JPH0568596A - ポリメラーゼ連鎖反応により増幅したｄｎａの検出法 - Google Patents
ポリメラーゼ連鎖反応により増幅したｄｎａの検出法Info
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- JPH0568596A JPH0568596A JP19987991A JP19987991A JPH0568596A JP H0568596 A JPH0568596 A JP H0568596A JP 19987991 A JP19987991 A JP 19987991A JP 19987991 A JP19987991 A JP 19987991A JP H0568596 A JPH0568596 A JP H0568596A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) により反応チ
ューブ内で増幅した産物である DNA の有無を目視でも
判定できる DNA の検出法を提供する。 【構成】 PCR で増幅させた産物である DNA を、該 DN
A に親和性を有する蛍光物質と結合させて検出する際
に、PCR 後に反応液の pH を調整し非特異的な蛍光の発
生を抑制して蛍光の有無から上記の DNA の存否を判定
する。 【効果】 この DNA 検出法は、PCR により増幅した反
応チューブ内の DNA と蛍光物質との結合による蛍光発
色を目視観察によっても確認できる方法なので、従来必
要とされてきた PCR 産物の電気泳動、UV 照射により発
光した蛍光の写真撮影等の煩雑な操作を必要とせず、従
って所要時間が大幅に短縮する。更に、PCR産物を反応
チューブから取り出す必要もないので、PCR を利用する
場合に問題とされるコンタミネーションが生じなく、こ
れらが相俟って検出の自動化乃至半自動化が可能とな
る。
ューブ内で増幅した産物である DNA の有無を目視でも
判定できる DNA の検出法を提供する。 【構成】 PCR で増幅させた産物である DNA を、該 DN
A に親和性を有する蛍光物質と結合させて検出する際
に、PCR 後に反応液の pH を調整し非特異的な蛍光の発
生を抑制して蛍光の有無から上記の DNA の存否を判定
する。 【効果】 この DNA 検出法は、PCR により増幅した反
応チューブ内の DNA と蛍光物質との結合による蛍光発
色を目視観察によっても確認できる方法なので、従来必
要とされてきた PCR 産物の電気泳動、UV 照射により発
光した蛍光の写真撮影等の煩雑な操作を必要とせず、従
って所要時間が大幅に短縮する。更に、PCR産物を反応
チューブから取り出す必要もないので、PCR を利用する
場合に問題とされるコンタミネーションが生じなく、こ
れらが相俟って検出の自動化乃至半自動化が可能とな
る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は微量の DNA 又は RNA を
鋳型としたものを用い、ポリメラーゼ連鎖反応 [Polyme
rase Chain Reaction (以下、「PCR」と略記する] によ
り、その産物である DNA を増幅させ、この増幅した DN
A を蛍光物質と結合させて蛍光の有無から判定する DNA
の検出法に係る。
鋳型としたものを用い、ポリメラーゼ連鎖反応 [Polyme
rase Chain Reaction (以下、「PCR」と略記する] によ
り、その産物である DNA を増幅させ、この増幅した DN
A を蛍光物質と結合させて蛍光の有無から判定する DNA
の検出法に係る。
【０００２】
【従来の技術】PCR 法は、増幅させたい DNA 領域を挟
む 2 種類のプライマーを用いて DNAポリメラーゼによ
る DNA 合成反応を繰り返すことによって、目的とする
DNA 断片を比較的短時間で数 10 万倍乃至 100 万倍以
上に増幅させる方法である。従ってPCR 法は、原理的に
は、DNA が 1 コピーあれば、これを増幅させて極めて
多数個になし得る方法であるためにウイルスの検出、癌
の診断、遺伝病の診断等の臨床面での応用が期待されて
いる。
む 2 種類のプライマーを用いて DNAポリメラーゼによ
る DNA 合成反応を繰り返すことによって、目的とする
DNA 断片を比較的短時間で数 10 万倍乃至 100 万倍以
上に増幅させる方法である。従ってPCR 法は、原理的に
は、DNA が 1 コピーあれば、これを増幅させて極めて
多数個になし得る方法であるためにウイルスの検出、癌
の診断、遺伝病の診断等の臨床面での応用が期待されて
いる。
【０００３】しかしながら、PCR 産物である DNA の検
出においては、一般にアガロース又はポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動と、それに続く臭化エチジウム染色、更
に UV 照射による反応産物の観察と写真撮影を行う必要
がある。従って、PCR 法を利用する従来の DNA 検出法
は、操作が煩雑で所要時間も長いので処理検体の数が限
られてしまい、その結果、多数の検体の処理が要求され
る一般の病院や臨床検査室では実施が困難な状況にあ
る。
出においては、一般にアガロース又はポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動と、それに続く臭化エチジウム染色、更
に UV 照射による反応産物の観察と写真撮影を行う必要
がある。従って、PCR 法を利用する従来の DNA 検出法
は、操作が煩雑で所要時間も長いので処理検体の数が限
られてしまい、その結果、多数の検体の処理が要求され
る一般の病院や臨床検査室では実施が困難な状況にあ
る。
【０００４】このような状況に鑑み、本発明者等は、こ
れまでに PCR で増幅した DNA の簡単な検出方法とし
て、DNA に親和性を有する蛍光物質を用いることにより
簡便であり多検体を短時間で処理できる方法を開発して
特許出願した (特願平 3 - 26477)。この方法を用いれ
ば、例えば C 型肝炎ウイルスを検出する場合に PCR 後
の DNA の検出において蛍光強度を測定するだけなの
で、100 人の患者血清を検体とする検査が僅か 1 時間
で完了する。このことは、従来の電気泳動による検出法
と比較する場合に、所要時間が約 1/6 に短縮すること
を意味している。
れまでに PCR で増幅した DNA の簡単な検出方法とし
て、DNA に親和性を有する蛍光物質を用いることにより
簡便であり多検体を短時間で処理できる方法を開発して
特許出願した (特願平 3 - 26477)。この方法を用いれ
ば、例えば C 型肝炎ウイルスを検出する場合に PCR 後
の DNA の検出において蛍光強度を測定するだけなの
で、100 人の患者血清を検体とする検査が僅か 1 時間
で完了する。このことは、従来の電気泳動による検出法
と比較する場合に、所要時間が約 1/6 に短縮すること
を意味している。
【０００５】尚、PCR を利用する DNA の検出法は、PCR
が極めて高感度な反応であるために、DNA に僅かなコン
タミネーションがあれば、本来「陰性」の検体が見掛け
上「陽性」と誤判定されることが大きな問題となってい
る。これに関連して言及するに、従来の方法では、PCR
産物の検出の際には必ず反応チューブより反応液を取り
出す必要がある。この際に、PCR 産物である増幅された
DNA が極く僅かでも飛散したり、実験器具や測定者の
手・衣服に付着してキャリーオーバーされることが上記
のコンタミネーションを引き起こす原因となる。従っ
て、PCR を利用する診断法は、有用であることが明らか
であるにも拘らず、PCR 産物のコンタミネーションが障
害となって取扱いが難しいために、一般に普及していな
いのが実状である。
が極めて高感度な反応であるために、DNA に僅かなコン
タミネーションがあれば、本来「陰性」の検体が見掛け
上「陽性」と誤判定されることが大きな問題となってい
る。これに関連して言及するに、従来の方法では、PCR
産物の検出の際には必ず反応チューブより反応液を取り
出す必要がある。この際に、PCR 産物である増幅された
DNA が極く僅かでも飛散したり、実験器具や測定者の
手・衣服に付着してキャリーオーバーされることが上記
のコンタミネーションを引き起こす原因となる。従っ
て、PCR を利用する診断法は、有用であることが明らか
であるにも拘らず、PCR 産物のコンタミネーションが障
害となって取扱いが難しいために、一般に普及していな
いのが実状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】現在迄の処、PCR 技術
を利用する DNA の検出法であって、PCR 後に反応チュ
ーブから反応液を取り出さずに、PCR 産物である DNA
の存否を判定、殊に目視で判定できる DNA の検出法は
確立されるに至っていない。
を利用する DNA の検出法であって、PCR 後に反応チュ
ーブから反応液を取り出さずに、PCR 産物である DNA
の存否を判定、殊に目視で判定できる DNA の検出法は
確立されるに至っていない。
【０００７】本発明は従来技術における既述の問題点乃
至困難を踏まえてなされたものであり、本発明の課題
は、PCR で増幅した DNA の検出において、PCR 後の反
応液を反応チューブの外に取り出さずに且つ目視観察に
よっても DNA の存否を判定できる、簡便にして正確な
DNA の検出法を提供することにある。
至困難を踏まえてなされたものであり、本発明の課題
は、PCR で増幅した DNA の検出において、PCR 後の反
応液を反応チューブの外に取り出さずに且つ目視観察に
よっても DNA の存否を判定できる、簡便にして正確な
DNA の検出法を提供することにある。
【０００８】更に、この目視観察による判定法は、DNA
と蛍光物質との結合によって生じる蛍光を利用する方法
であるので、この際に実験者の主観に左右されないよう
に「陽性」検体と「陰性」検体との蛍光強度の差を 5
倍以上に設定する必要性がある。そこで本発明の次の課
題は、殊に「陰性」検体に関する蛍光強度をできるだけ
低く抑える技術を提供することにある。
と蛍光物質との結合によって生じる蛍光を利用する方法
であるので、この際に実験者の主観に左右されないよう
に「陽性」検体と「陰性」検体との蛍光強度の差を 5
倍以上に設定する必要性がある。そこで本発明の次の課
題は、殊に「陰性」検体に関する蛍光強度をできるだけ
低く抑える技術を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段及び作用】本発明者等は、
PCR を利用する DNA の検出法について鋭意検討を行な
った結果、DNA に親和性を有する蛍光物質を PCR 後の
反応チューブに加えた後、反応チューブより反応液を取
り出すことなく、上記の蛍光物質に特異的な波長の励起
光を反応チューブに直接照射して、反応液の蛍光強度を
目視観察することにより簡単に DNA の存否を判定し、
延いては「陽性」検体と「陰性」検体とを区別し得るこ
とを見い出した。本発明による DNA の検出法におい
て、当該 DNA に親和性を有する蛍光物質としては、抗
生物質、抗癌剤、DNA 及び RNA の標識用蛍光試薬並び
に核染色用の蛍光色素等を用いることができる。これら
の蛍光物質としては、例えばミトラマイシン、アクリジ
ンオレンジ、臭化エチジウム、4',6'-ジアミジノ-2-フ
ェニルインドール、キナクリンマスタード等を例示する
ことができ、これらの内でも殊に臭化エチジウムを用い
るのが好ましい。
PCR を利用する DNA の検出法について鋭意検討を行な
った結果、DNA に親和性を有する蛍光物質を PCR 後の
反応チューブに加えた後、反応チューブより反応液を取
り出すことなく、上記の蛍光物質に特異的な波長の励起
光を反応チューブに直接照射して、反応液の蛍光強度を
目視観察することにより簡単に DNA の存否を判定し、
延いては「陽性」検体と「陰性」検体とを区別し得るこ
とを見い出した。本発明による DNA の検出法におい
て、当該 DNA に親和性を有する蛍光物質としては、抗
生物質、抗癌剤、DNA 及び RNA の標識用蛍光試薬並び
に核染色用の蛍光色素等を用いることができる。これら
の蛍光物質としては、例えばミトラマイシン、アクリジ
ンオレンジ、臭化エチジウム、4',6'-ジアミジノ-2-フ
ェニルインドール、キナクリンマスタード等を例示する
ことができ、これらの内でも殊に臭化エチジウムを用い
るのが好ましい。
【００１０】本発明者等は、「陰性」検体の蛍光強度を
できるだけ低く抑える技術について更に検討を行った結
果、先ず「陰性」検体の蛍光は PCR に用いるプライマ
ーによるものであることを見い出した。次に、このプラ
イマーによる非特異的な蛍光の発生は PCR 後の反応溶
液の pH を調整することにより抑制し得ることを見い出
した。即ち、反応溶液の pH を 10 - 12 に保てば、
「陰性」検体中のプライマーによる蛍光は目視観察では
全く感知できなくのである。一方、この pH 条件下にお
いて「陽性」検体中に存在し且つ PCR で増幅した DNA
は二本鎖を形成することができ、従って蛍光物質と特異
的に反応して蛍光を発するので、「陰性」検体と「陽
性」検体とは目視観察によっても確実に区別することが
可能になった。
できるだけ低く抑える技術について更に検討を行った結
果、先ず「陰性」検体の蛍光は PCR に用いるプライマ
ーによるものであることを見い出した。次に、このプラ
イマーによる非特異的な蛍光の発生は PCR 後の反応溶
液の pH を調整することにより抑制し得ることを見い出
した。即ち、反応溶液の pH を 10 - 12 に保てば、
「陰性」検体中のプライマーによる蛍光は目視観察では
全く感知できなくのである。一方、この pH 条件下にお
いて「陽性」検体中に存在し且つ PCR で増幅した DNA
は二本鎖を形成することができ、従って蛍光物質と特異
的に反応して蛍光を発するので、「陰性」検体と「陽
性」検体とは目視観察によっても確実に区別することが
可能になった。
【００１１】これらが相俟って、本発明者等は従来技術
における既述の課題を解決し、本発明を完成するに至っ
た。
における既述の課題を解決し、本発明を完成するに至っ
た。
【００１２】
【実施例】次に、実施例及び試験例により本発明を更に
詳細に且つ具体的に説明する。尚、以下の実施例及び試
験例においては蛍光物質として臭化エチジウムが用いら
れたが、DNA に親和性を有するものであれば、他の蛍光
物質も同様に用い得ることに留意され度い。
詳細に且つ具体的に説明する。尚、以下の実施例及び試
験例においては蛍光物質として臭化エチジウムが用いら
れたが、DNA に親和性を有するものであれば、他の蛍光
物質も同様に用い得ることに留意され度い。
【００１３】実施例 PCR によるヒト C 型肝炎ウイルス遺伝子 DNA の検出に
ついて説明する。本発明者等が開発した方法 (特願平 3
- 27537 明細書) に従い、ヒト C 型肝炎ウイルスに特
異的な2 組のプライマーを用い且つ C 型肝炎と確定診
断された患者 10 名の血清と健常人 10 名の血清をそれ
ぞれ対象検体とし、連続して 2回の PCR を行った。こ
の PCR 後の反応液をポリアクリルアミドゲル電気泳動
により確認した処、C 型肝炎患者の血清全例において、
予測された 180 塩基対の位置にバンドが検出され、こ
れによって PCR 産物である DNA の存在が確認された。
一方、健常人の血清を検体としたものに関しては、何れ
の場合にも当該バンドは検出されなかった。従って、上
記の 20 検体は検出試験に供するのに適切な検体である
ことが判明したので、これらの検体を用いて本発明によ
る検出法を下記のようにして実施した。
ついて説明する。本発明者等が開発した方法 (特願平 3
- 27537 明細書) に従い、ヒト C 型肝炎ウイルスに特
異的な2 組のプライマーを用い且つ C 型肝炎と確定診
断された患者 10 名の血清と健常人 10 名の血清をそれ
ぞれ対象検体とし、連続して 2回の PCR を行った。こ
の PCR 後の反応液をポリアクリルアミドゲル電気泳動
により確認した処、C 型肝炎患者の血清全例において、
予測された 180 塩基対の位置にバンドが検出され、こ
れによって PCR 産物である DNA の存在が確認された。
一方、健常人の血清を検体としたものに関しては、何れ
の場合にも当該バンドは検出されなかった。従って、上
記の 20 検体は検出試験に供するのに適切な検体である
ことが判明したので、これらの検体を用いて本発明によ
る検出法を下記のようにして実施した。
【００１４】各検体に関して上記のように 2 回の PCR
を行い、PCR 後の反応チューブに直接、1M グリシン-Na
OH 緩衝液 (pH 12) を 20μl と、10μg/ml の臭化エチ
ジウム溶液を 8μl 添加することにより pHを 11.1 に
調整した (上記の操作を、本明細書においては「pH 調
整」と称する)。この pH 調整された反応液を収容して
いる反応チューブに、トランスイルミネーター或は UV
ランプによる UV 照射を暗所において行い蛍光の有無を
目視観察した。結果は図１に示される通りであり、C 型
肝炎患者由来の血清検体全例で明瞭な蛍光が認められ、
健常人由来の血清検体では蛍光は全く認められなかっ
た。
を行い、PCR 後の反応チューブに直接、1M グリシン-Na
OH 緩衝液 (pH 12) を 20μl と、10μg/ml の臭化エチ
ジウム溶液を 8μl 添加することにより pHを 11.1 に
調整した (上記の操作を、本明細書においては「pH 調
整」と称する)。この pH 調整された反応液を収容して
いる反応チューブに、トランスイルミネーター或は UV
ランプによる UV 照射を暗所において行い蛍光の有無を
目視観察した。結果は図１に示される通りであり、C 型
肝炎患者由来の血清検体全例で明瞭な蛍光が認められ、
健常人由来の血清検体では蛍光は全く認められなかっ
た。
【００１５】各反応液が発している蛍光の強度を確認す
るために、反応チューブから反応液を取り出し、蛍光強
度計を用い励起波長 312nm、検出波長 590nm にて蛍光
強度を測定した。結果は図２に示される通りであり。健
常人由来の血清を検体とした場合の反応液の蛍光強度は
全例で低く、一方 C 型肝炎患者由来の血清を検体とし
た場合の反応液の蛍光強度値は健常人由来の血清を検体
とした場合の反応液の蛍光強度値の約 5 倍であり、目
視観察で確認された蛍光の強さと一致していた。このこ
とは、本発明による検出法が目視観察による判定を可能
にするものであり、その判定結果は十分信頼できるもの
であることを示している。
るために、反応チューブから反応液を取り出し、蛍光強
度計を用い励起波長 312nm、検出波長 590nm にて蛍光
強度を測定した。結果は図２に示される通りであり。健
常人由来の血清を検体とした場合の反応液の蛍光強度は
全例で低く、一方 C 型肝炎患者由来の血清を検体とし
た場合の反応液の蛍光強度値は健常人由来の血清を検体
とした場合の反応液の蛍光強度値の約 5 倍であり、目
視観察で確認された蛍光の強さと一致していた。このこ
とは、本発明による検出法が目視観察による判定を可能
にするものであり、その判定結果は十分信頼できるもの
であることを示している。
【００１６】試験例 PCR 後の反応チューブに臭化エチジウムを添加したが、
pH 調整を行わなかったもの (対照品) と、本発明方法
に従い臭化エチジウムを添加し且つ pH 調整を施したも
の (被験品) とについて、上記の実施例と同様に蛍光強
度を測定して比較した。結果は下記の表１に示される通
りであり (表１中において、値はそれぞれ 5例の平均値
で示されている)、この結果から pH 調整を行わない場
合には、健常人由来の血清検体に関する反応液の蛍光強
度は約 10 であって可成り高く、C 型肝炎患者由来の血
清検体に関する反応液の蛍光強度との差が少ないので、
「陰性」か「陽性」かの目視観察による判定が難しい状
況にあること、本発明方法に従って pH 調整を行えば、
健常人由来の血清検体に関する反応液の蛍光強度は約 1
/4 になり、目視観察では蛍光が殆ど感知できなくなる
こと、並びに C 型肝炎患者由来の血清検体に関する反
応液の蛍光強度も低下するが、低下の程度は約 1/2.5
であり、C 型肝炎患者由来の血清検体に関する反応液の
蛍光強度との差が約5 倍程度あり、蛍光を目視観察で充
分に確認することができ、従って「陰性」検体と「陽
性」検体との判定を容易に下し得ることが判る。
pH 調整を行わなかったもの (対照品) と、本発明方法
に従い臭化エチジウムを添加し且つ pH 調整を施したも
の (被験品) とについて、上記の実施例と同様に蛍光強
度を測定して比較した。結果は下記の表１に示される通
りであり (表１中において、値はそれぞれ 5例の平均値
で示されている)、この結果から pH 調整を行わない場
合には、健常人由来の血清検体に関する反応液の蛍光強
度は約 10 であって可成り高く、C 型肝炎患者由来の血
清検体に関する反応液の蛍光強度との差が少ないので、
「陰性」か「陽性」かの目視観察による判定が難しい状
況にあること、本発明方法に従って pH 調整を行えば、
健常人由来の血清検体に関する反応液の蛍光強度は約 1
/4 になり、目視観察では蛍光が殆ど感知できなくなる
こと、並びに C 型肝炎患者由来の血清検体に関する反
応液の蛍光強度も低下するが、低下の程度は約 1/2.5
であり、C 型肝炎患者由来の血清検体に関する反応液の
蛍光強度との差が約5 倍程度あり、蛍光を目視観察で充
分に確認することができ、従って「陰性」検体と「陽
性」検体との判定を容易に下し得ることが判る。
【００１７】
【表１】
【００１８】
【発明の効果】本発明による DNA の検出法は、PCR に
より増幅した反応チューブ内の DNA と蛍光物質の結合
による蛍光発色を目視観察によっても確認できる方法な
ので、従来の PCR 産物の電気泳動、臭化エチジウム染
色、ＵＶ照射による反応産物の確認及び写真撮影等の一
連の操作の内で、PCR 産物の電気泳動や写真撮影と云う
煩雑な操作が要求されず、従って極めて簡便であり且つ
所要時間が大幅に短縮する。更に、PCR 産物を反応チュ
ーブから取り出す必要もないので、PCR の欠点とされる
コンタミネーションの問題も生じない。従って、本発明
による DNA の検出法によれば単位時間当りにおいて多
数の検体を処理することができ、しかも簡便であるため
に目視観察による判定を機器による判定に置き換えるこ
とにより検出の自動化ないし半自動化を可能にする。
より増幅した反応チューブ内の DNA と蛍光物質の結合
による蛍光発色を目視観察によっても確認できる方法な
ので、従来の PCR 産物の電気泳動、臭化エチジウム染
色、ＵＶ照射による反応産物の確認及び写真撮影等の一
連の操作の内で、PCR 産物の電気泳動や写真撮影と云う
煩雑な操作が要求されず、従って極めて簡便であり且つ
所要時間が大幅に短縮する。更に、PCR 産物を反応チュ
ーブから取り出す必要もないので、PCR の欠点とされる
コンタミネーションの問題も生じない。従って、本発明
による DNA の検出法によれば単位時間当りにおいて多
数の検体を処理することができ、しかも簡便であるため
に目視観察による判定を機器による判定に置き換えるこ
とにより検出の自動化ないし半自動化を可能にする。
【図１】C 型肝炎と確定診断された患者 10 名由来の血
清と、健常人 10 名由来の血清を検体とし且つ C 型肝
炎ウイルス遺伝子 DNA に特異的な 2 組のプライマーを
用いて反応チューブ内で PCR を 2 回実施し、この PCR
後の反応液に蛍光物質である臭化エチジウムと pH 調
整のための緩衝液を添加し、暗所にて反応チューブにUV
照射を行って蛍光の有無、即ち PCR により増幅した D
NA の存否を目視観察により判定し、その確認のために
写真撮影した撮像を模写した図である。
清と、健常人 10 名由来の血清を検体とし且つ C 型肝
炎ウイルス遺伝子 DNA に特異的な 2 組のプライマーを
用いて反応チューブ内で PCR を 2 回実施し、この PCR
後の反応液に蛍光物質である臭化エチジウムと pH 調
整のための緩衝液を添加し、暗所にて反応チューブにUV
照射を行って蛍光の有無、即ち PCR により増幅した D
NA の存否を目視観察により判定し、その確認のために
写真撮影した撮像を模写した図である。
【図２】図１に示された蛍光の強度を、蛍光強度計を用
い励起波長 312nm、検出波長 590nm にて測定した結果
を示すグラフである。
い励起波長 312nm、検出波長 590nm にて測定した結果
を示すグラフである。
フロントページの続き (72)発明者 城森 孝仁 愛知県名古屋市東区東外堀町35番地 株式 会社三和化学研究所内 (72)発明者 高橋 治雄 愛知県名古屋市東区東外堀町35番地 株式 会社三和化学研究所内 (72)発明者 林 祐二 愛知県名古屋市東区東外堀町35番地 株式 会社三和化学研究所内 (72)発明者 鈴木 栄二 愛知県名古屋市東区東外堀町35番地 株式 会社三和化学研究所内
Claims (5)
- 【請求項１】 ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) により反
応チューブ内で増幅した産物である DNA を、該 DNA に
親和性を有する蛍光物質と結合させて検出する際に、PC
R 後に反応液の pH を調整して非特異的な蛍光の発生を
抑制することを特徴とする、ポリメラーゼ連鎖反応によ
り増幅した DNA の検出法。 - 【請求項２】 PCR 後に反応液の pH を 10 - 12 に調
整することを特徴とする、請求項１に記載のポリメラー
ゼ連鎖反応により増幅した DNA の検出法。 - 【請求項３】 PCR 後の反応液を反応チューブから取り
出さず、反応チューブに特定波長の光を照射し、蛍光の
有無を目視観察することを特徴とする、請求項１又は２
に記載のポリメラーゼ連鎖反応により増幅した DNA の
検出法。 - 【請求項４】 PCR で増幅した産物である DNA が生
物、ウイルス、プラスミド及び遺伝子組換え体由来の D
NA 若しくは RNAを鋳型としたものであることを特徴と
する、請求項１、２又は３に記載のポリメラーゼ連鎖反
応により増幅した DNA の検出法。 - 【請求項５】 DNA に親和性を示す蛍光物質が抗生物
質、抗癌剤、DNA 及びRNA の標識用蛍光試薬並びに核染
色用蛍光色素から選ばれたものであることを特徴とする
請求項１、２、３又は４に記載のポリメラーゼ連鎖反応
により増幅した DNA の検出法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19987991A JPH0568596A (ja) | 1991-07-16 | 1991-07-16 | ポリメラーゼ連鎖反応により増幅したｄｎａの検出法 |
| EP91120311A EP0488243A1 (en) | 1990-11-30 | 1991-11-27 | Method of extracting virus genome from sample derived from living body infected with the virus and detecting the genome |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19987991A JPH0568596A (ja) | 1991-07-16 | 1991-07-16 | ポリメラーゼ連鎖反応により増幅したｄｎａの検出法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0568596A true JPH0568596A (ja) | 1993-03-23 |
Family
ID=16415137
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19987991A Pending JPH0568596A (ja) | 1990-11-30 | 1991-07-16 | ポリメラーゼ連鎖反応により増幅したｄｎａの検出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0568596A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63102677A (ja) * | 1986-08-22 | 1988-05-07 | エフ．ホフマン―ラ ロシュ アクチェンゲゼルシャフト | 熱安定性ｄｎａポリメラーゼ |
-
1991
- 1991-07-16 JP JP19987991A patent/JPH0568596A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63102677A (ja) * | 1986-08-22 | 1988-05-07 | エフ．ホフマン―ラ ロシュ アクチェンゲゼルシャフト | 熱安定性ｄｎａポリメラーゼ |
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