JPH0560752A

JPH0560752A - 細胞分析装置

Info

Publication number: JPH0560752A
Application number: JP3223225A
Authority: JP
Inventors: Akishi Yamamoto; 晃史山本; Masahiro Hanabusa; 昌弘花房
Original assignee: Omron Corp; Omron Tateisi Electronics Co
Current assignee: Omron Corp
Priority date: 1991-09-04
Filing date: 1991-09-04
Publication date: 1993-03-12

Abstract

(57)【要約】【目的】複数のデータ平滑化手法のうち、個々の分析
処理ごとに最良の手法を決定することにより、更なる分
析の自動化、効率化を図り、データ精度も向上する細胞
分析装置を提供する。【構成】細胞光情報に複数種類の平滑化演算をする平
滑化処理（ＳＴ１１１）と、複数の平滑化演算によって
求められる画分を評価して、最適の平滑化処理を決定す
る平滑化決定処理（ＳＴ１１３〜ＳＴ１１７）とを特徴
的に備える。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、フローサイトメトリ
を適用した細胞分析装置に関し、詳しく言えば、細胞の
光情報を処理する過程で、データの平滑化を行うととも
に、平滑化した結果を比較して最良の平滑化手法を決定
することを可能にする細胞分析装置に関する。

【０００２】

【従来の技術】フローサイトメトリは、例えば蛍光色素
で標識された細胞又は粒子を細かい液流中に流し、流体
力学的焦点合わせ効果により１列になって流れる細胞の
１つ１つにレーザ光を照射し、細胞より生じる散乱光や
蛍光の強度、すなわち、細胞光情報を瞬時に測定し、細
胞を分析するものである。このフローサイトメトリは、
大量の細胞を高速度かつ高精度に分析できる特徴を有
し、臨床検査から研究用まで広く利用されている。

【０００３】上記フローサイトメトリを適用した細胞分
析装置としては、細かい液流を形成するためのフローセ
ルと、このフローセル内を流れる細胞に光ビームを照射
する光源（例えばレーザ）と、この光ビームが照射され
た細胞より細胞光情報を検出し電気信号に変換する光検
出器と、この電気信号に変換された細胞光情報の解析処
理等を行うコンピータを備えてなるものが知られてい
る。

【０００４】この従来の細胞分析装置は、蛍光色素で標
識した細胞浮遊液（試料）をシース液と共にフローセル
内に流す。フローセル内には、シースフローが形成さ
れ、流体力学的焦点合わせ効果により、細胞はフローセ
ル中心軸上を一列になって流れていく。これら細胞に光
ビームが照射されることにより生じる散乱光及び蛍光の
強度は、細胞光情報を構成するパラメータとして、光電
子増倍管などの光検出器により検出される。

【０００５】さて、細胞浮遊液中に複数の細胞集団が含
まれている時に、これら細胞集団の１つについて分析を
行いたい場合がある。例えば、ヒト血液中のリンパ球サ
ブセットの分析の場合には、試料として血液を蛍光色素
で標識したモノクローナル抗体と反応させ溶血したもの
が使用されるが、この試料中には、リンパ球の他に、単
球、顆粒球が含まれており、測定により得られた細胞光
情報より、リンパ球についてのものを選別する必要が生
じる。

【０００６】そこで、必要な細胞集団の細胞光情報を操
作者の主観にたよることなく、自動的に選別して収集す
る機能、いわゆるオートトリガ機能を備えた細胞分析装
置としては、本願出願人の先願に係る特願平２−２４７
１７がある。この細胞分析装置は、複数のパラメータよ
りなる細胞光情報を得、これを二次元平滑化して、１又
は２以上のパラメータに基づいて分析領域を設定し、こ
の分析領域内の目的細胞集団の細胞光情報を収集する。
例えば、リンパ球分析の場合において、二次元平滑化を
行った後、第１０図（ａ）、（ｂ）に示すように９０°
散乱光強度Ｉ₉₀、前方散乱光強度Ｉ₀のヒストグラムを
それぞれ作成する。Ｉ ₉₀のヒストグラムよりは極小点ｐ
₁、ｐ₂、ｐ₃が、Ｉ₀のヒストグラムよりは極小点ｐ
₄、ｐ₅が抽出される。

【０００７】これら極小点ｐ₁〜ｐ₅により、Ｉ₉₀−Ｉ
₀サイトグラムが、第８図中破線で示すように分画され
る。第８図において、ｂはリンパ球の分布、ｃは単球の
分布、ｄは顆粒球の分布をそれぞれ示している。また、
ａはデブリスの分布を示しているがデブリスは赤血球の
膜成分等より構成されるもので、通常はノイズ処理の段
階で取り除かれることが多い。

【０００８】第８図中実線で示される画分Ｂには、リン
パ球の分布ｂが含まれるから、この画分Ｂを分析領域と
し、細胞光情報が収集される。こうして、収集された細
胞光情報については、さらに蛍光特性が解析され陽性率
の判定等の処理が行われる。上記の画分Ｂの自動設定方
法では本願出願人により特願昭６３−１９３０３３号、
特願昭６３−１９３０７２号が既に出願されているが、
いずれかの方法がそのまま用いられる。更に、特願昭６
３−３２０９１５号では、設定された分析領域に属する
細胞数の統一方法が本願出願人により開示されている
が、この方法がそのまま用いられる。

【０００９】また、特願平２−２４７１７号の細胞分析
装置では、より目的細胞集団の分布形状に近い分析領域
を設定し、かつ細胞数を統一しているので、測定結果の
信頼性を向上させ、分析の自動化及び効率化を一層推進
することを図ることが可能となる。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】上記オートトリガ機能
を備えた細胞分析装置では、確かに測定の自動化が図ら
れ、客観的なデータ処理が行える等の利点を有してい
る。しかしながら、細胞数が少ない場合や細胞の分布に
バラツキあるいは偏りがある場合などに、Ｉ₉₀−Ｉ₀サ
イトグラムより前方散乱光強度Ｉ₀のヒストグラム、あ
るいは９０°散乱光強度Ｉ₉₀のヒストグラムが作成でき
なかったり、ヒストグラムが作成できても連続数の量子
化において、いわゆる“歯抜け”が生じることがある。
この場合に、各ヒストグラムより極小点あるいは所定の
しきい値となる点が抽出できなくなり、そのために、オ
ートトリガ演算が適切に行えず、測定の自動化が妨げら
れたり、データの信頼性が損なわれることがある。特
に、測定対象が顆粒球の如き広範囲に疎に分布する場合
や、抗癌剤投与された患者の血液検体等である場合に
は、顕著に上記の不具合が見られることがある。

【００１１】この発明は、上記に鑑みてなされたもので
あり、細胞光情報の処理手段での処理に、データ平滑化
及びその結果を比較して最良の平滑化手法を決定するこ
とにより、更なる分析の自動化、効率化を図り、データ
精度も向上した細胞分析装置を提供することを目的とす
る。

【００１２】

【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
め、本発明の細胞分析装置は以下の（イ）〜（リ）項に
列記する構成を有している。すなわち、（イ）細胞浮遊
液等が流されるフローセルと、（ロ）このフローセル内
を流れる細胞浮遊液等に光ビームを照射する光源と、
（ハ）この光ビームが照射された細胞浮遊液等に含まれ
る細胞等の各々の粒子状成分について、複数のパラメー
タよりなる細胞光情報を検出する細胞光情報検出手段
と、（ニ）この細胞光情報検出手段で得られる、１又は
２以上のパラメータに基づいて分析領域を設定する分析
領域設定手段と、（ホ）この分析領域設定手段で設定さ
れた分析領域内で、目的とする細胞集団の細胞情報を収
集する細胞光情報収集手段と、（ヘ）前記細胞光情報検
出手段で検出された細胞光情報及び前記細胞光情報収集
手段で収集された目的細胞集団の細胞光情報を処理する
細胞光情報処理手段と、（ト）この細胞光情報処理手段
の処理結果を出力する出力手段とを備えてなる細胞分析
装置において、前記細胞光情報処理手段（ヘ）中に、
（チ）前記細胞光情報検出手段で検出された細胞光情報
及び前記細胞光情報収集手段で収集された目的細胞集団
の細胞光情報を平滑化する複数の平滑化手段と、（リ）
この複数の平滑化手段による処理結果の個々について、
平滑化処理の良否を判定する評価用の演算を施し、その
演算結果によって最適の平滑化手段を決定する平滑化決
定手段と、を備えている。

【００１３】

【作用】平滑化手段は、細胞光情報検出手段で検出され
た細胞光情報及び細胞光情報収集手段で収集された目的
細胞集団の細胞光情報に複数の平滑化処理をする。平滑
化決定手段は、前記複数の平滑化手段によって平滑化処
理された個々のデータについて、平滑化処理の良否を判
定する評価用の演算を施し、その演算結果によって最適
の平滑化手段を決定する。

【００１４】つまり、この発明によれば、常に最適の平
滑化処理が施され、その処理後の細胞光情報について、
細胞分析がされることになる。

【００１５】

【実施例】本発明の１実施例を第１図乃至第３図に基づ
き、以下に説明する。第３図は、実施例細胞分析装置の
構成を示す図である。２は、オートサンプラーであり、
その試料ラック２ａには複数の試料容器３、…、３が装
填されている。この試料ラック２ａは、図示しない駆動
機構により駆動され、指定の試料を、試料吸引チューブ
４直下に位置させる。さらに、このオートサンプラー２
は、図示しない振とう機構、冷却機構を備えており、定
時的に試料を振とうすると共に、装填された試料容器
３、…、３内の試料を低温（例えば４℃〜１０℃）に保
持する。

【００１６】前記試料吸引チューブ４は、三方弁５の１
つのポートに接続されている。三方弁５の他の２つのポ
ートには、試料送液チューブ６ａ、６ｂがそれぞれ接続
されており、試料送液チューブ６ａと試料吸引チューブ
４、あるいは試料送液チューブ６ａと６ｂとを連通させ
ることができる。試料送液チューブ６ａの他端には、試
料ポンプ７が設けられている。一方、試料送液チューブ
６ｂの他端は、シース液送液チューブ８内に開口してい
る。

【００１７】このシース液送液チューブ８は、一端が送
液ポンプ９に接続され、他端がフローセル１０に接続さ
れている。フローセル１０は、石英ガラス等により構成
され、内部のフローチャネル１０ａ内にシースフローが
形成され、流体力学的焦点合わせ効果により、試料中の
細胞又は粒子がフローチャネル１０ａ中心軸上を一列に
なって流される。

【００１８】フローセル１０より流出した液は、廃液チ
ューブ１１に導かれて、廃液タンク１２に収容される。
なお、この細胞分析装置は、シース液タンク（図示せ
ず）を備えており、前記試料ポンプ７、送液ポンプ９に
シース液が補充される。又、オートサンプラ２、ポンプ
７、９等を含む送液系は密閉可能で、バイオハザードを
防止できる。

【００１９】フローセル１０の周囲には、レーザ（光
源）１４、光検出器（細胞光情報検出手段）１５ａ、１
５ｂ、１５ｃ、１５ｄが配設される。レーザ１４よりの
レーザビームＬは、フローチャネル１０ａを流れる細胞
（又は粒子）に照射される。この細胞（又は粒子）より
は、信号光が発生するが、その内前方方向のものは、前
方散乱光として、レンズ１６ａに集光されて、光検出器
１５ａに入射する。１７は、レーザビームＬが直接光検
出器１５ａに入射するのを防止するビームブロッカであ
る。

【００２０】一方、細胞よりの９０°方向の信号光は、
レンズ１６ｂで集光される。この信号光はその一部がダ
イクロイックミラー１８ａで反射されて、９０°散乱光
検出用の光検出器１５ｂに入射する。ダイクロイックミ
ラー１８ａを透過した信号光は、更にその一部がもう一
つのダイクロイックミラー１８ｂにより反射されて、フ
ィルタ１９ａを透過して、緑色蛍光用の光検出器１５ｃ
に受光される。ダイクロイックミラー１８ｂを透過した
光は、フィルタ１９ｂを透過して赤色蛍光用の光検出器
１５ｄに受光される。なお、例えばレーザ１４には、ア
ルゴンレーザやヘリウムネオンレーザ、前方散乱光用の
光検出器１５ａにはホトダイオード、その他の検出器１
５ｂ、１５ｃ、１５ｄには光電子増倍管が適用される。

【００２１】光検出器１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄ
の受光信号は、信号処理回路部２０で増幅されノイズを
取除かれた後、アナログ／デジタル（Ａ／Ｄ）変換器２
１によりデジタル信号に変換されて、ＭＰＵ２２に取り
込まれる。ＭＰＵ２２は、大きく分けてオートトリガに
関する機能、細胞数カウント・統一に関する機能及びそ
の他の機能を有している。オートトリガに関する機能と
しては、例えば特願昭６３−１９３０３３号の方式を適
用するならば、前方散乱光強度Ｉ₀、９０°散乱光強度
Ｉ₉₀についてのサイトグラム及びそれぞれのヒストグラ
ムを作成する機能、これらヒストグラムより極小点を抽
出し、細胞光情報を画分に分画する機能、サイトグラム
全体又は画分内で平滑化処理を行う機能、目的細胞集団
を含む画分内で最終の画分を決定する機能等を有してい
る。

【００２２】細胞数カウント・統一に関する機能として
は、直前測定の最終画分を記憶する機能、今回測定時に
直前測定時の最終画分を用いて細胞数をカウントする機
能、今回測定時に得られた最終画分内の細胞数を規定の
数ｎ₀に揃える機能等を備えている。その他の機能とし
ては、細胞数が揃えられた目的細胞集団の光情報につい
て蛍光解析を行う機能、前記試料ポンプ７、送液ポンプ
９及びオートサンプラ２を制御する機能等を有してい
る。

【００２３】ＭＰＵ２２には、フロッピディスクドライ
ブ２３、キーボード２４、ＣＲＴ２５及びプリンタ２６
が接続されている。フロッピディスクドライブ２３は、
測定条件（プロトコル）や測定データ等を、フロッピデ
ィスクに保存させるためのものである。キーボード２４
は、プロトコルの選択・設定或いはその他の指令をＭＰ
Ｕ２２に入力するためのものである。ＣＲＴ２５は、測
定をモニタするためのものであり、プリンタ２６は、Ｍ
ＰＵ２２の処理結果、例えばサイトグラムやヒストグラ
ム等をプリントアウトするためのものである。

【００２４】次に、実施例の細胞分析装置の動作を図２
に示すフローチャートを参照しながら説明する。まず、
分析目的に応じた処理が施された試料が、それぞれ試料
容器３に入れられて、試料ラック２ａに装填される。例
えば、リンパ球サブセットの解析を行う試料は、患者の
血液にフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）
で標識したＯＫＴ４モノクローナル抗体及びファイコエ
リスリン（ＰＥ）で標識したＯＫＴ８モノクローナル抗
体を反応させた後、溶血処理して得られる。

【００２５】細胞分析装置の電源がオンされると、ＲＯ
Ｍ（図示せず）よりＭＰＵ２２にプログラムが読込ま
れ、システムが立上がる〔ステップ( 以下ＳＴという）
１、図２参照〕。次に、測定する試料に適合するプロト
コルが選択・設定される。このプロトコルには、光検出
器１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄの検出ゲインや補正
演算等の測定条件を内容とするものである。これは、試
料の処理方法が測定目的に応じて異なるためであり、例
えば各処理に用いられるモノクローナル抗体の細胞との
反応性はそれぞれ異るため、光検出器１５ａ、１５ｂ、
１５ｃ、１５ｄの検出ゲインを変更する必要があり、又
各モノクローナル抗体と蛍光色素の結合様式がそれぞれ
異なるため補正演算もそれに応じて変更する必要があ
る。

【００２６】次にＳＴ２では、キーボード２４よりオー
トトリガを行う旨の指令が入力されているか否かが判定
される。この判定がＹＥＳの場合にはＳＴ３へ分岐し、
ＮＯの場合にはＳＴ４へ分岐する。又、ＳＴ３では、今
回の測定が前回の測定とは異なる新たなプロトコルに従
ってなされる旨の指令が入力されているか否かをＭＰＵ
２２が判定する。この判定がＮＯの場合にはＳＴ８へ分
岐し、ＹＥＳの場合にはＳＴ４へ分岐する。

【００２７】今、ＳＴ２又はＳＴ３からＳＴ４へ分岐し
たものとして説明を進める。ＳＴ４では、操作者がキー
ボード２４より、ウィンドウＢをＩ₉₀−Ｉ₀サイトグラ
ム上に設定する（図５図（ａ）参照）。ウィンドウＢが
設定されると、測定が開始される（ＳＴ５）。ＳＴ５で
は、試料ラック２ａが駆動され、最初に測定を行う試料
が入れられた試料容器３を試料吸引チューブ４の直下に
位置させる。そして、三方弁５が試料吸引チューブ４と
試料送液チューブ６ａとを連通するように切換えられ、
試料吸引チューブ４が試料容器３内に降下し、試料ポン
プ７が吸引側に駆動されて、試料が試料送液チューブ６
ａに吸引される。

【００２８】次に、三方弁５が試料送液チューブ６ａと
６ｂを連通するように切換えられ、試料ポンプ７が送液
側に駆動され、試料が送液チューブ８に送られる。一
方、送液ポンプ９が送液側に駆動され、シース液がフロ
ーセル１０に送られる。フローチャネル１０ａ内では、
シースフローが形成され、流体力学的焦点合わせ効果に
より、細胞はフローチャネル１０ａ中心軸上を一列にな
って流れていく。この細胞の一つ一つについてレーザビ
ームＬが照射され、前方散乱光強度Ｉ₀、９０°散乱光
強度Ｉ₉₀、緑色蛍光強度Ｉ_g、赤色蛍光強度Ｉ_rがそれ
ぞれ測定されていく。これら細胞光情報は、必要に応じ
てフロッピディスク等に順次記憶される。

【００２９】測定中は、上記ウィンドウＢに属する細胞
の数がカウントされる。ＳＴ６では、この細胞数が所定
のｎに達したか否かを判定し、ＹＥＳの場合にはＳＴ７
へ、ＮＯの場合にはＳＴ６を繰り返す。所定の値ｎは、
所定の細胞数ｎ₀に対し大きめのｎ₀＋αとされる（第
７図参照）。ＳＴ７では測定を終了し、先に設定された
ウィンドＢ内の細胞光情報について統計計算や各種パラ
メータについて演算が行われる。

【００３０】この時、ウィンドＢ内の細胞数Ｎは、前記
所定の細胞数ｎよりも少なくなるが、初めからα分だけ
余裕をもってカウントしているから、ｎ₀を下回ること
はないであろう。ＳＴ１２では、細胞数統一処理を行
う。この処理は、例えば特願平２−２４７１７と同様の
方法を用いて行われる。

【００３１】ＳＴ１２で細胞数が統一されたデータにつ
いては、更に蛍光特性解析が行われる（ＳＴ１３）。こ
の蛍光特性解析では、例えば緑色蛍光強度Ｉ_g、赤色蛍
光強度Ｉ_rについてそれぞれヒストグラムを作成し、陽
性率の算出等が行われる。この蛍光特性解析の結果は、
ＣＲＴ２５に表示され（ＳＴ１４）、プリンタ２６より
プリントアウトされる（ＳＴ１５）。

【００３２】ＳＴ１６では、更に測定すべき試料がある
か否かが判定される。この判定がＹＥＳの場合にはＳＴ
１へ戻り、ＮＯの場合には分析を終了する。さて、ＳＴ
１へ戻り、前回の測定と同じプロトコルで、且つオート
トリガを行う場合には、ＳＴ２、ＳＴ３を経て、ＳＴ８
の処理へ進む。ＳＴ８では、直前の測定で得られた最終
画分Ｂを再びＩ₉₀−Ｉ₀サイトグラム上にウィンドウと
して設定する（図５（ｂ）参照）。そして、ＳＴ５と全
く同様に測定を開始し、最終画分Ｂに入る細胞をカウン
トし、これが所定数ｎに達したか否かを判定する（ＳＴ
１０）。

【００３３】ＳＴ１０の判定がＹＥＳになると、ＳＴ１
１へ進み測定を終了すると共に、オートトリガ演算を行
う。このオートトリガ演算では、先ず得られたＩ₀、Ｉ
₉₀データに複数の平滑化演算を別々に施す（ＳＴ１１
１、第１図参照）。複数の平滑化演算とは、例えば、２
次元平滑化法のみの処理、点列平滑化法のみの処理、２
次元平滑化法と点列平滑化法の併用処理の３種類をい
い、その全ての処理を別々に行う。ここで、２次元平滑
化法は、特願平２−２４７１７に開示された方法により
行われる。そして、２次元平滑化法のマスキングは図４
の如くに行われる。一方、点列平滑化法は、第１１図の
如く点Ｐ_n、点Ｐ_n+1、点Ｐ_n+ ₂の３点（ウィンド境界
点）を用い、点Ｐ_n+1が点Ｐ_nと点Ｐ_n+2間の線分に対
して、どの位凹凸になっているかを判断して処理され
る。つまり、所定の値以上に凹凸がある場合には点Ｏと
点Ｐ_n+1間の線分と点Ｐ_nと点Ｐ_n+2間の線分の交点
Ｐ’を採用することで平滑化してゆく（以上ＳＴ１１
１）。

【００３４】次に、平滑化されたＩ₉₀、Ｉ₀データにつ
き、Ｉ₉₀−Ｉ₀サイトグラム、Ｉ₉₀、Ｉ₀ヒストグラム
を作成する（ＳＴ１１２）。そして、３種類の平滑化演
算によって求められた個々のヒストグラムについて、極
小点ｐ₁〜ｐ₅を抽出可能か否かを判定する（ＳＴ１１
３）。ここで、１つでも極小点が抽出できないものが存
在すればＳＴ１１５に移り、全てについて極小点が抽出
できればＳＴ１１４以降の処理に移る（ＳＴ１１３）。

【００３５】ＳＴ１１４ではヒストグラムの極小点ｐ₁
〜ｐ₅（第１０図（ａ）（ｂ）参照）に基づいて画分Ｂ
₁を設定し（第５図（ｂ）参照）、この画分Ｂ₁内のデ
ータを収集する。そして、この画分Ｂ₁について、特願
昭６３−１９３０３３号（第９図（ａ）（ｂ）参照）の
処理を施し（ＳＴ１１４）、その後演算された画分
Ｂ ₁’の画分評価演算が行われる（ＳＴ１１６）。

【００３６】この演算は３種類の平滑化演算後のデータ
の全てについて行なわれ、その結果に基づいて、最良と
思われる平滑化演算が決定される。画分評価演算は、具
体的には、画分内の目的細胞集団の縦横比（Ｆ₂−
Ｆ₁）／（Ｒ₂−Ｒ₁）あるいは偏心度（Ｘ₀−Ｒ₁）
／（Ｒ₂−Ｒ₁）及び（Ｙ₀−Ｆ₁）／（Ｆ₂−Ｆ₁）
の値を求める演算である（図５（ｂ）参照）。なお、点
（Ｘ₀，Ｙ₀）は、最終画分Ｂ₁’内の細胞出現頻度の
最大ポジションとする。

【００３７】そして、最良と思われる平滑化処理後のデ
ータについての上記画分評価演算の結果が、予め入力さ
れている値と比較され、ここまでの処理が正常か否かが
判定される（ＳＴ１１７）。正常と判定された場合は、
上記した最良と思われる平滑化法が採用され、画分
Ｂ₁’が最終的に決定される。逆に異常と判定された場
合は、ＳＴ１１５に移り警報が報知される（ＳＴ１１
５）。

【００３８】ＳＴ１１３の判定で極小点が抽出できなか
った場合も同様であって、ＣＲＴ２５にその旨を表示す
るなどして操作者に報知され（ＳＴ１１５）、続いて、
操作者による画分の手動設定が行われる（ＳＴ１１
８）。こうして設定された画分についても、所定の統計
計算やパラメータの計算が行われる（ＳＴ１１９）。Ｓ
Ｔ１２０では、画分決定を終了するか否かを判定する。
例えばキーボード２４より最終画分Ｂ₁’をやり直す旨
の入力があれば、この判定がＮＯとなって再びＳＴ１１
８に戻る。そうでない場合には、この判定はＹＥＳとな
り、第２図のメインルーチンにリターンする。

【００３９】あるいは、ＳＴ１１のオートトリガ演算
は、ＳＴ７の場合と同様に、極小点ｐ ₁〜ｐ₅を抽出
し、画分Ｂ₁を設定した後、この画分Ｂ₁内でのＩ₉₀、
Ｉ₀データに選択された平滑化処理を施して、最終画分
Ｂ₁’を決定してもよい。いずれの場合も、細胞数は、
直前の最終画分Ｂによりカウントされるので、最終画分
Ｂ₁’内の細胞数ｎ₁はｎとは異なるが、ｎ₀を下回る
ことはない。よって、この場合も先と同様に細胞数統一
処理を行う（ＳＴ１２）。そして、ＳＴ１３〜ＳＴ１５
の処理が行われる。

【００４０】第６図（ａ）（ｂ）は、顆粒球についてオ
ートトリガ演算を行い最終画分Ｂ₁’を決定した状態を
示すＩ₉₀−Ｉ₀サイトグラムで、第６図（ａ）は、２次
元平滑化処理を行わなかった場合、第６図（ｂ）は、２
次元平滑化処理を行った場合をそれぞれ示している。第
６図（ａ）では、最終画分Ｂ₁’が乱れた形となってお
り、最終画分Ｂ₁’が適切に設定されていない可能性が
高いことを示している。これに対して第６図（ｂ）は、
最終画分Ｂ₁’の境界が滑らかで、最終画分Ｂ ₁’が適
切に設定されていることを確認できる。

【００４１】また、第１２図（ａ）（ｂ）では同様に顆
粒球についてオートトリガ演算を施しているが、第１２
図（ａ）は点列平滑化法を行わなかった場合、第１２図
（ｂ）は点列平滑化法を行った場合を各々示している。
第１２図（ａ）は著しく凹凸が生じる所があるが、第１
２図（ｂ）ではこれに対して最終画分Ｂ₁’の境界がや
や滑らかになり、著しい凹凸が改善されたことを確認で
きる。

【００４２】このように、実施例細胞分析装置では、画
分内あるいはＩ₉₀−Ｉ₀サイトグラム全体でデータの平
滑化処理を適切に行えるので、データ数が少ない場合や
極小点の抽出が困難な場合でも、適切にオートトリガ演
算が行え、演算結果の測定の自動化の促進および信頼性
の向上を図ることができる。なお、上記実施例では、リ
ンパ球、顆粒球について説明しているが、単球等白血球
全般、赤血球、培養細胞等の広範囲な試料分析につい
て、本発明は適用可能である。

【００４３】また、オートトリガの方式としては、特願
昭６３−１９３０３３号のものに限定されず、特願昭６
３−１９３０７２号のものや、特願昭６２−２２８８４
号のものや、その他輪郭追跡法など適宜変更可能であ
る。

【００４４】

【発明の効果】以上説明したように、この発明の細胞分
析装置は、細胞光情報処理手段が、細胞光情報検出手段
で検出された細胞光情報及び細胞光情報手段で収集され
た目的細胞集団の細胞光情報を平滑化する複数の平滑化
手段と、この平滑化手段によって求められた細胞光情報
を、評価用の演算式によって演算し、その演算結果によ
って最適の平滑化手段を決定する平滑化決定手段とを備
えたことを特徴とするものである。

【００４５】その為、ヒストグラムが作成できなかった
り、ヒストグラムに“歯抜け”が生じるような事態を回
避できるばかりでなく、平滑化処理によって著しく元の
データと遊離してしまうという事態をも回避できる。つ
まり、細胞数が少ない場合や細胞の分布にバラツキある
いは偏りがある場合（例えば血液中の顆粒球の分布）で
もオートトリガ演算を適切に行え、しかも、その結果の
評価も同時に行えるので、測定の自動化だけでなく測定
結果の信頼性の向上を一層図ることができる利点を有し
ている。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一実施例に係る細胞分析装置のオート
トリガ演算を説明するフロー図である。

【図２】図１と同じ細胞分析装置の全体動作を説明する
フロー図である。

【図３】図１と同じ細胞分析装置の構成を説明するブロ
ック図である。

【図４】細胞分析装置の２次元平滑化処理を説明する図
面である。

【図５】細胞分析装置のオートトリガ演算を説明するた
めの９０°散乱光強度−前方散乱光強度のサイトグラム
である。

【図６】顆粒球について２次元平滑化を行わない場合と
行った場合を比較する９０°散乱光強度−前方散乱光強
度のサイトグラムである。

【図７】細胞分析装置の細胞数統一処理を説明する図面
である。

【図８】従来の細胞分析装置のオートトリガを説明する
ための９０°散乱光強度−前方散乱光強度のサイトグラ
ムである。

【図９】従来の細胞分析装置のオートトリガを説明する
ための９０°散乱光強度−前方散乱光強度のサイトグラ
ムである。

【図１０】細胞分析装置のオートトリガを説明するため
の９０°散乱光強度及び前方散乱光強度のヒストグラム
である。

【図１１】点列平滑化法処理を説明する図面である。

【図１２】平滑化処理を行わない場合と点列平滑化処理
をおこなった場合の９０°散乱光強度−前方散乱光強度
のサイトグラムデータを図示したものである。

【符号の説明】

ＳＴ１１１複数の平滑化手段ＳＴ１１３〜ＳＴ１１７平滑化決定手段

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【手続補正書】

【提出日】平成４年８月１８日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２４】次に、実施例の細胞分析装置の動作を図２
に示すフローチャートを参照しながら説明する。まず、
分析目的に応じた処理が施された試料が、それぞれ試料
容器３に入れられて、試料ラック２ａに装填される。例
えば、リンパ球サブセットの解析を行う試料は、患者の
血液に緑色蛍光としてフルオレセインイソチオシアネー
ト（ＦＩＴＣ）で標識したＯＫＴ４モノクローナル抗体
及び赤色蛍光としてファイコエリスリン（ＰＥ）で標識
したＯＫＴ８モノクローナル抗体を反応させた後、溶血
処理して得られる。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】細胞浮遊液等が流されるフローセルと、このフローセル内を流れる細胞浮遊液等に光ビームを照
射する光源と、この光ビームが照射された細胞浮遊液等に含まれる細胞
等の各々の粒子状成分について、複数のパラメータより
なる細胞光情報を検出する細胞光情報検出手段と、この細胞光情報検出手段で得られる、１又は２以上のパ
ラメータに基づいて分析領域を設定する分析領域設定手
段と、この分析領域設定手段で設定された分析領域内で、目的
とする細胞集団の細胞情報を収集する細胞光情報収集手
段と、前記細胞光情報検出手段で検出された細胞光情報及び前
記細胞光情報収集手段で収集された目的細胞集団の細胞
光情報を処理する細胞光情報処理手段と、この細胞光情報処理手段の処理結果を出力する出力手段
とを備えてなる細胞分析装置において、前記細胞光情報処理手段中に、前記細胞光情報検出手段で検出された細胞光情報及び前
記細胞光情報収集手段で収集された目的細胞集団の細胞
光情報を平滑化する複数の平滑化手段と、この複数の平滑化手段による処理結果の個々について、
平滑化処理の良否を判定する評価用の演算を施し、その
演算結果によって最適の平滑化手段を決定する平滑化決
定手段と、を備えてなることを特徴とする細胞分析装
置。