JPH06100569A

JPH06100569A - シコニン金属錯体化合物

Info

Publication number: JPH06100569A
Application number: JP24968192A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Sakurai; 弘桜井; Noriko Hashimoto; 法子橋本
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1992-09-18
Filing date: 1992-09-18
Publication date: 1994-04-12

Abstract

(57)【要約】【目的】本発明は、優れたＤＮＡ切断作用等の薬理作用
を有するシコニン金属錯体化合物を提供することを目的
とする。【構成】本発明の化合物は、式【化１】で表わされるシコニンと金属イオン化合物とのシコニン
金属錯体化合物である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規なシコニン金属錯
体化合物に関する。

【０００２】

【発明の開示】本発明のシコニン金属錯体化合物は、文
献未記載の新規化合物である。

【０００３】従来、古代色素“むらさき”と呼ばれる多
年草植物の根は、古くから生薬や染料として使用されて
いる。そのむらさきの根に含まれる赤紫色の有効成分が
シコニンであり、ナフタザリン骨格を有するキノン誘導
体で、側鎖に不斉炭素原子を１個有している。シコニン
の研究は、古くから行なわれていたが、近年植物培養技
術の進歩により、シコニンの工業的生産が行なわれるよ
うになり、天然栽培に比し生産性が飛躍的に向上しつつ
ある。

【０００４】本発明者は、シコニンにつき研究を重ねる
内、シコニンに金属イオン化合物を反応させて得られる
シコニン金属錯体化合物が下記に示すような薬理作用を
有していることを見い出し、ここに本発明を完成するに
至った。

【０００５】本発明のシコニン金属錯体化合物は、式

【０００６】

【化２】

【０００７】で表わされるシコニンと金属イオン化合物
との反応により得られる新規化合物である。

【０００８】本発明のシコニン金属錯体化合物は、活性
酸素種（例えばスーパーオキシドラジカル、ヒドロキシ
ラジカル等）の消去作用、具体的には抗菌作用、抗炎症
作用及び活性酸素種の生成作用、具体的にはＤＮＡ切断
作用等を有し、スーパーオキシドラジカルの関与する疾
患や症例の予防乃至治療剤として、具体的には自己免疫
疾患治療剤、抗動脈硬化剤、発癌予防剤、制癌剤、抗炎
症剤、鎮痛剤、血小板凝集抑制剤、降圧剤、抗高脂血症
剤、未熟児網膜症及び白内障の予防及び治療剤、抗菌剤
等の医薬として有効に使用され得る。更に本発明のシコ
ニン金属錯体化合物は、染料としても有用である。

【０００９】本発明の金属錯体化合物を構成する金属イ
オンとしては、例えばＦｅ³⁺、Ｆｅ²⁺、Ｍｎ²⁺、Ａ
ｌ³⁺、Ｃｕ²⁺、Ｎｉ²⁺、ＶＯ²⁺、Ｃｒ³⁺、Ｃｒ⁶⁺、Ｃｏ
²⁺、Ｚｎ²⁺等を挙げることができる。

【００１０】本発明のシコニン金属錯体化合物は、式
（１）で表わされるシコニンと金属塩とを反応させるこ
とにより容易に製造される。

【００１１】金属塩としては、従来公知のものを広く使
用でき、例えば塩化鉄（II）、塩化鉄（III)、塩化マン
ガン（II）、塩化アルミニウム（III)、塩化銅（II）、
塩化ニッケル（II）、塩化クロム（III)、塩化コバルト
（II）、塩化コバルト（III)等の塩化物、臭化銅（I
I）、臭化亜鉛（II）等の臭化物、沃化銅（II）等の沃
化物等のハロゲン化金属、硫酸亜鉛（II）、酸化硫酸バ
ナジウム（IV）、硫酸銅（II）、硫酸亜鉛（II）等の硫
酸塩、亜硫酸アンモニウム鉄（III)、二クロム（IV）酸
カリウム等を挙げることができる。これら金属塩の使用
量としては、特に限定がなく広い範囲内で適宜選択され
得るが、シコニンに対して通常０．２５〜５倍モル量程
度、好ましくは１〜２倍モル量程度とするのがよい。

【００１２】シコニンと金属塩との反応は、適当な不活
性溶媒中で行なわれる。用いられる不活性溶媒として
は、反応に悪影響を及ぼさないものである限り従来公知
のものを広く使用でき、例えばメタノール、エタノー
ル、イソプロパノール等の低級アルコール類、ジオキサ
ン、テトラヒドロフラン、エチレングリコールジメチル
エーテル等のエーテル類、ジメチルホルムアミド、ジメ
チルスルホキシド、ヘキサメチルリン酸トリアミド、ア
セトニトリル、Ｎ−メチルピロリドン等を挙げることが
できる。上記反応の系内には水酸化ナトリウム、水酸化
カリウム等のアルカリ金属水酸化物等の塩基性化合物を
添加してもよい。該反応は、通常室温付近〜５０℃程度
で進行し、一般に６〜１２時間程度で終了する。

【００１３】本発明のシコニン金属錯体化合物を医薬と
して用いる場合、一般的な医薬製剤の形態で用いられ
る。製剤は通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付
湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤あるいは
賦形剤を用いて調製される。この医薬製剤としては各種
の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なもの
として錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒
剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）等が
挙げられる。

【００１４】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来よりよく知られている各種のものを
広く使用することができる。その例としては、例えば乳
糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプ
ン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ
酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロ
ップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボ
キシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、
リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾
燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミ
ナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリ
オキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル
硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプ
ン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバタ
ー、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩
基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリ
ン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、
ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タル
ク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコー
ル等の滑沢剤等を使用できる。さらに錠剤は必要に応じ
通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包
錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重
錠、多層錠とすることができる。

【００１５】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用できる。その
例としては、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ
脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビ
アゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結
合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用でき
る。

【００１６】坐剤の形態に成形するに際しては、担体と
して従来公知のものを広く使用できる。その例として
は、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級ア
ルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半
合成グリセライド等を挙げることができる。

【００１７】注射剤として調製される場合、液剤、乳剤
及び懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ま
しく、これらの形態に成形するに際しては、希釈剤とし
てこの分野において慣用されているものをすべて使用で
き、例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロ
ピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコー
ル、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキ
シエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用でき
る。なお、この場合等張性の溶液を調製するに充分な量
の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを医薬製剤中に含
有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無
痛化剤等を添加してもよい。

【００１８】ペースト、クリーム及びゲルの形態に成形
するに際しては、希釈剤としてこの分野で従来公知のも
のを広く使用でき、例えば白色ワセリン、パラフィン、
グリセリン、セルロース誘導体、ポリエチレングリコー
ル、シリコン、ベントナイト等を例示できる。

【００１９】本発明の医薬製剤中に含有されるべき本発
明のシコニン金属錯体化合物の量としては、特に限定さ
れず広い範囲内で適宜選択され得るが、通常医薬製剤中
に１〜７０重量％程度含有されるように配合するのがよ
い。

【００２０】本発明の医薬製剤の投与方法は特に制限は
なく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、
疾患の程度等に応じた方法で投与される。例えば錠剤、
丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場
合には、経口投与される。注射剤の場合には単独で又は
ブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投
与され、更に必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下も
しくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直腸内投与さ
れる。また外用剤の場合には患部に塗布される。

【００２１】本発明のこれら医薬製剤の投与量は、用
法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等によ
り適宜選択されるが、通常有効成分である金属錯体化合
物等の量が、一日当り体重１ｋｇ当り、約０．２〜２０
０ｍｇ程度とするのがよい。また、該医薬製剤は、通常
１〜３回に分けて投与されるのがよい。

【００２２】

【実施例】以下に実施例を掲げて本発明をより一層明ら
かにする。

【００２３】実施例１トリス緩衝液（ｐＨ７．８）２５５０μｌ及びアセトニ
トリル５１７５μｌに、５０ｍＭのＣｕ²⁺（水溶媒、Ｃ
ｕＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ）７２５０μｌ及び５０ｍＭのシコ
ニン（アセトニトリル溶媒）４１２５μｌを加えて攪拌
した。これに蒸留水を適量加え、１〜２日放置した。放
置後、生成した沈殿をガラスフィルターを用いて濾過
し、採取した。その後デシケーター中で約２日間乾燥さ
せて、黒紫色のシコニン−銅錯体を４５ｍｇ得た。

【００２４】元素分析値（実測値）；Ｈ：４．２４
（％）、Ｃ：５２．３３（％）この元素分析値から、上記で得られたシコニン−銅錯体
は、シコニンと銅とが１：１の割合からなっているもの
と推測される。

【００２５】ＩＲスペクトル；１５２７．４（νＣ＝
Ｏ），シコニンとシコニン銅錯体のνＣ＝Ｏの差＝８４
（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ^-1 その他の振動数：３４００（ｓ），２９５０（ｗ），２
９００（ｍ），２８００（ｗ），１７５０（ｗ），１６
９０（ｗ），１６８０（ｗ），１６５０（ｗ），１６３
０（ｗ），１６００（ｍ），１５２０（ｓ），１４９５
（ｗ），１４８０（ｗ），１４７０（ｗ），１４４０
（ｓ），１３３０（ｍ），１２６０（ｍ），１２２０
（ｍ），１２００（ｍ），１１２０（ｍ），１１１０
（ｗ），１０６０（ｍ），１０３０（ｗ），９６５
（ｓ），９４０（ｗ），９００（ｗ），８４０（ｍ）。

【００２６】実施例２トリス緩衝液（ｐＨ７．８）２５５０μｌ及びアセトニ
トリル５１７５μｌに、５０ｍＭのＣｕ²⁺（水溶媒、Ｃ
ｕＣｌ₂・２Ｈ₂Ｏ）７２５０μｌ及び５０ｍＭのシコ
ニン（アセトニトリル溶媒）４１２５μｌを加え、更に
１００ｍＭの水酸化カリウム（メタノール溶媒）１２５
０μｌを加えて攪拌した。これに蒸留水を適量加え、１
〜２日放置した。放置後、生成した沈殿をガラスフィル
ターを用いて濾過し、採取した。その後デシケーター中
で約２日間乾燥させて、黒紫色のシコニン−銅錯体を５
２ｍｇ得た。

【００２７】元素分析値（実測値）；Ｈ：４．２４
（％）、Ｃ：５６．６７（％）この元素分析値から、上記で得られたシコニン−銅錯体
は、シコニンと銅とが４：３の割合からなっているもの
と推測される。

【００２８】ＩＲスペクトル；１５２７．４（νＣ＝
Ｏ），シコニンとシコニン銅錯体のνＣ＝Ｏの差＝８４
（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ^-1 その他の振動数：３４００（ｍ），１６０５（ｗ），１
５２０（ｓ），１４８０（ｗ），１４４０（ｓ），１３
３０（ｗ），１２６０（ｍ），１１９０〜１２３０
（ｍ），１１２０（ｍ），１０６０（ｍ），９６０
（ｓ），８４０（ｍ）ＥＳＲスペクトル；ＥＳＲ測定装置により室温及び液体
窒素温度で確認ｇ値＝２．１、微細結合定数（Ａ）＝１３３ｍＴ。

【００２９】実施例３ジメチルホルムアミド４７２５μｌに、１００ｍＭの水
酸化カリウム（メタノール溶媒）１７５０μｌ、５０ｍ
ＭのＣｕ²⁺（水溶媒）７８７５μｌ及び５０ｍＭのシコ
ニン（ジメチルホルムアミド溶媒）３５００μｌを加え
て攪拌した。これに蒸留水を適量加え、１〜２日放置し
た。放置後、生成した沈殿をガラスフィルターを用いて
濾過し、採取した。その後デシケーター中で約２日間乾
燥させて、黒紫色のシコニン−銅錯体を３８ｍｇ得た。

【００３０】元素分析値（実測値）；Ｈ：３．７１
（％）、Ｃ：４８．０６（％）この元素分析値から、上記で得られたシコニン−銅錯体
は、シコニンと銅とが３：４の割合からなっているもの
と推測される。

【００３１】ＩＲスペクトル；１５２７．４（νＣ＝
Ｏ），シコニンとシコニン銅錯体のνＣ＝Ｏの差＝８４
（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ^−１その他の振動数：３４００（ｍ），２８００（ｗ），１
６３０（ｗ），１６００（ｗ），１５２０（ｓ），１４
８０（ｗ），１４３５（ｓ），１３７０（ｗ），１２６
０（ｍ），１２２０（ｍ），１１１５（ｍ），１０６０
（ｍ），９６０（ｓ），８９０（ｗ），８４０（ｍ）。

【００３２】実施例４ジメチルホルムアミド４７２５μｌに、１００ｍＭの水
酸化カリウム（メタノール溶媒）１７５０μｌ、５０ｍ
ＭのＣｕ^２＋（ジメチルホルムアミド溶媒）７８７５μ
ｌ及び５０ｍＭのシコニン（ジメチルホルムアミド溶
媒）３５００μｌを加えて攪拌した。これに蒸留水を適
量加え、１〜２日放置した。放置後、生成した沈殿をガ
ラスフィルターを用いて濾過し、採取した。その後デシ
ケーター中で約２日間乾燥させて、黒紫色のシコニン−
銅錯体を４０ｍｇ得た。

【００３３】元素分析値（実測値）；Ｈ：４．３４
（％）、Ｃ：５２．９（％）この元素分析値から、上記で得られたシコニン−銅錯体
は、シコニンと銅とが１：１の割合からなっているもの
と推測される。

【００３４】ＩＲスペクトル；１５２７．４（νＣ＝
Ｏ），シコニンとシコニン銅錯体のνＣ＝Ｏの差＝８４
（Ｃ＝Ｏ）ｃｍ^-1 その他の振動数：３４００（ｍ），２９５０（ｗ），２
８００（ｍ），２３００（ｗ），１６３０（ｍ），１５
２０（ｓ），１４８０（ｗ），１４４０（ｓ），１３４
０（ｗ），１３００（ｗ），１２６０（ｍ），１２２０
（ｍ），１１２０（ｍ），１１６０（ｍ），１１３０
（ｗ），９７０（ｗ），９６０（ｓ），９６０（ｓ），
９００（ｍ），８４０（ｓ），８００（ｗ），７７０
（ｗ）。

【００３５】実施例５１００ｍＭの水酸化カリウム（水溶媒、シコニンの１０
倍量）１０ｍｌ、トリス緩衝液（ｐＨ７．８）３５０μ
ｌ、アセトニトリル３５０μｌ、２０ｍＭのＣｕ²⁺（水
溶媒）１ｍｌ及び２０ｍＭのシコニン（アセトニトリル
溶媒）５ｍｌを混合し、攪拌した。これに蒸留水を適量
加え、１〜２日放置した。放置後、生成した沈殿をガラ
スフィルターを用いて濾過し、採取した。その後デシケ
ーター中で約２日間乾燥させて、赤紫色のシコニン−銅
錯体を２５ｍｇ得た。

【００３６】ＥＳＲスペクトル；ＥＳＲ測定装置により
室温及び液体窒素温度で確認ｇ値＝２．１、微細結合定数（Ａ）＝１２５ｍＴ。

【００３７】薬理試験本発明のシコニン金属錯体化合物のＤＮＡ切断活性をア
ガロースゲル電気泳動法により調べた。

【００３８】プラスミドＤＮＡは、閉環したらせん構造
を有していて、スーパーコイルと呼ばれる高次構造を保
持している（フォームＩ）。２本鎖のどちらか１本が
切断されると開環ＤＮＡ（フォームＩＩ）に、また２
本鎖に切断が入ると直鎖状ＤＮＡ（フォームＩＩＩ）
となる。フォームＩ、フォームＩＩ及びフォームＩ
ＩＩは、それぞれアガロースゲル電気泳動法で分離し、
エチジウムブロマイドで染色した後、３２０ｎｍの光で
励起させ、蛍光測定により定量され得る。

【００３９】（１）緩衝液の作成２００ｍＭトリスヒドロキシメチルアミノメタン２４．
２ｇ及び１５ｍＭソジウムアセテートトリヒドレート
２．０４ｇを精製水で１０００ｍｌとし、ｐＨメーター
を用いて酢酸でｐＨを調整した。使用の際に、精製水で
１０倍希釈を行なった。

【００４０】（２）アガロースゲルの作成電気泳動用アガロースが１％となるように上記で作成し
た緩衝液を加え、加熱溶融した。これを放冷し、液温が
５０〜６０℃に下降した後、装置に流し込み、完全にゲ
ルを固化させ、泳動槽を緩衝液で満たした。

【００４１】（３）電気泳動０．３２５μｇのプラスミドＣｏｌＥ１ＤＮＡに、
シコニン、本発明金属錯体化合物、Ｃｕ²⁺、Ｆｅ³⁺、ア
セトニトリル又はトリス緩衝液（ｐＨ７．８）を加えて
１検体を全量１０μｌに調整し、攪拌後３７℃でインキ
ュベーションを行なった。インキュベーション後、反応
停止剤（５０％グリセロール、３ｍＭＥＤＴＡ及び０．
１％ブロモフェノールブルー）２．５μｌ（但しアセト
ニトリル：緩衝液（水）＝６：４の時には５μｌ）を加
えて反応を停止させ、サンプルをアルガースゲルの試料
溝に注入した後、５０Ｖで１０時間泳動させた。

【００４２】（４）ＤＮＡの染色ゲルをエチジウムブロマイド溶液（０．５ｍｇ／ｍｌ）
に３０〜６０分浸漬した。ゲル水洗後、ＵＶ照射中エチ
ジウムブロマイドにより発色されたＤＮＡバンドを、ポ
ラロイドカメラで撮影した。

【００４３】（５）蛍光測定ＣＳ−９０００を用いて蛍光測定を行ない、フォーム
Ｉ、フォームＩＩ及びフォームＩＩＩを定量した。
ＤＮＡ切断活性は、下記の式より算出した。

【００４４】

【数１】

【００４５】結果を表１〜表３に示す。

【００４６】

【表１】

【００４７】

【表２】

【００４８】

【表３】

【００４９】表１は、アセトニトリル：水＝４：６、ト
リス緩衝液（ｐＨ７．８）中でのＣｕ²⁺イオン、シコニ
ン及びシコニン−銅錯体のＤＮＡ切断活性の結果をまと
めたものである。該表から、Ｃｕ²⁺イオン単独及びシコ
ニン単独よりもシコニン−銅錯体の方が、遥かに高いＤ
ＮＡ切断活性を示した。

【００５０】また、これまでの研究からアセトニトリル
に対して水の割合が減少するにつれて、シコニンの還元
性が大きくなることが判ったため、アセトニトリル：水
＝６：４に代えて測定すると、アセトニトリル：水＝
４：６の場合よりも良好なＤＮＡ切断活性を発現するこ
とが確認できた（表２参照）。

【００５１】また、表３は、アセトニトリル：水＝４：
６、トリス緩衝液（ｐＨ７．８）中でのＦｅ²⁺イオン、
Ｆｅ³⁺イオン、シコニン及びシコニン−鉄錯体のＤＮＡ
切断活性の結果をまとめたものである。該表から、Ｆｅ
²⁺イオン単独、Ｆｅ³⁺イオン単独及びシコニン単独より
もシコニン−鉄錯体の方が、遥かに高いＤＮＡ切断活性
を示した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 31/28 ＡＢＸ 9283−4ＣＡＣＢ 9283−4ＣＡＤＮ 9283−4ＣＡＥＤ 9283−4Ｃ 31/295 ＡＢＥ 9283−4ＣＡＤＺ 9283−4Ｃ 31/30 ＡＤＵ 9283−4ＣＣ０７Ｃ 50/32 7457−4ＨＣ０７Ｆ 15/02 7537−4Ｈ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式【化１】で表わされるシコニンと金属イオン化合物とのシコニン
金属錯体化合物。