JPH0575352B2 - - Google Patents

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JPH0575352B2
JPH0575352B2 JP62097130A JP9713087A JPH0575352B2 JP H0575352 B2 JPH0575352 B2 JP H0575352B2 JP 62097130 A JP62097130 A JP 62097130A JP 9713087 A JP9713087 A JP 9713087A JP H0575352 B2 JPH0575352 B2 JP H0575352B2
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JP
Japan
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flow
cell
cells
capillary tube
nozzle
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Hiroshi Ooki
Hideaki Kanbara
Akira Myake
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Hitachi Ltd
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Hitachi Ltd
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G01N15/1404—Handling flow, e.g. hydrodynamic focusing

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  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
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  • General Physics & Mathematics (AREA)
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  • Pathology (AREA)
  • Optical Measuring Cells (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はフローセルに係り、特に生体細胞分析
装置に用いられるフローセルに関する。
〔従来の技術〕
従来から、細胞をフローセルに流しながら光計
測し、細胞の分析をおこなう生体細胞分析装置が
存在する。この生体細胞分析装置、いわゆるフロ
ーサイトメータでは、フローセル内の細胞懸濁液
中の細胞に光を照射し、細胞からの散乱光や螢光
吸収により細胞の大きさ、形状等の状態を分析し
ている。
この生体細胞分析装置では、細胞懸濁液を測定
部毛細管に安定して、しかも目詰りなく流すため
に、層流状態の急激な縮流を利用して、細胞懸濁
液を生理食塩水で包み込むようにして流す方式が
採用されている。この方式について、図面に従い
説明する。第２図は、この方式の概念図である。
第２図において、被検細胞懸濁液（サンプル液）
１は、シーズ液２により囲まれている。すなわち
サンプル液の回りにシース液流２が形成されるこ
とによりサンプル流は層流状態の縮流となる。こ
のようなサンプル流は出口３から系外に排出され
る。
このような方式は、シースフロー方式とよばれ
生体細胞を分析する上で有効な手段となつてい
る。しかし、第２図の４に示すように、細胞懸濁
液中の細胞には毛細管壁面や生理食塩水（シース
液）から等方適な力が作用するため、赤血球など
のような偏平な細胞では光照射測定部において
様々な姿勢となり、光測定部における散乱光や螢
光の測定データがばらつくという欠点があつた。
そのような欠点を克服するために、従来から二
つの手法がとられていた。そのうちの一つは、第
３図のフローセルの断面図に示すようにフローセ
ル縮流部と毛細管断面の縦横比を変えて流動中の
細胞に作用する縦方向、横方向の大きさを変える
ことにより、偏平な細胞の向きを一つの方向に揃
える方法である。この方法については、ザ・ジヤ
ーナル オブ ヒストケミストリー アンド サ
イトクミストリー、25巻、第７号（1977年）第
774頁から第780頁（The Journal of
Histochemistry and Cytochemistry、Vol.25、
No.７（1977）pp774−780）において論じられる。
他の一つの方法は、第４図に示すように細胞懸
濁液（サンプル流）をシース液の流れの中に放出
するノズル５の先端形状をくさび形にするもので
ある。第４図Ａはそのノズルの斜視図を示す。一
方第４図Ｂはノズル５から送られたサンプル流１
とシース液２との流れの状態を示すためのフロー
セルの断面図である。このようにノズルの先端形
状をくさび形にし、シース液流れの中における細
胞懸濁流の断面形状を偏平にすることにより、そ
の面内に偏平な細胞をとじ込めて流すことができ
る。この方法については、バイオフイシツクス
ジヤーナル23巻（1978年第７頁から第13頁
（Biophysics Journal、Vol.23（1978）pp7−13）
において詳しく論じられている。
〔発明が解決しようとする問題点〕
しかし、上記従来技術では次の問題点がある。
すなわち第３図に示すフローセルの断面縦横比を
変化させる従来例では、細胞に常に同じ割合で縦
横に力が作用するため、ノズルから放出された細
胞の初めの姿勢によつては常に回転モーメントが
加わり、偏平な細胞がすべて一方向に揃わないと
いう問題がある。
また、第４図に示す細胞懸濁液のノズル形状を
くさび形にする従来例では、わずかなシース液
（生理食塩水）の乱れで、偏平になつた細胞懸濁
流の流れがリボン状にねじれ、偏平な細胞を常に
一方向から測定することができないという問題点
があつた。
このように偏平な細胞を安定な姿勢にして測定
できないことにより、光測定部における測定デー
タの精度が損われるという問題があつた。
本発明は係る問題点を解決するために、偏平な
細胞でも高精度で光計測が可能となるフローセル
を提供することを目的とする。
〔問題点を解決するための手段〕
上記目的を達成するために本発明は、流路を形
成するための毛細管と、該毛細管内に設けられ、
細胞懸濁液を送るためのノズルとを有し、該ノズ
ルから送られる細胞懸濁流の回りの前記毛細管内
にシース液が供給され、該シース液により細胞懸
濁流の層流が形成されてなるフローセルにおい
て、前記毛細管内の液流を速度勾配を有する平行
流となるように当該毛細管内の流速を調整する流
速調整手段が設けられてなることを特徴とするフ
ローセルである。
〔作 用〕
上記本発明によれば、毛細管内の液流が速度勾
配を有する平行流、すなわちせん断流となつてい
るために、せん断流の中に存在する細胞が軸対称
形に変形し、偏平な細胞もその姿勢が揃うことに
なり、光計測のデータがばらつくことがない。し
たがつて、常に高精度な測定をおこなうことがで
きる。
〔実施例〕
次に本発明の実施例について図面に従い詳説す
る。
第１図はその一実施例を示す断面構成図であ
る。なお第１図において従来の技術で説明した部
分と同の部分については同の符号を付しその説明
を省略する。
第１図において、毛細管１０内には細胞懸濁流
（サンプル流）１を送り出すためのノズル５が設
けられている。この毛細管１０及びノズル５は、
このような流路を形成するための溝が設けられた
複数の金属プレートを積層することにより形成さ
れるものである。すなわち第１図１１部分は金属
板プレートからなつている。なお、図面の表側及
び裏側部分はガラス板でシールされていることか
ら、流路がシール状態になつている。このような
毛細管１０は、流れの下流側にいくに従つて、先
すぼまり形状となり、以後第１図右側部分に存在
する光計測部にいくまで、毛細管流路幅が狭くな
り、以後一定の幅を有するもの５２となつてい
る。
次に実施例の動作について説明する。
ノズル５内には被検細胞が含有された懸濁流が
送り込まれている。この懸濁液は加圧状態で送り
込まれているために、ノズル５先端から細胞懸濁
流１が毛細管１０内に形成されている。一方、ノ
ズル５周囲の毛細管部分にはシース液２が加圧状
態で送り込まれている。このシース液２はサンプ
ル流１を包み込むようにして流されており、かつ
光計測部に至る毛細管部分１０には所定の太さま
で絞り込まれているために、細胞懸濁流１は急激
な縮流となり、かつ層流状態５０となる。この層
流状態となつたサンプル流には被検細胞５１が
個々に通過し、その結果、光計測部においては一
つごとの細胞の状態を測定することができる。
測定部に至る毛細管の壁面の一方６は滑らかな
ものとなつており、壁面６に対する壁面７は粗い
面となつている。この結果毛細管の中を流れる流
体は滑らかな面６の側では小さな流体抵抗を受
け、粗い面７の側では大きな流体抵抗を受ける。
しかも面６と面７との距離は200μｍから500μｍ
と極めて狭い流路であるため流体の速度分布は流
路内全域がせん断流となる。第１図Ａ部分の拡大
図を第５図に示す。第５図に示すように、流路内
全域の流体と速度分布２０は、流路内全域でせん
断流とする。すなわち速度勾配をもつた平行流と
なるために、せん断流にさらされた偏平な細胞は
軸対称形状の細胞２に変形される。これはあたか
もラグビーボール状となり、その長軸が流れの方
向と一致するようになる。この結果、偏平な細胞
でも測定部における姿勢が揃つた形状となること
により光測定のデータがばらつくことなく常に高
精度な測定を可能とする。
第６図は、光測定部における毛細管の断面を示
した図である。第６図において滑らかな壁面６と
粗い壁面７が相対している状態が示されている。
この壁面６と７はガラス板８によつて密閉されて
おり、このガラス板を通して散乱光や螢光９が流
路内に流れる細胞２に照射される。対軸対称形と
なつた細胞２からの散乱光や螢光は、もはや最初
の細胞の姿勢に関係なく常に同じ種類の細胞であ
れば同じ情報が与えられる。壁面の表面粗さにつ
いては、滑らかな面の粗さは壁面間距離の1/500
以下であり、粗い面は1/20以上であればよい。粗
さの範囲については滑らかな壁面側が1Sから
10S、粗い壁面のほうが100Sから1000S程度が好
適である。
第７図は本発明の他の実施例を示すもので、粗
い面７を、ガラス面の一部まで延長した実施例を
示す構成図である。第７図はこの実施例における
光測定部の断面構成図を示すものである。
通常フローセルに用いられるガラスは、表面粗
さがよいものが用いられている。これは光計測に
おける光の照射が必要であるためである。しかし
本実施例では、ガラス面の一部３０をすりガラス
のように粗くし、壁面７の側の流体抵抗を大きく
したものである。このようにすることにより、さ
らに速度勾配が大きくなる。したがつて、第１図
に示す実施例に比較して、さらに被検細胞が軸対
称形状になりやすいものである。
本実施例では、当然のことながら、ガラス面を
通して散乱光や螢光の測定をしなければならない
ため、ガラス面を粗くする部分の距離は壁面間距
離の1/3以下とし、入射光や散乱光がこの部分に
かかわらないように光学系を調整する必要があ
る。
以上第１図及び第７図の実施例において、壁面
を滑らかにする手段としては研磨やめつきなどの
通常の方法を用いることができる。また壁面を粗
くする手段としてはローレツト加工や微細切削加
工などを用いることができる。
さらに第１図及び第７図の実施例において測定
される細胞は、生体の通常の細胞のほか赤血球な
どのように偏平な細胞を測定することができる。
次に本発明の他の実施例について説明する。第
８図はその実施例に係る毛細管部分の断面構成図
である。本実施例では、第１図の実施例と比較し
て、ノズル５先端部にメツシユ材４０が設けられ
ている点が異なつている。このメツシユ材４０は
流路断面内に設けられ、流路の一端から他端にい
くに従つてメツシユの間隔が徐々に狭くなつてい
る。第９図にこのメツシユ材の平面図を示す。第
９図において、メツシユ材の中央部にはノズル５
先端部に相当する孔４１が設けられている。前述
のように、このメツシユ材の間隔はメツシユ材の
一端から他端にいくに従つて徐々に狭くなつてい
る。したがつて、このメツシユ内を流れる流体抵
抗は、間隔が狭くなるほうに従い大きくなり、し
たがつて流体の流速分布は前記第５図で示したよ
うに、せん断流となる。この結果、被検細胞の形
状を軸対称形なものとすることができる。なお、
本実施例においてメツシユ材１４をノズル５の先
端より下流側に設置することは望ましくない。細
胞２がメツシユにひつかかり、光測定をすること
ができないからである。
次に、さらに本発明の他の実施例について説明
する。第１０図は、その実施例における毛細管部
分の断面構成図である。
本実施例では以上の実施例と異なり、シース液
流路を分割する隔壁３５が設けられている。本実
施例の場合は、シース液流路を６個に分割してい
る。この分割されたそれぞれの流路におけるシー
ス液の流速が、第１０図に示すように毛細管の一
端側から他端側に向つて徐々に小さくなるように
する。この結果、前記第５図に示すようなせん断
流が得られ、被検細胞の軸対称形のものとするこ
とができる。本実施例では、ノズル５を挾んで一
方の側のシース液流速はサンプル液１流れの速度
より順次大きくなるように流し、他方の側は順次
小さくなるように流すことが必要である。なお、
隔壁の数は必要に応じて選択することができる。
〔発明の効果〕
以上説明したように本発明によれば、毛細管の
流れは全域せん断流となる結果、そのせん断流の
中に存在する細胞は軸対称形に変形する。したが
つて、偏平細胞でもその姿勢によつて光測定のデ
ータがばらつくことがないため、常に被検細胞の
状態を高精度で測定できるフローセルを提供する
ことができる。
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明にかかるフローセルの一実施
例の縦断面図、第２図は従来方式のフローサイト
メータの概念図、第３図は従来のフローセルの断
面図、第４図Ａは従来のフローセルのノズル先端
形状を示す斜視図、第４図Ｂはノズル５から送ら
れたサンプル流とシース液との流れの状態を示す
ためのフローセルの断面図、第５図は第１図Ａ部
分の拡大図、第６図は光測定部における第１図の
フローセルの横断面図、第７図は本発明の他の実
施例にかかる光測定部における横断面図、第８図
は本発明の第３の実施例を示すフローセルの横断
面図、第９図は第８図の実施例に用いられるメツ
シユの平面図、第１０図は本発明の第４の実施例
を示すフローセルの横断面図である。 １…サンプル流、２…シース液流、１０…毛細
管、２０…流体の速度分布、５０…サンプル流の
層流、５１…被検細胞。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. １ 流路を形成するための毛細管と、該毛細管内
    に設けられ、細胞懸濁液を送るためのノズルとを
    有し、該ノズルから送られる細胞懸濁流の回りの
    前記毛細管内にシース液が供給され、該シース液
    により細胞懸濁流の層流が形成されてなるフロー
    セルにおいて、前記毛細管内の液流を速度勾配を
    有する平行流となるように当該毛細管内の流速を
    調整する流速調整手段が設けられてなることを特
    徴とするフローセル。
JP62097130A 1987-04-20 1987-04-20 フロ−セル Granted JPS63262565A (ja)

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JP62097130A JPS63262565A (ja) 1987-04-20 1987-04-20 フロ−セル
US07/182,430 US5007732A (en) 1987-04-20 1988-04-18 Flow-cell device
EP88106306A EP0288029B1 (en) 1987-04-20 1988-04-20 Flow-cell device
DE3886980T DE3886980T2 (de) 1987-04-20 1988-04-20 Vorrichtung mit Durchflusszelle.

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