JPH06172211A - アルツハイマー病の予防、治療薬 - Google Patents
アルツハイマー病の予防、治療薬Info
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- JPH06172211A JPH06172211A JP5201519A JP20151993A JPH06172211A JP H06172211 A JPH06172211 A JP H06172211A JP 5201519 A JP5201519 A JP 5201519A JP 20151993 A JP20151993 A JP 20151993A JP H06172211 A JPH06172211 A JP H06172211A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 アルツハイマー病の予防、治療薬を提供す
る。 【構成】 カルパインに対し阻害作用を有する物質はア
ルツハイマー病の予防、治療薬として有用である。
る。 【構成】 カルパインに対し阻害作用を有する物質はア
ルツハイマー病の予防、治療薬として有用である。
Description
【０００１】本発明は、アルツハイマー病の予防または
治療薬に関し、詳細にはカルパイン阻害剤を用いたアル
ツハイマー病の予防または治療薬、医薬組成物、その方
法に関する。
治療薬に関し、詳細にはカルパイン阻害剤を用いたアル
ツハイマー病の予防または治療薬、医薬組成物、その方
法に関する。
【０００２】アルツハイマー病は初老期(４５〜６５才)
に発病する進行性の痴呆で、病理学的にはその脳内に多
数の老人斑と神経原線維変化が認められる。６５才以上
の老年期に発症するいわゆる自然老化による老年痴呆
も、病理学的に何ら本質的な差は認められないので、ア
ルツハイマー型老年痴呆と呼ばれている。この疾患の患
者数は、高齢者人口の増加とともに増え、社会的に重要
な疾患となっている。しかしこの疾患の原因は諸説ある
ものの結果的にはまだ不明であり、早期解明が望まれて
いる。
に発病する進行性の痴呆で、病理学的にはその脳内に多
数の老人斑と神経原線維変化が認められる。６５才以上
の老年期に発症するいわゆる自然老化による老年痴呆
も、病理学的に何ら本質的な差は認められないので、ア
ルツハイマー型老年痴呆と呼ばれている。この疾患の患
者数は、高齢者人口の増加とともに増え、社会的に重要
な疾患となっている。しかしこの疾患の原因は諸説ある
ものの結果的にはまだ不明であり、早期解明が望まれて
いる。
【０００３】アルツハイマー病およびアルツハイマー型
老年痴呆(以下、両者をまとめて「アルツハイマー病」と
略す)に特徴的な二つの病理変化の出現量は、知能障害
の程度とよく相関することが知られている。そこで、こ
の二つの病理変化を生ずる不溶性の蓄積物質を分子レベ
ルで解明し、この疾患の病因に到達しよういう研究が１
９８０年代の前半頃から行われてきた。
老年痴呆(以下、両者をまとめて「アルツハイマー病」と
略す)に特徴的な二つの病理変化の出現量は、知能障害
の程度とよく相関することが知られている。そこで、こ
の二つの病理変化を生ずる不溶性の蓄積物質を分子レベ
ルで解明し、この疾患の病因に到達しよういう研究が１
９８０年代の前半頃から行われてきた。
【０００４】神経細胞の死によるシナプス消失は、アル
ツハイマー病における知的機能障害の程度と非常に良い
相関性があることが知られている(Ａnnals of Ｎeuro
logy,３０,５７２(１９９１);Ａnnals of Ｎeurolog
y,３９,３５５(１９８９);Ａnnals of Ｎeurology,２
７,４５７(１９９０))。この消失を引き起こす機構は、
分子レベルではまだ何もわかっていない。その中で、ア
ルツハイマー病やその他の興奮性アミノ酸毒性、β−ア
ミロイド神経毒性、フリーラジカル障害で、細胞内のカ
ルシウムの動的平衡がくずれていることが報告されてい
ることから(Ａging,１,１７(１９８９);Ｎeuron,１,６
２３(１９８９);Ｊournal of Ｎeuroscience,１２,３
７６(１９９２))、カルシウムの役割が急速に注目され
つつある。アルツハイマー病患者の線維芽細胞でも、同
様の変化が認められている(ＢrainＲesearch,５４３,１
３９(１９９１);Ｎew Ｅngland Ｊournal of Ｍedi
cine,３１２,１０６３(１９８５);Ｐroc．Ｎatl．Ａca
d．Ｓci．ＵＳＡ,８３,２７５８(１９８６);Ｂrain Ｒ
esearch Ｂulletin,２１,８２５(１９８８);Ｎeurosci
ence．Ｌetters,１２１,２３９(１９９１);Ｂiological
Ｐsychiatry,２２,１０７９(１９８７);Ｂrain Ｒes
earch,５６５,４２(１９９１);Ｊournalof Ｎeuroimmu
nology,３３,１６７(１９９１))。しかしながら、ヒト
脳でのカルシウム動的平衡の異常をとらえるのは、カル
シウムレベルが死後に変化するために困難であった。
ツハイマー病における知的機能障害の程度と非常に良い
相関性があることが知られている(Ａnnals of Ｎeuro
logy,３０,５７２(１９９１);Ａnnals of Ｎeurolog
y,３９,３５５(１９８９);Ａnnals of Ｎeurology,２
７,４５７(１９９０))。この消失を引き起こす機構は、
分子レベルではまだ何もわかっていない。その中で、ア
ルツハイマー病やその他の興奮性アミノ酸毒性、β−ア
ミロイド神経毒性、フリーラジカル障害で、細胞内のカ
ルシウムの動的平衡がくずれていることが報告されてい
ることから(Ａging,１,１７(１９８９);Ｎeuron,１,６
２３(１９８９);Ｊournal of Ｎeuroscience,１２,３
７６(１９９２))、カルシウムの役割が急速に注目され
つつある。アルツハイマー病患者の線維芽細胞でも、同
様の変化が認められている(ＢrainＲesearch,５４３,１
３９(１９９１);Ｎew Ｅngland Ｊournal of Ｍedi
cine,３１２,１０６３(１９８５);Ｐroc．Ｎatl．Ａca
d．Ｓci．ＵＳＡ,８３,２７５８(１９８６);Ｂrain Ｒ
esearch Ｂulletin,２１,８２５(１９８８);Ｎeurosci
ence．Ｌetters,１２１,２３９(１９９１);Ｂiological
Ｐsychiatry,２２,１０７９(１９８７);Ｂrain Ｒes
earch,５６５,４２(１９９１);Ｊournalof Ｎeuroimmu
nology,３３,１６７(１９９１))。しかしながら、ヒト
脳でのカルシウム動的平衡の異常をとらえるのは、カル
シウムレベルが死後に変化するために困難であった。
【０００５】カルシウム動的平衡が変化することによ
り、カルシウム依存性中性プロテアーゼ(カルパイン)が
影響を受けると考えられる。この酵素は細胞内伝達系の
制御に係わっていると考えられている(Ｐroc．Ｎatl．
Ａcad．Ｓci．ＵＳＡ,８７,３７０５(１９９０);Ｃell
Ｓtructure Ｆunction,１５,１(１９９０);Ｂiochem
istry Ｉnternational,１８,２６３(１９８９))。この
カルパインによる限定分解は、他の重要な酵素、例えば
カルシウム依存性タンパクリン酸化酵素、タンパク脱リ
ン酸酵素、神経伝達物質関連酵素の制御、および膜構成
タンパクや膜骨格タンパクの機能の制御に係わっている
ことが示唆されている(Ａnnals of theＮew Ｙork
Ａcademy of Ｓciences,５６８,１９８(１９８９))。
従って、カルパインの異常な活性化は様々な代謝経路を
介して重大な影響を与えるものと考えられる。虚血時に
起こるカルパインの急激な活性化は、急性神経細胞死を
引き起こす一方(Ｊournal of Ｎeuroscience,９,１５
７９(１９８９);Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．ＵＳＡ,
８８,７２３３(１９９１))、持統的な低レベルでの活性
化は、タンパクのリン酸化やタンパク代謝回転に対して
ゆっくりとした、しかし進行性の影響を与えるものと考
えられる。例えば、アミロイド前駆体(ＡＰＰ)のプロセ
ッシングや(Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．ＵＳＡ,８７,
６００３(１９９１);Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．ＵＳ
Ａ,８９,３０５５(１９９２))、細胞骨格タンパクの異
常なリン酸化(Ａnnals of the Ｎew Ｙork Ａcade
my ofＳciences,５６８,１９８(１９８９);Ａrchives
of Ｎeurology,４２,１０９７(１９８５))に関与し
ている。カルパインの活性化というのは、細胞内カルシ
ウムの動的平衡を反映するだけでなく、細胞内カルシウ
ムの増加に伴う神経変性という現象を直接反映し得るの
で、カルパインの活性変化を示すということはアルツハ
イマー病の病因や治療に重要な情報を与えるものと考え
られた。
り、カルシウム依存性中性プロテアーゼ(カルパイン)が
影響を受けると考えられる。この酵素は細胞内伝達系の
制御に係わっていると考えられている(Ｐroc．Ｎatl．
Ａcad．Ｓci．ＵＳＡ,８７,３７０５(１９９０);Ｃell
Ｓtructure Ｆunction,１５,１(１９９０);Ｂiochem
istry Ｉnternational,１８,２６３(１９８９))。この
カルパインによる限定分解は、他の重要な酵素、例えば
カルシウム依存性タンパクリン酸化酵素、タンパク脱リ
ン酸酵素、神経伝達物質関連酵素の制御、および膜構成
タンパクや膜骨格タンパクの機能の制御に係わっている
ことが示唆されている(Ａnnals of theＮew Ｙork
Ａcademy of Ｓciences,５６８,１９８(１９８９))。
従って、カルパインの異常な活性化は様々な代謝経路を
介して重大な影響を与えるものと考えられる。虚血時に
起こるカルパインの急激な活性化は、急性神経細胞死を
引き起こす一方(Ｊournal of Ｎeuroscience,９,１５
７９(１９８９);Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．ＵＳＡ,
８８,７２３３(１９９１))、持統的な低レベルでの活性
化は、タンパクのリン酸化やタンパク代謝回転に対して
ゆっくりとした、しかし進行性の影響を与えるものと考
えられる。例えば、アミロイド前駆体(ＡＰＰ)のプロセ
ッシングや(Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．ＵＳＡ,８７,
６００３(１９９１);Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．ＵＳ
Ａ,８９,３０５５(１９９２))、細胞骨格タンパクの異
常なリン酸化(Ａnnals of the Ｎew Ｙork Ａcade
my ofＳciences,５６８,１９８(１９８９);Ａrchives
of Ｎeurology,４２,１０９７(１９８５))に関与し
ている。カルパインの活性化というのは、細胞内カルシ
ウムの動的平衡を反映するだけでなく、細胞内カルシウ
ムの増加に伴う神経変性という現象を直接反映し得るの
で、カルパインの活性変化を示すということはアルツハ
イマー病の病因や治療に重要な情報を与えるものと考え
られた。
【０００６】カルパインには２つのアイソザイム、カル
パインＩとカルパインＩＩが存在することが知られてい
る。これらはそれぞれ、活性化するに際しμＭおよびm
Ｍレベルのカルシウム濃度を必要とする。両カルパイン
は、不活性前駆体として主に細胞内に存在する(Ｃell
Ｓtructure and Ｆunction,１５,１(１９９０);ＦＥ
ＢＳ Ｌetters,２２０,２７１(１９８７))。そしてそ
れは、カルシウム存在下でアミノ基側の自己消化プロセ
スにより活性化体となる(Ｊournal of Ｂiochemistr
y,９０,１７８７(１９８１);Ｊournal of Ｂiochemis
try,９８,４０７(１９８５);Ｂiochemica et Ｂiophy
sica Ａcta,１０７８,１９２(１９９１))。
パインＩとカルパインＩＩが存在することが知られてい
る。これらはそれぞれ、活性化するに際しμＭおよびm
Ｍレベルのカルシウム濃度を必要とする。両カルパイン
は、不活性前駆体として主に細胞内に存在する(Ｃell
Ｓtructure and Ｆunction,１５,１(１９９０);ＦＥ
ＢＳ Ｌetters,２２０,２７１(１９８７))。そしてそ
れは、カルシウム存在下でアミノ基側の自己消化プロセ
スにより活性化体となる(Ｊournal of Ｂiochemistr
y,９０,１７８７(１９８１);Ｊournal of Ｂiochemis
try,９８,４０７(１９８５);Ｂiochemica et Ｂiophy
sica Ａcta,１０７８,１９２(１９９１))。
【０００７】生体内のカルパインの作用をin vitroの
酵素活性測定でモニターすることは困難である。それ
は、活性を測定する過程で前駆体は活性化されるからで
ある。すなわち、観測される酵素活性は、酵素の不安定
さや様々な細胞質内抑制因子あるいは活性化因子によっ
て影響される(Ｉntracellular Ｃalcium−dependentＰ
roteolysis(ＣＲＣプレス,ボストン,ＭＡ),１(１９９
０))。
酵素活性測定でモニターすることは困難である。それ
は、活性を測定する過程で前駆体は活性化されるからで
ある。すなわち、観測される酵素活性は、酵素の不安定
さや様々な細胞質内抑制因子あるいは活性化因子によっ
て影響される(Ｉntracellular Ｃalcium−dependentＰ
roteolysis(ＣＲＣプレス,ボストン,ＭＡ),１(１９９
０))。
【０００８】カルパインの抗体を用いた研究で、カルパ
インが老人斑や神経原線維変化部位に存在することを明
らかにし(Ｂrain Ｒesearch,５５８,１０５(１９９
１);Ｂrain Ｒesearch,５６１,１７７(１９９１))。カ
ルパインがアルツハイマー病に特有な病理学的構造形成
に関与することが示唆されているが、直接カルパイン活
性を測定した結果ではアルツハイマー病患者と正常人と
の間では顕著な差は認められていなかった(Ｂiomedical
Ｒesearch,１０,１７(１９８９);Ｊournal ofＮeuro
logical Ｓcience,１０２,２２０(１９９１);Ｎeurobi
ology of Ａging,１１,４２５(１９９０))。
インが老人斑や神経原線維変化部位に存在することを明
らかにし(Ｂrain Ｒesearch,５５８,１０５(１９９
１);Ｂrain Ｒesearch,５６１,１７７(１９９１))。カ
ルパインがアルツハイマー病に特有な病理学的構造形成
に関与することが示唆されているが、直接カルパイン活
性を測定した結果ではアルツハイマー病患者と正常人と
の間では顕著な差は認められていなかった(Ｂiomedical
Ｒesearch,１０,１７(１９８９);Ｊournal ofＮeuro
logical Ｓcience,１０２,２２０(１９９１);Ｎeurobi
ology of Ａging,１１,４２５(１９９０))。
【０００９】本発明者らは、ヒト死後の脳のカルパイン
Ｉのそれぞれのアイソフォーム量に着目した。それら
は、血小板や赤血球で報告されている活性型と前駆体に
対応する(Ｂiochemical Ｊournal,２４６,４８１(１９
８７);Ｂiochemical Ｊournal,２６１,１０３９(１９
８９))。すなわち、生体内で整理的カルシウムレベルで
タンパク質が分解するためにはカルパインＩの自己消化
が必要であるので(Ｂiochemica et Ｂiophysica Ａc
ta,１０９４,２４９(１９９１))、組織内でのこの酵素
の前駆体と活性化体との比というのは、生体内でのカル
パインＩ機能の指標となると考えたからである。その結
果、アルツハイマー病患者の脳内ではかかるカルパイン
Ｉの活性化体が増加していることを見出し、本発明を完
成するに到った。
Ｉのそれぞれのアイソフォーム量に着目した。それら
は、血小板や赤血球で報告されている活性型と前駆体に
対応する(Ｂiochemical Ｊournal,２４６,４８１(１９
８７);Ｂiochemical Ｊournal,２６１,１０３９(１９
８９))。すなわち、生体内で整理的カルシウムレベルで
タンパク質が分解するためにはカルパインＩの自己消化
が必要であるので(Ｂiochemica et Ｂiophysica Ａc
ta,１０９４,２４９(１９９１))、組織内でのこの酵素
の前駆体と活性化体との比というのは、生体内でのカル
パインＩ機能の指標となると考えたからである。その結
果、アルツハイマー病患者の脳内ではかかるカルパイン
Ｉの活性化体が増加していることを見出し、本発明を完
成するに到った。
【００１０】即ち本発明の要旨は、カルパインに対し阻
害作用を有する物質を有効成分とするアルツハイマー病
の予防または治療薬に存する。以下、本発明につき詳細
に説明する。
害作用を有する物質を有効成分とするアルツハイマー病
の予防または治療薬に存する。以下、本発明につき詳細
に説明する。
【００１１】本発明者らは、、まず活性化されたカルパ
インＩが、アルツハイマー病患者の脳内において正常人
に比べて増加していることを確認した。その方法を以下
に示す。
インＩが、アルツハイマー病患者の脳内において正常人
に比べて増加していることを確認した。その方法を以下
に示す。
【００１２】ヒトの死後の脳から、カルパインＩを部分
精製する。この画分を電気泳動にかけ、ヒトカルパイン
Ｉに対するモノクローナル抗体(Ｂiochemical Ｊourna
l,２４６,４８１(１９８７);Ｂiochemical Ｊournal,
２６１,１０３９(１９８９))と反応させると、３つのバ
ンドが認められる。これらの分子量はそれぞれ８０ＫＤ
a、７８ＫＤaそして７６ＫＤaであり、ヒト赤血球のそ
れと同一である(Ｂiochemical Ｊournal,２４６,４８
１(１９８７);Ｂiochemical Ｊournal,２６１,１０３
９(１９８９))。ヒト赤血球のカルパインＩをカルシウ
ム存在下でインキュベートすると、８０ＫＤaのバンド
が消失し、７６ＫＤaのバンドが出現する。この反応
は、カルパインの阻害剤であるロイペプチンで拮抗され
る。また、７６ＫＤaのタンパクの量と酵素活性の間に
は、良い相関が認められる。従って、カルパインＩの８
０ＫＤaのバンドは不活性型(前駆体)で７６ＫＤaのバン
ドは活性型であると考えられる。これは、ヒト死後の脳
スライス標本を用いても、カルシウム存在下で８０ＫＤ
aから７６ＫＤaへの移行が認められる。
精製する。この画分を電気泳動にかけ、ヒトカルパイン
Ｉに対するモノクローナル抗体(Ｂiochemical Ｊourna
l,２４６,４８１(１９８７);Ｂiochemical Ｊournal,
２６１,１０３９(１９８９))と反応させると、３つのバ
ンドが認められる。これらの分子量はそれぞれ８０ＫＤ
a、７８ＫＤaそして７６ＫＤaであり、ヒト赤血球のそ
れと同一である(Ｂiochemical Ｊournal,２４６,４８
１(１９８７);Ｂiochemical Ｊournal,２６１,１０３
９(１９８９))。ヒト赤血球のカルパインＩをカルシウ
ム存在下でインキュベートすると、８０ＫＤaのバンド
が消失し、７６ＫＤaのバンドが出現する。この反応
は、カルパインの阻害剤であるロイペプチンで拮抗され
る。また、７６ＫＤaのタンパクの量と酵素活性の間に
は、良い相関が認められる。従って、カルパインＩの８
０ＫＤaのバンドは不活性型(前駆体)で７６ＫＤaのバン
ドは活性型であると考えられる。これは、ヒト死後の脳
スライス標本を用いても、カルシウム存在下で８０ＫＤ
aから７６ＫＤaへの移行が認められる。
【００１３】この活性化体と前駆体との比率をアルツハ
イマー病患者脳部位で調べてみると、後述の実施例に示
すように、大脳皮質前頭部、被殻、小脳のいずれにおい
ても活性化体量が増加していることが確認された。この
事実は、カルパインＩの活性化体の増加が単なる神経細
胞死による２次的結果ではなく、細胞死に先んじて起こ
る現象であり、この現象が細胞死を引き起こす引き金に
なっているものと考えられる。
イマー病患者脳部位で調べてみると、後述の実施例に示
すように、大脳皮質前頭部、被殻、小脳のいずれにおい
ても活性化体量が増加していることが確認された。この
事実は、カルパインＩの活性化体の増加が単なる神経細
胞死による２次的結果ではなく、細胞死に先んじて起こ
る現象であり、この現象が細胞死を引き起こす引き金に
なっているものと考えられる。
【００１４】よって、カルパインＩの前駆体から活性化
体への移行を阻害する薬物は、アルツハイマー病におけ
る細胞死あるいはアミロイド蓄積を防止し、アルツハイ
マー病の進行抑制あるいは予防に有効であると考えられ
る。
体への移行を阻害する薬物は、アルツハイマー病におけ
る細胞死あるいはアミロイド蓄積を防止し、アルツハイ
マー病の進行抑制あるいは予防に有効であると考えられ
る。
【００１５】本発明で用いることができるカルパイン阻
害剤としては、例えばＥ−６４(Ａgricaltural and
Ｂiological Ｃhemistry,４２巻,５２９ページ,１９７
８年)、Ｅ−６４−c(Ｊournal of Ｂiochemistry,９
０巻,２５５ページ、１９８１年)、Ｅ−６４−d(Ｊourn
al of Ｂiochemistry,９３巻,１３０５ページ,１９８
３年)、ＮＣＯ−７００(日本公開特許公報昭５８−１２
６８７９)、エスタチンＡ,Ｂ(Ｔhe Ｊournal of Ａn
tibiotics,４２巻,１３６２ページ,１９８９年)等のエ
ポキシコハク酸誘導：
害剤としては、例えばＥ−６４(Ａgricaltural and
Ｂiological Ｃhemistry,４２巻,５２９ページ,１９７
８年)、Ｅ−６４−c(Ｊournal of Ｂiochemistry,９
０巻,２５５ページ、１９８１年)、Ｅ−６４−d(Ｊourn
al of Ｂiochemistry,９３巻,１３０５ページ,１９８
３年)、ＮＣＯ−７００(日本公開特許公報昭５８−１２
６８７９)、エスタチンＡ,Ｂ(Ｔhe Ｊournal of Ａn
tibiotics,４２巻,１３６２ページ,１９８９年)等のエ
ポキシコハク酸誘導：
【化１】 ペプチジル フルオロメチルケトン誘導体(Ｊournal o
f Ｍedicinal Ｃhemistry,３５巻,２１６ページ,１９
９２年)、ペプチジル クロロメチルケトン誘導体(Ｊou
rnal of Ｂiochemistry,９９巻,１７３ページ,１９８
６年)、下記一般式(Ｉ)で表されるペプチジル アシル
オキシメチルケトン誘導体(Ｂiochemistry,３０巻,４６
７８ページ,１９９１年)：
f Ｍedicinal Ｃhemistry,３５巻,２１６ページ,１９
９２年)、ペプチジル クロロメチルケトン誘導体(Ｊou
rnal of Ｂiochemistry,９９巻,１７３ページ,１９８
６年)、下記一般式(Ｉ)で表されるペプチジル アシル
オキシメチルケトン誘導体(Ｂiochemistry,３０巻,４６
７８ページ,１９９１年)：
【化２】 (上記一般式(Ｉ)において、Ｒ3はＮ末端に置換基を有し
ていてもよいアミノ酸残基もしくはペプチド残基を表わ
し、Ｒ4はアミノ酸の側鎖を形成する基を表わし、Ｘは
フッ素原子、塩素原子または以下の式で表される基：
ていてもよいアミノ酸残基もしくはペプチド残基を表わ
し、Ｒ4はアミノ酸の側鎖を形成する基を表わし、Ｘは
フッ素原子、塩素原子または以下の式で表される基：
【化３】 (Ａrは置換基を有していてもよいフェニル基を表わす)
を表わす。)、下記一般式(ＩＩ)で表されるペプチジル
ジアゾメチルケトン誘導体(Ｂiochemical Ｊournal,
２５３巻,７５１ページ,１９８８年)：
を表わす。)、下記一般式(ＩＩ)で表されるペプチジル
ジアゾメチルケトン誘導体(Ｂiochemical Ｊournal,
２５３巻,７５１ページ,１９８８年)：
【化４】 (上記一般式(ＩＩ)において、Ｒ3およびＲ4は既に上記
一般式(Ｉ)において定義したとおりである。)、ロイペ
プチン(Ｔhe Ｊournal of Ａntibiotics,２２巻,１
８３ページ,１９６９年)、カルペプチン(Ｊournal of
Ｅnzyme Ｉnhibition,３巻,１９５ページ,１９９０
年)、ＭＤＬ２８１７０(Ｂiochemical and Ｂiophysi
cal Ｒesearch Ｃommunication,１５７巻,１１１７ペ
ージ,１９８８年)等のペプチジルアルデヒド誘導体：
一般式(Ｉ)において定義したとおりである。)、ロイペ
プチン(Ｔhe Ｊournal of Ａntibiotics,２２巻,１
８３ページ,１９６９年)、カルペプチン(Ｊournal of
Ｅnzyme Ｉnhibition,３巻,１９５ページ,１９９０
年)、ＭＤＬ２８１７０(Ｂiochemical and Ｂiophysi
cal Ｒesearch Ｃommunication,１５７巻,１１１７ペ
ージ,１９８８年)等のペプチジルアルデヒド誘導体：
【化５】 ペプチジル α−ジケトン、ペプチジル α−ケトエス
テル誘導体(Ｊournal of Ｍedicinal Ｃhemistry,３
３巻,１１ページ,１９９０年)：
テル誘導体(Ｊournal of Ｍedicinal Ｃhemistry,３
３巻,１１ページ,１９９０年)：
【化６】 (上記一般式(ＩＩＩ)において、Ｒ3およびＲ4は既に定
義したとおりであり、Ｒ5はアルキル基またはアルコキ
シ基を表わす。)、
義したとおりであり、Ｒ5はアルキル基またはアルコキ
シ基を表わす。)、
【００１６】ヒト脳のカルパスタチン(米国特許出願２
００,１４１)あるいはその誘導体等のペプチド化合物な
どが挙げられる。上記の化合物の製造は、上記文献に記
載の方法により、容易に行なうことができる。
００,１４１)あるいはその誘導体等のペプチド化合物な
どが挙げられる。上記の化合物の製造は、上記文献に記
載の方法により、容易に行なうことができる。
【００１７】かかる化合物を臨床に応用するに際し、治
療上有効な成分の担体成分に対する割合は、１重量％か
ら９０重量％の間で変動されうる。例えば前記化合物は
顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセ
ル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の剤形にし
て経口投与してもよいし、注射剤として静脈内投与、筋
肉内投与、皮下投与、髄液内投与、又は脳室内投与して
もよい。また、坐剤として用いることもできる。また、
注射用の粉末にして用時調製して使用してもよい。経
口、経腸、非経口に適した医薬用の有機又は無機の、固
体又は液体の担体若しくは希釈剤を本発明薬剤を調製す
るために用いることができる。固形製剤を製造する際に
用いられる賦形剤としては、例えば乳糖、庶糖、デンプ
ン、タルク、セルロース、デキストリン、カオリン、炭
酸カルシウム等が用いられる。経口投与のための液体製
剤、即ち、乳剤、シロップ剤、懸濁剤、液剤等は、一般
的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水又は植物油等
を含む。この製剤は、不活性な希釈剤以外に補助剤、例
えば湿潤剤、懸濁補助剤、甘味剤、芳香剤、着色剤又は
保存剤等を含むことができる。液体製剤にしてゼラチン
のような吸収されうる物質のカプセル中に含ませてもよ
い。非経口投与の製剤、即ち、注射剤、坐剤等の製造に
用いられる溶剤又は懸濁化剤としては、例えば水、プロ
ピレングリコール、ポリエチレングリコール、ベンジル
アルコール、オレイン酸エチル、レシチン等が挙げられ
る。坐剤に用いられる基剤としては、例えばカカオ脂、
乳化カカオ脂、ラウリン脂、ウィテップゾール等が挙げ
られる。製剤の調製方法は常法によればよい。
療上有効な成分の担体成分に対する割合は、１重量％か
ら９０重量％の間で変動されうる。例えば前記化合物は
顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセ
ル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の剤形にし
て経口投与してもよいし、注射剤として静脈内投与、筋
肉内投与、皮下投与、髄液内投与、又は脳室内投与して
もよい。また、坐剤として用いることもできる。また、
注射用の粉末にして用時調製して使用してもよい。経
口、経腸、非経口に適した医薬用の有機又は無機の、固
体又は液体の担体若しくは希釈剤を本発明薬剤を調製す
るために用いることができる。固形製剤を製造する際に
用いられる賦形剤としては、例えば乳糖、庶糖、デンプ
ン、タルク、セルロース、デキストリン、カオリン、炭
酸カルシウム等が用いられる。経口投与のための液体製
剤、即ち、乳剤、シロップ剤、懸濁剤、液剤等は、一般
的に用いられる不活性な希釈剤、例えば水又は植物油等
を含む。この製剤は、不活性な希釈剤以外に補助剤、例
えば湿潤剤、懸濁補助剤、甘味剤、芳香剤、着色剤又は
保存剤等を含むことができる。液体製剤にしてゼラチン
のような吸収されうる物質のカプセル中に含ませてもよ
い。非経口投与の製剤、即ち、注射剤、坐剤等の製造に
用いられる溶剤又は懸濁化剤としては、例えば水、プロ
ピレングリコール、ポリエチレングリコール、ベンジル
アルコール、オレイン酸エチル、レシチン等が挙げられ
る。坐剤に用いられる基剤としては、例えばカカオ脂、
乳化カカオ脂、ラウリン脂、ウィテップゾール等が挙げ
られる。製剤の調製方法は常法によればよい。
【００１８】臨床投与量は、経口投与により用いられる
場合には、成人に対し化合物として、一般には、１日量
０.０１〜１０００mgであるが、年令、病態、症状によ
り適宜増減することが更に好ましい。前記１日量の本発
明薬剤は、１日に１回、又は適当な間隔をおいて１日に
２若しくは３回に分けて投与してもよいし、間欠投与し
てもよい。
場合には、成人に対し化合物として、一般には、１日量
０.０１〜１０００mgであるが、年令、病態、症状によ
り適宜増減することが更に好ましい。前記１日量の本発
明薬剤は、１日に１回、又は適当な間隔をおいて１日に
２若しくは３回に分けて投与してもよいし、間欠投与し
てもよい。
【００１９】また、注射剤として用いる場合には、成人
に対し化合物として、１回量０.００１〜１００mgを連
続投与又は間欠投与することが望ましい。
に対し化合物として、１回量０.００１〜１００mgを連
続投与又は間欠投与することが望ましい。
【００２０】以下、本発明につき実施例を挙げて詳細に
説明するが、その要旨を越えない限り以下に限定される
ものではない。 実施例１(アルツハイマー病患者脳内におけるカルパイ
ンの測定) ヒト死後の脳約０.５gをとり、１０倍量の２０mＭ Ｔr
is−ＨＣl(pＨ７.４)、２mＭ ＥＧＴＡ、１mＭ ＥＤ
ＴＡ、１mＭ benzamidine、１mＭ dithiothreitol、
１mＭ phenylmethylsulfonylfluoride(ＰＭＳＦ)およ
び０.３２Ｍ sucrose(以下、「バッファーＡ」と略記す
る)にてホモジナイズし、これを遠心分離した(１５,０
００×g、３０分間、４℃)。上清をＤＥＡＥ−cellulos
eカラム(ＤＥ−５２。Ｗhatman:１.０×１.５cm)にか
け、ＫＣl濃度を０から３mＭへ上げていきながら各フラ
クションを集める。０.１５Ｍ ＫＣlで溶出してくる画
分を電気泳動にかけ、ＰＶＤＦ膜(Ｉmmobilon−Ｐ、Ｍi
llipore)に転写する。これにモノクローナル カルパイ
ンＩ抗体(Ｂiochemical Ｊournal,２４６,４８１(１９
８７);Ｂiochemical Ｊournal,２６１,１０３９(１９
８９))を反応させ、Ｊournal of Ｎeurochemistry,９
２,５２６(１９９２)に記載の方法に準じて解析した。
説明するが、その要旨を越えない限り以下に限定される
ものではない。 実施例１(アルツハイマー病患者脳内におけるカルパイ
ンの測定) ヒト死後の脳約０.５gをとり、１０倍量の２０mＭ Ｔr
is−ＨＣl(pＨ７.４)、２mＭ ＥＧＴＡ、１mＭ ＥＤ
ＴＡ、１mＭ benzamidine、１mＭ dithiothreitol、
１mＭ phenylmethylsulfonylfluoride(ＰＭＳＦ)およ
び０.３２Ｍ sucrose(以下、「バッファーＡ」と略記す
る)にてホモジナイズし、これを遠心分離した(１５,０
００×g、３０分間、４℃)。上清をＤＥＡＥ−cellulos
eカラム(ＤＥ−５２。Ｗhatman:１.０×１.５cm)にか
け、ＫＣl濃度を０から３mＭへ上げていきながら各フラ
クションを集める。０.１５Ｍ ＫＣlで溶出してくる画
分を電気泳動にかけ、ＰＶＤＦ膜(Ｉmmobilon−Ｐ、Ｍi
llipore)に転写する。これにモノクローナル カルパイ
ンＩ抗体(Ｂiochemical Ｊournal,２４６,４８１(１９
８７);Ｂiochemical Ｊournal,２６１,１０３９(１９
８９))を反応させ、Ｊournal of Ｎeurochemistry,９
２,５２６(１９９２)に記載の方法に準じて解析した。
【００２１】その結果、ヒト脳抽出液では８０ＫＤa、
７８ＫＤaおよび７６ＫＤaの３つのバンドが検出され、
それはヒト赤血球のそれと同一であった(Ｂiochemical
Ｊournal,２４６,４８１(１９８７);Ｂiochemical
Ｊournal,２６１,１０３９(１９８９))。ヒト赤血球カ
ルパインＩをin vitroでカルシウムを加えることによ
り活性化させると、８０ＫＤaisoformのＮ末端側で切断
され、７８ＫＤaのisoformとＧly26−Ｌeu27の部分で切
断される７６ＫＤaのisoformができた(切断部位は、自
己消化により生成された７６ＫＤaのisoformをＳＤＳ−
ＰＡＧＥで分離し、ＰＶＤＦ膜に転写して、これをＥdm
an分解法によりＮ末端からアミノ酸分析を行うことによ
って同定した)。８０ＫＤaのisoformから７６ＫＤaのis
oformへの移行は、３０秒内に確認された。酵素活性は
８０ＫＤaのisoformが消失されてからも維持されてお
り、７６ＫＤaのisoform量と良い相関が認められた。こ
れは、７６ＫＤaのisoformが酵素的に活性であるという
報告と一致した(Ｂiochemicaland Ｂiophysical Ｒes
earch Ｃommunication,１２３,３３１(１９８４):Ｂio
chemical and Ｂiophysical Ｒesearch Ｃommunica
tion,１３８,６３８(１９８６))。
７８ＫＤaおよび７６ＫＤaの３つのバンドが検出され、
それはヒト赤血球のそれと同一であった(Ｂiochemical
Ｊournal,２４６,４８１(１９８７);Ｂiochemical
Ｊournal,２６１,１０３９(１９８９))。ヒト赤血球カ
ルパインＩをin vitroでカルシウムを加えることによ
り活性化させると、８０ＫＤaisoformのＮ末端側で切断
され、７８ＫＤaのisoformとＧly26−Ｌeu27の部分で切
断される７６ＫＤaのisoformができた(切断部位は、自
己消化により生成された７６ＫＤaのisoformをＳＤＳ−
ＰＡＧＥで分離し、ＰＶＤＦ膜に転写して、これをＥdm
an分解法によりＮ末端からアミノ酸分析を行うことによ
って同定した)。８０ＫＤaのisoformから７６ＫＤaのis
oformへの移行は、３０秒内に確認された。酵素活性は
８０ＫＤaのisoformが消失されてからも維持されてお
り、７６ＫＤaのisoform量と良い相関が認められた。こ
れは、７６ＫＤaのisoformが酵素的に活性であるという
報告と一致した(Ｂiochemicaland Ｂiophysical Ｒes
earch Ｃommunication,１２３,３３１(１９８４):Ｂio
chemical and Ｂiophysical Ｒesearch Ｃommunica
tion,１３８,６３８(１９８６))。
【００２２】ヒト脳カルパインＩは、抽出した後ではか
なり不安定であるが、大脳皮質切片をカルシウムとイン
キュベートすると、８０ＫＤaのisoformから７６ＫＤa
のisoformへの移行を認めることができた。これは、Ｉm
ajoh et alの報告(Ｂiochemistry,２７,８１２２(１
９８８))による配列に従い、Ｊournal of Ｎeurochem
istry,４７,１０３９(１９８６)に記載の方法に準じて
Ｎ末側３４個のアミノ酸からなる合成ペプチドを作成
し、このペプチドに対するポリクローナル抗体を用いる
ことにより、カルパインＩの自己消化はＮ末側が消失す
ることにより引き起こされることを確認した。
なり不安定であるが、大脳皮質切片をカルシウムとイン
キュベートすると、８０ＫＤaのisoformから７６ＫＤa
のisoformへの移行を認めることができた。これは、Ｉm
ajoh et alの報告(Ｂiochemistry,２７,８１２２(１
９８８))による配列に従い、Ｊournal of Ｎeurochem
istry,４７,１０３９(１９８６)に記載の方法に準じて
Ｎ末側３４個のアミノ酸からなる合成ペプチドを作成
し、このペプチドに対するポリクローナル抗体を用いる
ことにより、カルパインＩの自己消化はＮ末側が消失す
ることにより引き起こされることを確認した。
【００２３】アルツハイマー病脳内でのカルパインＩの
活性化の程度を定量化するために、Ｉmmunoassay法(Ｊo
urnal of Ｎeurochemistry,９２,５２６(１９９２))
により３つのisoformを定量した。対照群としては、臨
床上神経疾患のない患者を、アルツハイマー病群として
は生前痴呆の診断を受け、神経病理学的にアルツハイマ
ー病の特徴を持った患者を選択した(Ａrchives of Ｎ
eurology,４２,１０９７(１９８５);Ｎeurology,４１,
４７９(１９９１))。アルツハイマー群(Ｎ＝２２)と対
照群(Ｎ＝１７)は、死亡時の年令がそれぞれ７５.８±
２.０才、６８.９分±２.６才で、死後脳サンプルを凍
結するまでの時間(死後時間)は１２.２±１.３時間と１
２.０±１.８時間であった。
活性化の程度を定量化するために、Ｉmmunoassay法(Ｊo
urnal of Ｎeurochemistry,９２,５２６(１９９２))
により３つのisoformを定量した。対照群としては、臨
床上神経疾患のない患者を、アルツハイマー病群として
は生前痴呆の診断を受け、神経病理学的にアルツハイマ
ー病の特徴を持った患者を選択した(Ａrchives of Ｎ
eurology,４２,１０９７(１９８５);Ｎeurology,４１,
４７９(１９９１))。アルツハイマー群(Ｎ＝２２)と対
照群(Ｎ＝１７)は、死亡時の年令がそれぞれ７５.８±
２.０才、６８.９分±２.６才で、死後脳サンプルを凍
結するまでの時間(死後時間)は１２.２±１.３時間と１
２.０±１.８時間であった。
【００２４】細胞質内の８０ＫＤaカルパインＩの量
は、対照群に比してアルツハイマー群の方がかなり低か
った(対照群は２２.７±１.５％、アルツハイマー群は
３７.２±２.２％。p＜０.００１。対応のないt検定に
よる)。一方、自己消化により活性化された７６ＫＤaの
カルパインＩは、アルツハイマー群の方が対照群に比し
てかなり多かった(アルツハイマー群は４１.２±１.６
％、対照群は２６.６±２.２％。p＜０.００１)。また
７８ＫＤaのカルパインＩには変化が見られなかった。
は、対照群に比してアルツハイマー群の方がかなり低か
った(対照群は２２.７±１.５％、アルツハイマー群は
３７.２±２.２％。p＜０.００１。対応のないt検定に
よる)。一方、自己消化により活性化された７６ＫＤaの
カルパインＩは、アルツハイマー群の方が対照群に比し
てかなり多かった(アルツハイマー群は４１.２±１.６
％、対照群は２６.６±２.２％。p＜０.００１)。また
７８ＫＤaのカルパインＩには変化が見られなかった。
【００２５】次に、個々の脳サンプルについて８０ＫＤ
aカルパインＩに対する７６ＫＤaのカルパインＩの比率
を求めると、アルツハイマー群の方が対照群に比べて約
３倍高いことが確認された(アルツハイマー群は２.２０
±０.３９、対照群は０.８１±０.１０。p＜０.００
５。図１a参照)。３つのカルパインＩ isoformの合計
量は、いずれのサンプルにおいても変化はなかった。
aカルパインＩに対する７６ＫＤaのカルパインＩの比率
を求めると、アルツハイマー群の方が対照群に比べて約
３倍高いことが確認された(アルツハイマー群は２.２０
±０.３９、対照群は０.８１±０.１０。p＜０.００
５。図１a参照)。３つのカルパインＩ isoformの合計
量は、いずれのサンプルにおいても変化はなかった。
【００２６】続いて、カルパインＩの細胞内分布につい
て検討した。大脳皮質前頭部をホモジナイズし、４℃で
３０分間、１５,０００×gで遠心分離して上清を細胞質
画分、沈査を細胞膜画分とした。カルパインＩの３つの
isoformの量は、前記と同様のＩmmunoassay法で測定し
た。その結果、全カルパインＩの２７〜３０％が対照
群、アルツハイマー群のいずれにおいても膜画分に存在
し、そこで各isoformの分布はほぼ同じであったことか
ら、細胞質内のカルパインＩのisoformの異常比率は、
それらの細胞内分布の移行によるものでないことが確認
された。膜画分においては、７６ＫＤaのカルパインＩ
が多く存在し(対照群で４０.４±１.８％、アルツハイ
マー群で４３.１±１.７％。両者ともＮ＝９)、８０Ｋ
ＤaのカルパインＩは少なかった(対照群で１８.２±１.
３％、アルツハイマー群で１７.５±１.３％、両者とも
Ｎ＝９)。この結果は、カルパインＩが膜上で主に活性
化されるという仮説と一致していた(Ｊournal of the
Ｂiological Ｃhemistry,２６４,１８８３８(１９６
９);Ｂiochemical and Ｂiophysical Ｒesearch Ｃ
ommunication,１２８,３３１(１９８５))。アルツハイ
マー病患者脳におけるカルパインＩの異常な活性化度合
は、死後時間にかかわらず一定していた。７６ＫＤaと
８０ＫＤaカルパインＩの比率と死後時間との相関性を
調べたところ、対照群ではr＝０.３５５、アルツハイマ
ー群ではr＝０.１５５、両者合わせた群でもr＝０.１４
８であり、有意な相関性は全くなかった。またカルパイ
ンＩの活性化度合は、死亡時年令との間にも何ら有意な
相関性は認められなかった。
て検討した。大脳皮質前頭部をホモジナイズし、４℃で
３０分間、１５,０００×gで遠心分離して上清を細胞質
画分、沈査を細胞膜画分とした。カルパインＩの３つの
isoformの量は、前記と同様のＩmmunoassay法で測定し
た。その結果、全カルパインＩの２７〜３０％が対照
群、アルツハイマー群のいずれにおいても膜画分に存在
し、そこで各isoformの分布はほぼ同じであったことか
ら、細胞質内のカルパインＩのisoformの異常比率は、
それらの細胞内分布の移行によるものでないことが確認
された。膜画分においては、７６ＫＤaのカルパインＩ
が多く存在し(対照群で４０.４±１.８％、アルツハイ
マー群で４３.１±１.７％。両者ともＮ＝９)、８０Ｋ
ＤaのカルパインＩは少なかった(対照群で１８.２±１.
３％、アルツハイマー群で１７.５±１.３％、両者とも
Ｎ＝９)。この結果は、カルパインＩが膜上で主に活性
化されるという仮説と一致していた(Ｊournal of the
Ｂiological Ｃhemistry,２６４,１８８３８(１９６
９);Ｂiochemical and Ｂiophysical Ｒesearch Ｃ
ommunication,１２８,３３１(１９８５))。アルツハイ
マー病患者脳におけるカルパインＩの異常な活性化度合
は、死後時間にかかわらず一定していた。７６ＫＤaと
８０ＫＤaカルパインＩの比率と死後時間との相関性を
調べたところ、対照群ではr＝０.３５５、アルツハイマ
ー群ではr＝０.１５５、両者合わせた群でもr＝０.１４
８であり、有意な相関性は全くなかった。またカルパイ
ンＩの活性化度合は、死亡時年令との間にも何ら有意な
相関性は認められなかった。
【００２７】アルツハイマー病患者の新皮質部位ではか
なりの神経が変性していることが確認されているので、
神経変性が少ないかあるいは認められない部位(Ｎuerol
ogy,３０,８２０(１９８０);Ｔhe Ｎeurobiology of
Ａging,５１(１９８３))におけるカルパインＩの活性
化の程度を調べた。８０ＫＤaのカルパインＩに対する
７６ＫＤaのカルパインＩの比率は、アルツハイマー病
患者の被殻(４６％、p＜０.００５)および小脳(５８
％、p＜０.００５)の両部位で対照群に比して有意に増
加していた(図１bおよびc参照)。一方、ハンチントン病
(ステージＩＩＩ)患者の大脳皮質前頭部および小脳にお
いては、カルパインＩのisoformの分布は正常であった
(図１aおよびc参照)。しかしハンチントン病で神経細胞
死が認められている被殻(Ｊournal of Ｎeuropatholo
gy and Ｅxperimental Ｎeurology,４４,５５９(１
９８５);Ｊournal of Ｎeurology,Ｎeurosurgery an
d Ｐsychiatry,４８,４２２(１９８５))では、５０％
(p＜０.０５)カルパインＩ活性化体の比率が増加してい
た(図１b参照)。
なりの神経が変性していることが確認されているので、
神経変性が少ないかあるいは認められない部位(Ｎuerol
ogy,３０,８２０(１９８０);Ｔhe Ｎeurobiology of
Ａging,５１(１９８３))におけるカルパインＩの活性
化の程度を調べた。８０ＫＤaのカルパインＩに対する
７６ＫＤaのカルパインＩの比率は、アルツハイマー病
患者の被殻(４６％、p＜０.００５)および小脳(５８
％、p＜０.００５)の両部位で対照群に比して有意に増
加していた(図１bおよびc参照)。一方、ハンチントン病
(ステージＩＩＩ)患者の大脳皮質前頭部および小脳にお
いては、カルパインＩのisoformの分布は正常であった
(図１aおよびc参照)。しかしハンチントン病で神経細胞
死が認められている被殻(Ｊournal of Ｎeuropatholo
gy and Ｅxperimental Ｎeurology,４４,５５９(１
９８５);Ｊournal of Ｎeurology,Ｎeurosurgery an
d Ｐsychiatry,４８,４２２(１９８５))では、５０％
(p＜０.０５)カルパインＩ活性化体の比率が増加してい
た(図１b参照)。
【００２８】アルツハイマー病新皮質で多大のカルパイ
ンＩの活性化体の増加および神経変性の少ない部位でも
認められた同様の結果から、このカルパインＩの活性化
が単なる神経細胞変性の末期における結果を反映してい
るのではなく、細胞死に先立って起き、そしておそらく
細胞死に直接関与するより広範囲にわたる代謝的変化を
反映しているものと考えられる。
ンＩの活性化体の増加および神経変性の少ない部位でも
認められた同様の結果から、このカルパインＩの活性化
が単なる神経細胞変性の末期における結果を反映してい
るのではなく、細胞死に先立って起き、そしておそらく
細胞死に直接関与するより広範囲にわたる代謝的変化を
反映しているものと考えられる。
【００２９】試験例１ カルパイン阻害活性 文献記載の方法(Ｊournal of Ｂiological Ｃhemist
ry,２５９巻、３２１０ページ、１９８４年)によりラッ
トの脳から精製したm−カルパインを用いて、文献記載
の方法(Ｊournal of Ｂiological Ｃhemistry,２５
９巻,１２４８９ページ,１９８４年)に準じてその阻害
活性を測定した。ただし、ＮＣＯ−７００(Ａrzneimitt
el Ｆorschung／Ｄrug Ｒesearch,３６巻,１９０ペー
ジ,１９８６年)およびＭＤＬ２８１７０(Ｂiochemical
and Ｂiophysical ＲesearchＣommunications,１５
７巻,１１７ページ,１９８８年)に関しては、文献記載
値を記した。 カルパイン阻害活性 Ｅ−６４ ＩＣ50＝０.９６μＭ ＮＣＯ−７００ ＩＣ50＝４６μＭ ロイペプチン ＩＣ50＝０.３６μＭ カルペプチン ＩＣ50＝０.０４６μＭ ＭＤＬ２８１７０ Ｋi＝０.００７μＭ
ry,２５９巻、３２１０ページ、１９８４年)によりラッ
トの脳から精製したm−カルパインを用いて、文献記載
の方法(Ｊournal of Ｂiological Ｃhemistry,２５
９巻,１２４８９ページ,１９８４年)に準じてその阻害
活性を測定した。ただし、ＮＣＯ−７００(Ａrzneimitt
el Ｆorschung／Ｄrug Ｒesearch,３６巻,１９０ペー
ジ,１９８６年)およびＭＤＬ２８１７０(Ｂiochemical
and Ｂiophysical ＲesearchＣommunications,１５
７巻,１１７ページ,１９８８年)に関しては、文献記載
値を記した。 カルパイン阻害活性 Ｅ−６４ ＩＣ50＝０.９６μＭ ＮＣＯ−７００ ＩＣ50＝４６μＭ ロイペプチン ＩＣ50＝０.３６μＭ カルペプチン ＩＣ50＝０.０４６μＭ ＭＤＬ２８１７０ Ｋi＝０.００７μＭ
【００３０】試験例２ 急性毒性試験 文献記載の急性毒性試験結果を以下に記す。 (１)Ｅ−６４,Ｅ−６４−c,Ｅ−６４−d(特公平４−４
８号公報) マウスにおいていずれもＬＤ50＞２０００mg／kg・po (２)ＮＣＯ−７００(特開昭５８−１２６８７９号公報) マウスにおいてＬＤ50＝３７４mg／kg・iv (３)エスタチンＡ,Ｂ(特開昭６２−７６号公報) マウスにおいてＬＤ50＞４００mg／kg・ｉｐ
８号公報) マウスにおいていずれもＬＤ50＞２０００mg／kg・po (２)ＮＣＯ−７００(特開昭５８−１２６８７９号公報) マウスにおいてＬＤ50＝３７４mg／kg・iv (３)エスタチンＡ,Ｂ(特開昭６２−７６号公報) マウスにおいてＬＤ50＞４００mg／kg・ｉｐ
【００３１】製剤例 （１)錠剤 下記成分を常法に従って混合し、慣用の装置により打錠
した。 Ｅ−６４ ３０mg 結晶セルロース ６０mg コーンスターチ １００mg 乳糖 ２００mg ステアリン酸マグネシウム ４mg
した。 Ｅ−６４ ３０mg 結晶セルロース ６０mg コーンスターチ １００mg 乳糖 ２００mg ステアリン酸マグネシウム ４mg
【００３２】(２)顆粒剤 下記成分を常法に従って混合し、慣用の装置により打錠
した後、粉砕し、整粒し、２０〜５０メッシュの粒子を
選別して顆粒剤を得た。 Ｅ−６４ １０g 乳糖 ２０g ステアリン酸マグネシウム １g
した後、粉砕し、整粒し、２０〜５０メッシュの粒子を
選別して顆粒剤を得た。 Ｅ−６４ １０g 乳糖 ２０g ステアリン酸マグネシウム １g
【００３３】(３)軟カプセル剤 下記成分を常法に従って混合し、軟カプセルに充填し
た。 Ｅ−６４ ３０g オリーブ油 ３００g レチシン ２０g
た。 Ｅ−６４ ３０g オリーブ油 ３００g レチシン ２０g
【００３４】(４)注射剤 卵黄レシチン２０mg及びＥ−６４ ３mgをクロロホルム
に完全に溶解した後、凍結乾燥により完全にクロロホル
ムを留去した。次に注射用蒸留水２mlを加えて、２ml入
のアンプルを調製した。
に完全に溶解した後、凍結乾燥により完全にクロロホル
ムを留去した。次に注射用蒸留水２mlを加えて、２ml入
のアンプルを調製した。
【００３５】(５)坐剤 ウィテップゾール２gの加温融解物にＥ−６４ ３０mg
を加えてよく混合し、これを直腸坐剤用金型に注入し、
冷却して坐剤を得た。
を加えてよく混合し、これを直腸坐剤用金型に注入し、
冷却して坐剤を得た。
【００３６】(６)上記(１)〜(５)の製剤化においてＥ−
６４のかわりにロイペプチンおよびカルペプチンを用い
てそれぞれ同様の操作を行ない、錠剤、顆粒剤、軟カプ
セル剤、注射剤、坐剤を得た。
６４のかわりにロイペプチンおよびカルペプチンを用い
てそれぞれ同様の操作を行ない、錠剤、顆粒剤、軟カプ
セル剤、注射剤、坐剤を得た。
【図１】 図１は、アルツハイマー病(ＡＤ)、ハンチン
トン病(ＨＤ)および正常人(control)の脳内におけるカ
ルパインＩ前駆体に対するカルパインＩ、活性化体の比
率を表わした図面である。図中、a)は大脳皮質前頭部に
おける比率を、b)は被殻における比率を、c)は小脳にお
ける比率をそれぞれ表わす。
トン病(ＨＤ)および正常人(control)の脳内におけるカ
ルパインＩ前駆体に対するカルパインＩ、活性化体の比
率を表わした図面である。図中、a)は大脳皮質前頭部に
おける比率を、b)は被殻における比率を、c)は小脳にお
ける比率をそれぞれ表わす。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ラルフ・エイ・ニクソン アメリカ合衆国02174マサチューセッツ州 アーリントン、プリーザント・ストリート 164番
Claims (3)
- 【請求項１】 カルパインに対し阻害作用を有する物質
を有効成分とするアルツハイマー病の予防または治療
薬。 - 【請求項２】 カルパインに対し阻害作用を有する物質
および薬学的に許容される担体を含有してなることを特
徴とするアルツハイマー病の予防または治療のための医
薬組成物。 - 【請求項３】 カルパインに対し阻害作用を有する物質
を用いてアルツハイマー病を予防または治療する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US93064792A | 1992-08-14 | 1992-08-14 | |
| US930647 | 1992-08-14 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06172211A true JPH06172211A (ja) | 1994-06-21 |
Family
ID=25459574
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5201519A Pending JPH06172211A (ja) | 1992-08-14 | 1993-08-13 | アルツハイマー病の予防、治療薬 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06172211A (ja) |
| KR (1) | KR940003550A (ja) |
| CA (1) | CA2101417A1 (ja) |
| TW (1) | TW268896B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999011640A1 (en) * | 1997-09-04 | 1999-03-11 | Nippon Chemiphar Co., Ltd. | Epoxysuccinamide derivatives |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116920095A (zh) * | 2023-07-19 | 2023-10-24 | 江苏省原子医学研究所 | 一种ATP6v0c蛋白治疗阿尔茨海默病的应用方法 |
-
1993
- 1993-07-27 CA CA002101417A patent/CA2101417A1/en not_active Abandoned
- 1993-08-12 KR KR1019930015610A patent/KR940003550A/ko not_active Withdrawn
- 1993-08-13 JP JP5201519A patent/JPH06172211A/ja active Pending
- 1993-08-23 TW TW082106789A patent/TW268896B/zh active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999011640A1 (en) * | 1997-09-04 | 1999-03-11 | Nippon Chemiphar Co., Ltd. | Epoxysuccinamide derivatives |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2101417A1 (en) | 1994-02-15 |
| KR940003550A (ko) | 1994-03-12 |
| TW268896B (ja) | 1996-01-21 |
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