JPH05963A - ポリペプチド類組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 電子出願以前の出願であるので 要約・選択図及び出願人の識別番号は存在しない。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は医療上、有用で新規な生理活性ポリペ プチド類組成物に関する。

［従来の技術］ 近年、生理活性ポリペプチド類を医薬として利 用する試みが数多くなされつつある。この場合、 最も重要な要件は、重大な副作用がなくかつ薬効 が高いことである。次に求められる要件は安定な 製剤で、さらに投与法が簡便なことである。これ らの要件のいずれもが生理活性ポリペプチド類の 医薬としての応用の成否を左右することになり、 できるだけ改善された状態にすることが求められ ている。

投与法に関してはその性質上、ほとんど注射剤 として用いられているが投与法の繁雑さ、また患 者への負担などの問題からより簡便な投与法が求 められていた。

薬剤を水溶性の微粒子化して投与する方法は、 いわゆるジェット・ネブライザーや超音波式ネブ ライザーと呼ばれ、また固体状の微粒子粉末とし て投与する方法は定量噴霧装置が使われ、主に、β_２ アドレナリン作動性拮抗剤やステロイド類ある いは抗生物質などの低分子化合物で実用化が進め られてきた。

ポリペプチド類に対するこのようなエアロゾル 製剤化の試みは比較的新しく、インシュリン固体 エアロゾル製剤の例(LeeとSciarra，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．
Ｓ i.，65，567，1976)や組換え型α_１−アンチト リプシンの固体エアロゾル製剤の例(Hubbardら、 Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86，680，1989)また ヒト白血球インターフェロンαを水溶液としてジ ェット・ネブライザーで投与した例(Kinnulaら、 J.Interferon Res.，９，419，1989）、ヒト成長ホ ルモンを水溶液としてネブライザーで投与した例 （特開昭６３−５１８６８）などがある。これら の例ではいずれも粒子径５μｍ以下が好ましいと され、経肺的にポリペプチド類を吸収させようと している。

スプレー式の液体や固体を用いた経鼻投与剤も エアロゾル製剤に含まれ、ヒト白血球インターフ ェロン溶液をライノウイルス感染阻止のために鼻 に噴霧した例(Scottら、Bt.Med.J.，284，182 ２，1982)があるほか、経鼻投与用のポリペプチド 類粉末組成物が開示（特開昭６２−３７０１６） されている。しかしここで用いられた経鼻用粉末 製剤はその粒子の少なくとも９０％以上の有効粒 子径が１０〜２５０μｍにあり、粒子が肺に入る のを避けるように規定されている。

エアロゾル製剤はその粒子径の設定で吸収部位 が特定化されると考えられている。すなわち、小 さい粒子ほど肺胞内まで到達することができ、逆 に大きな粒子は鼻腔や口腔内で沈着するといわれ ている。具体的には肺腔内到達には粒子径が0. 5〜７μｍの間になければならず(Porushら、J. Amer.Pharm.Ass.Sci.Ed.，49，70，1960）、５μ ｍ以下が好ましい(NewmanとClarks，Thorax，38， 881，1983）とされている。

［発明が解決しようとする課題］ 経肺あるいは経咽頭投与法は、その簡便さから、 現実の医療上、求められている投与法である。今 まで述べてきたように、経鼻投与法を含めていく つかの試みが行われているが、生理活性ポリペプ チド類はそれぞれの特性も異なり、実際の安定な 製剤を得るのに十分に技術が確立しているとは言 い難い。

たとえば、生理活性ポリペプチド類は一般に溶 液系では酸化や凝集、自己消化などの反応によっ て活性を失うことが多く、溶液状態で微粒子化 （たとえばジェット・ネブライザーや超音波式ネ ブライザーで噴霧）することは、噴霧時にさらに ポリペプチド類分子に剪断力がかかることになり、 溶液系ではその影響を受けやすいため、安定性や 薬効の点で問題が残る。この点では粉末製剤が可 能であればその方が優れていると言える。また、 液体状態、固体状態にかかわらず、安定化剤や安 定条件の設定は薬効の高いポリペプチド類製剤を 調製するのに不可欠である。

本発明は医薬への応用可能な生理活性ポリペプ チド類組成物を、経肺および経咽頭投与可能な固 体状の安定なエアロゾル製剤として得ることによ り、上記の課題を解決しようとするものである。

本発明者らは、この目的に沿って鋭意研究の結 果、本発明を完成した。

［課題を解決するための手段］ 上記目的は以下の本発明により達成される。す なわち本発明は、ポリペプチド類とヒト血清アル ブミン、糖あるいは糖アルコールを加えて凍結乾 燥し、さらに微粒子化させた有効粒子径が０．４ μｍ以上１０μｍ未満から成るポリペプチド類組 成物に関するものである。

本発明のポリペプチド類とは、具体的に抗ウイ ルス性ポリペプチド類（ヒト・インターフェロン α、βまたはγ）、免疫調節性ポリペプチド類 （ヒト・インターロイキン１、２、３、４、５、 ６、７または８）のほか、造血性ポリペプチド類 （ヒト顆粒球コロニー刺激因子、ヒト・マクロフ ァージコロニー刺激因子、ヒト顆粒球／マクロフ ァージコロニー刺激因子あるいはヒト・エリスロ ポエチン）なども含まれる。ここで用いられるポ リペプチド類はヒト細胞から抽出したもの（天然 型）、あるいは遺伝子組換え技術によって微生物 （たとえば大腸菌や酵母）や昆虫細胞（たとえば カイコや夜盗蛾）、またはヒトおよび他種の動物 細胞（たとえばハムスター卵巣細胞やマウスＣ１ ２７細胞）を宿主として作成した遺伝子組換え型 ポリペプチド、さらには化学合成によって作成さ れた合成ポリペプチドも含まれる。

これらのポリペプチド類は溶液系で抽出精製に より宿主細胞成分や培養液由来成分、添加血清成 分を十分に除去した後、生物学的製剤としての基 準を満たすヒト血清アルブミンをポリペプチド類 の０．５重量％以上加え、さらに糖あるいは糖ア ルコールを加えて凍結乾燥し、固体換される。

本発明で用いる糖あるいは糖アルコールは、ラ クトース、マルトース、ソルビトース、トレハロ ース、キシロース、あるいはマンニトール、ソル ビトール、キシリトールのうち少なくとも１種類 であり、ポリペプチド類とヒト血清アルブミンの 合計重量に対し、０．０１〜２００％の範囲で加 え得るが、好ましくは１〜５０％である。

凍結乾燥品の微粒子化はジェット・ミリング装 置（たとえば“Micronizer Mill” ）、ボール・ミリング装置などで行われる。粒子 径は経肺投与用としては全粒子の５０％以上、好 ましくは７５％以上が０．５〜４．０μｍであり、 また経咽頭用としては全粒子の５０％以上好まし くは７５％以上が４．０μｍ以上１０μｍ未満で ある。このときの粒子径分布は、通常の粒子分布 分析計（たとえば堀場製作所製ＣＡＰＡ７００型、 カリフォルニア・メジャーメント社製ＱＣＭカス ケードインパクターＰＣ２型など）により測定す ることができる。

微粒子化された凍結乾燥品は、粒子の分散性向 上のために界面活性剤を添加することが好ましい が、本発明で用いる界面活性剤は、ソルビタント リオレート（Ｓｐａｎ８５）、オレイルアルコー ル、大豆レシチンあるいは硬化ヒマシ油誘導体 （ＨＣＯ６０）のうち少なくとも１種であり、ポ リペプチド類とヒト血清アルブミンの合計重量に 対し、０．００１〜５％の範囲で加え得るが、好 ましくは０．０５〜２％である。

この他、本来生体に存在する浸透圧維持に必要 な鉱物イオン、たとえばカルシウムイオン、マグ ネシウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイ オン、クロルイオンなどは適宜含まれる。また、 生体に対する刺激性を抑えるために、肺胞由来の サーファクタントも必要に応じて添加することが できる。

このようにして調製された該ポリペプチド類組 成物は、そのまま、あるいは圧縮空気、圧縮炭酸 ガスなどを噴霧ガスとして、またあるいは適当な プロペラント中に分散して、口腔内または鼻腔内 を経由して咽頭部あるいは肺内に吸入させる。使 用可能なプロペラントとしては、クロルフルオロ カーボン（フロン１１，１２，１１４など）、水 素を含有したクロルフルオロカーボン（フロン１ ２３，１２４，１４１ｂ），塩素を含まないフル オロカーボン（フロン１２５，１３４ａ）などが 挙げられる。

［実施例］ 次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説 明するが、本発明はこれらに限定されるものでは ない。

実施例１． 天然型ヒト・インターフェロンβ（東レ製“フ エロン”）１５μｇ／ｍｌ、ヒト血清アルブミン １５ｍｇ／ｍｌ、ソルビトール４．５ｍｇ／ｍｌ， および塩化ナトリウム０．６ｍｇ／ｍｌを含む溶 液５０ｍｌを１０ｍｌずつガラスバイアルに入れ 凍結乾燥した。凍結乾燥した固形粉末を集め、５ ００ｍｌ容積をもつＳｔｕｒｔｅｖａｎｔジェッ ト・ミリング装置でミリングを行い、微粒子粉末 を得た。この粉末の粒度分布を粒子分布分析計Ｃ ＡＰＡ７００型（堀場製作所製）で測定したとこ ろ、平均粒子径±標準偏差は１．６±１．２μｍ であり、この範囲の粒子の含有率は８２．３％で あった。次にこの粒子４ｍｇを２ｍｌガラスバイ アルに入れ、さらにオレイルアルコール、ソルビ タントリオレエート（Ｓｐａｎ８５）、大豆レシ チン、硬化ヒマシ油誘導体（ＨＣＯ６０）の４種 類の界面活性剤をそれぞれ０．１重量％あるいは １重量％で加えた後、フルオロカーボン（フロン １２）を １ｍｌで加え、密栓して室温に４８時間 放置した。続いて、バイアル瓶の蓋を開け、内部 のフルオロカーボンを気化させてから、５％胎児 ウシ血清を含むイーグルＭＥＭ倍地５ｍｌを加え、 バイアル内の粒子を溶かし、その溶液のインター フェロン活性を測定した。ここでインターフェロ ン活性は抗ヒト・インターフェロンβ抗体を用い た酵素免疫測定法（ＥＩＡ）（Yamazaki ら、J.Im munoassay，10，57，1989）を使って測定した。

活性の回収率は表１のようになり、オレイルア ルコール、ソルビタントリオレート、大豆レシチ ン、あるいは硬化ヒマシ油誘導体を添加すること により安定なヒト・インターフェロンβ粉体組成 物が得られることがわかった。

比較例１． 溶液系での活性回収率を調べるために、実施例 に用いたのと同一処方の凍結乾燥前のヒト・イン ターフェロン溶液に各種界面活性剤を０．１％で 加えて室温、４８時間放置し、実施例と同様にＥ ＩＡを使ってインターフェロン活性を測定した。

その結果は表２にまとめたとおりで、溶液系では 実施例よりも回収率が低く、かつ界面活性剤存在 下で不安定なことがわかった。

実施例２． ヒト線維芽細胞培養上清から均一に精製したヒ ト・インターロイキン６ １０μｇ／ｍｌ、ヒト血 清アルブミン１０ｍｇ／ｍｌ、ソルビトール３．０ ｍｇ／ｍｌ、および塩化ナトリウム０．６ｍｇ／ｍｌ を含む溶液５０ｍｌを１０ｍｌずつガラスバイアルに 入れ凍結乾燥した。この凍結乾燥した固体粉末を 集め、５００ｍｌ容積をもつSturtevantジェット・ ミリング装置で微粒子粉末を得た。この粉末を粒 子分布分析計ＣＡＰＡ７００型（堀場製作所製） で分析したところ、８５．３％の粒子が１．８± １．３μｍに存在した。次にこの粒子１０ｍｇを１ ０ｍｌガラスバイアルに入れ、窒素中でソルビタン トリオレート（Span85)を０．１％になるように 加え、さらに定量噴霧バルブを装着した後、ガラ スバイアル内にフロン１１４：フロン１２＝４： ６となるようにフルオロカーボン５ｍｌを注入した。

この定量噴霧装置でヒト・インターロイキン６約 １００μｇをウサギ（２．５ｋｇ）に経肺的に投与 した。投与後２４時間目に耳静脈から採血し、血 小板数を計数したところ、血小板数は投与前に比 べて２１０％と有意に増加しており、経肺的に投 与したヒト・インターロイキン６の薬効が確認さ れた。

［発明の効果］ 本発明の微粒子状組成物は安定性に優れている ため、医薬として有用な生理活性ポリペプチド類 の経肺および経咽頭投与用組成物として適してい る。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/66 8317−4Ｃ 47/26 Ｂ 7329−4Ｃ 47/42 Ｂ 7329−4Ｃ

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ポリプペチド類、ヒト血清アルブミン、
   およ び糖あるいは糖アルコールを含む溶液を凍結乾燥 せしめ、該凍結乾燥品を微粒子化してなる有効粒 子径が０．５μｍ以上１０μｍ未満のポリプペチ ド類組成物。
2. 【請求項２】 ポリペプチド類がヒト・インターフェロ
   ンα、 ヒト・インターフェロンβまたはヒト・インター フェロンγである請求項(1)記載のポリペプチド類 組成物。
3. 【請求項３】 ポリペプチド類がヒト・インターロイキ
   ン６ である請求項(1)記載のポリペプチド類組成物。
4. 【請求項４】 有効粒子径が０．５μｍ以上４．０μｍ
   未満 である経肺投与用組成物としての請求項(1)項記載 のポリペプチド類組成物。
5. 【請求項５】 有効粒子径が４．０μｍ以上１０μｍ未
   満で ある経咽頭投与用としての請求項(1)項記載のポリ ペプチド類組成物。