JPH0569117B2

JPH0569117B2 -

Info

Publication number: JPH0569117B2
Application number: JP6769985A
Authority: JP
Inventors: Tetsuo Shiba; Shozo Kotani
Original assignee: Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1985-03-30
Filing date: 1985-03-30
Publication date: 1993-09-30
Also published as: IL85579A; JPS61227586A

Description

【発明の詳細な説明】

＜産業上の利用分野＞本発明は一般式（）

【化】（式中、ｍ及びｎは独立して８〜12の整数を、
R₁及びR₂は独立して水酸基又は水素原子を、R₃
及びR₄は独立して低級〜中級脂肪酸残基を、R₅、
R₆は各々水素原子又はリン酸基を意味する。）で
示される化合物及ひその塩に関する。＜従来技術＞各種グラム陰性桿菌の外膜成分であるリボ多糖
体〔LPS〕は生体の免疫機能促進活性等を有する
ことが知られており、その主たる活性発現部位は
LPS構成単位の１つであるジサツカライド部位
（Lipid Ａ）にあるといわれている。しかし、そ
の科学構造と活性との関係は明確にされておら
ず、近年ようやく種々のグラム陰性桿菌のLipid
Ａの化学構造解析がなされている。そして現在迄
にサルモネラチフイムリウム（Salmonella
typhimurium）を始めサルモネラミネソタ
（Salmonella minnesota）、大腸菌（Escherichia
coli）等由来のLipid Ａの構造が決定乃至推定さ
れており（J. Biol. Chem.、258、12801〜12803、
1983、Eur.J.Biochem.、145、505〜509、1984、
Tetrahedron Lett.、24、4017〜4020、1983）そ
のうち大腸菌由来Lipid Ａについては完全化学合
成がなされている。一方化学構造の決定と平行し
て大腸菌由来Lipid Ａの各種誘導体も化学合成さ
れ（Tetrahedron Lett.、25、2667〜2670、
1984）、大腸菌由来Lipid Ａ及びその誘導体につ
き各種の生物学的活性が検討されている（Infect.
Immun.、45、293〜296、1984、Eur.J.
Biochem.、140、221〜227、1984、同、143、287
〜242、1984）。その結果一部の化学合成された
Lipid Ａ誘導体については腫瘍壊死因子（以下、
TNF）誘導作用及びマイトジエン活性において
大腸菌由来Lipid Ａと同等又は同等以上であるこ
とが認められている。しかしながら、上記大腸菌
由来Lipid Ａ及びLipid Ａ誘導体については発熱
原性、致死毒性等の好ましからざる作用が認めら
れる。＜発明が解決しようとする問題点＞本発明者等はLipid Ａ誘導体について発熱原
性、致死毒性等の好ましからざる作用を消失又は
減弱化すべく鋭意検討した結果、本発明を完成し
た。＜発明の作用＞本発明は式（）の化合物及びその塩に関す
る。式（）において低級〜中級脂肪酸残基として
はアセチル、プロパノイル、ピバロイル、ヘキサ
ノイル、ウンデカノイル、ドデカノイル、テトラ
デカノイル、テトラデセノイル、ヘキサデカノイ
ル、エイコサノイル等を、好ましくは炭素数12〜
16の直鎖状脂肪酸残基をあげることができる。式（）の化合物の塩としてはナトリウム、カ
リウム、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ
金属もしくはアルカリ土類金属との塩又はトリエ
チルアミン等の有機塩基との塩をあげることがで
きる。本発明の式（）の化合物は種々の製造法によ
り製造可能であるが、その代表例として以下の製
造法Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤをあげることができる。製造法Ａ

【化】

【化】（式中、Allylはアリル基を、m′及びn′は独立し
て10〜14の整数を示し、R₃及びR₄は前記に同じ
である。）即ち、式（）の化合物の２及び2′位アミノ基
に脂肪酸を結合させ（第１工程）、次いで１位水
酸基を保護しているアリル基を脱離させる（第２
工程）。得られた化合物の4′位リン酸基の保護基
であるフエニル基を接触還元で脱離させることに
より式（）においてR₁、R₂及びR₆が水素原子
でR₅がリン酸基である式（ａ）の化合物の製
造することができる（第３工程）。第１〜３工程
の反応条件は下記の通りである。第１工程式（）の化合物を無水塩化メチレン等の溶媒
中トリエチルアミンと室温で数10分間、好ましく
は30分間反応させ、次いで脂肪酸ハライド及びピ
リジンを室温で数時間、好ましくは２時間反応さ
せることにより式（）の化合物を得ることがで
きる。第２工程式（）の化合物を無水の非極性溶媒、例えば
無水テトラヒドロフラン中、１，５−シクロオク
タジエンビス（メチルジフエニルホスフイン）イ
リジウムヘキサフルオロホスフエート（以下、イ
リジウム錯体）と約50℃で数10分間、好ましくは
30分間反応させることにより式（）において
Allyl基を脱離させた化合物を得ることができる。第３工程第２工程で得られた化合物をテトラヒドロフラ
ン−エタノール混液等の溶媒中酸化白金を用いて
接触還元を行ない、次いでクロロホルム−メタノ
ール混液等の溶媒中氷冷下に超音波を照射しなが
ら1M塩酸等の酸と処理することにより式（ａ）
の化合物を製造することができる。製造法Ｂ

【化】（式中、m′、n′、R₃及びR₄は前記に同じ）即ち、式（）の化合物の6′位水酸基をベンジ
ルオキシメチル基等の保護基で保護し（第４工
程）、次いで１位水酸基を保護しているアリル基
を脱離させる（第５工程）。得られた化合物の１
位水酸基をリン酸化し、次いで4′位リン酸基を保
護しているフエニル基及び6′位水酸基を保護して
いるベジルオキシメチル基を接触還元により脱離
させることにより式（）においてR₁及びR₂が
水素原子で、R₅及びR₆がリン酸基である式（
ｂ）の化合物を製造することができる（第６工
程）。第４〜６工程の反応条件は下記の通りであ
る。第４工程式（）の化合物を無水クロロホルム、無水塩
化メチレン等の溶媒、好ましくは無水塩化メチレ
ン中室温でピリジン、ジイソプロピルエチルアミ
ン等の塩基、好ましくはジイソプロピルエチルア
ミン及び塩化ベンジルオキシメチルと約32時間反
応させることにより式（）において6′位水酸基
がベンジルオキシメチル基で保護された化合物を
製造することができる。第５工程第４工程で得られた化合物を製造法Ａにおける
第２工程と同様に反応させることにより式（）
において6′位水酸基が保護され、１位水酸基が脱
保護された化合物を製造することができる。第６工程第５工程で得られた化合物を無水非極性溶媒、
例えば無水テトラヒドロフラン中約−75℃でブチ
ルリチウム及びジベンジルホスホロクロリデート
と数10分間、好ましくは約10分間反応させ、次い
でパラジウム黒触媒を用いて接触還元し、更に酸
化白金を用いて接触還元することにより式（
ｂ）の化合物を製造することができる。製造法Ｃ

【化】

【化】（式中、R₃、R₄、ｍ、ｎは前記に同じであり、
Bzlはベンジル基を示す。）即ち、式（）の化合物の２及び2′位アミノ基
に、保護された水酸基を有する脂肪酸を結合させ
（第７工程、次いで6′位水酸基をベンジルオキシ
メチル基で保護する（第８工程）。得られた化合
物の１位水酸基を保護しているアリル基を脱離さ
せることにより式（）の化合物を製造すること
ができる（第９工程）。これを接触還元して4′位
リン酸基を保護しているフエニル基等を脱離させ
ることにより式（）においてR₁及びR₂が水酸
基で、R₅がリン酸基で、R₆水素原子である式
（Ic）の化合物を製造することができる（第10工
程）。第７〜10工程の反応条件は下記の通りであ
る。第７工程式（）の化合物を無水塩化メチレン等の溶媒
中ベンジル基等の保護基で保護された水酸基を有
する直鎖状脂肪酸、ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド及びトリエチルアミンと室温で約24時間反応
させることにより式（）において２及び2′位ア
ミノ基に、保護された水酸基を有する直鎖状脂肪
酸が結合した化合物を製造することができる。第８工程第７工程で得られ化合物を製造法Ｂの第４工程
と同様に反応させることにより式（）において
２及び2′位アミノ基に、保護された水酸基を有す
る脂肪酸が結合し、6′位水酸基がベンジルオキシ
メチル基等の保護基で保護された化合物を製造す
ることができる。第９工程第８工程で得られた化合物を製造法Ａの第２工
程と同様に反応させることにより式（）の化合
物を製造することができる。第10工程式（）の化合物を製造法Ａの第３工程と同様
に反応させることにより式（ｃ）の化合物を製
造することができる。製造法Ｄ

【化】（式中、R₃、R₄、ｍ及びｎは前記に同じであ
る。）即ち、式（）の化合物の１位水酸基をリン酸
化し、次いで4′位リン酸基を保護しているフエニ
ル基及び6′位水酸基を保護しているベンジルオキ
シメチル基を接触還元で脱離させることにより式
（）においてR₁及びR₂が水酸基で、R₅及びR₆
がリン酸基である式（ｄ）の化合物を製造する
ことができる（第11工程）。第11工程の反応条件
は下記の通りである。第11工程式（）の化合物を製造法Ｂの第６校庭と同様
に反応させることにより式（ｄ）の化合物を製
造することができる。前記製造法において使用される式（）の原料
化合物は新規物質であり参考例に示される方法に
より製造することができる。＜発明の効果＞本発明化合物は強いTNF誘導作用及びアジユ
バント活性を示し、更に発熱原性が大幅に減弱化
されていることを確認した。従つて、本発明化合
物は免疫機能の低下に起因する疾病の予防及び治
療剤、例えば各種感染症の予防・治療剤及び抗腫
瘍剤等として有用である。以下、本発明を更に参考例、実施例及び試験例
により説明するが、本発明はこれらにより限定さ
れるものではない。参考例 (1) アリル２−デオキシ−４，６−０−イソプ
ロピリデン−２−トリクロロエトキシカルボニ
ルアミノ−α−Ｄ−グルコピラノシド8.0ｇを
無水ピリジン120mlに溶かし、氷冷下に塩化テ
トラデカノイル5.4ｇを無水テトラヒドロフラ
ン（以下、THF）15mlに溶かした溶液を撹拌
しながら加えた。氷冷下に20分、室温で24時間
撹拌を続けたのち、少量のメタノールを加えて
しばらく撹拌した。溶媒を減圧留去して得られ
る残分をクロロホルムに溶かし、1M塩酸、飽
和食塩水で洗浄後硫酸マグネシウムで乾燥し
た。乾燥剤を濾去し、濾液にジアゾメタンのエ
ーテル溶液を加えてから溶媒を減圧留去し、残
分をシリカゲルカラムクロマトグラフイー（溶
出溶媒：クロロホルム）で精製して油状物を得
た。この油状物を90％酢酸90mlに溶かし、10分
間90℃に加熱した。放冷後溶媒を減圧留去し、
残渣にトルエンを加えて再び減圧留去したのち
シリカゲルカラムクロマトグラフイー（溶出溶
媒：クロロホルム−メタノール（50：１））で
精製し、アリル２−デオキシ−２−トリクロ
ロエトキシカルボニルアミノ−３−０−テトラ
デカノイル−α−Ｄ−グルコピラノシド（化合
物Ａ）を油状物として得た。収量8.5ｇ。〔α〕
²⁹ _D＋59.4°（C1.20、クロロホルム）。元素分析値 C₂₆H₄₄NO₈Cl₃として計算値 C51.62、H7.33、N2.32、Cl17.58 実験値 C51.71、H7.38、N2.35、Cl17.65 (2) 化合物A5.0ｇを無水ピリジン50mlに溶かし、
氷冷撹拌下にクロロギ酸２，２，２−トリクロ
ロエチル2.2ｇをTHF10mlに溶かした溶液を加
えて30分撹拌した。水を加えてから溶媒を減圧
留去し、残分をクロロホルムに溶かし、1M塩
酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水で順次
洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を
減圧留去し、得られる残分をシリカゲルカラム
クロマトグラフイー（溶出溶媒：クロロホル
ム）で精製し、アリル２−デオキシ−２−ト
リクロロエトキシカルボニルアミノ−６−０−
トリクロロエトキシカルボニル−３−０−テト
ラデカノイル−α−Ｄ−グルコピラノシド（化
合物Ｂ）を油状物として得た。 (3) 化合物B4.7ｇを無水塩化メチレン50mlに溶
かし、４−Ｎ，N′−ジメチルアミノピリジン
1.1ｇ及びピリジン1.5mlを加えたのち、ジフエ
ニルホスホロクロリデート4.5ｇを加えて室温
で４時間撹拌した。水を加えて30分撹拌したの
ち、有機層を1M塩酸、飽和炭酸水素ナトリウ
ム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し硫酸マグネ
シウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られ
る残分をシリカゲルカラムクロマトグラフイー
（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール（200：
１））によつて精製し、アリル６−０−トリ
クロロエトキシカルボニル−２−デオキシ−２
−トリクロロエトキシカルボニルアミノ−３−
０−テトラデカノイル−４−０−ジフエニルス
ルホノ−α−Ｄ−グルコピラノシド（化合物
Ｃ）を油状物として得た。収量5.5ｇ。元素分析値 C₄₁H₅₄NO₁₃PCl₆として計算値 C48.63、H5.38、N1.38、Cl21.01 実験値 C48.83、H5.31、N1.38、Cl21.02 (4) 化合物C30.5ｇを無水THF90mlに溶かし、一
度系を脱気して窒素ガスに置き換えたのち１，
５−シクロオクタジエンビス（メチルジフエニ
ルホスフイン）イリジウムヘキサフルオロホス
フエート（以下、イリジウム錯体）220mgを加
えた。系内をアスピレーターで排気して窒素ガ
スで置換する操作を３回繰返したのち、系内を
水素ガスで置換した。イリジウム錯体の色が消
失したところで再び窒素で置換して50℃に保ち
30分撹拌した。放冷後水20ml、続いてヨウ素
15.3ｇを加えて室温で10分撹拌したのち、５％
チオ硫酸ナトリウム水溶液をヨウ素の色が消失
するまで加えた。クロロホルムを加えて有機層
を分取し、５％チオ硫酸ナトリウム水溶液、次
いで、水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し
た。溶媒を減圧留去して得られた残分をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフイー（溶出溶媒：ク
ロロホルム−アセトン（30：１））で精製して
油状物24.7ｇを得た。この油状物をクロロホルム250mlに溶かし、
ピリジン30mlと無水酢酸25mlを加えて室温で
1.5時間撹拌した。反応混合物に水20mlを加え
てしばらく撹拌したのち、有機層を1M塩酸、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水で順次洗浄
し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧
留去して得られる残分をヘキサンから再結晶
し、１−０−アセチルオキシ−６−０−トリク
ロロエトキシカルボニル−２−デオキシ−２−
トリクロロエトキシカルボニルアミノ−３−０
−テトラデカノイル−４−０−ジフエニルホス
ホノ−α−Ｄ−グルコピラノース（化合物Ｄ）
を得た。収量24.0ｇ。融点57〜59℃。〔α〕³³ _D＋
39.8°（C1.05、クロロホルム）。元素分析値 C₄₀H₅₂NO₁₄PCl₆として計算値 C47.36、H5.17、N1.38、Cl20.97 実験値 C47.65、H5.25、N1.42、Cl20.94 (5) 化合物D21.0ｇを無水塩化メチレン１に溶
かし、−20℃に冷却して乾燥臭化水素ガスを飽
和させて密栓し、室温で18時間放置した。溶媒
を減圧留去したのち、残渣を五酸化リンと水酸
化ナトリウムを入れた真空デシケーター中で乾
燥した。この残分を再び無水クロロホルム400
mlに溶かし、化合物A9.4ｇと粉砕したシアン
化水銀（）10.5ｇを加えて還流下に40時間加
熱した。放冷後、不溶の水銀塩を濾去し、濾液
を10％ヨウ化カリウム水溶液、飽和食塩水で順
次洗浄して硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒
を減圧留去し得られる残分をシリカゲルカラム
クロマトグラフイー（溶出溶媒：クロロホルム
−アセトン（30：１））によつて精製し、メタ
ノールから再結晶するとアリル６−０−｛２
−デオキシ−２−トリクロロエトキシカルボニ
ルアミノ−３−０−テトラデカノイル−４−０
−ジフエニルホスホノ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル｝−２−デオキシ−２−トリクロロエトキ
シカルボニルアミノ−３−０−テトラデカノイ
ル−α−Ｄ−グルコピラノシド（化合物Ｅ）が
得られた。収量15.9ｇ。融点80〜82℃。〔α〕³³ _D
＋19.3°（C0.56、クロロホルム）。元素分析値 C₆₄H₉₂N₂O₂₀PCl₉として計算値 C49.29、H5.95、N1.80、Cl20.46 実験値 C49.46、H5.99、N1.89、Cl20.44 (6) 化合物E12.0ｇを酢酸240mlに溶かし、50℃に
加温して亜鉛末24.0ｇを加えて30分間激しく撹
拌した。放冷後不溶物を濾去し、溶媒を減圧留
去したのち、残分にトルエンを加えて減圧留去
した。残つた固体を酢酸エチル500mlに溶かし
て1M酢酸、飽和食塩水で洗つて硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残分を酢
酸エチル−ヘキサンから再結晶し、アリル６
−０−｛２−デオキシ−２−アミノ−３−０−
テトラデカノイル−４−０−ジフエニルホスホ
ノ−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−デオキ
シ−２−アミノ−３−０−テトラデカノイル−
α−Ｄ−グルコピラノシド・２塩酸塩・1/2水
和物（化合物Ｆ）を得た。収量8.5ｇ。融点212
℃（分解）。〔α〕³³ _D＋25.2°（C0.62、クロロホル
ム−メタノール（５：１））。元素分析値 C₅₅H₈₉N₂O₁₄P・2HCl・0.5H₂O
として計算値 C59.23、H8.32、N2.51、Cl6.36 実験値 C59.22、H8.30、N2.49、Cl6.66 実施例１ (1) 化合物F4.0ｇを無水塩化メチレン80mlに懸濁
し、トリエチルアミン1.0mlを加えて室温で30
分撹拌した。この混合物に塩化テトラデカノイ
ル2.4ｇを無水塩化メチレン10mlに溶かした溶
液とピリジン0.80mlを加えて室温で２時間撹拌
した。メタノール次いでジアゾメタンのエーテ
ル溶液を加えたのち、混合物を1M塩酸、水で
洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減
圧留去し、残分をメタノールから再結晶すると
アリル６−０−｛２−デオキシ−２−テトラ
デカノイルアミノ−３−０−テトラデカノイル
−４−０−ジフエニルホスホノ−β−Ｄ−グル
コピラノシル｝−２−デオキシ−２−テトラデ
カノイルアミノ−３−０−テトラデカノイル−
α−Ｄ−グルコピラノシド（化合物Ｇ）が得ら
れた。収量4.4ｇ。融点85℃。〔α〕³³ _D＋8.6°
（C0.51、クロロホルム）。元素分析値 C₈₅H₁₄N₂O₁₆Pとして計算値 C68.56、H9.77、N1.93 実験値 C68.44、H9.83、N1.89 (2) 化合物Ｇをイリジウム錯体及びヨウ素を用い
て参考例の(4) 同様に反応させて６−０−｛２
−デオキシ−２−テトラデカノイルアミノ−３
−０−テトラデカノイル−４−０−ジフエニル
ホスホノ−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−
デオキシ−−テトラデカノイルアミノ−３−０
−テトラデカノイル−α−Ｄ−グルコピラノー
ス・3/2水和物（化合物Ｈ）を得た。融点203〜
205℃（分解）。〔α〕¹⁵ _D−3.0°（C0.63、クロロホ
ルム−メタノール５：１）。元素分析値 C₈₀H₁₃₇N₂O₁₆P・1.5H₂Oとして計算値 C66.68、H9.79、N1.94 実験値 C66.87、H9.91、N2.09 (3) 化合物H50mgをTHF−エタノール（４：１）
混液10mlに溶かし、酸化白金を加えて７Kg／cm²
の水素雰囲気中で接触還元した。触媒を濾去
し、溶媒を減圧留去して得られた残分をクロロ
ホルム−メタノール（９：１）の混液に溶か
し、氷冷下に超音波を照射しながら1M塩酸で
PH２に調節した。溶媒を減圧留去し、残分をク
ロロホルム−メタノール（９：１）混液に溶か
して同じ操作を繰り返した。再び溶媒を減圧留
去して得られた残分をもう一度同じ溶媒に溶か
し、水を加えてボルテツクスミキサーで撹拌し
て水洗した。有機層を減圧濃縮乾固し、残分を
ジオキサンから凍結乾燥すると６−０−｛２−
デオキシ−２−テトラデカノイルアミノ−３−
０−テトラデカノイル−４−０−ホスホノ−β
−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−デオキシ−２
−テトラデカノイルアミノ−３−０−テトラデ
カノイル−α−Ｄ−グルコピラノースが白色固
体として得られた。収量42mg。〔α〕¹⁵ _D−6.4°
（C0.47、クロロホルム−メタノール（５：１））元素分析値 C₆₈H₂₉N₂O₁₆Pとして計算値 C64.73、H10.30、N2.22 実験値 C64.46、H10.25、N2.16 実施例２ (1) 化合物G4.4ｇを無水塩化メチレン90mlに溶
かし、ジイソプロピルエチルアミン2.7mlと塩
化ベンジルオキシメチル2.4ｇを加えて室温で
32時間撹拌した。混合物を1M塩酸、次いで水
で洗つたのち、硫酸マグネシウムで乾燥した。
溶媒を減圧留去して得られた残分をシリカゲル
カラムクロマトグラフイー（溶出溶媒：クロロ
ホルム−メタノール（80：１））によつて精製
し、メタノールから再結晶するとアリル６−
０−｛６−０−ベンジルオキシメチル−２−デ
オキシ−２−テトラデカノイルアミノ−３−０
−テトラデカノイル−４−０−ジフエニルホス
ホノ−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−デオ
キシ−２−テトラデカノイルアミノ−３−０−
テトラデカノイル−α−Ｄ−グルコピラノシ
ド・１水和物（化合物Ｊ）が得られた。収量
2.4ｇ。融点95〜97℃。〔α〕¹⁶ _D＋13.9°（C0.79、ク
ロロホルム）。元素分析値 C₉₁H₁₄₉N₂O₁₇P・H₂Oとして計算値 C68.65、H9.56、N1.76 実験値 C68.65、H9.61、N1.85 (2) 化合物J200mgを参考例の(4)と同様にしてイリ
ジウム錯体10mg、次いでヨウ素64mgと処理し
た。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフ
イー（溶出溶媒：クロロホルム−アセトン
（５：１））によつて精製しメタノールから再結
晶すると６−０−｛２−デオキシ−２−テトラ
デカノイルアミノ−３−０−テトラデカノイル
−４−０−ジフエニルホスホノ−６−０−ベン
ジルオキシメチル−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル｝−２−デオキシ−２−テトラデカノイルア
ミノ−３−０−テトラデカノイル−α−Ｄ−グ
ルコピラノース・1/2水和物（化合物Ｋ）を得
た。収量123mg。融点123〜125℃。〔α〕¹⁸ _D−3.2°
（C0.78、クロロホルム−メタノール（５：
１））。元素分析値 C₈₈H₁₄₅N₂O₁₇P・0.5H₂Oとして計算値 C68.50、H9.54、N1.82 実験値 C68.50、H9.60、N1.86 (3) 化合物K200mgを無水THF50mlに溶かし、系
内を窒素で置換し、−75℃に冷却した。撹拌下
に15％ブチルリチウム−ヘキサン溶液100μ
を加えた。10分後ジベンジルホスホロクロリデ
ート40μを加えてさらに10分間同じ温度で撹
拌した。パラジウム黒触媒を加えて直ちに７
Kg／cm²の水素雰囲気中で還元した。触媒を濾去
した後溶媒を減圧下に留去した。同じ規模で繰り返した３回分の生成物を集め
てTHF50mlに溶かし、酸化白金を加えて還元
した。触媒を濾去し、溶媒を減圧留去して得ら
れた残分を中圧シリカゲルカラムクロマトグラ
フイー（溶出溶媒：クロロホルム−メタノール
−水−トリエチルアミン（50：10：１：0.1〜
５：５：１：0.1））、続いてシリカゲルTLC（展
開溶媒：クロロホルム−メタノール−水−濃ア
ンモニア水（50：25：４：２））で精製した。得られた固体をクロロホルム−メタノール
（９：１）の混液に溶かし、氷冷下に超音波を
照射しつつPH２になるまで1M塩酸を少量ずつ
加えた。水を加えてボテツクスミキサーで混合
したのち遠心分離して水層を除去した。有機層
を同様に水で３回洗い、溶媒を減圧留去したの
ち、残分をジオキサンから凍結乾燥すると６−
０−｛２−デオキシ−２−テトラデカノイルア
ミノ−３−０−テトラデカノイル−４−０−ホ
スホノ−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−デ
オキシ−２−テトラデカノイルアミノ−３−０
−テトラデカノイル−１−０−ホスホノ−α−
Ｄ−グルコピラノースが白色固体として得られ
た。又、水層を合わせて凍結乾燥し、得られた
固体をクロロホルム−メタノールの混液に溶か
し、塩酸及び水で洗うと上記化合物が得られ
た。合計収量101mg。〔α〕¹⁶ _D＋2.8°（C0.43、クロ
ロホルム−メタノール（５：１））。元素分析値 C₆₈H₁₃₀N₂O₁₉P₂として計算値 C60.87、H9.77、N2.09 実験値 C60.91、H9.65、N2.44 実施例３ (1) 化合物F4.5ｇを無水塩化メチレン90mlに懸濁
し、トリエチルアミン1.1mlを加えて室温で撹
拌した。この混合物に(R)−３−ベンジルオキシ
テトラデカン酸3.6ｇとジシクロヘキシルカル
ボジイミド2.3ｇを加えて24時間撹拌を続けた。
不溶物を濾去し、以下、実施例１の１）と同様
に処理するとアリル６−０−｛２−デオキシ
−２−〔(R)−３−ベンジルオキシテトラデカノ
イルアミノ〕−３−０−テトラデカノイル−４
−０−ジフエニルホスホノ−β−Ｄ−グルコピ
ラノシル｝−２−デオキシ−２−〔(R)−３−ベン
ジルオキシテトラデカノイルアミノ〕−３−０
−テトラデカノイル−α−Ｄ−グルコピラノシ
ド・１水和物（化合物Ｌ）を得た。収量2.9ｇ。
融点140〜142℃。〔α〕¹⁶ _D−7.2°（C1.0、クロロホ
ルム）。元素分析値 C₉₇H₁₅₃N₂O₁₈P・H₂Oとして計算値 C69.17、H9.28、Ｎ 1.66 実験値 C69.04、H9.41、Ｎ 1.79 (2) 化合物L2.5ｇを実施例２の(1)と同様に反応さ
せ、得られた生成物をシリカゲルカラムクロマ
トグラフイー（溶出溶媒：クロロホルム−アセ
トン（30：１））を用いて精製しメタノールか
ら再結晶するとアリル６−０−｛６−０−ベ
ンジルオキシメチル−２−デオキシ−２−〔(R)
−３−ベンジルオキシテトラデカノイルアミ
ノ〕−３−０−テトラデカノイル−４−０−ジ
フエニルホスホノ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル｝−２−デオキシ−２−〔(R)−３−ベンジルオ
キシテトラデカノイルアミノ〕−３−０−テト
ラデカノイル−α−Ｄ−グルコピラノシド・１
水和物（化合物Ｍ）が得られた。収量1.6ｇ。
融点108〜111℃。〔α〕¹⁶ _D＋3.4°（C0.83、クロロ
ホルム）。元素分析値 C₁₀₅H₁₆₁N₂O₁₉P・H₂Oとして計算値 C69.90、H9.10、N1.55 実験値 C69.91、H9.29、N1.67 (3) 化合物M1.5ｇを参考例の(4)と同様にしてイ
リジウム錯体45mg、次いでヨウ素420mgと反応
させ、得られた生成物をシリカゲルカラムクロ
マトグラフイー（溶出溶媒：クロロホルム−メ
タノール（100：１））で精製した。メタノール
から再結晶し、６−０−｛６−０−ベンジルオ
キシメチル−２−デオキシ−２−｛(R)−３−ベ
ンジルオキシテトラデカノイルアミノ〕−３−
０−テトラデカノイル−４−０−ジフエニルホ
スホノ−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−デ
オキシ−２−〔(R)−３−ベンジルオキシテトラ
デカノイルアミノ〕−３−０−テトラデカノイ
ル−α−Ｄ−グルコピラノース・１水和物（化
合物Ｎ）を1.2ｇ得た。融点103〜106℃。〔α〕
¹⁸ _D−10.5°（C0.62、クロロホルム−メタノール
（５：１））。元素分析値 C₁₀₂H₁₅₇N₂O₁₉P・H₂Oとして計算値 C69.44、H9.08、N1.59 実験値 C69.60、H9.21、N1.69 (4) 化合物N100mgをTHF3mlに溶かし、酸化白
金を加えて７Kg／cm²の水素雰囲気中で接触還元
した。生成物を実施例１の(3)と同様に精製しジ
オキサンから凍結乾燥すると６−０−｛２−デ
オキシ−２−〔(R)−３−ヒドロキシテトラデカ
ノイルアミノ〕−３−０−テトラデカノイル−
４−０−ホスホノ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル｝−２−デオキシ−２−〔(R)−３−ヒドロキシ
テトラデカノイルアミノ〕−３−０−テトラデ
カノイル−α−Ｄ−グルコピラノース・3/4水
和物が白色固体として得られた。収量78mg。
〔α〕¹⁸ _D−16.3°（C0.52、クロロホルム−メタノー
ル（５：１））。元素分析値 C₆₈H₁₂₉N₂O₁₈P・0.75H₂Oとして計算値 C62.48、H10.06、N2.14 実験値 C62.48、H10.03、N2.43 実施例４化合物N300mgを無水THF45mlに溶かし、15％
プチルリチウム−ヘキサン溶液125μ及びジベ
ンジルホスホロクロリデート50μを用いて実施
例２の(3)のリン酸化と同様に反応させた。生成物
を実施例２の(3)と同様にパラジウム黒、次いで酸
化白金を触媒として接触還元した。反応生成物を
中圧シリカゲルカラムクロマトグラフイー（溶出
溶媒：クロロホルム−メタノール−水−トリエチ
ルアミン（30：10：１：0.1〜10：10：２：
0.1））、続いてシリカゲルTLC（展開溶媒：クロロ
ホルム−メタノール−水−濃アンモニア水（30：
20：３：２））で精製した。得られた固体に100mg当り約10mlの水を加え、
トリエチルアミンを少しづつ加えてPH９〜10に調
節して溶かした。氷冷下に超音波を照射しながら
1M塩酸を加えて酸性にし、生じた沈殿を０℃、
17500rpmで20分間遠心分離した。沈殿を氷冷し
た0.1M塩酸、次いで水で洗いそれぞれ水層を遠
心分離し、沈殿を凍結乾燥すると６−０−｛２−
デオキシ−２−〔(R)−３−ヒドロキシテトラデカ
ノイルアミノ〕−３−０−テトラデカノイル−４
−０−ホスホノ−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−
２−デオキシ−２−〔(R)−３−ヒドロキシテトラ
デカノイルアミノ〕−３−０−テトラデカノイル
−１−０−ホスホノ−α−Ｄ−グルコピラノー
ス・２水和物が白色固体として得られた。また、水層及び塩酸層を合わせ凍結乾燥した。
得られた固体をトリエチルアミンで中和し水に溶
解した後塩酸で洗浄すると上記化合物が得られ
た。合計収量163mg。〔α〕¹⁶ _D−2.7°（C0.48、クロロ
ホルム−メタノール（５：１））。元素分析値 C₆₈H₁₃₀N₂O₂₁P₂・2H₂Oとして計算値 C57.94、H9.58、N1.99 実験値 C57.99、H9.55、N2.11 実施例５実施例１で得られた化合物35mgをクロロホルム
−メタノール（９：１）の混液７mlに溶解し、ト
リエチルアミン3.9μを加えた。氷冷下に20分間
超音波を照射したのち、溶媒を減圧留去し、残渣
にジオキサンを加え凍結乾燥し、６−０−｛２−
デオキシ−２−テトラデカノイルアミノ−３−０
−テトラデカノイル−４−０−ホスホノ−β−Ｄ
−グルコピラノシル｝−２−デオキシ−２−テト
ラデカノイルアミノ−３−０−テトラデカノイル
−α−Ｄ−クルコピラノース・トリエチルアミン
塩・１水和物39mgを得た。元素分析値 C₆₈H₁₂₉N₂O₁₆P・（C₂H₅）₃N・H₂O
として計算値 C64.36、H10.66、N3.04 実験値 C64.38、H10.38、N2.87 実施例６実施例２で得られた化合物72mgを無菌水2.5ml
に懸濁し、トリチルアミン15μを加えた。氷冷
下に超音波を照射したのち凍結乾燥し、６−０−
｛２−デオキシ−２−テトラデカノイルアミノ−
３−０−テトラデカノイル−４−０−ホスホノ−
β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２−デオキシ−２
−テトラデカノイルアミノ−３−０−テトラデカ
ノイル−１−０−ホスホノ−α−Ｄ−グルコピラ
ノース・トリエチルアミン塩・２水和物77mgを得
た。元素分析値 C₆₈H₁₅₀N₂O₁₉P₂・（C₂H₅）₃N・
2H₂Oとして計算値 C60.10、H10.15、N2.84 実験値 C59.91、H9.99、N3.10 実施例７実施例３で得られた化合物20mgを実施例５と同
様にして６−０−｛２−デオキシ−２−（(R)−３−
ヒドロキシテトラデカノイルアミノ〕−３−０−
テトラデカノイル−４−０−ホスホノ−β−Ｄ−
グルコピラノシル｝−２−デオキシ−２−〔(R)−３
−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ〕−３−０
−テトラデカノイル−α−Ｄ−グルコピラノー
ス・トリエチルアミン塩・3/2水和物22mgを得た。元素分析値 C₆₈H₁₂₉N₂O₁₈P・（C₂H₅）₃N・2/3
H₂Oとして計算値 C62.51、H10.42、N2.96 実験値 C62.48、H10.32、N2.82 実施例８実施例４で得られた化合物100mgをクロロホル
ム−メタノール（９：１）の混液10mlに溶解し、
トリエチルアミン20μを加えた。氷冷下に20分
間超音波を照射し、溶媒を減圧留去した。残渣を
ジオキサンに溶解し凍結乾燥し、６−０−｛２−
デオキシ−２−〔(R)−３−ヒドロキシテトラデカ
ノイルアミノ−３−０−テトラデカノイル−４−
０−ホスホノ−β−Ｄ−グルコピラノシル｝−２
−デオキシ−２−〔(R)−３−ヒドロキシテトラデ
カノイルアミノ〕−３−０−テトラデカノイル−
１−０−ホスホノ−α−Ｄ−グルコピラノース・
ビストリエチルアミン塩・２水和物114mgを得た。元素分析値 C₆₈H₁₃₀N₂O₂₁P₂・２（C₂H₅）₃N・
2H₂Oとして計算値 C59.60、H10.25、N3.48 実験値 C59.81、H10.14、N3.22 試験例１本発明化合物のTNF誘導活性については、結
核菌生菌（B.C.G.）にて感作されたマウスに本発
明化合物を投与し、その血清のマウス線維芽細胞
由来L929細胞に対する増殖抑制効果を検討する
ことにより確認した。即ち、ddYマウスに１個体
あたり10μｇの本発明化合物又は対照化合物を尾
静脈内に投与する。その２時間後に血液を集め、
血清分離する。一方L929細胞を96穴のマイクロ
プレートに１穴あたり５×10³コとなるように５
％ウシ胎児血清（FCS）加RPMI 1640培地を用
いて培養する。この各穴内に５％FCS加RPMI
1640培地で適宜希釈した前述のマウス血清を各穴
内における最終血清希釈倍率が各々、1/30、1/6
０、1/120、1/240、1/480、1/960、1/1920、1/384
０、1/7680、1/15360、1/30720、1/61440となる様
に加え４日間培養する。培養後クリスタルバイオ
レツトにて生存細胞を染色し、残存細胞数を染色
濃度より算定し、最終的に50％のL929細胞の増
殖抑制を示すマウス血清希釈倍率を求め、その逆
数（TCID₅₀）を求める。表１にその成績を示す。

【表】対照化合物１；６−０−｛２−デオキシ−２−〔(R)
−３−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ〕−
３−０−〔(R)−３−ヒドロキシテトラデカノイ
ル〕−４−０−ホスホノ−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル｝−２−デオキシ−２−〔(R)−３−ヒドロ
キシテトラデカノイルアミノ〕−３−０−〔(R)−
３−ヒドロキシテトラデカノイル−α−Ｄ−グ
ルコピラノース対照化合物２；６−０−｛２−デオキシ−２−〔(R)
−３−ヒドロキシテトラデカノイルアミノ〕−
３−０−〔(R)−３−ヒドロキシテトラデカノイ
ル〕−４−０−ホスホノ−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル｝−２−デオキシ−２−〔(R)−３−ヒドロ
キシテトラデカノイルアミノ〕−３−０−〔(R)−
３−ヒドロキシテトラデカノイル〕−１−０−
ホスホノ−α−Ｄ−グルコピラノース試験例２本発明化合物の発熱原性についてはリムルステ
スト（トキシカラーテスト）により検討した。即
ち、本発明化合物又は対照化合物を0.1％トリエ
チルアミン水溶液（パイロジエンフリー）にて２
mg／mlとなるように溶解し、更にパイロジエンフ
リーの蒸留水にて１mlあたり４×10^-1mgとなるよ
うに希釈する。以下10倍希釈を繰り返し１mlあた
り４×10^-1mgから４×10^-10mgまでの希釈水溶液
を調整する。各希釈水溶液0.1ml及び凍結乾燥し
たカブトガニアメーバ様細胞分解産物と発色物質
であるＮ−第三級ブトキシカルボニル−Ｌ−ロイ
シルグリシル−Ｌ−アルギニン−Ｐ−ニトロアニ
リンの混合物0.1mlをパイロジエンフリーの反応
容器に加え、37℃にて30分間インキユベートす
る。その後常法に従い亜硝酸ナトリウム0.5mlを
加え撹拌後、スルフアミン酸アンモニウム及びＮ
−（１−ナフチル）エチレンジアミンを0.1mlずつ
加えて発色させ、波長545nｍにて吸光度を測定
する。この結果をもとに各試験化合物１mgが示す
活性を大腸菌0111：B₄(W)株由来のLPS量に換算
し比較する。表２にその成績を示す。

【表】

Claims

【特許請求の範囲】１一般式【化】で示されるジサツカライド誘導体及びその塩（式
中、ｍ及びｎは独立して８〜12の整数を、R₁及
びR₂は独立して水酸基又は水素原子を、R₃及び
R₄は独立して低級〜中級脂肪酸残基を、R₅及び
R₆は独立して水素原子又はリン酸基を示す。）