、成長ホルモン放出ホルモンレセプターにて拮抗薬として働くか、又はソマトスタチンの作用を阻害するものとして働くような化合物である方法。
２８．成長ホルモン放出ホルモンレセプターにて拮抗薬として働くか、又はソマトスタチンの作用を阻害するものとして働くような第二化合物を更に含んで成る、請求の範囲２２に記載の薬学的組成物。
２９．血液成長ホルモンの放出を促進し且つその値を高揚せしめるための医薬品の製造における、次式の化合物：【配列があります】（式中、Ａ１はＨｉｓ，３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ，Ｈｉｓ−Ａｌａ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ａｏ−Ｈｉｓ又はＡｏ−３（ＮＭｅ）Ｈｉｓであり、ここでＡｏは任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（Ｏ），ＤＯＰＡ，Ａｂｕ又は式Ｌ−Ａｏのペプチドであり、ここでＬはＨ，ＤＯＰＡ，ＬｙｓＰｈｅ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ又はＴｙｒ−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｓａｒであり；Ａ２はＤβＮａｌ又はＤＰｈｅであり；Ａ３はＡｌａ，Ｇｌｙ又はＳｅｒであり；Ａ５はＤＰｈｅ，Ｄ／Ｌβ（Ｍｅ）Ｐｈｅ又は（ＮＭｅ）ＯＰｈｅであり；Ａ６はＢ−Ｇ又はＧである）の利用。
３０．次式の化合物、【配列があります】（式中、Ａ１はＨｉｓ，３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ，Ｈｉｓ−Ａｌａ，ａｌａ，Ｔｙｒ，Ａｏ−Ｈｉｓ又はＡｏ−３（ＮＭｅ）Ｈｉｓであり、ここでＡｏは任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（Ｏ）１ＤＯＰＡ，Ａｂｕ又は式Ｌ−Ａｏのペプチドであり、ここでＬはＨ，ＤＯＰＡ，Ｌｙｓ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ｔｙｒ−Ａｌａ− Ｇｌｙ−Ｔｈｒ又はＴｙｒ−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｓａｒであり；Ａ２はＤβＮａｌ又はＤＰｈｅであり；Ａ３はＡｌａ，Ｇｌｙ又はＳｅｒであり；Ａ５はＤＰｈｅ，Ｄ／Ｌβ（Ｍｅ）Ｐｈｅ又は（ＮＭｅ）ＤＰｈｅであり；Ａ６はＢ−Ｇ又はＧである）の製造のための方法であって、この化合物を生成するためにアミノ酸又はアミノ酸誘導体をカップリングすることを含んで成る方法。
３１．ペプチドを生成するために、ペプチドフラグメントの縮合反応を含んで成る、請求の範囲１に記載のペプチドの調製のための方法。