JPH0559380B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0559380B2 JPH0559380B2 JP61177599A JP17759986A JPH0559380B2 JP H0559380 B2 JPH0559380 B2 JP H0559380B2 JP 61177599 A JP61177599 A JP 61177599A JP 17759986 A JP17759986 A JP 17759986A JP H0559380 B2 JPH0559380 B2 JP H0559380B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glycated hemoglobin
- sample
- heating
- unstable
- hemoglobin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/12—Preparation by evaporation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25375—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.]
- Y10T436/255—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.] including use of a solid sorbent, semipermeable membrane, or liquid extraction
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、臨床検査における安定型糖化ヘモグ
ロビンを迅速に測定する方法およびそれに使用さ
れる装置に関するものである。
ロビンを迅速に測定する方法およびそれに使用さ
れる装置に関するものである。
糖化ヘモグロビンとは血液中の糖がその濃度に
比例して赤血球に入つた後に、ヘモグロビンと結
合して生成したものであり、その濃度は過去２〜
３カ月間の血液中の平均的な糖濃度を反映すると
言われている。更に、血糖値や尿糖値と比べ生理
的要因に左右され難いということもあり糖尿病の
診断あるいは糖尿病患者の経過観察の最適な指標
として広く測定されている。
比例して赤血球に入つた後に、ヘモグロビンと結
合して生成したものであり、その濃度は過去２〜
３カ月間の血液中の平均的な糖濃度を反映すると
言われている。更に、血糖値や尿糖値と比べ生理
的要因に左右され難いということもあり糖尿病の
診断あるいは糖尿病患者の経過観察の最適な指標
として広く測定されている。
この糖化ヘモグロビンの主成分は、ヘモグロビ
ンのβ鎖Ｎ末端にグルコースが結合したもので、
その生成は非酵素的反応により二段階の反応で進
行する。すなわち、一段階目の反応では生成した
糖化ヘモグロビンの一部が可逆反応により遊離型
に戻る、いわゆる不安定型糖化ヘモグロビンが生
成するのに対し、二段階目の反応は不可逆反応で
あり、安定型糖化ヘモグロビンが生成する。より
正確な糖尿病の指標としては、この安定型糖化ヘ
モグロビンを測定することが望ましいことは言う
までもない。
ンのβ鎖Ｎ末端にグルコースが結合したもので、
その生成は非酵素的反応により二段階の反応で進
行する。すなわち、一段階目の反応では生成した
糖化ヘモグロビンの一部が可逆反応により遊離型
に戻る、いわゆる不安定型糖化ヘモグロビンが生
成するのに対し、二段階目の反応は不可逆反応で
あり、安定型糖化ヘモグロビンが生成する。より
正確な糖尿病の指標としては、この安定型糖化ヘ
モグロビンを測定することが望ましいことは言う
までもない。
ヘモグロビンと糖化ヘモグロビンを分離するた
めには、その電気的性質の差に基づく方法が多
く、電気泳動法、イオン交換クロマトグラフイー
法などがあり、特に高速液体クロマトグラフイー
法に基づく専用機も市販されている。しかし、こ
れらの方法は通常のヘモグロビンと糖化ヘモグロ
ビンの区別はできるものの不安定型糖化ヘモグロ
ビンと安定型糖化ヘモグロビンの区別はできな
い。
めには、その電気的性質の差に基づく方法が多
く、電気泳動法、イオン交換クロマトグラフイー
法などがあり、特に高速液体クロマトグラフイー
法に基づく専用機も市販されている。しかし、こ
れらの方法は通常のヘモグロビンと糖化ヘモグロ
ビンの区別はできるものの不安定型糖化ヘモグロ
ビンと安定型糖化ヘモグロビンの区別はできな
い。
そこで、安定型糖化ヘモグロビンだけを測定す
るには、あらかじめ前処理により不安定型糖化ヘ
モグロビンを除去する方法がとられる。
るには、あらかじめ前処理により不安定型糖化ヘ
モグロビンを除去する方法がとられる。
その従来法としては、赤血球を生理食塩水中あ
るいはセミカルバジドとアリニンを含む緩衝液中
でふ置する方法、また、ホウ酸などを含む溶血剤
で全血を溶血後ふ置する方法などである。例え
ば、生理食塩水法はふ置に先立ち赤血球を同液で
数回洗浄する必要があるばかりでなく、37℃での
ふ置時間が４時間以上必要である（スベンセン
他、ダイアベトロジア、P.A.Svendsen etal、
Diabetologia、19、130（1980））。また、セミカル
バジドーアニリン法は試薬溶液が不安定であるた
め使用時毎の用時調製が必要であり、37℃でのふ
置時間も30分から１時間を要する「ナタン他、ク
リニカルケミストリー、D.M.Nathan、etal、
Clin.Chem.、28、512（1982）。一方、市販の不安
定型糖化ヘモグロビン除去試薬は安定性の点では
問題ないものの前例同様に37℃で30分前後のふ置
時間が必要であるなどいずれの方法も試料の前処
理が煩雑であつたり、迅速処理に問題があつた。
るいはセミカルバジドとアリニンを含む緩衝液中
でふ置する方法、また、ホウ酸などを含む溶血剤
で全血を溶血後ふ置する方法などである。例え
ば、生理食塩水法はふ置に先立ち赤血球を同液で
数回洗浄する必要があるばかりでなく、37℃での
ふ置時間が４時間以上必要である（スベンセン
他、ダイアベトロジア、P.A.Svendsen etal、
Diabetologia、19、130（1980））。また、セミカル
バジドーアニリン法は試薬溶液が不安定であるた
め使用時毎の用時調製が必要であり、37℃でのふ
置時間も30分から１時間を要する「ナタン他、ク
リニカルケミストリー、D.M.Nathan、etal、
Clin.Chem.、28、512（1982）。一方、市販の不安
定型糖化ヘモグロビン除去試薬は安定性の点では
問題ないものの前例同様に37℃で30分前後のふ置
時間が必要であるなどいずれの方法も試料の前処
理が煩雑であつたり、迅速処理に問題があつた。
更に、安定型糖化ヘモグロビンと不安定型糖化
ヘモグロビンの違い、例えば不安定型では糖水酸
基の２位に水酸基が存在するのに対し安定型では
存在しない、ことを識別し得る酵素（グルコース
酸化酵素）等による酵素処理により不安定型糖化
ヘモグロビンのみを分解して除去する方法も知ら
れている（特開昭59−143957号公報参照）。生理
活性物質である酵素の厳格な基質特異性を利用す
るこの方法では、正確に不安定型糖化ヘモグロビ
ンを除去し得るものの、温度に対して敏感な酵素
試薬を使用することから、その保管や実際の除去
反応を酵素が失活しない温度に管理することが必
要なうえ、除去反応自体は37℃で30分もの放置時
間が必要であるなどの問題があつた。
ヘモグロビンの違い、例えば不安定型では糖水酸
基の２位に水酸基が存在するのに対し安定型では
存在しない、ことを識別し得る酵素（グルコース
酸化酵素）等による酵素処理により不安定型糖化
ヘモグロビンのみを分解して除去する方法も知ら
れている（特開昭59−143957号公報参照）。生理
活性物質である酵素の厳格な基質特異性を利用す
るこの方法では、正確に不安定型糖化ヘモグロビ
ンを除去し得るものの、温度に対して敏感な酵素
試薬を使用することから、その保管や実際の除去
反応を酵素が失活しない温度に管理することが必
要なうえ、除去反応自体は37℃で30分もの放置時
間が必要であるなどの問題があつた。
以上のべたごとく、従来方法では安定型糖化ヘ
モグロビンのみを測定できなかつたり、測定する
為の不安定型糖化ヘモグロビンの除去処理操作が
煩雑で、長時間を要するといつた問題をかかえて
いた。
モグロビンのみを測定できなかつたり、測定する
為の不安定型糖化ヘモグロビンの除去処理操作が
煩雑で、長時間を要するといつた問題をかかえて
いた。
本発明の目的は、このような従来の方法よりも
より簡単な方法で短時間に安定型糖化ヘモグロビ
ンを測定する方法およその際使用される装置を提
供することにある。
より簡単な方法で短時間に安定型糖化ヘモグロビ
ンを測定する方法およその際使用される装置を提
供することにある。
本発明の要旨は、血液試料に不安定型糖化ヘモ
グロビンの除去試薬を含む溶血剤を加えて希釈
し、希釈された試料を、45〜70℃に加熱処理して
前記除去試薬による不安定型糖化ヘモグロビン除
去反応を促進し、続いて分離カラムに注入するこ
とを特徴とする高速液体クロマトグラフイーによ
る安定型糖化ヘモグロビンの測定方法を提供する
ことにある。
グロビンの除去試薬を含む溶血剤を加えて希釈
し、希釈された試料を、45〜70℃に加熱処理して
前記除去試薬による不安定型糖化ヘモグロビン除
去反応を促進し、続いて分離カラムに注入するこ
とを特徴とする高速液体クロマトグラフイーによ
る安定型糖化ヘモグロビンの測定方法を提供する
ことにある。
以下、その詳細を説明する。
本発明で使用される不安定型糖化ヘモグロビン
の除去試薬としては、ホウ酸、フタル酸カリウム
などの他に界面活性剤や防腐剤を含む一般に市販
されているものをそのまま使うことができる。本
発明では、酵素は不安定型糖化ヘモグロビン除去
試薬として使用しない。
の除去試薬としては、ホウ酸、フタル酸カリウム
などの他に界面活性剤や防腐剤を含む一般に市販
されているものをそのまま使うことができる。本
発明では、酵素は不安定型糖化ヘモグロビン除去
試薬として使用しない。
また、溶血剤とは、同様に一般に市販されてい
るものを使えるが、それにホウ酸またはフタル酸
カリウムなどを添加して使用しても何らさしつか
えない。
るものを使えるが、それにホウ酸またはフタル酸
カリウムなどを添加して使用しても何らさしつか
えない。
安定型糖化ヘモグロビンの分離に供される分離
カラムは、糖化ヘモグロビン分析用に開発された
陽イオン交換樹脂または陰イオン交換樹脂を充填
したものが使われるが、市販のものが使える。
カラムは、糖化ヘモグロビン分析用に開発された
陽イオン交換樹脂または陰イオン交換樹脂を充填
したものが使われるが、市販のものが使える。
加熱処理方法としては、希釈された血液試料を
45〜70℃に加熱処理できるものであれば良く、実
際の高速液体クロマトグラフイーにおいては、オ
ンライン、オフラインのどちらの方式で行つても
さしつかえない。オンラインの場合の該加熱処理
の場所としては、試料容器を並べるオートサンプ
ラーのテーブル全体を加熱する、あるいは特定の
場所を加熱する、例えば試料容器の中へ加熱用素
子を挿入するまたは、試料の一部を吸引後加熱す
る、などによることが考えられる。加熱効率、試
料の安定性、装置の簡略性、操作性などの点から
すると試料の一部を吸引後加熱処理するのが好ま
しい。
45〜70℃に加熱処理できるものであれば良く、実
際の高速液体クロマトグラフイーにおいては、オ
ンライン、オフラインのどちらの方式で行つても
さしつかえない。オンラインの場合の該加熱処理
の場所としては、試料容器を並べるオートサンプ
ラーのテーブル全体を加熱する、あるいは特定の
場所を加熱する、例えば試料容器の中へ加熱用素
子を挿入するまたは、試料の一部を吸引後加熱す
る、などによることが考えられる。加熱効率、試
料の安定性、装置の簡略性、操作性などの点から
すると試料の一部を吸引後加熱処理するのが好ま
しい。
加熱方法としては、試料液を急速に温度上昇さ
せることのできるものであれば何でも使うことが
できる。
せることのできるものであれば何でも使うことが
できる。
不安定型糖化ヘモグロビン除去試薬の共存下で
加熱処理を行うことで、除去試薬による不安定型
糖化ヘモグロビンの除去反応を促進することがで
きる。その結果、除去試薬のみ又は酵素処理等に
よる除去に比べ、短時間で反応を終了することが
できる。該加熱温度が高い程短い時間で不安定型
糖化ヘモグロビンの除去が可能であるが、70℃を
こえると試料中のヘモグロビンの変性あるいは分
解が起こり、分離カラムによる分離が充分でなく
なる。一方、45℃より低い温度では不安定型糖化
ヘモグロビンの除去に時間がかかりすぎ、本発明
の効果を期待できない。
加熱処理を行うことで、除去試薬による不安定型
糖化ヘモグロビンの除去反応を促進することがで
きる。その結果、除去試薬のみ又は酵素処理等に
よる除去に比べ、短時間で反応を終了することが
できる。該加熱温度が高い程短い時間で不安定型
糖化ヘモグロビンの除去が可能であるが、70℃を
こえると試料中のヘモグロビンの変性あるいは分
解が起こり、分離カラムによる分離が充分でなく
なる。一方、45℃より低い温度では不安定型糖化
ヘモグロビンの除去に時間がかかりすぎ、本発明
の効果を期待できない。
加熱処理により不安定型糖化ヘモグロビンを除
去した後の安定型糖化ヘモグロビンの測定は、分
離された各成分を検出器で415nｍおよび690nｍ
における吸光を測定し、得られたクロマトグラム
から計算することができる。
去した後の安定型糖化ヘモグロビンの測定は、分
離された各成分を検出器で415nｍおよび690nｍ
における吸光を測定し、得られたクロマトグラム
から計算することができる。
本発明の測定方法を実施するのに好適な液体ク
ロマトグラフイー装置の実施態様例を第１図に示
す。該装置は、高速液体クロマトグラフを基本と
し、オートサンプラーの試料の吸引注入装置と分
離カラムへの試料導入装置との間に加熱装置を設
けたものである。
ロマトグラフイー装置の実施態様例を第１図に示
す。該装置は、高速液体クロマトグラフを基本と
し、オートサンプラーの試料の吸引注入装置と分
離カラムへの試料導入装置との間に加熱装置を設
けたものである。
以下、第１図により本発明を具体的に説明す
る。除去試薬添加溶血剤により希釈された試料を
セツトするサンプルテーブル６、試料の吸引を行
う吸引ノズル７、試料を加熱するヒートブロツク
８、試料計量用サンプルループ１１、試料および
溶離液１を分離カラム１４へ注入するための試料
導入装置１２および検出器１６から成り、さらに
溶離液１を試料導入装置１２へ導くデガツサー
２、弁３および圧送ポンプ４、プレフイルター１
３、データプロセツサーまたは記録計１７などの
通常の高速液体クロマトグラフで使用される部分
から成りたつている。
る。除去試薬添加溶血剤により希釈された試料を
セツトするサンプルテーブル６、試料の吸引を行
う吸引ノズル７、試料を加熱するヒートブロツク
８、試料計量用サンプルループ１１、試料および
溶離液１を分離カラム１４へ注入するための試料
導入装置１２および検出器１６から成り、さらに
溶離液１を試料導入装置１２へ導くデガツサー
２、弁３および圧送ポンプ４、プレフイルター１
３、データプロセツサーまたは記録計１７などの
通常の高速液体クロマトグラフで使用される部分
から成りたつている。
加熱の為のヒートブロツク８は、平板サンドイ
ツチ型ヒーター、溝のある平板型ヒーター、棒状
ヒーターなどのヒーター１０が適宜選ばれる。ヒ
ーター材質としては、アルミニウム、銅などの熱
伝導性の良いものであれば特に制限はない。ま
た、温度制御の為に温度センサー９とコントロー
ラー１８が設けられている。
ツチ型ヒーター、溝のある平板型ヒーター、棒状
ヒーターなどのヒーター１０が適宜選ばれる。ヒ
ーター材質としては、アルミニウム、銅などの熱
伝導性の良いものであれば特に制限はない。ま
た、温度制御の為に温度センサー９とコントロー
ラー１８が設けられている。
試料は、まずサンプルテーブル６にセツトさ
れ、次いで試料吸引ノズル７により、ヒートブロ
ツク８までの試料輸送管２０が試料で満たされる
量吸引される。そしてヒートブロツク８部分で加
熱処理され、その後加熱処理された試料の一部が
試料計量用サンプルループ１１に導かれ、試料導
入装置１２から分離カラム１４へと注入されてい
く。これらの動作はコントローラー１８により制
御することができる。以後、分離カラム１４で分
離されたものを検出器１６で検出し、定量する。
れ、次いで試料吸引ノズル７により、ヒートブロ
ツク８までの試料輸送管２０が試料で満たされる
量吸引される。そしてヒートブロツク８部分で加
熱処理され、その後加熱処理された試料の一部が
試料計量用サンプルループ１１に導かれ、試料導
入装置１２から分離カラム１４へと注入されてい
く。これらの動作はコントローラー１８により制
御することができる。以後、分離カラム１４で分
離されたものを検出器１６で検出し、定量する。
試料吸引ノズル７から試料導入装置１２までの
間の試料輸送管２０としては、テフロン管の他、
ステンレス管のような耐薬品性があり、熱伝導性
の良いものが好ましく用いられる。テフロン管を
用いる場合は、加熱効率をよくする肉薄管が好ま
しいが、試料吸引の際の抵抗の問題や加工性の点
からすると内径0.2〜2.0mmが好ましい。
間の試料輸送管２０としては、テフロン管の他、
ステンレス管のような耐薬品性があり、熱伝導性
の良いものが好ましく用いられる。テフロン管を
用いる場合は、加熱効率をよくする肉薄管が好ま
しいが、試料吸引の際の抵抗の問題や加工性の点
からすると内径0.2〜2.0mmが好ましい。
以上の説明から明らかなように、本発明によれ
ば、 (1) 不安定型糖化ヘモグロビンの除去を簡単な処
理方法で短時間にすることができ、 (2) 装置としても、非常に簡単な加熱装置を設け
るだけで糖尿病の指標として有用な安定型糖化
ヘモグロビンを測定することができる。
ば、 (1) 不安定型糖化ヘモグロビンの除去を簡単な処
理方法で短時間にすることができ、 (2) 装置としても、非常に簡単な加熱装置を設け
るだけで糖尿病の指標として有用な安定型糖化
ヘモグロビンを測定することができる。
以下、本発明を実施例によりさらに説明する
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例 １
試料は、抗凝固剤としてエチレンジアミン四酢
酸ナトリウム塩を添加して採血した新鮮血および
不安定型糖化ヘモグロビンをin vitroで生成させ
るために新鮮血にグルコースを添加（10mg／ml新
鮮血）し、37℃で30分間ふ置したものを用いた。
ホウ酸を除去試薬とする0.1％ポリオキシエーテ
ル−ホウ酸緩衝液の溶血剤で試料を200倍に希釈
し、第１図に示したサンプルテーブル６にセツト
した。分離カラム１４には、TSKゲル
Glyco4.0id×150mm（東洋曹達工業社製）を用い、
23℃の分離温度とした。成分の分離は、HLC−
723GH6用溶離液（日本ケミフア社製）を1.6ml／
minで1.1分、2.4分、3.6分でのステツプワイズグ
ラジエント法によつた。加熱処理のための第一段
の試料吸引は150μとし、内径0.6mm、外径1/16
inchのテフロン管を試料輸送管として用いた。加
熱部分は、テフロン試料輸送管を、アルミニウム
製棒状ヒーター８（外径1.6cm、長さ６cm）に約
20cm巻きつけ、更に外側をアルミブロツク８で覆
つた。加熱処理後、20μをサンプリングし分離
に供し、検出器１６で415nｍと690nｍ（バツク
グラウンド測定用）における吸光値を測定し、安
定型糖化ヘモグロビンを求めた。
酸ナトリウム塩を添加して採血した新鮮血および
不安定型糖化ヘモグロビンをin vitroで生成させ
るために新鮮血にグルコースを添加（10mg／ml新
鮮血）し、37℃で30分間ふ置したものを用いた。
ホウ酸を除去試薬とする0.1％ポリオキシエーテ
ル−ホウ酸緩衝液の溶血剤で試料を200倍に希釈
し、第１図に示したサンプルテーブル６にセツト
した。分離カラム１４には、TSKゲル
Glyco4.0id×150mm（東洋曹達工業社製）を用い、
23℃の分離温度とした。成分の分離は、HLC−
723GH6用溶離液（日本ケミフア社製）を1.6ml／
minで1.1分、2.4分、3.6分でのステツプワイズグ
ラジエント法によつた。加熱処理のための第一段
の試料吸引は150μとし、内径0.6mm、外径1/16
inchのテフロン管を試料輸送管として用いた。加
熱部分は、テフロン試料輸送管を、アルミニウム
製棒状ヒーター８（外径1.6cm、長さ６cm）に約
20cm巻きつけ、更に外側をアルミブロツク８で覆
つた。加熱処理後、20μをサンプリングし分離
に供し、検出器１６で415nｍと690nｍ（バツク
グラウンド測定用）における吸光値を測定し、安
定型糖化ヘモグロビンを求めた。
加熱処理の温度と時間を変えて、不安定型糖化
ヘモグロビンの除去効果をみ、その結果を第２図
に示す。白丸はグルコース無添加の結果、黒丸は
グルコース添加の結果であるが、グルコースを添
加し、不安定型糖化ヘモグロビンをin vitroで生
成させた試料でさえ、50℃加熱の場合８分で、65
℃では１分で不安定型糖化ヘモグロビンが除去さ
れている。無添加生新鮮血試料では、50℃加熱で
も２分で良く、従来の37℃30分以上というふ置に
よる除去に比べ、非常に短時間に処理できること
がわかる。
ヘモグロビンの除去効果をみ、その結果を第２図
に示す。白丸はグルコース無添加の結果、黒丸は
グルコース添加の結果であるが、グルコースを添
加し、不安定型糖化ヘモグロビンをin vitroで生
成させた試料でさえ、50℃加熱の場合８分で、65
℃では１分で不安定型糖化ヘモグロビンが除去さ
れている。無添加生新鮮血試料では、50℃加熱で
も２分で良く、従来の37℃30分以上というふ置に
よる除去に比べ、非常に短時間に処理できること
がわかる。
実施例 ２
本法と生理的食塩水による処理法である従来法
と測定置の比較を行つた。試料は健常人および糖
尿病患者の抗凝固剤の入つた新鮮血を用いた。本
法の測定条件は、ヒートブロツク加熱温度65℃、
加熱時間1.5分以外の条件は実施例１と同じとし
た。生理食塩水法は、試料の前処理として全血に
対して約10倍量の生理遅水を添加し撹拌後、遠心
分離し上澄を捨てた。この操作を２回繰り返した
後、約10倍量の生理食塩水を添加し、37℃で4hr
ふ置した。その後遠心分離を行い、血球量とほぼ
同量の上澄を残し余分の上澄を捨てた。この全血
をHLC−723GH6用溶血剤（0.1％トリトンＸ−
100、0.1％エチレンジアミン四酢酸ナトリウム、
0.1％アジ化ナトリウム）で200倍に希釈し測定し
た。この場合、ヒートブロツクをつけていない装
置で測定し、測定条件をヒートブロツク方式と同
一にして行つた。
と測定置の比較を行つた。試料は健常人および糖
尿病患者の抗凝固剤の入つた新鮮血を用いた。本
法の測定条件は、ヒートブロツク加熱温度65℃、
加熱時間1.5分以外の条件は実施例１と同じとし
た。生理食塩水法は、試料の前処理として全血に
対して約10倍量の生理遅水を添加し撹拌後、遠心
分離し上澄を捨てた。この操作を２回繰り返した
後、約10倍量の生理食塩水を添加し、37℃で4hr
ふ置した。その後遠心分離を行い、血球量とほぼ
同量の上澄を残し余分の上澄を捨てた。この全血
をHLC−723GH6用溶血剤（0.1％トリトンＸ−
100、0.1％エチレンジアミン四酢酸ナトリウム、
0.1％アジ化ナトリウム）で200倍に希釈し測定し
た。この場合、ヒートブロツクをつけていない装
置で測定し、測定条件をヒートブロツク方式と同
一にして行つた。
63例について測定した結果を第３図に示すが、
本発明方法と生理食塩水法との相関係数が
0.9940、相関式がＹを本法、Ｘを生理食塩水法と
した場合、Ｙ＝1.031X−0.308と非常によい相関
が得られた。この結果は、従来法通り不安定型糖
化ヘモグロビンが本法により完全に除去されてい
ることを示すものである。
本発明方法と生理食塩水法との相関係数が
0.9940、相関式がＹを本法、Ｘを生理食塩水法と
した場合、Ｙ＝1.031X−0.308と非常によい相関
が得られた。この結果は、従来法通り不安定型糖
化ヘモグロビンが本法により完全に除去されてい
ることを示すものである。
第１図は、本発明の測定方法を実施するのに好
適な、加熱装置を設けた液体クロマトグラフイー
装置の一実施態様例である。第２図は、本発明方
法による不安定型糖化ヘモグロビンの除去と加熱
温度、時間の関係を示すグラフである。第３図
は、本発明方法と従来法としての生理食塩水処理
法による相関関係を示す図である。 １……溶離液、２……デガツサー、３……三方
電磁弁、４……圧送ポンプ、５……オートサンプ
ラー、６……サンプルテーブル、７……吸引ノズ
ル、８……ヒートブロツク、９……温度センサ
ー、１０……ヒーター、１１……サンプルルー
プ、１２……試料導入装置、１３……プレフイル
ター、１４……分離カラム、１５……カラムオー
ブン、１６……検出器、１７……データプロセツ
サー、１８……コントローラー、１９……廃液タ
ンク、２０……試料輸送管。
適な、加熱装置を設けた液体クロマトグラフイー
装置の一実施態様例である。第２図は、本発明方
法による不安定型糖化ヘモグロビンの除去と加熱
温度、時間の関係を示すグラフである。第３図
は、本発明方法と従来法としての生理食塩水処理
法による相関関係を示す図である。 １……溶離液、２……デガツサー、３……三方
電磁弁、４……圧送ポンプ、５……オートサンプ
ラー、６……サンプルテーブル、７……吸引ノズ
ル、８……ヒートブロツク、９……温度センサ
ー、１０……ヒーター、１１……サンプルルー
プ、１２……試料導入装置、１３……プレフイル
ター、１４……分離カラム、１５……カラムオー
ブン、１６……検出器、１７……データプロセツ
サー、１８……コントローラー、１９……廃液タ
ンク、２０……試料輸送管。
Claims (1)
- １ 血液試料に不安定型糖化ヘモグロビンの除去
試薬を含む溶血剤を加えて希釈し、希釈された試
料を、45〜70℃に加熱処理して前記除去試薬によ
る不安定型糖化ヘモグロビン除去反応を促進し、
続いて分離カラムに注入することを特徴とする高
速液体クロマトグラフイーによる安定型糖化ヘモ
グロビンの測定方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61177599A JPS6336143A (ja) | 1986-07-30 | 1986-07-30 | 安定型糖化ヘモグロビン測定方法および装置 |
| EP87110991A EP0255122B1 (en) | 1986-07-30 | 1987-07-29 | Process for estimating stable type glycated hemoglobin and the apparatus thereof |
| DE87110991T DE3788013T2 (de) | 1986-07-30 | 1987-07-29 | Verfahren zum Bewerten von der stabilen Sorte des glykosilierten Hämoglobins und Apparat dafür. |
| US07/079,435 US4879039A (en) | 1986-07-30 | 1987-07-30 | Process for measuring stable-type glycated hemoglobin in a sample |
| US07/401,879 US5004546A (en) | 1986-07-30 | 1989-09-01 | Process for measuring stable-type glycated hemoglobin in a sample |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61177599A JPS6336143A (ja) | 1986-07-30 | 1986-07-30 | 安定型糖化ヘモグロビン測定方法および装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6336143A JPS6336143A (ja) | 1988-02-16 |
| JPH0559380B2 true JPH0559380B2 (ja) | 1993-08-30 |
Family
ID=16033812
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61177599A Granted JPS6336143A (ja) | 1986-07-30 | 1986-07-30 | 安定型糖化ヘモグロビン測定方法および装置 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4879039A (ja) |
| EP (1) | EP0255122B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6336143A (ja) |
| DE (1) | DE3788013T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006118306A1 (ja) | 2005-05-02 | 2006-11-09 | Oji Paper Co., Ltd. | 糖化ヘモグロビンの分析装置および分析方法 |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0299419B1 (en) * | 1987-07-14 | 1993-10-20 | Kabushiki Kaisha Kyoto Daiichi Kagaku | Automatic measurement method of glycohemoglobin |
| JPH0197857A (ja) * | 1987-07-14 | 1989-04-17 | Kyoto Daiichi Kagaku:Kk | グリコヘモグロビンの自動測定方法及び試料導入バルブ |
| US5292663A (en) * | 1987-11-30 | 1994-03-08 | Sekisui Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Method of treating blood containing labile glycosylated hemoglobin A1C |
| CA1338348C (en) * | 1987-11-30 | 1996-05-28 | Kazutoshi Yamazaki | Eliminating agent for glycosylated hemoglobin |
| GB2220369B (en) * | 1988-06-10 | 1993-01-27 | Inst Of Child Health | Method for testing body fluids by low pressure liquid chromatography |
| JPH0324458A (ja) * | 1989-06-21 | 1991-02-01 | Daiso Co Ltd | 尿中赤血球の免疫学的測定法 |
| JP2619537B2 (ja) * | 1989-09-18 | 1997-06-11 | 株式会社日立製作所 | 液体クロマトグラフの方法，その装置，そのシステム，及びその分離カラム |
| JP2782470B2 (ja) * | 1990-07-20 | 1998-07-30 | 株式会社日立製作所 | グリコヘモグロビンの分離方法および分離装置並びに分離カラム |
| JP2669255B2 (ja) * | 1992-04-01 | 1997-10-27 | 株式会社日立製作所 | ヘモグロビン類の分析方法，分析装置およびそれに用いるカラム劣化抑制液 |
| US5543315A (en) * | 1992-06-30 | 1996-08-06 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Method for stabilizing measurement values by high speed liquid chromatography |
| JP3177863B2 (ja) * | 1992-07-17 | 2001-06-18 | 東ソー株式会社 | 不安定型糖化ヘモグロビンの除去方法 |
| JP2773569B2 (ja) * | 1992-09-17 | 1998-07-09 | 株式会社日立製作所 | 分離カラム、及び分離カラムの劣化防止方法，運搬方法，取扱方法そして分離カラム用封入液 |
| GB9220526D0 (en) * | 1992-09-29 | 1992-11-11 | Drew Scient Ltd | Process |
| US5739037A (en) * | 1992-09-29 | 1998-04-14 | Drew Scientific Limited | Process for eliminating labile glycohaemoglobin from a sample |
| JP3503331B2 (ja) * | 1996-03-29 | 2004-03-02 | 東ソー株式会社 | 糖化ヘモグロビン分析装置 |
| US6260407B1 (en) * | 1998-04-03 | 2001-07-17 | Symyx Technologies, Inc. | High-temperature characterization of polymers |
| CA2510277C (en) * | 2003-09-23 | 2012-07-24 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for glycated albumin |
| WO2006029017A1 (en) * | 2004-09-03 | 2006-03-16 | Symyx Technologies, Inc. | System and method for rapid chromatography with fluid temperature and mobile phase composition control |
| JP2011141120A (ja) * | 2008-10-07 | 2011-07-21 | Arkray Inc | 液体クロマトグラフィ装置および液体クロマトグラフィ |
| US20100167306A1 (en) * | 2008-12-26 | 2010-07-01 | Henry John Smith | Rapid test for glycated albumin in saliva |
| CN102326074B (zh) * | 2009-03-31 | 2016-01-20 | 株式会社日立高新技术 | 液体色谱仪、液体色谱仪用反应柱以及液体色谱仪用反应柱过滤器的应用 |
| US8426151B2 (en) * | 2010-02-10 | 2013-04-23 | Companion Diagnostics Inc. | Systems and methods for the detection of biomarkers |
| JP7215146B2 (ja) * | 2018-12-21 | 2023-01-31 | 東ソー株式会社 | 吸光光度検出器 |
| US12163933B2 (en) * | 2021-05-04 | 2024-12-10 | Waters Technologies Corporation | Compact liquid chromatography system providing thermal management and detection |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3903254A (en) * | 1971-07-23 | 1975-09-02 | Upjohn Co | Separation of erythrocyte stroma from lysing medium and hemoglobin with acrinol |
| US3914400A (en) * | 1973-05-21 | 1975-10-21 | Us Health | Stable antigen-erythrocytes for measuring antibodies against toxoplasma organism |
| GB2024829B (en) * | 1978-06-28 | 1982-08-04 | Amicon Corp | Method and product for separation of glycoproteins |
| US4269605A (en) * | 1978-06-28 | 1981-05-26 | Amicon Corporation | Method and kit for separation of glycoproteins |
| US4243534A (en) * | 1979-01-25 | 1981-01-06 | Becton, Dickinson And Company | Blood separation |
| US4268270A (en) * | 1979-04-30 | 1981-05-19 | Children's Hospital Medical Center | Glycosylated hemoglobin measurement |
| US4463098A (en) * | 1980-10-14 | 1984-07-31 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University A Division Of Yeshiva University | Hemoglobin marker of alcoholism |
| US4371374A (en) * | 1980-11-17 | 1983-02-01 | The Rockefeller University | Monitoring metabolic control in diabetic patients by measuring glycosylated amino acids and peptides in urine |
| US4407961A (en) * | 1981-03-16 | 1983-10-04 | Sanders James L | Ion-exchange system and method for isolation and determination of glycosylated hemoglobin in human blood |
| DE3119046C2 (de) * | 1981-05-13 | 1983-03-10 | Panchem Gesellschaft für chemische Produkte mbH, 8751 Kleinwallstadt | Verfahren zur Bestimmung des Gehalts an glykosiliertem Hämoglobin bei der Langzeitkontrolle des Blutzuckerspiegels |
| US4465774A (en) * | 1981-07-16 | 1984-08-14 | Sherwood Medical Company | Standard or control material for glysocylated or total hemoglobin determination |
| US4436820A (en) * | 1982-02-01 | 1984-03-13 | Reiter Paul C | Method and apparatus for glycosylated hemoglobin separating and measuring fractions |
| CA1167278A (en) * | 1982-04-05 | 1984-05-15 | Giovanni Berti | Test for glycosilated hemoglobins |
| EP0090868A1 (en) * | 1982-04-05 | 1983-10-12 | Miles Italiana SpA | Test for glycosylated hemoglobins |
| US4389491A (en) * | 1982-04-26 | 1983-06-21 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Method and kit for chromatographic separation of hemoglobin A1c |
| US4409335A (en) * | 1982-05-28 | 1983-10-11 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Method for eliminating glucose dependent Schiff base effect from hemoglobin A1 assay |
| US4448888A (en) * | 1982-08-24 | 1984-05-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Compositions and method for correcting temperature dependence of hemoglobin assays |
| JPS59143957A (ja) * | 1983-02-07 | 1984-08-17 | Tadao Hoshino | ヒトヘモグロビンの分析方法 |
-
1986
- 1986-07-30 JP JP61177599A patent/JPS6336143A/ja active Granted
-
1987
- 1987-07-29 DE DE87110991T patent/DE3788013T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-07-29 EP EP87110991A patent/EP0255122B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-30 US US07/079,435 patent/US4879039A/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-09-01 US US07/401,879 patent/US5004546A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006118306A1 (ja) | 2005-05-02 | 2006-11-09 | Oji Paper Co., Ltd. | 糖化ヘモグロビンの分析装置および分析方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0255122A2 (en) | 1988-02-03 |
| EP0255122A3 (en) | 1989-02-22 |
| US4879039A (en) | 1989-11-07 |
| US5004546A (en) | 1991-04-02 |
| EP0255122B1 (en) | 1993-11-03 |
| JPS6336143A (ja) | 1988-02-16 |
| DE3788013D1 (de) | 1993-12-09 |
| DE3788013T2 (de) | 1994-03-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0559380B2 (ja) | ||
| Ellis et al. | An automated" high-pressure" liquid-chromatographic assay for hemoglobin A1c. | |
| Spicer et al. | A simplified assay of hemoglobin AIc in diabetic patients by use of isoelectric focusing and quantitative microdensitometry | |
| John et al. | Enzyme immunoassay--a new technique for estimating hemoglobin A1c | |
| Cooper | Methods for determining the amount of glucose in blood | |
| Werner et al. | Use of gel filtration in the assay of urinary enzymes | |
| Li et al. | Direct, fixed-time kinetic assays for beta-hydroxybutyrate and acetoacetate with a centrifugal analyzer or a computer-backed spectrophotometer. | |
| JPS61240163A (ja) | シス−ジオ−ルまたはグリコシル化ヘモグロビンの検定方法およびこれに使用する検定用試薬 | |
| CN110567780A (zh) | 一种糖化血红蛋白质控品及其制备方法 | |
| JPS5879163A (ja) | 糖結合ヘモグロビンの測定法 | |
| JP4144117B2 (ja) | グルコースの測定方法及び測定装置 | |
| CN110806450B (zh) | 一种糖化血红蛋白的液态校准品 | |
| JP3698281B2 (ja) | グルコース濃度の測定方法 | |
| CN111455020A (zh) | 一种1,5-脱水山梨醇检测试剂盒及检测方法 | |
| JP3177863B2 (ja) | 不安定型糖化ヘモグロビンの除去方法 | |
| JP2929462B2 (ja) | 安定型糖化ヘモグロビン分析方法 | |
| Larsen | Evaluation of a new capillary blood collection system for laboratory assay of glycated haemoglobin | |
| JP5425062B2 (ja) | Ｄ−マンニトールを含有する管理試料を用いるグリコアルブミン等の測定方法 | |
| Diamandis et al. | Liquid chromatography of glycated hemobglobins with the Daiichi HA-8110 automated analyzer. | |
| Hansen | A specific, sensitive, and rapid micromethod for determination of ketone bodies in blood | |
| Fitzgerald et al. | Determination of glycosylated hemoglobins in neonatal blood by isoelectric focusing | |
| Gunasingham et al. | Clinical evaluation of amperometric enzyme electrodes in continuous-flow analysis for glucose in undiluted whole blood | |
| Rodriguez-Castellon et al. | Evaluation of an automated glucose-oxidase procedure | |
| JPH10108695A (ja) | グルコース濃度の測定方法 | |
| Gachon et al. | Fast fluctuations of glycosylated hemoglobins. I. Implications for the preparation and storage of samples for hemoglobin A1c determinations |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |