JPH055738A - 遊離ハプトグロビンの定量方法 - Google Patents
遊離ハプトグロビンの定量方法Info
- Publication number
- JPH055738A JPH055738A JP18207691A JP18207691A JPH055738A JP H055738 A JPH055738 A JP H055738A JP 18207691 A JP18207691 A JP 18207691A JP 18207691 A JP18207691 A JP 18207691A JP H055738 A JPH055738 A JP H055738A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- haptoglobin
- type
- antibody
- free
- monoclonal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000014702 Haptoglobin Human genes 0.000 title claims abstract description 63
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 title claims abstract description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 6
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 5
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 5
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 5
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 claims description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims 1
- -1 microtiter plate Substances 0.000 claims 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 32
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 32
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 15
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 11
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 abstract description 9
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 abstract description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 abstract description 6
- 238000007689 inspection Methods 0.000 abstract 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003307 reticuloendothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 特殊な検査機器、施設を必要とせず、短時間
で検査のできる高感度総ハプトグロビンの測定方法を提
供する。 【構成】 遊離ヘモグロビンを固定化した実験器具、ま
たは遊離ヘモグロビンを固定化した、アフィニティーク
ロマトグラフィー担体を封入したカートリッジを用い
る。 【効果】 従来、検査方法が確立されていなかった遊離
ハプトグロビンの定量を可能にした。更に、測定に要す
る費用も従来法より安価に設定することが可能となり、
自動分析機器の利用も可能となる。
で検査のできる高感度総ハプトグロビンの測定方法を提
供する。 【構成】 遊離ヘモグロビンを固定化した実験器具、ま
たは遊離ヘモグロビンを固定化した、アフィニティーク
ロマトグラフィー担体を封入したカートリッジを用い
る。 【効果】 従来、検査方法が確立されていなかった遊離
ハプトグロビンの定量を可能にした。更に、測定に要す
る費用も従来法より安価に設定することが可能となり、
自動分析機器の利用も可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は遊離ハプトグロビンの定
量方法に関する。
量方法に関する。
【０００２】
【従来技術】ハプトグロビン（Ｈｐ）は、血清α２−グ
ロブリンに属する糖タンパクで、溶血によって生ずるヘ
モグロビン（Ｈｂ）と強く結合して、安定な複合体を形
成する。Ｈｐ−Ｈｂ複合体形成によるマイクロ分子化
は、Ｈｂの腎臓からの流失を防ぐだけではなく、Ｈｂに
よる腎細尿管障害を防止する効果もある。Ｈｐ−Ｈｂ複
合体は、網内系細胞により、摂取、処理される。
ロブリンに属する糖タンパクで、溶血によって生ずるヘ
モグロビン（Ｈｂ）と強く結合して、安定な複合体を形
成する。Ｈｐ−Ｈｂ複合体形成によるマイクロ分子化
は、Ｈｂの腎臓からの流失を防ぐだけではなく、Ｈｂに
よる腎細尿管障害を防止する効果もある。Ｈｐ−Ｈｂ複
合体は、網内系細胞により、摂取、処理される。
【０００３】ハプトグロビンには、Ｈｐ１−１型（分子
量約 １０万）、Ｈｐ２−１型（分子量約４０万）、Ｈ
ｐ２−１型（分子量約２２万）の３種の血清型が存在
し、更に、６種の亜型が存在する。従来、Ｍａｎｃｉｎ
ｉ法により総ハプトグロビンを求める際には、３種の血
清型により、ハプトグロビンの拡散速度が異なる為、実
測値にファクターを掛けて値を算出する必要があり、直
接、総ハプトグロビンを定量することは困難だった。ま
た、従来は、遊離ハプトグロビンを直接定量する方法は
存在しなかった。
量約 １０万）、Ｈｐ２−１型（分子量約４０万）、Ｈ
ｐ２−１型（分子量約２２万）の３種の血清型が存在
し、更に、６種の亜型が存在する。従来、Ｍａｎｃｉｎ
ｉ法により総ハプトグロビンを求める際には、３種の血
清型により、ハプトグロビンの拡散速度が異なる為、実
測値にファクターを掛けて値を算出する必要があり、直
接、総ハプトグロビンを定量することは困難だった。ま
た、従来は、遊離ハプトグロビンを直接定量する方法は
存在しなかった。
【０００４】本発明者は、担体に固定化した遊離ヘモグ
ロビンに遊離ハプトグロビンを結合させ、Ｈｐ−Ｈｂ複
合体を形成させた後、更に、酵素標識ハプトグロビン抗
体を結合させ、発色する方法が、遊離ハプトグロビンの
定量に最適であることを見出し、本発明を完成した。
ロビンに遊離ハプトグロビンを結合させ、Ｈｐ−Ｈｂ複
合体を形成させた後、更に、酵素標識ハプトグロビン抗
体を結合させ、発色する方法が、遊離ハプトグロビンの
定量に最適であることを見出し、本発明を完成した。
【０００５】
【実施例】以下に実施例を挙げて、本発明を更に詳細に
説明するが、本発明は以下の実施例には何ら限定される
ものではない。
説明するが、本発明は以下の実施例には何ら限定される
ものではない。
【０００６】実施例１ Ａ．遊離ハプトグロビン定量キットの構成 （１）遊離ヘモグロビンを固定化したアガロースを封入
したカートリッジ （２）標準遊離ハプトグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 Ｂ．測定操作 （１）小試験管に、検体１ｍｌ（１検体につき３本）と
遊離ヘモグロビンを固定化したアガロースを封入レたカ
ートリッジ各１個を分取、混和し、室温で３０分間イン
キュベートした。 （２）各試験管の内容液を捨て、試験管内の遊離ヘモダ
ロビンを固定化したアガロースを封入したカートリッジ
を洗浄液２ｍｌで２回洗浄、水切りをした。 （３）（２）の操作をした各試験管（１検体につき３
本）に、３種類の酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モ
ノクローナル１−１型抗体または、モノクローナル２−
１型抗体、または、モノクローナル２−２型抗体）２ｍ
ｌを別々に添加、混和し、３７℃で３０分間インキュベ
ートした。 （４）（３）の操作をした各試験管の内容液を捨て、試
験管内の遊離ヘモグロビンを固定化したアガロースを封
入したカートリッジを洗浄液２ｍｌで３回洗浄、水切り
をした。 （５）（４）の操作をした各試験管に酵素基質液５００
ｕｌを添加、混和し、３７℃で３０分間インキュベート
した。 （６）（５）の操作をした各試験管に反応停止液２ｍｌ
を添加、混和した。 （７）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （８）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
したカートリッジ （２）標準遊離ハプトグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 Ｂ．測定操作 （１）小試験管に、検体１ｍｌ（１検体につき３本）と
遊離ヘモグロビンを固定化したアガロースを封入レたカ
ートリッジ各１個を分取、混和し、室温で３０分間イン
キュベートした。 （２）各試験管の内容液を捨て、試験管内の遊離ヘモダ
ロビンを固定化したアガロースを封入したカートリッジ
を洗浄液２ｍｌで２回洗浄、水切りをした。 （３）（２）の操作をした各試験管（１検体につき３
本）に、３種類の酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モ
ノクローナル１−１型抗体または、モノクローナル２−
１型抗体、または、モノクローナル２−２型抗体）２ｍ
ｌを別々に添加、混和し、３７℃で３０分間インキュベ
ートした。 （４）（３）の操作をした各試験管の内容液を捨て、試
験管内の遊離ヘモグロビンを固定化したアガロースを封
入したカートリッジを洗浄液２ｍｌで３回洗浄、水切り
をした。 （５）（４）の操作をした各試験管に酵素基質液５００
ｕｌを添加、混和し、３７℃で３０分間インキュベート
した。 （６）（５）の操作をした各試験管に反応停止液２ｍｌ
を添加、混和した。 （７）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （８）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
【０００７】実施例２． Ａ．遊離ハプトグロビン定量キットの構成 （１）反応性官能基を固相化し、更に遊離ヘモグロビン
を共有結合させたビーズ （２）標準遊離ハプトグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 Ｂ．測定操作 （１）小試験管に、検体１ｍｌ（１検体につき ３本）
と遊離ヘモグロビンを共有結合させたビーズ各１個を分
取、混和し、室温で３０分間インキュベートした。 （２）各試験管の内容液を捨て、試験管内の遊離ヘモグ
ロビンを共有結合させたビーズを洗浄液２ｍｌで２回洗
浄した。 （３）（２）の操作をした各試験管（１検体につき３
本）に、３種類の酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モ
ノクローナル１−１ 型抗体または、モノクローナル２
−１型抗体、または、モノクローナル ２−２ 型抗
体）２ｍｌを別々に添加、混和し、３７℃で３０分間イ
ンキュベートした。 （４）（３）の操作をした各試験管の内容液を捨て、試
験管内の遊離ヘモグロビンを共有結合させたビーズを洗
浄液２ｍｌで３回洗浄した。 （５）新たに準備した各試験管に酵素基質液５００ｕｌ
を秤量し、（４）の操作をしたビーズを移し、混和後、
３７℃で３０分間インキュベートした。 （６）（５）の操作をした各試験管に反応停止液２ｍｌ
を添加、混和した。 （７）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （８）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
を共有結合させたビーズ （２）標準遊離ハプトグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 Ｂ．測定操作 （１）小試験管に、検体１ｍｌ（１検体につき ３本）
と遊離ヘモグロビンを共有結合させたビーズ各１個を分
取、混和し、室温で３０分間インキュベートした。 （２）各試験管の内容液を捨て、試験管内の遊離ヘモグ
ロビンを共有結合させたビーズを洗浄液２ｍｌで２回洗
浄した。 （３）（２）の操作をした各試験管（１検体につき３
本）に、３種類の酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モ
ノクローナル１−１ 型抗体または、モノクローナル２
−１型抗体、または、モノクローナル ２−２ 型抗
体）２ｍｌを別々に添加、混和し、３７℃で３０分間イ
ンキュベートした。 （４）（３）の操作をした各試験管の内容液を捨て、試
験管内の遊離ヘモグロビンを共有結合させたビーズを洗
浄液２ｍｌで３回洗浄した。 （５）新たに準備した各試験管に酵素基質液５００ｕｌ
を秤量し、（４）の操作をしたビーズを移し、混和後、
３７℃で３０分間インキュベートした。 （６）（５）の操作をした各試験管に反応停止液２ｍｌ
を添加、混和した。 （７）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （８）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
【０００８】実施例３． Ａ．遊離ハプトグロビン定量キットの構成 （１）遊離ヘモグロビンを共有結合させたマイクロタイ
タープレート （２）標準遊離ヘモグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 Ｂ．測定操作 （１）遊離ヘモグロビンを共有結合させたマイクロタイ
タープレートに、検体２００ｕｌを秤量、混和し、室温
で３０分間インキュベートした。 （２）各マイクロタイタープレートの内容液を捨て、各
マイクロタイタープレートを洗浄液３００ｕｌで３回洗
浄した。 （３）（２）の操作をしたマイクロタイタープレートの
各穴（１検体につき３穴に、３種類の酵素標識遊離ハプ
トグロビン抗体（モノクローナル１−１型抗体または、
モノクローナル２−１型抗体、または、モノクローナル
２−２型抗体）２００ｕｌを別々に添加、混和し、３７
℃で３０分間インキュベートした。 （４）（３）の操作をした各マイクロタイタープレート
の内容液を捨て、各試験管を洗浄液３００ｕｌで３回洗
浄した。 （５）（４）の操作をした各マイクロタイタープレート
に酵素基質液２００ｕｌを添加、混和し、３７℃で３０
分間インキュベートした。 （６）（５）の操作をした各試験管に反応停止液１００
ｕｌを添加、混和した。 （７）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （８）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
タープレート （２）標準遊離ヘモグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 Ｂ．測定操作 （１）遊離ヘモグロビンを共有結合させたマイクロタイ
タープレートに、検体２００ｕｌを秤量、混和し、室温
で３０分間インキュベートした。 （２）各マイクロタイタープレートの内容液を捨て、各
マイクロタイタープレートを洗浄液３００ｕｌで３回洗
浄した。 （３）（２）の操作をしたマイクロタイタープレートの
各穴（１検体につき３穴に、３種類の酵素標識遊離ハプ
トグロビン抗体（モノクローナル１−１型抗体または、
モノクローナル２−１型抗体、または、モノクローナル
２−２型抗体）２００ｕｌを別々に添加、混和し、３７
℃で３０分間インキュベートした。 （４）（３）の操作をした各マイクロタイタープレート
の内容液を捨て、各試験管を洗浄液３００ｕｌで３回洗
浄した。 （５）（４）の操作をした各マイクロタイタープレート
に酵素基質液２００ｕｌを添加、混和し、３７℃で３０
分間インキュベートした。 （６）（５）の操作をした各試験管に反応停止液１００
ｕｌを添加、混和した。 （７）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （８）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
【０００９】実施例４． Ａ．遊離ハプトグロビン定量キットの構成 （１）反応性官能基に遊離ヘモグロビンを共有結合させ
た試験管 （２）標準遊離ハプトグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 Ｂ．測定操作 （１）反応性官能基を固体相化し、更に遊離ヘモグロビ
ンを共有結合させた試験管に、検体１ｍｌを秤量、混和
し、室温で３０分間インキュベートした。 （２）各試験管の内容液を捨て、各試験管を洗浄液３ｍ
ｌで３回洗浄した。 （３）（２）の操作をした各試験管（１検体につき３
本）に、３種類の酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モ
ノクローナル１−１型抗体または、モノクローナル２−
１型抗体、または、モノクローナル２−２ 型抗体）２
ｍｌを別々に添加、混和し、３７℃で３０分間インキュ
ベートした。 （４）（３）の操作をした各試験管の内容液を捨て、各
試験管を洗浄液３ｍｌで３回洗浄した。 （５）（４）の操作をした各試験管に酵素基質液１ｍｌ
を添加、混和し、３７℃で３０分間インキュベートし
た。 （６）（５）の操作をした各試験管に反応停止液１ｍｌ
を添加、混和した。 （７）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （８）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
た試験管 （２）標準遊離ハプトグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 Ｂ．測定操作 （１）反応性官能基を固体相化し、更に遊離ヘモグロビ
ンを共有結合させた試験管に、検体１ｍｌを秤量、混和
し、室温で３０分間インキュベートした。 （２）各試験管の内容液を捨て、各試験管を洗浄液３ｍ
ｌで３回洗浄した。 （３）（２）の操作をした各試験管（１検体につき３
本）に、３種類の酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モ
ノクローナル１−１型抗体または、モノクローナル２−
１型抗体、または、モノクローナル２−２ 型抗体）２
ｍｌを別々に添加、混和し、３７℃で３０分間インキュ
ベートした。 （４）（３）の操作をした各試験管の内容液を捨て、各
試験管を洗浄液３ｍｌで３回洗浄した。 （５）（４）の操作をした各試験管に酵素基質液１ｍｌ
を添加、混和し、３７℃で３０分間インキュベートし
た。 （６）（５）の操作をした各試験管に反応停止液１ｍｌ
を添加、混和した。 （７）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （８）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
【００１０】実施例５． Ａ．遊離ハプトグロビン定量キットの構成 （１）遊離ヘモグロビンを固定化したアガロースを封入
したカートリッジ （２）標準遊離ハプトグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 （８）ハプトグロビン抗体感作ラテックス（モノクロー
ナル１−１ 型抗体） ハプトグロビン抗体感作ラテックス（モノクローナル２
−１ 型抗体） ハプトグロビン抗体感作ラテックス（モノクローナル２
−２ 型抗体） Ｂ．測定操作 （１）スライドグラスの３ヶ所に検体各３０ｕｌを取
り、３種類のハプトグロビン感作ラテックス３０ｕｌを
添加、混和し、室温で５分間インキュベートし、凝集像
を観察し、ハプトグロビン型を決定した。 （２）小試験管に、検体１ｍｌと遊離ヘモグロビンを固
定化したアガロースを封入したカートリッジ各１個を分
取、混和し、室温で３０分間インキュベートした。 （３）各試験管の内容液を捨て、試験管内の遊離ヘモグ
ロビンを固定化したアガロースを封入したカートリッジ
を洗浄液２ｍｌで２回洗浄、水切りをした。 （４）（３）の操作をした各試験管に、既知の型の酵素
標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル１−１型
抗体または、モノクローナル２−１型抗体、または、モ
ノクローナル２−２型抗体）２ｍｌを添加、混和し、３
７℃で３０分間インキュベートした。 （５）（４）の操作をした各試験管の内容液を捨て、試
験管内の遊離ヘモグロビンを固定化したアガロースを封
入したカートリッジを洗浄液２ｍｌで３回洗浄、水切り
をした。 （６）（５）の操作をした各試験管に酵素基質液５００
ｕｌを添加、混和し、３７℃で３０分間インキュベート
した。 （７）（６）の操作をした各試験管に反応停止液２ｍｌ
を添加、混和した。 （８）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （９）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
したカートリッジ （２）標準遊離ハプトグロビン （３）酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナ
ル１−１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
１ 型抗体） 酵素標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル２−
２ 型抗体） （４）洗浄液 （５）酵素基質 （６）緩衝液 （７）反応停止液 （８）ハプトグロビン抗体感作ラテックス（モノクロー
ナル１−１ 型抗体） ハプトグロビン抗体感作ラテックス（モノクローナル２
−１ 型抗体） ハプトグロビン抗体感作ラテックス（モノクローナル２
−２ 型抗体） Ｂ．測定操作 （１）スライドグラスの３ヶ所に検体各３０ｕｌを取
り、３種類のハプトグロビン感作ラテックス３０ｕｌを
添加、混和し、室温で５分間インキュベートし、凝集像
を観察し、ハプトグロビン型を決定した。 （２）小試験管に、検体１ｍｌと遊離ヘモグロビンを固
定化したアガロースを封入したカートリッジ各１個を分
取、混和し、室温で３０分間インキュベートした。 （３）各試験管の内容液を捨て、試験管内の遊離ヘモグ
ロビンを固定化したアガロースを封入したカートリッジ
を洗浄液２ｍｌで２回洗浄、水切りをした。 （４）（３）の操作をした各試験管に、既知の型の酵素
標識遊離ハプトグロビン抗体（モノクローナル１−１型
抗体または、モノクローナル２−１型抗体、または、モ
ノクローナル２−２型抗体）２ｍｌを添加、混和し、３
７℃で３０分間インキュベートした。 （５）（４）の操作をした各試験管の内容液を捨て、試
験管内の遊離ヘモグロビンを固定化したアガロースを封
入したカートリッジを洗浄液２ｍｌで３回洗浄、水切り
をした。 （６）（５）の操作をした各試験管に酵素基質液５００
ｕｌを添加、混和し、３７℃で３０分間インキュベート
した。 （７）（６）の操作をした各試験管に反応停止液２ｍｌ
を添加、混和した。 （８）ブランクを対照にして、４９２ｎｍの吸光度を測
定した。 （９）標準遊離ハプトグロビンを用いて同一操作をして
描いた３種類（１−１型、２−１型、２−２型）の検量
線から検体の遊離ハプトグロビン量を求めた。
【００１１】
【発明の効果】本発明は、遊離ヘモグロビンを固定化し
た実験器具、または遊離ヘモグロビンを固定化したアフ
ィニティークロマトグラフィー担体を封入したカートリ
ッジを用いることにより、従来、検査方法が存在しなか
った遊離ハプトグロビンを定量する為に考案された。本
発明によれば、 （１）従来、不可能であった遊離ハプトグロビンの定量
が可能となる。 （２）従来法（非特異吸着法）に比較して、遊離ヘモグ
ロビンを固定化したアフィニティークロマトグラフィー
担体を封入したカートリッジは、検体を多量に吸着する
ことが可能となり、検体の希釈が不要になる。 （３）従来、定量が不能であった遊離ハブトグロビンの
定量が可能となる。 （４）ＥＩＡ法（サンドイッチ法）と比較して、抗体使
用量が半減する。 という利点がある。
た実験器具、または遊離ヘモグロビンを固定化したアフ
ィニティークロマトグラフィー担体を封入したカートリ
ッジを用いることにより、従来、検査方法が存在しなか
った遊離ハプトグロビンを定量する為に考案された。本
発明によれば、 （１）従来、不可能であった遊離ハプトグロビンの定量
が可能となる。 （２）従来法（非特異吸着法）に比較して、遊離ヘモグ
ロビンを固定化したアフィニティークロマトグラフィー
担体を封入したカートリッジは、検体を多量に吸着する
ことが可能となり、検体の希釈が不要になる。 （３）従来、定量が不能であった遊離ハブトグロビンの
定量が可能となる。 （４）ＥＩＡ法（サンドイッチ法）と比較して、抗体使
用量が半減する。 という利点がある。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】遊離ヘモグロビンを固定化した担体を封入
したカートリッジを用いたハプトグロビンの定量方法。 【請求項２】−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ＝Ｎ−、
−ＣＯＮＨ−等の反応性官能基を固相化し、その官能基
に、遊離ヘモグロビンを共有結合させた試験管、ビー
ズ、マイクロタイタープレート、磁性粒子等の実験器具
を用いたハプトグロビンの定量方法。 【請求項３】「請求項１」、「請求項２」、「請求項
３」の実施の為に構成された遊離ハプトグロビン定量キ
ット。 【請求項４】「請求項１」、「請求項２」、「請求項
３」に記載された遊離ヘモグロビンを共有結合させた実
験器具。 【請求項５】ハプトダロビン抗体（モノクローナル１−
１型抗体、モノクローナル２−１型抗体、モノクローナ
ル２−２型抗体）を感作したラテックスまたは、赤血球
を用いた凝集法によるハプトグロビン型の判定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18207691A JPH055738A (ja) | 1991-04-20 | 1991-04-20 | 遊離ハプトグロビンの定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18207691A JPH055738A (ja) | 1991-04-20 | 1991-04-20 | 遊離ハプトグロビンの定量方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH055738A true JPH055738A (ja) | 1993-01-14 |
Family
ID=16111932
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18207691A Pending JPH055738A (ja) | 1991-04-20 | 1991-04-20 | 遊離ハプトグロビンの定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH055738A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999024833A1 (en) * | 1997-11-12 | 1999-05-20 | The University Court Of The University Of Glasgow | Haptoglobin assay |
| JP2003511701A (ja) * | 1999-10-12 | 2003-03-25 | ザ ユニバーシティー コート オブ ザ ユニバーシティー オブ グラスゴウ | 乳汁中のハプトグロブビンを検出する乳腺炎の検定方法 |
-
1991
- 1991-04-20 JP JP18207691A patent/JPH055738A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999024833A1 (en) * | 1997-11-12 | 1999-05-20 | The University Court Of The University Of Glasgow | Haptoglobin assay |
| US6451550B1 (en) | 1997-11-12 | 2002-09-17 | The University Court Of The University Of Glasgow | Haptoglobin assay |
| JP2003511701A (ja) * | 1999-10-12 | 2003-03-25 | ザ ユニバーシティー コート オブ ザ ユニバーシティー オブ グラスゴウ | 乳汁中のハプトグロブビンを検出する乳腺炎の検定方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5770457A (en) | Rapid oneside single targeting (ROST) immunoassay method | |
| JP2000514196A (ja) | グリコヘモグロビン（％）の定量 | |
| CN111579781A (zh) | 丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒、制备方法及检测方法 | |
| CN101046479B (zh) | 不含目标蛋白质人血清基体物质的制备方法 | |
| JPH06507716A (ja) | Ｈｌａ型判定 | |
| Qi et al. | A new method for ultra-sensitive P24 antigen assay based on near-infrared fluorescent microsphere immunochromatography | |
| CN102621301B (zh) | 一种基于硝酸纤维素膜的蛋白芯片封闭液的制备方法 | |
| JP2682697B2 (ja) | 免疫測定試薬および免疫測定法 | |
| CN102680621B (zh) | 一种化学发光检测技术及其用途 | |
| CN101178404B (zh) | 人类免疫缺陷病毒抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒及其制备方法 | |
| JPH08304397A (ja) | 病原体感染の検出方法 | |
| EP4592675A1 (en) | Hydrophobic disruptor, preparation method therefor, and use thereof | |
| JPH055738A (ja) | 遊離ハプトグロビンの定量方法 | |
| JP2001033453A (ja) | リガンドの測定方法 | |
| GB2217335A (en) | Compositions for isolation and immobilisation of C-reactive protein in body liquids | |
| CN104977412A (zh) | 一种检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素sem的双抗夹心法 | |
| CN120847391B (zh) | 一种样本稀释液及其应用、试剂盒 | |
| RU2129717C1 (ru) | Способ экспресс - диагностики герпетических нейроинфекций у детей | |
| JP2004117068A (ja) | 免疫測定試薬および免疫測定方法 | |
| JPH0353166A (ja) | ヒト体液中の抗原および／または抗体の測定方法およびそのための試験キット | |
| JPH05172809A (ja) | 糞便潜血の特異的検出方法と同方法を用いた糞便潜血定量キット | |
| JP3290520B2 (ja) | 抗リン脂質抗体測定法 | |
| JP3717735B2 (ja) | 免疫固相検定用の固相担体 | |
| EP0324008A4 (en) | A color-coded solid phase analysis method | |
| JPH0694713A (ja) | アンチトロンビンｉｉｉ活性の測定方法とそれを用いたアンチトロンビンｉｉｉ活性の測定キット |