JPH0577667B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明はアンジオテンシン変換酵素に対して酵
素阻害活性を示す新規なヒスタジン関連化合物に
関する。 〔従来の技術〕 ヒスタジン（Histargin）は本発明者でもある
梅沢らによつてストレブトミセス属に属するヒス
タジン生産菌ストレプトミセス・ロゼオビリデイ
ス（Streptomyces roseoviridis）MF118−A5
（微工研菌寄7043号）の培養液より単離された
化合物で、次の構造を有する。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ヒスタジンは、α−アミノ酸であるヒスチジン
とアルギニンの各α−アミノ基がエチレン基を介
して結合した新しい型の化合物であるため、両ア
ミノ酸を種々のアミノ酸に変換した類縁体を検索
することによつて、より強い阻害活性を有する生
理活性物質を発見できる可能性がある。また、カ
ルボキシペプチダーゼＢやエンケフアリナーゼ以
外の種々のペプチダーゼに対し阻害活性を有する
化合物の検索にも適した化合物群である。本発明
の目的はそのような化合物群を提供することにあ
る。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明は、下記一般式()で表わされるヒスタ
ジン関連化合物又はそれらの塩に関する。

【化】 〔式中Ａは、α−アミノ酸（但し、アルギニン
及びヒスチジンを除く）又はその低級アルキルエ
ステルのα−アミノ基から水素原子１個を除いた
残基を示し、Ｒは水素原子又は低級アルキル基を
示す。〕 本発明者らはヒスタジンの両アミノ酸を種々の
アミノ酸又はそのエステルに変換した化合物を
種々合成し、鋭意検討した結果、ヒスタジンのア
ルギニン部分を他のα−アミノ酸に変換した上記
一般式()で表わされる新規なヒスタジン関連化
合物がアンジオテンシン変換酵素に対して優れた
阻害活性を有することを見出し、本発明を完成す
るに至つた。本発明の化合物は降圧剤として使用
できるものである。更に本発明の化合物の一部は
カルボキシペプチダーゼＢ及び／又はカルボキシ
ペプチダーゼＡに対しても阻害活性を有し、これ
ら酵素に関連する生化学的研究において試薬とし
て利用することができる。 本発明を更に詳しく説明すれば、上記一般式
（）中のＡはα−アミノ酸（但し、アルギニン及
びヒスタジンを除く）又はその低級アルキルエス
テルのα−アミノ基から水素原子１個を除いた残
基（以下単にα−アミノ酸残基という）であり、
公知のα−アミノ酸から誘導される残基であれば
特に制限はない。また、α−アミノ酸残基におい
て光学活性炭素を有するもの、及び()式に含ま
れているヒスチジン部分は、Ｌ−、Ｄ−及びDL
−型のいずれでも使用することができる。 具体的なα−アミノ酸を例示すると次の通りで
ある。グリシン、アラニン、α−アミノ酪酸、プ
ロリン、パリン、ノルパリン、イソロイシン、ア
ロイソロイシン、ロイシン、ノルロイシン、セリ
ン、ホモセリン、トレオニン、アロトレオニン、
Ｏ−メチルセリン、Ｏ−エチルセリン、Ｏ−メチ
ルホモセリン、Ｏ−エチルホモセリン、Ｏ−メチ
ルトレオニン、Ｏ−エチルトルオニン、Ｏ−メチ
ルアロトレオニン、Ｏ−エチルアロトレオニン、
オルニチン、リジン、アスパラギン酸、グルタミ
ン酸、アスパラギン、グルタミン、フエニルアラ
ニン、チロシン、トリプトフアン、システイン、
ホモシステイン、Ｓ−メチルシステイン、Ｓ−エ
チルシステイン、メチオニン、エチオニンなどが
挙げられる。 ヒスタジン関連化合物は分子内塩又は薬学的に
許容される塩として取扱うこともできる。塩の例
としては、カルボキシル基における薬学的に許容
できる陽イオン、例えばナトリウムイオン、カリ
ウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイ
オンやイミノ基、イミダゾイル基、α−アミノ酸
の側鎖アミノ基における薬学的に許容できる無機
塩、有機塩塩等が挙げられる。 ヒスタジン関連化合物の多くは後記の実施例に
示すごとく、合成の最終工程として、各種保護基
を除去し、ダウエツクス 50W（ダウ・ケミカル
社製）のようなイオン交換樹脂を用いて精製し、
非結晶性の化合物の場合は、凍結乾燥により白色
粉末として、結晶性の場合は、再結晶により無色
結晶として得ることができる。 本発明において、上記一般式()で表わされる
化合物を便宜的に両アミノ酸の略号の間に−C₂
−と表記することとする。例えばHis−C₂−Phe
はヒスチジンとフエニルアラニンの各α−アミノ
基がエチレン基を介して結合している化合物を示
す。また、一般式()の化合物を合成するための
中間体となる保護されたヒスタジン関連化合物
も、保護基をもつアミノ酸の略号の間に−C₂−
と表記する。例えば、Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−
Lys(Z)−OMeはN〓−ベンジルオキシカルボニル
−Ｌ−ヒスナジンとN〓−ベンジルオキシカルボ
ニル−Ｌ−リジンメチルエステルの各α−アミノ
基がエチレン基を介して結合している化合物を示
す。 本発明の代表的化合物と、参考化合物（化合物
番号１、1a、８、及び8a、以下各表において同
じ）との構造と略号及び分子式を第１表に示す。
第１表に掲げた代表的化合物の中で両アミノ酸が
Ｌ体である化合物の赤外線吸収スペクトル
（KBr錠として測定）及びプロトンNMRスペク
トル〔重水中２，２−ジメチル−２−シラペンタ
ン−５−スルホン酸ナトリウム（DSS）を基準物
質として測定〕を第２表に、比旋光度と融点を第
３表に示す。

【表】

【表】

【表】

【表】

【表】

【表】 ＊ 非結晶性粉末のため明確な融点を示さな
い。
本発明の化合物はいずれもアンジオテンシン変
換酵素に対して優れた阻害活性を有する。また本
発明の化合物の一部はカルボキシペプチダーゼＢ
及び／又はカルボキシペプチダーゼＡに対しても
阻害活性を示す。 次に生理活性について試験例を挙げて説明す
る。 カルボキシペプチダーゼＢに対する阻害活性 カルボキシペプチダーゼＢに対する阻害活性の
測定は、M.ハヤカリ（M.HAYAKARI）等アナ
リテイカル バイオケミストリー（Analy−tical
Biochemistry）第84巻、第361〜369頁（1978）
記載のアンジオテンシン変換酵素活性測定法を改
良して行つた。 すなわち、0.05Mのヒプリル−Ｌ−リジン（蛋
白質研究奨励会製）0.05mlに0.05Mトリス−塩酸
緩衝液（PH8.0）の0.25ml、検体を含む溶液の0.15
mlを加えた混合溶液を37℃、３分間加温した後、
豚膵臓より精製したカルボキシペプチダーゼＢ
（ベーリンガー・マンハイム社製）の1μg／mlと
牛アルブミン１mg／mlを含む水溶液を0.05ml加え
て、37℃、30分間反応させた。1N苛性ソーダの
0.03mlを加え反応を停止し、15分後に0.06Mリン
酸ナトリウム緩衝液（PH7.2）の２mlを加え、１
％塩化シアヌルのメチルセロソルブ溶液の２mlを
加え発色させ、室温に15分間放置後382nmにおけ
る吸光度(a)を測定した。同時に検体だけを除いて
同様に反応した時の対照の反応液の吸光度(b)を測
定した。なお、この時、それぞれに対応する盲検
の吸光度(a)′及び(b)′をも測定した。盲検は先に苛
性ソーダを加えてから酵素液を加え酵素反応を行
わずに発色させたものを用いた。そしてカルボキ
シペプチダーゼＢ阻害率を式：〔１−（ａ−a′）／
（ｂ−b′）〕×100により計算した。 この定量法で、化合物番号1a（Ｌ−His−C₂−
Ｌ−His）、2a（Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe）、6a（Ｌ
−His−C₂−Ｌ−Orn）の化合物は、それぞれ
60μg／ml、64μg／ml、112μg／mlの濃度で50％阻
害を示した（後記第４表参照）。 カルボキシペプチダーゼＡに対する阻害活性 カルボキシペプチダーゼＡに対する阻害活性の
測定はT.タナカ（T.TANAKA）等ザ ジヤー
ナル オブ アンチバイオチクス（The Journal
of Antibiotics）第37巻、第682〜684頁（1984）
記載の方法を用いて行つた。すなわち、0.01Mヒ
プリル−Ｌ−フエニルアラニン（シグマ社製）
0.05mlに0.9Mの食塩を含む0.05Mトリス−塩酸緩
衝液（PH7.5）0.25ml、検体を含む溶液0.15mlを加
えた混合溶液を37℃、３分間加温した後、牛膵臓
より精製されたカルボキシペプチダーゼＡ（シグ
マ社製）の希釈水溶液（同時に１mg／mlの濃度に
精製牛アルブミンを含む）を0.05ml加えて、37
℃、30分間反応させた。1N−苛性ソーダ0.03ml
を加え反応を停止し、15分後に0.06Mリン酸ナト
リウム緩衝液（PH7.2）２mlを加え、次いで１％
塩化シアヌルのメチルセロソルブ溶液２mlを加え
て発色させ、室温に15分放置後382nmにおける吸
光度(a)を測定した。同時に検体だけを除いて同様
に処理した対照の反応液の吸光度(b)を測定した。
なお、この時それぞれに対応する盲検の吸光度
(a)′及び(b)′をも測定した。盲検は先に苛性ソーダ
を加えてから酵素液を加え酵素反応を行わずに発
色させたものを用いた。そして、カルボキシペプ
チダーゼＡの阻害率を式：〔１−（ａ−a′）／（ｂ
−b′）〕×100により計算した。 この定量法で、化合物番号2a（Ｌ−His−C₂−
Ｌ−Phe）の化合物は8.4μg／mlの濃度で50％阻
害を示した（第４表参照）。 アンジオテンシン変換酵素に対する阻害活性 アンジオテンシン変換酵素に対する阻害活性の
測定は、M.ハヤカリ等、アナリテイカル バイ
オケミストリー第84巻、第361〜369頁（1978年）
記載のアンジオテンシン変換酵素活性測定法を改
良して行つた。すなわち、食塩0.3Mを含むトリ
ス−塩酸緩衝液（0.5M、PH8.0）に基質ヒプリル
−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシンを５mg／mlの濃
度で溶解し、この溶液0.05mlに検体を含む溶液
0.40mlを加えた混合溶液を37℃、３分間加温した
後、牛肺臓より部分精製したアンジオテンシン変
換酵素溶液を0.05ml加えて、37℃、30分間反応さ
せた。1N苛性ソーダを0.03ml加えて反応を停止
し、15分後に0.06Mリン酸ナトリウム緩衝液（PH
7.2）を２ml加え、次いで１％塩化シアヌルのメ
チルセロソルブ溶液を２ml加えて発色させ、室温
に15分間放置後、382nmにおける吸光度(a)を測定
した。同時に検体を含まない混合溶液を同様に調
製し、同様に反応させた対照の吸光度(b)を測定し
た。なお、この時、それぞれに対応する盲検の吸
光度（a′）及び（b′）をも測定した。盲検は先に
苛性ソーダを加えてから酵素液を加え酵素反応を
行わずに発色させたものを用いた。そしてアンジ
オテンシン変換酵素阻害率を式：〔１−（ａ−
a′）／（ｂ−b′）〕×100により計算した。 この定量法で、第２表に掲げた化合物番号1a
〜6aのいずれの化合物も低濃度で強い阻害活性
を示した（第４表参照）。特に化合物番号1a（Ｌ
−His−C₂−Ｌ−His）及び5a（Ｌ−His−C₂−Ｌ
−Asp）の化合物のIC₅₀（50％阻害濃度）はそれ
ぞれ0.7μg／ml、0.5μg／mlであり、最も阻害活性
の強い化合物であつた。

【表】 急性毒性 本発明の化合物はいずれも低毒性であり、医薬
として使用することができる。第５表に本発明の
化合物をマウスの腹腔内に投与した急性毒性試験
結果を示す。

【表】 本発明のヒスタジン関連化合物は新規物質であ
り、以下その製造法について説明する。 ２つのα−アミノ酸の各α−アミノ基がエチレ
ン基を介して結合した型の化合物で、従来合成さ
れているものは、２つのα−アミノ酸が同一アミ
ノ酸に限られており、その合成法はα−アミノ酸
と１，２−ジブロモエタンを縮合させる方法であ
つた〔インオーガニツク ケミストリー
（Inorganic Chemistry）第７巻、第2405頁
（1968年）参照〕。この場合でも、ヒスチジンを用
いて行われた例はない。 本発明のヒスタジン関連化合物のように、異な
るα−アミノ酸を含む化合物を合成する場合、２
種のα−アミノ酸と、１，２−ジブロモエタンを
同一反応容器内で反応させると生成物が複雑にな
り、精製が困難となる。そこで段階的に合成する
方法が優れていることを見出した。 すなわちヒスタジンに次式()：

【化】 （式中Ｘはハロゲン原子を示し、R₁は低級ア
ルキル基を示す）で表わされる２−ハロゲノ−
１，１−ジアルコキシエタンを作用させ、次式
（）：

【化】 （式中R₁は低級アルキル基を示す）で表わさ
れるN〓−（２，２−ジアルコキシエチル）ヒスチ
ジンとする。()式の化合物として具体的には、
市販品である２−ブロモアセトアルデヒドジエチ
ルアセタール、２−ブロモアセトアルデヒドジメ
チルアセタール、２−クロロアセトアルデヒドジ
エチルアセタール、２−クロロアセトアルデヒド
ジメチルアセタールなどが挙げられる。 続いて()式に含まれるヒスチジン部分のα−
アミノ基を例えばベンジルオキシカルボニル基な
どのアミノ保護基で保護し、次にアルデヒド保護
基を酸処理により脱保護して次式()：

【化】 （式中R₂はアミノ保護基を示す）で表わされ
るＮ−ホルミルメチル誘導体とする。()式の化
合物は次式(′)：

〔実施例〕

以下、本発明を実施例により更に具体的に説明
するが、本発明は、これら実施例に限定されるも
のではない。 実施例 １−１ N〓−（２，２−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒス
チジンの合成 Ｌ−ヒスタジン50.0ｇ（0.35モル）と炭酸カリ
ウム（無水）44.5ｇをエタノール500mlと水500ml
の混液に溶かし、ブロモアセトアルデヒドジエチ
ルアセタール63.5ｇ（0.32モル）を加え、１日煮
沸還流した。冷却後、水１中に希釈し、PHを
6.8に調整し、エタノールを減圧で留去した。折
出する未反応のＬ−ヒスチジンを去し、水層を
酢酸エチルで２回洗浄後、水層を500mlまで減圧
濃縮した。塩化ナトリウム（以下NaCl）29.2ｇ
を加え、0.5M NaCl溶液とし、あらかじめ0.5M
NaClで調整したダイヤイオン HP−20（三菱化
成社製）２のカラムにかけた。0.5M NaCl6
、水15、20％メタノール７で溶出し、目的
物を含むフラクシヨンを集めて、減圧乾固し、残
留固体にエタノール150mlを加えて不溶のNaClを
去した。この操作を２回繰返し、得られた液
にエチルエーテルを加えて結晶化し、N〓−（２，
２−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒスチジンを31.8
ｇ得た。収率36.3％mp160〜162℃。 〔α〕²⁵ _D−27.4゜（ｃ＝１，メタノール） IR（KBr）ν（cm^-1）＝2970，2870，1645，
1580，1570，1450，1380，1300，1125，1090，
1065，845，800，630，550，480。NMR（重メタ
ノール）δ＝1.20（ｔ，CH₃×２，Ｔ＝７Hz），3.0
〜3.5（ｍ，CH₂×２），3.5〜4.0（ｍ，5H），4.79
（ｔ，CH，Ｔ＝５Hz），6.98（ｓ，CH），7.62（ｓ，
CH）。 実施例 １−２ N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（２，２
−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒスチジンの合成 N〓−（２，２−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒス
チジン19.5ｇ（71.7ミリモル）を1N−NaOH71.7
mlに溶かし、氷冷下激しくかくはんしながら、ベ
ンジルオキシカルボニルクロライド22.6mlを５回
に分けて、10分間隔に加えた。この間、反応液の
PHを2N−NaOHで9.0〜10.0に調整し、試薬を添
加後２時間かくはんした。酢酸エチル（150ml）
で３回抽出し、合せた酢酸エチル層を1N−HCl、
飽和食塩水で各２回洗浄後無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。溶媒を留去して得たN〓，N^im−ジベン
ジルオキシカルボニル−N〓−（２，２−ジエトキ
シエチル）−Ｌ−ヒスチジン40.1ｇを無水メタノ
ール250mlに溶かし、28％ナトリウムメチラート
メタノール溶液27.7mlを加え、室温で2.5時間か
くはんした。反応液を水250ml中に希釈し、PH7.0
に調整後、メタノールを減圧で留去して得た水層
を酢酸エチルで２回洗浄した。水層を減圧乾固
し、残留物に少量のメタノールを加えて不溶の
NaClを去した。この操作を２回繰返し、得ら
れた液を減圧濃縮し、シロツプ状のN〓−ベン
ジルオキシカルボニル−N〓−（２，２−ジエトキ
シエチル）−Ｌ−ヒスチジンを26.0ｇ得た。収率
89.3％。 〔α〕²⁵ _D−58.9゜（ｃ＝１，メタノール） IR（KBr）ν（cm^-1）＝3380，2960，1680，
1600，1460，1450，1390，1340，1250，1125，
1050，1000，810，760，690。NMR（重メタノー
ル）δ＝1.05（ｔ，CH₃×２，Ｔ＝６Hz），3.0〜
4.0（ｍ，9H），4.5（ｍ，1H），5.10（ｓ，CH₂），
6.70（ｓ，CH），7.32（ｓ，5H），7.60（ｓ，CH）。 実施例 １−３ N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジンの合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（２，２
−ジエトキシエチル）−Ｌ−ヒスチジン25.9ｇ
（63.9ミリモル）をエタノール60mlと水140mlの混
液に溶かし、1N−HClを加え、室温で４時間か
くはんした。反応後、PHを7.0に調整し、エタノ
ールを減圧で留去した。水層をダイヤイオン
HP−20の４のカラムにかけ、水４で洗浄
後、25％メタノールで溶出した。目的物を含むフ
ラクシヨンを集めて減圧濃縮し、N〓−ベンジル
オキシカルボニル−N〓−（ホルミルメチル）−Ｌ
−ヒスチジンを淡黄色粉末として15.1ｇ得た。収
率71.5％。 〔α〕²⁵ _D−13.1゜（ｃ＝１，メタノール） IR（KBr）ν（cm^-1）＝3450，2950，1700，
1600，1420，1370，1310，1260，1220，1190，
1130，1110，990，825，785，740，705，670。
NMR（重メタノール）δ＝3.1〜3.4（2H），3.9〜
4.2（ｍ，2H），4.3〜4.7（ｍ，1H），5.09（ｓ，
CH₂），5.6〜5.9（ｍ，1H），6.70（ｓ，1H），7.28
及び7.32（各ｓ，5H），7.65（ｓ，1H） 実施例 １−４（参考例１） Ｌ−His−C₂−Ｌ−His（化合物番号1a）の合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン1.72ｇ（5.2ミリモ
ル）のメタノール（20ml）溶液に、Ｌ−ヒスチジ
ンメチルエステル二塩酸塩2.52ｇ（10.4ミリモ
ル）を水10mlに溶かし、PHを6.7に調整した溶液
を加え、氷冷下かくはんしながら水素化シアノホ
ウ素ナトリウム327mg（5.2ミリモル）を少しずつ
添加した。添加後、室温で４時間かくはんした
後、反応液を減圧濃縮し、得られた残留物を水10
mlに溶かし、ダイヤイオン HP−20の500mlの
カラムにかけた。 水1.5で洗浄後、25％メタノール３、50％
メタノール３で溶出し、目的物を含むフラクシ
ヨンを集めて減圧濃縮し、Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ
−His−OMeを2.29ｇ得た。NMRスペクトル
（重メタノール）においてδ3.69（ｓ，CH₃），5.03
（ｓ，CH₂），7.28（ｓ，5H）に特徴的なシグナル
を示す。これをメタノール40mlに溶かし、1N−
NaOH 13mlを加え、室温で3.5時間かくはんし
た。反応後PHを6.8に調整し、メタノールを減圧
で留去して得た水層を、ダイヤイオン HP−20
の350mlのカラムにかけ、水１で洗浄後、25％
メタノールで溶出した。目的物を含むフラクシヨ
ンを集めて減圧濃縮し、Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−
Hisを1.12ｇ得た（全収率45.8％）。NMRスペク
トル（重メタノール）でδ2.6〜3.5（ｍ，CH₂×
４），4.2〜4.6（ｍ，CH×２），5.00（ｓ，CH₂），
6.56（ｓ，CH），6.80（ｓ，CH），7.23（ｓ，5H），
7.45（ｓ，CH×２）にシグナルを示す。 Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−His 465mgをエタノー
ル５mlと水５mlの混液に溶かし、1N−HCl ３ml
と10％パラジウム−炭素25mgを加え、水素基流中
3.5時間かくはんした。触媒を去し、液をダ
ウエツクス 50W×８（Ｈ型，ダウ・ケミカル社
製）50mlのカラムにかけ、水200mlで洗浄後、2N
−NH₄OHで溶出した。目的物を含むフラクシヨ
ンを集めて、減圧濃縮して得られる残留物をエタ
ノールより結晶化し、目的物であるＬ−His−C₂
−Ｌ−Hisを225mg得た。収率67.0％。mp227〜
232℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋17.1゜（ｃ＝１，6N−HCl）。 実施例 ２ Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe（化合物番号2a）の合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン910mg（2.8ミリモ
ル）、Ｌ−フエニルアラニンエチルエステル一塩
酸塩1.263ｇ（5.5ミリモル）、水素化ホウ素ナト
リウム173mg（2.8ミリモル）を用いて、実施例１
−４と同様に反応を行い、ダイヤイオン HP−
20の250mlのカラムを用いて精製し、Ｚ−Ｌ−
His−C₂−Ｌ−Phe−OEtを1.39ｇ得た。NMRス
ペクトル（重メタノール）においてδ1.17（ｔ，
CH₃，Ｔ＝７Hz），4.10（ｑ，CH₂，Ｔ＝７Hz），
5.00（ｓ，CH₂），7.20（ｓ，5H），7.27（ｓ，5H）
に特徹的なシグナルを示す。次に、実施例１−４
と同様に加水分解反応を行い、ダイヤイオン
HP−20の250mlのカラムで精製し、Ｚ−Ｌ−His
−C₂−Ｌ−Pheを773mg得た（全収率58.5％）。 Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe 716mg、1N−
HCl4.5ml、10％パラジウム−炭素50mgを用い、
実施例１−４と同様に反応を行い、ダウエツクス
50W×８（Ｈ型）50mlのカラムを用いて精製し、
エタノールより結晶化し、目的物であるＬ−His
−C₂−Ｌ−Pheを277mg得た。収率53.7％。mp
248〜250℃（分解）。〔α〕²⁵ _D＋38.1゜（ｃ＝１，6
N
−HCl）。 実施例 ３ Ｌ−His−C₂−Ｌ−Lys（化合物番号3a）の合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン1.71ｇ（5.2ミリモ
ル）、N〓−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リジ
ンメチルエステル一塩酸塩2.30ｇ（6.9ミリモ
ル）、水素化シアノホウ素ナトリウム324mg（5.2
ミリモル）を用いて、実施例１−４と同様に反応
を行い、ダイヤイオン HP−20の500mlのカラ
ムを用いて精製し、75％メタノール溶出部より、
Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Lys(Z)−OMeを主成分と
する残留物3.27ｇを得た。NMRスペクトル（重
メタノール）においてδ3.72（ｓ，CH₂），5.02（ｓ，
CH₂×２），7.29（ｓ，10H）に特徴的なシグナル
を示す。 次に実施例１−４と同様に加水分解反応を行
い、ダイヤイオン HP−20の500mlを用いて精
製し、75％メタノール溶出部よりＺ−Ｌ−His−
C₂−Ｌ−Lys(Z)を1.93ｇ得た（全収率62.6％）。
NMRスペクトル（重メタノール）でδ1.2〜2.1
（ｍ，CH₂×３），2.8〜3.6（ｍ，CH₂×５），4.2〜
4.7（ｍ，CH×２），5.04（ｓ，CH₂），5.07（ｓ，
CH₂），6.85（ｓ，CH），7.30（ｓ，5H），8.03（ｓ，
CH）にシグナルを示す。 Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Lys(Z)1.88ｇ、1N−
HCl9.6ml、10％パラジウム−炭素100mgを用い、
実施例１−４と同様に反応を行い、触媒を去
し、液を減圧濃縮して得た残留物を水10mlに溶
かし、CM−セフアデツクス Ｃ−25（Na型，フ
アルマシア社製）150mlにかけた。水１と1M
NaCl １によるグラジエント溶出法で溶出し、
目的物を含むフラクシヨンを集め、ダウエツクス
50W×８（Ｈ型）50mlのカラムにかけ、水洗後、
2N−NH₄OHで溶出した。目的物を含むフラク
シヨンを集めて減圧濃縮した。得られた残留物
（粉末）を水２mlに溶かし、凍結乾燥することに
より、Ｌ−His−C₂−Ｌ−Lysを白色粉末として
219mg得た。収率23.1％。 〔α〕²⁵ _D−32.0゜（ｃ＝１，6N−HCl）。 実施例 ４ Ｌ−His−C₂−Ｌ−Pro（化合物番号4a）の合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン4.73ｇ（14.3ミリモ
ル），Ｌ−プロリンベンジルエステル一塩酸塩
6.88ｇ（28.6ミリモル）、水酸化シアノホウ素ナ
トリウム899mg（14.3ミリモル）を用いて、実施
例１−４と同様に反応を行い、ダイヤイオン
HP−20の１のカラムを用いて精製し、75％メ
タノール溶出部より、Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−
Pro・OBzlを2.21ｇ得た。NMRスペクトル（重
メタノール）においてδ1.7〜2.4（ｍ，CH₂×２），
2.8〜3.8（ｍ，CH₂×４），4.2〜4.7（ｍ，CH×
２），5.00（ｓ，CH₂），5.10（ｓ，CH₂），6.72（ｓ，
CH），7.22（ｓ，5H），7.27（ｓ，5H），7.80（ｓ，
CH）にシグナルを示す。Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ
−Pro・OBzl 2.10ｇ、1N−HCl12ml、10％パラ
ジウム−炭素100mgを用い、実施例１−４と同様
に反応を行い、触媒を去し、液を減圧濃縮し
て得た残留物を水10mlに溶かし、CM−セフアデ
ツクス Ｃ−25（Na型）300mlのカラムにかけ、
水で溶出した。目的物を含むフラクシヨンを集
め、ダウエツクス 50W×８（Ｈ型）100mlのカラ
ムにかけ、水洗後、2N−NH₄OHで溶出した。
目的物を含むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、
得られた残留物を水５mlに溶かし、凍結乾燥する
ことにより、Ｌ−His−C₂−Ｌ−Proを白色粉末
として646mg得た。全収率15.8％。 〔α〕²⁵ _D−24.2゜（ｃ＝１，6N−HCl） 実施例 ５ Ｌ−His−C₂−Ｌ−Asp（化合物番号5a）の合
成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン2.00ｇ（6.1ミリモ
ル）、Ｌ−アスパラギン酸1.61ｇ（12.1ミリモ
ル）、水素化シアノホウ素ナトリウム380mg（6.1
ミリモル）を用いて実施例１−４と同様に反応を
行い、あらかじめ0.5M NaClで調整したダイヤ
イオン HP−20の250mlのカラムにかけ、0.5M
NaCl １で洗浄後、水で溶出した。目的物を含
むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、Ｚ−Ｌ−
His−C₂−Ｌ−Aspを292mg得た。 Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Asp 292mg、1N−HCl
２ml、10％パラジウム−炭素20mgを用いた実施例
１−４と同様に反応を行い、液をCM−セフア
デツクス Ｃ−25（Na型）100mlのカラムにかけ
水で溶出した。目的物を含むフラクシヨンを集め
て減圧濃縮し、得られた残留物を分取薄層クロマ
トグラフイー〔シリカゲル60F₂₅₄、厚さ２mm（メ
ルク社製）〕にかけ、エタノール：Ｃ−NH₄OH
＝１：１で展開した。目的物を含む帯（Rf0.67）
をかき取り、エタノール：Ｃ−NH₄OH＝１：１
で溶出した。溶出液を減圧濃縮して得た残留物を
ダウエツクス 50w×８（Ｈ型）20mlのカラムに
かけ、水洗後、2N−NH₄OHで溶出した。目的
物を含むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、得ら
れた残留物をメタノールより結晶化し、Ｌ−His
−C₂−Ｌ−Aspを10.7mg得た。 mp250〜252℃（分解）。〔α〕²⁵ _D＋39.9゜（ｃ＝１
，
6N−HCl）。 実施例 ６ Ｌ−His−C₂−Ｌ−Asp（化合物番号5a）の別
途合成 N〓−ベンジルオキシカルボニル−N〓−（ホルミ
ルメチル）−Ｌ−ヒスチジン3.00ｇ（9.1ミリモ
ル）、Ｌ−アスパラギン酸α，β−ジベンジルエ
ステルトシレート8.79ｇ（18.1ミリモル）、水素
化ホウ素ナトリウム569mg（9.1ミリモル）を用い
て、実施例１−４と同様に反応を用い、反応液を
減圧濃縮し、得られた残留物を水20mlに溶かし、
酢酸エチルで２回洗浄した。水層を半量に減圧濃
縮し、ダイヤイオン HP−20の200mlのカラム
にかけ、水300ml、50％メタノール300mlで洗浄
後、メタノールで溶出した。目的物を含むフラク
シヨンを集めて減圧濃縮し、Ｚ−Ｌ−His−C₂−
Ｌ−Asp（OBzl）−OBzlを2.52ｇ得た。 Ｚ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Asp（OBzl）−OBzl2.34
ｇ、1N−HCl10ml、10％パラジウム−炭素200mg
を用い、実施例１−４と同様に反応を行い、反応
後、触媒を去し、液を減圧濃縮して得た残留
物を水10mlに溶かし、ダイヤイオン HP−20の
250mlのカラムにかけ、水で溶出した。目的物を
含むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、得られた
残留物をメタノールより結晶化し、Ｌ−His−C₂
−Ｌ−Aspを314mg得た。全収率11.8％。 実施例 ７ Ｌ−His−C₂−Ｌ−Orn（化合物番号6a）の合
成 培養液より得たヒスタジン268mgを飽和水酸
化バリウム水40mlに溶かし、油浴中（105℃）２
時間煮沸還流した。冷却後、炭酸ガスを吹込み生
じた沈殿を去し、液をダウエツクス 50W×
４（Ｈ型）45mlのカラムにかけ、水洗後2.5％−
NH₄OHで溶出した。目的物を含むフラクシヨン
を集めて、減圧下に濃縮乾固し、224mgの粗粉末
を得た。この粗粉末を1Mピリジン−酢酸緩衝液
（PH5.0）10mlに溶解し、あらかじめこの緩衝液で
平衡化したダウエツクス 50W×４（Py型）80ml
のカラムにかけ、同じ緩衝液で溶出した。目的物
を含むフラクシヨンを集め、これをダウエツクス
50W×４（Ｈ型）80mlに吸着させ、水洗後、2.5
％−NH₄OHで溶出した。目的物を含むフラクシ
ヨンを集め減圧濃縮し、得られた残留物を水２ml
に溶かし、凍結乾燥することにより、Ｌ−His−
C₂−Ｌ−Ornの白色粉末を91.5mg得た。 〔α〕²⁵ _D＋30.8゜（ｃ＝１，6N−HCl） 実施例 ８ Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe−OEt（化合物番号7a）
の合成 実施例２で得たＺ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−Phe−
OEt 301mgをエタノール−水（１：１）の混液10
mlに溶かし、1N−HCl1.7mlと10％パラジウム−
炭素25mgを加え、水素気流中４時間かくはんし
た。触媒を去し、液を中和後、半量に減圧濃
縮し、CM−セフアデツクス Ｃ−25（Na型）
300mlのカラムにかけ、水で溶出した。目的物を
含むフラクシヨンを集めて減圧濃縮し、得られた
残留物をメタノール１mlに溶かし、セフアデツク
ス LH−20（フアルマシア社製）100mlのカラム
にかけ、メタノールで溶出した。目的物を含むフ
ラクシヨンを集めで減圧濃縮し、得られた残留物
を水１mlに溶かし、凍結乾燥することにより、Ｌ
−His−C₂L−Phe−OEtの一塩酸塩を白色粉末と
して60.5mg得た。 〔α〕²⁵ _D＋33.4゜（ｃ＝１，6N−HCl） 参考例 ２ Ｌ−His−OMe−C₂−Ｌ−His−OMe（化合
物番号8a）の合成） 実施例１−４で得たＺ−Ｌ−His−C₂−Ｌ−
His−OMe1.05ｇをメタノール10mlに溶かし、氷
冷下ジアゾメタンエーテル溶液を加え、メチル化
した。溶媒を留去して得た残留物をエタノール−
水（１：１）の混液15mlに溶かし、1N−HCl5ml
と10％パラジウム−炭素150mlを加え、水素気流
中3.5時間かくはんした。触媒を去し、液を
中和後、半量に減圧濃縮し、CM−セフアデツク
ス Ｃ−25（Na型）200mlのカラムにかけた。水
1.5と1M NaCl1.5によるグラジエント溶出法
で溶出し、目的物を含むフラクシヨンを集めて減
圧濃縮し、得られた残留物をメタノール５mlに溶
かし、不溶のNaClを去した。この操作を２回
繰返し、残留物をメタノール２mlに溶かし、セフ
アデツクス LH−20の150mlのカラムにかけ、
メタノールで溶出した。目的物を含むフラクシヨ
ンを集めて減圧濃縮し、得られた残留物を水２ml
に溶かし、凍結乾燥することにより、Ｌ−His−
OMe−C₂−Ｌ−His−OMeの二塩酸塩を白色粉
末として176mg得た。〔α〕²⁵ _D＋15.3゜（ｃ＝１，6N
−HCl）。 〔発明の効果〕 以上説明したように、本発明はアンジオテンシ
ン変換酵素に対して優れた阻害活性を示し、降圧
剤として有用なヒスタジン開連化合物を提供する
ものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記一般式： 【化】 〔式中Ａは、α−アミノ酸（但し、アルギニン
   及びヒスチジンを除く）又はその低級アルキルエ
   ステルのα−アミノ基から水素原子１個を除いた
   残基を示し、Ｒは水素原子又は低級アルキル基を
   示す。〕で表わされるヒスタジン関連化合物又は
   それらの塩。