JPH0581220B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

［産業上の利用分野］ 本発明は、牛乳カゼインのペプシンによる加水
分解物より得られるペプチド混合物またはその
塩、その製造方法、およびそれを含有せしめた食
品に関する。本発明のペプチド混合物またはその
塩は、体調調節機能、具体的には、鎮静作用を有
しており、該ペプチド混合物またはその塩を含有
せしめた食品は、例えば機能性食品あるいは健康
食品として有用である。 ［従来の技術］ 食品には生命維持に必要な栄養源としての機能
と、味覚・嗅覚応答にかかわる感覚機能とがある
が、近年、食品に第３の機能を見い出そうとする
動きがある。ここに言う第３の機能とは、高次の
生命活動に対する食品の体調調節機能のことであ
り、例えば免疫賦活化機能、アレルギー低減化機
能、神経系調節機能、高血圧防止機能、老化抑制
機能等が考えられている。そして食品の品質変換
操作により得られるものであつて、上記の機能を
有する成分を含有せしめた食品は機能性食品と呼
ばれる。 さて、カゼインは乳汁中に存在する分子量約
75000〜375000の燐蛋白質であるが、これから体
調調節機能を有する成分を見い出す試みは既にな
されている。例えば、Acta Medica Kinki
University、第３巻、11頁（1978年）には、カゼ
インをペプシンで加水分解して得られるもの（以
下、カゼインのペプシン加水分解物と呼ぶ）を
Sephadex Ｇ−25で分画し、各画分の血圧低下作
用を調べたと記載されている。しかし、この画分
を特定する具体的な物理化学的性質についてはこ
の記載からは不明である。また、特開昭60−
11425号には、カゼインのペプシン加水分解物か
ら得られる分子量200〜1500のペプチド混合物と
その血中コレステロール低下作用が開示されてい
る。 しかしながら、上記各開示は、カゼインのペプ
シン加水分解物の血圧低下作用あるいは血中コレ
ステロール低下作用に関するもので、いずれにお
いても鎮静作用についての記載はない。 ［発明が解決しようとする課題］ 社会の複雑化に伴ない日常生活においても精神
的ストレスが増加傾向にあり、心身を安静に保つ
機能、すなわち鎮静作用を有する食品が望まれる
様になつて来ている。本発明者等はこの様な機能
を付与した食品、例えば機能性食品あるいは健康
食品を提供すべく、カゼインのペプシン加水分解
物から鎮静作用を有する画分を探索した。本発明
の目的は、鎮静作用を有するペプチド混合物また
はその塩、その製造方法およびそれを含有せしめ
た食品を提供することにある。 ［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、カゼインをペプシンで加水分解
し、この加水分解物を種々分画して鎮静作用を検
討した結果、 (a) 水に対する溶解度が100mg／ml以上であり、 (b) PH９のアンモニア性80％エタノールに対する
溶解度が１mg／ml以下であり、 (c) 分子量分布が850〜56000の範囲内にある、 ことを特徴とするペプチド混合物またはその塩が
鎮静作用を有することを見い出し、本発明を完成
した。 以下、本発明ペプチド混合物の製造法について
説明する。 まず、カゼインと、ペプシンとを塩酸中に加
え、カゼインを加水分解する。 カゼインには、牛乳あるいは脱脂牛乳等から常
法によつて得られるカゼイン、あるいはこれを精
製して得られるαsカゼイン等の牛乳由来のカゼ
イン（牛乳カゼイン）を用いる。 塩酸には、通常0.05〜1.5規定の塩酸、好まし
くは約0.1規定の塩酸を用い、その使用量は、通
常カゼインに対して７〜20倍（ｖ／ｗ）である。 カゼインに対するペプシンの使用量は、カゼイ
ン1gに対して通常１万〜10万ユニツトであり、
好ましくは３万〜６万ユニツトである。 ペプシンには精製ペプシンばかりでなくペプシ
ンを主成分とする酵素製剤、例えば含糖ペプシン
（第十一改正日本薬局方解説書Ｄ−214、日本公定
書協会監修、広川書店発行 1986年参照）の原末
も使用し得るが、この場合も上記ユニツト量を使
用する。 なお、ここで言うユニツトとは、ヘモグロビン
を基質として測定した値である（Methods in
Enzymology，Gertrude E.Perlmannおよび
Laszlo Lorand 編集、19巻、316〜319頁、1970
年、Academic Press Inc.（London）LTD.発行
参照）。 加水分解反応は、通常30〜50℃で30分〜20時
間、好ましくは約37℃で３〜７時間行なう。 次に、上記加水分解反応液にアルカリ、好まし
くは、アンモニア水を添加し反応液のPHを約９に
調整し、次に反応液量に対して通常１〜20倍容
量、好ましくは２〜10倍容量のエタノールを加え
ペプチド混合物を沈殿させる。 最後に、沈殿したペプチド混合物を濾過、遠心
分離あるいはデカンテーシヨン等の通常の分離手
段で取得して減圧乾燥するか、沈殿したペプチド
混合物を通常２〜10倍（ｗ／ｖ）の水に加え、要
すれば濾過あるいは遠心分離等により不溶物を除
去後、水溶液を噴霧乾燥あるいは凍結乾燥して粉
末状の本発明ペプチド混合物を得る。なお、本発
明ペプチド混合物の実施形態によつて、乾燥粉末
として取得する必要の無い場合は、上記水溶液を
濃縮し、本発明ペプチド混合物をこの濃厚溶液あ
るいはペーストとして得てもよい。 本発明ペプチド混合物は常法により、塩酸塩、
酢酸塩、クエン酸塩、ナトリウム塩、カリウム
塩、アンモニウム塩等、食品として許容される塩
に変換することが出来る。 本発明ペプチド混合物の分子量分布をゲルクロ
マトグラフイー法により測定すると、少なくとも
５種のピークが認められメインピークは分子量
5600〜10300に相当するところに現われ、分子量
分布は850〜56000の範囲にある。 一方、本発明ペプチド混合物は、水に対して
100mg／ml以上の溶解度を示し、PH９のアンモニ
ア性80％エタノールに対し１mg／ml以下の溶解度
を示す。 本発明ペプチド混合物およびその塩は、心身の
過度な緊張を緩和し心身を安静に保つための食
品、例えば機能性食品あるいは健康食品の成分と
して使用される。 これら食品は、ブドウ糖、水飴、ガムベース、
香料、クエン酸、水などの各種食品原料に本発明
ペプチド混合物またはその塩を通常0.05〜５重量
％添加し、常法により、例えば清涼飲料水、スポ
ーツ飲料、ジユース等の各種ソフトドリンク、チ
ユーインガム、およびキヤンデイ等の形態に製造
する事が出来る。なお、本発明ペプチド混合物ま
たはその塩の添加による風味低下はない。 ［発明の効果］ 本発明のペプチド混合物およびその塩は、鎮静
作用を有する。この事は、本発明のペプチド混合
物を、例えばマウスに経口投与すると自発運動を
抑制する（後記試験例１参照）が、筋弛緩作用を
示さない（後記試験例２参照）ことから明らかで
ある。 一方、本発明のペプチド混合物およびその塩は
低毒性であり、例えばマウスに5g／Kg体重の割
合で経口投与しても毒性を発現しない。 従つて本発明ペプチド混合物およびその塩は、
心身の過度な緊張を緩和し心身を安静に保つため
の食品、例えば機能性食品あるいは健康食品の成
分として有用である。 以下に試験例を挙げて本発明のペプチド混合物
の有用性を示す。 試験例１（自発運動抑制作用） (a) 検体 ・ 本発明ペプチド混合物Ａ…実施例１で得たペ
プチド混合物 ・ 本発明ペプチド混合物Ｂ…実施例２で得たペ
プチド混合物 ・ 本発明ペプチド混合物Ｃ…実施例３で得たペ
プチド混合物 ・ 比較ペプチド混合物Ｘ…実施例２の本発明ペ
プチド混合物の製造過程で除去したペプチド混
合物（実施例２の本発明ペプチド混合の製造に
於いて、かぜいん加水分解反応液をPH９に調製
しエタノールを添加しても沈殿しなかつたペプ
チド混合物。エタノール添加後の上清液を濃
縮・乾燥して得た。） ・ 牛乳カゼイン（牛乳から常法で調製した） (b) 試験方法 検体をそれぞれ蒸留水に溶解または懸濁し、こ
の液を20ml／Kg体重の割合でddY系雄性マウス
（５週齢、１群10〜20匹）に経口投与した（検体
の投与量はそれぞれ3000mg／Kg体重）。対照群マ
ウスには、生理食塩水のみを20ml／Kg体重の割合
で経口投与した。 次に、実験動物運動量測定装置ACTY−303
（バイオメデイカ社製）でマウスの自発運動量を
測定した。検体投与後15分間における各群の自発
運動量の平均値を算出すると共に、検体投与群の
自発運動量と対照群の自発運動量との間の有意差
検定を行つた。 (c) 試験結果 第１表に示す。

【表】 比較ペプチド混合物Ｘおよび牛乳カゼインは、
自発運動を抑制しなかつたが、本発明ペプチド混
合物はいずれも有意に自発運動を抑制した。 試験例２（筋弛緩作用） (a) 検体 ・ 本発明ペプチド混合物Ａ…実施例１で得たペ
プチド混合物 ・ 本発明ペプチド混合物Ｂ…実施例２で得たペ
プチド混合物 ・ 本発明ペプチド混合物Ｃ…実施例３で得たペ
プチド混合物 (b) 試験方法 Rotarod法により測定した。すなわち、まず水
平に支えられ毎分５回転する直径３cmの木製の棒
（rotarod）上にddY系マウスを、回転方向と逆方
向に向けて乗せ、１分間以上rotarod上に留るこ
との出来るマウスを選び、これを１群８匹毎の群
に分けた。 次に、各検体を蒸留水に懸濁し、各群のマウス
にこの懸濁液を20ml／Kg体重の割合で経口投与し
た（検体投与量は3g／Kg体重、または9g／Kg体
重）。なお、対照群マウスには蒸留水のみを経口
投与した。 次に、検体投与してから15分後に、上記と同様
にしてマウスをrotarod上に乗せ、１分間に２回
以上落下したマウスの数を数え、フイツシヤーテ
ストにより検体投与群と対照群との有意差検定を
行つた。 (c) 試験結果 本発明ペプチド混合物投与群と対照群との間に
有意差はなく、本発明ペプチド混合物は筋弛緩作
用を示さなかった。結果を第２表に示す。

【表】 以上の試験例１〜２の結果の通り、本発明ペプ
チド混合物は、自発運動を抑制するが筋弛緩作用
を示さない。 ［実施例］ 以下、実施例により本発明を説明する。 なお、実施例中、ペプチド混合物の分子量分布
は、ゲルクロマトグラフイー法（下記条件の高速
液体クロマトグラフイー）により測定した。 高速液体クロマトグラフ機種：ポンプ、マルチ
ポンプCCPM；検出器、紫外線吸収測定器
UV−8011（いずれも東洋曹達株式会社製）。 カラム：Asahipak GS−320、7.6mm×500mm
（旭化成工業株式会社製）。 溶出溶媒：4Mグアニジン−アセトニトリル
（95：５）混合溶媒。 検出波長：230nm。 試料注入法：濃度４mg／mlの試料溶液10μを
注入。 標準物質：アルドラーゼ（MW 42000）、リゾ
チーム（MW 14300）、インスリンＢ鎖
（MW 3496）、ブラジキニンポテンシエータ
（MW 1052）、メチオニンエンケフアリン
（MW 574）。 実施例 １ 0.1規定塩酸1000mlに牛乳カゼイン100g（牛乳か
ら常法で得た）および含糖ペプシン原末（天野製
薬製）12g（456.9万ユニツト）を37℃で加え、同
温で６時間撹拌して加水分解反応を行なつた。反
応液のPHをアンモニア水の添加によつて９に調整
した後、エタノール2333mlを加えて室温に静置し
た。上清液をデカンテーシヨンにより除去し、沈
澱物を水100mlに加えた。不溶物を遠心分離によ
り除去し、得られた水溶液を凍結乾燥し、白色粉
状物として本発明のペプチド混合物10.6gを得た。 分子量分布：850〜34000（メインピーク10300） 溶解度（20℃）：水に対して100mg／ml以上、PH
９のアンモニア性80％エタノールに対して１
mg／ml以下。 実施例 ２ 0.1規定塩酸1000mlに、37℃でカゼイン100g（牛
乳から常法で得た）および含糖ぺプシン原末（天
野製薬製）12g（456.9万ユニツト）を加え、同温
で６時間撹拌して加水分解反応を行なつた。反応
液のPHをアンモニア水の添加によつて９に調整し
た後、エタノール4000mlを加えて室温に静置し
た。上清液をデカンテーシヨンにより除去し、沈
澱物を水60mlに加えた。不溶物を遠心分離により
除去し、得られた水溶液を凍結乾燥し、白色粉状
物として本発明のペプチド混合物18.6gを得た。 分子量分布：850〜56000（メインピーク10300） 溶解度（20℃）：水に対して100mg／ml以上、PH
９のアンモニア性80％エタノールに対して１
mg／ml以下。 酢酸塩の調製：上記本発明ペプチド混合物
205.3mgを水５mlに溶解し、酢酸を滴下して
溶液のPHを約４に調整した後、凍結乾燥して
本発明ペプチド混合物の酢酸塩207.3mgを得
た。 実施例 ３ 0.1規定塩酸1000mlに37℃でカゼイン100g（牛乳
から常法で得た）および含糖ヘプシン原末12g
（456.9万ユニツト）を加え、同温で６時間撹拌し
加水分解反応を行なつた。反応液のPHをアンモニ
ア水の添加によつて９に調整した後、エタノール
9000mlを加えて室温に静置した。上清液をデカン
テーシヨンにより除去し、沈澱物を水60mlに加え
た。不溶物を遠心分離により除去し、得られた水
溶液を凍結乾燥し、白色粉状物として本発明のペ
プチド混合物39.0gを得た。 分子量分布：850〜49000（メインピーク5600） 溶解度（20℃）：水に対して100mg／ml以上、PH
９のアンモニア性80％エタノールに対して１
mg／ml以下。 実施例４（チユーインガムの製造） 配合組成 重量部 チユーインガムベース 20.0 粉糖 50.6 ブドウ糖 10.0 水飴 18.0 ペパーミントオイル 0.8 粉末ペパーミント香料 0.5 本発明ペプチド混合物 0.1 製 法 60℃に保温したチユーインガムベース及び水飴
をニーダーに投入して、10分間混練し、粉糖の1/
３量及びブドウ糖を投入して５分間、次いで粉糖
の1/3量を投入して５分間混練した。次に、ペパ
ーミントオイル、粉末ペパーミント香料および本
発明ペプチド混合物（実施例１と同様にして製造
した）を残りの1/3量の粉糖に混合してから投入
し、５分間混練してガムミツクスを得た。このガ
ムミツクスを通常の方法で、押出、圧延、切断、
包装し、板ガムとして製品化した。 実施例５（チユーインガムの製造） 配合組成 重量部 バブルガムベース 25.0 無水結晶ブドウ糖 33.5 含水結晶ブドウ糖 20.0 粉糖 10.0 水飴 10.0 バナナフレーバー 0.8 クエン酸 0.5 ベニバナ色素 0.1 本発明ペプチド混合物 0.1 製 法 50℃に保温したバブルガムベース、クエン酸、
ベニバナ色素及び水飴をニーダーに投入して10分
間混練し、次いで無水結晶ブドウ糖の1/2量及び
粉糖を投入して５分間、含水結晶ブドウ糖を投入
してさらに５分間混練した。次いでバナナフレー
バー及び残りの1/2量の無水結晶ブドウ糖に本発
明ペプチド混合物（実施例３と同様にして製造し
た）を混合してから投入し、５分間混練してガム
ミツクスを得た。このガムミツクスを通常の方法
で、押出、サイジング、切断、包装しブロツクガ
ムとして製品化した。 実施例６（キヤンデイの製造） 配合組成 重量部 グラニユー糖 65.0 水飴（水分30％） 50.0 アツプルフレーバー 0.2 クエン酸 0.3 クチナシ色素 0.1 本発明ペプチド混合物 0.1 製 法 予備溶解釜に、グラニユー糖、水飴及び少量の
水を投入し、一度沸騰させて、グラニユー糖を完
全に溶解し、この混合物を真空クツカーにポンプ
で送り込み、真空度460mmHg、温度130℃で煮詰
めた後、取出釜に取り、混合釜に移した。次いで
アツプルフレーバー、クエン酸及びクチナシ色素
を投入して十分混合後、冷却盤上に広げ、温度が
110℃以下になつた時点で本発明ペプチド混合物
（実施例２と同様にして製造した）を混合しキヤ
ンデイマスを得た。 このキヤンデイマスを、通常の方法で、コーン
ローラーに投入し、サイジング、型打後、包装し
て、粒状ハードキヤンデイとして製品化した。 実施例７（スポーツ飲料） 配合組成 重量部 砂糖 7.0 クエン酸 2.1 クエン酸ナトリウム 0.8 塩化ナトリウム 0.41 乳酸カルシウム 0.52 塩化カリウム 0.28 塩化マグネシウム 0.12 フレーバー 0.1 本発明ペプチド混合物（実施例２に従い製造）
0.05 水 88.7 製 法 全原料を水に溶解させ、フイルターを通過させ
85℃まで加温した後、充填巻き締めしクーラーに
て40℃まで冷却して製品化した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 牛乳カゼインを塩酸中ペプシンで加水分解す
   ることにより生成し、エタノールと水との混合溶
   媒から沈殿させることにより分画され、 (a) 水に対する溶解度が100mg／ml以上であり、 (b) PH９のアンモニア性80％エタノールに対する
   溶解度が １mg／ml以下であり、そして (c) 分子量分布が850〜56000の範囲内にある、 ペプチド混合物またはその塩。 ２ 牛乳カゼインを塩酸中ペプシンで加水分解
   し、その反応液のPHを約９に調整し、次にエタノ
   ールを加えて沈殿するペプチド混合物を取得する
   ことを特徴とする、 (a) 水に対する溶解度が100mg／ml以上であり、 (b) PH９のアンモニア性80％エタノールに対する
   溶解度が１mg／ml以下であり、そして (c) 分子量分布が850〜56000の範囲内にある、 ペプチド混合物またはその塩の製造方法。 ３ 特許請求の範囲第１項に記載のペプチド混合
   物またはその塩を含有せしめた食品。