JPH0584320B2 - - Google Patents
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- A—HUMAN NECESSITIES
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- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
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Description
本発明は、脂質溶液をシリカゲル上のクロマト
グラフイを行うことによつて、他のリン脂質を含
有しない純粋な１，２−ジアシル−グリセロ−３
−ホスフオコリン（ホスフアチジルコリン）を単
離する新規な方法に関する。 製薬業において、植物性のホスフアチジルコリ
ンは活性薬剤および助剤として使用されている。 活性薬剤としての用途においては、（経口投与
用には）ホスフアチジルコリンを多く含有するリ
ン脂質または（静脈内投与用には）リンホスフア
チジルコリンをほとんど含まない高純度のホスフ
アチジルコリンが必要とされる。 非経口投与される脂肪乳濁液の調製のために用
いられる乳化剤のような助剤としての用途または
リポゾームおよび混合ミセルの各々の生成のため
の用途のためには、ホスフアチジルコリンは、溶
血的に作用する（heamolytically acting）リソ
ホスフアチジルコリンを含まないことが要求され
る。 植物性のホスフアチジルコリンを回収するため
の出発材料として、大豆油および食用油（サラダ
油）の調製において生成され精製されていないレ
シチンおよび精製されていないリン脂質と称され
る精製されていないリン脂質または市販のレシチ
ンが使用される。（カーク−オスマー（Kirk−
Othmer）による「Encyl.Chem.Technol.」14、
250〜269およびピーエイチリスト（P.H.List）に
よる「Pharm.Verfahrenstechn.heute1(7)１〜８
（1980）に記載されている。） 大豆レシチン（大豆の精製されていないリン脂
質）（soya raw−phosphatide）は、 極性脂質（リン脂質／糖脂質） 60〜70％ 大豆油 27〜37％ 水 1.5〜２％ 様々の他の物質 0.5〜２％ を含有する。 精製されていないレシチンおよび大豆レシチン
のそれぞれを脱油することによつて得られ、純粋
レシチンとも称される極性脂質は、下記の成分
（近似値で示す）を有するものである。 ホスフアチジルコリン（PC） 30％ リソホスフアチジルコリン（LPC） ２％ ホスフアチジルエタノールアミン（PE） 22％ リソホスフアチジルエタノールアミン（LPE）
２％ ホスフアチジルセリン（PS） ３％ ホスフアチジルイノシトール（PI） 15％ リソホスフアチジルイノシトール（LPI） １％ フイト糖脂質（PGL） 13％ ホスフアチジル酸（PA） ８％ 他の脂質 ４％ 低品位の大豆レシチン（大豆の精製されていな
いリン脂質）（soya raw−phosphatide）は、５
％までのリソホスフアチジルコリンを含む。 ホスフアチジルコリンを豊富に含む画分の調製
について様々な方法があることが知られている。
例えば大豆の精製されていないリン脂質をアセト
ンによつて脱油することによつて（米国特許第
3268335号）、極性脂質（純粋なレシチン）の混合
物から得られる。また大豆の精製されていないリ
ン脂質のアルコール抽出によつて（西独国特許第
1492952号）、ホスフアチジルコリンを多く含む極
性脂質の混合物を含有する油が得られる。 最近では、新規の極性脂質回収方法が例えば
DE−OS3011185号のような文献に記載されてお
り、それによると大豆の精製されていないリン脂
質を超臨界CO2による抽出によつて脱油しまた
は、欧州特許出願第0049914号に記載されている
ように、限界過によつて、ヘキサン／２−プロ
パノール（75／25）中リン脂質の溶液からホスフ
アチジルコリンを多く含む画分が得られる。大豆
の精製されていないリン脂質のようなリン脂質混
合物を含む油を、この方法において使用する場合
は、アセトンによる脱油または勾配溶剤法のいず
れかの操作が必要とされる。 他のリン脂質を含有しないホスフアチジルコリ
ンの回収は、リン脂質をクロマトグラフイによつ
て分離することによつて実施される。この場合吸
着剤と溶離剤の組み合わせは、重要な決め手とな
る。 天然の大豆の精製されていないリン脂質を出発
材料とする場合には、多段階方法において、エタ
ノールを溶離剤としアルミナ上でクロマトグラフ
イを行なうことによつて、３〜４％のリンホスフ
アチジルコリンを含有する純粋なホスフアチジル
コリンが得られる（米国特許第3031478号）。アル
ミナは再生不可能で廃棄処分をしなければならな
いため、アルミナをホスフアチジルエタノールア
ミン、ホスフアチジルイノシトール、ホスフアチ
ジル酸および糖脂質のようなリン脂質とともに充
填される。 リン脂質の分類における吸着剤としてはしばし
ばシリカゲルが用いられる。ドイツ特許公開明細
書第2915614号には、石油エーテルを溶剤とする
シリカゲル上でのクロマトグラフイによつて、大
豆の精製されていないリン脂質より油およびステ
アリンを分離して純粋なレシチンを回収する方法
が開示されている。この方法によるとシリカゲル
上に油およびステアリンが残留しているので、第
２分画において極性を有する溶剤による溶離をし
なければならない。リン脂質は、室温においてシ
リカゲルによるアルコール溶媒より保持される
（エイチリヒター（H.Richter）等による
「Pharmazie」32、164、（1977））。 リン脂質の分離または選択的な脱着は、アルコ
ール／アンモニア（特開昭49−93400号）または
クロロホルム／メタノール若しくはクロロホル
ム／メタノール／水の混合物のいずれかを用いる
ことによつて実施される。第１に、クロロホル
ム／メタノールおよびクロロホルム／メタノー
ル／水の各勾配溶出用の溶剤を用いるシリカゲル
上のクロマトグラフイを行なうことによつて、リ
ソホスフアチジルコリンを含まないホスフアチジ
ルコリンを回収することは可能である。勾配溶出
法を行つた場合には、最終生成物から溶剤混合物
（部分的に共沸混合物を含有）を回収および除去
するのに極めて複雑な操作を要する。 ドイツ特許公開明細書第3047048号に開示され
ているリン脂質のアルコール溶液から高温におけ
るシリカゲル上のカラムクロマトグラフイによつ
てホスフアチジルコリンを単離する方法は、以下
の２段階よりなる。 １ 大豆の精製されていないリン脂質からの抽出
ホスフアチジルコリン収率：約60％ ２ カラムクロマトグラフイによる精製 ホスフアチジルコリン収率：約73％ 両段階を通じてのホスフアチジルコリンの全収
率は大豆の精製されていないリン脂質に対する理
論値に対して約44％である。 この効率は、満足できる値とは言えない。さら
にホスフアチジルコリンは痕跡量のホスフアチジ
ルエタノールアミンおよびリソホスフアチジルコ
リンを含有する。リソホスフアチジルコリンは、
その方法の性質のため分離することが不可能であ
るので、出発材料としては、リソホスフアチジル
コリンを0.5％以下しか含有しない最高級の大豆
の精製されていないリン脂質のみが使用可能であ
る。 大豆の精製されていないリン脂質から他のリン
脂質を含まないホスフアチジルコリンを単離する
ための上記した全ての方法は、下記の欠点のうち
１つまたはそれ以上を有するものである。 即ち多段階操作であること、ホスフアチジルコ
リンの収率が低いこと、部分的に勾配溶出法を用
いるカラムクロマトグラフイによる分離において
は再生不可能な溶剤混合物を用いること、毒性溶
媒を用いること、リソホスフアチジルコリンによ
つて出発材料を選択する必要があること、再生不
可能な吸着剤を用いること、最終生成物中にホス
フアチジルエタノールアミンおよびリソホスフア
チジルコリンのような他のリン脂質が存在するこ
とおよびホスフアチジルコリンの含有量が低い点
があげられる。 これらの欠点があるため調製に必要なコストが
必然的に高くつき、他のリン脂質を含まない所望
のホスフアチジルコリンが得られないという結果
となる。 そこで本発明の目的は、他のリン脂質、特にリ
ソホスフアチジルコリンを含まないホスフアチジ
ルコリンを、精製されていないリン脂質（大豆、
ナタネ、ヒマワリ）から単離するための簡単な方
法を提供する点にある。 １段階操作において、特定の溶剤を用い特定の
条件下において溶出液の特定のフラクシヨンのみ
を採集するというシリカゲルクロマトグラフイを
行なうことによつて、精製されていないリン脂質
溶液から他のリン脂質を含まないホスフアチジル
コリンを得ることができるという発見は、驚きに
値いするものである。 本発明による方法は、低沸点石油エーテル留点
（40℃乃至80℃）、C1〜C4の低級アルカノールお
よび水からなる溶剤混合物中に精製されていない
リン脂質を溶解させ、その溶液をシリカゲルを充
填したカラムに注入し、前記温度において同一の
溶剤混合物を用いて溶離を行ない、溶出液のう
ち、主流出液を採集し、溶離材料を常法により単
離すると出発材料中のリン脂質混合中に存在して
いた他のリン脂質のような付随的リン脂質を含ま
ないホスフアチジルコリンが得られた。１容積部
の石油エーテル（65℃乃至73℃）、１容積部のプ
ロパノール−２および0.175体積部の水よりなる
溶剤混合物を使用することが望ましい。 出発材料の大豆リン脂質内に含まれている他の
脂質は初期溶出液および終期溶出液中で分離され
る。１段階操作において、主流出液中の多種の化
合物を含む混合物から痕跡量の糖脂質のみを不純
物として含有する純粋なホスフアチジルコリンを
単離することが可能であることは驚くべきことで
ある。 糖脂質は、それ自体周知の方法、例えばホスフ
アチジルコリンをエタノールに溶解させる（糖脂
質はエタノールに不溶性であるので）ことによつ
て除去することができる。このようにして、他の
物質、特にリソホスフアチジルコリンを含まない
高純度ホスフアチジルコリンが得られる。 たとえば、大豆の精製されていないリン脂質よ
り純粋なホスフアチジルコリン標準物質と高純度
のオスフアチジルコリン標準物質が得られ、その
収率は大豆の精製されていないリン脂質に対し
て、各々理論値の88％および86％でありこの収率
は今までに達成不可能であつた値である。 操作が簡単であることに加えて、本発明は低品
位の精製されていないリン脂質も使用可能である
ことに利点がある。この方法は、リソホスフアチ
ジルコリンを不純物として含む低品位の精製され
ていないリン脂質より周知の方法によつて調製さ
れたホスフアチジルコリンにも応用できる。 シリカゲルとしては、様々の粒子寸法を有する
クロマトグラフイ用の普通の製品または活性化若
しくは不活化され得る圧縮型シリカゲルを用いる
ことができる。 本発明による方法は、常圧または大気圧より高
い圧力下で、それらの圧力に対して許容しうる温
度、好適には20℃乃至50℃において実施すること
ができる。 本発明による方法の第１の利点は、クロマトグ
ラフイ終了後常にシリカゲルを再使用できる点に
ある。全ての不純物は、初期流出液および終期流
出液の各々に含まれる。カラムを再充填した場合
には、その中に含まれる不純物が次に続く初期流
出液とともに溶離されるので終期流出液の採集は
省略することができる。 第２の利点は、容易に再蒸留され得る溶剤混合
物を使用できる点にある。 さらに従来の方法と比較すると、一段階の操作
よりなる新規な方法は経済的であるという利点が
ある。例えば、大豆ホスフアチジルコリンが、大
豆の精製されていないリン脂質より収率88％で回
収される。カラムクロマトグラフイによる分離法
においては、シリカゲル200ｇ上で大豆の精製さ
れていないリン脂質110ｇを分離する際に必要な
全溶離剤はわずか4.4である。本方法はカラム
クロマトグラフイでの一般的な精製よりもむしろ
過の性質を有している。 以下、実施例により本発明を詳しく説明する
が、これに限定されるものではない。 （実施例） 分 析 リン脂質を薄層クロマトグラフイによつて分析
した。油含有量は、透析可能な物質と等しいと考
慮した。水分含有量は、カールフイツシヤ
（Karl Fischer）法によつて測定し、残留溶媒の
含有量はガスクロマトグラフイで測定した。 溶剤および溶離混合物 １容積部の石油エーテル（65℃乃至73℃）、１
容積部のプロパノール−２および0.175容積部の
水よりなる混合物を使用した。 カラムクロマトグラフイー 二重ジヤケツト式クロマトグラフイカラム（内
径4.5cm長さ37cm）を使用した。熱交換器をカラ
ムの前部に設けた。上記した溶剤混合物中のシリ
カゲル（Woelm社製）200ｇのスラリーをカラム
に充填した。なおクロマトグラフイ、終了後にも
シリカゲルは再利用することができる。 出発材料 下記の成分を有する精製されていないリン脂質
を使用した。
グラフイを行うことによつて、他のリン脂質を含
有しない純粋な１，２−ジアシル−グリセロ−３
−ホスフオコリン（ホスフアチジルコリン）を単
離する新規な方法に関する。 製薬業において、植物性のホスフアチジルコリ
ンは活性薬剤および助剤として使用されている。 活性薬剤としての用途においては、（経口投与
用には）ホスフアチジルコリンを多く含有するリ
ン脂質または（静脈内投与用には）リンホスフア
チジルコリンをほとんど含まない高純度のホスフ
アチジルコリンが必要とされる。 非経口投与される脂肪乳濁液の調製のために用
いられる乳化剤のような助剤としての用途または
リポゾームおよび混合ミセルの各々の生成のため
の用途のためには、ホスフアチジルコリンは、溶
血的に作用する（heamolytically acting）リソ
ホスフアチジルコリンを含まないことが要求され
る。 植物性のホスフアチジルコリンを回収するため
の出発材料として、大豆油および食用油（サラダ
油）の調製において生成され精製されていないレ
シチンおよび精製されていないリン脂質と称され
る精製されていないリン脂質または市販のレシチ
ンが使用される。（カーク−オスマー（Kirk−
Othmer）による「Encyl.Chem.Technol.」14、
250〜269およびピーエイチリスト（P.H.List）に
よる「Pharm.Verfahrenstechn.heute1(7)１〜８
（1980）に記載されている。） 大豆レシチン（大豆の精製されていないリン脂
質）（soya raw−phosphatide）は、 極性脂質（リン脂質／糖脂質） 60〜70％ 大豆油 27〜37％ 水 1.5〜２％ 様々の他の物質 0.5〜２％ を含有する。 精製されていないレシチンおよび大豆レシチン
のそれぞれを脱油することによつて得られ、純粋
レシチンとも称される極性脂質は、下記の成分
（近似値で示す）を有するものである。 ホスフアチジルコリン（PC） 30％ リソホスフアチジルコリン（LPC） ２％ ホスフアチジルエタノールアミン（PE） 22％ リソホスフアチジルエタノールアミン（LPE）
２％ ホスフアチジルセリン（PS） ３％ ホスフアチジルイノシトール（PI） 15％ リソホスフアチジルイノシトール（LPI） １％ フイト糖脂質（PGL） 13％ ホスフアチジル酸（PA） ８％ 他の脂質 ４％ 低品位の大豆レシチン（大豆の精製されていな
いリン脂質）（soya raw−phosphatide）は、５
％までのリソホスフアチジルコリンを含む。 ホスフアチジルコリンを豊富に含む画分の調製
について様々な方法があることが知られている。
例えば大豆の精製されていないリン脂質をアセト
ンによつて脱油することによつて（米国特許第
3268335号）、極性脂質（純粋なレシチン）の混合
物から得られる。また大豆の精製されていないリ
ン脂質のアルコール抽出によつて（西独国特許第
1492952号）、ホスフアチジルコリンを多く含む極
性脂質の混合物を含有する油が得られる。 最近では、新規の極性脂質回収方法が例えば
DE−OS3011185号のような文献に記載されてお
り、それによると大豆の精製されていないリン脂
質を超臨界CO2による抽出によつて脱油しまた
は、欧州特許出願第0049914号に記載されている
ように、限界過によつて、ヘキサン／２−プロ
パノール（75／25）中リン脂質の溶液からホスフ
アチジルコリンを多く含む画分が得られる。大豆
の精製されていないリン脂質のようなリン脂質混
合物を含む油を、この方法において使用する場合
は、アセトンによる脱油または勾配溶剤法のいず
れかの操作が必要とされる。 他のリン脂質を含有しないホスフアチジルコリ
ンの回収は、リン脂質をクロマトグラフイによつ
て分離することによつて実施される。この場合吸
着剤と溶離剤の組み合わせは、重要な決め手とな
る。 天然の大豆の精製されていないリン脂質を出発
材料とする場合には、多段階方法において、エタ
ノールを溶離剤としアルミナ上でクロマトグラフ
イを行なうことによつて、３〜４％のリンホスフ
アチジルコリンを含有する純粋なホスフアチジル
コリンが得られる（米国特許第3031478号）。アル
ミナは再生不可能で廃棄処分をしなければならな
いため、アルミナをホスフアチジルエタノールア
ミン、ホスフアチジルイノシトール、ホスフアチ
ジル酸および糖脂質のようなリン脂質とともに充
填される。 リン脂質の分類における吸着剤としてはしばし
ばシリカゲルが用いられる。ドイツ特許公開明細
書第2915614号には、石油エーテルを溶剤とする
シリカゲル上でのクロマトグラフイによつて、大
豆の精製されていないリン脂質より油およびステ
アリンを分離して純粋なレシチンを回収する方法
が開示されている。この方法によるとシリカゲル
上に油およびステアリンが残留しているので、第
２分画において極性を有する溶剤による溶離をし
なければならない。リン脂質は、室温においてシ
リカゲルによるアルコール溶媒より保持される
（エイチリヒター（H.Richter）等による
「Pharmazie」32、164、（1977））。 リン脂質の分離または選択的な脱着は、アルコ
ール／アンモニア（特開昭49−93400号）または
クロロホルム／メタノール若しくはクロロホル
ム／メタノール／水の混合物のいずれかを用いる
ことによつて実施される。第１に、クロロホル
ム／メタノールおよびクロロホルム／メタノー
ル／水の各勾配溶出用の溶剤を用いるシリカゲル
上のクロマトグラフイを行なうことによつて、リ
ソホスフアチジルコリンを含まないホスフアチジ
ルコリンを回収することは可能である。勾配溶出
法を行つた場合には、最終生成物から溶剤混合物
（部分的に共沸混合物を含有）を回収および除去
するのに極めて複雑な操作を要する。 ドイツ特許公開明細書第3047048号に開示され
ているリン脂質のアルコール溶液から高温におけ
るシリカゲル上のカラムクロマトグラフイによつ
てホスフアチジルコリンを単離する方法は、以下
の２段階よりなる。 １ 大豆の精製されていないリン脂質からの抽出
ホスフアチジルコリン収率：約60％ ２ カラムクロマトグラフイによる精製 ホスフアチジルコリン収率：約73％ 両段階を通じてのホスフアチジルコリンの全収
率は大豆の精製されていないリン脂質に対する理
論値に対して約44％である。 この効率は、満足できる値とは言えない。さら
にホスフアチジルコリンは痕跡量のホスフアチジ
ルエタノールアミンおよびリソホスフアチジルコ
リンを含有する。リソホスフアチジルコリンは、
その方法の性質のため分離することが不可能であ
るので、出発材料としては、リソホスフアチジル
コリンを0.5％以下しか含有しない最高級の大豆
の精製されていないリン脂質のみが使用可能であ
る。 大豆の精製されていないリン脂質から他のリン
脂質を含まないホスフアチジルコリンを単離する
ための上記した全ての方法は、下記の欠点のうち
１つまたはそれ以上を有するものである。 即ち多段階操作であること、ホスフアチジルコ
リンの収率が低いこと、部分的に勾配溶出法を用
いるカラムクロマトグラフイによる分離において
は再生不可能な溶剤混合物を用いること、毒性溶
媒を用いること、リソホスフアチジルコリンによ
つて出発材料を選択する必要があること、再生不
可能な吸着剤を用いること、最終生成物中にホス
フアチジルエタノールアミンおよびリソホスフア
チジルコリンのような他のリン脂質が存在するこ
とおよびホスフアチジルコリンの含有量が低い点
があげられる。 これらの欠点があるため調製に必要なコストが
必然的に高くつき、他のリン脂質を含まない所望
のホスフアチジルコリンが得られないという結果
となる。 そこで本発明の目的は、他のリン脂質、特にリ
ソホスフアチジルコリンを含まないホスフアチジ
ルコリンを、精製されていないリン脂質（大豆、
ナタネ、ヒマワリ）から単離するための簡単な方
法を提供する点にある。 １段階操作において、特定の溶剤を用い特定の
条件下において溶出液の特定のフラクシヨンのみ
を採集するというシリカゲルクロマトグラフイを
行なうことによつて、精製されていないリン脂質
溶液から他のリン脂質を含まないホスフアチジル
コリンを得ることができるという発見は、驚きに
値いするものである。 本発明による方法は、低沸点石油エーテル留点
（40℃乃至80℃）、C1〜C4の低級アルカノールお
よび水からなる溶剤混合物中に精製されていない
リン脂質を溶解させ、その溶液をシリカゲルを充
填したカラムに注入し、前記温度において同一の
溶剤混合物を用いて溶離を行ない、溶出液のう
ち、主流出液を採集し、溶離材料を常法により単
離すると出発材料中のリン脂質混合中に存在して
いた他のリン脂質のような付随的リン脂質を含ま
ないホスフアチジルコリンが得られた。１容積部
の石油エーテル（65℃乃至73℃）、１容積部のプ
ロパノール−２および0.175体積部の水よりなる
溶剤混合物を使用することが望ましい。 出発材料の大豆リン脂質内に含まれている他の
脂質は初期溶出液および終期溶出液中で分離され
る。１段階操作において、主流出液中の多種の化
合物を含む混合物から痕跡量の糖脂質のみを不純
物として含有する純粋なホスフアチジルコリンを
単離することが可能であることは驚くべきことで
ある。 糖脂質は、それ自体周知の方法、例えばホスフ
アチジルコリンをエタノールに溶解させる（糖脂
質はエタノールに不溶性であるので）ことによつ
て除去することができる。このようにして、他の
物質、特にリソホスフアチジルコリンを含まない
高純度ホスフアチジルコリンが得られる。 たとえば、大豆の精製されていないリン脂質よ
り純粋なホスフアチジルコリン標準物質と高純度
のオスフアチジルコリン標準物質が得られ、その
収率は大豆の精製されていないリン脂質に対し
て、各々理論値の88％および86％でありこの収率
は今までに達成不可能であつた値である。 操作が簡単であることに加えて、本発明は低品
位の精製されていないリン脂質も使用可能である
ことに利点がある。この方法は、リソホスフアチ
ジルコリンを不純物として含む低品位の精製され
ていないリン脂質より周知の方法によつて調製さ
れたホスフアチジルコリンにも応用できる。 シリカゲルとしては、様々の粒子寸法を有する
クロマトグラフイ用の普通の製品または活性化若
しくは不活化され得る圧縮型シリカゲルを用いる
ことができる。 本発明による方法は、常圧または大気圧より高
い圧力下で、それらの圧力に対して許容しうる温
度、好適には20℃乃至50℃において実施すること
ができる。 本発明による方法の第１の利点は、クロマトグ
ラフイ終了後常にシリカゲルを再使用できる点に
ある。全ての不純物は、初期流出液および終期流
出液の各々に含まれる。カラムを再充填した場合
には、その中に含まれる不純物が次に続く初期流
出液とともに溶離されるので終期流出液の採集は
省略することができる。 第２の利点は、容易に再蒸留され得る溶剤混合
物を使用できる点にある。 さらに従来の方法と比較すると、一段階の操作
よりなる新規な方法は経済的であるという利点が
ある。例えば、大豆ホスフアチジルコリンが、大
豆の精製されていないリン脂質より収率88％で回
収される。カラムクロマトグラフイによる分離法
においては、シリカゲル200ｇ上で大豆の精製さ
れていないリン脂質110ｇを分離する際に必要な
全溶離剤はわずか4.4である。本方法はカラム
クロマトグラフイでの一般的な精製よりもむしろ
過の性質を有している。 以下、実施例により本発明を詳しく説明する
が、これに限定されるものではない。 （実施例） 分 析 リン脂質を薄層クロマトグラフイによつて分析
した。油含有量は、透析可能な物質と等しいと考
慮した。水分含有量は、カールフイツシヤ
（Karl Fischer）法によつて測定し、残留溶媒の
含有量はガスクロマトグラフイで測定した。 溶剤および溶離混合物 １容積部の石油エーテル（65℃乃至73℃）、１
容積部のプロパノール−２および0.175容積部の
水よりなる混合物を使用した。 カラムクロマトグラフイー 二重ジヤケツト式クロマトグラフイカラム（内
径4.5cm長さ37cm）を使用した。熱交換器をカラ
ムの前部に設けた。上記した溶剤混合物中のシリ
カゲル（Woelm社製）200ｇのスラリーをカラム
に充填した。なおクロマトグラフイ、終了後にも
シリカゲルは再利用することができる。 出発材料 下記の成分を有する精製されていないリン脂質
を使用した。
【表】
実施例 １
上記した溶剤混合物中（16％PCおよび2.5％
LPCを含む）大豆の精製されていないリン脂質
110ｇの溶液450mlをシリカゲル（200ｇ）を充填
したクロマトグラフイカラムへ注入し、同じ溶剤
混合物によつて室温において溶離した。全溶離液
を３つのフラクシヨンに分けた。フラクシヨンを
蒸発させ残留物を分析した。 第１フラクシヨン：０乃至1.6残留物：89.5ｇ
中性脂質、糖脂質ならびにPE、Ｎ−アシル−
PE、PAおよびPIおよび痕跡量のPCのような
リン脂質を含んでいた。 第２フラクシヨン1.8乃至4.4残留物：18ｇ（純
粋なホスフアチジルコリン） PC含有量：86％ 油含有量：0.5％ 薄膜クロマトグラフイの試験によつて、PC以
外には不純物として糖脂質のみが検出された。 PC効果：大豆の精製されていないリン脂質に対
する理論値の88％ 第３フラクシヨン4.4乃至5.0残留物：２ｇ
PC、LPCおよび痕跡量の糖脂質を含んでいた。 シリカゲル上に少量のPC残存物が残つてい
た。86％のホスフアチジルコリンを含む第２フ
ラクシヨン18ｇを１時間室温において95％エタ
ノール中200mlとともに撹拌した。非溶性の糖
脂質を過助剤としてのアルミナ１ｇを介して
過した。液を蒸発させ残留物を分析した。 残留物：15.8ｇ（高純度のホスフアチジルコリ
ン） PC含有量：96％ 水：1.6％ 油：0.5％ エタノール：0.8％ PC効果：天然の大豆脂質に対する理論値の86
％ 純度（DC）：他の不純物は検出されなかつた。 実施例 ２ 実施例１と同じ方法によつてカラム温度50℃に
おいて試験を行なつた。同様のフラクシヨン分画
を同じ全溶離液体積で行なつた。第２フラクシヨ
ンは、87％PC（純粋なホスフアチジルコリン）を
含有する固体16.5ｇを含んでいた。薄層クロマト
グラフイによる純度は、実施例１による生成物の
純度と同じであつた。 実施例 ３ （ドイツ特許公開明細書第3047048号に開示され
た方法による比較例） （16.5％PCおよび2.5％LPCを含有する）大豆
の生成されていないリン脂質を５分間75℃におい
て96％エタノール1032mlで撹拌した。沈殿物を室
温において分離し、上方のエタノール相を蒸発さ
せた。 残留物：110ｇ PC含有量：30ｇ PC効率：大豆の精製されていないリン脂質に対
する理論値の60％ 残留物110ｇを96％エタノール350ml中に溶解さ
せ、ドイツ特許公開明細書第3047048号に記載の
方法（実施例１）に従つて、70℃の温度において
96％エタノールを溶離剤とするカラムクロマトグ
ラフイにより分離した。主流出液を蒸発させ残留
物を分析した。 残留物：27.7ｇ PC含有量：87％ LPC含有量：５％ PC効率：73％ 87％PCと５％LPCとともにホスフアチジルコ
リンを含有する主流出液より得られた残留物30ｇ
を１容積部の石油エーテル（65℃乃至73℃）と１
容積部のプロパノール−２と0.175容積部の水と
からなる混合物150ml中に溶解させ、シリカゲル
（200ｇ）を充填したクロマトグラフイカラムに注
入し、同じ溶剤混合物によつて室温で溶離した。
初期流出液400mlを得た後に主流出液3.5を採集
した。 主流出物を蒸発させ、残留物を分析した。 残留物：22ｇ PC含有量：95％ 油含有量：0.5％ LPC含有量：0.2％（測定限界） PC効率：出発材料に対する理論値の80％ 水：1.5％ 実施例 ４ 上記した溶剤混合物中22％PCおよび1.0％LPC
を含むヒマワリの精製されていないリン脂質125
ｇの溶液500mlをシリカゲル（200ｇ）を充填した
クロマトグラフイカラムへ注入し、同じ溶剤混合
物とともに室温において溶離した。全溶出液を２
つのフラクシヨンに分けた。フラクシヨンを蒸発
させ残留物を分析した。 第１フラクシヨン０乃至1.0残留物：97ｇ中性
脂質、糖脂質ならびにPE、Ｎ−アシル−PE、
PA、PIおよび痕跡量のPCのようなリン脂質を
含有していた。 第２フラクシヨン1.0乃至4.0残留物：26ｇ PC含有量：87％ 油含有量：0.7％ 薄層クロマトグラフイ試験によつて、PC以外
には不純物として糖脂質のみが検出された。 PC効率：天然のヒマワリリン脂質に対する理論
値の83％ シリカゲルに少量のPCのみが残存していた。 87％ホスフアチジルコリンを含有する第２フ
ラクシヨン26ｇを室温において１時間の間95％
エタノール200mlとともに撹拌した。不溶性の
糖脂質を過助剤としてのアルミナ１ｇを介し
て過した。液を蒸発させて残留物を分析し
た。 残留物：23.2ｇ（高純度のホスフアチジルコリ
ン） PC含有量：97％ 油含有量：0.7％ 乾燥損失：1.5％ PC効率：天然のヒマワリリン脂質に対する理
論値の82％ 純度（DC）：他の不純物は検出されなかつた。 実施例 ５ 上記した溶剤混合物中ナタネの精製されていな
いリン脂質（18％PC、2.6％LPC）160ｇの溶液
500mlを実施例４に記載の方法によつて処理した。 残留物：20.7ｇ（高純度ホスフアチジルコリン） PC含有量：96％ 油含有量：1.30％ 乾燥損失：2.0％ PC効率：ナタネの精製されていないリン脂質に
対する理論値の69％ 純度（DC）：他の不純物が検出されなかつた。
LPCを含む）大豆の精製されていないリン脂質
110ｇの溶液450mlをシリカゲル（200ｇ）を充填
したクロマトグラフイカラムへ注入し、同じ溶剤
混合物によつて室温において溶離した。全溶離液
を３つのフラクシヨンに分けた。フラクシヨンを
蒸発させ残留物を分析した。 第１フラクシヨン：０乃至1.6残留物：89.5ｇ
中性脂質、糖脂質ならびにPE、Ｎ−アシル−
PE、PAおよびPIおよび痕跡量のPCのような
リン脂質を含んでいた。 第２フラクシヨン1.8乃至4.4残留物：18ｇ（純
粋なホスフアチジルコリン） PC含有量：86％ 油含有量：0.5％ 薄膜クロマトグラフイの試験によつて、PC以
外には不純物として糖脂質のみが検出された。 PC効果：大豆の精製されていないリン脂質に対
する理論値の88％ 第３フラクシヨン4.4乃至5.0残留物：２ｇ
PC、LPCおよび痕跡量の糖脂質を含んでいた。 シリカゲル上に少量のPC残存物が残つてい
た。86％のホスフアチジルコリンを含む第２フ
ラクシヨン18ｇを１時間室温において95％エタ
ノール中200mlとともに撹拌した。非溶性の糖
脂質を過助剤としてのアルミナ１ｇを介して
過した。液を蒸発させ残留物を分析した。 残留物：15.8ｇ（高純度のホスフアチジルコリ
ン） PC含有量：96％ 水：1.6％ 油：0.5％ エタノール：0.8％ PC効果：天然の大豆脂質に対する理論値の86
％ 純度（DC）：他の不純物は検出されなかつた。 実施例 ２ 実施例１と同じ方法によつてカラム温度50℃に
おいて試験を行なつた。同様のフラクシヨン分画
を同じ全溶離液体積で行なつた。第２フラクシヨ
ンは、87％PC（純粋なホスフアチジルコリン）を
含有する固体16.5ｇを含んでいた。薄層クロマト
グラフイによる純度は、実施例１による生成物の
純度と同じであつた。 実施例 ３ （ドイツ特許公開明細書第3047048号に開示され
た方法による比較例） （16.5％PCおよび2.5％LPCを含有する）大豆
の生成されていないリン脂質を５分間75℃におい
て96％エタノール1032mlで撹拌した。沈殿物を室
温において分離し、上方のエタノール相を蒸発さ
せた。 残留物：110ｇ PC含有量：30ｇ PC効率：大豆の精製されていないリン脂質に対
する理論値の60％ 残留物110ｇを96％エタノール350ml中に溶解さ
せ、ドイツ特許公開明細書第3047048号に記載の
方法（実施例１）に従つて、70℃の温度において
96％エタノールを溶離剤とするカラムクロマトグ
ラフイにより分離した。主流出液を蒸発させ残留
物を分析した。 残留物：27.7ｇ PC含有量：87％ LPC含有量：５％ PC効率：73％ 87％PCと５％LPCとともにホスフアチジルコ
リンを含有する主流出液より得られた残留物30ｇ
を１容積部の石油エーテル（65℃乃至73℃）と１
容積部のプロパノール−２と0.175容積部の水と
からなる混合物150ml中に溶解させ、シリカゲル
（200ｇ）を充填したクロマトグラフイカラムに注
入し、同じ溶剤混合物によつて室温で溶離した。
初期流出液400mlを得た後に主流出液3.5を採集
した。 主流出物を蒸発させ、残留物を分析した。 残留物：22ｇ PC含有量：95％ 油含有量：0.5％ LPC含有量：0.2％（測定限界） PC効率：出発材料に対する理論値の80％ 水：1.5％ 実施例 ４ 上記した溶剤混合物中22％PCおよび1.0％LPC
を含むヒマワリの精製されていないリン脂質125
ｇの溶液500mlをシリカゲル（200ｇ）を充填した
クロマトグラフイカラムへ注入し、同じ溶剤混合
物とともに室温において溶離した。全溶出液を２
つのフラクシヨンに分けた。フラクシヨンを蒸発
させ残留物を分析した。 第１フラクシヨン０乃至1.0残留物：97ｇ中性
脂質、糖脂質ならびにPE、Ｎ−アシル−PE、
PA、PIおよび痕跡量のPCのようなリン脂質を
含有していた。 第２フラクシヨン1.0乃至4.0残留物：26ｇ PC含有量：87％ 油含有量：0.7％ 薄層クロマトグラフイ試験によつて、PC以外
には不純物として糖脂質のみが検出された。 PC効率：天然のヒマワリリン脂質に対する理論
値の83％ シリカゲルに少量のPCのみが残存していた。 87％ホスフアチジルコリンを含有する第２フ
ラクシヨン26ｇを室温において１時間の間95％
エタノール200mlとともに撹拌した。不溶性の
糖脂質を過助剤としてのアルミナ１ｇを介し
て過した。液を蒸発させて残留物を分析し
た。 残留物：23.2ｇ（高純度のホスフアチジルコリ
ン） PC含有量：97％ 油含有量：0.7％ 乾燥損失：1.5％ PC効率：天然のヒマワリリン脂質に対する理
論値の82％ 純度（DC）：他の不純物は検出されなかつた。 実施例 ５ 上記した溶剤混合物中ナタネの精製されていな
いリン脂質（18％PC、2.6％LPC）160ｇの溶液
500mlを実施例４に記載の方法によつて処理した。 残留物：20.7ｇ（高純度ホスフアチジルコリン） PC含有量：96％ 油含有量：1.30％ 乾燥損失：2.0％ PC効率：ナタネの精製されていないリン脂質に
対する理論値の69％ 純度（DC）：他の不純物が検出されなかつた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 植物性脂質混合物を、低沸点石油エーテル留
分（40℃乃至80℃）、C1〜C4の低級アルカノール
および水からなる溶剤混合物に溶解し、その溶液
をシリカゲルを充填したカラムへ20℃乃至50℃の
範囲内の温度において注入し、この温度において
同一の溶剤混合物を用いて溶離を行ない、主流出
液を採集し、その中より出発材料の植物性脂質混
合物中に存在する他のリン脂質を含まない純粋な
ホスフアチジルコリンを常法によつて単離するこ
とを特徴とする植物性脂質混合物からホスフアチ
ジルコリンを単離する方法。 ２ １容積部の石油エーテル留分（65℃乃至73
℃）、１容積部の２−プロパノールおよび0.175容
積部の水からなる溶剤混合物を使用することを特
徴とする特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３ 脂質混合物が、精製されていないリン脂質
（精製されていないレシチン）中に存在する極性
および非極性の植物性脂質からなることを特徴と
する特許請求の範囲第１項または第２項に記載の
方法。 ４ 脂質混合物が、ホスフアチジルコリンを含有
するリン脂質よりなることを特徴とする特許請求
の範囲第３項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
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| DE19843445949 DE3445949A1 (de) | 1984-12-17 | 1984-12-17 | Verfahren zur isolierung eines begleitphospholipid-freien phosphatidylcholins |
Publications (2)
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|---|---|
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| JPH0584320B2 true JPH0584320B2 (ja) | 1993-12-01 |
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